CN111349155B - 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途 - Google Patents
一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111349155B CN111349155B CN201811584730.5A CN201811584730A CN111349155B CN 111349155 B CN111349155 B CN 111349155B CN 201811584730 A CN201811584730 A CN 201811584730A CN 111349155 B CN111349155 B CN 111349155B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ser
- glucagon
- glu
- artificial sequence
- gln
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 title claims abstract description 127
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 39
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 132
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 49
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 46
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 35
- 108010088406 Glucagon-Like Peptides Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims abstract description 30
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims abstract description 30
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims abstract description 30
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 13
- 108010086246 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102100040890 Glucagon receptor Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 102100032882 Glucagon-like peptide 1 receptor Human genes 0.000 claims abstract 2
- 101001040075 Homo sapiens Glucagon receptor Proteins 0.000 claims abstract 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 22
- -1 2- (2- (-2-aminoethoxy) ethoxy) acetyl- Chemical group 0.000 claims description 20
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 13
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 12
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 9
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 7
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 claims description 7
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 6
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 6
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 5
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 claims description 4
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 3
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 claims description 3
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 claims description 3
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 claims description 3
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 claims description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 3
- 208000006575 hypertriglyceridemia Diseases 0.000 claims description 3
- 150000002762 monocarboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000004983 pleiotropic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 1
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 abstract description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 abstract description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 7
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 abstract description 6
- HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N Exenatide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N 0.000 abstract description 5
- 108010011459 Exenatide Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 4
- 229960001519 exenatide Drugs 0.000 abstract description 3
- 229940014641 bydureon Drugs 0.000 abstract description 2
- SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H]2NCCC2)CCC1 SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 97
- UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 97
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 97
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 97
- IVDFVBVIVLJJHR-LKXGYXEUSA-N Thr-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IVDFVBVIVLJJHR-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 96
- VDWWLJRQDNTHJB-MXAMYCJDSA-N (2s)-2-[[(2s,3r)-2-[[2-[[(2s)-5-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 VDWWLJRQDNTHJB-MXAMYCJDSA-N 0.000 description 95
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 78
- JKPGHIQCHIIRMS-AVGNSLFASA-N Gln-Asp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N JKPGHIQCHIIRMS-AVGNSLFASA-N 0.000 description 77
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 77
- YJIUYQKQBBQYHZ-ACZMJKKPSA-N Gln-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YJIUYQKQBBQYHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 71
- NHOVZGFNTGMYMI-KKUMJFAQSA-N Tyr-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NHOVZGFNTGMYMI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 66
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 66
- ARRIJPQRBWRNLT-DCAQKATOSA-N Leu-Met-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N ARRIJPQRBWRNLT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 64
- OXVPMZVGCAPFIG-BQFCYCMXSA-N Val-Gln-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N OXVPMZVGCAPFIG-BQFCYCMXSA-N 0.000 description 64
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 64
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 59
- BSCBBPKDVOZICB-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BSCBBPKDVOZICB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 38
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 36
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 34
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 33
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 32
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 29
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 29
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 28
- QJKPECIAWNNKIT-KKUMJFAQSA-N Ser-Lys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O QJKPECIAWNNKIT-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 26
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 25
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 22
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ser Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 19
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 18
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 18
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 18
- BNJOQKFENDDGSC-UHFFFAOYSA-N octadecanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O BNJOQKFENDDGSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 18
- ACYHZNZHIZWLQF-BQBZGAKWSA-N Met-Asn-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O ACYHZNZHIZWLQF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 17
- GPPIDDWYKJPRES-YDHLFZDLSA-N Asp-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GPPIDDWYKJPRES-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 16
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- IIMZHVKZBGSEKZ-SZMVWBNQSA-N Gln-Trp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IIMZHVKZBGSEKZ-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 15
- YLGQHMHKAASRGJ-WDSOQIARSA-N Trp-Leu-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N YLGQHMHKAASRGJ-WDSOQIARSA-N 0.000 description 14
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 13
- CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N Asp-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 12
- ILJREDZFPHTUIE-GUBZILKMSA-N Leu-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ILJREDZFPHTUIE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 12
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 description 12
- JJOJFIHJIRWASH-UHFFFAOYSA-N icosanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O JJOJFIHJIRWASH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 101100030361 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pph-3 gene Proteins 0.000 description 10
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 10
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 description 10
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000007446 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Human genes 0.000 description 9
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 9
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010063919 Glucagon Receptors Proteins 0.000 description 8
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 8
- LQQXBYSAGYOQJW-ZAQUEYBZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[[(4s)-4-(hexadecanoylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LQQXBYSAGYOQJW-ZAQUEYBZSA-N 0.000 description 7
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 7
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LWBHHRRTOZQPDM-UHFFFAOYSA-N undecanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCC(O)=O LWBHHRRTOZQPDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](COC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N 0.000 description 5
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 5
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 238000013234 NASH mouse model Methods 0.000 description 5
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 5
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 5
- KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-tritylsulfanylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)SC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 4
- GAFPFSNULHUKJC-UHFFFAOYSA-N 3-hexadecylpyrrole-2,5-dione Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC1=CC(=O)NC1=O GAFPFSNULHUKJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MWRZFXOQMUTNRK-OAHLLOKOSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[(2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-3-oxopropan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](COC(C)(C)C)C=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 MWRZFXOQMUTNRK-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 4
- GXCSUJQOECMKPV-CIUDSAMLSA-N Arg-Ala-Gln Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GXCSUJQOECMKPV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- PCJOFZYFFMBZKC-PCBIJLKTSA-N Asp-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PCJOFZYFFMBZKC-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HGJREIGJLUQBTJ-SZMVWBNQSA-N Glu-Trp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HGJREIGJLUQBTJ-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 4
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 4
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 4
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 4
- AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 4
- QQHJDPROMQRDLA-UHFFFAOYSA-N hexadecanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QQHJDPROMQRDLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- ZPGDWQNBZYOZTI-SFHVURJKSA-N (2s)-1-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ZPGDWQNBZYOZTI-SFHVURJKSA-N 0.000 description 3
- LPSJDEUEIVWKAN-UHFFFAOYSA-N 1-hexadecylpyrrolidine-2,5-dione Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCN1C(=O)CCC1=O LPSJDEUEIVWKAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AHDSRXYHVZECER-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-tris[(dimethylamino)methyl]phenol Chemical compound CN(C)CC1=CC(CN(C)C)=C(O)C(CN(C)C)=C1 AHDSRXYHVZECER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 3
- JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N Gln-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- GNRMAQSIROFNMI-IXOXFDKPSA-N Phe-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GNRMAQSIROFNMI-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YEKUUBPJRPXMBM-PTCFZACGSA-N (2S)-5-[[(5S)-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-6-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-4-carboxy-1-[[(2S)-1-[[2-(carboxymethylamino)-2-oxoethyl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-carboxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-6-oxohexyl]amino]-2-(hexadecanoylamino)-5-oxopentanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)Cc1c[nH]cn1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O)C(O)=O YEKUUBPJRPXMBM-PTCFZACGSA-N 0.000 description 2
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LBVXPUINIMIGAU-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)ethoxy]acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCCOCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LBVXPUINIMIGAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N Asp-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- IROMJFUCLCZATG-UHFFFAOYSA-N C(CCCCCCCCCCCCCCC)NN1C(CCC1=O)=O Chemical compound C(CCCCCCCCCCCCCCC)NN1C(CCC1=O)=O IROMJFUCLCZATG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWIAMTNJOMRDAK-GUBZILKMSA-N Gln-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O TWIAMTNJOMRDAK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 229940089838 Glucagon-like peptide 1 receptor agonist Drugs 0.000 description 2
- 101000837845 Homo sapiens Transcription factor E3 Proteins 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 2
- HQVDJTYKCMIWJP-YUMQZZPRSA-N Lys-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O HQVDJTYKCMIWJP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013231 NASH rodent model Methods 0.000 description 2
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100028507 Transcription factor E3 Human genes 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000001124 arachidoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940121426 cotadutide Drugs 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 2
- 239000003877 glucagon like peptide 1 receptor agonist Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000020925 non fasting Nutrition 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- WRGVLTAWMNZWGT-VQSPYGJZSA-N taspoglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NC(C)(C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)C(C)(C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 WRGVLTAWMNZWGT-VQSPYGJZSA-N 0.000 description 2
- 108010048573 taspoglutide Proteins 0.000 description 2
- 229950007151 taspoglutide Drugs 0.000 description 2
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000747 viability assay Toxicity 0.000 description 2
- 238000003026 viability measurement method Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 description 1
- UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N (2s,3s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N 0.000 description 1
- GOPWHXPXSPIIQZ-FQEVSTJZSA-N (4s)-4-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)OC(C)(C)C)C3=CC=CC=C3C2=C1 GOPWHXPXSPIIQZ-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 1-Hexadecylamine Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCN FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical class C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDUQJXKBWRNMKI-UHFFFAOYSA-N 18-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-18-oxooctadecanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WDUQJXKBWRNMKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZNJRONVKWRHYBF-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(1-azatricyclo[7.3.1.05,13]trideca-5,7,9(13)-trien-7-yl)ethenyl]-6-methylpyran-4-ylidene]propanedinitrile Chemical compound O1C(C)=CC(=C(C#N)C#N)C=C1C=CC1=CC(CCCN2CCC3)=C2C3=C1 ZNJRONVKWRHYBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWJNQYPJQDRXPH-UHFFFAOYSA-N 2-cyanobenzohydrazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=CC=C1C#N TWJNQYPJQDRXPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZUQOBHTUMCEQBG-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-hydroxynaphthalene-1,7-disulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(O)=C2C(N)=CC=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 ZUQOBHTUMCEQBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[[4-[2-[bis(4-methylphenyl)methylamino]-2-oxoethoxy]phenyl]-(2,4-dimethoxyphenyl)methyl]carbamate Chemical compound COC1=CC(OC)=CC=C1C(C=1C=CC(OCC(=O)NC(C=2C=CC(C)=CC=2)C=2C=CC(C)=CC=2)=CC=1)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YXXPVUOMPSZURS-ZLIFDBKOSA-N Ala-Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)=CNC2=C1 YXXPVUOMPSZURS-ZLIFDBKOSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 1
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 1
- 102220473068 Chemerin-like receptor 2_R17Q_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220586234 Chemerin-like receptor 2_R18A_mutation Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150089905 Gcgr gene Proteins 0.000 description 1
- JZJGEKDPWVJOLD-QEWYBTABSA-N Glu-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JZJGEKDPWVJOLD-QEWYBTABSA-N 0.000 description 1
- LLWQVJNHMYBLLK-CDMKHQONSA-N Gly-Thr-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O LLWQVJNHMYBLLK-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- 108010023302 HDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- AFPFGFUGETYOSY-HGNGGELXSA-N His-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AFPFGFUGETYOSY-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001015516 Homo sapiens Glucagon-like peptide 1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N Leu-Val-Arg Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021360 Myristic acid Nutrition 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N Myristic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCC(O)=O TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- DLSWIYLPEUIQAV-UHFFFAOYSA-N Semaglutide Chemical compound CCC(C)C(NC(=O)C(Cc1ccccc1)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(CCCCNC(=O)COCCOCCNC(=O)COCCOCCNC(=O)CCC(NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O)C(O)=O)NC(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(NC(=O)C(Cc1ccccc1)NC(=O)C(NC(=O)CNC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C)(C)NC(=O)C(N)Cc1cnc[nH]1)C(C)O)C(C)O)C(C)C)C(=O)NC(C)C(=O)NC(Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O DLSWIYLPEUIQAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 102220564325 TIR domain-containing adapter molecule 2_S16E_mutation Human genes 0.000 description 1
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- COYSIHFOCOMGCF-WPRPVWTQSA-N Val-Arg-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000008484 agonism Effects 0.000 description 1
- RZJRJXONCZWCBN-UHFFFAOYSA-N alpha-octadecene Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC RZJRJXONCZWCBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000001204 arachidyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002511 behenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 108091005205 cotadutide Proteins 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 125000003074 decanoyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 125000002642 gamma-glutamyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000021302 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000010030 glucose lowering effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 229940126904 hypoglycaemic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 102000005861 leptin receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000003468 luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- LLYKPZOWCPVRPD-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine;n,n-dimethylpyridin-4-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1.CN(C)C1=CC=CC=N1 LLYKPZOWCPVRPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229940038384 octadecane Drugs 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 238000007410 oral glucose tolerance test Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 108010060325 semaglutide Proteins 0.000 description 1
- 229950011186 semaglutide Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- OHSJPLSEQNCRLW-UHFFFAOYSA-N triphenylmethyl radical Chemical compound C1=CC=CC=C1[C](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OHSJPLSEQNCRLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/26—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途。本发明提供一种胰高血糖素类似物，包括类胰高血糖素多肽片段，所述类胰高血糖素多肽片段上交联有长效载体。本发明所提供的胰高血糖素类似物中的多肽链在天然Glucagon序列的基础上只突变了2‑3个氨基酸，免疫原性风险极低，另外在此基础上引入已上市的药物Exenatide（商品名Bydureon）的C末端序列，安全性更高。此外，本发明所提供的胰高血糖素类似物具有极高的GLP‑1R及GCGR激动活性，令人惊讶的是，胰高血糖素类似物在脂肪酸交联前后，体外活性更是具有显著的变化。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途。
背景技术
糖尿病按病理特征可分为一型糖尿病和二型糖尿病两种。一型糖尿病主要表现为胰岛素分泌不足，需要每天注射胰岛素；而二型糖尿病则是由于人体无法有效利用胰岛素造成。其中二型糖尿病患者占绝大多数。据估计大约80-90％二型糖尿病患者明显肥胖(Center for disease control and prevention(CDC)National Diabetes Fact Sheet,2014)。
目前上市的蛋白类药物中，用于治疗二型糖尿病的主要是GLP-1R(GLP-1受体)激动剂，如利拉鲁肽(Liraglutide，商品名
及
)、索玛鲁肽(Semeglutide，商品名
)等。利拉鲁肽是一种化学修饰的GLP-1类似物，脂肪酸(十六烷酸)通过γGlu连接至GLP-1蛋白骨架的第26位赖氨酸上，脂肪酸可与血清白蛋白结合，临床上每天给药一次，分别用于降糖及减重两个适应症。索玛鲁肽从结构上看，是GLP-1(7-37)链上8位的Aib取代了Ala，34位的Arg取代了Lys，26位的Lys接上十八烷脂肪酸链。与利拉鲁肽相比，索玛鲁肽的脂肪酸链更长，与血清白蛋白的亲和力更高，在临床上每周1次皮下注射。
糖尿病患者普遍肥胖，体重减轻对于糖尿病有显著改善。因此对于GLP-1类似物，减重是个重要指标。利拉鲁肽虽然被获批用于治疗肥胖，然而实际上其体重减轻大概只有5.6公斤。而临床上索玛鲁肽(0.5mg)、索玛鲁肽(1.0mg)治疗组的平均减重为4.2kg和5.5kg。目前用于肥胖的药物减重一般在5–10％左右(与安慰剂相比)，即整体上平均减重的比例不超过患者体重的10％(Rudolph L.Leibel等，Biologic Responses to Weight Lossand Weight Regain:Report From an American Diabetes Association ResearchSymposium，Diabetes，64(7): 2299-2309，2015)。因此，这类GLP-1类似物的减重效果还有待改善。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一方面提供一种胰高血糖素类似物，包括类胰高血糖素多肽片段，所述类胰高血糖素多肽片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽片段；
HSQGT FTSDX10SKYX14D X16X17 AAX20DFVX24W LMNGG PSSGA PPPSX40(SEQ ID No.3)
X10＝Y、K或C，X14＝L、K或C，X16＝S或E，X17＝Q或E，X20＝Q、K或C，X24＝Q、 K或C，X40为K、C或缺失，且X10、X14、X20、X24、X40其中至少一个为K或C；
或，b)氨基酸序列与SEQ ID NO.3具有90％以上序列同一性且具有a)限定的多肽片段的功能的多肽片段；
所述类胰高血糖素多肽片段上交联有长效载体。
本发明一些实施方式中，X10、X14、X20、X24、X40其中一个为K或C。
本发明一些实施方式中，所述长效载体选自脂肪酸、脂肪链或PEG。
本发明一些实施方式中，氨基酸残基K和/或氨基酸残基C与长效载体交联。
本发明一些实施方式中，所述类胰高血糖素多肽的C端被酰胺化。
本发明一些实施方式中，所述胰高血糖素类似物为人工设计的。
本发明一些实施方式中，所述脂肪酸选自C8～C30脂肪酸。
本发明一些实施方式中，所述脂肪酸为一元羧酸和/或二元羧酸。
本发明一些实施方式中，所述脂肪酸为直链的。
本发明一些实施方式中，所述脂肪酸交联形成脂肪酸基团，所述脂肪酸基团选自化学结构式如下所示的基团：
本发明一些实施方式中，所述类胰高血糖素多肽片段和长效载体之间设有接头。
本发明一些实施方式中，所述接头选自-Abu-(-L-2-氨基丁酰-)、-GABA-(-γ-氨基丁酰-)、-EACA-(-ε-氨基己酰-)、-β-Ala-(-β-丙氨酰-)、-γGlu-(-γ-谷氨酰)、-D-γGlu-(-D-γ- 谷氨酰-)或其二肽，如-β-Ala-β-Ala-、-γGluγGlu-及其立体异构体形式(S和R对映体)、 -5-Aminopentanoyl-(-5-氨基戊酰-)，-8-Aminooctanoyl-(-ω-氨基辛酰-)、-9-Aminononanoyl- (-9-氨基壬酰-)、-10-Aminodecanoyl-(-10-氨基正癸酰-)、-OEG-(2-(2-(-2-氨基乙氧基)乙氧基)乙酰-)、-2xOEG-、-γGlu-OEG-、-γGlu-2xOEG-、-D-γGlu-2xOEG-、-2xOEG-γGlu-、-γGlu-3xOEG-、-γGlu-8xPEG-(-3-((γ-谷氨酰胺)-8x聚乙二醇)-丙酰-)、 -γGlu-3xOEG-γ-Glu-8xPEG-。
在本发明的优选实施例中，所述胰高血糖素类似物包含的SEQ ID No.3的10位或14位为K；优选地，所述胰高血糖素类似物在SEQ ID No.3的10位或14位的K任一处进行交联；优选地，所述接头为-γGlu-2xOEG-或-γGlu-；更优选地，所述长效载体选自C16～C20脂肪酸；最优选地，所述胰高血糖素类似物选自任一以下的序列：SEQ ID No.16-33、SEQ IDNo.49-52、 SEQ ID No.57-60、SEQ ID No.65-68、SEQ ID No.73-76、SEQ ID No.96-99。
本发明另一方面提供所述的胰高血糖素类似物的制备方法，包括：利用化学合成方法制备所述胰高血糖素类似物。
本发明另一方面提供所述的胰高血糖素类似物在制备用于治疗代谢性疾病、GCGR/GLP-1R多效激动剂的药物中的用途。
本发明一些实施方式中，所述代谢性疾病选自糖尿病、血脂失调、非酒精性脂肪肝病、与糖尿病相关的其他代谢综合征、甘油三酯过高、低HDL胆固醇及高LDL胆固醇、胰岛素抗性、肥胖症或葡萄糖耐受不良。
本发明另一方面提供一种药物组合物，包括治疗有效量的所述的胰高血糖素类似物。
附图说明
图1显示为FC382K14D21质谱分析结果图；
图2显示为FC382K10D21质谱分析结果图；
图3显示为FC382K20D21质谱分析结果图；
图4显示为FC382K24D21质谱分析结果图；
图5-图8显示为胰高血糖素衍生物的体外活性残留结果图；
图9-图14显示为胰高血糖素衍生物在糖尿病小鼠体中给药后的随机血糖试验结果；
图15-图17显示为胰高血糖素衍生物在糖尿病小鼠中给药后的血糖含量百分比
图18显示为胰高血糖素衍生物在NASH模型鼠中给药后对ALT的变化结果；
图19显示为胰高血糖素衍生物在NASH模型鼠中给药后对AST的变化结果；
图20显示为胰高血糖素衍生物在NASH模型鼠中给药后对TG的变化结果；
图21显示为胰高血糖素衍生物在NASH模型鼠中给药后对HDL的变化结果；
图22显示为胰高血糖素衍生物在NASH模型鼠中给药后的NAS评分结果。
具体实施方式
本发明发明人通过提供一种胰高血糖素类似物，并进一步对其交联脂肪酸、脂肪链或 PEG，从而极大地提升了胰高血糖素类似物的激动活性，另外，由于胰高血糖素类似物中的多肽片段与天然Glucagon序列更为接近，所以免疫原性风险极低，在此基础上完成了本发明。
本发明第一方面提供一种胰高血糖素类似物，包括类胰高血糖素多肽片段，所述类胰高血糖素多肽片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽片段；
HSQGT FTSDX10SKYX14D X16X17 AAX20DFVX24W LMNGG PSSGA PPPSX40(SEQ ID No.3)
其中，X10＝Y、K或C，X14＝L、K或C，X16＝S或E，X17＝Q或E，X20＝Q、K或C， X24＝Q、K或C，X40为K、C或缺失，且X10、X14、X20、X24、X40其中至少一个为K或C；
或，b)氨基酸序列与SEQ ID NO.3具有90％以上序列同一性(sequenceidentity)、且具有a)限定的多肽片段的功能的多肽片段；
所述类胰高血糖素多肽片段上交联有长效载体。
本发明所提供的胰高血糖素类似物中，所述类胰高血糖素多肽片段选自天然Glucagon (本文中简称为GCG，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示)的类似物或者其他具有胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)及胰高血糖素受体(GCGR)激动活性的多肽片段。所述胰高血糖素类似物为人工设计的，通常可以衍生自氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽片段。为了达到交联的目的，在这些多肽原始序列的基础上引入氨基酸K或C，并将脂肪酸、脂肪链或PEG交联至K或C上。例如，可以是第10位Y突变为K或C，再例如，可以是第14位L 突变成K或C，再例如，可以是第20位Q突变为K或C，再例如，可以是第24位Q突变为K或C，再例如，可以是C末端增加一个C或K。X10、X14、X20、X24、X40其中至少一个为K或C，从而可以通过K或C将脂肪酸、脂肪链或PEG交联至类胰高血糖素多肽片段上。在本发明一些具体实施例中，X10、X14、X20、X24、X40其中一个为K或C。
所述类胰高血糖素多肽片段具体可以是：a)氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽片段，也可以是b)氨基酸序列与SEQ ID NO.3具有90％以上、93％以上、95％以上、97％以上、或99％以上序列同一性、且具有a)限定的多肽片段的功能的多肽片段。所述b)中的氨基酸序列具体指：SEQ ID No.3所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或多个(具体可以是1-50、1-30个、1-20个、1-10个、1-5个、或1-3个)氨基酸而得到的，或者在N- 末端和/或C-末端添加一个或多个(具体可以是1-50个、1-30个、1-20个、1-10个、1-5个、或1-3个)氨基酸而得到的，且其编码的多肽片段分别具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列所编码的多肽片段的功能的氨基酸序列。
在本发明一些具体实施例中，所述SEQ ID No.3中，X16＝S、X17＝Q。
在本发明一些具体实施例中，所述SEQ ID No.3中，X16＝S、X17＝E。
在本发明一些具体实施例中，所述SEQ ID No.3中，X16＝E、X17＝Q。
在本发明一些具体实施例中，所述SEQ ID No.3中，X16＝E、X17＝E。
在本发明一些具体实施例中，所述类胰高血糖素多肽片段可以是氨基酸序列如SEQ ID No.4～13其中之一所示的多肽片段，具体序列如表1所示，表1中，SEQ ID NO.1所示为胰高血糖素的氨基酸序列。
表1
如上所述，本发明所提供的胰高血糖素类似物C末端氨基酸可以被修饰，比如酰胺化，所述酰胺化通常指将C末端的-COOH基团转变为-CONH2基团。
本发明所提供的胰高血糖素类似物中，还可以包括长效载体，所述长效载体可以起到延长所述胰高血糖素类似物在体内半衰期的作用，所述长效载体可以是包括但不限于脂肪酸、脂肪链及聚乙二醇(PEG)等中的一种或多种的组合。所述长效载体可以与类胰高血糖素多肽片段交联，通常可以通过类胰高血糖素多肽片段上的氨基酸残基K和/或氨基酸残基C与长效载体上的活性基团(例如，脂肪酸中可以包括羧基等活性基团、脂肪链和PEG中可以包括羧基、马来酰亚胺等活性基团)发生反应以实现长效载体与类胰高血糖素多肽片段的交联，例如，可以是各种类型的缩合反应。
本发明所提供的胰高血糖素类似物中，所述类胰高血糖素多肽片段和长效载体之间还可以设有接头。所述接头通常可以分别与类胰高血糖素多肽片段上的赖氨酸残基K和/或半胱氨酸残基C、以及长效载体上的活性基团(例如，接头中可以包括羧基、马来酰亚胺等活性基团)发生反应，以使得接头两端分别连接长效载体和类胰高血糖素多肽片段，以实现长效载体与类胰高血糖素多肽片段的交联，例如，可以是各种类型的缩合反应。
所述接头可以是本领域各种适合用于连接类胰高血糖素多肽片段和长效载体的接头，在本发明一些具体实施例中，所述接头可以是包括但不限于-Abu-(-L-2-氨基丁酰-)、-GABA- (-γ-氨基丁酰-)、-EACA-(-ε-氨基己酰-)、-β-Ala-(-β-丙氨酰-)、-γGlu-(-γ-谷氨酰-)、 -D-γGlu-(-D-γ-谷氨酰-)或其二肽，如-β-Ala-β-Ala-、-γGlu-γGlu-及其立体异构体形式(S和 R对映体)、-5-Aminopentanoyl-(-5-氨基戊酰-)，-8-Aminooctanoyl-(-ω-氨基辛酰-)、 -9-Aminononanoyl-(-9-氨基壬酰-)、-10-Aminodecanoyl-(-10-氨基正癸酰-)、-OEG-(-2-(2-(2- 氨基乙氧基)乙氧基)乙酰-)、-2xOEG-、-γGlu-OEG-、-γGlu-2xOEG-、-D-γGlu-2xOEG-、 -2xOEG-γGlu-、-γGlu-3xOEG-、-γGlu-8xPEG-(-3-((γ-谷氨酰胺)-8x聚乙二醇)-丙酰-)、 -γGlu-3xOEG-γ-Glu-8xPEG-等中的一种或多种的组合。在本发明另一些具体实施例中，所述接头可以是包括但不限于化学结构式如下所示的基团：
本发明所提供的胰高血糖素类似物中，所述脂肪酸可以为C8～C30、C8～C12、 C12～C16、C16～C20、或C20～C30脂肪酸，所述脂肪酸可以为一元羧酸和/或二元羧酸，所述脂肪酸可以为直链的，也可以是有支链的。所述脂肪酸具体可以是包括但不限于辛酸(C8)、癸酸(C10)、月桂酸(C12)、肉豆蔻酸(C14)、棕榈酸(C16)、或硬脂酸(C18)等，或它们对应的二元酸，例如，可以是包括但不限于十六烷基二酸、十八烷基二酸、二十烷基二酸、二十二烷基二酸等；所述脂肪链可以为C8～C30、C8～C12、C12～C16、C16～C20、或 C20～C30脂肪链，所述脂肪链可以为直链的，也可以是有支链的。在本发明一具体实施例中，交联所形成的基团可以是包括但不限于化学结构式如下所示的基团：
在本发明一些具体实施例中，所示胰高血糖素类似物可以是表2中所列出的化合物：
表2
表2中，-γE-即-γGlu(-γ-谷氨酰-)，例如“K(棕榈酰基-γE)”表示具有棕榈酰基通过-γ- 谷氨酰-接头缀合到ε氮上的赖氨酸。“K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)”表示具有十八烷二酸单酰基通过-γ-谷氨酰-与2个OEG分子相连的接头缀合到ε氮上的赖氨酸。X40＝C (mPEG2-马来酰亚胺)及X14＝C(mPEG2-马来酰亚胺)表示具有如下所示的结构，其中 mPEG2-马来酰亚胺的MW为40KD：
本发明的第二方面，提供一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码前述的类胰高血糖素多肽片段。
本发明的第三方面，提供一种重组表达载体，包含本发明第二方面提供的分离的多核苷酸。
本发明的第四方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞含有本发明第三方面提供的重组表达载体或基因组中整合有外源的本发明第二方面提供的分离的多核苷酸。
本发明第五方面提供本发明第一方面所提供的胰高血糖素类似物的制备方法，所述制备方法可以包括：利用化学合成方法制备所述胰高血糖素类似物；所述制备方法也可以包括：在合适的条件下培养本发明第四方面提供的宿主细胞，使之表达所述类胰高血糖素多肽片段，分离、纯化获得所述类胰高血糖素多肽片段，再将所述长效载体化学交联至所述类胰高血糖素多肽片段。本发明的胰高血糖素类似物可通过标准肽合成方法进行制备，例如，通过标准固相或液相方法，逐步或通过片段组装，并分离和纯化最终的类胰高血糖素多肽片段、胰高血糖素类似物产物，或通过重组和合成方法任意组合。
本发明第六方面提供所述的胰高血糖素类似物在制备用于治疗代谢性疾病、GCGR/GLP-1R多效激动剂的药物中的用途。所述代谢性疾病具体可以选自糖尿病、肥胖、血脂失调、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)/非酒精性脂肪肝炎(NASH)、与糖尿病相关的其他代谢综合征，包括甘油三酯过高、低HDL胆固醇及高LDL胆固醇、胰岛素抗性、肥胖症或葡萄糖耐受不良等。
本发明第七方面提供一种药物组合物，包括治疗有效量的本发明第一方面所提供的胰高血糖素类似物。
本发明的第八方面提供一种疾病的治疗方法，包括步骤：向个体施用本发明第一方面提供的胰高血糖素类似物，或本发明第七方面提供的药物组合物。本发明的研究人员发现本发明所提供的胰高血糖素类似物在中性pH或微弱酸性的pH下具有足够的水溶性且具有改善的化学稳定性。在随机血糖检测试验中，施用了部分本发明的胰高血糖素类似物的糖尿病模型小鼠在24小时后血糖值低于对照生理盐水组及利拉鲁肽组，呈现出极平稳的血糖波动。施用了另一部分本发明胰高血糖素衍生物的糖尿病模型小鼠在72小时后血糖值低于对照生理盐水组及利拉鲁肽组。此外，本发明的胰高血糖素衍生物在DIO小鼠体内施用后，诱导了体重的显著降低，胰高血糖素衍生物在NASH模型小鼠体内施用后，NAS组织学评分、肝脏 TG、AST、ALT含量显著下降，HDL含量则明显升高。
虽然在现有技术中，研究开发具有多重激动活性的分子已经成为本领域的研究热点，且非常有临床前景，但真正要获得一个理想的这类药物，实际上却是非常困难的。首先是安全性问题，特别是免疫原性问题。降糖减肥类药物需要长期使用，对安全性要求极高。为了设计获得一个具有高多重激动活性、并且体内稳定的多肽，现有的技术方案都往往都引入了较多的突变位点，并且经常引入非天然氨基酸及其他修饰。这些突变及非天然氨基酸的引入，都增加了潜在免疫原性的风险。一般情况下与人源序列具有越高的同源性，在人体中免疫原性风险就相对的越低。罗氏与益普生合作研发的GLP-1受体激动剂降糖药Taspoglutide(仅引入了2个非天然氨基酸Aib)，抗体生成率达到了49％，目前已经暂停了所有临床Ⅲ期的研究(JULIO ROSENSTOCK等，The Fate of Taspoglutide,a Weekly GLP-1Receptor Agonist, Versus wice-Daily Exenatide for Type 2,DIABETES CARE,36:498-504,2013)。PHIL AMBERY 等(THE ENDOCRINOLOGIST，SPRING，2017：12-13)在GCG的序列基础上筛选了500多个结构，才获得了一条候选肽MEDI0382。其中，为了保持较高的GLP-1与GCG双重活性和体内稳定性，与GCG相比，MEDI0382引进了9个突变位点，突变率达到了约30％；同样，Andreas Evers等(J Med Chem.2017May 25；60(10):4293-4303)在Exendin-4的结构基础上引入了9个突变位点，突变率达到了约23％，并进行了脂肪酸链修饰，才获得了同时具有较高GLP-1与GCG双重活性的杂合肽；Brian Finan等(Brian Finan等，NatMed.21: 27-36，2015)设计的GLP-1/GCG双活性肽是在GCG的C末端加入了GPSSGAPPPS序列，并引入了7个突变氨基酸，包括第二位突变为非天然氨基酸Aib。因此，现有的技术方案往往都引入了较多的突变位点，并且经常引入非天然氨基酸及其他修饰，才能获得同时具有GLP-1及GCG高活性的多肽。这些突变，修饰及非天然氨基酸的引入，都增加了潜在免疫原性的风险。而对于治疗糖尿病，肥胖这类疾病的药物，安全性是极其重要的。此外，对于 GLP-1,Glucagon这类30个氨基酸长度的小肽，序列的改变对其活性变化是极其敏感的；而对于多重活性多肽，由于涉及对多个不同受体的激动，其变化就更加复杂，根本无法预测任何一个氨基酸改变后对受体激动活性会是什么样的后果。
而本发明所提供的胰高血糖素类似物中的多肽链在天然Glucagon序列的基础上只突变了 2-3个氨基酸(如S16E、R17Q、R18A)，免疫原性风险极低，另外在此基础上引入已上市的药物Exenatide(商品名Bydureon)的C末端序列，安全性更高。此外，本发明所提供的胰高血糖素类似物具有极高的GLP-1R及GCGR激动活性，令人惊讶的是，胰高血糖素类似物在脂肪酸交联前后，体外活性更是具有显著的变化。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989 and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987 and periodic updates；theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego； Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS INENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999 等。
实施例中所涉及的缩写含义具体如下：
RT：室温
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
Fmoc：9H-芴-9-基甲氧基羰基
Trt：三苯甲基
Boc：叔丁氧羰基
HOBt：1-羟基苯并三唑
tBu:叔丁基
DCM：二氯甲烷
DBLK：20％N,N-二甲基甲酰胺哌啶
DIC：N,N’-二异丙基碳二亚胺
MeOH：甲醇
TFA：三氟乙酸
Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH：Nα-芴甲氧羰基-(Nε–(γ-谷氨酰基(Nα-十六烷基,α-叔丁酯))) 赖氨酸
Decanoyl：癸酰基
Stearoyl：十八烷酰基
OEG：2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙酸-γGLu-：-γ谷氨酰-
-γGlu-：-γ-谷氨酰-
PEG：聚乙二醇
DMAP:二甲基氨基吡啶
TFEA：2,2,2-三氟乙醇
DIEA：N,N-二异丙基乙胺
MTBE：甲基叔丁基醚
Pd(PPh3)4：四(三苯基膦)钯
Alloc：烯丙氧羰基
作为一种通用的方法，实施例中以C382(或其酰胺化修饰多肽C381)为基础，将特定氨基酸位点突变为K或C制备胰高血糖素衍生物的方法。类似的，其他氨基酸序列的多肽，如C462及C495(或其酰胺化修饰多肽)为基础制备胰高血糖素衍生物的方法与此一致。
实施例中涉及的各商购氨基酸以及氨基酸片段、以及各商购树脂，其生产厂家和商品型号如下：
Fmoc保护基氨基酸原料、2-CTC树脂和王树脂均为常规的市售试剂(保护氨基酸厂家：成都郑源生化科技有限公司，树脂厂家：天津南开和成科技有限公司)；
有机溶剂和其它原料来源均为市售品(厂家：国药集团化学试剂有限公司；化学纯)。
另外，HPLC和质谱的条件和所用设备型号及生产厂家说明如下：
仪器：HPLC UltiMate3000；检测条件如下表3所示。
表3
制备液相：北京创新通恒，LC3000。
质谱：仪器型号为5800MALDI-TOF-TOF(AB SCIEX)，分析软件为T0F/TOFExplorer，Data Explorer，MS采用Reflector Positive参数：CID(OFF)，mass rang(700－6500Da)Focus Mass(1200Da)Fixed laser intensity(5600)Digitizer：Bin Size(0.5ns)
实施例1
胰高血糖素衍生物FC382K14D21的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.16)
Fmoc保护的氨基酸购自成都郑源生化科技有限公司，在多肽延长合成过程中，使用以下的氨基酸：Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Asn(Trt)-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Lys(Boc)-OH、 Fmoc-L-Met-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Pro-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Trp(Boc)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH。
Fmoc-Ser(tBu)-王树脂合成：
称取替代度为0.58mmol/g的王树脂(天津南开和成科技有限公司)12.95g，加入到固相反应柱中，加入100mL DCM溶胀树脂30分钟后，用DMF洗涤3次，每次100mL。另取 5.76gFmoc-Ser(tBu)-OH、2.43g HOBt和0.19g DMAP用DMF溶解，5-8℃下加入2.6mL DIC活化5min后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应16小时。Kaiser检测为阴性后，依次DMF洗涤2次，MeOH洗涤2次、DCM洗2次和MeOH洗涤2次，每次洗涤溶剂为 100mL。收料、常温减压干燥，得到未封端的Fmoc-Ser(tBu)-王树脂14.18g。
上述树脂加入反应柱中，加入100mL DCM溶胀30分钟后，抽干，用DMF洗涤3次，每次100mL。再往反应柱中加入100mL DMF和13mL封闭液(封闭液为V乙酸酐：V吡啶＝1:1)，反应2小时，依次DMF洗涤2次，MeOH洗涤2次、DCM洗2次和MeOH洗涤 2次，每次洗涤溶剂为100mL。收料、常温减压干燥得到Fmoc-Ser(tBu)-王树脂15.26g。
肽树脂的合成：
称取上述封端后的Fmoc-Ser(tBu)-王树脂4.48g(1.0mmol)，加入反应柱中用20mLDCM 溶胀30分钟后，用DMF洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，往反应柱中加入10mL DBLK 溶液(20％哌啶/DMF(V/V))，反应5分钟，抽滤，用20mL DMF洗涤一次，再加入10mL DBLK溶液(20％哌啶/DMF(V/V))，反应10分钟，Kaiser检测为阳性。抽滤，用DMF洗涤3 次，每次20mL。另取Fmoc-Pro-OH(1.69g，5.0eq)、HOBt(0.81g，6.0eq)加入10mL DMF中溶解，5-8℃下加入DIC(0.69g，5.5eq)活化5min后，加入反应柱中，反应1小时，Kaiser检测为阴性，反应完全，用DMF洗涤3次，每次20mL。重复上述去保护和偶联操作，根据多肽序列依次完成其他氨基酸的偶联，其中K14采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(成都郑源生化科技有限公司)偶联。最后一个氨基酸偶联完成后，按上述方法去保护，去保护完全后依次DMF洗涤2次，MeOH洗涤2次、DCM洗2次和MeOH洗涤2次，每次洗涤溶剂为 20mL。收料、常温减压干燥得到目标肽树脂12.26g。
粗肽的切割：
称取上述肽树脂6.01g，20-30℃缓慢加入至60mL裂解液(三氟乙酸：苯甲硫醚：苯甲醚：乙二硫醇＝90:5:3:2)中，加毕反应2小时。反应完成后，过滤除去树脂，剧烈搅拌下，将滤液倒入事先预冷的甲叔醚(600mL)中，得到的混合溶液冰浴沉降2小时。除去上清液，用预冷的甲叔醚离心洗涤5次，每次400mL。完成后收料，常温减压干燥得到粗肽3.00g。
粗肽的纯化：
经多步纯化对粗肽进行精制：第一步：固定相：C18(Daisogel： sp-120-40/60-C18-RPS)，流动相的线性梯度20-60％B(流动相A：0.1％TFA，流动相B：乙腈)，40分钟，流速15mL/min，紫外线(UV)在220nm检测；第二步：固定相：C8 (Daisogel：sp-120-10-C8-P)，流动相的线性梯度20-60％B(流动相A：0.5％磷酸，流动相B：乙腈)，40分钟，流速15mL/min，紫外线(UV)在220nm检测冻干机：冻干机北京博医康，FD-2A。
最后冻干得到精肽(95.6％)。MS：m/z 4541.29(M+H)+。
实施例2
胰高血糖素衍生物FC382K14W07的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(十八烷酰基-γE)(SEQ ID NO.81)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys(Stearoyl-Glu-OtBu)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(97.3％)。MS：m/z 4569.02(M+H)+。
实施例3
胰高血糖素衍生物FC382K14W09的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(二十烷二酸单酰基-γE)(SEQ ID NO.82)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys(N-(tBuOCO(CH2)18CO)-Glu-OtBu)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.7％)。MS：m/z 4627.12(M+H)+。
实施例4
胰高血糖素衍生物FC382K14D17的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(癸酰基-γE)(SEQ ID NO.83)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys(Decanoyl-Glu-OtBu)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.1％)。MS：m/z 4456.96(M+H)+。
实施例5
胰高血糖素衍生物FC382K14D26的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(((棕榈酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.84)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys(N-(CH3(CH2)14CO)-Glu-OtBu) -OEG-OEG)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.90％)。MS：m/z 4831.18(M+H)+。
实施例6
胰高血糖素衍生物FC382K14W13的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(((十八烷酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.85)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys((N-(CH3(CH2)16CO)-Glu-OtBu) -OEG-OEG)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(97.2％)。MS：m/z 4859.20(M+H)+。
实施例7
胰高血糖素衍生物FC382K14W14的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(((二十烷酰基)-γE)-OEG)(SEQ ID NO.86)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys((N-(CH3(CH2)18CO)-Glu-OtBu)-OEG) -OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.6％)。MS：m/z 4742.17(M+H)+。
实施例8
胰高血糖素衍生物FC382K10D21的制备：
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.24)
合成方法同实施例1，其中Y10替换为K10并采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(成都郑源生化科技有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.0％)。MS：m/z 4492.02(M+H)+。
实施例9
胰高血糖素衍生物FC382K10D24的制备：
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(((棕榈酰基)-γE)-γE)(SEQ ID NO.87)
合成方法同实施例1，其中L10替换为K10并采用Fmoc-Lys (N-(N-Pal-Glu-OtBu)-Glu-OtBu)-OH进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(97.0％)。MS：m/z 4620.11(M+H)+。
实施例10
胰高血糖素衍生物FC382K20D21的制备：
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAX DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X20＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.34)
合成方法同实施例1，其中Q20替换为K20并采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(成都郑源生化科技有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(95.8％)。MS：m/z 4525.94(M+H)+。
实施例11
胰高血糖素衍生物FC382K20W07的制备：
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAX DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X20＝K(十八烷酰基-γE)(SEQ ID NO.89)
合成方法同实施例1，其中Q20替换为K20并采用Fmoc-Lys(Stearoyl-Glu-OtBu)-OH 进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽。MS：m/z 4554.02 (M+H)+。
实施例12
胰高血糖素衍生物FC382K24D21的制备：
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAQ DFVXW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X24＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.39)
合成方法同实施例1，其中Q24替换为K24并采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(成都郑源生化科技有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.9％)。MS：m/z 4526.12(M+H)+。
实施例13
胰高血糖素衍生物FC382K24W07的制备：
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAQ DFVXW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X24＝K(十八烷酰基-γE)(SEQ ID NO.90)
合成方法同实施例1，其中Q24替换为K24并采用Fmoc-Lys(Stearoyl-Glu-OtBu)-OH (杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.3％)。MS：m/z 4554.16(M+H)+。
实施例14胰高血糖素衍生物FC381K14D21的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X14＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.17)
Fmoc-Ser(tBu)-Rink amide MBHA树脂的合成：
称取替代度为0.38mmol/g的Rink amide MBHA树脂(天津南开和成科技有限公司)3.03g，加入到固相反应柱中，加入10mL DCM溶胀树脂30分钟后，用DMF洗涤3次，每次10mL。往反应柱中加入15mL DBLK溶液，反应5分钟，抽滤，用20mL DMF洗涤一次，再加入15mL DBLK溶液，反应10分钟，Kaiser检测为阳性。抽滤，用DMF洗涤3次，每次20mL。
另取2.03g Fmoc-Ser(tBu)-OH和1.31g HOBt用10mLDMF溶解，5-8℃下加入1mLDIC 活化5min后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时。Kaiser检测为阴性后，直接用于下步肽树脂的合成。
肽树脂的合成：
称取上述树脂Fmoc-Ser(tBu)-Rink amide MBHA树脂(1.0mmol)，加入反应柱中用20mL DCM 溶胀30分钟后，用DMF洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，往反应柱中加入10mLDBLK 溶液(20％哌啶/DMF(V/V))，反应5分钟，抽滤，用20mL DMF洗涤一次，再加入10mLDBLK溶液(20％哌啶/DMF(V/V))，反应10分钟，Kaiser检测为阳性。抽滤，用DMF洗涤3 次，每次20mL。另取Fmoc-Pro-OH(1.69g，5.0eq)、HOBt(0.81g，6.0eq)加入10mL DMF中溶解，5-8℃下加入DIC(0.69g，5.5eq)活化5min后，加入反应柱中，反应1小时，Kaiser检测为阴性，反应完全，用DMF洗涤3次，每次20mL。重复上述去保护和偶联操作，根据肽序依次完成其他氨基酸的偶联，其中K14采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH偶联。最后一个氨基酸偶联完成后，按上述去保护方法去保护，去保护完全后依次DMF洗涤2次，MeOH 洗涤2次、DCM洗2次和MeOH洗涤2次，每次洗涤溶剂为20mL。收料、常温减压干燥得到目标肽树脂。
粗肽的切割：
称取上述肽树脂6.01g，20-30℃缓慢加入至60mL裂解液(三氟乙酸：苯甲硫醚：苯甲醚：乙二硫醇＝90:5:3:2)中，加毕反应2小时。反应完成后，过滤除去树脂，剧烈搅拌下，将滤液倒入事先预冷的甲叔醚(600mL)中，得到的混合溶液放置冰箱沉降2小时。除去上清液，用预冷的甲叔醚离心洗涤5次，每次400mL。完成后收料，常温减压干燥得到粗肽 3.00g。
粗肽的纯化：
使用制备液相(北京创新通恒，LC3000)，经多步纯化对粗肽进行精制：第一步：固定相：C18(Daisogel：sp-120-40/60-C18-RPS)，流动相0.1％TFA，乙腈；第二步：固定相： C8(Daisogel：sp-120-10-C8-P)，流动相：0.5％磷酸，乙腈，第三步：固定相：C8 (Daisogel：sp-120-10-C8-P)，流动相：50mM乙酸铵、0.3％醋酸，乙腈，最后冻干(冻干机北京博医康，FD-2A)得到精肽(0.120g，97.8％)。最后采用MS对精肽进行分子量测定： m/z 4540.35(M+H)+。
实施例15
胰高血糖素衍生物FC381K10D21的制备：
HSQGT FTSDXSKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X10＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.25)
合成方法同实施例14，其中K10采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(98.3％)。MS:m/z 4590.55(M+H)+。
实施例16
胰高血糖素衍生物FC382K14W15的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.18)
固相法合成带支链的保护氨基酸W1：Alloc-Lys((Octadecanedioic Acid mono-tert-butylester)-Glu-OtBu)-OEG-OEG)-OH，如下：
W1的合成：
称取取代度为1.0mmol/g的2-CTC树脂20g，加入到固相反应柱中，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取8.53g Alloc-Lys(Fmoc)-OH(20mmol) 用DMF溶解，冰水浴下加入7.5ml DIEA(45mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入30ml无水甲醇封闭1小时，用DMF洗涤3次。用DMF:吡啶体积比为 4:1的混合溶液脱去Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，称取15.42g[2-[2-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸、5.41g HOBt加入DMF溶解，冰水浴下加入6.2ml DIC活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，室温下反应2小时。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应物料偶联的步骤，按照支链片段顺序，依次完成[2-[2-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸、 Fmoc-Glu-OtBu、十八烷二酸单叔丁酯。偶联完毕，将树脂用DMF洗涤3次，MeOH洗涤5 次，抽干。将树脂加入400ml TFEA/DCM＝1:4中室温下反应4h。过滤树脂后，滤液旋除 DCM，将其加入500mlMTBE中沉降，离心干燥后得到目标化合物19.43g，收率95.1％，m/Z 1059.41(M+H)。
多肽的合成同实施案例1，K14采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.7％)。MS：m/z 4889.57(M+H)+。
实施例17
胰高血糖素衍生物FC382K10W15的制备：
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.30)
带支链的保护氨基酸W1合成同实施例16。多肽的合成同实施案例1，其中K10采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(97.5％)。MS：m/z 4839.73(M+H)+。
实施例18
胰高血糖素衍生物FC382K20W15的制备：
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAX DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X20＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.36)
带支链的保护氨基酸W1合成同实施例16。多肽的合成同实施案例1，其中K20采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(98.3％)。MS：m/z 4873.93(M+H)+。
实施例19
胰高血糖素衍生物FC382K24W15的制备：
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAQ DFVXW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X24＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.41)
带支链的保护氨基酸W1合成同实施例16。多肽的合成同实施案例1，其中K24采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.4％)。m/z 4874.32(M+H)+。
实施例20
胰高血糖素衍生物FC382K10W09的制备：
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(二十烷二酸单酰基-γE)(SEQ ID NO.91)
合成方法同实施例1，其中K10采用Fmoc-Lys(N-(tBuOCO(CH2)18CO)-Glu-OtBu)-OH (杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.5％)。MS：m/z 4577.20(M+H)+。
实施例21
胰高血糖素衍生物FC382K10W03的制备：
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(十六烷二酸单酰基-GABA)(SEQ ID NO.92)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys(N-(tBuOCO(CH2)14CO)-GABA)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.7％)。MS：m/z 4477.12(M+H)+。
实施例22
多肽FC382C14D22的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝C(十六烷基-马来酰亚胺)(SEQ ID NO.48)
N-十六烷基-2,5-二氧代吡咯烷的合成：
十六烷胺盐取(4.10g，0.017mol)，加入60ml乙酸溶解，加入马来酸酐(2g，0.02mol)，升温至120℃乙酸回流，回流反应8h后，加水洗100ml搅拌，过滤，用水洗涤滤饼，滤饼干燥后得到十六烷氨基-2,5-二氧代吡咯烷3.6g。
多肽的合成：
多肽的合成同实施案例1，其中成C14采用Fmoc-Cys(Trt)-OH进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.5％)。
多肽的脂肪酸修饰：
称取多肽化合物(10mg，2.3μmol)，加入5ml 50mM PB缓冲液溶解(pH7)，加入十六烷氨基-2,5-二氧代吡咯烷(1.30mg，5.75μmol)，室温搅拌反应3h，RP-HPLC监控反应终点。反应毕，反应液采用RP-HPLC进行纯化，得到精肽(96.7％)。MS:m/z4470.10(M+H) +。
实施例23
胰高血糖素衍生物FC382C10D22的制备：
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝C(十六烷基-马来酰亚胺)(SEQ ID NO.45)
N-十六烷基-2,5-二氧代吡咯烷的合成同实施案例22。
多肽的合成同实施案例1，其中C10采用Fmoc-Cys(Trt)-OH进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(0.073g，98.5％)。多肽的脂肪链修饰同实施案例22，RP-HPLC监控反应终点。反应毕，反应液采用RP-HPLC进行纯化，得到精肽 (95.3％)。MS:m/z 4420.30(M+H)+。
实施例24
胰高血糖素衍生物FC381C10D22的制备：
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X10＝C(十六烷基-马来酰亚胺)(SEQ ID NO.47)
N-十六烷基-2,5-二氧代吡咯烷的合成同实施案例22。多肽的合成同实施案例14，其中 C10采用Fmoc-Cys(Trt)-OH进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(0.036g，98.4％)。多肽的脂肪链修饰同实施案例22，RP-HPLC监控反应终点。反应毕，反应液采用RP-HPLC进行纯化，得到精肽(97.3％)。m/z 4419.40(M+H)+。
实施例25
胰高血糖素衍生物FC381K10W15的制备：
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X10＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.31)
带支链的保护氨基酸W1合成同实施例16。多肽的合成同实施案例14，其中K10采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，得到精肽(95.6％)。MS:m/z 4838.80(M+H)+。
实施例26
胰高血糖素衍生物FC381K14W15的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X14＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.19)
带支链的保护氨基酸W1合成同实施例16。多肽的合成同实施案例14，其中K14采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化。得到精肽(95.4％)。MS:m/z 4888.33(M+H)+。
实施例27
胰高血糖素衍生物FC462K14W12的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD EEAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(((二十烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.96)
带支链的保护氨基酸合成同实施例16,，先固相法合成带支链的保护氨基酸W2：Alloc-Lys((Eicosanedioic Acid mono-tert-butylester)-Glu-OtBu)-OEG-OEG)-OH(其中脂肪酸偶联采用二十烷二酸单叔丁酯)，如下：
再进行多肽合成，多肽合成同实施例1，其中K14采用W2进行偶联，并采用Pd(PPh3)4 脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化得到精肽(96.4％)。MS：m/z 4960.43(M+H)+。
实施例28
胰高血糖素衍生物FC462K10W12的制备：
HSQGT FTSDX SKYLD EEAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(((二十烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.98)
带支链的保护氨基酸W2合成和多肽的合成同实施例27，其中K10采用W2进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(97.0％)。m/z 4910.32(M+H)+。
实施例29
胰高血糖素衍生物FC463K14W12的制备：
HSQGT FTSDY SKYXD EEAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X14＝K(((二十烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.97)
带支链的保护氨基酸W2合成同实施例27，和多肽的合成同实施列14，其中K14采用W2进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.3％)。MS：m/z 4959.33(M+H)+。
实施例30
胰高血糖素衍生物FC463K10W12的制备：
HSQGT FTSDX SKYLD EEAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X10＝K(((二十烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.99)
带支链的保护氨基酸W2合成同实施例27，和多肽的合成同实施列14，其中K14采用W2进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.3％)。MS：m/z 4909.45(M+H)+。
以上实施例中胰高血糖素衍生物的制备仅以C382及C381系列多肽为例，表2中的其他胰高血糖素衍生物反应条件均参照上述方法，即：多肽部分C末端-OH基团封闭的胰高血糖素衍生物，例如FC495K14D21(SEQ ID NO.49)或FC462K14D21(SEQ ID NO.65)其合成与实施例1相同，多肽部分C末端酰胺化修饰的胰高血糖素衍生物，例如FC496K14D21 (SEQ IDNO.50)或FC463K14D21(SEQ ID NO.66)其合成与实施例14相同。至于脂肪酸链部分，棕榈酰基-γE的交联与实施例1相同；十八烷酰基-γE的交联与实施例2相同；二十烷二酸单酰基-γE的交联与实施例3相同；癸酰基-γE的交联与实施例4相同；((棕榈酰基)-γE)-2xOEG的交联与实施例5相同；((十八烷酰基)-γE)-2xOEG的交联与实施例6相同；((二十烷酰基)-γE)-OEG的交联与实施例7相同；棕榈酰基-γE-γE的交联与实施例9 相同；((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG的交联与实施例16相同；十六烷二酸单酰基 -GABA的交联与实施例21相同；十六烷基-马来酰亚胺的交联与实施例22相同；((二十烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG的交联与实施例27相同。
实施例31
体外细胞学活性测定：
(一)GLP-1R激动活性测定：
GLP-1R激动活性检测采用荧光素酶报告基因检测法(Jonathan W Day等：NatChem Biol. 2009Oct；5(10):749-57)。将人源GLP-1R基因克隆至哺乳动物细胞表达质粒pCDNA3.1中，构建成重组表达质粒pCDNA3.1-GLP-1R，同时荧光素酶(luciferase)全长基因克隆至pCRE 质粒得到pCRE-Luc重组质粒。pcDNA3.1-GLP-1R和pCRE-Luc质粒按摩尔比1:10的比例转染CHO-K1细胞，筛选稳转表达株。
在9-cm细胞培养皿中用含10％FBS和300μg/ml G418的DMEM/F12培养基培养细胞，等汇合度至90％左右时，弃去培养上清，加入2ml胰酶消化3min后，加入2ml含10％FBS 和300μg/ml G418的DMEM/F12培养基中和，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min后，弃去上清，加入2ml含10％FBS和300μg/ml G418的DMEM/F12培养基重悬，计数。用含 10％FBS的DMEM/F12培养基稀释细胞至1×105/ml，96孔板中每孔铺100μl，即1×104/孔，贴壁后换成含0.2％FBS的DMEM/F12培养基培养。铺在96孔板的细胞弃去上清后，将纯化的重组蛋白用含1％BSA的DMEM/F12培养基稀释至一系列指定浓度，加入到细胞培养孔中，100μl/孔，刺激6h后检测。根据lucifersae reporter kit(Ray Biotech,Cat:68-LuciR-S200)说明书进行检测。每个样品的测活重复3次。
(二)GCGR激动活性检测方法：
GCGR激动活性检测同样也采用荧光素酶报告基因检测法。将人源GCGR基因克隆至哺乳动物细胞表达质粒pcDNA3.1中，构建成重组表达质粒pCDNA3.1-GCGR，转染CHO-K1 及稳转细胞株的筛选构建同上。每个样品的测活重复3次。
表4
Glucagon：HSQGT FTSDY SKYLD SRRAQ DFVQW LMNT-OH(SEQ ID NO.1)。
利拉鲁肽：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAXEFIAWLVRGRG，X＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ IDNO.2)。
实施例32
血清稳定性：
(1)图中相应胰高血糖素衍生物用5mM Tris-HCl，pH8.5，0.02％TWEEN80溶液配制成浓度为1.0mg/ml的溶液，除菌过滤(0.22μm，Millipore SLGP033RB)后，用大鼠血清稀释10倍，混匀，分装到无菌离心管中；
(2)上述样品各取3管于-20℃冻存作为对照，其余置37℃恒温箱，于0小时、24小时及72小时取样检测活性；
(3)检测胰高血糖素衍生物GCGR激动活性。
相对活性：以0小时的活性值为100％，后续时间点测得的值与之相比而获得。
图5-图8为胰高血糖素衍生物随着时间变化的活性残留结果。
实施例33
db/db小鼠给药后随机血糖检测：
瘦素受体缺陷二型糖尿病(db/db)小鼠中的降糖实验。db/db小鼠主要按照体重、非空腹血糖，药前OGTT反应三个指标进行筛选并均衡分组，每组6只，排除过大或者过小的个体，非空腹血糖要大于15mM。胰高血糖素衍生物溶解于50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)， 5％山梨醇，0.02％v/v Tween-80，皮下注射利拉鲁肽或表2中胰高血糖素衍生物(单次给药)，剂量皆为10nmol/Kg体重，在给药前及给药后0、1、3、6、24、72小时，测定血糖值。0-24 小时血糖变化趋势如图9～图14所示，图15为不同长效载体交联后的胰高血糖素衍生物24 小时的血糖含量百分比(与0小时血糖含量相比百分比)。72小时血糖含量百分比(与0小时血糖含量相比百分比)如图16、17所示。图16与图17所示胰高血糖素衍生物在72小时的血糖含量值比0小时显著降低，而其他胰高血糖素衍生物已经够恢复(或已接近)到0小时初始值(结果未显示)，说明图16-17中的胰高血糖素衍生物在体内的活性半衰期比其他胰高血糖素衍生物明显更长，起效时间更长。
实施例34
饮食诱导肥胖(DIO)小鼠中的减重实验：
DIO鼠模型的制备：约7周龄雄性C57BL/6J雄性小鼠给予高脂饲料(60％kcal fromfat) 继续饲养约16周(共23周)，到体重约为45g时进行试验。DIO小鼠随机分为组，每组6只，基础体重无差异，每天称重。皮下注射胰高血糖素衍生物、利拉鲁肽或PBS。利拉鲁肽及表5中胰高血糖素衍生物给药剂量为20nmol/Kg体重，每天给药一次；表6中胰高血糖素衍生物给药剂量为40nmol/Kg体重，每4天给药一次。
表5
| 胰高血糖素衍生物 | 体重变化(％) | SEM | 胰高血糖素衍生物 | 体重变化 | SEM |
| 利拉鲁肽 | -8.4 | 2.4 | FC495K10D21 | -39.2 | 2.6 |
| PBS | +1.7 | 1.1 | FC496K10D21 | -39.7 | 5.3 |
| FC382K14D21 | -36.5 | 1.7 | FC495K20D21 | -15.8 | 1.6 |
| FC381K14D21 | -37.2 | 3.8 | FC496K20D21 | -14.9 | 1.5 |
| FC382K10D21 | -42.3 | 3.9 | FC495K24D21 | -20.1 | 2.8 |
| FC381K10D21 | -41.5 | 5.3 | FC496K24D21 | -18.5 | 3.0 |
| FC382K20D21 | -15.6 | 1.9 | FC462K14D21 | -40.7 | 2.6 |
| FC381K20D21 | -17.2 | 2.3 | FC463K14D21 | -39.4 | 2.9 |
| FC382K24D21 | -16.7 | 3.2 | FC462K10D21 | -42.1 | 3.8 |
| FC381K24D21 | -15.9 | 4.7 | FC463K10D21 | -42.3 | 4.5 |
| FC884K14D21 | -12.4 | 2.4 | FC462K20D21 | -26.5 | 3.2 |
| FC885K14D21 | -21.9 | 3.2 | FC463K20D21 | -24.5 | 3.8 |
| FC495K14D21 | -38.9 | 1.9 | FC462K24D21 | -14.9 | 5.4 |
| FC496K14D21 | -41.0 | 2.3 | FC463K24D21 | -16.4 | 1.9 |
表6
实施例35
胰高血糖素衍生物在非酒精性脂肪肝(NASH)小鼠模型中的药效：
选取8-10周龄，体重25-30克的C57BL/6雄性小鼠，用CDA-HFD饲料诱导NASH模型。在实验开始前及实验终点前测定血糖含量。实验终点检测血清中的AST、ALT、肝脏 TG含量、血清HDL-C含量(日立7060全自动生化检测仪)等参数；肝组织病理学分析： H&E、SR。统计学方法：采用t-test或One-way ANOVA进行差异显著性检验，P<0.01为有显著统计学差异，P<0.001为有极其显著的统计学差异。皮下注射胰高血糖素衍生物。表5中胰高血糖素衍生物和FC384K14D21给药剂量为20nmol/Kg体重，每天给药一次；表6中胰高血糖素衍生物和FC386K10W15给药剂量为40nmol/Kg体重，每4天给药一次。共给药 7周。NAS评分标准如表7所示。结果如图18-22所示，图中的模型鼠组和正常鼠组对应的数据是皮下注射PBS后得到的，其余药物组都是在模型鼠中完成。
表7
综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
序列表
<110> 杭州和泽医药科技有限公司
浙江道尔生物科技有限公司
<120> 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途
<160> 99
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 2
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly
20 25 30
<210> 3
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Xaa Asp Xaa
1 5 10 15
Xaa Ala Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa
35 40
<210> 4
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 5
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 6
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 7
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 8
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 9
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 10
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 11
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 12
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
His Asx Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 13
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
His Asx Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 14
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Lys Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 15
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Lys Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 16
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 17
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 18
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 19
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 20
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 21
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 22
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 23
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 24
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 25
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 26
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 27
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 28
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 29
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 30
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 31
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 32
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 33
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
His Asx Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 34
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 35
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 36
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 37
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 38
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 39
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 40
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 41
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 42
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 43
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 44
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 45
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 46
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 47
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 48
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 49
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 50
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 51
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 52
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 53
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 54
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 55
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 56
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 57
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 58
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 59
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 60
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 61
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 62
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 63
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 64
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 65
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 66
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 67
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 68
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 69
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 70
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 71
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 72
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 73
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 74
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 75
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 76
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 77
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 78
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 79
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 80
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 81
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 82
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 83
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 84
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 85
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 86
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 87
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 88
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 89
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 90
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 91
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 92
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 93
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 94
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa
35 40
<210> 95
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 96
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 97
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 98
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 99
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
Claims (12)
1.一种胰高血糖素类似物，包括类胰高血糖素多肽片段和长效载体，所述类胰高血糖素多肽片段为：氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽片段；
HSQGT FTSDX10 SKYX14D X16X17 AAX20 DFVX24W LMNGGPSSGA PPPSX40(SEQ ID No.3)
其中，(1)X14＝K或C，X10＝Y，X16＝S或E，X17＝Q或E，X20＝Q，X24＝Q，X40缺失；或(2)X40为C，X10＝Y，X14＝L，X16＝S，X17＝Q，X20＝Q，X24＝Q；
所述类胰高血糖素多肽片段上的氨基酸残基K和/或氨基酸残基C与长效载体交联。
2.如权利要求1所述的胰高血糖素类似物，其特征在于，所述长效载体选自脂肪酸、脂肪链或PEG；
和/或，所述类胰高血糖素多肽的C端被酰胺化。
3.如权利要求2所述的胰高血糖素类似物，其特征在于，所述脂肪酸选自C8～C30脂肪酸。
4.如权利要求2所述的胰高血糖素类似物，其特征在于，所述脂肪酸为一元羧酸和/或二元羧酸。
5.如权利要求2所述的胰高血糖素类似物，其特征在于，所述脂肪酸为直链的。
6.如权利要求2所述的胰高血糖素类似物，其特征在于，所述脂肪酸交联形成脂肪酸基团，所述脂肪酸基团选自化学结构式如下所示的基团：
7.如权利要求1所述的胰高血糖素类似物，其特征在于，所述类胰高血糖素多肽片段和长效载体之间还设有接头。
8.如权利要求7所述的胰高血糖素类似物，其特征在于，所述接头选自-Abu-(-L-2-氨基丁酰-)、-GABA-(-γ-氨基丁酰-)、-EACA-(-ε-氨基己酰-)、-β-Ala-(-β-丙氨酰-)、-γGlu-(-γ-谷氨酰)、-D-γGlu-(-D-γ-谷氨酰-)或其二肽、-β-Ala-β-Ala-、-γGluγGlu-及其S型立体异构体和R型立体异构体形式、-5-Aminopentanoyl-(-5-氨基戊酰-)、-8-Aminooctanoyl-(-ω-氨基辛酰-)、-9-Aminononanoyl-(-9-氨基壬酰-)、-10-Aminodecanoyl-(-10-氨基正癸酰-)、-OEG-(2-(2-(-2-氨基乙氧基)乙氧基)乙酰-)、-2xOEG-、-γGlu-OEG-、-γGlu-2xOEG-、-D-γGlu-2xOEG-、-2xOEG-γGlu-、-γGlu-3xOEG-、-γGlu-8xPEG-(-3-((γ-谷氨酰胺)-8x聚乙二醇)-丙酰-)、-γGlu-3xOEG-γ-Glu-8xPEG-。
9.如权利要求1～8任一权利要求所述的胰高血糖素类似物的制备方法，包括：利用化学合成方法制备所述胰高血糖素类似物。
10.如权利要求1～8任一权利要求所述的胰高血糖素类似物在制备用于治疗代谢性疾病、GCGR/GLP-1R多效激动剂的药物中的用途；所述代谢性疾病选自糖尿病、血脂失调、非酒精性脂肪肝病、与糖尿病相关的其他代谢综合征、甘油三酯过高、低HDL胆固醇及高LDL胆固醇、胰岛素抗性、肥胖症或葡萄糖耐受不良。
11.如权利要求10所述的用途，其特征在于，所述代谢性疾病为非酒精性脂肪肝炎。
12.一种药物组合物，包括治疗有效量的如权利要求1～8任一权利要求所述的胰高血糖素类似物。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811584730.5A CN111349155B (zh) | 2018-12-24 | 2018-12-24 | 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途 |
| PCT/CN2019/119391 WO2020134717A1 (zh) | 2018-12-24 | 2019-11-19 | 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811584730.5A CN111349155B (zh) | 2018-12-24 | 2018-12-24 | 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111349155A CN111349155A (zh) | 2020-06-30 |
| CN111349155B true CN111349155B (zh) | 2022-04-05 |
Family
ID=71129667
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811584730.5A Active CN111349155B (zh) | 2018-12-24 | 2018-12-24 | 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111349155B (zh) |
| WO (1) | WO2020134717A1 (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114478744A (zh) * | 2020-11-13 | 2022-05-13 | 成都奥达生物科技有限公司 | 一种长效glp-1拮抗剂 |
| EP4249505A1 (en) * | 2020-12-23 | 2023-09-27 | Zhejiang Doer Biologics Co., Ltd. | Long-acting glucagon derivative |
| CN114685646B (zh) * | 2020-12-31 | 2023-04-07 | 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 | 一种多肽侧链类似物的制备方法及其应用 |
| MX2023008330A (es) | 2021-01-20 | 2024-01-18 | Viking Therapeutics Inc | Agonistas del receptor dual gip/glp-1 de molécula pequeña, composiciones farmacéuticas y preparación de las mismas para usarse en el tratamiento de trastornos metabólicos y hepáticos. |
| CN115636876A (zh) * | 2021-07-20 | 2023-01-24 | 重庆派金生物科技有限公司 | 胰高血糖素样肽-2突变体的定向化学偶联物及其应用 |
| CN116162147B (zh) * | 2021-11-24 | 2023-10-03 | 成都奥达生物科技有限公司 | 一种长效胰岛素类似物 |
| WO2023143458A1 (zh) * | 2022-01-28 | 2023-08-03 | 甘李药业股份有限公司 | 酰化胰岛素 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1786031A (zh) * | 2005-12-16 | 2006-06-14 | 暨南大学 | 胰高血糖素样多肽－1类似物及其制备方法与应用 |
| CN101985470A (zh) * | 2005-12-16 | 2011-03-16 | 暨南大学 | 胰高血糖素样多肽-1类似物及其制备方法与应用 |
| CN104144696A (zh) * | 2011-12-23 | 2014-11-12 | 西兰制药公司 | 胰高血糖素类似物 |
| CN107987170A (zh) * | 2016-10-27 | 2018-05-04 | 浙江道尔生物科技有限公司 | 一种用于治疗肠道疾病的融合蛋白 |
| CN108341880A (zh) * | 2017-01-23 | 2018-07-31 | 天津药物研究院有限公司 | 含有胰高血糖素样肽-1和胰高血糖素的片段类似物的嵌合多肽及其用途 |
| CN109836488A (zh) * | 2017-11-24 | 2019-06-04 | 浙江道尔生物科技有限公司 | 一种治疗代谢疾病的胰高血糖素类似物 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9309301B2 (en) * | 2011-06-22 | 2016-04-12 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists |
| WO2013086785A1 (zh) * | 2011-12-15 | 2013-06-20 | Qin Shulin | 具有降血糖作用的化合物、组合物及其用途 |
| CN109310743A (zh) * | 2016-05-16 | 2019-02-05 | 因塔西亚制药公司 | 胰高血糖素受体选择性多肽及其使用方法 |
| CN108948213B (zh) * | 2018-07-25 | 2021-08-06 | 中国药科大学 | 长效化胃泌酸调节素(oxm)杂合肽、其制备方法及其作为药物的用途 |
| CN108822222B (zh) * | 2018-07-25 | 2021-08-06 | 中国药科大学 | 一种长效化降糖减重肽，及其制备方法与应用 |
-
2018
- 2018-12-24 CN CN201811584730.5A patent/CN111349155B/zh active Active
-
2019
- 2019-11-19 WO PCT/CN2019/119391 patent/WO2020134717A1/zh active Application Filing
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1786031A (zh) * | 2005-12-16 | 2006-06-14 | 暨南大学 | 胰高血糖素样多肽－1类似物及其制备方法与应用 |
| CN101985470A (zh) * | 2005-12-16 | 2011-03-16 | 暨南大学 | 胰高血糖素样多肽-1类似物及其制备方法与应用 |
| CN104144696A (zh) * | 2011-12-23 | 2014-11-12 | 西兰制药公司 | 胰高血糖素类似物 |
| CN107987170A (zh) * | 2016-10-27 | 2018-05-04 | 浙江道尔生物科技有限公司 | 一种用于治疗肠道疾病的融合蛋白 |
| CN108341880A (zh) * | 2017-01-23 | 2018-07-31 | 天津药物研究院有限公司 | 含有胰高血糖素样肽-1和胰高血糖素的片段类似物的嵌合多肽及其用途 |
| CN109836488A (zh) * | 2017-11-24 | 2019-06-04 | 浙江道尔生物科技有限公司 | 一种治疗代谢疾病的胰高血糖素类似物 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Insulin Secretion Depends on Intra-islet Glucagon Signaling;svendsen等;《CELL PRESS》;20181030;第25卷(第5期);第1127-1134页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111349155A (zh) | 2020-06-30 |
| WO2020134717A1 (zh) | 2020-07-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111349155B (zh) | 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途 | |
| US11208451B2 (en) | Protein and protein conjugate for diabetes treatment, and applications thereof | |
| US7595294B2 (en) | Vasoactive intestinal polypeptide pharmaceuticals | |
| EP2223938B1 (en) | Derivatives of exendin | |
| CN111253475B (zh) | Glp-1激动多肽化合物及其盐与合成方法及用途 | |
| JP7324530B2 (ja) | 新型ポリペプチド及びその治療用途 | |
| WO2018011803A1 (en) | Fusion proteins with extended serum half life | |
| KR20230088337A (ko) | Glp-1/gip 이중 작용제 | |
| CN113429471B (zh) | 长效glp-1多肽类似物及其制备方法和应用 | |
| AU2020483085B2 (en) | Long-acting glucagon derivative | |
| WO2015149627A1 (zh) | 结构修饰的glp-1类似物及其制备方法 | |
| WO2022007805A1 (zh) | 新型多肽及其治疗用途 | |
| CN113493503B (zh) | 一种肠促胰岛素类似物及其制备方法和用途 | |
| US20230044268A1 (en) | An improved process for preparation of liraglutide | |
| CN114685642B (zh) | 一种肠促胰岛素类似物药学上可接受盐及制备方法和用途 | |
| CN114981294B (zh) | 一种长效胰高血糖素衍生物 | |
| CN115232200B (zh) | 长效化Exendin-4类似物及其应用 | |
| CN114891071A (zh) | 新型多肽及其治疗用途 | |
| KR20210125028A (ko) | 글루카곤-유사 펩타이드-1(ｇｌｐ-1) 작용제 유사체, 이의 제조 방법 및 용도 | |
| CN117756913A (zh) | 一种新型长效多肽化合物、组合物及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: Room 201, building 4, No. 101, No. 1 Street, Qiantang New District, Hangzhou City, Zhejiang Province Applicant after: Zhejiang Heze Pharmaceutical Technology Co., Ltd Applicant after: ZHEJIANG DOER BIOLOGICS Corp. Address before: 310018 Room 201, Building 101, No. 1 Street, Hangzhou Economic and Technological Development Zone, Hangzhou City, Zhejiang Province Applicant before: HANGZHOU HEZE PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. Applicant before: ZHEJIANG DOER BIOLOGICS Corp. |
|
| CB02 | Change of applicant information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |