CN111346622A - 色谱填料及其制备方法和用途 - Google Patents

色谱填料及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明提出了色谱填料、制备丝瓜络纤维的方法、制备色谱填料的方法、色谱柱及色谱填料在分离样品中乳铁蛋白中的应用，所述色谱填料包括：丝瓜络纤维；以及离子交换树脂。本发明利用丝瓜络纤维作为离子交换树脂的支撑骨架，从而强化色谱填料的机械强度，提高色谱分离的稳定性及色谱柱的使用寿命。

Description

色谱填料及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及食品生物领域。具体地，本发明涉及色谱填料及其制备方法和用途。
背景技术
色谱柱是色谱系统分离过程的核心，而色谱柱中色谱填料的状态对色谱分离性能有至关重要的作用。离子交换树脂树脂是具有网状结构的复杂的有机高分子聚合物，并连接有许多可被交换的活性基团。
然而，目前以离子交换树脂作为色谱填料仍有待研究。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。
需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：
现有的离子交换树脂承压效果差，例如强阳离子交换树脂SP Sepharose BigBeads仅能承受0.4Mpa的操作反压，抗机械强度较差，长期使用会使其支架受到机械性破坏，导致色谱柱出现孔穴、断层、压缩等缺陷，发明人发现SP Sepharose Big Beads色谱柱反复使用10次后，色谱柱柱床体积压缩至95％，乳铁蛋白的提取效率降低3％。
有鉴于此，为了解决传统的离子交换树脂抗压性能较差、分离稳定性不足等问题，发明人利用丝瓜络纤维天然形成的空间结构和运输通道作为离子交换树脂的支撑骨架，从而强化色谱填料的机械强度，提高色谱分离的稳定性及色谱柱的使用寿命。
为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种色谱填料。根据本发明的实施例，所述色谱填料包括：丝瓜络纤维；以及离子交换树脂。为了解决传统的离子交换树脂抗压性能较差、分离稳定性不足等问题，发明人利用丝瓜络纤维天然形成的空间结构和运输通道作为离子交换树脂的支撑骨架，从而强化色谱填料的机械强度，提高色谱分离的稳定性及色谱柱的使用寿命。
根据本发明的实施例，所述色谱填料还可以具有下列附加技术特征：
根据本发明的实施例，所述丝瓜络纤维与离子交换树脂的质量比为1：(2～6)。
根据本发明的实施例，所述离子交换树脂选自交联葡聚糖凝胶树脂或者琼脂糖凝胶树脂。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种制备前面所述色谱填料中丝瓜络纤维的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)利用碱液对丝瓜络粉末进行光化处理；(2)利用酸液处理步骤(1)所得到的丝瓜络；以及(3)将步骤(2)所得到的丝瓜络浸没于酒精溶液中，进行静置处理及干燥处理，以便得到所述丝瓜络纤维。利用根据本发明实施例的方法所得到的丝瓜络纤维表面粗糙，热稳定性强，气味淡，抗机械强度高。并且，该方法操作简便、快捷，适于规模化生产。
根据本发明的实施例，所述丝瓜络粉末的粒径不超过20～60目，优选不超过40目。
根据本发明的实施例，所述碱液的浓度为0.5～2mol/L。
根据本发明的实施例，所述光化处理是在70～90℃下进行1～5小时。
根据本发明的实施例，步骤(1)进一步包括：(1-1)利用碱液对丝瓜络粉末进行光化处理，并用水洗涤经所述光化处理后的丝瓜络至中性；以及(1-2)重复步骤(1-1)1～3次。
根据本发明的实施例，所述碱液选自0.5～2mol/L的氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液。
根据本发明的实施例，步骤(2)中，所述处理是在70～90℃下进行1～5小时。
根据本发明的实施例，所述酸液选自浓度为10～30质量％的醋酸溶液或者是浓度为1～2质量％的盐酸溶液。
根据本发明的实施例，步骤(2)进一步包括：用水洗涤经过酸液处理的丝瓜络至中性。
根据本发明的实施例，所述酒精溶液的浓度为60～80体积％。
根据本发明的实施例，所述静置处理是在50～60℃下进行14～18小时。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种制备前面所述色谱填料的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将所述丝瓜络纤维与离子交换树脂进行混合处理，以便得到混合料；以及将缓冲液与所述混合料进行混合处理，以便得到所述色谱填料。利用根据本发明实施例的方法所得到的色谱填料机械强度高、稳定性强，从而提高色谱分离的稳定性及色谱柱的使用寿命。并且，该方法操作简便、快捷，适于规模化生产。
根据本发明的实施例，所述方法进一步包括：利用所述缓冲液将所述混合料制成悬浮液，然后将所述悬浮液在20～40℃下进行超声处理30～60分钟。
根据本发明的实施例，所述丝瓜络纤维是利用前面所述制备色谱填料中丝瓜络纤维的方法制备得到的。
根据本发明的实施例，所述缓冲液选自含有10～30体积％乙醇的pH值为7.0，浓度为0.1～0.3mol/L的磷酸缓冲液。
根据本发明的实施例，所述混合料与缓冲液的质量体积比为1：(8～12)。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种色谱柱。根据本发明的实施例，所述色谱柱包括：色谱柱基体；以及前面所述的色谱填料，所述色谱填料填充于所述色谱柱基体中。根据本发明实施例的色谱柱抗机械强度高、色谱分离的稳定性高、使用寿命长。
根据本发明的实施例，所述色谱填料通过高压方式填充至所述色谱柱基体中，采用的压力为0.4～0.6MPa。
根据本发明的实施例，所述色谱柱的柱床体积为
Figure BDA0001918390000000031
在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述色谱填料在分离样品中乳铁蛋白中的应用。利用根据本发明实施例的色谱填料可以有效地分离出乳铁蛋白，获得的乳铁蛋白纯度高、蛋白回收率高。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明一个实施例的制备丝瓜络纤维的方法的流程示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
本发明提出了色谱填料、制备丝瓜络纤维的方法、制备色谱填料的方法、色谱柱及色谱填料在分离样品中乳铁蛋白中的应用，下面将分别对其进行详细描述。
色谱填料
在本发明的一个方面，本发明提出了一种色谱填料。根据本发明的实施例，该色谱填料包括：丝瓜络纤维；以及离子交换树脂。
丝瓜络为葫芦科植物丝瓜或粤丝瓜的成熟果实的维管束，外观多呈白色或者黄白色，为长圆筒形或长梭形，略弯曲，两端较细，长约25～60cm，直径约5～10cm。丝瓜络是由多层丝状纤维纵横交织而成的立体多孔网状物，具有体轻、质韧、耐磨、富有弹性等天然特性。丝瓜络整体是由多层丝状纤维自组装而成的立体交织网状物，丝状纤维在其不同部位的连接方式和空间取向存在差异，因此导致丝瓜络不同部位的力学性能亦不尽相同。研究发现，丝瓜络外圆周壁部位的单根纤维(长30mm，直径20-50μm)可承受的断裂强度为103MPa。
为了解决传统的离子交换树脂抗压性能较差、分离稳定性不足等问题，发明人利用丝瓜络纤维天然形成的空间结构和运输通道作为离子交换树脂的支撑骨架，从而强化色谱填料的机械强度，提高色谱分离的稳定性及色谱柱的使用寿命。
根据本发明的实施例，丝瓜络纤维与离子交换树脂的质量比为1：(2～6)。由此，丝瓜络纤维可以起到较好的支撑作用，强化离子交换树脂的抗机械强度，并且，也不影响其色谱分离效果，该色谱填料与单独使用离子交换树脂的提取效果基本一致，反复实验10次后柱床体积及分离效率没有明显变化。
根据本发明的实施例，离子交换树脂选自交联葡聚糖凝胶树脂或者琼脂糖凝胶树脂。由此，利用丝瓜络纤维起到支撑交联葡聚糖凝胶树脂或者琼脂糖凝胶树脂作用，强化离子交换树脂的抗机械强度，反复实验10次后柱床体积及分离效率没有明显变化。
制备色谱填料中丝瓜络纤维的方法
在本发明的又一方面，本发明提出了一种制备前面所述色谱填料中丝瓜络纤维的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：
S100光化处理
在该步骤中，利用碱液对丝瓜络粉末进行光化处理。通过对丝瓜络进行光化处理，以便去除包裹在纤维表面大量胶质蜡质等憎水性组分，以及半纤维素和木质素，进而，增大纤维的表面粗糙性及热稳定性，便于辅助离子交换树脂吸附目标物。
根据本发明的实施例，丝瓜络粉末的粒径不超过20～60目，优选不超过40目。由此，以便提高丝瓜络与碱液的接触面积，提高光化处理效率。
根据本发明的实施例，碱液的浓度为0.5～2mol/L。由此，以便充分去除憎水性组分、半纤维素和木质素。
根据本发明的实施例，光化处理是在70～90℃下进行1～5小时。由此，以便充分去除憎水性组分、半纤维素和木质素，增大纤维的表面粗糙性及热稳定性。
根据本发明的实施例，步骤S100进一步包括：
S110：利用碱液对丝瓜络粉末进行光化处理，并用水洗涤经光化处理后的丝瓜络至中性；以及S120：重复步骤S110 1～3次。由此，重复利用碱液对丝瓜络进行光化处理，以便进一步去除憎水性组分、半纤维素和木质素，增大纤维的表面粗糙性及热稳定性。
根据本发明的实施例，碱液选自0.5～2mol/L的氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液。由此，以便进一步去除憎水性组分、半纤维素和木质素，增大纤维的表面粗糙性及热稳定性。
S200酸液处理
在该步骤中，利用酸液处理步骤S100所得到的丝瓜络。由此，以便进一步纯化丝瓜络纤维，减小纤维非特异性吸附，同时强化纤维的机械强度。
根据本发明的实施例，步骤S200中，处理是在70～90℃下进行1～5小时。由此，步骤S100所得的丝瓜络得以与酸适度反应，进一步纯化丝瓜络纤维，降低非特异性吸附，增加其机械强度。
根据本发明的实施例，酸液选自浓度为10～30质量％的醋酸溶液或者是浓度为1～2质量％的盐酸。由此，步骤S100所得的丝瓜络得以与酸适度反应，进一步纯化丝瓜络纤维，降低非特异性吸附，增加其机械强度。
根据本发明的实施例，步骤S200进一步包括：用水洗涤经过酸液处理的丝瓜络至中性，终止酸化反应，防止纤维过分水解。
S300酒精溶液浸没
在该步骤中，将步骤S300所得到的丝瓜络浸没于酒精溶液中，进行静置处理及干燥处理，以便得到丝瓜络纤维。通过将丝瓜络浸没于酒精溶液中，以便充分溶解其中的有机风味小分子，避免待提取的目标物混有丝瓜络自身特有的风味，从而影响目标物的使用，尤其是应用于食品中。
根据本发明的实施例，酒精溶液的浓度为60～80体积％。由此，以便充分溶解丝瓜络中的有机风味小分子。
根据本发明的实施例，静置处理是在50～60℃下进行14～18小时。由此，以便充分溶解丝瓜络中的有机风味小分子。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对色谱填料所描述的特征和优点，同样适用于该制备方法，在此不再赘述。
制备色谱填料的方法
在本发明的又一方面，本发明提出了一种制备前面所述色谱填料的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将丝瓜络纤维与离子交换树脂进行混合处理，以便得到混合料；以及将缓冲液与混合料进行混合处理，以便得到色谱填料。利用根据本发明实施例的方法所得到的色谱填料机械强度高、稳定性强，从而提高色谱分离的稳定性及色谱柱的使用寿命。并且，该方法操作简便、快捷，适于规模化生产。
根据本发明的实施例，该方法进一步包括：利用缓冲液将混合料制成悬浮液，然后将悬浮液在20～40℃下进行超声处理30～60分钟。由此，通过超声处理以便使得丝瓜络纤维与离子交换树脂充分结合，丝瓜络纤维可以充分发挥支撑作用，强化离子交换树脂的抗机械强度，从而提高色谱柱的分离效果及使用寿命。
根据本发明的实施例，丝瓜络纤维是利用前面所述方法制备得到的。
根据本发明的实施例，丝瓜络纤维与色谱填料按照1:(3-6)质量比混合，制得混合料。由此，丝瓜络纤维可以充分发挥支撑作用，强化离子交换树脂的抗机械强度的同时，不影响离子交换树脂的吸附性能。
根据本发明的实施例，缓冲液选自含有10～30体积％乙醇的pH值为7.0，浓度为0.1～0.3mol/L的磷酸缓冲液。由此，混合料在缓冲液体系下得以初步平衡活化，以便乳铁蛋白有较好的的吸附。
根据本发明的实施例，混合料与缓冲液的质量体积比为1：(8～12)。由此，混合料可以在缓冲液中充分混匀悬浮，以便均匀装柱。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对色谱填料和制备色谱填料中丝瓜络纤维的方法所描述的特征和优点，同样适用于该制备色谱填料的方法，在此不再赘述。
色谱柱
在本发明的又一方面，本发明提出了一种色谱柱。根据本发明的实施例，该色谱柱包括：色谱柱基体；以及前面所述的色谱填料，该色谱填料填充于色谱柱基体中。根据本发明实施例的色谱柱抗机械强度高、色谱分离的稳定性高、使用寿命长。
根据本发明的实施例，色谱填料通过高压方式填充至所述色谱柱基体中，采用的压力为0.4～0.6MPa。由此，以便使得色谱填料充分均匀地填充于色谱柱基体中。
根据本发明的实施例，色谱柱的柱床体积为
Figure BDA0001918390000000061
由此，以便使得样品中的目标物充分吸附于色谱填料中。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对色谱填料所描述的特征和优点，同样适用于该色谱柱，在此不再赘述。
色谱填料在分离样品中乳铁蛋白中的应用
在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述色谱填料在分离样品中乳铁蛋白中的应用。利用根据本发明实施例的色谱填料可以有效地分离出乳铁蛋白，获得的乳铁蛋白纯度高、蛋白回收率高。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对色谱填料所描述的特征和优点，同样适用于该用途，在此不再赘述。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
在该实施例中，按照以下步骤制备丝瓜纤维素并提取乳铁蛋白：
1、丝瓜络纤维的制备
(1)将丝瓜曝晒2天后去皮去瓤以及丝瓜络内周壁经络，仅保留丝瓜络外周壁部分。将干燥的丝瓜络切成小块后用粉碎机粉碎、过40目筛，得到丝瓜络原料粉末。
(2)将丝瓜络原料粉末置于0.5M的NaOH溶液或KOH溶液中，于70℃、低速搅拌下反应2h，用大量去离子水冲洗至中性，再用稀碱液对丝瓜络原料进行相同条件处理，再用去离子水清洗至中性。
(3)用10％的醋酸溶液在70℃下处理上步所得的丝瓜络2h，冷却至室温，用大量去离子水冲洗至中性。
(4)将上步所得的丝瓜络浸没于60％(v/v)的酒精溶液中，密封放入50℃恒温箱，静态吸附16h，充分溶解其中的有机风味小分子，最后进行真空冷冻干燥6获得丝瓜络纤维素，此纤维素为状如棉花的白色粉末。
2、离子交换色谱柱的装填
取制备的丝瓜络纤维素与SP Sepharose Big Beads树脂材料按照1：3的质量比混合后，用含20％(v/v)乙醇的pH＝7.0，0.1M磷酸缓冲溶液悬浮(固液比为1：8)，悬浮液置于超声震荡器中30℃超声波处理30min。使制备的丝瓜络纤维素与离子交换树脂材料充分混匀，在其尚未沉降之前，以0.4MPa高压压进柱中，制备出柱床体积为
Figure BDA0001918390000000071
的色谱柱。
3、离子交换色谱法制备乳铁蛋白
根据CN104926936A提供方法，使样品经过步骤2所得到的色谱柱，再进行处理，得到乳铁蛋白。经检测，获得的乳铁蛋白纯度为90％，蛋白回收率为51％。
实施例2
在该实施例中，按照以下步骤制备丝瓜纤维素并提取乳铁蛋白：
1、丝瓜络纤维的制备
(1)将丝瓜曝晒2天后去皮去瓤以及丝瓜络内周壁经络，仅保留丝瓜络外周壁部分。将干燥的丝瓜络切成小块后用粉碎机粉碎、过40目筛，得到丝瓜络原料粉末。
(2)将丝瓜络原料粉末置于1M的NaOH溶液或KOH溶液中，于80℃、低速搅拌下反应2h，用大量去离子水冲洗至中性，再用稀碱液对丝瓜络原料进行相同条件处理，再用去离子水清洗至中性。
(3)用20％的醋酸溶液在80℃下处理上步所得的丝瓜络2h，冷却至室温，用大量去离子水冲洗至中性。
(4)将上步所得的丝瓜络浸没于70％(v/v)的酒精溶液中，密封放入55℃恒温箱，静态吸附16h，充分溶解其中的有机风味小分子，最后进行真空冷冻干燥获得丝瓜络纤维素，此纤维素为状如棉花的白色粉末。
2、离子交换色谱柱的装填
取制备的丝瓜络纤维素与SP Sepharose Big Beads树脂材料按照1：4的质量比混合后，用含20％(v/v)乙醇的pH＝7.0，0.2M磷酸缓冲溶液悬浮(固液比为1：10)，悬浮液置于超声震荡器中30℃超声波处理45min。使制备的丝瓜络纤维素与离子交换树脂材料充分混匀，在其尚未沉降之前，以0.5MPa高压压进柱中，制备出柱床体积为
Figure BDA0001918390000000081
的色谱柱。
3、离子交换色谱法制备乳铁蛋白
根据CN104926936A提供方法，使样品经过步骤2所得到的色谱柱，再进行处理，得到乳铁蛋白。经检测，获得的乳铁蛋白纯度为92％，蛋白回收率为53％。
实施例3
在该实施例中，按照以下步骤制备丝瓜纤维素并提取乳铁蛋白：
1、丝瓜络纤维的制备
(1)将丝瓜曝晒2天后去皮去瓤以及丝瓜络内周壁经络，仅保留丝瓜络外周壁部分。将干燥的丝瓜络切成小块后用粉碎机粉碎、过40目筛，得到丝瓜络原料粉末。
(2)将丝瓜络原料粉末置于2M的NaOH溶液或KOH溶液，于90℃、低速搅拌下反应2h，用大量去离子水冲洗至中性，再用稀碱液对丝瓜络原料进行相同条件处理，再用去离子水清洗至中性。
(3)用30％的醋酸溶液在90℃下处理上步所得的丝瓜络2h，冷却至室温，用大量去离子水冲洗至中性。
(4)将上步所得的丝瓜络浸没于80％(v/v)的酒精溶液中，密封放入70℃恒温箱，静态吸附16h，充分溶解其中的有机风味小分子，最后进行真空冷冻干燥获得丝瓜络纤维素，此纤维素为状如棉花的白色粉末。
2、离子交换色谱柱的装填
取制备的丝瓜络纤维素与SP Sepharose Big Beads树脂材料按照1：3的质量比混合后，用含20％(v/v)乙醇的pH＝7.0，2M磷酸缓冲溶液悬浮(固液比为1：12)，悬浮液置于超声震荡器中30℃超声波处理60min。使制备的丝瓜络纤维素与离子交换树脂材料充分混匀，在其尚未沉降之前，以0.6MPa高压压进柱中，制备出柱床体积为
Figure BDA0001918390000000091
的色谱柱子。
3、离子交换色谱法制备乳铁蛋白
根据CN104926936A提供方法，使样品经过步骤2所得到的色谱柱，再进行处理，得到乳铁蛋白。经检测，获得的乳铁蛋白纯度为89％，蛋白回收率为51％。
对比例1
在该对比例中，按照下列方法制备丝瓜络纤维：
(1)将干燥的丝瓜络切成小块后用粉碎机粉碎、过40目筛，得到丝瓜络原料粉末。
(2)将丝瓜络原料粉末在0.1M的NaOH或KOH中，于50℃、低速搅拌下反应2h，用大量去离子水冲洗至中性，再用稀碱液对丝瓜络原料进行相同条件处理，再用去离子水清洗至中性。
(3)用5％的醋酸溶液在50℃下处理上步所得的丝瓜络2h，冷却至室温，用大量去离子水冲洗至中性。
(4)将上步所得的丝瓜络浸没于50％(v/v)的酒精溶液中，密封放入40℃恒温箱，静态吸附16h，充分溶解其中的有机风味小分子，最后进行真空冷冻干燥获得丝瓜络纤维素。获得的纤维为淡黄色块状固体，没有完全纯化，分散性较差，无法继续装柱。
对比例2
在该对比例中，按照以下步骤制备丝瓜纤维素并提取乳铁蛋白：
1、丝瓜络纤维的制备
(1)将丝瓜曝晒2天后去皮去瓤以及丝瓜络内周壁经络，仅保留丝瓜络外周壁部分。将干燥的丝瓜络切成小块后用粉碎机粉碎、过40目筛，得到丝瓜络原料粉末。
(2)将丝瓜络原料粉末置于3M的NaOH溶液或KOH溶液中，在95℃、低速搅拌下反应2h，用大量去离子水冲洗至中性，再用稀碱液对丝瓜络原料进行相同条件处理，再用去离子水清洗至中性。
(3)用35％的醋酸溶液在95℃下处理上步所得的丝瓜络2h，冷却至室温，用大量去离子水冲洗至中性。
(4)将上步所得的丝瓜络浸没于80％(v/v)的酒精溶液中，密封放入50℃恒温箱，静态吸附16h，充分溶解其中的有机风味小分子，最后进行真空冷冻干燥获得丝瓜络纤维素，此纤维素为状如棉花的白色粉末。
2、离子交换色谱柱的装填
取制备的丝瓜络纤维素与SP Sepharose Big Beads树脂材料按照1：3的质量比混合后，用含20％(v/v)乙醇的pH＝7.0，0.1M磷酸缓冲溶液悬浮(固液比为1：8)；悬浮液置于超声震荡器中30℃超声波处理30min，发现丝瓜络纤维素由于过度酸化水解无法与树脂材料较好融合，较多丝瓜络纤维漂浮在液面上，不能形成均一的匀浆，无法继续进行装柱。
实施例4
对实施例1～3及对比例1和2所得到的丝瓜络纤维的特性及色谱柱使用情况进行检测及分析。
在给定升温速率的情况下，样品在一定温度下发生解聚和玻璃化，需吸收大量热量，因此可运用DSC对制备的丝瓜络纤维进行热稳定性检测(起始融化温度越高，热稳定性越好)。另外，丝瓜络纤维素材料可用质构仪检测拉伸强度判断其机械强度(拉伸强度越高，抗机械能力越强)。此外，通过比较不同使用次数下，色谱柱的柱床高度变化及乳铁蛋白的分离得率来判断装柱分离效果的稳定性。具体实验结果见下表，可以看出，实施例1～3所得到的丝瓜络纤维热稳定性强，抗机械强度高，色谱柱的稳定剂及分离效果较好。
Figure BDA0001918390000000101
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种色谱填料，其特征在于，包括：
丝瓜络纤维；以及
离子交换树脂。
2.根据权利要求1所述的色谱填料，其特征在于，所述丝瓜络纤维与离子交换树脂的质量比为1：(2～6)；
任选地，所述离子交换树脂选自交联葡聚糖凝胶树脂或者琼脂糖凝胶树脂。
3.一种制备权利要求1或2所述色谱填料中丝瓜络纤维的方法，其特征在于，包括：
(1)利用碱液对丝瓜络粉末进行光化处理；
(2)利用酸液处理步骤(1)所得到的丝瓜络；以及
(3)将步骤(2)所得到的丝瓜络浸没于酒精溶液中，进行静置处理及干燥处理，以便得到所述丝瓜络纤维。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述丝瓜络粉末的粒径不超过20～60目，优选不超过40目；
所述碱液的浓度为0.5～2mol/L；
所述光化处理是在70～90℃下进行1～5小时。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)进一步包括：
(1-1)利用碱液对丝瓜络粉末进行光化处理，并用水洗涤经所述光化处理后的丝瓜络至中性；以及
(1-2)重复步骤(1-1)1～3次；
任选地，所述碱液选自0.5～2mol/L的氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述处理是在70～90℃下进行1～5小时；
任选地，所述酸液选自浓度为10～30质量％的醋酸溶液或者是浓度为1～2质量％的盐酸溶液；
任选地，步骤(2)进一步包括：用水洗涤经过酸液处理的丝瓜络至中性；
任选地，所述酒精溶液的浓度为60～80体积％；
任选地，所述静置处理是在50～60℃下进行14～18小时。
7.一种制备权利要求1或2所述色谱填料的方法，其特征在于，包括：
将所述丝瓜络纤维与离子交换树脂进行混合处理，以便得到混合料；以及
将缓冲液与所述混合料进行混合处理，以便得到所述色谱填料。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，进一步包括：
利用所述缓冲液将所述混合料制成悬浮液，然后将所述悬浮液在20～40℃下进行超声处理30～60分钟；
任选地，所述丝瓜络纤维是利用权利要求3～6任一项所述方法制备得到的；
任选地，所述缓冲液选自含有10～30体积％乙醇的pH值为7.0，浓度为0.1～0.3mol/L的磷酸缓冲液；
任选地，所述混合料与缓冲液的质量体积比为1：(8～12)。
9.一种色谱柱，其特征在于，包括：
色谱柱基体；以及
权利要求1～3任一项所述的色谱填料，所述色谱填料填充于所述色谱柱基体中；
任选地，所述色谱填料通过高压方式填充至所述色谱柱基体中，采用的压力为0.4～0.6MPa；
任选地，所述色谱柱的柱床体积为φ5mm×20mm。
10.权利要求1或2所述色谱填料在分离样品中乳铁蛋白中的应用。
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