CN111349155A - 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途 - Google Patents

一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN111349155A
CN111349155A CN201811584730.5A CN201811584730A CN111349155A CN 111349155 A CN111349155 A CN 111349155A CN 201811584730 A CN201811584730 A CN 201811584730A CN 111349155 A CN111349155 A CN 111349155A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ser
glucagon
artificial sequence
gln
gly
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811584730.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111349155B (zh
Inventor
黄岩山
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Heze Pharmaceutical Technology Co Ltd
Zhejiang Doer Biologics Co Ltd
Original Assignee
Hangzhou Heze Pharmaceutical Technology Co Ltd
Zhejiang Doer Biologics Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Heze Pharmaceutical Technology Co Ltd, Zhejiang Doer Biologics Co Ltd filed Critical Hangzhou Heze Pharmaceutical Technology Co Ltd
Priority to CN201811584730.5A priority Critical patent/CN111349155B/zh
Priority to PCT/CN2019/119391 priority patent/WO2020134717A1/zh
Publication of CN111349155A publication Critical patent/CN111349155A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111349155B publication Critical patent/CN111349155B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途。本发明提供一种胰高血糖素类似物，包括类胰高血糖素多肽片段，所述类胰高血糖素多肽片段上交联有长效载体。本发明所提供的胰高血糖素类似物中的多肽链在天然Glucagon序列的基础上只突变了2‑3个氨基酸，免疫原性风险极低，另外在此基础上引入已上市的药物Exenatide（商品名Bydureon）的C末端序列，安全性更高。此外，本发明所提供的胰高血糖素类似物具有极高的GLP‑1R及GCGR激动活性，令人惊讶的是，胰高血糖素类似物在脂肪酸交联前后，体外活性更是具有显著的变化。

Description

一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途。
背景技术
糖尿病按病理特征可分为一型糖尿病和二型糖尿病两种。一型糖尿病主要表现为胰岛素分泌不足，需要每天注射胰岛素；而二型糖尿病则是由于人体无法有效利用胰岛素造成。其中二型糖尿病患者占绝大多数。据估计大约80-90％二型糖尿病患者明显肥胖(Center for disease control and prevention(CDC)National Diabetes Fact Sheet,2014)。
目前上市的蛋白类药物中，用于治疗二型糖尿病的主要是GLP-1R(GLP-1受体)激动剂，如利拉鲁肽(Liraglutide，商品名
Figure BDA0001918808700000011
及
Figure BDA0001918808700000012
)、索玛鲁肽(Semeglutide，商品名
Figure BDA0001918808700000013
)等。利拉鲁肽是一种化学修饰的GLP-1类似物，脂肪酸(十六烷酸)通过γGlu连接至GLP-1蛋白骨架的第26位赖氨酸上，脂肪酸可与血清白蛋白结合，临床上每天给药一次，分别用于降糖及减重两个适应症。索玛鲁肽从结构上看，是GLP-1(7-37)链上8位的Aib取代了Ala，34位的Arg取代了Lys，26位的Lys接上十八烷脂肪酸链。与利拉鲁肽相比，索玛鲁肽的脂肪酸链更长，与血清白蛋白的亲和力更高，在临床上每周1次皮下注射。
糖尿病患者普遍肥胖，体重减轻对于糖尿病有显著改善。因此对于GLP-1类似物，减重是个重要指标。利拉鲁肽虽然被获批用于治疗肥胖，然而实际上其体重减轻大概只有5.6公斤。而临床上索玛鲁肽(0.5mg)、索玛鲁肽(1.0mg)治疗组的平均减重为4.2kg和5.5kg。目前用于肥胖的药物减重一般在5–10％左右(与安慰剂相比)，即整体上平均减重的比例不超过患者体重的10％(Rudolph L.Leibel等，Biologic Responses to Weight Lossand Weight Regain:Report From an American Diabetes Association ResearchSymposium，Diabetes，64(7): 2299-2309，2015)。因此，这类GLP-1类似物的减重效果还有待改善。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一方面提供一种胰高血糖素类似物，包括类胰高血糖素多肽片段，所述类胰高血糖素多肽片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽片段；
HSQGT FTSDX10SKYX14D X16X17 AAX20DFVX24W LMNGG PSSGA PPPSX40(SEQ ID No.3)
X10＝Y、K或C，X14＝L、K或C，X16＝S或E，X17＝Q或E，X20＝Q、K或C，X24＝Q、 K或C，X40为K、C或缺失，且X10、X14、X20、X24、X40其中至少一个为K或C；
或，b)氨基酸序列与SEQ ID NO.3具有90％以上序列同一性且具有a)限定的多肽片段的功能的多肽片段；
所述类胰高血糖素多肽片段上交联有长效载体。
本发明一些实施方式中，X10、X14、X20、X24、X40其中一个为K或C。
本发明一些实施方式中，所述长效载体选自脂肪酸、脂肪链或PEG。
本发明一些实施方式中，氨基酸残基K和/或氨基酸残基C与长效载体交联。
本发明一些实施方式中，所述类胰高血糖素多肽的C端被酰胺化。
本发明一些实施方式中，所述胰高血糖素类似物为人工设计的。
本发明一些实施方式中，所述脂肪酸选自C8～C30脂肪酸。
本发明一些实施方式中，所述脂肪酸为一元羧酸和/或二元羧酸。
本发明一些实施方式中，所述脂肪酸为直链的。
本发明一些实施方式中，所述脂肪酸交联形成脂肪酸基团，所述脂肪酸基团选自化学结构式如下所示的基团：
Figure BDA0001918808700000021
本发明一些实施方式中，所述类胰高血糖素多肽片段和长效载体之间设有接头。
本发明一些实施方式中，所述接头选自-Abu-(-L-2-氨基丁酰-)、-GABA-(-γ-氨基丁酰-)、-EACA-(-ε-氨基己酰-)、-β-Ala-(-β-丙氨酰-)、-γGlu-(-γ-谷氨酰)、-D-γGlu-(-D-γ- 谷氨酰-)或其二肽，如-β-Ala-β-Ala-、-γGluγGlu-及其立体异构体形式(S和R对映体)、 -5-Aminopentanoyl-(-5-氨基戊酰-)，-8-Aminooctanoyl-(-ω-氨基辛酰-)、-9-Aminononanoyl- (-9-氨基壬酰-)、-10-Aminodecanoyl-(-10-氨基正癸酰-)、-OEG-(2-(2-(-2-氨基乙氧基)乙氧基)乙酰-)、-2xOEG-、-γGlu-OEG-、-γGlu-2xOEG-、-D-γGlu-2xOEG-、-2xOEG-γGlu-、-γGlu-3xOEG-、-γGlu-8xPEG-(-3-((γ-谷氨酰胺)-8x聚乙二醇)-丙酰-)、 -γGlu-3xOEG-γ-Glu-8xPEG-。
在本发明的优选实施例中，所述胰高血糖素类似物包含的SEQ ID No.3的10位或14位为K；优选地，所述胰高血糖素类似物在SEQ ID No.3的10位或14位的K任一处进行交联；优选地，所述接头为-γGlu-2xOEG-或-γGlu-；更优选地，所述长效载体选自C16～C20脂肪酸；最优选地，所述胰高血糖素类似物选自任一以下的序列：SEQ ID No.16-33、SEQ IDNo.49-52、 SEQ ID No.57-60、SEQ ID No.65-68、SEQ ID No.73-76、SEQ ID No.96-99。
本发明另一方面提供所述的胰高血糖素类似物的制备方法，包括：利用化学合成方法制备所述胰高血糖素类似物。
本发明另一方面提供所述的胰高血糖素类似物在制备用于治疗代谢性疾病、GCGR/GLP-1R多效激动剂的药物中的用途。
本发明一些实施方式中，所述代谢性疾病选自糖尿病、血脂失调、非酒精性脂肪肝病、与糖尿病相关的其他代谢综合征、甘油三酯过高、低HDL胆固醇及高LDL胆固醇、胰岛素抗性、肥胖症或葡萄糖耐受不良。
本发明另一方面提供一种药物组合物，包括治疗有效量的所述的胰高血糖素类似物。
附图说明
图1显示为FC382K14D21质谱分析结果图；
图2显示为FC382K10D21质谱分析结果图；
图3显示为FC382K20D21质谱分析结果图；
图4显示为FC382K24D21质谱分析结果图；
图5-图8显示为胰高血糖素衍生物的体外活性残留结果图；
图9-图14显示为胰高血糖素衍生物在糖尿病小鼠体中给药后的随机血糖试验结果；
图15-图17显示为胰高血糖素衍生物在糖尿病小鼠中给药后的血糖含量百分比
图18显示为胰高血糖素衍生物在NASH模型鼠中给药后对ALT的变化结果；
图19显示为胰高血糖素衍生物在NASH模型鼠中给药后对AST的变化结果；
图20显示为胰高血糖素衍生物在NASH模型鼠中给药后对TG的变化结果；
图21显示为胰高血糖素衍生物在NASH模型鼠中给药后对HDL的变化结果；
图22显示为胰高血糖素衍生物在NASH模型鼠中给药后的NAS评分结果。
具体实施方式
本发明发明人通过提供一种胰高血糖素类似物，并进一步对其交联脂肪酸、脂肪链或 PEG，从而极大地提升了胰高血糖素类似物的激动活性，另外，由于胰高血糖素类似物中的多肽片段与天然Glucagon序列更为接近，所以免疫原性风险极低，在此基础上完成了本发明。
本发明第一方面提供一种胰高血糖素类似物，包括类胰高血糖素多肽片段，所述类胰高血糖素多肽片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽片段；
HSQGT FTSDX10SKYX14D X16X17 AAX20DFVX24W LMNGG PSSGA PPPSX40(SEQ ID No.3)
其中，X10＝Y、K或C，X14＝L、K或C，X16＝S或E，X17＝Q或E，X20＝Q、K或C， X24＝Q、K或C，X40为K、C或缺失，且X10、X14、X20、X24、X40其中至少一个为K或C；
或，b)氨基酸序列与SEQ ID NO.3具有90％以上序列同一性(sequenceidentity)、且具有a)限定的多肽片段的功能的多肽片段；
所述类胰高血糖素多肽片段上交联有长效载体。
本发明所提供的胰高血糖素类似物中，所述类胰高血糖素多肽片段选自天然Glucagon (本文中简称为GCG，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示)的类似物或者其他具有胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)及胰高血糖素受体(GCGR)激动活性的多肽片段。所述胰高血糖素类似物为人工设计的，通常可以衍生自氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽片段。为了达到交联的目的，在这些多肽原始序列的基础上引入氨基酸K或C，并将脂肪酸、脂肪链或PEG交联至K或C上。例如，可以是第10位Y突变为K或C，再例如，可以是第14位L 突变成K或C，再例如，可以是第20位Q突变为K或C，再例如，可以是第24位Q突变为K或C，再例如，可以是C末端增加一个C或K。X10、X14、X20、X24、X40其中至少一个为K或C，从而可以通过K或C将脂肪酸、脂肪链或PEG交联至类胰高血糖素多肽片段上。在本发明一些具体实施例中，X10、X14、X20、X24、X40其中一个为K或C。
所述类胰高血糖素多肽片段具体可以是：a)氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽片段，也可以是b)氨基酸序列与SEQ ID NO.3具有90％以上、93％以上、95％以上、97％以上、或99％以上序列同一性、且具有a)限定的多肽片段的功能的多肽片段。所述b)中的氨基酸序列具体指：SEQ ID No.3所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或多个(具体可以是1-50、1-30个、1-20个、1-10个、1-5个、或1-3个)氨基酸而得到的，或者在N- 末端和/或C-末端添加一个或多个(具体可以是1-50个、1-30个、1-20个、1-10个、1-5个、或1-3个)氨基酸而得到的，且其编码的多肽片段分别具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列所编码的多肽片段的功能的氨基酸序列。
在本发明一些具体实施例中，所述SEQ ID No.3中，X16＝S、X17＝Q。
在本发明一些具体实施例中，所述SEQ ID No.3中，X16＝S、X17＝E。
在本发明一些具体实施例中，所述SEQ ID No.3中，X16＝E、X17＝Q。
在本发明一些具体实施例中，所述SEQ ID No.3中，X16＝E、X17＝E。
在本发明一些具体实施例中，所述类胰高血糖素多肽片段可以是氨基酸序列如SEQ ID No.4～13其中之一所示的多肽片段，具体序列如表1所示，表1中，SEQ ID NO.1所示为胰高血糖素的氨基酸序列。
表1
Figure BDA0001918808700000051
如上所述，本发明所提供的胰高血糖素类似物C末端氨基酸可以被修饰，比如酰胺化，所述酰胺化通常指将C末端的-COOH基团转变为-CONH2基团。
本发明所提供的胰高血糖素类似物中，还可以包括长效载体，所述长效载体可以起到延长所述胰高血糖素类似物在体内半衰期的作用，所述长效载体可以是包括但不限于脂肪酸、脂肪链及聚乙二醇(PEG)等中的一种或多种的组合。所述长效载体可以与类胰高血糖素多肽片段交联，通常可以通过类胰高血糖素多肽片段上的氨基酸残基K和/或氨基酸残基C与长效载体上的活性基团(例如，脂肪酸中可以包括羧基等活性基团、脂肪链和PEG中可以包括羧基、马来酰亚胺等活性基团)发生反应以实现长效载体与类胰高血糖素多肽片段的交联，例如，可以是各种类型的缩合反应。
本发明所提供的胰高血糖素类似物中，所述类胰高血糖素多肽片段和长效载体之间还可以设有接头。所述接头通常可以分别与类胰高血糖素多肽片段上的赖氨酸残基K和/或半胱氨酸残基C、以及长效载体上的活性基团(例如，接头中可以包括羧基、马来酰亚胺等活性基团)发生反应，以使得接头两端分别连接长效载体和类胰高血糖素多肽片段，以实现长效载体与类胰高血糖素多肽片段的交联，例如，可以是各种类型的缩合反应。
所述接头可以是本领域各种适合用于连接类胰高血糖素多肽片段和长效载体的接头，在本发明一些具体实施例中，所述接头可以是包括但不限于-Abu-(-L-2-氨基丁酰-)、-GABA- (-γ-氨基丁酰-)、-EACA-(-ε-氨基己酰-)、-β-Ala-(-β-丙氨酰-)、-γGlu-(-γ-谷氨酰-)、 -D-γGlu-(-D-γ-谷氨酰-)或其二肽，如-β-Ala-β-Ala-、-γGlu-γGlu-及其立体异构体形式(S和 R对映体)、-5-Aminopentanoyl-(-5-氨基戊酰-)，-8-Aminooctanoyl-(-ω-氨基辛酰-)、 -9-Aminononanoyl-(-9-氨基壬酰-)、-10-Aminodecanoyl-(-10-氨基正癸酰-)、-OEG-(-2-(2-(2- 氨基乙氧基)乙氧基)乙酰-)、-2xOEG-、-γGlu-OEG-、-γGlu-2xOEG-、-D-γGlu-2xOEG-、 -2xOEG-γGlu-、-γGlu-3xOEG-、-γGlu-8xPEG-(-3-((γ-谷氨酰胺)-8x聚乙二醇)-丙酰-)、 -γGlu-3xOEG-γ-Glu-8xPEG-等中的一种或多种的组合。在本发明另一些具体实施例中，所述接头可以是包括但不限于化学结构式如下所示的基团：
Figure BDA0001918808700000071
本发明所提供的胰高血糖素类似物中，所述脂肪酸可以为C8～C30、C8～C12、 C12～C16、C16～C20、或C20～C30脂肪酸，所述脂肪酸可以为一元羧酸和/或二元羧酸，所述脂肪酸可以为直链的，也可以是有支链的。所述脂肪酸具体可以是包括但不限于辛酸(C8)、癸酸(C10)、月桂酸(C12)、肉豆蔻酸(C14)、棕榈酸(C16)、或硬脂酸(C18)等，或它们对应的二元酸，例如，可以是包括但不限于十六烷基二酸、十八烷基二酸、二十烷基二酸、二十二烷基二酸等；所述脂肪链可以为C8～C30、C8～C12、C12～C16、C16～C20、或 C20～C30脂肪链，所述脂肪链可以为直链的，也可以是有支链的。在本发明一具体实施例中，交联所形成的基团可以是包括但不限于化学结构式如下所示的基团：
Figure BDA0001918808700000081
在本发明一些具体实施例中，所示胰高血糖素类似物可以是表2中所列出的化合物：
表2
Figure BDA0001918808700000082
Figure BDA0001918808700000091
Figure BDA0001918808700000101
Figure BDA0001918808700000111
Figure BDA0001918808700000121
表2中，-γE-即-γGlu(-γ-谷氨酰-)，例如“K(棕榈酰基-γE)”表示具有棕榈酰基通过-γ- 谷氨酰-接头缀合到ε氮上的赖氨酸。“K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)”表示具有十八烷二酸单酰基通过-γ-谷氨酰-与2个OEG分子相连的接头缀合到ε氮上的赖氨酸。X40＝C (mPEG2-马来酰亚胺)及X14＝C(mPEG2-马来酰亚胺)表示具有如下所示的结构，其中 mPEG2-马来酰亚胺的MW为40KD：
Figure BDA0001918808700000131
本发明的第二方面，提供一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码前述的类胰高血糖素多肽片段。
本发明的第三方面，提供一种重组表达载体，包含本发明第二方面提供的分离的多核苷酸。
本发明的第四方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞含有本发明第三方面提供的重组表达载体或基因组中整合有外源的本发明第二方面提供的分离的多核苷酸。
本发明第五方面提供本发明第一方面所提供的胰高血糖素类似物的制备方法，所述制备方法可以包括：利用化学合成方法制备所述胰高血糖素类似物；所述制备方法也可以包括：在合适的条件下培养本发明第四方面提供的宿主细胞，使之表达所述类胰高血糖素多肽片段，分离、纯化获得所述类胰高血糖素多肽片段，再将所述长效载体化学交联至所述类胰高血糖素多肽片段。本发明的胰高血糖素类似物可通过标准肽合成方法进行制备，例如，通过标准固相或液相方法，逐步或通过片段组装，并分离和纯化最终的类胰高血糖素多肽片段、胰高血糖素类似物产物，或通过重组和合成方法任意组合。
本发明第六方面提供所述的胰高血糖素类似物在制备用于治疗代谢性疾病、GCGR/GLP-1R多效激动剂的药物中的用途。所述代谢性疾病具体可以选自糖尿病、肥胖、血脂失调、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)/非酒精性脂肪肝炎(NASH)、与糖尿病相关的其他代谢综合征，包括甘油三酯过高、低HDL胆固醇及高LDL胆固醇、胰岛素抗性、肥胖症或葡萄糖耐受不良等。
本发明第七方面提供一种药物组合物，包括治疗有效量的本发明第一方面所提供的胰高血糖素类似物。
本发明的第八方面提供一种疾病的治疗方法，包括步骤：向个体施用本发明第一方面提供的胰高血糖素类似物，或本发明第七方面提供的药物组合物。本发明的研究人员发现本发明所提供的胰高血糖素类似物在中性pH或微弱酸性的pH下具有足够的水溶性且具有改善的化学稳定性。在随机血糖检测试验中，施用了部分本发明的胰高血糖素类似物的糖尿病模型小鼠在24小时后血糖值低于对照生理盐水组及利拉鲁肽组，呈现出极平稳的血糖波动。施用了另一部分本发明胰高血糖素衍生物的糖尿病模型小鼠在72小时后血糖值低于对照生理盐水组及利拉鲁肽组。此外，本发明的胰高血糖素衍生物在DIO小鼠体内施用后，诱导了体重的显著降低，胰高血糖素衍生物在NASH模型小鼠体内施用后，NAS组织学评分、肝脏 TG、AST、ALT含量显著下降，HDL含量则明显升高。
虽然在现有技术中，研究开发具有多重激动活性的分子已经成为本领域的研究热点，且非常有临床前景，但真正要获得一个理想的这类药物，实际上却是非常困难的。首先是安全性问题，特别是免疫原性问题。降糖减肥类药物需要长期使用，对安全性要求极高。为了设计获得一个具有高多重激动活性、并且体内稳定的多肽，现有的技术方案都往往都引入了较多的突变位点，并且经常引入非天然氨基酸及其他修饰。这些突变及非天然氨基酸的引入，都增加了潜在免疫原性的风险。一般情况下与人源序列具有越高的同源性，在人体中免疫原性风险就相对的越低。罗氏与益普生合作研发的GLP-1受体激动剂降糖药Taspoglutide(仅引入了2个非天然氨基酸Aib)，抗体生成率达到了49％，目前已经暂停了所有临床Ⅲ期的研究(JULIO ROSENSTOCK等，The Fate of Taspoglutide,a Weekly GLP-1Receptor Agonist, Versus wice-Daily Exenatide for Type 2,DIABETES CARE,36:498-504,2013)。PHIL AMBERY 等(THE ENDOCRINOLOGIST，SPRING，2017：12-13)在GCG的序列基础上筛选了500多个结构，才获得了一条候选肽MEDI0382。其中，为了保持较高的GLP-1与GCG双重活性和体内稳定性，与GCG相比，MEDI0382引进了9个突变位点，突变率达到了约30％；同样，Andreas Evers等(J Med Chem.2017May 25；60(10):4293-4303)在Exendin-4的结构基础上引入了9个突变位点，突变率达到了约23％，并进行了脂肪酸链修饰，才获得了同时具有较高GLP-1与GCG双重活性的杂合肽；Brian Finan等(Brian Finan等，NatMed.21: 27-36，2015)设计的GLP-1/GCG双活性肽是在GCG的C末端加入了GPSSGAPPPS序列，并引入了7个突变氨基酸，包括第二位突变为非天然氨基酸Aib。因此，现有的技术方案往往都引入了较多的突变位点，并且经常引入非天然氨基酸及其他修饰，才能获得同时具有GLP-1及GCG高活性的多肽。这些突变，修饰及非天然氨基酸的引入，都增加了潜在免疫原性的风险。而对于治疗糖尿病，肥胖这类疾病的药物，安全性是极其重要的。此外，对于 GLP-1,Glucagon这类30个氨基酸长度的小肽，序列的改变对其活性变化是极其敏感的；而对于多重活性多肽，由于涉及对多个不同受体的激动，其变化就更加复杂，根本无法预测任何一个氨基酸改变后对受体激动活性会是什么样的后果。
而本发明所提供的胰高血糖素类似物中的多肽链在天然Glucagon序列的基础上只突变了 2-3个氨基酸(如S16E、R17Q、R18A)，免疫原性风险极低，另外在此基础上引入已上市的药物Exenatide(商品名Bydureon)的C末端序列，安全性更高。此外，本发明所提供的胰高血糖素类似物具有极高的GLP-1R及GCGR激动活性，令人惊讶的是，胰高血糖素类似物在脂肪酸交联前后，体外活性更是具有显著的变化。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989 and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987 and periodic updates；theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego； Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS INENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999 等。
实施例中所涉及的缩写含义具体如下：
RT：室温
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
Fmoc：9H-芴-9-基甲氧基羰基
Trt：三苯甲基
Boc：叔丁氧羰基
HOBt：1-羟基苯并三唑
tBu:叔丁基
DCM：二氯甲烷
DBLK：20％N,N-二甲基甲酰胺哌啶
DIC：N,N’-二异丙基碳二亚胺
MeOH：甲醇
TFA：三氟乙酸
Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH：Nα-芴甲氧羰基-(Nε–(γ-谷氨酰基(Nα-十六烷基,α-叔丁酯))) 赖氨酸
Decanoyl：癸酰基
Stearoyl：十八烷酰基
OEG：2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙酸-γGLu-：-γ谷氨酰-
-γGlu-：-γ-谷氨酰-
PEG：聚乙二醇
DMAP:二甲基氨基吡啶
TFEA：2,2,2-三氟乙醇
DIEA：N,N-二异丙基乙胺
MTBE：甲基叔丁基醚
Pd(PPh3)4：四(三苯基膦)钯
Alloc：烯丙氧羰基
作为一种通用的方法，实施例中以C382(或其酰胺化修饰多肽C381)为基础，将特定氨基酸位点突变为K或C制备胰高血糖素衍生物的方法。类似的，其他氨基酸序列的多肽，如C462及C495(或其酰胺化修饰多肽)为基础制备胰高血糖素衍生物的方法与此一致。
实施例中涉及的各商购氨基酸以及氨基酸片段、以及各商购树脂，其生产厂家和商品型号如下：
Fmoc保护基氨基酸原料、2-CTC树脂和王树脂均为常规的市售试剂(保护氨基酸厂家：成都郑源生化科技有限公司，树脂厂家：天津南开和成科技有限公司)；
有机溶剂和其它原料来源均为市售品(厂家：国药集团化学试剂有限公司；化学纯)。
另外，HPLC和质谱的条件和所用设备型号及生产厂家说明如下：
仪器：HPLC UltiMate3000；检测条件如下表3所示。
表3
Figure BDA0001918808700000171
制备液相：北京创新通恒，LC3000。
质谱：仪器型号为5800MALDI-TOF-TOF(AB SCIEX)，分析软件为T0F/TOFExplorer，Data Explorer，MS采用Reflector Positive参数：CID(OFF)，mass rang(700－6500Da)Focus Mass(1200Da)Fixed laser intensity(5600)Digitizer：Bin Size(0.5ns)
实施例1
胰高血糖素衍生物FC382K14D21的制备：
Figure BDA0001918808700000172
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.16)
Fmoc保护的氨基酸购自成都郑源生化科技有限公司，在多肽延长合成过程中，使用以下的氨基酸：Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Asn(Trt)-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Lys(Boc)-OH、 Fmoc-L-Met-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Pro-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Trp(Boc)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH。
Fmoc-Ser(tBu)-王树脂合成：
称取替代度为0.58mmol/g的王树脂(天津南开和成科技有限公司)12.95g，加入到固相反应柱中，加入100mL DCM溶胀树脂30分钟后，用DMF洗涤3次，每次100mL。另取 5.76gFmoc-Ser(tBu)-OH、2.43g HOBt和0.19g DMAP用DMF溶解，5-8℃下加入2.6mL DIC活化5min后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应16小时。Kaiser检测为阴性后，依次DMF洗涤2次，MeOH洗涤2次、DCM洗2次和MeOH洗涤2次，每次洗涤溶剂为 100mL。收料、常温减压干燥，得到未封端的Fmoc-Ser(tBu)-王树脂14.18g。
上述树脂加入反应柱中，加入100mL DCM溶胀30分钟后，抽干，用DMF洗涤3次，每次100mL。再往反应柱中加入100mL DMF和13mL封闭液(封闭液为V乙酸酐：V吡啶＝1:1)，反应2小时，依次DMF洗涤2次，MeOH洗涤2次、DCM洗2次和MeOH洗涤 2次，每次洗涤溶剂为100mL。收料、常温减压干燥得到Fmoc-Ser(tBu)-王树脂15.26g。
肽树脂的合成：
称取上述封端后的Fmoc-Ser(tBu)-王树脂4.48g(1.0mmol)，加入反应柱中用20mLDCM 溶胀30分钟后，用DMF洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，往反应柱中加入10mL DBLK 溶液(20％哌啶/DMF(V/V))，反应5分钟，抽滤，用20mL DMF洗涤一次，再加入10mL DBLK溶液(20％哌啶/DMF(V/V))，反应10分钟，Kaiser检测为阳性。抽滤，用DMF洗涤3 次，每次20mL。另取Fmoc-Pro-OH(1.69g，5.0eq)、HOBt(0.81g，6.0eq)加入10mL DMF中溶解，5-8℃下加入DIC(0.69g，5.5eq)活化5min后，加入反应柱中，反应1小时，Kaiser检测为阴性，反应完全，用DMF洗涤3次，每次20mL。重复上述去保护和偶联操作，根据多肽序列依次完成其他氨基酸的偶联，其中K14采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(成都郑源生化科技有限公司)偶联。最后一个氨基酸偶联完成后，按上述方法去保护，去保护完全后依次DMF洗涤2次，MeOH洗涤2次、DCM洗2次和MeOH洗涤2次，每次洗涤溶剂为 20mL。收料、常温减压干燥得到目标肽树脂12.26g。
粗肽的切割：
称取上述肽树脂6.01g，20-30℃缓慢加入至60mL裂解液(三氟乙酸：苯甲硫醚：苯甲醚：乙二硫醇＝90:5:3:2)中，加毕反应2小时。反应完成后，过滤除去树脂，剧烈搅拌下，将滤液倒入事先预冷的甲叔醚(600mL)中，得到的混合溶液冰浴沉降2小时。除去上清液，用预冷的甲叔醚离心洗涤5次，每次400mL。完成后收料，常温减压干燥得到粗肽3.00g。
粗肽的纯化：
经多步纯化对粗肽进行精制：第一步：固定相：C18(Daisogel： sp-120-40/60-C18-RPS)，流动相的线性梯度20-60％B(流动相A：0.1％TFA，流动相B：乙腈)，40分钟，流速15mL/min，紫外线(UV)在220nm检测；第二步：固定相：C8 (Daisogel：sp-120-10-C8-P)，流动相的线性梯度20-60％B(流动相A：0.5％磷酸，流动相B：乙腈)，40分钟，流速15mL/min，紫外线(UV)在220nm检测冻干机：冻干机北京博医康，FD-2A。
最后冻干得到精肽(95.6％)。MS：m/z 4541.29(M+H)+。
实施例2
胰高血糖素衍生物FC382K14W07的制备：
Figure BDA0001918808700000191
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(十八烷酰基-γE)(SEQ ID NO.81)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys(Stearoyl-Glu-OtBu)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(97.3％)。MS：m/z 4569.02(M+H)+。
实施例3
胰高血糖素衍生物FC382K14W09的制备：
Figure BDA0001918808700000201
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(二十烷二酸单酰基-γE)(SEQ ID NO.82)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys(N-(tBuOCO(CH2)18CO)-Glu-OtBu)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.7％)。MS：m/z 4627.12(M+H)+。
实施例4
胰高血糖素衍生物FC382K14D17的制备：
Figure BDA0001918808700000202
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(癸酰基-γE)(SEQ ID NO.83)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys(Decanoyl-Glu-OtBu)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.1％)。MS：m/z 4456.96(M+H)+。
实施例5
胰高血糖素衍生物FC382K14D26的制备：
Figure BDA0001918808700000211
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(((棕榈酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.84)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys(N-(CH3(CH2)14CO)-Glu-OtBu) -OEG-OEG)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.90％)。MS：m/z 4831.18(M+H)+。
实施例6
胰高血糖素衍生物FC382K14W13的制备：
Figure BDA0001918808700000212
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(((十八烷酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.85)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys((N-(CH3(CH2)16CO)-Glu-OtBu) -OEG-OEG)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(97.2％)。MS：m/z 4859.20(M+H)+。
实施例7
胰高血糖素衍生物FC382K14W14的制备：
Figure BDA0001918808700000213
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(((二十烷酰基)-γE)-OEG)(SEQ ID NO.86)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys((N-(CH3(CH2)18CO)-Glu-OtBu)-OEG) -OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.6％)。MS：m/z 4742.17(M+H)+。
实施例8
胰高血糖素衍生物FC382K10D21的制备：
Figure BDA0001918808700000221
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.24)
合成方法同实施例1，其中Y10替换为K10并采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(成都郑源生化科技有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.0％)。MS：m/z 4492.02(M+H)+。
实施例9
胰高血糖素衍生物FC382K10D24的制备：
Figure BDA0001918808700000222
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(((棕榈酰基)-γE)-γE)(SEQ ID NO.87)
合成方法同实施例1，其中L10替换为K10并采用Fmoc-Lys (N-(N-Pal-Glu-OtBu)-Glu-OtBu)-OH进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(97.0％)。MS：m/z 4620.11(M+H)+。
实施例10
胰高血糖素衍生物FC382K20D21的制备：
Figure BDA0001918808700000231
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAX DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X20＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.34)
合成方法同实施例1，其中Q20替换为K20并采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(成都郑源生化科技有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(95.8％)。MS：m/z 4525.94(M+H)+。
实施例11
胰高血糖素衍生物FC382K20W07的制备：
Figure BDA0001918808700000232
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAX DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X20＝K(十八烷酰基-γE)(SEQ ID NO.89)
合成方法同实施例1，其中Q20替换为K20并采用Fmoc-Lys(Stearoyl-Glu-OtBu)-OH 进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽。MS：m/z 4554.02 (M+H)+。
实施例12
胰高血糖素衍生物FC382K24D21的制备：
Figure BDA0001918808700000241
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAQ DFVXW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X24＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.39)
合成方法同实施例1，其中Q24替换为K24并采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH(成都郑源生化科技有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.9％)。MS：m/z 4526.12(M+H)+。
实施例13
胰高血糖素衍生物FC382K24W07的制备：
Figure BDA0001918808700000242
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAQ DFVXW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X24＝K(十八烷酰基-γE)(SEQ ID NO.90)
合成方法同实施例1，其中Q24替换为K24并采用Fmoc-Lys(Stearoyl-Glu-OtBu)-OH (杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.3％)。MS：m/z 4554.16(M+H)+。
实施例14胰高血糖素衍生物FC381K14D21的制备：
Figure BDA0001918808700000243
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X14＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.17)
Fmoc-Ser(tBu)-Rink amide MBHA树脂的合成：
称取替代度为0.38mmol/g的Rink amide MBHA树脂(天津南开和成科技有限公司)3.03g，加入到固相反应柱中，加入10mL DCM溶胀树脂30分钟后，用DMF洗涤3次，每次10mL。往反应柱中加入15mL DBLK溶液，反应5分钟，抽滤，用20mL DMF洗涤一次，再加入15mL DBLK溶液，反应10分钟，Kaiser检测为阳性。抽滤，用DMF洗涤3次，每次20mL。
另取2.03g Fmoc-Ser(tBu)-OH和1.31g HOBt用10mLDMF溶解，5-8℃下加入1mLDIC 活化5min后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时。Kaiser检测为阴性后，直接用于下步肽树脂的合成。
肽树脂的合成：
称取上述树脂Fmoc-Ser(tBu)-Rink amide MBHA树脂(1.0mmol)，加入反应柱中用20mL DCM 溶胀30分钟后，用DMF洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，往反应柱中加入10mLDBLK 溶液(20％哌啶/DMF(V/V))，反应5分钟，抽滤，用20mL DMF洗涤一次，再加入10mLDBLK溶液(20％哌啶/DMF(V/V))，反应10分钟，Kaiser检测为阳性。抽滤，用DMF洗涤3 次，每次20mL。另取Fmoc-Pro-OH(1.69g，5.0eq)、HOBt(0.81g，6.0eq)加入10mL DMF中溶解，5-8℃下加入DIC(0.69g，5.5eq)活化5min后，加入反应柱中，反应1小时，Kaiser检测为阴性，反应完全，用DMF洗涤3次，每次20mL。重复上述去保护和偶联操作，根据肽序依次完成其他氨基酸的偶联，其中K14采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH偶联。最后一个氨基酸偶联完成后，按上述去保护方法去保护，去保护完全后依次DMF洗涤2次，MeOH 洗涤2次、DCM洗2次和MeOH洗涤2次，每次洗涤溶剂为20mL。收料、常温减压干燥得到目标肽树脂。
粗肽的切割：
称取上述肽树脂6.01g，20-30℃缓慢加入至60mL裂解液(三氟乙酸：苯甲硫醚：苯甲醚：乙二硫醇＝90:5:3:2)中，加毕反应2小时。反应完成后，过滤除去树脂，剧烈搅拌下，将滤液倒入事先预冷的甲叔醚(600mL)中，得到的混合溶液放置冰箱沉降2小时。除去上清液，用预冷的甲叔醚离心洗涤5次，每次400mL。完成后收料，常温减压干燥得到粗肽 3.00g。
粗肽的纯化：
使用制备液相(北京创新通恒，LC3000)，经多步纯化对粗肽进行精制：第一步：固定相：C18(Daisogel：sp-120-40/60-C18-RPS)，流动相0.1％TFA，乙腈；第二步：固定相： C8(Daisogel：sp-120-10-C8-P)，流动相：0.5％磷酸，乙腈，第三步：固定相：C8 (Daisogel：sp-120-10-C8-P)，流动相：50mM乙酸铵、0.3％醋酸，乙腈，最后冻干(冻干机北京博医康，FD-2A)得到精肽(0.120g，97.8％)。最后采用MS对精肽进行分子量测定： m/z 4540.35(M+H)+。
实施例15
胰高血糖素衍生物FC381K10D21的制备：
Figure BDA0001918808700000261
HSQGT FTSDXSKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X10＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ ID NO.25)
合成方法同实施例14，其中K10采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(98.3％)。MS:m/z 4590.55(M+H)+。
实施例16
胰高血糖素衍生物FC382K14W15的制备：
Figure BDA0001918808700000262
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.18)
固相法合成带支链的保护氨基酸W1：Alloc-Lys((Octadecanedioic Acid mono-tert-butylester)-Glu-OtBu)-OEG-OEG)-OH，如下：
Figure BDA0001918808700000271
W1的合成：
称取取代度为1.0mmol/g的2-CTC树脂20g，加入到固相反应柱中，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取8.53g Alloc-Lys(Fmoc)-OH(20mmol) 用DMF溶解，冰水浴下加入7.5ml DIEA(45mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入30ml无水甲醇封闭1小时，用DMF洗涤3次。用DMF:吡啶体积比为 4:1的混合溶液脱去Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，称取15.42g[2-[2-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸、5.41g HOBt加入DMF溶解，冰水浴下加入6.2ml DIC活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，室温下反应2小时。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应物料偶联的步骤，按照支链片段顺序，依次完成[2-[2-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸、 Fmoc-Glu-OtBu、十八烷二酸单叔丁酯。偶联完毕，将树脂用DMF洗涤3次，MeOH洗涤5 次，抽干。将树脂加入400ml TFEA/DCM＝1:4中室温下反应4h。过滤树脂后，滤液旋除 DCM，将其加入500mlMTBE中沉降，离心干燥后得到目标化合物19.43g，收率95.1％，m/Z 1059.41(M+H)。
多肽的合成同实施案例1，K14采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.7％)。MS：m/z 4889.57(M+H) +。
实施例17
胰高血糖素衍生物FC382K10W15的制备：
Figure BDA0001918808700000272
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.30)
带支链的保护氨基酸W1合成同实施例16。多肽的合成同实施案例1，其中K10采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(97.5％)。MS：m/z 4839.73(M+H)+。
实施例18
胰高血糖素衍生物FC382K20W15的制备：
Figure BDA0001918808700000281
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAX DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X20＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.36)
带支链的保护氨基酸W1合成同实施例16。多肽的合成同实施案例1，其中K20采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(98.3％)。MS：m/z 4873.93(M+H)+。
实施例19
胰高血糖素衍生物FC382K24W15的制备：
Figure BDA0001918808700000282
HSQGT FTSDY SKYLD SQAAQ DFVXW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X24＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.41)
带支链的保护氨基酸W1合成同实施例16。多肽的合成同实施案例1，其中K24采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.4％)。m/z 4874.32(M+H)+。
实施例20
胰高血糖素衍生物FC382K10W09的制备：
Figure BDA0001918808700000291
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(二十烷二酸单酰基-γE)(SEQ ID NO.91)
合成方法同实施例1，其中K10采用Fmoc-Lys(N-(tBuOCO(CH2)18CO)-Glu-OtBu)-OH (杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.5％)。MS：m/z 4577.20(M+H)+。
实施例21
胰高血糖素衍生物FC382K10W03的制备：
Figure BDA0001918808700000292
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(十六烷二酸单酰基-GABA)(SEQ ID NO.92)
合成方法同实施例1，其中K14采用Fmoc-Lys(N-(tBuOCO(CH2)14CO)-GABA)-OH(杭州和素化学技术有限公司)进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.7％)。MS：m/z 4477.12(M+H)+。
实施例22
多肽FC382C14D22的制备：
Figure BDA0001918808700000293
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝C(十六烷基-马来酰亚胺)(SEQ ID NO.48)
N-十六烷基-2,5-二氧代吡咯烷的合成：
十六烷胺盐取(4.10g，0.017mol)，加入60ml乙酸溶解，加入马来酸酐(2g，0.02mol)，升温至120℃乙酸回流，回流反应8h后，加水洗100ml搅拌，过滤，用水洗涤滤饼，滤饼干燥后得到十六烷氨基-2,5-二氧代吡咯烷3.6g。
多肽的合成：
多肽的合成同实施案例1，其中成C14采用Fmoc-Cys(Trt)-OH进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.5％)。
多肽的脂肪酸修饰：
称取多肽化合物(10mg，2.3μmol)，加入5ml 50mM PB缓冲液溶解(pH7)，加入十六烷氨基-2,5-二氧代吡咯烷(1.30mg，5.75μmol)，室温搅拌反应3h，RP-HPLC监控反应终点。反应毕，反应液采用RP-HPLC进行纯化，得到精肽(96.7％)。MS:m/z4470.10(M+H) +。
实施例23
胰高血糖素衍生物FC382C10D22的制备：
Figure BDA0001918808700000301
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝C(十六烷基-马来酰亚胺)(SEQ ID NO.45)
N-十六烷基-2,5-二氧代吡咯烷的合成同实施案例22。
多肽的合成同实施案例1，其中C10采用Fmoc-Cys(Trt)-OH进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(0.073g，98.5％)。多肽的脂肪链修饰同实施案例22，RP-HPLC监控反应终点。反应毕，反应液采用RP-HPLC进行纯化，得到精肽 (95.3％)。MS:m/z 4420.30(M+H)+。
实施例24
胰高血糖素衍生物FC381C10D22的制备：
Figure BDA0001918808700000311
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X10＝C(十六烷基-马来酰亚胺)(SEQ ID NO.47)
N-十六烷基-2,5-二氧代吡咯烷的合成同实施案例22。多肽的合成同实施案例14，其中 C10采用Fmoc-Cys(Trt)-OH进行偶联，得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(0.036g，98.4％)。多肽的脂肪链修饰同实施案例22，RP-HPLC监控反应终点。反应毕，反应液采用RP-HPLC进行纯化，得到精肽(97.3％)。m/z 4419.40(M+H)+。
实施例25
胰高血糖素衍生物FC381K10W15的制备：
Figure BDA0001918808700000312
HSQGT FTSDX SKYLD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X10＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.31)
带支链的保护氨基酸W1合成同实施例16。多肽的合成同实施案例14，其中K10采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，得到精肽(95.6％)。MS:m/z 4838.80(M+H)+。
实施例26
胰高血糖素衍生物FC381K14W15的制备：
Figure BDA0001918808700000313
HSQGT FTSDY SKYXD SQAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X14＝K(((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.19)
带支链的保护氨基酸W1合成同实施例16。多肽的合成同实施案例14，其中K14采用W1进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化。得到精肽(95.4％)。MS:m/z 4888.33(M+H)+。
实施例27
胰高血糖素衍生物FC462K14W12的制备：
Figure BDA0001918808700000321
HSQGT FTSDY SKYXD EEAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X14＝K(((二十烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.96)
带支链的保护氨基酸合成同实施例16,，先固相法合成带支链的保护氨基酸W2：Alloc-Lys((Eicosanedioic Acid mono-tert-butylester)-Glu-OtBu)-OEG-OEG)-OH(其中脂肪酸偶联采用二十烷二酸单叔丁酯)，如下：
Figure BDA0001918808700000322
再进行多肽合成，多肽合成同实施例1，其中K14采用W2进行偶联，并采用Pd(PPh3)4 脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化得到精肽(96.4％)。MS：m/z 4960.43(M+H)+。
实施例28
胰高血糖素衍生物FC462K10W12的制备：
Figure BDA0001918808700000323
HSQGT FTSDX SKYLD EEAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-OH
X10＝K(((二十烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.98)
带支链的保护氨基酸W2合成和多肽的合成同实施例27，其中K10采用W2进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(97.0％)。m/z 4910.32(M+H)+。
实施例29
胰高血糖素衍生物FC463K14W12的制备：
Figure BDA0001918808700000331
HSQGT FTSDY SKYXD EEAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X14＝K(((二十烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.97)
带支链的保护氨基酸W2合成同实施例27，和多肽的合成同实施列14，其中K14采用W2进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.3％)。MS：m/z 4959.33(M+H)+。
实施例30
胰高血糖素衍生物FC463K10W12的制备：
Figure BDA0001918808700000332
HSQGT FTSDX SKYLD EEAAQ DFVQW LMNGG PSSGA PPPS-NH2
X10＝K(((二十烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG)(SEQ ID NO.99)
带支链的保护氨基酸W2合成同实施例27，和多肽的合成同实施列14，其中K14采用W2进行偶联，并采用Pd(PPh3)4脱除Alloc基团。得到的粗肽采用RP-HPLC进行纯化，最后冻干得到精肽(96.3％)。MS：m/z 4909.45(M+H)+。
以上实施例中胰高血糖素衍生物的制备仅以C382及C381系列多肽为例，表2中的其他胰高血糖素衍生物反应条件均参照上述方法，即：多肽部分C末端-OH基团封闭的胰高血糖素衍生物，例如FC495K14D21(SEQ ID NO.49)或FC462K14D21(SEQ ID NO.65)其合成与实施例1相同，多肽部分C末端酰胺化修饰的胰高血糖素衍生物，例如FC496K14D21 (SEQ IDNO.50)或FC463K14D21(SEQ ID NO.66)其合成与实施例14相同。至于脂肪酸链部分，棕榈酰基-γE的交联与实施例1相同；十八烷酰基-γE的交联与实施例2相同；二十烷二酸单酰基-γE的交联与实施例3相同；癸酰基-γE的交联与实施例4相同；((棕榈酰基)-γE)-2xOEG的交联与实施例5相同；((十八烷酰基)-γE)-2xOEG的交联与实施例6相同；((二十烷酰基)-γE)-OEG的交联与实施例7相同；棕榈酰基-γE-γE的交联与实施例9 相同；((十八烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG的交联与实施例16相同；十六烷二酸单酰基 -GABA的交联与实施例21相同；十六烷基-马来酰亚胺的交联与实施例22相同；((二十烷二酸单酰基)-γE)-2xOEG的交联与实施例27相同。
实施例31
体外细胞学活性测定：
(一)GLP-1R激动活性测定：
GLP-1R激动活性检测采用荧光素酶报告基因检测法(Jonathan W Day等：NatChem Biol. 2009Oct；5(10):749-57)。将人源GLP-1R基因克隆至哺乳动物细胞表达质粒pCDNA3.1中，构建成重组表达质粒pCDNA3.1-GLP-1R，同时荧光素酶(luciferase)全长基因克隆至pCRE 质粒得到pCRE-Luc重组质粒。pcDNA3.1-GLP-1R和pCRE-Luc质粒按摩尔比1:10的比例转染CHO-K1细胞，筛选稳转表达株。
在9-cm细胞培养皿中用含10％FBS和300μg/ml G418的DMEM/F12培养基培养细胞，等汇合度至90％左右时，弃去培养上清，加入2ml胰酶消化3min后，加入2ml含10％FBS 和300μg/ml G418的DMEM/F12培养基中和，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min后，弃去上清，加入2ml含10％FBS和300μg/ml G418的DMEM/F12培养基重悬，计数。用含 10％FBS的DMEM/F12培养基稀释细胞至1×105/ml，96孔板中每孔铺100μl，即1×104/孔，贴壁后换成含0.2％FBS的DMEM/F12培养基培养。铺在96孔板的细胞弃去上清后，将纯化的重组蛋白用含1％BSA的DMEM/F12培养基稀释至一系列指定浓度，加入到细胞培养孔中，100μl/孔，刺激6h后检测。根据lucifersae reporter kit(Ray Biotech,Cat:68-LuciR-S200)说明书进行检测。每个样品的测活重复3次。
(二)GCGR激动活性检测方法：
GCGR激动活性检测同样也采用荧光素酶报告基因检测法。将人源GCGR基因克隆至哺乳动物细胞表达质粒pcDNA3.1中，构建成重组表达质粒pCDNA3.1-GCGR，转染CHO-K1 及稳转细胞株的筛选构建同上。每个样品的测活重复3次。
表4
Figure BDA0001918808700000351
Figure BDA0001918808700000361
Figure BDA0001918808700000371
Glucagon：HSQGT FTSDY SKYLD SRRAQ DFVQW LMNT-OH(SEQ ID NO.1)。
利拉鲁肽：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAXEFIAWLVRGRG，X＝K(棕榈酰基-γE)(SEQ IDNO.2)。
实施例32
血清稳定性：
(1)图中相应胰高血糖素衍生物用5mM Tris-HCl，pH8.5，0.02％TWEEN80溶液配制成浓度为1.0mg/ml的溶液，除菌过滤(0.22μm，Millipore SLGP033RB)后，用大鼠血清稀释10倍，混匀，分装到无菌离心管中；
(2)上述样品各取3管于-20℃冻存作为对照，其余置37℃恒温箱，于0小时、24小时及72小时取样检测活性；
(3)检测胰高血糖素衍生物GCGR激动活性。
相对活性：以0小时的活性值为100％，后续时间点测得的值与之相比而获得。
图5-图8为胰高血糖素衍生物随着时间变化的活性残留结果。
实施例33
db/db小鼠给药后随机血糖检测：
瘦素受体缺陷二型糖尿病(db/db)小鼠中的降糖实验。db/db小鼠主要按照体重、非空腹血糖，药前OGTT反应三个指标进行筛选并均衡分组，每组6只，排除过大或者过小的个体，非空腹血糖要大于15mM。胰高血糖素衍生物溶解于50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)， 5％山梨醇，0.02％v/v Tween-80，皮下注射利拉鲁肽或表2中胰高血糖素衍生物(单次给药)，剂量皆为10nmol/Kg体重，在给药前及给药后0、1、3、6、24、72小时，测定血糖值。0-24 小时血糖变化趋势如图9～图14所示，图15为不同长效载体交联后的胰高血糖素衍生物24 小时的血糖含量百分比(与0小时血糖含量相比百分比)。72小时血糖含量百分比(与0小时血糖含量相比百分比)如图16、17所示。图16与图17所示胰高血糖素衍生物在72小时的血糖含量值比0小时显著降低，而其他胰高血糖素衍生物已经够恢复(或已接近)到0小时初始值(结果未显示)，说明图16-17中的胰高血糖素衍生物在体内的活性半衰期比其他胰高血糖素衍生物明显更长，起效时间更长。
实施例34
饮食诱导肥胖(DIO)小鼠中的减重实验：
DIO鼠模型的制备：约7周龄雄性C57BL/6J雄性小鼠给予高脂饲料(60％kcal fromfat) 继续饲养约16周(共23周)，到体重约为45g时进行试验。DIO小鼠随机分为组，每组6只，基础体重无差异，每天称重。皮下注射胰高血糖素衍生物、利拉鲁肽或PBS。利拉鲁肽及表5中胰高血糖素衍生物给药剂量为20nmol/Kg体重，每天给药一次；表6中胰高血糖素衍生物给药剂量为40nmol/Kg体重，每4天给药一次。
表5
胰高血糖素衍生物 体重变化(％) SEM 胰高血糖素衍生物 体重变化 SEM
利拉鲁肽 -8.4 2.4 FC495K10D21 -39.2 2.6
PBS +1.7 1.1 FC496K10D21 -39.7 5.3
FC382K14D21 -36.5 1.7 FC495K20D21 -15.8 1.6
FC381K14D21 -37.2 3.8 FC496K20D21 -14.9 1.5
FC382K10D21 -42.3 3.9 FC495K24D21 -20.1 2.8
FC381K10D21 -41.5 5.3 FC496K24D21 -18.5 3.0
FC382K20D21 -15.6 1.9 FC462K14D21 -40.7 2.6
FC381K20D21 -17.2 2.3 FC463K14D21 -39.4 2.9
FC382K24D21 -16.7 3.2 FC462K10D21 -42.1 3.8
FC381K24D21 -15.9 4.7 FC463K10D21 -42.3 4.5
FC884K14D21 -12.4 2.4 FC462K20D21 -26.5 3.2
FC885K14D21 -21.9 3.2 FC463K20D21 -24.5 3.8
FC495K14D21 -38.9 1.9 FC462K24D21 -14.9 5.4
FC496K14D21 -41.0 2.3 FC463K24D21 -16.4 1.9
表6
Figure BDA0001918808700000381
Figure BDA0001918808700000391
实施例35
胰高血糖素衍生物在非酒精性脂肪肝(NASH)小鼠模型中的药效：
选取8-10周龄，体重25-30克的C57BL/6雄性小鼠，用CDA-HFD饲料诱导NASH模型。在实验开始前及实验终点前测定血糖含量。实验终点检测血清中的AST、ALT、肝脏 TG含量、血清HDL-C含量(日立7060全自动生化检测仪)等参数；肝组织病理学分析： H&E、SR。统计学方法：采用t-test或One-way ANOVA进行差异显著性检验，P<0.01为有显著统计学差异，P<0.001为有极其显著的统计学差异。皮下注射胰高血糖素衍生物。表5中胰高血糖素衍生物和FC384K14D21给药剂量为20nmol/Kg体重，每天给药一次；表6中胰高血糖素衍生物和FC386K10W15给药剂量为40nmol/Kg体重，每4天给药一次。共给药 7周。NAS评分标准如表7所示。结果如图18-22所示，图中的模型鼠组和正常鼠组对应的数据是皮下注射PBS后得到的，其余药物组都是在模型鼠中完成。
表7
Figure BDA0001918808700000401
综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
序列表
<110> 杭州和泽医药科技有限公司
浙江道尔生物科技有限公司
<120> 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途
<160> 99
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 2
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly
20 25 30
<210> 3
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Xaa Asp Xaa
1 5 10 15
Xaa Ala Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa
35 40
<210> 4
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 5
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 6
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 7
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 8
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 9
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 10
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 11
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 12
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
His Asx Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 13
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
His Asx Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 14
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Lys Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 15
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Lys Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 16
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 17
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 18
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 19
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 20
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 21
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 22
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 23
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 24
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 25
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 26
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 27
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 28
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 29
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 30
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 31
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 32
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 33
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
His Asx Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 34
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 35
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 36
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 37
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 38
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 39
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 40
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 41
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 42
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 43
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 44
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 45
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 46
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 47
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 48
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 49
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 50
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 51
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 52
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 53
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 54
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 55
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 56
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 57
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 58
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 59
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 60
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 61
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 62
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 63
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 64
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 65
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 66
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 67
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 68
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 69
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 70
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 71
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 72
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 73
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 74
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 75
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 76
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 77
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 78
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 79
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 80
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 81
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 82
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 83
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 84
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 85
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 86
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 87
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 88
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 89
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 90
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 91
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 92
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 93
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 94
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa
35 40
<210> 95
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Ser
1 5 10 15
Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 96
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 97
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Xaa Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 98
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 99
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35

Claims (10)

1.一种胰高血糖素类似物，包括类胰高血糖素多肽片段，所述类胰高血糖素多肽片段为：
a)氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽片段；
HSQGT FTSDX10 SKYX14D X16X17 AAX20 DFVX24W LMNGG PSSGA PPPSX40(SEQ ID No.3)
X10＝Y、K或C，X14＝L、K或C，X16＝S或E，X17＝Q或E，X20＝Q、K或C，X24＝Q、K或C，X40为K、C或缺失，且X10、X14、X20、X24、X40其中至少一个为K或C；
或，b)氨基酸序列与SEQ ID NO.3具有90％以上序列同一性且具有a)限定的多肽片段的功能的多肽片段；
所述类胰高血糖素多肽片段上交联有长效载体。
2.如权利要求1所述的胰高血糖素衍生物，其特征在于，X10、X14、X20、X24、X40其中一个为K或C。
3.如权利要求1所述的胰高血糖素衍生物，其特征在于，所述长效载体选自脂肪酸、脂肪链或PEG；
和/或，氨基酸残基K和/或氨基酸残基C与长效载体交联；
和/或，所述类胰高血糖素多肽的C端被酰胺化；
和/或，所述胰高血糖素类似物为人工设计的。
4.如权利要求3所述的胰高血糖素衍生物，其特征在于，所述脂肪酸选自C8～C30脂肪酸；
和/或，所述脂肪酸为一元羧酸和/或二元羧酸；
和/或，所述脂肪酸为直链的；
和/或，所述脂肪酸交联形成脂肪酸基团，所述脂肪酸基团选自化学结构式如下所示的基团：
Figure FDA0001918808690000011
5.如权利要求1所述的胰高血糖素衍生物，其特征在于，所述类胰高血糖素多肽片段和长效载体之间还设有接头。
6.如权利要求5所述的胰高血糖素衍生物，其特征在于，所述接头选自-Abu-(-L-2-氨基丁酰-)、-GABA-(-γ-氨基丁酰-)、-EACA-(-ε-氨基己酰-)、-β-Ala-(-β-丙氨酰-)、-γGlu-(-γ-谷氨酰)、-D-γGlu-(-D-γ-谷氨酰-)或其二肽，如-β-Ala-β-Ala-、-γGluγGlu-及其立体异构体形式(S和R对映体)、-5-Aminopentanoyl-(-5-氨基戊酰-)，-8-Aminooctanoyl-(-ω-氨基辛酰-)、-9-Aminononanoyl-(-9-氨基壬酰-)、-10-Aminodecanoyl-(-10-氨基正癸酰-)、-OEG-(2-(2-(-2-氨基乙氧基)乙氧基)乙酰-)、-2xOEG-、-γGlu-OEG-、-γGlu-2xOEG-、-D-γGlu-2xOEG-、-2xOEG-γGlu-、-γGlu-3xOEG-、-γGlu-8xPEG-(-3-((γ-谷氨酰胺)-8x聚乙二醇)-丙酰-)、-γGlu-3xOEG-γ-Glu-8xPEG-。
7.如权利要求1～6任一权利要求所述的胰高血糖素类似物的制备方法，包括：利用化学合成方法制备所述胰高血糖素类似物。
8.如权利要求1～6任一权利要求所述的胰高血糖素类似物在制备用于治疗代谢性疾病、GCGR/GLP-1R多效激动剂的药物中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述代谢性疾病选自糖尿病、血脂失调、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪肝炎、与糖尿病相关的其他代谢综合征、甘油三酯过高、低HDL胆固醇及高LDL胆固醇、胰岛素抗性、肥胖症或葡萄糖耐受不良。
10.一种药物组合物，包括治疗有效量的如权利要求1～6任一权利要求所述的胰高血糖素类似物。
CN201811584730.5A 2018-12-24 2018-12-24 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途 Active CN111349155B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811584730.5A CN111349155B (zh) 2018-12-24 2018-12-24 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途
PCT/CN2019/119391 WO2020134717A1 (zh) 2018-12-24 2019-11-19 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811584730.5A CN111349155B (zh) 2018-12-24 2018-12-24 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111349155A true CN111349155A (zh) 2020-06-30
CN111349155B CN111349155B (zh) 2022-04-05

Family

ID=71129667

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811584730.5A Active CN111349155B (zh) 2018-12-24 2018-12-24 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN111349155B (zh)
WO (1) WO2020134717A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114478744A (zh) * 2020-11-13 2022-05-13 成都奥达生物科技有限公司 一种长效glp-1拮抗剂
WO2022133797A1 (zh) * 2020-12-23 2022-06-30 浙江道尔生物科技有限公司 一种长效胰高血糖素衍生物
WO2023143458A1 (zh) * 2022-01-28 2023-08-03 甘李药业股份有限公司 酰化胰岛素

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114685646B (zh) * 2020-12-31 2023-04-07 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 一种多肽侧链类似物的制备方法及其应用
JP2023554693A (ja) 2021-01-20 2023-12-28 バイキング・セラピューティクス・インコーポレイテッド 代謝及び肝臓障害の処置のための組成物及び方法
CN115636876A (zh) * 2021-07-20 2023-01-24 重庆派金生物科技有限公司 胰高血糖素样肽-2突变体的定向化学偶联物及其应用
CN116162147B (zh) * 2021-11-24 2023-10-03 成都奥达生物科技有限公司 一种长效胰岛素类似物

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1786031A (zh) * 2005-12-16 2006-06-14 暨南大学 胰高血糖素样多肽－1类似物及其制备方法与应用
CN101985470A (zh) * 2005-12-16 2011-03-16 暨南大学 胰高血糖素样多肽-1类似物及其制备方法与应用
CN104144696A (zh) * 2011-12-23 2014-11-12 西兰制药公司 胰高血糖素类似物
CN107987170A (zh) * 2016-10-27 2018-05-04 浙江道尔生物科技有限公司 一种用于治疗肠道疾病的融合蛋白
CN108341880A (zh) * 2017-01-23 2018-07-31 天津药物研究院有限公司 含有胰高血糖素样肽-1和胰高血糖素的片段类似物的嵌合多肽及其用途
CN109836488A (zh) * 2017-11-24 2019-06-04 浙江道尔生物科技有限公司 一种治疗代谢疾病的胰高血糖素类似物

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6184404B2 (ja) * 2011-06-22 2017-08-23 インディアナ ユニヴァーシティ リサーチ アンド テクノロジー コーポレイション グルカゴン／ｇｌｐ−１レセプターコアゴニスト
CN104114575B (zh) * 2011-12-15 2019-04-09 爱德迪安（北京）生物技术有限公司 具有降血糖作用的化合物、组合物及其用途
RU2760007C2 (ru) * 2016-05-16 2021-11-22 Интарсия Терапьютикс, Инк. Полипептиды, селективные к рецепторам глюкагона, и способы их применения
CN108948213B (zh) * 2018-07-25 2021-08-06 中国药科大学 长效化胃泌酸调节素(oxm)杂合肽、其制备方法及其作为药物的用途
CN108822222B (zh) * 2018-07-25 2021-08-06 中国药科大学 一种长效化降糖减重肽，及其制备方法与应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1786031A (zh) * 2005-12-16 2006-06-14 暨南大学 胰高血糖素样多肽－1类似物及其制备方法与应用
CN101985470A (zh) * 2005-12-16 2011-03-16 暨南大学 胰高血糖素样多肽-1类似物及其制备方法与应用
CN104144696A (zh) * 2011-12-23 2014-11-12 西兰制药公司 胰高血糖素类似物
CN107987170A (zh) * 2016-10-27 2018-05-04 浙江道尔生物科技有限公司 一种用于治疗肠道疾病的融合蛋白
CN108341880A (zh) * 2017-01-23 2018-07-31 天津药物研究院有限公司 含有胰高血糖素样肽-1和胰高血糖素的片段类似物的嵌合多肽及其用途
CN109836488A (zh) * 2017-11-24 2019-06-04 浙江道尔生物科技有限公司 一种治疗代谢疾病的胰高血糖素类似物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SVENDSEN等: "Insulin Secretion Depends on Intra-islet Glucagon Signaling", 《CELL PRESS》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114478744A (zh) * 2020-11-13 2022-05-13 成都奥达生物科技有限公司 一种长效glp-1拮抗剂
WO2022133797A1 (zh) * 2020-12-23 2022-06-30 浙江道尔生物科技有限公司 一种长效胰高血糖素衍生物
CN114981294A (zh) * 2020-12-23 2022-08-30 浙江道尔生物科技有限公司 一种长效胰高血糖素衍生物
AU2020483085B2 (en) * 2020-12-23 2024-03-07 Zhejiang Doer Biologics Co., Ltd. Long-acting glucagon derivative
CN114981294B (zh) * 2020-12-23 2024-04-26 浙江道尔生物科技有限公司 一种长效胰高血糖素衍生物
JP7573760B2 (ja) 2020-12-23 2024-10-25 浙江道尓生物科技有限公司 長時間作用型グルカゴン誘導体
WO2023143458A1 (zh) * 2022-01-28 2023-08-03 甘李药业股份有限公司 酰化胰岛素

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020134717A1 (zh) 2020-07-02
CN111349155B (zh) 2022-04-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111349155B (zh) 一种胰高血糖素类似物及其制备方法和用途
US11208451B2 (en) Protein and protein conjugate for diabetes treatment, and applications thereof
EP2223938B1 (en) Derivatives of exendin
US7595294B2 (en) Vasoactive intestinal polypeptide pharmaceuticals
CN111253475B (zh) Glp-1激动多肽化合物及其盐与合成方法及用途
WO2018011803A1 (en) Fusion proteins with extended serum half life
KR20230088337A (ko) Glp-1/gip 이중 작용제
CN113429471B (zh) 长效glp-1多肽类似物及其制备方法和应用
AU2021251791B2 (en) Incretin analogue, preparation method therefor, and use thereof
AU2020483085B2 (en) Long-acting glucagon derivative
CN117756913A (zh) 一种新型长效多肽化合物、组合物及其应用
WO2015149627A1 (zh) 结构修饰的glp-1类似物及其制备方法
WO2022007805A1 (zh) 新型多肽及其治疗用途
CN114685642B (zh) 一种肠促胰岛素类似物药学上可接受盐及制备方法和用途
CN115232200B (zh) 长效化Exendin-4类似物及其应用
CN114891071A (zh) 新型多肽及其治疗用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Address after: Room 201, building 4, No. 101, No. 1 Street, Qiantang New District, Hangzhou City, Zhejiang Province

Applicant after: Zhejiang Heze Pharmaceutical Technology Co., Ltd

Applicant after: ZHEJIANG DOER BIOLOGICS Corp.

Address before: 310018 Room 201, Building 101, No. 1 Street, Hangzhou Economic and Technological Development Zone, Hangzhou City, Zhejiang Province

Applicant before: HANGZHOU HEZE PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.

Applicant before: ZHEJIANG DOER BIOLOGICS Corp.

CB02 Change of applicant information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant