CN111346105A - Cx43介导的青蒿素B联合顺铂抗肺癌作用及相关机制 - Google Patents
Cx43介导的青蒿素B联合顺铂抗肺癌作用及相关机制 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111346105A CN111346105A CN201811586136.XA CN201811586136A CN111346105A CN 111346105 A CN111346105 A CN 111346105A CN 201811586136 A CN201811586136 A CN 201811586136A CN 111346105 A CN111346105 A CN 111346105A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- artemisinin
- cisplatin
- cells
- tumor
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- PVBSTLWHHZPUSK-JDRMZHCHSA-N 2-[(1s,4r,4as,8r,8ar)-8,8a-dihydroxy-4,7-dimethyl-2,3,4,4a,5,8-hexahydro-1h-naphthalen-1-yl]prop-2-enoic acid Chemical compound O[C@@H]1C(C)=CC[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H](C(=C)C(O)=O)[C@]21O PVBSTLWHHZPUSK-JDRMZHCHSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 19
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 title claims abstract description 18
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 title claims abstract description 18
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 title claims abstract description 11
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 11
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title claims description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 12
- 229960004191 artemisinin Drugs 0.000 claims description 8
- 229930101531 artemisinin Natural products 0.000 claims description 8
- 240000000011 Artemisia annua Species 0.000 claims description 6
- 235000001405 Artemisia annua Nutrition 0.000 claims description 6
- -1 artemisinin compound Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 3
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims 1
- 102000001045 Connexin 43 Human genes 0.000 abstract description 25
- 108010069241 Connexin 43 Proteins 0.000 abstract description 25
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 23
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 14
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 abstract description 10
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 abstract description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 abstract description 6
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 abstract description 5
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000023402 cell communication Effects 0.000 abstract description 2
- 230000035992 intercellular communication Effects 0.000 abstract description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 abstract description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 65
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 18
- 210000003976 gap junction Anatomy 0.000 description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 14
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 14
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 12
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 11
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 11
- 230000009471 action Effects 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 7
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 5
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 5
- BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N artemisinin Chemical compound C([C@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2OC(=O)[C@@H]4C BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N 0.000 description 5
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 5
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000010970 Connexin Human genes 0.000 description 4
- 108050001175 Connexin Proteins 0.000 description 4
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 3
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 3
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 3
- BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N calcein am Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=C(OC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(=O)C)C(OC(C)=O)=C1 BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- MGWVMALVHHWUDF-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxy-6,8-dimethoxychromen-2-one Chemical compound O1C(=O)C=CC2=C(O)C(OC)=CC(OC)=C21 MGWVMALVHHWUDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012406 Annexin V-FITC/PI double staining Methods 0.000 description 2
- 235000003826 Artemisia Nutrition 0.000 description 2
- 235000003261 Artemisia vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 244000030166 artemisia Species 0.000 description 2
- 235000009052 artemisia Nutrition 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 208000034404 cisplatin toxicity Diseases 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Substances [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- HATRDXDCPOXQJX-UHFFFAOYSA-N Thapsigargin Natural products CCCCCCCC(=O)OC1C(OC(O)C(=C/C)C)C(=C2C3OC(=O)C(C)(O)C3(O)C(CC(C)(OC(=O)C)C12)OC(=O)CCC)C HATRDXDCPOXQJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 210000001099 axilla Anatomy 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 229930009674 sesquiterpene lactone Natural products 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/365—Lactones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了青蒿素B对顺铂抗肺癌增效减毒方面的应用。本发明重要之处在于发现了青蒿素B与顺铂体外联合具有相加及协同作用，体内联合亦能有效抑制裸鼠异种移植瘤的增殖并延缓顺铂毒性的发生，且初步验证青蒿素B对顺铂之作用与细胞间通讯有关。具体包括青蒿素B可增强A549细胞中Cx43表达及细胞间GJ功能；青蒿素B联合顺铂Q值在0.85≤Q≤1.15及Q>1.15范围之内；体内实验结果表明青蒿素B联合顺铂的瘤组织坏死程度大于单独用药组，脾脏损伤程度小于顺铂组等。另外，体内外Western blotting结果也显示青蒿素B及联合用药时上调Cx43蛋白的表达同时加强了MAPKs活化。因此，青蒿素B能够通过细胞通讯机制增强顺铂的抗肺癌作用并在一定程度上减少其毒副作用。此结果具有潜在的临床应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及青蒿素B对阳性药顺铂抗肿瘤作用的增效减毒方面的应用。
背景技术
黄花蒿(Artemisia annua L.)是菊科蒿属的一年生草本植物，又名香蒿、草青蒿、臭青蒿，其分布广泛、适应性强，具有解暑、退热、治感冒等功效，是我国传统的中草药。青蒿素(Artemisinin)是我国药学工作者于1972年从黄花蒿中提取得到的具有抗疟活性的倍半萜内酯类化合物。临床上，青蒿素及其衍生物能够快速杀死疟原虫，疗效显著且无明显副作用。此外，近年来研究表明，除抗疟活性外，青蒿素类化合物还具有抗内毒素、免疫调节、抗变态反应及抗肿瘤等多种药理作用，是一类具有良好临床应用前景的中药活性成分。其中，青蒿素类化合物的抗肿瘤活性在近年来得到了广泛而深入的研究。我们的研究结果显示，青蒿素类化合物具有多种抗肿瘤活性，尤其在肺癌治疗中极具研究开发价值。青蒿素类化合物不仅自身具有抗肺癌作用，且同某些治疗手段或治疗药物联用时可获得与单药用药相比更强的的肺癌抑制活性，如DHA与顺铂在抑制A549及A549顺铂耐药株增殖方面就具有协同作用，可通过调节血管生成的机制增强顺铂的抗肿瘤效果。
缝隙连接(Gap junction，GJ)是位于相邻细胞间的一类由蛋白质组成的连接通道，系细胞间进行物质信息交换的重要通道。其由细胞GJ所介导的缝隙连接细胞间通讯(Gap junction intercellular communication，GJIC)决定着细胞之间各类因子的传递与平衡，对细胞的生长分化、内环境稳定及组织的免疫修复等均具关键性作用。缝隙连接蛋白(Connexin，Cx)是一种膜蛋白，作为连接蛋白之一，是形成GJ结构和功能性的基础，Cx的表达水平高低是GJ功能正常与否的关键因素。此外，受多种因素与机制调控的Cx表达水平一旦改变便会影响到由其所构成的GJ通道，导致GJ功能异常，并引起细胞间通讯传递的障碍进而引发包括肿瘤等多种疾病的发生。
青蒿素B(Arteannuin B)为青蒿素类化合物，本课题组前期研究发现青蒿素B在体外对多种肿瘤细胞株都具有较好的抗肿瘤活性，能够抑制肿瘤的增殖和转移。Cx43在肺癌的发生发展中具有重要的调节作用，是一个极具潜力的肿瘤抑制因子，在肺癌的临床治疗方面具有较大的应用前景，值得全面深入的研究。经查阅文献未见青蒿素B对肺癌细胞通讯及阳性抗肿瘤药物顺铂抗肿瘤作用方面的相关报道，其具有作为抗肿瘤及辅助药物的潜在开发价值。
发明内容
本发明对青蒿素B能否影响人非小细胞肺癌A549细胞的GJ功能及Cx43表达进行研究，并考察了青蒿素B与化疗药顺铂体内外联合应用对肿瘤细胞的增殖抑制作用。此研究旨在为青蒿素类化合物的进一步开发及抗肿瘤作用机制的研究提供新资料。
本发明是通过如下技术方案实现的：采用Parachute assay、Western blotting、qRT-PCR、细胞免疫荧光等技术研究青蒿素B对缝隙连接的影响；MTT、Annexin V-FITC/PI双染等检测方法考察青蒿素B与DDP的体外联合作用；通过建立A549细胞的裸鼠移植瘤模型考察青蒿素B与DDP的体内联合作用；采用Western blotting法实验进一步研究青蒿素B与DDP体内外联合对Cx43的调节所涉及的信号通路相关机制。
本发明相对于已有技术，其创新性在于：
(1)本论文首次证实青蒿素B能够对非小细胞肺癌A549细胞通讯中Cx43的表达及GJ功能进行调节，且具有良好的浓度依赖性；
(2)本研究首次证实青蒿素B与DDP在体外联用对A549细胞的增殖抑制活性具有相加及协同作用。
(3)青蒿素B与DDP在体内联合使用能有效抑制裸鼠异种移植瘤的增殖并延缓顺铂毒性的发生，青蒿素B体内外调节Cx43的机制涉及MAPKs信号通路的激活；
(4)本发明为研制新的抗肿瘤辅助药物提供了新的科学依据，对开发利用传统中药具有重要意义。
附图说明
图1-4为实施例1中探究青蒿素B对缝隙连接的影响。
图5-7及表1-2为实施例2中考察青蒿素B与DDP的体外联合作用。
图8-12及表3-6为实施例3中考察青蒿素B与DDP的体内联合作用。
图13-16为实施例4中探究青蒿素B与DDP体内外联合对Cx43的调节机制。
具体实施方式：
下面结合技术方案和图表详细说明本发明的具体实施例。
以下实验所用的青蒿素B是系发明人从黄花蒿中提取分离所得。
实施例1
青蒿素B对缝隙连接的影响
(1)Parachute assay
1)细胞接种：取对数生长期的细胞，消化后用培养基重悬计数，将细胞密度调整至1.5×105cell/mL后接种于12孔板，置于37℃、5％CO2培养箱中孵育48h进行后续实验。
2)配制负载液：取12.5μL calcein-AM(1mg/mL)加入至487.5μL无血清培养基中吹打混匀，使calcein-AM的终浓度为25μM。
3)制备“供体细胞”：选择1孔细胞作为“供体细胞”，弃上清，PBS洗涤一次，加入上述已配制好的负载液500μL。12孔板置于37℃、5％CO2培养箱中继续孵育30min。吸弃负载液，PBS洗涤3次，每次5min。胰酶消化“供体细胞”孔后离心，用无血清培养基重悬计数，将细胞浓度调整为500cell/mL，制成“donor cell”液。
4)处理“受体细胞”：光学显微镜下观察高密度接种的细胞，挑选生长良好且有GJ形成(细胞之间出现融合)的细胞作为“受体细胞”。在选择的“受体细胞”孔中分别加入已配制成不同药物浓度的“donor cell”液1mL/孔，于37℃、5％CO2培养箱中培养4h。
5)倒置荧光显微镜观察：利用倒置荧光显微镜对细胞间的GJ功能进行观察，计数一个“供体细胞”周围含有Calcein-AM的“受体细胞”的数目，以其作为GJ功能的指标。
结果显示：随着青蒿素B作用浓度的增加由GJ介导的细胞间的荧光传递也随之增强，且在6.25μM及12.5μM时青蒿素B显著增强了细胞间的荧光传递。相比对照组，浓度梯度的青蒿素B作用下荧光传递的功能分别增加了37.50％±1.53％、100％±2.08％(P<0.05)及187.5％±2.52％(P<0.01)，表明青蒿素B能够增强A549细胞间的GJ功能且具有浓度依赖性(图1)。
(2)Western blotting
1)细胞接种及给药：细胞处于对数生长期且状态良好时进行消化离心，弃上清，完全培养基重悬细胞计数。将细胞悬液密度调整为1×105cells/mL接种至六孔板中，2mL/孔，置于37℃、5％CO2的培养箱中孵育24h。24h后，吸弃旧培养液，加入不同浓度青蒿素B药液(青蒿素B浓度分别为3.125、6.25及12.5μM)2mL/孔，阴性对照组加入等体积完全培养基，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中作用48h。
2)提取蛋白：吸弃六孔板中旧培养液，用预冷的PBS洗涤两次，每孔加入300μL的SDS裂解液(含1％PMSF和1％Na2VO3)冰浴裂解10min。裂解完成后将细胞裂解液转移至1.5mLEP管，超声数秒，高速离心机设置4℃，12000rpm离心10min，取上清至已做好标记的对应新EP管，得总蛋白溶液。
3)蛋白定量分析：根据BCA蛋白定量试剂盒说明书进行操作。96孔板中加入待测样品及不同浓度梯度的标准品，对应每孔中再加入200μL BCA工作液(A液：B液＝50:1，临用前混匀)，在37℃条件下孵育30min。利用酶标仪于562nm条件下检测OD值，绘制标准曲线计算样品蛋白含量。调整各样品蛋白浓度成一致，加入5×buffer混匀后变性(100℃煮沸10min)，-20℃保存待用。
4)制胶与上样：将洗净晾干的玻璃板对齐后垂直卡入制胶器中准备灌胶。根据目的蛋白分子量配制10-15％的分离胶(配方见Tab.2.1)，蒸馏水压胶。分离胶凝好后配制5％浓缩胶(配方见Tab.2.2)，滤纸吸干玻璃板中蒸馏水后补加浓缩胶至玻璃板顶部，插入梳子待浓缩胶凝固。将制好的胶放入灌有电泳液的电泳槽中，小心拔出梳子，根据蛋白浓度确定上样体积，每孔确保30-50μg的总蛋白上样量。
Table 2.1The formula of separation gel(10mL)
Table 2.2The formula of concentration gel(4mL)
5)电泳：上样完成后，接通电泳仪电源，在60V稳压下进行电泳，待彩虹marker出现分层后，将电压调整为110V，继续电泳，当指示蛋白样品的溴酚蓝跑至分离胶最底端时，即停止电泳。
6)转膜：根据蛋白Marker所对应的分子量区间，切取目的蛋白胶体，做好标记后置于转膜液中备用。剪取与胶块对应大小的PVDF膜(0.22μm/0.45μm)，放置甲醇中活化。制备转膜“三明治”(阴极—海绵—滤纸—凝胶—PVDF膜—滤纸—海绵—阳极)后装好转膜仪，设定转膜电流(200mA)与转膜时间(由目的蛋白的分子量确定)，转膜仪在恒定电流下冰浴转膜。
7)封闭：转膜结束后将PVDF膜取出置于封闭液中，室温摇床封闭2h以上。
8)一抗孵育：封闭完成后将条带用1×TBST溶液洗涤一次，之后放入已按最适比例稀释后的一抗溶液中，置于4℃冰箱中孵育过夜。
9)洗膜：将PVDF膜取出至1×TBST溶液中，摇床上振荡洗涤三次，每次15min。
10)二抗孵育：按适当比例稀释二抗，将洗涤后的PVDF膜放入二抗溶液中，室温摇床上孵育2-3h。
11)洗膜：将PVDF膜取出至1×TBST溶液中，摇床上振荡洗涤三次，每次15min。
12)显影：配制ECL发光液(A液：B液＝1：1)，滴加至PVDF膜上避光孵育2min，于暗室中用X胶片进行曝光、显影和定影。胶片定影后用水稍加漂洗之后烘干保存。
13)条带分析：利用Quantity One软件对显出条带进行灰度分析，以内参蛋白的表达量作为参照，得出不同样品目的蛋白的相对表达量。
结果显示：青蒿素B能够显著性增强A549细胞中Cx43总蛋白的表达，对照组Cx43的表达量较低，随着青蒿素B作用浓度的增加，Cx43的表达水平也不断上调，青蒿素B对Cx43总蛋白表达的正向调节具有浓度依赖性(图2)。
(3)qRT-PCR
1)总RNA的抽提：吸弃六孔板中旧培养液，PBS洗涤一次后加入TRIZOL 500μL/孔，轻轻吹打混匀后静止5min。裂解液转移至1.5mL RNase Free EP管中，于冰上保存。加入氯仿200μL/管，涡旋30s后室温静置5min。低温高速离心机设置4℃，14000rpm离心15min，小心吸取上层水相至另一批新RNase free EP管。加入等体积异丙醇，颠倒混匀数次后室温静置5min。4℃，14000rpm离心15min弃上清，收集沉淀。用75％的灭酶乙醇洗涤沉淀两次，每次洗涤后于4℃，10000rpm离心5min，弃上清，超净台风干。干燥后的RNA沉淀用DEPC水(25μL/管)溶解后至-80℃保存待用。
2)RNA纯度检测：从保存的RNA样品中各取3μL至PCR小管，于核酸蛋白检测仪上进行检测。A260/A280的比值范围在1.8～2.1之间说明制备的RNA无污染，可用于后续实验。
3)逆转录反应(mRNA→cDNA)：根据罗氏逆转录试剂盒说明书进行操作。
a.按下列组分在RNase free PCR管中配制相应反应体系：
b.将装有反应体系的PCR管放置PCR仪上设置65℃加热10min。
c.在PCR管中添加剩余组分：
d.用移液枪轻轻混匀逆转录试剂(勿涡旋)，稍离心后放入PCR仪。将反转录程序设定为25℃ 10min，55℃ 30min，85℃ 5min进行逆转录。
4)引物序列设计如下：
5)实时荧光定量：根据life technologies SYBR荧光定量试剂盒说明书进行操作。
a.根据所要检测的基因及样品数确定总反应体积。单个反应体系组分添加如下(反应体系设定为10μL)：
b.利用移液枪轻轻混匀体系后，分装转移至八连管中(平行设置三个复孔)，盖好管盖，简单离心后放入荧光定量PCR仪中进行监测分析。荧光定量PCR仪程序设置如下：
c.反应完成后，拷取数据，利用Bio-Rad CFX Manager软件进行分析。
结果显示：不同浓度青蒿素B均能显著性增强Cx43的mRNA水平，且随着浓度的增大，Cx43的mRNA水平越高，表明青蒿素B对Cx43从转录水平就开始调节，影响着Cx43从转录到翻译的全过程(图3)。
(4)细胞免疫荧光
1)细胞接种及给药：将浓度为2×104cell/mL的细胞悬液接种至共聚焦皿，200μL/皿，置于37℃、5％CO2的培养箱中孵育24h。24h后，吸弃旧培养液，加入不同浓度青蒿素B药液2mL/孔，阴性对照组加入等体积完全培养基，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中作用48h。
2)固定与封闭：吸弃共聚焦皿中旧培养液，PBS洗涤一次后用4％多聚甲醛室温固定20min。经PBS洗涤三次，加入0.2％TritonX-100室温孵育5min后吸弃。利用5％BSA TBST溶液对样品进行封闭(200μL/皿)，室温摇床孵育2h。
3)一抗孵育：吸弃封闭液，加入已按比例稀释的一抗溶液(1:200)在4℃冰箱放置过夜。
4)二抗孵育：PBS洗涤小皿三次，加入按适当比例稀释后的荧光二抗于37℃、5％CO2的培养箱中孵育2h。
5)核染及拍照：PBS洗涤小皿三次，加入DAPI 200μL/皿染核，于37℃细胞培养箱中作用30min。PBS洗涤小皿三次，每次5min，利用激光共聚焦显微镜观察并拍照。
结果显示：随着青蒿素B浓度的增大，代表Cx43蛋白的绿色荧光也随之增强，表明青蒿素B能够浓度依赖性的增强A549细胞膜上Cx43蛋白的表达(图4)。
实施例2
青蒿素B与DDP体外联合作用的考察
(1)MTT实验
1)细胞接种：弃去培养瓶中旧培养液，PBS洗涤一次，加入胰酶消化后离心，离心机设置1000rpm离心5min，弃上清，加入完全培养基重悬，血球计数板计数。将细胞浓度调整至3×104cell/mL进行铺板，96孔板中每孔加入100μL细胞悬液，设置空白对照组，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养24h，使细胞贴壁生长。
2)加药处理：24h后，弃上清，在相应96孔板区域加入已配制好的不同浓度药液，阴性对照组加入等体积完全培养基。96孔板放置于细胞培养箱中孵育72h。
3)显色反应：避光条件下于96孔板中加入5mg/mL MTT溶液20μL/孔，置于细胞培养箱中孵育4h。小心吸弃上清，加入DMSO溶液200μL/孔，置震荡仪上振摇10min，使甲瓒结晶充分溶解。
4)比色检测：利用多功能酶标仪在570nm检测条件下对96孔板各孔吸光值(OD值)进行检测。根据检测到的OD值，计算YA-2对A549细胞的增殖抑制率，公式如下：细胞增殖抑制率(％)＝(对照组OD值－实验组OD值)/对照组OD值×100％。
结果显示：
a.DDP对A549细胞具有较强的抗肿瘤活性，青蒿素B亦能浓度依赖性抑制A549细胞的增殖，但活性明显弱于DDP。青蒿素B与DDP对A549细胞作用72h的IC50值分别为24.06±13.74μM及2.49±1.24μM(图5及表1)。
b.青蒿素B与DDP联合作用的Q值范围均在0.85≤Q≤1.15及Q>1.15的范围之内，说明青蒿素B与DDP联合使用具有相加及协同作用。其中，青蒿素B浓度为6.25μM及DDP浓度为2.5μM时Q值最大，表明该浓度下两药联合的协同作用最强(图6及表2)。
(2)Annexin V-FITC/PI双染实验
1)细胞接种：对数生长期的细胞用胰酶消化后离心计数，细胞悬液浓度调整为1×105cell/mL进行铺板，六孔板中每孔加入2mL细胞悬液，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养24h。
2)加药处理：实验设置四组分别为青蒿素B单独作用组(6.25μM)、DDP单独作用组(2.5μM)、青蒿素B与DDP联合作用组及对照组。联合作用组对应孔加入青蒿素B与DDP药液各1mL混匀，单独作用组加入青蒿素B或DDP药液2mL/孔，对照组加入等量培养基，置于细胞培养箱中孵育48h。
3)收集细胞：药物作用细胞48h后即可进行处理。收集含有死细胞的上清，用不含EDTA的胰酶消化细胞与上清一同离心，离心机设置1500rpm离心5min，弃上清收集沉淀。
4)洗涤：预冷的PBS洗涤细胞三次后，加入200μL binding buffer重悬混匀转移至对应EP管中。
5)染色：于单细胞悬液中加入Annexin V-FITC染色液5μL/管混匀，避光孵育15min，加入PI染液5μL/管同等条件下孵育反应5min。
6)检测：将染色完成后的样品用流式细胞仪进行检测，待测样品保证每管细胞数不少于10000个。在检测结果中，Q1区表示的是坏死或损伤细胞所占比例，Q2区是凋亡晚期细胞所占比例，Q3区为正常活细胞比例，Q4区则为凋亡早期细胞的比例。
结果显示：青蒿素B与DDP单独及联合处理A549细胞48h后的早期凋亡率分别为11.44％、6.61％以及22.53％，表明青蒿素B与DDP联合用药之后诱导A549细胞凋亡的作用要强于两者单独用药(图7)。
实施例3
青蒿素B与DDP体内联合作用的考察
1)肿瘤模型的建立：胰酶消化处于对数生长期的A549细胞，收集于15mL的离心管中；1000rpm离心10min，弃上清，留取细胞沉淀；PBS洗涤一次，1000rpm离心10min，弃上清，加入PBS溶液重悬，轻轻吹打混匀成单细胞悬液；利用血球计数板计数，调整细胞悬液浓度至5×106cell/mL；超净台中用75％酒精消毒裸鼠右侧腋窝，皮下注射0.2mL细胞悬液/只。裸鼠接种肿瘤细胞后每天观察成瘤情况，隔天称重并测量瘤体积，当瘤体积达100mm3时，进行随机分组给药。
2)动物分组及给药：
给药后每天观察裸鼠摄食、饮水和精神状态等变化，隔天记录裸鼠体重并用游标卡尺测量裸鼠肿瘤的长(a)短(b)径，计算瘤体积(公式：V＝a×b2/2)
3)相关指标的计算及检测：
a.抑瘤率(％)＝(空白组瘤重-给药组瘤重)/空白组瘤重×100％
b.脾脏指数＝小鼠脾重(mg)/小鼠体重(g)
肾脏指数＝小鼠肾重(mg)/小鼠体重(g)
肝脏指数＝小鼠肝重(mg)/小鼠体重(g)
c.相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)＝Vt(给药后每一次测量所得肿瘤体积)/V0(给药时测量所得肿瘤体积)
d.相对肿瘤增殖率T/C(％)＝TRTV(治疗组RTV)/CRTV(阴性对照组RTV)×100％相对肿瘤增殖率是药物抗肿瘤活性的评价指标，疗效评价标准：T/C％>40％为无效；T/C％≤40％，并经统计学处理P<0.05为有效。
e.TUNEL及肝肾生化检测：由试剂公司进行检测。
结果显示：
a.青蒿素B与DDP联合用药组的瘤组织坏死程度要大于单独用药组且没有明显的肝肾毒性(图8-9及表3-5)。
b.DDP与青蒿素B联用能够有效抑制裸鼠异种移植瘤的增殖并延缓顺铂毒性的发生(图10-11及表6)。
c.TUNEL检测各组间瘤组织的凋亡情况，同一个视野下联合用药组的凋亡面积大于单独用药组，见图12。
实施例4
青蒿素B与DDP体内外联合对Cx43的调节机制
(1)Western blotting(体外)
1)细胞接种及给药：细胞处于对数生长期且状态良好时进行消化离心，弃上清，完全培养基重悬细胞计数。将细胞悬液密度调整为1×105cells/mL接种至六孔板中，2mL/孔，置于37℃、5％CO2的培养箱中孵育24h。24h后，吸弃旧培养液，加入对应浓度药液2mL/孔，阴性对照组加入等体积完全培养基，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中作用48h。
2)其它步骤同实施例1中(2)。
结果显示：不同浓度青蒿素B作用A549细胞48h后，JNK、ERK以及P38的磷酸化形式均有所上调，且在青蒿素B浓度为12.5μM时，p-JNK、p-ERK以及p-P38的表达量最高，表明青蒿素B调节Cx43的表达可能与MAPKs相关信号通路的活化有关；青蒿素B与顺铂体外联用时同样能对Cx43的表达进行调节，且正向调节Cx43的机制涉及MAPKs信号通路的激活(图13-14)。
(2)Western blotting(体内)
1)瘤组织蛋白提取：从-80℃冰箱中取出瘤组织至预冷的研钵中，倒入适量液氮进行快速研磨，期间不断加入液氮直至将瘤组织研磨成细小粉末。每组瘤组织粉末各称取50mg至六孔板中用以提取蛋白，于每孔加入含有1％PMSF及1％Na2VO3的RIPA裂解液1mL，冰上裂解30min后超声5次，每次5s，低温高速离心机14000rpm离心10min，取上清，得总蛋白溶液。
2)BCA蛋白定量试剂盒对瘤组织所提蛋白进行定量分析，根据定量分析结果将各样品蛋白浓度调成一致→制胶→电泳(60V恒压至蛋白跑至分离胶，110V恒压至蛋白跑至分离胶底部)→转膜(200mA恒流，根据蛋白分子量大小确定转膜时间)→封闭(室温摇床2h以上)→一抗孵育(4℃冰箱过夜)→洗膜(摇床上振荡洗涤3次，每次15min)→二抗孵育(室温摇床孵育2-3h)→洗膜(摇床上振荡洗涤3次，每次15min)→显影及条带分析。
结果显示：青蒿素B组与联合用药组Cx43、p-ERK、p-JNK及p-P38的蛋白表达水平均高于对照组和DDP组，表明青蒿素B单独或与DDP联合作用均能够增强A549细胞实体瘤中Cx43的表达且调节机制与MAPKs信号通路的活化有关(图16)。
(3)免疫组化检测(由试剂公司进行检测)
结果显示：模型组与DDP单独用药组几乎未见明显的棕黄色及褐色颗粒，而青蒿素B组及联合用药组则可见大片棕黄色及褐色颗粒的区域，进一步表明青蒿素B能够增加小鼠肿瘤组织中Cx43的表达(图15)。
Claims (4)
1.Cx43介导的青蒿素B联合顺铂抗肺癌作用及相关机制。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的体内外实验所用的细胞株为人源非小小细胞肺癌(A549)。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述青蒿素B为青蒿素类化合物，系发明人从黄花蒿中提取分离所得。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述青蒿素B对抗肿瘤药物顺铂治疗肿瘤过程中增强其抗肿瘤效果的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811586136.XA CN111346105A (zh) | 2018-12-22 | 2018-12-22 | Cx43介导的青蒿素B联合顺铂抗肺癌作用及相关机制 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811586136.XA CN111346105A (zh) | 2018-12-22 | 2018-12-22 | Cx43介导的青蒿素B联合顺铂抗肺癌作用及相关机制 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111346105A true CN111346105A (zh) | 2020-06-30 |
Family
ID=71188539
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811586136.XA Pending CN111346105A (zh) | 2018-12-22 | 2018-12-22 | Cx43介导的青蒿素B联合顺铂抗肺癌作用及相关机制 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111346105A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115120585A (zh) * | 2021-03-29 | 2022-09-30 | 于荣敏 | 一种抗ddp耐药肺腺癌的青蒿素b及其药物组合物 |
| CN116334109A (zh) * | 2022-07-29 | 2023-06-27 | 西南大学 | 在青蒿中过表达AaMAPK6基因在提高青蒿素含量中的应用及方法 |
| CN117802055A (zh) * | 2024-01-03 | 2024-04-02 | 暨南大学 | 去氧青蒿素b合酶及其应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102614170A (zh) * | 2011-01-28 | 2012-08-01 | 于荣敏 | 青蒿素b在制备抗肿瘤药物中的应用 |
-
2018
- 2018-12-22 CN CN201811586136.XA patent/CN111346105A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102614170A (zh) * | 2011-01-28 | 2012-08-01 | 于荣敏 | 青蒿素b在制备抗肿瘤药物中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 曹义: "双氢青蒿素联合顺铂对肺腺癌A549 细胞的协同作用及caspase-3 活性的研究", 《中国知网》 * |
| 陈卫强等: "双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌Ａ549/CDDP细胞凋亡", 《现代肿瘤医学》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115120585A (zh) * | 2021-03-29 | 2022-09-30 | 于荣敏 | 一种抗ddp耐药肺腺癌的青蒿素b及其药物组合物 |
| CN115120585B (zh) * | 2021-03-29 | 2024-01-30 | 于荣敏 | 一种抗ddp耐药肺腺癌的青蒿素b及其药物组合物 |
| CN116334109A (zh) * | 2022-07-29 | 2023-06-27 | 西南大学 | 在青蒿中过表达AaMAPK6基因在提高青蒿素含量中的应用及方法 |
| CN116334109B (zh) * | 2022-07-29 | 2024-04-05 | 西南大学 | 在青蒿中过表达AaMAPK6基因在提高青蒿素含量中的应用及方法 |
| CN117802055A (zh) * | 2024-01-03 | 2024-04-02 | 暨南大学 | 去氧青蒿素b合酶及其应用 |
| CN117802055B (zh) * | 2024-01-03 | 2024-06-11 | 暨南大学 | 去氧青蒿素b合酶及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111346105A (zh) | Cx43介导的青蒿素B联合顺铂抗肺癌作用及相关机制 | |
| Xu et al. | Therapeutic mechanism of ginkgo biloba exocarp polysaccharides on gastric cancer | |
| CN108685921B (zh) | 一种n电子等排体鸢尾苷的喹啉衍生物在抗肝癌药物中的应用 | |
| Li et al. | Curcumol Inhibits Lung Adenocarcinoma Growth and Metastasis via Inactivation of PI3K/AKT and Wnt/β-Catenin Pathway | |
| Dong et al. | Antitumor effects of artesunate on human breast carcinoma MCF-7 cells and IGF-IR expression in nude mice xenografts | |
| CN113230259A (zh) | 逆转紫杉醇耐药性的化合物伊曲茶碱的药物用途 | |
| CN114588274B (zh) | 一种负载cRGD和小分子抗肿瘤药物的复合外泌体及其制备方法和应用 | |
| CN111297943A (zh) | 超临界co2流体萃取丹参提取物的应用 | |
| CN110623964A (zh) | 麦角甾醇联合吉非替尼复方脂质体冻干粉的制备方法、脂质体及用途 | |
| CN114195779B (zh) | 9-0-乙基乙醚小檗红碱的合成方法及其在制备抗肿瘤药物中的用途 | |
| CN104083368A (zh) | G-1在制备基于g蛋白偶联受体30的三阴性乳腺癌靶向药物方面的应用 | |
| CN111643488A (zh) | 补骨脂酚在提高化疗药抗肿瘤作用中的应用 | |
| CN111560433B (zh) | 人nufip1的用途及相关产品 | |
| CN110215523B (zh) | 甲基hispolon在制备抗宫颈癌的药物中的应用 | |
| CN111150752A (zh) | 鸡骨草提取物在制备抗癌药物中的应用 | |
| CN111000851A (zh) | 丹参酮i在制备肿瘤细胞自噬诱导剂药物中的应用 | |
| CN108434133A (zh) | 一种小白菊内酯用作骨形成蛋白9抑制剂的生物医药用途 | |
| Wang et al. | Experimental study of realgar on tumor suppression in lymphoma model | |
| CN115364089B (zh) | 桑根酮c在制备治疗胶质母细胞瘤药物中的应用 | |
| CN109260197A (zh) | 靛玉红类化合物和硼替佐米在制备治疗多发性骨髓瘤的药物中的用途 | |
| CN113476456B (zh) | 一种富含连翘脂素的药物组合物及其应用 | |
| CN116036073B (zh) | 异鼠李素在制备诱导鼻咽癌细胞发生副凋亡药物中的应用 | |
| CN115590861B (zh) | 雷公藤氯内酯醇的用途 | |
| CN114848691B (zh) | 赶黄草乙酸乙酯提取物在制备降脂、减肥的药物中的用途 | |
| US11123353B2 (en) | Uses of ergosterol combined with gefitinib, preparation methods of liposome and freeze-dried powder thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20200630 |