CN111344011A - 抗fam19a5抗体用于治疗纤维化的用途 - Google Patents

Abstract

本公开涉及特异性结合FAM19A5的拮抗剂(例如抗体或其抗原结合部分)治疗或诊断有需要的受试者的纤维化和/或纤维化相关疾病的药学用途。

Description

抗FAM19A5抗体用于治疗纤维化的用途

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与本申请一起提交的ASCII文本文件(名称：3763.004PC02_SeqListing.ST25.txt；大小：166,853字节；和创建日期：2018年6月26日)中的电子提交的序列表的全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本公开提供了使用特异性结合序列相似家族19成员A5(FAM19A5)的抗体或其抗原结合片段，或包括此类抗体或其抗原结合片段的组合物治疗或诊断受试者(例如人)的纤维化的方法。

背景技术

纤维化是响应于某些损伤在器官或组织中形成过量的纤维结缔组织。通常，急性伤口正常以有序且有效的方式通过特征在于四个不同阶段的过程(止血、炎症、增殖和重塑)愈合。Diegelmann R.F.等人，《生物科学前沿地标(Front Biosci)》9:283-289(2004)。然而，当损伤严重或重复时，可能发生伤口愈合过程的失调，其特征是受损组织中和周围的纤维结缔组织的过度积累。Wynn T.A.等人，《自然医学(Nat Med)》18(7):1028-1040(2012)。这种积累可导致永久性瘢痕形成、器官功能障碍和甚至死亡，如在许多纤维化疾病(例如，慢性肝病、肾病、特发性肺纤维化(IPF)和心力衰竭)中观察到的。

肝(或肝脏)纤维化是疤痕组织的过度积聚，其由在大多数类型的慢性肝病中发生的进行中的炎症和肝细胞死亡引起。至少在工业化国家，肝纤维化的主要原因包含慢性肝炎病毒感染、酗酒、铁和铜过载以及非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。Bataller R等人，《临床研究杂志(J Clin Invest)》115(2):209-218(2005)。在对肝脏的反复损害后，肝细胞产生活性氧簇(ROS)和其它炎性介质(例如，细胞因子，如TGF-β、PDGF、TNF-α、IL-1和GM-CSF)，其帮助激活不同的肝细胞(例如，肝星状细胞(HSC)、肌成纤维细胞、间质成纤维细胞和胆管上皮细胞)。

活化的肝细胞经历一系列形态学和功能变化(例如，细胞骨架蛋白平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)的出现、细胞维生素A储存的损失、粗面内质网出现的增加和胶原蛋白mRNA表达的增加)。Tsukada等人，《临床化学学报(Clin Chim Acta)》364(1-2):33-60(2006)。这些活化的细胞迁移到损害部位，在那里它们产生大量的ECM(主要由胶原蛋白、糖蛋白和蛋白聚糖构成)，其通过形成纤维性疤痕而积累并扭曲肝结构。

通常，如果除去损害源，则可以逆转肝纤维化。然而，随着反复损害，可发生ECM之间的交联增加，导致形成粗原纤维并发展为肝硬化。

目前，对于许多纤维化疾病，特别是肝纤维化，没有标准治疗。甚至那些具有批准的可用治疗选择的疾病(例如，特发性肺纤维化)，病原体的去除仍然是可用的最有效的治疗。此外，目前可用于诊断纤维化(例如，肝纤维化)的最可靠方法是通过组织活检。但是此类方法通常是高度侵入性的，并且具有各种不期望的副作用(例如，在活检部位出血、疼痛和不适)。因此，目前需要对受试者(例如，人)中的纤维化更有效的治疗和诊断选择。

发明内容

本文提供了针对序列相似家族19成员A5(FAM19A5)蛋白的拮抗剂(“FAM19A5拮抗剂”)，其用于治疗有需要的受试者的组织纤维化。

在一些实施例中，纤维化选自由肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、骨髓纤维化、胰腺纤维化、皮肤纤维化、心脏纤维化、动脉纤维化、关节纤维化、乳腺纤维化、肌肉纤维化、腹膜后纤维化、甲状腺纤维化、淋巴结纤维化、膀胱纤维化、系统性纤维化和胸膜纤维化组成的群组。

在一些实施例中，FAM19A5拮抗剂降低组织内细胞外基质蛋白(例如胶原蛋白)的积累。

在一些实施例中，FAM19A5拮抗剂是特异性结合FAM19A5蛋白的抗体或其抗原结合部分(“抗FAM19A5抗体”)。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、12和13，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、24和25。在其它实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：14、15和16，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：26、27和28。在进一步的实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：17、18和19，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：29、30和31。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：20、21和22，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：32、33和34。

本文还提供了体外诊断纤维化或纤维化相关疾病的方法，包括使FAM19A5拮抗剂与所述受试者的生物样品接触，并测量所述样品中的FAM19A5蛋白水平或FAM19A5 mRNA水平。在一些实施例中，FAM19A5拮抗剂是抗FAM19A5抗体。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、12和13，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、24和25。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：14、15和16，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：26、27和28。在其它实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：17、18和19，并且所述轻链CDR1，CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：29、30和31。在进一步的实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ IDNO：20、21和22，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：32、33和34。实施例

实施例1.一种用于治疗有需要的受试者的纤维化的方法，所述方法包括向所述受试者施用针对序列相似家族19成员A5(FAM19A5)蛋白的拮抗剂。

实施例2.根据实施例1所述的方法，其中所述纤维化选自由肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、骨髓纤维化、胰腺纤维化、皮肤纤维化、心脏纤维化、动脉纤维化、关节纤维化、乳腺纤维化、肌肉纤维化、腹膜后纤维化、甲状腺纤维化、淋巴结纤维化、膀胱纤维化、系统性纤维化和胸膜纤维化组成的群组。

实施例3.根据实施例1或2所述的方法，其中所述纤维化与硬皮病、结缔组织疾病、酒精中毒、感染、铁沉积、环境污染物、放疗、化疗、心脏药物、抗炎药、皮肌炎、多肌炎、系统性红斑狼疮、骨关节炎、类风湿性关节炎、结节病、非酒精性脂肪性肝炎或其任何组合相关或由其引起。

实施例4.根据实施例2所述的方法，其中所述纤维化是肝纤维化或肺纤维化。

实施例5.根据实施例4所述的方法，其中所述肝纤维化与不可逆的肝硬化相关。

实施例9.根据实施例1至8中任一项所述的方法，其中所述拮抗剂是反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、dsRNA、适体、靶向FAM19A5的PNA，或包含它们的载体。

实施例10.根据实施例1至8中任一项所述的方法，其中所述拮抗剂是特异性结合FAM19A5蛋白的抗体或其抗原结合部分(“抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分”)、编码抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分的多核苷酸或包括其多核苷酸的载体。

实施例11.一种诊断有需要的受试者的纤维化和/或纤维化相关疾病的方法，所述方法包括使抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分与所述受试者的生物样品接触，并测量所述样品中FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5蛋白的mRNA水平。

实施例12.一种测量患有纤维化的受试者中FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5蛋白的mRNA水平的方法，其包括使抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分与所述受试者的生物样品接触。

实施例13.根据实施例11或12所述的方法，其中所述受试者表现出的FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5蛋白的mRNA水平是参考样品(未患有纤维化的受试者的样品)中FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5蛋白的mRNA水平的至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍或至少30倍。

实施例14.根据实施例11至13中任一项所述的方法，还包括在所述测量之前从所述受试者收集所述生物样品。

实施例15.根据实施例11至14中任一项所述的方法，其中通过免疫组织化学、Western Blotting、放射免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫扩散、免疫沉淀测定、Ouchterlony免疫扩散方法、火箭免疫电泳、组织免疫染色方法、补体结合测定、FACS或蛋白质芯片测量FAM19A5的蛋白水平。

实施例16.根据实施例11至14中任一项所述的方法，其中通过RT-PCT、实时聚合酶链式反应或Northern Blot测量编码FAM19A5的mRNA水平。

实施例17.根据实施例11至16中任一项所述的方法，其中所述生物样品包括组织、细胞、血液、血清、血浆、唾液、脑脊液、玻璃体液或尿液。

实施例18.根据实施例10至17中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分表现出选自以下的性质：

(a)如通过酶联免疫吸附测定(ELISA)所测量的，以10nM或更小的KD结合可溶性人FAM19A5；

(b)如通过ELISA所测量的，以10nM或更小的KD结合膜结合的人FAM19A5；和

(c)(a)和(b)两者。

实施例19.根据实施例10至18中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分与包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体交叉竞争结合人FAM19A5表位，

(i)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQID NO：12的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列，所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列；

(ii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQID NO：15的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，和所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；

(iii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQID NO：18的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，和所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；或

(iv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQID NO：21的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列，和所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列。

实施例20.根据实施例10至19中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合与参考抗体相同的FAM19A5表位，所述参考抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，

(i)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQID NO：12的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列，和所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列；

(ii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQID NO：15的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，和所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；

(iii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQID NO：18的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，和所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；或

(iv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQID NO：21的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列，和所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列。

实施例21.根据实施例10至20中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合至少一个FAM19A5表位，其为SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：9。

实施例22.根据实施例10至20中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分仅结合FAM19A5表位，其为SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：9。

实施例23.根据实施例10至21中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分还结合另外的FAM19A5表位。

实施例24.根据实施例23所述的方法，其中所述另外的FAM19A5表位选自由SEQ IDNO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、及其任何组合组成的群组。

实施例25.根据实施例10至24中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3。

实施例26.根据实施例25所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分的重链CDR3包括SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：22的氨基酸序列。

实施例27.根据实施例25或26所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分的重链CDR1包括SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：20的氨基酸序列。

实施例28.根据实施例25至27中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分的重链CDR2包括SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：21的氨基酸序列。

实施例29.根据实施例25至28中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分的轻链CDR1包括SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：32的氨基酸序列。

实施例30.根据实施例25至29中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分的轻链CDR2包括SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：30或SEQ ID NO：33的氨基酸序列。

实施例31.根据实施例25至30中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分的轻链CDR3包括SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：31或SEQ ID NO：34的氨基酸序列。

实施例32.根据实施例10至31中任一项所述的方法，其中抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中

(i)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、12和13，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、24和25；

(ii)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：14、15和16，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：26、27和28；

(iii)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：17、18和19，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：29、30和31；或

(iv)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：20、21和22，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：32、33和34。

实施例33.根据实施例10至32中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括重链可变结构域和/或轻链可变结构域，所述重链可变结构域包括SEQID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37或SEQ ID NO：38，所述轻链可变结构域包括SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：42。

实施例34.根据实施例33所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括含有SEQ ID NO：35的重链可变结构域和含有SEQ ID NO：39的轻链可变结构域。

实施例35.根据实施例33所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括含有SEQ ID NO：36的重链可变结构域和含有SEQ ID NO：40的轻链可变结构域。

实施例36.根据实施例33所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括含有SEQ ID NO：37的重链可变结构域和含有SEQ ID NO：41的轻链可变结构域。

实施例37.根据实施例33所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括含有SEQ ID NO：38的重链可变结构域和含有SEQ ID NO：42的轻链可变结构域。

实施例38.根据实施例10至32中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：35、36、37或38所示氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

实施例39.根据实施例10至32中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39、40、41或42所示氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

实施例40.根据实施例10至32中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：35、36、37或38所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39、40、41或42所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

实施例41.根据实施例10至40中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体为嵌合抗体、人抗体或人源化抗体。

实施例42.根据实施例10至40中任一项所述的方法，其中其抗原结合部分是Fab、Fab'、F(ab')2,、Fv或单链Fv(scFv)。

实施例43.根据实施例10至42中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分选自由IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体组成的群组。

实施例44.根据实施例43所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分是IgG2、IgG4或其组合。

实施例45.根据实施例43所述的方法，其中抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括IgG2/IgG4同种型抗体。

实施例46.根据实施例10至45中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分还包括不具有Fc功能的恒定区。

实施例47.根据实施例10至46中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分与具有第二结合部分的分子连接，由此形成双特异性分子。

实施例48.根据实施例10至47中任一项所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分与试剂连接，由此形成免疫缀合物。

实施例49.根据实施例1至48中任一项所述的方法，其中用药学上可接受的载体配制所述FAM19A5蛋白的拮抗剂。

实施例50.根据实施例1至49中任一项所述的方法，其中静脉内、口服、肠胃外、鞘内、脑室内、肺、肌内、皮下、玻璃体内或心室内施用FAM19A5蛋白拮抗剂。

实施例51.根据实施例1至50中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。

附图说明

图1显示具有胆管结扎(BDL)诱导的肝纤维化(“疾病模型”)的大鼠(n＝5)与健康大鼠(“正常”)(n＝3)的血清中FAM19A5蛋白水平的比较。FAM19A5蛋白质的水平显示为相对于在正常对照动物中观察到的水平的倍数变化。“*”表示与正常对照动物相比的统计学显著差异(p<0.005)。

图2显示具有气管内注射3mg/kg博来霉素诱导的特发性肺纤维化(“疾病模型”)的大鼠(n＝5)与健康大鼠(“正常”)(n＝5)的血清中FAM19A5蛋白水平的比较。FAM19A5蛋白质的水平显示为相对于在正常对照动物中观察到的水平的倍数变化。“*”表示与正常对照动物相比的统计学显著差异(p<0.005)。

图3显示具有确认肝纤维化如肝硬化的人类患者(患者#1-10)和健康个体(正常#1-3)二者的血清中FAM19A5蛋白质水平的倍数变化。每个条形图上显示的具体值表示相对于在健康个体血清中检测到的FAM19A5蛋白质平均浓度的倍数变化。

图4显示用对照抗体(“NHI”)或抗FAM19A5抗体(“1-65”、“3-2”和“1-28”)处理的心肌梗塞诱导动物中左心室组织的H&E(苏木精和曙红)染色的比较。健康动物(即，没有心肌梗塞诱导，“正常对照”)用作另外的对照。

图5A和5B显示心肌梗塞诱导动物的左心室组织中胶原蛋白积累的比较。心肌梗塞诱导的动物接受对照抗体(“NHI”)或抗FAM19A5抗体(“1-65”、“3-2”和“1-28”)。再次使用健康动物(即，没有心肌梗塞诱导，“正常对照”)作为另外的对照。图5A显示使用Masson三色染色的胶原蛋白积累。图5B显示作为纤维面积与整个左心室面积的比的胶原蛋白积累(即纤维面积)。数据表示为平均值±S.D(n＝5至8/组)。条上的“***/**”表示与“正常对照”组(健康动物)相比的统计学显著差异(分别为p＜0.001，p＜0.05)。条上的“#”表示与“NHI”组(心肌梗塞诱导+对照抗体)相比的统计学显著差异(p<0.05)。

图6A提供评估抗FAM19A5抗体在二甲基亚硝胺(DMN)介导的纤维化动物模型中的抗纤维化作用的施用方案。暗灰色方框表示何时将DMN施用于动物以诱导肝纤维化。亮灰色方框表示何时施用对照(人IgG)抗体或抗FAM19A5抗体。

图6B、6C、6D和6E显示接受对照抗体(“G2”，人IgG)或抗FAM19A5抗体(“G3”)的DMN处理动物的肝脏中胶原蛋白产生的比较。为了比较的目的，还显示代表性正常对照/健康动物(“G1”)。在图6B和6C中，胶原蛋白产生由天狼星红染色(染色总胶原蛋白)表示。图6B提供接受对照抗体(G2)或抗FAM19A5抗体(G3)的DMN处理动物的肝脏中天狼星红染色的代表性免疫组织化学图像。图6C提供天狼星红阳性细胞相对于肝组织切片的百分比(平均值±S.D.)。在图6D和6E中，提供了I型胶原蛋白的具体生产。图6D提供接受对照抗体(G2)或抗FAM19A5抗体(G3)的DMN处理的动物的肝脏中I型胶原蛋白染色的代表性免疫组织化学图像。图6E提供I型胶原蛋白表达相对于整个染色的肝组织切片的百分比(平均值±S.D.)。在图6C和6E中，都使用SPSS统计19进行统计分析。条上的“**”表示与“G1”组(健康动物)相比的统计学显著差异(p＜0.01)。“#”和“##”表示与用对照抗体处理的动物(G2)相比的统计学显著差异(分别为p＜0.05；p＜0.01)。

图7A和7B显示接受对照抗体(G2)或抗FAM19A5抗体(G3)的DMN处理的动物的肝脏中TGF-β产生的比较。为了比较的目的，还显示正常对照/健康动物(G1)。图7A提供肝脏样品中TGF-β染色的代表性免疫组织化学图像。图7B提供TGF-β表达相对于肝组织切片的百分比(平均值±S.D.)。使用SPSS统计19进行统计分析。条上的“*”和“**”表示与“G1”(健康动物)相比的统计学显著差异(分别为p＜0.05；p＜0.01)。“##”表示与用对照抗体处理的动物(G2)相比的统计学显著差异(p＜0.01)。

具体实施方式

本公开显示纤维化，例如肝纤维化，可通过施用抗FAM19A5拮抗剂，例如抗FAM19A5抗体来控制、治疗、改善或减少。不受任何理论的约束，一种可能的功效机制可能是由于抗FAM19A5抗体对纤维化的抗炎作用。本公开还表明纤维化，例如肝纤维化，可通过测量血清中FAM19A5的表达来诊断。在纤维化形成期间，活化的肝星状细胞(HSC)(许多纤维化中的主要原因)产生高水平的FAM19A5蛋白，其可被分泌到血清中。因此，随着纤维化和/或纤维化相关疾病的严重性增加，血清中FAM19A5蛋白表达更高。

为了便于理解本文公开的公开内容，定义了多个术语和短语。在整个详细描述中阐述了另外的定义。

I.定义

在本公开中，术语“一”或“一个”实体是指一个或多个该实体；例如，“抗体”应理解为代表一个或多个抗体。因此，术语“一”(或“一个”)、“一个或多个”和“至少一个”在本文可以互换使用。

此外，“和/或”在本文使用时应被视为两个指定特征或组件中的每一个与或不与另一个的具体公开。因此，在短语如“A和/或B”中使用的术语“和/或”在本文旨在包含“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样，在短语如“A、B和/或C”中使用的术语“和/或”旨在包括以下方面中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

应当理解，无论本文用语言“包括”描述何种方面，也提供了在术语“由……组成”和/或“基本上由……组成”中描述的类似方面。

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本公开相关领域的普通技术人员通常理解的相同含义。例如《简明生物医学和分子生物学词典(ConciseDictionary of Biomedicine and Molecular Biology)》第二版，Juo,Pei-Show,2002,CRCPress；《细胞与分子生物学词典(The Dictionary of Cell and Molecular Biology)》第三版，1999,Academic Press；和《牛津生物化学与分子生物学词典(Oxford Dictionary OfBiochemistry And Molecular Biology)》修订版，2000,Oxford University Press为技术人员提供了本公开中使用的许多术语的通用词典。

单位、前缀和符号以其国际单位制(SI)接受的形式表示。数值范围包含限定该范围的数字。除非另有说明，否则氨基酸序列以氨基至羧基的方向从左到右书写。本文提供的标题不是对本公开的各个方面的限制，其可以通过参考说明书整体来获得。因此，下面紧接着定义的术语通过参考说明书整体而更充分地定义。

术语“约”在本文中用于指大约、粗略地、在其周围或在其区域中。当术语“约”与数值范围结合使用时，它通过将边界扩展到所给出的数值之上和之下来修饰该范围。通常，术语“约”可以通过上或下(高于或低于)例如10％的变量将数值修饰为所给出的数值之上和之下。

如本文所用，术语“治疗(treat、treating和treatment)”是指在受试者上进行的或向受试者施用活性剂的任何类型的干预或过程，目的是逆转、减轻、改善、抑制或减缓或阻止与疾病相关的症状、并发症、状态或生物化学指标的进展、发展、严重或复发。治疗可以是对患有疾病的受试者或未患有疾病的受试者(例如，用于预防)的治疗。

如本文所用，“施用”是指使用本领域技术人员已知的各种方法和递送系统中的任一种将治疗剂或包括治疗剂的组合物物理引入受试者。本文所述的抗体的不同施用途径包含静脉内、腹膜内、肌内、皮下、脊髓或其它肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。如本文所用，短语“肠胃外施用”是指除了肠内和局部施用之外的施用模式，通常通过注射，并且包含但不限于静脉内、腹膜内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、经气管、气管内、肺、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、心室内、玻璃体内、硬膜外和胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。或者，本文所述的抗体可通过非肠胃外途径施用，例如局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、口服、阴道、直肠、舌下或局部施用。施用也可以例如一次、多次和/或在一个或多个延长的时间段内进行。

如本文所用的术语“治疗有效量”是指药物单独或与另一种治疗剂组合有效“治疗”受试者中的疾病或病症或降低疾病或病症(例如，肝纤维化或肺纤维化)的风险、可能性或发生的量。“治疗有效量”包含对患有疾病或病症(例如，本文公开的肝纤维化或肺纤维化)的受试者或处于患有该疾病或病症风险中的受试者提供一些改善或益处的药物或治疗剂的量。因此，“治疗有效”量是降低疾病的风险、可能性或发生的量，或提供病症或一些减轻、缓和和/或降低至少一种指标(例如，纤维化)和/或减少疾病或病症的至少一种临床症状的量。

本公开的某个方面涉及诊断有需要的受试者的纤维化和/或纤维化相关疾病。关于本公开，申请人已经发现，在组织或器官损害时，在损害部位和患有纤维化疾病或病症的受试者的外周血中，FAM19A5表达都增加。因此，在一些实施例中，本公开提供了诊断有需要的受试者的纤维化和/或纤维化相关疾病的方法，所述方法包括使本文公开的单克隆抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物与获自受试者的样品接触并测量FAM19A5表达水平。在一个实施例中，纤维化是肝纤维化或肺纤维化。在一些实施例中，与没有纤维化的受试者的参照样品中FAM19A5的水平相比，受试者样品中FAM19A5的水平增加。参见下文。

如本文所用，术语“诊断”是指可以用于确定或预测患者是否患有给定疾病或病况的方法。本领域技术人员可基于一种或多种诊断标志物(例如FAM19A5)进行诊断，其中诊断标志物的存在、不存在、量或量的变化指示病况的存在、严重程度或不存在。在一些实施例中，来自受试者的生物样品中的FAM19A5表达增加指示纤维化和/或纤维化相关疾病。术语“诊断”不是指以100％的准确性确定特定疾病的存在或不存在的能力，或者甚至给定的过程或结果相比不发生而更可能发生的能力。相反，技术人员将理解术语“诊断”是指受试者中存在某种疾病的概率增加。

术语“诊断标志物”(例如FAM19A5表达)是指能够与正常细胞分开诊断纤维化组织细胞的物质，并且包含在纤维化组织细胞中增加或减少的有机生物分子，如多肽或核酸(例如mRNA)、脂质、糖脂、糖蛋白和糖(单糖、二糖、寡糖等)。本公开中提供的纤维化和/或纤维化相关疾病的诊断标志物可以是由FAM19A5基因表达的蛋白质，其在纤维化组织的细胞中的表达增加。

用于诊断纤维化和/或纤维化相关疾病的组合物包含用于测量FAM19A5基因的mRNA表达水平或蛋白质表达量的试剂。此类试剂包含具有与FAM19A5 mRNA互补的序列的寡核苷酸、特异性结合FAM19A5 mRNA的引物或核酸探针和特异性结合FAM19A5蛋白的抗体。

如本文所用，术语“受试者”包含任何人或非人动物。术语“非人动物”包含所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，如非人灵长类动物、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。

术语“序列相似家族19成员A5”或“FAM19A5”指属于五种高度同源的蛋白的TAFA家族(也称为FAM19家族)的蛋白，并且主要在大脑和脊髓中表达。Tang T.Y等人，《基因组学(Genomics)》83(4):727-34(2004)。这些蛋白在固定位置含有保守的半胱氨酸残基，并且与作为CC-趋化因子家族成员的巨噬细胞炎性蛋白1-α(MIP-1-α)远缘相关。TAFA蛋白主要在大脑和脊髓的特定区域表达。这些蛋白被认为是由成年神经干细胞在神经发生过程中产生和分泌的。FAM19A5也称为TAFA5或趋化因子样蛋白TAFA-5。

FAM19A5主要在脊椎动物的大脑中表达，并且据信FAM19A5对于完整中枢神经系统的发育、分化、形成是重要的。FAM19A5在许多中枢神经系统损伤和/或退行性大脑疾病(例如亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病和脑脊髓损伤)的发病机理中也起重要作用。中枢神经系统损伤后，神经干细胞产生FAM19A5，其诱导正常星形胶质细胞分化为反应性星形胶质细胞。这些反应性星形胶质细胞(连同小神经胶质细胞)可以表达多种ECM(例如蛋白聚糖、糖蛋白和胶原蛋白)并诱导反应性神经胶质增生，其可以像网一样围绕中枢神经系统的受损区域并阻止神经元的再生。抗FAM19A5抗体可用于预防和/或治疗中枢神经系统损伤和/或疾病。参见美国专利号9,579,398。

在人类中，编码FAM19A5的基因位于染色体22上。存在三种人FAM19A5(UniProt：Q7Z5A7)同种型，其被认为是通过可变剪接产生的：同种型1(UniProt：Q7Z5A7-1)，由132个氨基酸组成；同种型2(UniProt：Q7Z5A7-2)，由125个氨基酸组成；和同种型3(UniProt：Q7Z5A7-3)，由53个氨基酸组成。人FAM19A5蛋白被认为以膜结合和可溶性(分泌)形式存在。同种型1被认为是具有一个跨膜区的膜蛋白。同种型2，其在Tang T.Y.等人，《基因组学(Genomics)》83(4):727-34(2004)中报道作为分泌蛋白(可溶性)，含有在第1位至第25位氨基酸的信号肽。根据EST数据预测同种型3。下面是三种已知的人FAM19A5同种型的氨基酸序列。

(I)同种型1(UniProt：Q7Z5A7-1，跨膜蛋白)：选择该同种型作为规范序列。

MAPSPRTGSRQDATALPSMSSTFWAFMILASLLIAYCSQLAAGTCEIVTLDRDSSQPRRTIARQTARCACRKGQIAGTTRARPACVDARI IKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO：1)

(II)同种型2(UniProt：Q7Z5A7-2，可溶性蛋白)：

MQLLKALWALAGAALCCFLVLVIHAQFLKEGQLAAGTCEIVTLDRDSSQPRRTIARQTARCACRKGQIAGTTRARPACVDARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO：2)

(III)同种型3(UniProt：Q7Z5A7-3)：

MYHHREWPARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO：3)

术语“FAM19A5”包含由细胞天然表达的FAM19A5的任何变体或同种型。因此，本文所述的抗体可与相同物种中的不同同种型(例如，人FAM19A5的不同同种型)交叉反应，或与来自非人物种的FAM19A5(例如，小鼠FAM19A5)交叉反应。或者，抗体可对人FAM19A5具有特异性，且不能表现出与其它物种的任何交叉反应性。FAM19A5或其任何变体和同种型可以从天然表达它们的细胞或组织中分离，或者重组产生。编码人FAM19A5的多核苷酸具有GenBank登录号BC039396和以下序列：

表1A.人FAM19A5的多核苷酸序列

术语“针对FAM19A5蛋白的拮抗剂”指抑制FAM19A5蛋白表达的所有拮抗剂。此类拮抗剂可以是肽、核酸或化合物。更具体地，拮抗剂可以是反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、dsRNA、适体、靶向FAM19A5的PNA(肽核酸)或包含它们的载体。在一些实施例中，拮抗剂可以是特异性结合FAM19A5蛋白的抗体或其抗原结合部分。

术语“抗体(antibody或antibodies)”是本领域的术语，并且在本文中可互换使用，并且是指具有特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。本文所用的术语包含完整抗体和其任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或单链。在一个实施例中，“抗体”指包括通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白或其抗原结合部分。在另一实施例中，“抗体”指包括单个可变结构域例如VHH结构域的单链抗体。每条重链由重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区构成。在某些天然存在的抗体中，重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3构成。在某些天然存在的抗体中，每条轻链由轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域CL构成。

VH和VL区可进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区，其中散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR构成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包含免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。

术语“Kabat编号”和类似术语是本领域公认的，指对抗体或其抗原结合部分的重链和轻链可变区中的氨基酸残基进行编号的系统。在某些方面，抗体的CDR可根据Kabat编号系统(参见，例如，Kabat EA和Wu TT(1971)《纽约科学院年鉴(Ann NY Acad Sci)》190:382-391和Kabat EA等人，(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteinsof Immunological Interest)》第五版，美国卫生与公共服务部，NIH公开号91-3242)确定。使用Kabat编号系统，抗体重链分子内的CDR典型存在于第31位至第35位氨基酸(其任选地可以包含一个或两个另外的氨基酸)、(在35位之后(在Kabat编号方案中称为35A和35B)(CDR1))第50位至第65位氨基酸(CDR2)和第95位至第102位氨基酸(CDR3)。使用Kabat编号系统，抗体轻链分子内的CDR典型存在于第24位至第34位氨基酸(CDR1)、第50位至第56位氨基酸(CDR2)和第89位至第97位氨基酸(CDR3)。在一个具体的实施例中，本文所述抗体的CDR已根据Kabat编号方案确定。

短语“如Kabat中的氨基酸位置编号”、“Kabat位置”及其语法变体是指Kabat等人，《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》第五版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)中的抗体编译的用于重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用这种编号系统，实际的线性氨基酸序列可以含有更少或更多的氨基酸，对应于可变结构域的FW或CDR的缩短或插入。例如，重链可变结构域可包含H2的残基52之后的单个氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)和重链FW残基82之后的插入残基(例如，根据Kabat的残基82a、82B和82c等)。参见表1B。

表1B

对于给定抗体，可以通过在抗体序列的同源区与“标准”Kabat编号序列比对来确定残基的Kabat编号。而Chothia是指结构环的位置(Chothia和Lesk，《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196:901-917(1987))。当使用Kabat编号惯例编号时，Chothia CDR-H1环的末端在H32和H34之间变化，这取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案将插入置于H35A和H35B；如果35A和35B都不存在，则环在32处结束；如果仅35A存在，则环在33处结束；如果35A和35B都存在，则环在34处结束)。AbM高变区代表Kabat CDR和Chothia结构环之间的折衷，并且被Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用。

IMGT(ImMunoGeneTics)也提供了免疫球蛋白可变区(包含CDR)的编号系统。参见，例如，通过引用并入本文的Lefranc，M.P.等人，《发展与比较免疫学(Dev.Comp.Immunol.)》27:55-77(2003)。IMGT编号系统基于超过5,000个序列的比对、结构数据和高变环的表征，并且允许容易地比较所有物种的可变区和CDR区。根据IMGT编号方案，VH-CDR1在第26位至第35位，VH-CDR2在第51位至第57位，VH-CDR3在第93位至第102位，VL-CDR1在第27位至第32位，VL-CDR2在第50位至第52位，并且VL-CDR3在第89位至第97位。

对于本公开中讨论的所有重链恒定区氨基酸位置，编号是根据Edelman等人(1969)《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》63(1):78-85中首先描述的EU索引，该EU索引描述了骨髓瘤蛋白EU的氨基酸序列，其是测序的首个人IgG1。Edelman等人的EU索引也在Kabat等人(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)》第五版，United States Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda中列出。因此，短语“Kabat中列出的EU索引”或“Kabat的EU索引”和“根据Kabat中列出的EU索引的第……位”及其语法变体是指基于如Kabat 1991中列出的Edelman等人的人IgG1 EU抗体的残基编号系统。

用于可变结构域(重链和轻链二者)和轻链恒定区氨基酸序列的编号系统如Kabat1991中所列。

抗体可以是任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何类别(例如IgD、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2)或任何亚类(例如人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4；和小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3)的免疫球蛋白分子。免疫球蛋白如IgG1以几种同种异型存在，它们在至多几个氨基酸上彼此不同。本文公开的抗体可以来自任何通常已知的同种型、类别、亚类或同种异型。在某些实施例中，本文所述的抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的抗体或其任何杂合体。在某些实施例中，抗体是人IgG1亚类或人IgG2或人IgG4亚类的抗体。

“抗体”包含，例如，天然存在的和非天然存在的抗体二者；单克隆和多克隆抗体；嵌合和人源化抗体；人和非人抗体；完全合成的抗体；单链抗体；单特异性抗体；多特异性抗体(包含双特异性抗体)；包括两个重链和两个轻链分子的四聚体抗体；抗体轻链单体；抗体重链单体；抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体；抗体轻链-抗体重链对；胞内抗体；异源缀合抗体；单价抗体；骆驼化抗体；affybody；抗独特型(抗-Id)抗体(包含，例如，抗-抗-Id抗体)，和单结构域抗体(sdAbs)，其包含由完全能够进行抗原结合的单一单体可变抗体结构域(例如，VH结构域或VL结构域)组成的结合分子。Harmen M.M.和Haard H.J.《应用微生物学与生物技术(Appl Microbiol Biotechnol.)》77(1):13–22(2007))。

如本文所用，抗体的术语“抗原结合部分”指保留特异性结合抗原(例如人FAM19A5)的能力的抗体的一个或多个片段。此类“片段”的长度为例如约8个至约1500个氨基酸，合适的长度为约8个至约745个氨基酸，合适的长度为约8个至约300个氨基酸，例如约8个至约200个氨基酸，或约10个至约50个或100个氨基酸。已经显示抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来进行。包括在抗体例如本文所述的抗FAM19A5抗体的术语“抗原结合部分”内的结合片段的实例包含(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包括在铰链区由二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，由抗体单臂的VL和VH结构域组成，和二硫键连接的Fvs(sdFv)；(v)dAb片段(Ward等人，(1989)《自然(Nature)》341:544-546)，由VH结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)或(vii)两个或更多个分离的可任选地通过合成接头连接的CDR的组合。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但是它们可以使用重组方法通过合成接头连接，所述合成接头使得它们能够被制备成单个蛋白链，其中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv))；参见，例如，Bird等人(1988)《科学(Science)》242:423-426；和Huston等人(1988)《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》85:5879-5883)。此类单链抗体也旨在包括在抗体的术语“抗原结合部分”内。这些抗体片段使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。抗原结合部分可以通过重组DNA技术或通过完整免疫球蛋白的酶或化学裂解来产生。

如本文所用，术语“可变区”或“可变结构域”可互换使用，并且是本领域常见的。可变区典型地指抗体的一部分，通常指轻链或重链的一部分，典型地在成熟重链氨基末端的约110至120个氨基酸，在成熟轻链中的约90至115个氨基酸，其在抗体之间在序列方面广泛不同，并用于特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。序列的可变性集中在称为互补决定区(CDR)的那些区域中，而可变结构域中更高度保守的区域称为框架区(FR)。

不希望受任何特定机制或理论的束缚，据信轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用和特异性。在某些实施例中，可变区是人可变区。在某些实施例中，可变区包括啮齿类或鼠CDR和人框架区(FR)。在特定的实施例中，可变区是灵长类(例如，非人灵长类)可变区。在某些实施例中，可变区包括啮齿类或鼠CDR和灵长类(例如非人灵长类)框架区(FR)。

如本文所用，术语“重链”在用于指代抗体时，可指基于恒定结构域的氨基酸序列的任何不同类型，例如α、δ、ε、γ和μ，其分别产生IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类抗体，包含IgG亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。

如本文所用，术语“轻链”在用于指代抗体时，可以指基于恒定结构域的氨基酸序列的任何不同类型，例如κ或λ。轻链氨基酸序列是本领域熟知的。在具体的实施例中，轻链是人轻链。

术语“VL”和“VL结构域”可互换使用，并且是指抗体的轻链可变区。

术语“VH”和“VH结构域”可互换使用，并且是指抗体的重链可变区。

如本文所用，术语“恒定区”或“恒定结构域”可互换，并且具有其在本领域中的通常含义。恒定区是抗体部分，例如轻链和/或重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但可表现出各种效应子功能，例如与Fc受体的相互作用。免疫球蛋白分子的恒定区通常具有相对于免疫球蛋白可变结构域更保守的氨基酸序列。

“Fc区”(可结晶片段区)或“Fc结构域”或“Fc”是指抗体重链的C-末端区，其介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包含与位于免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)上的Fc受体的结合或与经典补体系统的第一组分(C1q)的结合。因此，Fc区包括抗体的恒定区，不包括第一恒定区免疫球蛋白结构域(例如CH1或CL)。在IgG、IgA和IgD抗体同种型中，Fc区包括两个相同的蛋白片段，其源自抗体两条重链的第二(CH2)和第三(CH3)恒定结构域；IgM和IgE Fc区在每条多肽链中包括三个重链恒定结构域(CH结构域2-4)。对于IgG，Fc区包括免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3以及Cγ1和Cγ2之间的铰链。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能变化，但是人IgG重链Fc区通常被定义为从C226或P230位的氨基酸残基(或这两个氨基酸之间的氨基酸)延伸至重链的羧基末端，其中编号根据如Kabat中的EU索引。人IgGFc区的CH2结构域从约氨基酸231延伸至约氨基酸340，而CH3结构域位于Fc区中Cm结构域的C-末端侧，即它从IgG的约氨基酸341延伸至约氨基酸447。如本文所用，Fc区可以是天然序列Fc，包含任何同种异型变体，或变体Fc(例如，非天然存在的Fc)。Fc也可以指分离的或在含Fc的蛋白多肽的上下文中的该区域，例如“包括Fc区的结合蛋白”，其也称为“Fc融合蛋白”(例如抗体或免疫粘附素)。

“天然序列Fc区”或“天然序列Fc”包括与天然存在的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包含天然序列人IgG1 Fc区；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区及其天然存在的变体。天然序列Fc包含各种Fes同种异型(参见，例如Jeffris等人(2009)《单克隆抗体(mAbs)》1:1；Vidarsson G.等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日))。

“Fc受体”或“FcR”是结合免疫球蛋白Fc区的受体。结合IgG抗体的FcR包括FcγR家族的受体，包含这些受体的等位基因变体和可变剪接形式。FcγR家族由三种激活受体(小鼠中的FcγRI、FcγRIII和FcγRIV；人中的FcγRIA、FcγRIIA和FcγRIIIA)和一种抑制受体(FcγRIIB)组成。人IgG1结合至大部分人Fc受体并引起最强的Fc效应子功能。就其结合的活化Fc受体的类型而言，认为其等同于鼠IgG2a。相反，人IgG4引起最小的Fc效应子功能。Vidarsson G等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。

恒定区可以例如通过重组技术来操作，以消除一种或多种效应子功能。“效应子功能”是指抗体Fc区与Fc受体或配体的相互作用，或由此产生的生物化学事件。示例性的“效应子功能”包含C1q结合、补体依赖的细胞毒性(CDC)、Fc受体结合、FcγR-介导的效应子功能如ADCC和抗体依赖的细胞介导的吞噬作用(ADCP)以及细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)的下调。此类效应子功能通常需要Fc区与结合结构域(例如抗体可变结构域)组合。因此，术语“无Fc功能的恒定区”包含由Fc区介导的具有降低的或不具有一种或多种效应子功能的恒定区。

抗体的效应子功能可以通过不同的方法降低或避免。通过使用缺乏Fc区的抗体片段(如例如Fab、F(ab')₂、单链Fv(scFv)或由单体VH或VL结构域组成的sdAb)可以降低或避免抗体的效应子功能。可替代地，所谓的非糖基化抗体可通过除去与Fc区中特定残基连接的糖来产生，以降低抗体的效应子功能，同时保留Fc区的其它有价值的属性(例如延长的半衰期和异二聚化)。非糖基化抗体可以通过例如缺失或改变糖所连接的残基、酶促除去糖、在糖基化抑制剂存在下培养的细胞中产生抗体或通过在不能糖基化蛋白的细胞(例如细菌宿主细胞)中表达抗体来产生。参见例如美国公开号20120100140。另一种方法是使用来自IgG亚类的具有降低的效应子功能的Fc区，例如，IgG2和IgG4抗体的特征在于具有比IgG1和IgG3更低水平的Fc效应子功能。Fc部分CH2结构域中最接近铰链区的残基负责抗体的效应子功能，因为它含有针对先天免疫系统效应细胞上的C1q(补体)和IgG-Fc受体(FcγR)的大部分重叠结合位点。Vidarsson G等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。因此，具有降低的Fc效应子功能或不具有Fc效应子功能的抗体可通过产生例如包括来自IgG4同种型的IgG抗体的CH2结构域和来自IgG1同种型的IgG抗体的CH3结构域的嵌合Fc区，或包括来自IgG2的铰链区和来自IgG4的CH2区的嵌合Fc区(参见例如LauC等人《免疫学杂志(J.Immunol.)》191:4769-4777(2013))，或具有导致Fc效应子功能改变(降低的FC功能或无FC功能)的突变的Fc区来制备。此类具有突变的Fc区是本领域已知的。参见，例如，美国公开号20120100140和其中引用的美国和PCT申请以及An等人《单克隆抗体(mAbs)》1:6,572-579(2009)；所述专利的全部公开内容通过引用并入本文。

“铰链”、“铰链结构域”或“铰链区”或“抗体铰链区”是指连接CH1结构域和CH2结构域的重链恒定区的结构域，并包含铰链的上部、中部和下部(Roux等人(1998)《免疫学杂志(J.Immunol.)》161:4083)。铰链在抗体的结合区和效应区之间提供不同水平的灵活性，并且还为两个重链恒定区之间的分子间二硫键提供位点。如本文所用，对于所有IgG同种型，铰链起始于Glu216并终止于Gly237(Roux等人，(1998)《免疫学杂志(J.Immunol.)》161:4083)。野生型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4铰链的序列是本领域已知的。参见，例如，Kabat EA等人(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest)》第五版，美国卫生与公共服务部，NIH公开号91-3242；Vidarsson G.等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。

术语“CH1结构域”是指重链恒定区，其在重链恒定结构域中连接可变结构域与铰链。如本文所用，CH1结构域起始于A118并终止于V215。术语“CH1结构域”包含野生型CH1结构域，及其天然存在的变体(例如同种异型)。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(包含野生型和同种异型)的CH1结构域序列是本领域已知的。参见，例如，Kabat EA等人，(1991)同上和VidarssonG等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。示例性CH1结构域包含具有改变抗体生物活性例如半衰期的突变的CH1结构域，例如描述于美国公开号20120100140和其中引用的美国专利和出版物以及PCT出版物中。

术语“CH2结构域”指重链恒定结构域中连接铰链与CH3结构域的重链恒定区。如本文所用，CH2结构域起始于P238并终止于K340。术语“CH2结构域”包含野生型CH2结构域，及其天然存在的变体(例如同种异型)。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(包含野生型和同种异型)的CH2结构域序列是本领域已知的。参见，例如，Kabat EA等人，(1991)同上和Vidarsson G等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。示例性CH2结构域包含具有改变抗体生物活性例如半衰期和/或Fc效应子功能降低的突变的CH2结构域，例如描述于美国公开号20120100140和其中引用的美国专利和出版物以及PCT出版物中。

术语“CH3结构域”指重链恒定区，其是重链恒定结构域中CH2结构域的C-末端。如本文所用，CH3结构域起始于G341并终止于K447。术语“CH3结构域”包含野生型CH3结构域，及其天然存在的变体(例如同种异型)。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(包含野生型和同种异型)的CH3结构域序列是本领域已知的。参见，例如，Kabat EA等人，(1991)同上和Vidarsson G等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。示例性CH3结构域包含具有改变抗体生物活性例如半衰期的突变的CH3结构域，例如描述于美国公开号20120100140和其中引用的美国专利和出版物以及PCT出版物中。

如本文所用，“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE抗体)。

“同种异型”指特定同种型组中天然存在的变体，这些变体在几个氨基酸上有所不同(参见例如Jeffris等人(2009)《单克隆抗体(mAbs)》1:1)。本文所述的抗体可以是任何同种异型的。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的同种异型是本领域已知的。参见，例如，Kabat EA等人，(1991)同上；Vidarsson G等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)；和Lefranc MP，《单克隆抗体(mAbs)》1:4,1-7(2009)。

短语“识别抗原的抗体”和“对抗原具有特异性的抗体”在本文中与术语“特异性结合抗原的抗体”可互换使用。

如本文所用，“分离的抗体”旨在是指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体(例如，特异性结合FAM19A5的分离的抗体基本上不含特异性结合除FAM19A5以外的抗原的抗体)。然而，特异性结合FAM19A5表位的分离的抗体可与来自不同物种的其它FAM19A5蛋白具有交叉反应性。

“结合亲和力”通常指分子(例如抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对成员(例如抗体和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以由解离常数(K_D)表示。亲和力可以以本领域已知的多种方式测量和/或表达，包含但不限于平衡解离常数(K_D)和平衡缔合常数(K_A)。K_D由k_off/k_on的商计算并且表示为摩尔浓度(M)，而K_A由k_on/k_off的商计算。k_on是指例如抗体与抗原的结合速率常数，并且k_off是指例如抗体与抗原的解离。k_on和k_off可以通过本领域普通技术人员已知的技术来确定，例如免疫测定(例如酶联免疫吸附测定(ELISA))、

或动力学排除测定

如本文所用，术语“特异性结合”、“特异性识别”、“特异的结合”、“选择的结合”和“选择性结合”是抗体上下文中的类似术语，并且是指结合抗原(例如表位或免疫复合物)的分子(例如抗体)，此类结合是本领域技术人员所理解的。例如，特异性结合抗原的分子可以通过较低的亲和力结合其它肽或多肽，如通过例如免疫测定、

3000仪器(Sapidyne Instruments,Boise,ID)或本领域已知的其它测定所确定的。在一个具体实施例中，特异性结合抗原的分子结合抗原的K_A至少是2log、2.5log、3log、4log或大于该分子结合另一抗原时的K_A。

抗体典型地以高亲和力特异性结合其同源抗原，这通过10^-5至10^-11M或更低的解离常数(K_D)反映。任何K_D大于约10^-4M一般被认为是表明非特异性结合。如本文所用，“特异性结合”抗原的抗体是指以高亲和力结合抗原和基本上相同的抗原的抗体，意指当通过例如免疫测定(例如ELISA)或表面等离子体共振(SPR)技术在BIACORE^TM2000仪器中使用预定抗原测定时，具有10^-7M或更低，优选10^-8M或更低，甚至更优选10^-9M或更低，并且最优选10^-8M至10^-10M或更低的K_D，但不以高亲和力结合无关抗原。

如本文所用，术语“抗原”是指任何天然或合成的免疫原性物质，例如蛋白、肽或半抗原。抗原可以是FAM19A5或其片段。

如本文所用，“表位”是本领域的术语，并且是指抗体可特异性结合的抗原的局部区域。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或连续表位)，或者表位可以例如来自一个或多个多肽的两个或更多个非连续区域(构象、非线性、不连续或非连续表位)。由连续氨基酸形成的表位典型但不总是在暴露于变性溶剂时保留，而由三级折叠形成的表位典型地在用变性溶剂处理时丢失。表位典型包含独特空间构象中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或20个氨基酸。用于确定哪些表位被给定抗体结合的方法(即表位作图)是本领域熟知的，并且包含例如免疫印迹和免疫沉淀测定，其中测试来自(例如来自FMAM19A5)的重叠或连续肽与给定抗体(例如抗FAM19A5抗体)的反应性。测定表位空间构象的方法包含本领域技术和本文所述的那些，例如，x-射线晶体学、2-维核磁共振和HDX-MS(参见，例如，《分子生物学方法中的表位作图方案(Epitope Mapping Protocols in Methods inMolecular Biology)》，Vol.66,G.E.Morris,Ed.(1996))。

在某些实施例中，抗体结合的表位可以通过例如NMR光谱、X射线衍射晶体学研究、ELISA测定、与质谱(例如液相色谱电喷雾质谱)偶联的氢/氘交换、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如定点诱变作图)来测定。对于X射线晶体学，结晶可以使用本领域已知的任何方法完成(例如Giege R等人，(1994)《晶体学报D卷：生物晶体学(ActaCrystallogr D Biol Crystallogr)》50(Pt 4):339-350；McPherson A(1990)《欧洲生物化学杂志(Eur J Biochem)》189:1-23；Chayen NE(1997)《结构(Structure)》5:1269-1274；McPherson A(1976)《生物化学杂志(J Biol Chem)》251:6300-6303)。抗体：抗原晶体可以使用熟知的X射线衍射技术研究，并且可以使用计算机软件如X-PLOR精制(YaleUniversity,1992,由Molecular Simulations,Inc.发布；参见例如《酶学方法(MethEnzymol)》(1985)，第114卷和第115卷，Wyckoff HW等人编辑；U.S.2004/0014194)和BUSTER(Bricogne G(1993)《晶体学报D卷：生物晶体学(Acta Crystallogr D BiolCrystallogr)》49(Pt 1):37-60；Bricogne G(1997)《酶学方法(Meth Enzymol)》276A:361-423,ed Carter CW；Roversi P等人，(2000)《晶体学报D卷：生物晶体学(Acta CrystallogrD Biol Crystallogr)》56(Pt 10):1316-1323)。诱变作图研究可以使用本领域技术人员已知的任何方法完成。参见，例如，Champe M等人，(1995)《生物化学杂志(J Biol Chem)》270:1388-1394和Cunningham BC和Wells JA(1989)《科学(Science)》244:1081-1085描述了诱变技术，包含丙氨酸扫描诱变技术。

术语“表位作图”是指鉴定用于抗体-抗原识别的分子决定簇的过程。

关于两种或更多种抗体的术语“结合相同表位”是指抗体结合相同的氨基酸残基区段，如通过给定方法所测定的。用于确定抗体是否与本文所述抗体“FAM19A5上相同表位”结合的技术包含例如表位作图方法，例如，抗原：抗体复合物的晶体的x-射线分析，其提供了表位的原子分辨率和氢/氘交换质谱(HDX-MS)。其它方法监测抗体与抗原片段或抗原的突变变体的结合，其中由于抗原序列内的氨基酸残基的修饰而导致的结合丧失通常被认为是表位组分的指示。此外，也可以使用用于表位作图的计算组合方法。这些方法依赖于相关抗体从组合噬菌体展示肽文库亲和分离特异性短肽的能力。具有相同VH和VL或相同CDR1、2和3序列的抗体预期结合相同表位。

“与另一抗体竞争结合靶标”的抗体是指(部分或完全)抑制另一抗体与靶标结合的抗体。可以使用已知的竞争实验来确定两种抗体是否彼此竞争结合靶标，即一种抗体是否抑制另一种抗体与靶标的结合以及抑制程度。在某些实施例中，抗体与另一种抗体竞争与靶标的结合并抑制另一种抗体与靶标的结合至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。抑制或竞争的水平可以不同，这取决于哪种抗体是“封闭抗体”(即，首先与靶标一起孵育的冷抗体)。竞争测定可如例如Ed Harlow和David Lane，《冷泉港方案(Cold Spring Harb Protoc)》；2006；doi:10.1101/pdb.prot4277或Ed Harlow和David Lane“《使用抗体(Using Antibodies)》”(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,USA 1999)的第11章中所述进行。竞争性抗体结合相同表位、重叠表位或相邻表位(例如，如通过位阻所证明的)。

其它竞争性结合测定包含：固相直接或间接放射性免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli等人，《酶学方法(Methods inEnzymology)》9:242(1983))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见Kirkland等人，《免疫学杂志(J.Immunol.)》137:3614(1986))；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow和Lane，《抗体：实验室手册(Antibodies：A Laboratory Manual)》，Cold SpringHarbor Press(1988))；使用1-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel等人，《分子免疫学(Mol.Immunol.)》25(1):7(1988))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人，《病毒学(Virology)》176:546(1990))；和直接标记的RIA(Moldenhauer等人，《斯堪的纳维亚免疫学杂志(Scand.J.Immunol.)》32:77(1990))。

“双特异性”或“双功能抗体”是具有两个不同的重链/轻链对和两个不同的结合位点的人工杂交抗体。双特异性抗体可通过多种方法产生，包含融合杂交瘤或连接Fab'片段。参见，例如Songsivilai和Lachmann，《临床与实验免疫学(Clin.Exp.Immunol.)》79:315-321(1990)；Kostelny等人，《免疫学杂志(J.Immunol.)》148,1547-1553(1992)。

如本文所用，术语“单克隆抗体”是指对特定表位显示单一结合特异性和亲和力的抗体或其中所有抗体对特定表位显示单一结合特异性和亲和力的抗体组合物。因此，术语“人单克隆抗体”是指显示单一结合特异性并且具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变和任选恒定区的抗体或抗体组合物。在一个实施例中，人单克隆抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤包含B细胞，所述B细胞得自转基因非人动物，例如转基因小鼠，其基因组包括与永生化细胞融合的人重链转基因和轻链转基因。

如本文所用，术语“重组人抗体”包含通过重组方法制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如(a)从对人免疫球蛋白基因转基因或转染色体的动物(例如小鼠)或从其制备的杂交瘤分离的抗体，(b)从转化以表达抗体的宿主细胞，例如从转染瘤分离的抗体，(c)从重组、组合人抗体文库分离的抗体，和(d)通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其它DNA序列的任何其它方法制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体包括利用由种系基因编码的特定人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区，但包含例如在抗体成熟期间发生的后续重排和突变。如本领域已知的(参见，例如，Lonberg(2005)《自然生物技术(NatureBiotech.)》23(9):1117-1125)，可变区含有抗原结合结构域，其由重排以形成对外源抗原具有特异性的抗体的各种基因编码。除了重排之外，可变区还可以通过多个单个氨基酸改变(称为体细胞突变或超突变)来进一步修饰，以增加抗体对外源抗原的亲和力。恒定区将在对抗原的进一步应答中改变(即同种型转换)。因此，响应于抗原而编码轻链和重链免疫球蛋白多肽的重排和体细胞突变的核酸分子不能与原始核酸分子具有序列同一性，而是将基本上相同或相似(即，具有至少80％的同一性)。

“人”抗体(HuMAb)指具有可变区的抗体，其中框架区和CDR区都源自人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也源自人种系免疫球蛋白序列。本文所述的抗体可以包含不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包含其中源自另一哺乳动物物种如小鼠的种系的CDR序列已被移植到人框架序列上的抗体。术语“人”抗体和“全人”抗体同义使用。

“人源化”抗体指非人抗体CDR结构域之外的一些、大部分或全部氨基酸被源自人免疫球蛋白的相应氨基酸代替的抗体。在抗体的人源化形式的一个实施例中，CDR结构域之外的一些、大部分或所有氨基酸已被来自人免疫球蛋白的氨基酸置换，而一个或多个CDR区内的一些、大部分或所有氨基酸未改变。氨基酸的小添加、缺失、插入、取代或修饰是允许的，只要它们不消除抗体结合特定抗原的能力。“人源化”抗体保留了与原始抗体相似的抗原特异性。

“嵌合抗体”是指可变区源自一个物种而恒定区源自另一个物种的抗体，例如其中可变区源自小鼠抗体而恒定区源自人抗体的抗体。

如本文所用，术语“交叉反应性”是指本文所述抗体结合来自不同物种的FAM19A5的能力。例如，本文所述结合人FAM19A5的抗体也可结合另一物种FAM19A5(例如小鼠FAM19A5)。如本文所用，交叉反应性可通过在结合测定(例如SPR、ELISA)中检测与纯化抗原的特异反应性或与生理学表达FAM19A5的细胞结合或以其他方式与其功能相互作用来测量。测定交叉反应性的方法包含本文所述的标准结合测定，例如，通过使用

2000SPR仪器(Biacore AB,Uppsala,Sweden)的

表面等离子体共振(SPR)分析，或流式细胞术技术。

术语“天然存在的”在应用于本文的物体时是指物体可以在自然界中发现的事实。例如，存在于生物体(包含病毒)中的多肽或多核苷酸序列是天然存在的，所述生物体可以从天然来源分离并且在实验室中没有被人有意修饰。

“多肽”是指包括至少两个连续连接的氨基酸残基的链，链的长度没有上限。蛋白中的一个或多个氨基酸残基可以含有修饰，例如但不限于糖基化、磷酸化或二硫键形成。“蛋白”可以包括一种或多种多肽。

如本文所用，术语“核酸分子”旨在包含DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，并且可以是cDNA。

“保守氨基酸取代”指用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基。具有相似侧链的氨基酸残基的家族在本领域中已经定义。这些家族包含具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。在某些实施例中，抗TIM3抗体中预测的非必需氨基酸残基被来自相同侧链家族的另一氨基酸残基替代。鉴定核苷酸和不消除抗原结合的氨基酸保守性替代的方法是本领域熟知的(参见例如Brummell等人，《生物化学(Biochem.)》32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人，《蛋白质工程化(Protein Eng.)》12(10):879-884(1999)；和Burks等人，《美国科学学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》94:412-417(1997))。

对于核酸，术语“基本同源性”是指当最佳比对和比较时，在具有适当的核苷酸插入或缺失的情况下，两个核酸或其指定序列在至少约80％的核苷酸、至少约90％至95％或至少约98％至99.5％的核苷酸上是相同的。或者，当片段在选择性杂交条件下与链的互补序列杂交时，存在基本同源性。

对于多肽，术语“基本同源性”是指当最佳比对和比较时，在具有适当氨基酸插入或缺失的情况下，两个多肽或其指定序列在至少约80％的氨基酸、至少约90％至95％或至少约98％至99.5％的氨基酸上是相同的。

两个序列之间的同一性百分比是序列共享的相同位置的数目的函数(即，％同源性＝相同位置数/总位置数x100)，考虑到空位的数目和每个空位的长度，需要引入所述空位以用于两个序列的最佳比对。序列的比较和两个序列之间同一性百分比的确定可以使用数学算法来完成，如以下非限制性实例中所述。

两个核苷酸序列之间的同一性百分比可以使用GCG软件包(可从worldwideweb.gcg.com获得)中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵，40、50、60、70或80的空位权重，1、2、3、4、5或6的长度权重来确定。两个核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比也可使用已被纳入ALIGN程序(2.0版)的E.Meyers和W.Miller(CABIOS,4:11-17(1989))的算法，使用PAM120权重残基表，12的空位长度罚分，和4的空位罚分来确定。此外，两个氨基酸序列之间的同一性百分比可使用已纳入GCG软件包(可从http://www.gcg.com获得)中的GAP程序的Needleman和Wunsch(《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》(48):444-453(1970))算法，使用Blossum62矩阵或PAM250矩阵，16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重来确定。

本文所述的核酸和蛋白质序列可进一步用作“查询序列”以针对公共数据库进行检索，从而例如鉴定相关序列。这种检索可以使用Altschul等人(1990)《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》215:403-10的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)进行。BLAST核苷酸检索可以用NBLAST程序进行，评分＝100，字长＝12，以获得与本文所述核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白质检索可以用XBLAST程序进行，得分＝50，字长＝3以获得与本文所述蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的空位比对，可以使用Altschul等人，(1997)《核酸研究(Nucleic Acids Res.)》25(17):3389-3402中描述的Gapped BLAST。当利用BLAST和Gapped BLAST程序时，可使用各程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见worldwideweb.ncbi.nlm.nih.gov。

核酸可以以完整细胞、细胞裂解物或部分纯化或基本纯的形式存在。当通过标准技术，包含碱/SDS处理、CsCl显带、柱色谱法、琼脂糖凝胶电泳和本领域熟知的其它技术，与其它细胞组分或其它污染物，例如其它细胞核酸(例如染色体的其它部分)或蛋白质纯化分离时，核酸是“分离的”或“使得基本上纯的”。参见F.Ausubel等人，(ed.)《分子生物学最新方案(Current Protocols in Molecular Biology)》，Greene Publishing and WileyInterscience,New York(1987)。

可以根据标准技术使核酸突变，例如cDNA，以提供基因序列。对于编码序列，这些突变可影响所需的氨基酸序列。特别地，考虑了与天然V、D、J、恒定区、转换和本文所述的其它此类序列基本同源或源自天然V、D、J、恒定区、转换和本文所述的其它此类序列的DNA序列(其中“源自”表示序列与另一序列相同或从另一序列修饰)。

如本文所用，术语“载体”旨在是指能够转运与其连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，其是指环状双链DNA环，其中可以连接另外的DNA区段。另一种类型的载体是病毒载体，其中另外的DNA区段可以连接到病毒基因组中。某些载体能够在它们所导入的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如，非附加型哺乳动物载体)可以在引入宿主细胞后整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与它们可操作地连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“表达载体”)。通常，用于重组DNA技术的表达载体通常是质粒的形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可以互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，还包含其它形式的表达载体，例如病毒载体(例如复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)，其提供等同的功能。

如本文所用，术语“重组宿主细胞”(或简称为“宿主细胞”)旨在是指包括并非天然存在于细胞中的核酸的细胞，并且可以是已经引入重组表达载体的细胞。应当理解，此类术语不仅指特定的受试细胞，还指此类细胞的后代。因为由于突变或环境影响，在随后的世代中可能发生某些修饰，所以此类后代实际上不能与亲本细胞相同，但是仍然包含在如本文所用的术语“宿主细胞”的范围内。

如本文所用，术语“连接”是指两个或更多个分子的缔合。该连接可以是共价或非共价的。连接也可以是遗传的(即重组融合的)。这样的连接可以使用多种本领域公认的技术来实现，例如化学缀合和重组蛋白生产。

如本文所用，术语“治疗有效量”是指药物单独或与另一种治疗剂组合有效“治疗”受试者中的疾病或病症或降低疾病或病症(例如，肝纤维化或肺纤维化)的风险、可能性或发生的量。“治疗有效量”包含对患有与纤维化相关的疾病或病症或处于患有所述与纤维化相关的疾病或病症的风险中的受试者提供一些改善或益处的药物或治疗剂的量。因此，“治疗有效”量是降低疾病的风险、可能性或发生的量，或提供病症或一些减轻、缓和和/或降低至少一种指标(例如，纤维化或纤维组织形成的发作)和/或减少与纤维化相关的疾病或病症的至少一种临床症状的量。

II.治疗纤维化的方法

本文公开了治疗、减轻、控制或抑制有需要的受试者的纤维化的方法，所述方法包括向所述受试者施用抗FAM19A5拮抗剂。纤维化是响应于某些损伤在器官或组织中形成过量的纤维结缔组织。通常，急性伤口正常以有序且有效的方式通过特征在于四个不同阶段(止血、炎症、增殖和重塑)的过程愈合。Diegelmann R.F.等人，《生物科学前沿地标(FrontBiosci)》9:283-289(2004)。然而，当损伤严重或重复时，可能发生伤口愈合过程的失调，其特征是细胞外基质蛋白(ECM)(例如，胶原蛋白、糖蛋白和蛋白聚糖)在损害部位的过度积累。这可导致受损组织中和周围形成大量纤维结缔组织。Wynn T.A.等人，《自然医学(NatMed)》18(7):1028-1040(2012)。这种积累可导致永久性瘢痕形成、器官功能障碍和甚至死亡，如在许多纤维化疾病(例如，慢性肝病、肾病、特发性肺纤维化(IPF)和心力衰竭)中观察到的。

在一些实施例中，拮抗剂是特异性结合FAM19A5蛋白的抗体或其抗原结合部分(“抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分”)、编码抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分的多核苷酸或包括其多核苷酸的载体。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分特异性结合FAM19A5蛋白并减少FAM19A5活性。

在一些实施例中，纤维化是良性的(即，不引起症状)。在其它实施例中，纤维化与病理状态相关，所述病理状态可以是可逆的或不可逆的。在一些实施例中，纤维化选自由肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、骨髓纤维化、胰腺纤维化、皮肤纤维化、心脏纤维化、动脉纤维化、关节纤维化、乳腺纤维化、肌肉纤维化、腹膜后纤维化、甲状腺纤维化、淋巴结纤维化、膀胱纤维化、系统性纤维化和胸膜纤维化组成的群组。在一个实施例中，纤维化是肝纤维化或肺纤维化。在一些实施例中，本文公开的方法减轻、逆转、缓解、改善、抑制或减慢或预防纤维化、与纤维化相关的症状、纤维化的主要原因或其组合。

当肝受损时，该损伤通过Kupffer细胞，也称为星状巨噬细胞和Kupffer-Browicz细胞引起或诱导炎症，以及活化肝星状细胞，其导致肝纤维化和肝硬化。因此，本公开包含减少、预防或治疗有需要的受试者的纤维化的方法，所述方法包括向所述受试者施用FAM19A5拮抗剂。

纤维化可以发生在各种组织或器官中。此类组织或器官的实例包含但不限于肝(肝纤维化)、肺(肺纤维化)、肾(肾纤维化)、骨(骨髓纤维化)、胰腺(胰腺纤维化)、皮肤(皮肤纤维化)、心脏(心脏纤维化)、动脉(动脉纤维化)、关节(关节纤维化)、乳房(乳腺纤维化)、肌肉(肌肉纤维化)、腹膜后区域(腹膜后纤维化)、甲状腺(甲状腺纤维化)、淋巴结(淋巴结纤维化)、膀胱(膀胱纤维化)和肺的内脏胸膜(胸膜纤维化)。如本文所用，术语“纤维化”包含任何和所有类型的纤维化，而不管受影响组织的原因和/或部位。

在一些实施例中，可通过本发明方法治疗的纤维化包含非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。NASH是作为二十一世纪即将来临的公共健康威胁出现的。在解决与NASH相关的潜在复杂代谢功能障碍和肝硬化的临床终点方面存在许多未满足的需求。

纤维化可以由物理损伤(例如创伤或重复应激)、疾病或病症(例如肝炎病毒感染)、暴露于毒性剂(例如酒精)或其组合引起或与其相关。纤维化原因的非限制性实例可以包含：硬皮病、结缔组织疾病、酒精中毒、感染、铁沉积、环境污染物、放疗、化疗、心脏药物、抗炎药、皮肌炎、多肌炎、系统性红斑狼疮、骨关节炎、类风湿性关节炎、结节病和非酒精性脂肪性肝炎。

在一些实施例中，本文公开的方法可以治疗任何等级或阶段的纤维化或纤维化相关疾病或病症。术语“等级”当用于纤维化或纤维化相关疾病或病症的上下文时，是指与特定疾病或病症相关的坏死和炎症(“坏死性炎症”)的严重性。术语“阶段”当用于纤维化或纤维化相关疾病或病症的上下文时，是指瘢痕形成的程度，其中末期导致死亡或器官衰竭(例如，在肝纤维化的情况下的肝硬化)。Goodman Z.D.，《肝病杂志(J Hepatol)》47(4):598-607(2007)。每个等级和/或阶段的精确定义取决于特定的疾病或病症和/或所使用的评分系统(例如Knodell系统、肝炎活性指数的Ishak改进、METAVIR系统、Scheuer系统和Batts-Ludwig系统)。

在一个实施例中，在所述方法中治疗的受试者是非人动物，如大鼠或小鼠。在一个实施例中，在该方法中治疗的受试者是人。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分或其组合物可与一种或多种用于治疗纤维化的另外的药剂(例如，用于特发性肺纤维化的吡非尼酮

或尼达尼布

)组合施用。一种或多种另外的治疗药物的剂量和施用是本领域已知的，例如，如由相应药物的产品标签所指导的。

在某些实施例中，本公开包含预防有需要的受试者的纤维化的方法，所述方法包括向所述受试者施用FAM19A5拮抗剂。可通过向所述受试者预防性施用FAM19A5拮抗剂阻断纤维化形成的发作来预防纤维化。

III.诊断纤维化的方法

目前，可用于诊断纤维化的最可靠的方法是通过组织活检。但是此类方法通常是高度侵入性的，并且具有各种不期望的副作用(例如，在活检部位出血、疼痛和不适)。因此，本文公开了诊断有需要的受试者的纤维化和/或纤维化相关疾病的方法，其包括使抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分与受试者的生物样品接触，并测量样品中FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5蛋白的mRNA水平。在一些实施例中，生物样品中FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5蛋白的mRNA水平是参考样品(例如，未患有纤维化的受试者的样品)中FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5蛋白的mRNA水平的至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍或至少30倍。

结合本公开，申请人已经证明患有纤维化和/或纤维化相关疾病的受试者在外周血和受损组织部位都表达更高水平的FAM19A5。参见实例6至10。因此，本文公开的方法可用于通过测量受试者的FAM19A5表达水平(蛋白质和/或mRNA)来诊断受试者的纤维化和/或纤维化相关疾病，其中与参考水平(例如，没有纤维化和/或纤维化相关疾病的受试者中的FAM19A5水平)相比增加的表达将提示受试者患有纤维化疾病或病症。在一些实施例中，本公开可用于通过测量疑似患有纤维化疾病或病症的受试者的FAM19A5蛋白水平来确认纤维化疾病或病症的存在。在其他实施例中，本公开提供了与另一种用于诊断纤维化和/或纤维化相关的疾病的测定组合的测量受试者的FAM19A5蛋白水平的方法。

在一些实施例中，通过免疫组织化学、Western Blotting、放射免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫扩散、免疫沉淀测定、Ouchterlony免疫扩散方法、火箭免疫电泳、组织免疫染色方法、补体结合测定、FACS或蛋白质芯片测量FAM19A5的蛋白水平。在一个实施例中，通过RT-PCR、实时聚合酶链式反应或Northern Blot测量编码FAM19A5蛋白的mRNA的水平。在一些实施例中，生物样品包括组织、细胞、血液、血清、血浆、唾液、脑脊液、玻璃体内液体或尿液。不受任何理论的约束，在纤维化组织中增加表达的FAM19A5蛋白可渗漏到血清中，在那里可使用上文列出的任何测定测量蛋白质。因此，本公开提供了测量怀疑患有纤维化和/或纤维化相关疾病的受试者血清中FAM19A5蛋白质表达的方法。因此，这种方法比许多目前可用的诊断方法(例如，活检)更方便且侵入性更小。

IV.可用于本公开的FAM19A5拮抗剂

在一个实施例中，可用于本公开的FAM19A5拮抗剂是特异性靶向FAM19A5的反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、dsRNA、适体、PNA(肽核酸)或包含它们的载体。在其他实施例中，FAM19A5拮抗剂是特异性结合FAM19A5蛋白的抗体或其抗原结合部分(“抗-FAM19A5抗体”)、编码抗FAM19A5抗体的多核苷酸或包括其多核苷酸的载体。

可用于本文公开的方法的抗-FAM19A5抗体包含单克隆抗体，其特征在于特定的功能特征或性质。例如，抗体特异性结合人FAM19A5，包含可溶性FAM19A5和膜结合FAM19A5。除了特异性结合可溶性和/或膜结合人FAM19A5之外，本文所述的抗体还(a)以10nM或更低的K_D结合可溶性人FAM19A5；(b)以1nM或更低的K_D结合膜结合的人FAM19A5；或(a)和(b)两者。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以高亲和力特异性结合可溶性人FAM19A5或膜结合人，例如K_D为10^-7M或更低、10^-8M或更低、10^-9M(1nM)或更低、10^-10M(0.1nM)或更低、10^-11M或更低或10^-12M(1pM)或更低，例如10^-12M至10^-7M、10^-11M至10^-7M、10^{- 10}M至10^-7M或10^-9M至10^-7M，例如，10^-12M、5X 10^-12M、10^-11M、5X 10^-11M、10^-10M、5X 10^-10M、10^{- 9}M、5X 10^-9M、10^-8M、5X10^-8M、10^-7M或5X 10^-7M。评价各种物种的抗体对人FAM19A5的结合能力的标准测定是本领域已知的，包含例如ELISA、Western Blot和RIA。合适的测定在实例中详细描述。抗体的结合动力学(例如结合亲和力)也可通过本领域已知的标准测定来评估，例如通过ELISA、

分析或

下文和实例中进一步详细描述了评价抗体对FAM19A5功能性质(例如配体结合)的影响的测定。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以10^-7M或更低、10^-8M(10nM)或更低、10^-9M(1nM)或更低、10^-10M或更低、10^-12M至10^-7M、10^-11M至10^-7M、10^-10M至10^-7M、10^-9M至10^-7M或10^-8M至10^-7M的K_D结合可溶性人FAM19A5，如例如通过ELISA测定的。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以10nM或更低，例如0.1至10nM、0.1至5nM、0.1至1nM、0.5至10nM、0.5至5nM、0.5至1nM、1至10nM、1至5nM或5至10nM的K_D结合可溶性FAM19A5。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以约1pM、2pM、3pM、4pM、5pM、6pM、7pM、8pM、9pM、10pM、20pM、30pM、40pM、50pM、60pM、70pM、80pM、90pM、100pM、200pM、300pM、400pM、500pM、600pM、700pM、800pM或900pM，或约1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM或9nM，或约10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM或90nM的K_D特异性结合可溶性人FAM19A5，如通过ELISA测定的。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以10^-7M或更低、10^-8M(10nM)或更低、10^-9M(1nM)或更低、10^-10M或更低、10^-12M至10^-7M、10^-11M至10^-7M、10^-10M至10^-7M、10^-9M至10^-7M或10^-8M至10^-7M的K_D结合膜结合性人FAM19A5，如例如通过ELISA测定的。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以10nM或更低的K_D，例如0.1至10nM、0.1至5nM、0.1至1nM、0.5至10nM、0.5至5nM、0.5至1nM、1至10nM、1至5nM或5至10nM的K_D特异性地结合膜结合性人FAM19A5，如通过ELISA测定的。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以约1pM、2pM、3pM、4pM、5pM、6pM、7pM、8pM、9pM、10pM、20pM、30pM、40pM、50pM、60pM、70pM、80pM、90pM、100pM、200pM、300pM、400pM、500pM、600pM、700pM、800pM或900pM或约1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM或9nM或约10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM或90nM的KD结合膜结合性人FAM19A5，如通过ELISA测定的。

在某些实施例中，可用于本文公开的方法的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分与本文公开的包括CDR或可变区的抗FAM19A5抗体交叉竞争结合人FAM19A5表位(或抑制其结合)。

在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分抑制包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体的结合，(i)其中所述参考抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13的氨基酸序列，并且所述参考抗体的轻链CDR1、CDR2和CDR3包括SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：25的氨基酸序列；(ii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ IDNO：15的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(iii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ IDNO：18的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；(iv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ IDNO：21的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列；(v)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：89的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ IDNO：90的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：91的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：92的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：93的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：94的氨基酸序列；(vi)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：95的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ IDNO：96的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：97的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：98的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：99的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：100的氨基酸序列；(vii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：101的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQID NO：102的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：103的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQID NO：104的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：105的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQID NO：106的氨基酸序列；(viii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：107的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：108的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：109的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：110的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：111的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：112的氨基酸序列；(ix)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：113的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：114的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：115的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：116的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：117的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：118的氨基酸序列；(x)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：119的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：120的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：121的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：122的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：123的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：124的氨基酸序列；(xi)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：125的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：126的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：127的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：128的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：129的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：130的氨基酸序列；(xii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：131的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：132的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：133的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：134的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：135的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：136的氨基酸序列；(xiii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：137的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：138的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：139的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：140的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：141的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：142的氨基酸序列；(xiv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：143的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：144的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：145的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：146的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：147的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：148的氨基酸序列；或(xv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：149的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ IDNO：150的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：151的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ IDNO：152的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：153的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ IDNO：154的氨基酸序列。

在一些实施例中，所述参考抗体包括(a)分别包括SEQ ID NO：35和39的重链和轻链可变区序列；(b)分别包括SEQ ID NO：36和40的重链和轻链可变区序列；(c)分别包括SEQID NO：37和41的重链和轻链可变区序列；(d)分别包括SEQ ID NO：38和42的重链和轻链可变区序列；(e)分别包括SEQ ID NO：155和166的重链和轻链可变区序列；(f)分别包括SEQID NO：156和167的重链和轻链可变区序列；(g)分别包括SEQ ID NO：157和168的重链和轻链可变区序列；(h)分别包括SEQ ID NO：158和169的重链和轻链可变区序列；(i)分别包括SEQ ID NO：159和170的重链和轻链可变区序列；(j)分别包括SEQ ID NO：160和171的重链和轻链可变区序列；(k)分别包括SEQ ID NO：161和172的重链和轻链可变区序列；(l)分别包括SEQ ID NO：162和173的重链和轻链可变区序列；(m)分别包括SEQ ID NO：163和174的重链和轻链可变区序列；(n)分别包括SEQ ID NO：164和175的重链和轻链可变区序列；或(o)分别包括SEQ ID NO：165和176的重链和轻链可变区序列。

在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分抑制此类参考抗体与人FAM19A5的结合至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％或100％。竞争性抗体结合相同表位、重叠表位或相邻表位(例如，如通过位阻所证明的)。两种抗体是否彼此竞争结合靶标可以使用本领域已知的竞争实验例如RIA和EIA来确定。

在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分与本文公开的包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体结合相同的FAM19A5表位，(i)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列；(ii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(iii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：18的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；(iv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列；(v)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：89的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：90的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：91的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：92的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：93的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：94的氨基酸序列；(vi)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：95的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：96的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：97的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：98的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：99的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：100的氨基酸序列；(vii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：101的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：102的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：103的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：104的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：105的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：106的氨基酸序列；(viii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：107的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ IDNO：108的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：109的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ IDNO：110的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：111的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ IDNO：112的氨基酸序列；(ix)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：113的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：114的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：115的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：116的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：117的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：118的氨基酸序列；(x)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：119的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：120的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：121的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：122的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：123的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：124的氨基酸序列；(xi)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：125的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：126的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：127的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：128的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：129的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：130的氨基酸序列；(xii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：131的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：132的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：133的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：134的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：135的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：136的氨基酸序列；(xiii)其中重链CDR1包括SEQ IDNO：137的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：138的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ IDNO：139的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：140的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ IDNO：141的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：142的氨基酸序列；(xiv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：143的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：144的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：145的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：146的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：147的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：148的氨基酸序列；或(xv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：149的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：150的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：151的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：152的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：153的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO：154的氨基酸序列。

在一些实施例中，所述参照抗体包括(a)分别包括SEQ ID NO：35和39的重链和轻链可变区序列；(b)分别包括SEQ ID NO：36和40的重链和轻链可变区序列；(c)分别包括SEQID NO：37和41的重链和轻链可变区序列；(d)分别包括SEQ ID NO：38和42的重链和轻链可变区序列；(e)分别包括SEQ ID NO：155和166的重链和轻链可变区序列；(f)分别包括SEQID NO：156和167的重链和轻链可变区序列；(g)分别包括SEQ ID NO：157和168的重链和轻链可变区序列；(h)分别包括SEQ ID NO：158和169的重链和轻链可变区序列；(i)分别包括SEQ ID NO：159和170的重链和轻链可变区序列；(j)分别包括SEQ ID NO：160和171的重链和轻链可变区序列；(k)分别包括SEQ ID NO：161和172的重链和轻链可变区序列；(l)分别包括SEQ ID NO：162和173的重链和轻链可变区序列；(m)分别包括SEQ ID NO：163和174的重链和轻链可变区序列；(n)分别包括SEQ ID NO：164和175的重链和轻链可变区序列；或(o)分别包括SEQ ID NO：165和176的重链和轻链可变区序列。

用于确定两种抗体是否结合相同表位的技术包含，例如，表位作图方法(例如，抗原：抗体复合物的晶体的x-射线分析，其提供表位的原子分辨率和氢/氘交换质谱(HDX-MS))、监测抗体与抗原片段或抗原的突变变体的结合的方法(其中由于抗原序列内的氨基酸残基的修饰而导致的结合的丧失通常被认为是表位组分的指示)及用于表位作图的计算组合方法。

可用于本文公开的方法的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分可结合成熟人FAM19A5的至少一个表位，如例如通过抗体与人FAM19A5的片段结合所确定的。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合位于TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：2的氨基酸残基42至61)的氨基酸序列内的片段，例如具有SEQ ID NO：6的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的表位。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸残基46至51(即DSSQPR)的一个或多个氨基酸，例如氨基酸残基46、50和52(即D---P-R)，例如氨基酸残基46、47、48和50(即DSS-P)处结合SEQ ID NO：6。在一些实施例中，抗FAM19A5或其抗原结合部分结合位于CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：2的氨基酸90至109)的氨基酸序列内的片段，例如具有SEQ ID NO：9的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的表位。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分在一个或多个氨基酸残基99至107(即EGCDLLINR)处结合SEQ ID NO：9，例如SEQ ID NO：4的氨基酸残基102、103、105和107(即DL-I-R)，例如氨基酸残基99、100、102、103、105和107(即EG-DL-I-R)，例如氨基酸残基99、100和107(即EG------R)。

在一些实施例中，所述至少一个表位具有与SEQ ID NO：6至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在一些实施例中，所述至少一个表位具有与SEQ ID NO：9至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分仅结合为SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的人FAM19A5表位，或位于SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的氨基酸序列内的片段，例如具有SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的表位。

在一些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以其天然构象(即未变性)结合SEQ ID NO：6或其片段。在一些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以其天然构象(即未变性)结合SEQ ID NO：9或其片段。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合糖基化和未糖基化的人FAM19A5二者。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分还结合一个或多个另外的FAM19A5表位。因此，某些抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合SEQ ID NO：6的表位和另外的表位或SEQ ID NO：9的表位和另外的表位。其它抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分可结合SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9的表位和另外的表位。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合SEQ ID NO：6的表位、SEQ ID NO：10的表位和另外的表位。在一些实施例中，所述一个或多个另外的FAM19A5表位选自QLAAGTCEIVTLDR(SEQ ID NO：5，表位F1)、TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO：6，表位F2)、TARCACRKGQIAGTTRARPA(SEQ ID NO：7，表位F3)、ARPACVDARIIKTKQWCDML(SEQ ID NO：8，表位F4)、CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ IDNO：9，表位F5)或NRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO：10，表位F6)或位于SEQ ID NO：5、SEQID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或其任何组合的氨基酸序列内的片段。位于SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列内的片段，包含具有SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6和SEQ IDNO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10中任一个的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的片段。在一些实施例中，所述一个或多个另外的FAM19A5表位选自SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10，或位于SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的氨基酸序列内的片段，例如，具有SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10或其任何组合的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的片段。在一些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合处于其天然构象(即未变性)的一个或多个另外表位中的任一个。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合糖基化和非糖基化的一个或多个另外的FAM19A5表位二者。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合鉴定为EP2、EP4和/或EP8的至少一个FAM19A5表位，其中EP2包括氨基酸DSSFP(SEQ ID NO：66)、基本上由其组成或由其组成，其中EP4包括氨基酸ARCACRK(SEQ ID NO：68)、基本上由其组成或由其组成，且其中EP8包括氨基酸TCTQPGGR(SEQ ID NO：72)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施例中，所述至少一个表位具有与EP2、EP4或EP8至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分仅结合EP2。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合EP4和EP8。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合鉴定为EP6、EP7或EP8的至少一个FAM19A5表位，其中EP6包括氨基酸KTKQWCDML(SEQ ID NO：70)，其中EP7包括氨基酸GCDLLINR(SEQ ID NO：71)，并且其中EP8包括氨基酸TCTQPGGR(SEQ ID NO：72)。在一些实施例中，所述至少一个表位具有与EP6、EP7或EP8至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分仅结合EP6、EP7或EP8。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合EP6、EP7和EP8。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合EP7和EP8。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合EP7。

在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合一个或多个FAM19A5表位，所述表位选自由SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ IDNO：69、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72及其任何组合组成的群组。

在某些实施例中，本文提供了以高于FAM19A家族中另一蛋白的亲和力20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高的亲和力结合FAM19A5(例如人FAM19A5)的抗体或其抗原结合部分，所述亲和力通过例如免疫测定(例如ELISA)、表面等离子体共振或动力学排除测定来测量。在一个具体实施例中，本文提供了结合FAM19A5(例如人FAM19A5)且与FAM19A家族中另一蛋白无交叉反应性的抗体或其抗原结合部分，如通过例如免疫测定所测量。

在某些实施例中，抗FAM19A5抗体不是天然抗体或不是天然存在的抗体。例如，抗FAM19A5抗体例如通过具有更多、更少或不同类型的翻译后修饰而具有与天然存在的抗体不同的翻译后修饰。

V.示例性抗FAM19A5抗体

可用于本文公开的方法的特定抗体是具有本文公开的CDR和/或可变区序列的抗体，例如单克隆抗体，以及与其可变区或CDR序列具有至少80％同一性(例如至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性)的抗体。本公开的不同抗FAM19A5抗体的VH和VL氨基酸序列分别提供于表4和5中。

表2可变重链CDR氨基酸序列(根据Kabat系统)

表3可变轻链CDR氨基酸序列(根据Kabat系统)

表4：可变重链氨基酸序列

表5：可变轻链氨基酸序列

因此，本文提供了分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分，其包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：35-38或155-165的氨基酸序列。在其它实施例中，分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括选自由SEQ ID NO：35-38或155-165组成的群组的重链可变区的CDR。

还提供了分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分，其包括重链可变区和轻链可变区，其中轻链可变区包括SEQ ID NO：39-42或166-176的氨基酸序列。在其它实施例中，分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括选自由SEQ ID NO：39-42或166-176组成的群组的轻链可变区的CDR。

在某些实施例中，分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括选自由SEQ IDNO：35-38或155-165组成的群组的重链可变区的CDR，以及选自由SEQ ID NO：39-42或166-176组成的群组的轻链可变区的CDR。

还提供了分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分，其包括重链可变区和轻链可变区，(i)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：35的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：39的氨基酸序列；(ii)其中重链可变区包括SEQ ID NO：36的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：40的氨基酸序列；(iii)其中所述重链可变区包括SEQID NO：37的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：41的氨基酸序列；(iv)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：38的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQID NO：42的氨基酸序列；(v)其中重链可变区包括SEQ ID NO：155的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：166的氨基酸序列；(vi)其中重链可变区包括SEQ ID NO：156的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：167的氨基酸序列；(vii)其中重链可变区包括SEQ ID NO：157的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：168的氨基酸序列；(viii)其中重链可变区包括SEQ ID NO：158的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：169的氨基酸序列；(ix)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：159的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：170的氨基酸序列；(x)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：160的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：171的氨基酸序列；(xi)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：161的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：172的氨基酸序列；(xii)其中重链可变区包括SEQ ID NO：162的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：173的氨基酸序列；(xiii)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：163的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：174的氨基酸序列；(xiv)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：164的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：175的氨基酸序列；和(xv)其中重链可变区包括SEQ ID NO：165的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：176的氨基酸序列。

本文提供了分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分，其包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与如SEQ ID NO：35-38或155-165所列的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

本文还提供了分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分，其包括重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39-42或166-176所列的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

还提供了分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分，其包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：35-38或155-165所列的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39-42或166-176所列的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在一些实施例中，本公开提供分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分，其包括：

(a)分别包括SEQ ID NO：35和39的重链和轻链可变区序列；

(b)分别包括SEQ ID NO：36和40的重链和轻链可变区序列；

(c)分别包括SEQ ID NO：37和41的重链和轻链可变区序列；

(d)分别包括SEQ ID NO：38和42的重链和轻链可变区序列；

(e)分别包括SEQ ID NO：155和166的重链和轻链可变区序列；

(f)分别包括SEQ ID NO：156和167的重链和轻链可变区序列；

(g)分别包括SEQ ID NO：157和168的重链和轻链可变区序列；

(h)分别包括SEQ ID NO：158和169的重链和轻链可变区序列；

(i)分别包括SEQ ID NO：159和170的重链和轻链可变区序列；

(j)分别包括SEQ ID NO：160和171的重链和轻链可变区序列；

(k)分别包括SEQ ID NO：161和172的重链和轻链可变区序列；

(l)分别包括SEQ ID NO：162和173的重链和轻链可变区序列；

(m)分别包括SEQ ID NO：163和174的重链和轻链可变区序列；

(n)分别包括SEQ ID NO：164和175的重链和轻链可变区序列；或

(o)分别包括SEQ ID NO：165和176的重链和轻链可变区序列。

在某些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括(i)2-13的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或2-13的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(ii)3-2的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或3-2的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(iii)1-65的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或1-65的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(iv)1-28的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或1-28的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(v)P2-C12的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P2-C12的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(vi)13B4的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或13B4的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(vii)13F7的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或13F7的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(viii)15A9的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或15A9的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(ix)P1-A03的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P1-A03的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(x)P1-A08的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P1-A08的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xi)P1-F02的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P1-F02的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xii)P2-A01的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P2-A01的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xiii)P2-A03的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P2-A03的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xiv)P2-F07的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P2-F07的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；或(xv)P2-F11的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或F2-F11的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合。表2中提供了本文公开的不同抗FAM19A5抗体的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列。表3中提供了本文公开的不同抗FAM19A5抗体的VL CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列。

2-13的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别列于SEQ ID NO：11、12和13。2-13的VL CDR1、CDR2s和CDR3的氨基酸序列分别列于SEQ ID NO：23、24和25。3-2的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别列于SEQ ID NO：14、15和16。3-2的VL CDR1、CDR2s和CDR3的氨基酸序列分别列于SEQ ID NO：26、27和28。1-65的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别列于SEQ ID NO：17、18和19。1-65的VL CDR1、CDR2s和CDR3的氨基酸序列分别列于SEQ IDNO：29、30和31。1-28的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别列于SEQ ID NO：20、21和22。1-28的VL CDR1、CDR2s和CDR3的氨基酸序列分别列于SEQ ID NO：32、33和34。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VH CDR1；和/或

(b)包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VH CDR2；和/或

(c)包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列的VH CDR3。

在具体实施例中，抗体或其抗原结合部分包括一个、两个或所有三个上述VH CDR。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列的VL CDR1；和/或

(b)包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列的VL CDR2；和/或

(c)包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列的VL CDR3。

在具体的实施例中，抗体或其抗原结合部分包括一个、两个或所有三个上述VLCDR。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VH CDR1；

(b)包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VH CDR2；

(c)包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列的VH CDR3；

(d)包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列的VL CDR1；

(e)包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列的VL CDR2；和/或

(f)包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列的VL CDR3。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列的VH CDR1；和/或

(b)包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列的VH CDR2；和/或

(c)包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH CDR3。

在具体实施例中，抗体或其抗原结合部分包括一个、两个或所有三个上述VH CDR。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列的VL CDR1；和/或

(b)包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列的VL CDR2；和/或

(c)包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列的VL CDR3。

在具体的实施例中，抗体或其抗原结合部分包括一个、两个或所有三个上述VLCDR。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列的VH CDR1；

(b)包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列的VH CDR2；

(c)包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH CDR3；

(d)包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列的VL CDR1；

(e)包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列的VL CDR2；和/或

(f)包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列的VL CDR3。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列的VH CDR1；和/或

(b)包括SEQ ID NO：18的氨基酸序列的VH CDR2；和/或

(c)包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列的VH CDR3。

在具体实施例中，抗体或其抗原结合部分包括一个、两个或所有三个上述VHCDR。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列的VL CDR1；和/或

(b)包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列的VL CDR2；和/或

(c)包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列的VL CDR3。

在具体的实施例中，抗体或其抗原结合部分包括一个、两个或所有三个上述VLCDR。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列的VH CDR1；

(b)包括SEQ ID NO：18的氨基酸序列的VH CDR2；

(c)包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列的VH CDR3；

(d)包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列的VL CDR1；

(e)包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列的VL CDR2；和/或

(f)包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列的VL CDR3。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VH CDR1；和/或

(b)包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VH CDR2；和/或

(c)包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列的VH CDR3。

在具体实施例中，抗体或其抗原结合部分包括一个、两个或所有三个上述VH CDR。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列的VL CDR1；和/或

(b)包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列的VL CDR2；和/或

(c)包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列的VL CDR3。

在具体的实施例中，抗体或其抗原结合部分包括一个、两个或所有三个上述VLCDR。

在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括：

(a)包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VH CDR1；

(b)包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VH CDR2；

(c)包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列的VH CDR3；

(d)包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列的VL CDR1；

(e)包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列的VL CDR2；和/或

(f)包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列的VL CDR3。

在具体实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括上述CDR中的一个、两个、三个、四个、五个或六个。

本文所述的VH结构域或其一个或多个CDR可与恒定结构域连接以形成重链，例如全长重链。类似地，本文所述的VL结构域或其一个或多个CDR可以与恒定结构域连接以形成轻链，例如全长轻链。全长重链和全长轻链组合形成全长抗体。

因此，在具体实施例中，本文提供了包括抗体轻链和重链，例如单独的轻链和重链的抗体。关于轻链，在一个具体实施例中，本文所述抗体的轻链是κ轻链。在另一个具体实施例中，本文所述抗体的轻链是λ轻链。在又一个具体实施例中，本文所述抗体的轻链是人κ轻链或人λ轻链。在一个特定实施例中，特异性结合FAM19A5多肽(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括轻链，所述轻链包括本文所述的任何VL或VL CDR氨基酸序列，且其中所述轻链的恒定区包括人κ轻链恒定区的氨基酸序列。在一个特定实施例中，特异性结合FAM19A5多肽(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括轻链，所述轻链包括本文所述VL或VL CDR氨基酸序列，且其中所述轻链的恒定区包括人λ轻链恒定区的氨基酸序列。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中描述，例如参见美国专利号5,693,780和Kabat EA等人，(1991)同上。

关于重链，在一些实施例中，本文所述抗体的重链可以是α、δ、ε、γ或μ重链。在另一个具体实施例中，所述抗体的重链可包括人α、δ、ε、γ或μ重链。在一个实施例中，特异性结合FAM19A5(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括重链，所述重链包括本文所述的VH或VHCDR氨基酸序列，并且其中所述重链的恒定区包括人γ重链恒定区的氨基酸序列。在另一个实施例中，特异性结合FAM19A5(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括重链，所述重链包括本文公开的VH或VH CDR氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包括本文所述或本领域已知的人重链的氨基酸。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中描述，例如参见美国专利号5,693,780和Kabat EA等人，(1991)同上。

在一些实施例中，特异性结合FAM19A5(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括VL结构域和VH结构域，所述VL结构域和VH结构域包括本文所述的VH或VH CDR以及VL和VL CDR，并且其中恒定区包括IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子或人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列。在另一个具体实施例中，特异性结合FAM19A5(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括VL结构域和VH结构域，所述VL结构域和VH结构域包括本文所述的任何氨基酸序列，并且其中恒定区包括IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)的恒定区的氨基酸序列。在一些实施例中，恒定区包括天然存在的人IgG恒定区的氨基酸序列，包含亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)和同种异型(例如G1m、G2m、G3m和nG4m)及其变体。参见，例如，Vidarsson G.等人，《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)以及Jefferis R.和Lefranc MP，《单克隆抗体(mAbs)》1:4,1-7(2009)。在一些实施例中，恒定区包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的恒定区的氨基酸序列。

在某些实施例中，本文公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分不具有Fc效应子功能，例如补体依赖的细胞毒性(CDC)和/或抗体依赖的细胞吞噬作用(ADCP)。效应子功能由Fc区介导，并且在Fc区的CH2结构域中最接近铰链区的残基负责抗体的效应子功能，因为它含有针对先天免疫系统的效应细胞上的C1q(补体)和IgG-Fc受体(FcγR)的大部分重叠的结合位点。此外，IgG2和IgG4抗体的Fc效应子功能水平比IgG1和IgG3抗体低。抗体的效应子功能可以通过本领域已知的不同方法来降低或避免，包含(1)使用缺乏Fc区的抗体片段(例如，诸如Fab、F(ab')₂、单链Fv(scFv)或由单体VH或VL结构域组成的sdAb)；(2)产生非糖基化抗体，其可以通过例如缺失或改变糖所连接的残基、酶促除去糖、在糖基化抑制剂存在下培养的细胞中产生抗体或通过在不能糖基化蛋白的细胞(例如细菌宿主细胞，参见例如美国公开号20120100140)中表达抗体来产生；(3)使用来自IgG亚类的具有降低的效应子功能的Fc区(例如，来自IgG2或IgG4抗体的Fc区或包括来自IgG2或IgG4抗体的CH2结构域的嵌合Fc区，参见例如美国公开号20120100140和Lau C等人《免疫学杂志(J.Immunol.)》191:4769-4777(2013)；和(4)产生具有导致Fc功能降低或无Fc功能的突变的Fc区。参见例如美国公开号20120100140和其中引用的美国和PCT申请以及An等人《单克隆抗体(mAbs)》1:6,572-579(2009)。

因此，在一些实施例中，本文公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分为Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、单链Fv(scFv)或由单体VH或VL结构域组成的sdAb。此类抗体片段是本领域熟知的，并且如上所述。

在一些实施例中，本文公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括Fc效应子功能降低或无Fc效应子功能的Fc区。在一些实施例中，恒定区包括人IgG2或IgG4Fc区的氨基酸序列，在一些实施例中，抗FAM19A5抗体是IgG2/IgG4同种型。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括嵌合Fc区，其包括来自IgG4同种型的IgG抗体的CH2结构域和来自IgG1同种型的IgG抗体的CH3结构域，或包括来自IgG2的铰链区和来自IgG4的CH2区的嵌合Fc区，或具有导致Fc功能降低或无Fc功能的突变的Fc区。Fc效应子功能降低或无Fc效应子功能的Fc区包含本领域已知的那些。参见例如Lau C等人《免疫学杂志(J.Immunol.)》191:4769-4777(2013)；An等人，《单克隆抗体(mAbs)》1:6,572-579(2009)；和美国公开号20120100140以及其中引用的美国专利和出版物和PCT出版物。本领域普通技术人员也可以容易地制备Fc效应子功能降低或无Fc效应子功能的Fc区。

VI.核酸分子

本文所述的另一个方面涉及编码本文所述的任何一种抗体或其抗原结合部分的一种或多种核酸分子。核酸可以完整细胞、细胞裂解物或部分纯化或基本上纯的形式存在。当通过标准技术，包含碱/SDS处理、CsCl带、柱层析、限制酶、琼脂糖凝胶电泳和本领域熟知的其它技术，与其它细胞组分或其它污染物，例如其它细胞核酸(例如其它染色体DNA，例如与天然分离的DNA连接的染色体DNA)或蛋白纯化分离时，核酸是“分离的”或“使得基本上纯的”。参见，F.Ausubel等人编辑，(1987)《分子生物学最新方案(Current Protocols inMolecular Biology)》，Greene Publishing and Wiley Interscience,New York。本文所述的核酸可以是例如DNA或RNA，并且可以含有或不含有内含子序列。在某些实施例中，核酸是cDNA分子。

本文所述的核酸可以使用标准分子生物学技术获得。对于杂交瘤(例如，由如下进一步描述的携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤)表达的抗体，编码由杂交瘤制备的抗体的轻链和重链的cDNA可以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得。对于从免疫球蛋白基因文库(例如，使用噬菌体展示技术)获得的抗体，可以从文库回收编码抗体的核酸。

本文所述的某些核酸分子是编码本公开的各种抗FAM19A5抗体的VH和VL序列的那些。编码此类抗体的VH序列的示例性DNA序列列于SEQ ID NO：43-46和177。编码此类抗体的VL序列的示例性DNA序列列于SEQ ID NO：47-50和178。

表6：可变重链多核苷酸序列

表7：可变轻链多核苷酸序列

用于制备本文公开的抗FAM19A5抗体的方法可包括在包括编码具有信号肽的重链和轻链的核苷酸序列的细胞系中表达抗体的相关重链和轻链，所述核苷酸序列分别例如SEQ ID NO：43和47，SEQ ID NO：44和48，SEQ ID NO：45和49，SEQID NO：46和50，SEQ ID NO：177和178。包括这些核苷酸序列的宿主细胞包括在本发明内。

一旦获得编码VH和VL区段的DNA片段，这些DNA片段就可以通过标准重组DNA技术进一步操作，例如将可变区基因转化为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，编码VL或VH的DNA片段与编码另一种蛋白的另一种DNA片段如抗体恒定区或柔性接头可操作地连接。如本上下文所用，术语“可操作地连接”旨在指两个DNA片段连接，使得由两个DNA片段编码的氨基酸序列保持在框内。

通过将编码VH的DNA与编码重链恒定区(铰链、CH1、CH2和/或CH3)的另一DNA分子可操作地连接，可以将编码VH区的分离的DNA转化为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见，例如，Kabat E.A.等人，(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》第五版(U.S.Department ofHealth and Human Services)，NIH公开号91-3242)，并且包括这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，例如IgG2和/或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因，编码VH的DNA可与仅编码重链CH1恒定区的另一DNA分子可操作地连接。

通过将编码VL的DNA与编码轻链恒定区CL的另一DNA分子可操作地连接，可以将编码VL区的分离DNA转化为全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见，例如，Kabat E.A.等人(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》第五版(U.S.Department ofHealth and Human Services)，NIH公开号91-3242)，并且包括这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。

为了产生scFv基因，将编码VH和VL的DNA片段与另一个编码柔性接头(例如编码氨基酸序列(Gly4–Ser)3)的片段可操作地连接，以使VH和VL序列可表达为连续的单链蛋白，其中VL和VH区通过柔性接头连接(参见例如Bird等人(1988)《科学(Science)》242:423-426；Huston等人(1988)《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》85:5879-5883；McCafferty等人，(1990)《自然(Nature)》348:552-554)。

在一些实施例中，本公开提供了包括分离的核酸分子的载体，所述分离的核酸分子包括编码抗体或其抗原结合部分的核苷酸序列。在其它实施例中，载体可用于基因治疗。

本公开的合适载体包含表达载体、病毒载体和质粒载体。在一个实施例中，载体是病毒载体。

如本文所用，表达载体是指任何核酸构建体，其含有插入的编码序列的转录和翻译所必需的元件，或在RNA病毒载体的情况下，当引入适当的宿主细胞时，含有复制和翻译所必需的元件。表达载体可以包含质粒、噬菌粒、病毒及其衍生物。

本公开的表达载体可以包含编码本文所述的抗体或其抗原结合部分的多核苷酸。在一个实施例中，抗体或其抗原结合部分的编码序列与表达控制序列可操作地连接。如本文所用，当两个核酸序列以允许每个组成核酸序列保留其功能性的方式共价连接时，它们被称为是可操作地连接的。当编码序列和基因表达控制序列以使得编码序列的表达或转录和/或翻译处于基因表达控制序列的影响或控制之下的方式共价连接时，则称它们是可操作地连接的。如果在5'基因表达序列中诱导启动子导致编码序列的转录，并且如果两个DNA序列之间的连接的性质不(1)导致移码突变的引入，(2)干扰启动子区指导编码序列转录的能力，或(3)干扰相应RNA转录物翻译成蛋白的能力，则称两个DNA序列是可操作地连接的。因此，如果基因表达序列能够影响编码核酸序列的转录，使得所得转录物被翻译成所需抗体或其抗原结合部分，则基因表达序列将可操作地连接至编码核酸序列。

病毒载体包含但不限于来自以下病毒的核酸序列：逆转录病毒，如莫洛尼鼠白血病病毒、哈维鼠肉瘤病毒、鼠乳腺肿瘤病毒和劳斯肉瘤病毒；慢病毒；腺病毒；腺相关病毒；SV40型病毒；多瘤病毒；EB病毒；乳头瘤病毒；疱疹病毒；牛痘病毒；脊髓灰质炎病毒；和RNA病毒如逆转录病毒。可以容易地使用本领域熟知的其它载体。某些病毒载体基于非致细胞病变的真核病毒，其中非必需基因已被目标基因取代。非致细胞病变病毒包含逆转录病毒，其生命周期包括基因组病毒RNA逆转录为DNA，随后前病毒整合到宿主细胞DNA中。逆转录病毒已被批准用于人类基因疗法试验。最有用的是那些复制缺陷型(即能够指导期望蛋白的合成，但不能够制造感染性颗粒)的逆转录病毒。此类遗传改变的逆转录病毒表达载体具有在体内高效转导基因的一般用途。在Kriegler M.，《基因转移和表达，实验室手册(GeneTransfer and Expression,A Laboratory Manual)》，W.H.Freeman Co.,New York(1990)和Murry E.J.，《分子生物学方法(Methods in Molecular Biology)》，Vol.7,HumanaPress,Inc.,Cliffton,N.J.(1991)中提供了用于生产复制缺陷型逆转录病毒的标准方案(包含将外源遗传物质掺入质粒中、用质粒转染包装细胞系、通过包装细胞系生产重组逆转录病毒、从组织培养基中收集病毒颗粒以及用病毒颗粒感染靶细胞的步骤)。

在一个实施例中，病毒是腺相关病毒，是一种双链DNA病毒。腺相关病毒可被工程化为复制缺陷型，并且能够感染广泛的细胞类型和种类。它还具有优点如热和脂质溶剂稳定性；在包含造血细胞在内的不同谱系细胞中的高转导频率；并且缺乏重复感染抑制，因此允许多个系列的转导。据报道，腺相关病毒可以以位点特异性的方式整合到人细胞DNA中，从而使插入突变的可能性和逆转录病毒感染的插入基因表达特征的可变性降到最低。此外，在不存在选择压力的情况下，野生型腺相关病毒感染已经在组织培养中追踪超过100代，这意味着腺相关病毒基因组整合是相对稳定的事件。腺相关病毒也可以染色体外方式起作用。

在其它实施例中，载体源自慢病毒。在某些实施例中，所述载体是能够感染非分裂细胞的重组慢病毒的载体。

慢病毒基因组和前病毒DNA典型具有逆转录病毒中发现的三个基因：gag、pol和env，其侧翼为两个长末端重复(LTR)序列。gag基因编码内部结构(基质、衣壳和核壳)蛋白；pol基因编码RNA指导的DNA聚合酶(逆转录酶)、蛋白酶和整合酶；并且env基因编码病毒包膜糖蛋白。5'和3'LTR用于促进病毒粒子RNA的转录和多腺苷酸化。LTR含有病毒复制所必需的所有其它顺式作用序列。慢病毒具有其它基因，包含vif、vpr、tat、rev、vpu、nef和vpx(在HIV-l、HIV-2和/或SIV中)。

与5'LTR相邻的是基因组逆转录(tRNA引物结合位点)和病毒RNA有效衣壳化成颗粒(psi位点)所必需的序列。如果衣壳化(或逆转录病毒RNA包装到感染性病毒粒子中)所必需的序列从病毒基因组中缺失，则顺式缺陷会阻止基因组RNA的衣壳化。

然而，所得突变体仍然能够指导所有病毒粒子蛋白的合成。本公开提供了一种产生能够感染非分裂细胞的重组慢病毒的方法，包括用两种或更多种携带包装功能的载体转染合适的宿主细胞，即gag、pol和env以及rev和tat。如下文将公开的，缺乏功能性Tat基因的载体对于某些应用是期望的。因此，例如，第一载体可提供编码病毒gag和病毒pol的核酸，而另一载体可提供编码病毒env的核酸，以产生包装细胞。将提供异源基因的载体(本文鉴定为转移载体)引入该包装细胞产生生产细胞，其释放携带目标外源基因的感染性病毒颗粒。

根据载体和外源基因的上述构型，第二载体可提供编码病毒包膜(env)基因的核酸。env基因可以源自几乎任何合适的病毒，包含逆转录病毒。在一些实施例中，env蛋白是双嗜性包膜蛋白，其允许人和其他物种的细胞的转导。

源自逆转录病毒的env基因的实例包含但不限于：莫洛尼鼠白血病病毒(MoMuLV或MMLV)、哈维鼠肉瘤病毒(HaMuSV或HSV)、鼠乳腺肿瘤病毒(MuMTV或MMTV)、长臂猿白血病病毒(GaLV或GALV)、人免疫缺陷病毒(HIV)和劳斯肉瘤病毒(RSV)。也可使用其它env基因，如水泡性口炎病毒(VSV)蛋白G(VSV G)、肝炎病毒和流感病毒的env基因。

提供病毒env核酸序列的载体与本文别处所述的调节序列可操作地连接。

在某些实施例中，所述载体包含慢病毒载体，其中HIV毒力基因env、vif、vpr、vpu和nef缺失，而不损害所述载体转导非分裂细胞的能力。

在一些实施例中，载体包括包含3'LTR的U3区缺失的慢病毒载体。U3区的缺失可以是完全缺失或部分缺失。

在一些实施例中，包括本文所述FVIII核苷酸序列的本公开的慢病毒载体可以在细胞中用(a)包括gag、pol或gag和pol基因的第一核苷酸序列和(b)包括异源env基因的第二核苷酸序列转染；其中所述慢病毒载体缺乏功能性tat基因。在其它实施例中，细胞进一步用包括rev基因的第四核苷酸序列转染。在某些实施例中，慢病毒载体缺乏选自vif、vpr、vpu、vpx和nef或其组合的功能性基因。

在某些实施例中，慢病毒载体包括编码gag蛋白、Rev-响应元件、中央聚嘌呤区域(cPPT)或其任何组合的一种或多种核苷酸序列。

慢病毒载体的实例公开于WO9931251、W09712622、W09817815、W09817816和WO9818934中，其全部内容通过引用并入本文。

其它载体包含质粒载体。质粒载体在本领域中已被广泛描述，并且是本领域技术人员所熟知的。参见，例如，Sambrook等人，《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratory Manual)》第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989。在过去的几年中，已经发现质粒载体对于体内递送基因至细胞是特别有利的，因为它们不能在宿主基因组内复制并整合到宿主基因组中。然而，这些质粒具有与宿主细胞相容的启动子，可以表达来自在质粒内可操作编码的基因的肽。一些通常使用的质粒可从商业供应商处获得，包含pBR322、pUC18、pUC19、各种pcDNA质粒、pRC/CMV、各种pCMV质粒、pSV40和pBlueScript。具体质粒的其它实例包含pcDNA3.1，目录号V79020；pcDNA3.1/hygro，目录号V87020；pcDNA4/myc-His，目录号V86320；和pBudCE4.1，目录号V53220，全部来自Invitrogen(Carlsbad,CA)。其它质粒是本领域普通技术人员熟知的。另外，质粒可以使用标准分子生物学技术定制设计以除去和/或添加DNA的具体片段。

VII.抗体生产

免疫特异性结合至FAM19A5(例如人FAM19A5)的抗体或其片段可通过本领域已知的用于合成抗体的任何方法产生，例如通过化学合成或通过重组表达技术。除非另有说明，否则本文所述的方法采用分子生物学、微生物学、遗传分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡核苷酸合成和修饰、核酸杂交和本领域技术的相关领域中的常规技术。这些技术描述于例如本文引用的参考文献中，并在文献中充分解释。参见，例如，Maniatis T等人，(1982)《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》(ColdSpring Harbor Laboratory Press)；Sambrook J等人，(1989)《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》第二版(Cold Spring Harbor LaboratoryPress)；Sambrook J等人，(2001)《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratory Manual)》，Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Ausubel FM等人，《分子生物学最新方案(Current Protocols in MolecularBiology)》(John Wiley&Sons)(1987和每年的更新版)；《免疫学最新方案(CurrentProtocols in Immunology)》(John Wiley&Sons)(1987和每年的更新版)；Gait(ed.)(1984)《寡核苷酸合成：实用方法(Oligonucleotide Synthesis:A Practical Approach)》(IRL Press)；Eckstein(ed.)(1991)《寡核苷酸和类似物：实用方法(Oligonucleotidesand Analogues:A Practical Approach)》(IRL Press)；Birren B等人，(eds.)(1999)《基因组分析：实验室手册(Genome Analysis:A Laboratory Manual)》(Cold Spring HarborLaboratory Press)。

在一个具体实施例中，本文所述的抗体是通过涉及产生的任何方法，例如通过合成、DNA序列的遗传工程而制备、表达、产生或分离的抗体(例如重组抗体)。在某些实施例中，此类抗体包括在体内在动物或哺乳动物(例如人)的全套抗体种系内不天然存在的序列(例如DNA序列或氨基酸序列)。

VIII.药物组合物

本文还提供了包括在生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(《雷氏药学大全(Remington's Pharmaceutical Sciences)》(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA)中的具有期望纯度的本文所述的抗体或其抗原结合部分(例如，抗-FAM19A5抗体)的组合物。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且包含缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包含抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，如钠；金属复合物(例如，Zn-蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂，如

或聚乙二醇(PEG)。

在一些实施例中，药物组合物包括在药学上可接受的载体中的本文所述的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物，以及任选地一种或多种另外的预防剂或治疗剂。在某些实施例中，药物组合物包括在药学上可接受的载体中的有效量的本文所述的抗体或其抗原结合部分，以及任选地一种或多种另外的预防剂或治疗剂。在一些实施例中，抗体是药物组合物中包含的唯一活性成分。本文所述的药物组合物可用于降低FAM19A5活性，从而治疗纤维化疾病或病况，例如肝纤维化和/或肺纤维化。

用于肠胃外制剂的药学上可接受的载体包含水性媒介物、非水性媒介物、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮剂和分散剂、乳化剂、多价螯合剂或螯合剂和其它药学上可接受的物质。水性媒介物的实例包含氯化钠注射剂、林格注射剂、等渗右旋糖注射剂、无菌水注射剂、右旋糖和乳酸林格注射剂。非水肠胃外媒介物包含植物来源的不挥发油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油。抑制细菌或抑制真菌浓度的抗微生物剂可以加入到包装在多剂量容器中的肠胃外制剂中，所述抗微生物剂包含苯酚或甲酚、汞制剂、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵和苄索氯铵。等渗剂包含氯化钠和右旋糖。缓冲剂包含磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧化剂包含硫酸氢钠。局部麻醉剂包含盐酸普鲁卡因。悬浮剂和分散剂包含羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包含聚山梨醇酯80(

80)。金属离子的多价螯合剂或螯合剂包含EDTA。药物载体还包含用于水混溶性媒介物的乙醇、聚乙二醇和丙二醇；和用于pH调节的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。

药物组合物可以被配制用于向受试者施用的任何途径。施用途径的具体实例包含鼻内、口服、肠胃外、鞘内、脑室内、肺、皮下或心室内。本文还考虑了特征为皮下、肌内或静脉内注射的肠胃外施用。注射剂可以常规形式制备，作为液体溶液或悬浮液、适于在注射前在液体中溶解或悬浮的固体形式或作为乳液。注射剂、溶液和乳液还含有一种或多种赋形剂。合适的赋形剂是例如水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。此外，如果期望，待施用的药物组合物也可以含有少量无毒的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、增溶剂和其它这样的试剂，例如乙酸钠、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯和环糊精。

用于抗体的肠胃外施用的制剂包含准备注射的无菌溶液、准备在临用前与溶剂组合的无菌干燥可溶产品，例如冻干粉末，包含皮下注射片剂、准备注射的无菌悬浮液、准备在临用前与媒介物组合的无菌干燥不溶产品和无菌乳液。溶液可以是水性或非水性的。

如果静脉内施用，合适的载体包含生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)，以及含有增稠剂和增溶剂如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇及其混合物的溶液。

如所述制备包括抗体的局部混合物用于局部和全身施用。所得混合物可以是溶液、悬浮液、乳液等，并且可以配制成乳膏、凝胶、软膏、乳液、溶液、酏剂、洗剂、悬浮液、酊剂、糊剂、泡沫、气雾剂、冲洗剂、喷雾、栓剂、绷带、皮肤贴剂或任何其它适于局部施用的制剂。

本文所述的抗体或其抗原结合部分可以配制成用于局部施用的气雾剂，例如通过吸入(参见，例如，美国专利号4,044,126、4,414,209和4,364,923，其描述了用于递送可用于治疗炎性疾病，特别是哮喘的类固醇的气雾剂)。这些用于向呼吸道施用的制剂可以是用于喷雾器的气雾剂或溶液的形式，或者是用于吹入的微细粉末，单独地或与惰性载体如乳糖组合。在这种情况下，在一个实施例中，制剂的颗粒的直径小于50微米，在一个实施例中小于10微米。

本文所述的抗体或其抗原结合部分可以配制成用于局地或局部施用，例如用于局部应用至皮肤和粘膜，例如在眼中，以凝胶、乳膏和洗剂的形式，并且用于应用至眼或用于脑池内或脊柱内应用。局部施用考虑用于经皮递送，也用于向眼睛或粘膜施用，或用于吸入疗法。也可以施用单独的抗体鼻溶液或与其它药学上可接受的赋形剂组合的抗体鼻溶液。

经皮贴剂，包含离子电渗和电泳装置，是本领域技术人员熟知的，并且可以用于施用抗体。例如，这种贴剂公开于美国专利号6,267,983、6,261,595、6,256,533、6,167,301、6,024,975、6,010715、5,985,317、5,983,134、5,948,433和5,860,957中。

在某些实施例中，包括本文所述的抗体或其抗原结合部分的药物组合物是冻干粉末，其可以重构用于作为溶液、乳液和其它混合物施用。它也可以被重构和配制成固体或凝胶。通过将本文所述的抗体或其抗原结合部分或其药学上可接受的衍生物溶解在合适的溶剂中来制备冻干粉末。在一些实施例中，冻干粉末是无菌的。溶剂可以含有改善稳定性的赋形剂或粉末或由粉末制备的重构溶液的其它药理学组分。可以使用的赋形剂包含但不限于右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其它合适的试剂。溶剂也可含有缓冲剂，例如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾或本领域技术人员已知的其它此类缓冲剂，在一个实施例中，其pH为约中性。随后将溶液无菌过滤，接着在本领域技术人员已知的标准条件下冻干，以提供期望的制剂。在一些实施例中，可将所得溶液分配到小瓶中以进行冻干。每个小瓶可含有单剂量或多剂量的化合物。冻干粉末可以在适当的条件下储存，例如在约4℃至室温下。

用注射用水重构该冻干粉末提供了用于肠胃外施用的制剂。为了重构，将冻干粉末加入到无菌水或其它合适的载体中。精确的量取决于所选择的化合物。此类量可以凭经验确定。

本文所述的抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或免疫缀合物和本文提供的其他组合物还可以被配制为靶向待治疗的受试者的身体的特定组织、受体或其他区域。许多此类靶向方法是本领域技术人员熟知的。本文的所有此类靶向方法都预期用于本发明组合物。靶向方法的非限制性实例参见，例如美国专利号6,316,652、6,274,552、6,271,359、6,253,872、6,139,865、6,131,570、6,120,751、6,071,495、6,060,082、6,048,736、6,039,975、6,004,534、5,985,307、5,972,366、5,900,252、5,840,674、5,759,542和5,709,874。在一个具体实施例中，本文所述的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分可用于治疗纤维化和/或与纤维化相关的疾病或病况。

用于体内施用的组合物可以是无菌的。这可以通过例如无菌滤膜过滤而容易地实现。

IX.试剂盒

本文提供了试剂盒，其包括本文所述的一种或多种抗体或其抗原结合部分、双特异性分子或其免疫缀合物。在一些实施例中，本文提供了药物包或试剂盒，其包括一个或多个容器，所述容器填充有本文所述的药物组合物的一种或多种成分，例如本文提供的一种或多种抗体或其抗原结合部分，使用说明书可以任选。在一些实施例中，试剂盒含有本文所述的药物组合物和任何预防剂或治疗剂，例如本文所述的那些。

实例

下面的实验方法和细节在下面的实例中被引用。

实例1人FAM19A5蛋白的表达和纯化

产生并纯化重组人FAM19A5蛋白，并将纯化的蛋白用于基于结合亲和力分析的抗体筛选测定。首先，将含有FAM19A5基因的LPS-hT质粒转化到细菌中，并诱导蛋白过表达。一旦产生，就使用Ni-NTA亲和色谱(Qiagen,Valencia,CA,USA)纯化FAM19A5蛋白。使用逐渐增加浓度的咪唑，我们从Ni柱上除去His-标记的FAM19A5蛋白。使用考马斯亮蓝R-250染料测量溶液中的蛋白表达。仅取含FAM19A5咪唑的溶液，我们使用PBS浓缩FAM19A5蛋白。当浓缩完成时，使用Western Blot测定测量FAM19A5蛋白的纯度和浓度。随后将浓缩的蛋白用于筛选FAM19A5特异性抗体。

实例2抗体文库FAM19A5的产生

将FAM19A5蛋白用作使鸡免疫的抗原。将50μg合成肽KLH缀合物混合在750μl磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，并在37℃孵育30分钟。然后，在2％角鲨烯内毒素MPL(单磷酸化的脂质A种类)和乳化的含有油包水乳液佐剂(RIBI+MPL+TDM+CWS佐剂，Sigma,St.Louis,Mo,USA)的TDW和CWS的细胞壁组分的分枝杆菌中除去毒素，然后皮下注射到三只鸡中。使鸡免疫共三次，免疫之间相隔约2至3周。使用过表达FAM19A5蛋白的HEK293T细胞的裂解物，通过免疫印迹测量从免疫鸡获得的抗体的滴度。将接受三次免疫的鸡的血清用作第一抗体。所用的第二抗体是缀合到HRP(辣根过氧化物酶)的抗鸡IgG(Y)多克隆抗体(兔抗鸡IgG(Y)-HRP，Millipore Corporation,Billeria,MA,USA)。

从免疫鸡制备单链可变片段(scFv)文库。使用TRI试剂(Invitrogen,Carlsbad,CAUSA)，我们从上述免疫的鸡的脾、骨髓和滑膜囊提取了RNA。使用寡-dT引物和SUPERSCRIPT^TMIII第一链合成系统(Invitrogen)合成第一链cDNA。对于从鸡的免疫系统获得的cDNA，使用Expand高保真PCR系统(Roche Molecular Systems,IN,USA)产生单链可变区文库。在每个反应中，将1μL cDNA、60pmol各引物、10μL的10×反应缓冲液、8μL的2.5mM dNTP(Promega,Madison,WI,USA)和0.5μL的Taq DNA聚合酶与水混合。最终体积为100μL。使用以下条件进行PCR反应：30个循环的(i)94℃下15秒(ii)56℃下30秒和(iii)72℃下90秒，随后72℃下最终延伸10分钟。将包括长度约为350bp的片段的PCR产物上样到1.5％琼脂糖凝胶上，电泳后用QIAGEN Gel II提取试剂盒(QIAGEN,Valencia,CA,USA)纯化核苷酸片段。通过在OD260nm处读数来定量纯化的PCR产物。(1单位OD＝50μg/ml)。

通过重叠延伸PCR将来自第二次PCR的两个VH和VL第一产物随机连接。将每个PCR反应与100ng纯化的VL和VH产物、60pmol各引物、10μL的10×反应缓冲液、8μL的2.5mMdNTP、0.5μL的Taq DNA聚合酶和水混合，最终体积为100μL。PCR在下列条件下进行：25个循环的(i)94℃下15秒，(ii)56℃下30秒，和(iii)72℃下2分钟，接着72℃下最终延伸10分钟。将包括长度约700bp的单链可变区片段的PCR产物上样到1.5％琼脂糖凝胶上，电泳后，用QIAGEN II凝胶提取试剂盒(QIAGEN)纯化核苷酸片段。通过在OD260 nm处读数来定量纯化的PCR产物。(1单位OD＝50/ml)。

将PCR产物的scFv片段和载体pComb3X-SS(The Scripps Research Institute,CA,USA)用Sfi I限制酶消化。将10μg纯化的重叠PCT产物与360单位Sif I(μg DNA/16单位，Roche Molecular Systems,Pleasanton,CA,USA)、20μL的10X反应缓冲液和水混合至最终体积为200μL。将20μg pComb3X-SS载体与120单位Sfi L(μg DNA/6单位)、20μL的10×反应缓冲液和水混合至最终体积为200μL。将混合物在50℃消化8小时。然后，将包括scFv片段(约700bp)和载体(约3400bp)的消化产物上样到1％琼脂糖凝胶上，并使用凝胶提取试剂盒II QIAGEN(QIAGEN,Valencia,CA,USA)纯化。将1400ng Sfi I限制的pComb3X载体和700ng消化的scFv片段与5×连接酶缓冲液、10μL的T4 DNA连接酶(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)和水混合至最终体积为200μL。将混合物在16℃下孵育16小时以进行连接。

用乙醇沉淀后，将DNA沉淀溶解在15μL水中。为了产生文库，使用振荡器基因(Genepulser:Bio-Rad Laboratories,Hercules,CA,USA)通过电穿孔将连接样品转化到大肠杆菌菌株ER2738(New England Biolabs Inc,Hitchin,Hertfordshine,SG4OTY,England,UK)中。将细胞混合在5ml超级肉汤(SB)培养基中，并在37℃下以250rpm搅拌一小时进行孵育。然后，将3μL的100mg/mL卡那霉素加入10mL SB培养基。为了确定文库大小，将0.1μL、1μL和10μL培养样品涂布在含有50μg/mL卡那霉素的Luria肉汤(LB)琼脂平板上。搅拌1小时后，将4.5μL的100mg/mL卡那霉素加入LB培养物中，并进一步搅拌另外1小时。然后，将2mL VCM13辅助噬菌体的水溶液(>10¹¹cfu/mL)与含有92.5μL的100mg/mL卡那霉素的预热LB(183mL)一起加入LB培养基中。将该混合物在37℃下以250rpm搅拌另外2小时。然后，将280μL(50mg/mL)卡那霉素加入培养物中，并在37℃搅拌过夜。第二天，使用高速离心机(Beckman，JA-10转子)在3,000g、4℃下离心细菌沉淀。然后，使用细菌沉淀提取噬菌粒DNA，同时将上清液转移至无菌离心瓶。接着将8克聚乙二醇-8000(PEG-8000，Sigma)和6克氯化钠(NaCl，Merck)加入到上清液中，然后在冰中保持30分钟。然后，将上清液在15,000g、4℃下离心15分钟。然后弃去上清液，将含有1％BSA的噬菌体沉淀Tris(复制)悬浮于缓冲盐水(TBS)中。

实例3固定化抗原上的文库淘选(生物淘选)

使用磁珠(Dynabeads M-270环氧树脂，Invitrogen)进行生物淘选。在室温下，通过在室温下一起搅拌同时旋转珠子和蛋白20小时，用5μg重组FAM19A5蛋白包被大约1×10⁷个珠子。一旦完成包被，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤珠子4次，并在室温下在含有3％BSA的PBS中封闭一小时。然后，将包被的珠子与上述噬菌体展示的scFv在室温下培养两小时。为了除去任何未与抗原包被的珠子结合的噬菌体，用0.05％Tween20/PBS洗涤珠子。然后用50μL的0.1M甘氨酸/氯化氢(0.1M甘氨酸-HCl，pH 2.2)洗脱结合的噬菌体，并用3μL的2M Tris与氯化氢(Tris-HCl，pH9.1)中和。将该含有噬菌体的上清液用于感染大肠杆菌ER2738细胞，并将VCSM13辅助噬菌体用于扩增和拯救过夜。通过在含有50μg/ml卡那霉素的LB琼脂平板上印迹噬菌体感染的培养物，还测定来自噬菌体感染的培养物的噬菌体滴度的输入(输入)和产生(输出)。第二天，使用PEG-8000和NaCl沉淀噬菌体，随后将其用于生物淘选。通过重复上述过程进行生物淘选，直至总共五次不同的淘选。每次扩增时，筛选并选择对FAM19A5蛋白具有高亲和力的噬菌体。

实例4通过噬菌体ELISA选择克隆

为了分析从生物淘选中选择的克隆，我们从噬菌体展示的scFv中随机选择单个克隆，并使用ELISA证实克隆与FAM19A5重组蛋白结合。将FAM19A5重组蛋白稀释在0.1MNaHCO₃缓冲液中，并使用100ng/孔的蛋白在4℃包被96孔微量滴定板16小时。第二天，用3％BSA/PBS在37℃封闭板1小时。然后，将噬菌体上清液与6％BSA/PBS混合，并在37℃培养2小时。然后用0.05％Tween20/PBS洗涤含有上清液的板。将HRP缀合的M13抗体(a-M13-HRP,Pierce Chemical Co,Rockford,IL,USA)稀释至1/5000。将50μL稀释的抗体加入到板中，并在37℃孵育1小时。孵育和洗涤后，向板中加入0.05M柠檬酸盐缓冲液、1μg/ml的2,2'-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS,Amresco,Solon,OH,USA)和0.1％H₂O₂用于显色。在405nm下测量每个孔的吸光度。

分析了24个与FAM19A5重组蛋白结合并显示高吸光度的克隆。我们从24个克隆中获得了13个具有独特序列的scFv克隆。进一步选择克隆后，我们获得了具有最高亲和力的克隆1-65。

实例5抗FAM19A5-IgG2/4抗体的产生

将抗FAM19A5 scFv亚克隆到哺乳动物表达载体中。在FAM19A5 scFv基因序列中，将人C_κ基因与轻链可变结构域连接，并将人免疫球蛋白同种型IgG2/4的CH1、CH2和CH3基因与重链可变区连接。通过添加限制性位点(Genscript,USA)合成具有每条轻链和每条重链的抗体。将合成的基因插入到具有修饰的限制性位点的哺乳动物细胞表达载体中以促进克隆。首先，使用Hind III和Xba I(New England Biolabs,UK)限制酶将轻链基因插入载体中，然后通过使用NheI和BamHI(New England Biolabs,UK)限制酶将重链基因加入载体中。

为了表达和纯化抗FAM19A5-IgG2/4抗体，我们使用了哺乳动物细胞转染和过表达注射系统。我们将2μg/ml哺乳动物表达载体与4μg聚乙烯亚胺(PEI,Polysciences,Warrington,PA,USA)在150mM氯化钠(NaCl，Merck)中混合，相当于细胞培养体积的1/10。将混合物在室温下静置15分钟。将混合物加入HEK293F细胞(2×10⁶细胞/ml，Invitrogen)，然后在含有100U/ml青霉素和链霉素(Invitrogen)的FREESTYLE^TM 293表达培养基中，在7％CO₂和37℃下，在135rpm的搅拌条件下，孵育六天。为了从细胞培养上清液中纯化表达的抗FAM19A5 IgG2/4抗体，我们使用蛋白A珠(RepliGen,Waltham,MA,USA)亲和凝胶色谱。将蛋白A色谱在4-12％Bis-Tris梯度凝胶电泳上运行。通过考马斯亮蓝染色证实蛋白的大小和产量。

实例6肝纤维化的血清分析

为了评估FAM19A5蛋白在肝纤维化中的水平，使用肝纤维化大鼠模型(即胆管结扎(BLD)-诱导的肝纤维化Sprague-Dawley(SD)大鼠模型)。参见Kountouras等人，《英国实验病理学杂志(Br J Exp Path)》65:305-311(1984)。简言之，用氯胺酮和甲苯噻嗪麻醉动物。制造1.5cm中线切口，定位胆总管，用3-0丝线物双重结扎。然后，在肝纤维化诱导后21天，从动物收集全血，并从全血中分离血清。

使用FAM19A5夹心ELISA测定测量血清中FAM19A5蛋白质的水平。用100μL体积的1μg/mL的1-65人IgG1抗FAM19A5抗体包被96孔ELISA板过夜。然后用PBS洗涤板，随后用1％BSA/PBS在室温下封闭1小时。接着，再次用PBS和大约100μL标准物洗涤板，并将样品分配到合适的孔中。然后将板在室温下孵育2小时。然后，用0.05％PBS-Tween 20(即洗涤缓冲液)洗涤板，并将约100μL检测抗体(辣根过氧化物酶(HRP)缀合的山羊抗-兔IgG抗体(SantaCruz，Cat#SC-2030)，在1％BSA/PBS中以1:5000稀释)加入到孔中。将板在室温下孵育另外1小时。用洗涤缓冲液另外洗涤后，将约100μL邻苯二胺二盐酸盐(OPD)底物加入每个孔中，并使板在室温下显影。约10分钟后，将约100μL的1N H2SO4(硫酸)加入到孔中以终止反应。立即使用96孔MicroPlate读数器(Molecular Device，Versa Max)在492nM波长下测量吸光度。

如图1所示，BDL诱导的肝纤维化SD大鼠(“疾病模型”)的血清中FAM19A5蛋白质水平是正常(即，非BDL诱导的)大鼠的血清中FAM19A5蛋白质水平的3倍以上。

实例7肺纤维化的血清分析

为了评估FAM19A5蛋白质水平在肺纤维化中是否也增加，通过气管内注射施用3mg/kg博来霉素在7周龄雄性SD大鼠中诱导特发性肺纤维化。在施用博来霉素后24天，从动物中收集全血，并将血清与全血分离。如上文实例6所示，使用FAM19A5夹心ELISA测定测量血清中FAM19A5蛋白质的水平。如图2所示，肺纤维化诱导的SD大鼠(“疾病模型”)的血清中FAM19A5蛋白质水平是正常(即无特发性肺纤维化)大鼠的血清中FAM19A5蛋白质水平的1.5倍以上。

实例8人肝纤维化患者的血清分析

AST和/或ALT水平可以在肝细胞损害后在血清中增加，并且这种增加通常被依赖以提示肝损害。参见Gowda等人，《泛非医学杂志(Pan Afr Med J)》3:17(2009)；Giannini等人，《内科医学档案(Arch Intern Med)》163:218-224(2003)。然而，当损害严重时(例如肝硬化)，AST和ALT水平可以表现为正常。因此，为了评估FAM19A5表达是否可为肝损害的更好指标，使用FAM19A5夹心ELISA测定测量已确认肝硬化的人类患者的血清中FAM19A5蛋白质的水平。

将2-13抗FAM19A5人IgG1抗体以1μg/μL的浓度重构于50mM碳酸盐缓冲液(Bio-World,Cat.C2070-9.6,Lot.C70-9.616Z11C)中。然后将抗FAM19A5抗体以1:1000的比例在PBS中稀释，随后用于包被96孔ELISA板过夜。第二天，用PBS洗涤板，随后在室温下用1％BSA/PBS封闭约1小时。然后，再次用PBS洗涤板，并将约100μL的标准品和样品分配到适当的孔中。将板在室温下孵育2小时。然后，用0.05％PBS-Tween20(即洗涤缓冲液)洗涤板。接着，将3-2抗FAM19A5小鼠IgG2a抗体(以1μg/μL的浓度重构)以1:2000的比例稀释在1％BSA/PBS中。将约100μL该稀释的抗体加入到每个孔中，并使板在室温下孵育另外2小时。在用洗涤缓冲液另外洗涤后，将约100μL辣根过氧化物酶(HRP)缀合的驴抗-小鼠IgG抗体(JacksonLab,Cat.715-035-151,Lot.122401)(在1％BSA/PBS中以1:5000稀释)加入到孔中。随后将板在室温下孵育1小时。孵育后，用洗涤缓冲液洗涤板，并将约100μL的1-STEP^TM Ultra TMB-ELISA底物溶液(Pierce,Cat.34028,Lot.QJ20436540)加入到每个孔中。在孵育10分钟后，将约100μL的1N H2SO4(硫酸)加入到孔中以终止反应。立即使用96孔MicroPlate读数器(Molecular Device，Versa Max)在450nM波长下测量吸光度。

如图3所示，肝硬化患者的FAM19A5蛋白质水平是正常健康个体的血清中观察到的水平的约2-6倍。此类数据与上述动物研究一致，表明FAM19A5蛋白质的血清浓度可能是肝硬化的理想诊断标志物。

实例9对心肌梗塞的作用的分析

心肌梗塞期间发生的缺血性细胞死亡导致修复反应，其中受损组织被纤维化瘢痕取代。这之后是周围组织的重塑(例如，左心室壁变薄和室扩张)，并最终导致受损的心脏功能。参见Talman等人，《细胞组织研究(Cell Tissue Res)》365(3):563-581(2016)；Firth等人，《心血管药物疗法(Cardiovasc Drugs Ther)》4:1363-1374(1990)。为了评估抗FAM19A5抗体对心肌梗塞的作用，使用小鼠缺血再灌注模型。简言之，购买Balb/cAnNCrljOri小鼠(6周龄，雄性)(Orient Bio Inc.,Seoul,South Korea)，并在特定的无病原体(SPF)条件下饲养约1周。然后，用Zoletil 50(VIRBAC,France)和Zylazine(

Bayer AG,Germany)深度麻醉小鼠。一旦麻醉，就对小鼠进行开胸术以暴露冠状动脉，并通过用7-0缝合线和PE20管结扎动脉诱导心肌梗塞。维持缺血条件40分钟，此时通过除去PE20管重新灌注血液。从心肌梗塞诱导后第3天开始，以每周一次的间隔通过静脉内注射将抗FAM19A5抗体(1-65、3-2或1-28抗体)施用于小鼠，总共三次注射。正常对照(即健康)和NHI小鼠用作对照。

在心肌梗塞诱导后第21天，处死小鼠并收获其心脏。将心脏组织固定在10％福尔马林溶液中。然后，将固定的组织以2mm的厚度在顶端周围横向切片，并放置在石蜡块中，将石蜡块进一步切成5μm切片，并放置在玻璃组织载玻片上用于分析。对心脏组织样品进行苏木精和曙红(H&E)染色以评估每种抗FAM19A5抗体(即1-65、3-2和1-28抗体)对心肌梗塞相关组织重塑的作用。

如所预期的，来自NHI对照组的心脏组织显示显著的左心室扩张和左心室壁变薄。参见图4(“NHI”)。相反，来自接受抗FAM19A5抗体的小鼠的心脏组织类似于来自正常对照(“健康”)动物的心脏组织(即，减少左心室扩张和保存左心室壁组织)。

为了帮助定量这种作用，在心脏组织切片上进行染色胶原蛋白的Masson三色法。如前所述，胶原蛋白是细胞外基质(ECM)的主要成分，因此，组织样品中增加的胶原蛋白积累的Masson三色染色可以是纤维化的准确指标。染色的载玻片使用光学显微镜(OlympusBX53,Japan)拍照，且纤维面积与总左心室面积的比率也使用图像分析仪计算。

如图5A所示，接受抗FAM19A5抗体的小鼠与NHI对照组相比胶原蛋白积累显著减少。在抗FAM19A5抗体处理组中，约10-15％的总左心室面积由纤维组织构成。参见图5B。相反，在来自NHI对照组的小鼠中，纤维面积占总左心室面积的约20％。在不同的FAM19A5抗体中，1-65抗体似乎具有最大的作用。

总之，上述结果证明，在心肌梗塞后不久施用FAM19A5抗体可极大地改善组织重塑和纤维化形成。

实施例10抗FAM19A5抗体在DMN(二甲基亚硝胺)介导的纤维化模型中的抗纤维化作用

为了评估抗FAM19A5抗体的抗纤维化作用，使用肝纤维化动物模型。简言之，通过腹膜内注射向大鼠施用二甲基亚硝胺(DMN)(以10mg/ml/kg的浓度稀释于盐水中)连续3天(每天一次)，连续4周。从初始DMN施用后第5周开始，动物每周一次接受对照人IgG抗体或抗FAM19A5抗体，持续2周。参见图6A。然后，在最后一次抗体施用后一周(即，在初始DMN施用后第7周)，将动物处死，放血，并收获肝组织。将获得的肝组织固定在10％缓冲的中性福尔马林中。然后，将组织包埋在石蜡中，获得组织切片(约4-5μm厚)。

肝纤维化的进展可以通过细胞外基质的积累来确认，细胞外基质的积累可以通过天狼星红染色来确认，天狼星红染色是胶原蛋白的特异性染色，胶原蛋白是细胞外基质的典型组分。因此，为了评估动物中纤维化进展的程度，组织切片用天狼星红染色并使用显微镜在100x放大倍数下拍照。然后，使用图像分析仪(Image Pro Plus 7.0,MediaCybernetics,USA)测定染色的肝组织切片中天狼星红-阳性细胞的相对频率。

如图6B和6C所示，与接受对照(人IgG)抗体(G2)的动物相比，接受抗FAM19A5抗体(G3)的DMN处理的动物的肝脏的天狼星红阳性染色的面积显著减小。该结果表明，施用抗FAM19A5可抑制肝纤维化组织中DMN诱导的胶原蛋白产生。

为了证实上述观察结果，也在组织切片上进行I型胶原蛋白的免疫组织化学染色。简言之，对组织切片的I型胶原蛋白染色，并使用显微镜在100x放大倍数下拍照。然后，使用图像分析仪(Image Pro Plus 7.0,MediaCybernetics,USA)测定具有阳性I型胶原蛋白表达的面积相对于总染色组织切片的百分比。如图6D和6E所示，与接受对照抗体的动物相比，接受抗FAM19A5抗体的动物在其肝脏中I型胶原蛋白染色显著降低，证实了天狼星红染色的结果。

作为进一步的证实，免疫组织化学也用于定量转化生长因子β(TGF-β)的产生，TGF-β是肝纤维化的发展和进展中的重要因素。简言之，对组织切片进行TGF-β染色，并使用显微镜在100x放大倍数下拍照。然后，用图像分析仪(Image Pro Plus 7.0,MediaCybernetics,USA)测定具有阳性TGF-β表达的面积相对于总染色组织切片的百分比。如图7A和7B所示，与用对照抗体处理的动物相比，接受抗FAM19A5抗体的DMN处理的动物的肝脏中TGF-β产生显著降低。

总之，上述数据表明，在DMN诱导的肝纤维化动物模型中，抗FAM19A5抗体可抑制胶原蛋白和TGF-β二者的产生，证明了抗体的抗纤维化作用。

应当理解，包含发明内容和摘要部分的具体实施方式旨在用于解释权利要求。发明内容和摘要部分可以阐述发明人所设想的本公开的一个或多个但不是所有示例性实施例，因此，不旨在以任何方式限制本公开和所附权利要求。

以上已经借助于示出了指定功能及其关系的实现的功能构建块描述了本公开。为了便于描述，在本文任意定义了这些功能性构建块的边界。只要适当地执行指定的功能及其关系，就可以定义可替代的边界。

具体实施例的上述描述将如此充分地揭示本公开的一般性质，以致其他人可以通过应用本领域技术内的知识，在不偏离本公开的一般概念的情况下，在不进行过度实验的情况下，容易地修改和/或改变此类具体实例的各种应用。因此，基于本文所呈现的教示和指导，此类改变和修改旨在处于所公开实施例的等效物的含义和范围内。应当理解，这里的措辞或术语是为了描述而不是限制的目的，使得本说明书的术语或措辞由技术人员根据教示和指导来解释。

本公开的广度和范围不应由上述示例性实施例中的任何一个限制，而应仅根据所附权利要求及其等同物来限定。

本文引用的所有出版物、专利、专利申请、互联网站点和登录号/数据库序列(包含多核苷酸和多肽序列二者)通过引用整体并入本文，用于所有目的，其程度如同每个单独的出版物、专利、专利申请、互联网站点或登录号/数据库序列被具体和单独地指明通过引用如此并入。

该PCT申请要求2017年6月27日提交的第62/525,633号美国临时申请和2017年11月7日提交的第62/582,886号美国临时申请的优先权，这两个申请均通过引用整体并入本文。

序列表

<110> NEURACLE SCIENCE CO., LTD.

<120> 抗FAM19A5抗体用于治疗纤维化的用途

<130> 3763.004PC02/C-K/DKC

<150> 62/525,633

<151> 2017-06-27

<150> 62/582,886

<151> 2017-11-07

<160> 200

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Met Ala Pro Ser Pro Arg Thr Gly Ser Arg Gln Asp Ala Thr Ala Leu

1 5 10 15

Pro Ser Met Ser Ser Thr Phe Trp Ala Phe Met Ile Leu Ala Ser Leu

20 25 30

Leu Ile Ala Tyr Cys Ser Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val

35 40 45

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

50 55 60

Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

65 70 75 80

Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp

85 90 95

Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile

100 105 110

Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr

115 120 125

Thr Thr Val Ser

130

<210> 2

<211> 125

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Met Gln Leu Leu Lys Ala Leu Trp Ala Leu Ala Gly Ala Ala Leu Cys

1 5 10 15

Cys Phe Leu Val Leu Val Ile His Ala Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln

20 25 30

Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser

35 40 45

Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg

50 55 60

Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp

65 70 75 80

Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu

85 90 95

Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys

100 105 110

Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr Thr Thr Val Ser

115 120 125

<210> 3

<211> 53

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

Met Tyr His His Arg Glu Trp Pro Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln

1 5 10 15

Trp Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu

20 25 30

Ile Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys

35 40 45

Thr Thr Thr Val Ser

50

<210> 4

<211> 1501

<212> DNA

<213> 智人

<400> 4

ggcggcggag gatggcgcgc gcggggcccg cacgtggagg ccggcgcggg ggcgcgggca 60

gggccggctg ctgagacgcg ctgctgcccc ccgcgcgggc gccgcggctt caatggcgcc 120

atcgcccagg accggcagcc ggcaagatgc gaccgccctg cccagcatgt cctcaacttt 180

ctgggcgttc atgatcctgg ccagcctgct catcgcctac tgcagtcagc tggccgccgg 240

cacctgtgag attgtgacct tggaccggga cagcagccag cctcggagga cgatcgcccg 300

gcagaccgcc cgctgtgcgt gtagaaaggg gcagatcgcc ggcaccacga gagcccggcc 360

cgcctgtgtg gacgcaagaa tcatcaagac caagcagtgg tgtgacatgc ttccgtgtct 420

ggagggggaa ggctgcgact tgttaatcaa ccggtcaggc tggacgtgca cgcagcccgg 480

cgggaggata aagaccacca cggtctcctg acaaacacag cccctgaggg ggccccggga 540

gtggccttgg ctccctggag agcccacgtc tcagccacag ttctccactc gcctcggact 600

tcacccgttc tctgccgccc gcccactccg tttccctgtg gtccgtgaag gacggcctca 660

ggccttggca tcctgagctt cggtctgtcc agccgacccg aggaggccgg actcagacac 720

ataggcgggg ggcggcacct ggcatcagca atacgcagtc tgtgggagcc cggccgcgcc 780

cagcccccgc cgaccgtggc gttggccctg ctgtcctcag aggaggagga ggaggaggca 840

gctccggcag ccacagaagg ctgcagccca gcccgcctga gacacgacgc ctgccccagg 900

ggactgtcag gcacagaagc ggcctcctcc cgtgccccag actgtccgaa ttgcttttat 960

tttcttatac tttcagtata ctccatagac caaagagcaa aatctatctg aacctggacg 1020

caccctcact gtcagggtcc ctggggtcgc ttgtgcgggc gggagggcaa tggtggcaga 1080

gacatgctgg tggccccggc ggagcggaga gggcggccgt ggtggaggcc tccaccccag 1140

gagcaccccg cacaccctcg gaggacgggc ttcggctgcg cggaggccgt ggcacacctg 1200

cgggaggcag cgacggcccc cacgcagacg ccgggaacgc aggccgcttt attcctctgt 1260

acttagatca acttgaccgt actaaaatcc ctttctgttt taaccagtta aacatgcctc 1320

ttctacagct ccatttttga tagttggata atccagtatc tgccaagagc atgttgggtc 1380

tcccgtgact gctgcctcat cgatacccca tttagctcca gaaagcaaag aaaactcgag 1440

taacacttgt ttgaaagaga tcattaaatg tattttgcaa agcccaaaaa aaaaaaaaaa 1500

a 1501

<210> 5

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 表位F1

<400> 5

Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val Thr Leu Asp Arg

1 5 10

<210> 6

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 表位F2

<400> 6

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 7

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 表位F3

<400> 7

Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

1 5 10 15

Ala Arg Pro Ala

20

<210> 8

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 表位F4

<400> 8

Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp

1 5 10 15

Cys Asp Met Leu

20

<210> 9

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 表位F5

<400> 9

Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile

1 5 10 15

Asn Arg Ser Gly

20

<210> 10

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 表位F6

<400> 10

Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr

1 5 10 15

Thr Thr Val Ser

20

<210> 11

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体VH-CDR1

<400> 11

Ser His Gly Met Phe

1 5

<210> 12

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体VH-CDR2

<400> 12

Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 13

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体VH-CDR3

<400> 13

Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp Thr Gly

1 5 10 15

Gln Ile Asp Ala

20

<210> 14

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体VH-CDR1

<400> 14

Ser Phe Asn Met Phe

1 5

<210> 15

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体VH-CDR2

<400> 15

Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val Arg

1 5 10 15

Gly

<210> 16

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体VH-CDR3

<400> 16

Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val Asp Ser

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ile Asp Ala

20

<210> 17

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体VH-CDR1

<400> 17

Ser Tyr Gln Met Gly

1 5

<210> 18

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体VH-CDR2

<400> 18

Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser

1 5 10

<210> 19

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体VH-CDR3

<400> 19

Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala

1 5 10

<210> 20

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体VH-CDR1

<400> 20

Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr Gly

1 5

<210> 21

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体VH-CDR2

<400> 21

Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro

1 5

<210> 22

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体VH-CDR3

<400> 22

Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly

1 5 10 15

Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala

20 25

<210> 23

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体VL-CDR1

<400> 23

Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly

1 5

<210> 24

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体VL-CDR2

<400> 24

Trp Asp Asp Glu Arg Pro Ser

1 5

<210> 25

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体VL-CDR3

<400> 25

Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val

1 5 10

<210> 26

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体VL-CDR1

<400> 26

Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly

1 5 10

<210> 27

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体VL-CDR2

<400> 27

Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser

1 5

<210> 28

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体VL-CDR3

<400> 28

Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly Gly Ile

1 5 10

<210> 29

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体VL-CDR1

<400> 29

Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly

1 5 10

<210> 30

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体VL-CDR2

<400> 30

Trp Asn Asp Lys Arg Pro Ser

1 5

<210> 31

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体VL-CDR3

<400> 31

Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly Tyr Val Gly Val

1 5 10

<210> 32

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体VL-CDR1

<400> 32

Gly Tyr Gly Tyr Gly

1 5

<210> 33

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体VL-CDR2

<400> 33

Gln Asn Asp

1

<210> 34

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体VL-CDR3

<400> 34

Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile

1 5 10

<210> 35

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体VH

<400> 35

Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His

20 25 30

Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Ala Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp

100 105 110

Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 36

<211> 131

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体VH

<400> 36

Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe

20 25 30

Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Ala Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val

50 55 60

Arg Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Asn Pro Gly Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val

100 105 110

Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile

115 120 125

Val Ser Ser

130

<210> 37

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体VH

<400> 37

Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp

100 105 110

Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser

115 120

<210> 38

<211> 136

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体VH

<400> 38

Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ala Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro Ser Tyr Gly Ser Ala Val

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Lys Asp Asn Gly Arg Ser Thr Val Arg

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly

100 105 110

Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala Trp Gly His

115 120 125

Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser

130 135

<210> 39

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体VL

<400> 39

Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val

1 5 10 15

Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Gln Gln

20 25 30

Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Trp Asp Asp Glu

35 40 45

Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ala Leu Ser Gly Ser

50 55 60

Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val Phe Gly

85 90 95

Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu

100

<210> 40

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体VL

<400> 40

Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val

1 5 10 15

Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr

20 25 30

Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Thr Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala

65 70 75 80

Asp Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly

85 90 95

Gly Ile Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 41

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体VL

<400> 41

Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val

1 5 10 15

Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp

20 25 30

Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Ser Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Trp

35 40 45

Asn Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys

50 55 60

Ser Gly Ser Thr His Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp

65 70 75 80

Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly

85 90 95

Tyr Val Gly Val Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 42

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体VL

<400> 42

Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Leu Glu Gly Thr Val

1 5 10 15

Glu Ile Thr Cys Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln

20 25 30

Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Gln Asn Asp Lys

35 40 45

Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser

50 55 60

Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala Val

65 70 75 80

Tyr Tyr Cys Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile Phe Gly

85 90 95

Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu

100

<210> 43

<211> 388

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体VH

<400> 43

gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60

gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agccatggca tgttctgggt gcgacagacg 120

cccggcaagg ggttggaata tgtcgctgaa attaccaatg atggtagtgg cacaaactac 180

gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240

ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc cagatctact 300

tatgaatgtc ctggtggttt tagttgttgg ggtgatactg gtcaaataga cgcatggggc 360

cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcca 388

<210> 44

<211> 394

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体VH

<400> 44

gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60

gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agcttcaaca tgttctgggt gcgacaggcg 120

cccggcaagg ggctggaata cgtcgctcaa attagcagca gtggtagtag cacaaactac 180

gcacccgcgg tgaggggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240

ctgcagctga acaaccccgg ggctgaagac accggcacct actactgcgc caaaagtagt 300

tatgactgtc cttacggtca ttgtagtagt ggtgttgata gtgctggtga gatcgacgca 360

tggggccacg ggaccgaagt catcgtctcc tcca 394

<210> 45

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体VH

<400> 45

gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60

gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agctatcaga tgggctgggt gcgacaggcg 120

cccggcaagg ggctggaatg ggtcggtgtt attaacaaga gtggtagtga cacatcatac 180

gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240

ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc caaaggttct 300

gctagttata taactgctgc taccatcgac gcatggggcc acgggaccga agtcatcgtc 360

tcctcc 366

<210> 46

<211> 408

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体VH

<400> 46

gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60

gtctgcaagg cctccgggtt cgacttcagc gattatggca tgggttgggt gcgacaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggttgctgct attagaagtg atggtagtaa cccatcatac 180

gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgaaggaca acgggcgaag cacagtgagg 240

ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accgccacct actactgcgc caaggatggt 300

aatggttact gtgctctcga tgcttatcgt agtggtggtt atagttgtgg tgtttatcct 360

ggtagcatcg acgcatgggg ccacgggacc gaagtcatcg tctcctcc 408

<210> 47

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体VL

<400> 47

ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaacccagga gaaaccgtca agataacctg 60

ctccgggggt agctatagct atggctggtt ccagcagaag tctcctggca gtgcccttgt 120

cactgtgatc tactgggatg atgagagacc ctcggacatc ccttcacgat tctccggtgc 180

cctatccggc tccacaaaca cattaaccat cactggggtc caagccgacg acgaggctgt 240

ctatttctgt gggactgaag acatcagcgg cactgctggt gtatttgggg ccgggacaac 300

cctgaccgtc ctggg 315

<210> 48

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体VL

<400> 48

ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaacccagga gaaaccgtca agatcacctg 60

ctccgggggt ggcagctatg ctggaagtta ctattatggc tggtaccagc agaaggcacc 120

tggcagtgcc cctgtcactc tgatctatga aagcaacaag agaccctcgg acatcccttc 180

acgattctcc ggttccacat ctggctccac agccacacta accatcactg gggtccaagc 240

cgatgacgag gctatctatt actgtgggag ctgggacagt agcaatggtg gtatatttgg 300

ggccgggaca accctgaccg tcctagg 327

<210> 49

<211> 331

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体VL

<400> 49

ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaaccctggg gaaactgtca agatcacctg 60

ctccgggggt ggtagcagtg gctatggtta tggctggtat cagcagaagt cacctagcag 120

tgcccctctc actgtgatct actggaacga caagagaccc tcggacatcc cttcacgatt 180

ctccggttcc aaatccggct ccacacacac attaaccatc actggggtcc aagccgagga 240

cgaggctgta tatttctgtg ggaatgatga ctacagcagt gatagtggat atgtcggtgt 300

atttggggcc gggacaaccc tgaccgtcct a 331

<210> 50

<211> 312

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体VL

<400> 50

gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacctggaag gaaccgtcga gatcacctgc 60

tccgggagtg gctatggtta tggctggtat cagcagaagt ctcctggcag tgcccctgtc 120

actgtgatct atcagaacga caagagaccc tcggacatcc cttcacgatt ctccggttcc 180

aaatccggct ccacgggcac attaaccatc actggggtcc aagtcgagga cgaggctgtc 240

tattactgtg ggagtgaaga cagcagcact cttgctggta tatttggggc cgggacaacc 300

ctgaccgtcc ta 312

<210> 51

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3突变体

<400> 51

Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val

1 5 10 15

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Ile Glu Glu Arg Ser Gln

20 25 30

Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

35 40 45

Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp

50 55 60

Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile

65 70 75 80

Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr

85 90 95

Thr Thr Val Ser

100

<210> 52

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M4突变体

<400> 52

Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val

1 5 10 15

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

20 25 30

Thr Val Lys Cys Ser Cys Phe Pro Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

35 40 45

Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp

50 55 60

Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile

65 70 75 80

Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr

85 90 95

Thr Thr Val Ser

100

<210> 53

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M5突变体

<400> 53

Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val

1 5 10 15

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

20 25 30

Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

35 40 45

Asn Lys Pro Ser Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp

50 55 60

Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile

65 70 75 80

Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr

85 90 95

Thr Thr Val Ser

100

<210> 54

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M6突变体

<400> 54

Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val

1 5 10 15

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

20 25 30

Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

35 40 45

Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Leu Gln Arg Trp Trp

50 55 60

Cys Gln Met Glu Leu Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile

65 70 75 80

Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr

85 90 95

Thr Thr Val Ser

100

<210> 55

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M7突变体

<400> 55

Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val

1 5 10 15

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

20 25 30

Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

35 40 45

Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp

50 55 60

Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Glu Cys Lys Thr Leu Pro

65 70 75 80

Asp Asn Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr

85 90 95

Thr Thr Val Ser

100

<210> 56

<211> 101

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M8突变体

<400> 56

Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val

1 5 10 15

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

20 25 30

Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

35 40 45

Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp

50 55 60

Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile

65 70 75 80

Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Ser Cys Ser Ser Gly Asn Lys Ile Lys

85 90 95

Thr Thr Thr Val Ser

100

<210> 57

<211> 459

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体HC

<400> 57

Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His

20 25 30

Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Ala Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp

100 105 110

Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser

115 120 125

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

130 135 140

Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

145 150 155 160

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

165 170 175

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

180 185 190

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln

195 200 205

Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

210 215 220

Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

225 230 235 240

Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

245 250 255

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

260 265 270

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

275 280 285

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

290 295 300

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

305 310 315 320

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

325 330 335

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

340 345 350

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu

355 360 365

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

370 375 380

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

385 390 395 400

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

405 410 415

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

420 425 430

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

435 440 445

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455

<210> 58

<211> 461

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体HC

<400> 58

Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe

20 25 30

Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Ala Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val

50 55 60

Arg Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Asn Pro Gly Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val

100 105 110

Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile

115 120 125

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

130 135 140

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

145 150 155 160

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

165 170 175

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

180 185 190

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

195 200 205

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

210 215 220

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

225 230 235 240

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

245 250 255

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

260 265 270

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

275 280 285

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

290 295 300

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

305 310 315 320

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

325 330 335

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

340 345 350

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

355 360 365

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

370 375 380

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

385 390 395 400

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

405 410 415

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

420 425 430

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

435 440 445

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 59

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体HC

<400> 59

Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp

100 105 110

Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Pro Gly Lys

450

<210> 60

<211> 466

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体HC

<400> 60

Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ala Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro Ser Tyr Gly Ser Ala Val

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Lys Asp Asn Gly Arg Ser Thr Val Arg

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly

100 105 110

Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala Trp Gly His

115 120 125

Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

130 135 140

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

145 150 155 160

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

165 170 175

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

180 185 190

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

195 200 205

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

210 215 220

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

225 230 235 240

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

245 250 255

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

260 265 270

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

275 280 285

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

290 295 300

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

305 310 315 320

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

325 330 335

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

340 345 350

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

355 360 365

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

370 375 380

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

385 390 395 400

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

405 410 415

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

420 425 430

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

435 440 445

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455 460

Gly Lys

465

<210> 61

<211> 211

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 2-13抗体LC

<400> 61

Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val

1 5 10 15

Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Gln Gln

20 25 30

Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Trp Asp Asp Glu

35 40 45

Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ala Leu Ser Gly Ser

50 55 60

Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val Phe Gly

85 90 95

Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val

100 105 110

Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser

115 120 125

Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln

130 135 140

Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val

145 150 155 160

Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu

165 170 175

Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu

180 185 190

Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg

195 200 205

Gly Glu Cys

210

<210> 62

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 3-2抗体LC

<400> 62

Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val

1 5 10 15

Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr

20 25 30

Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Thr Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala

65 70 75 80

Asp Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly

85 90 95

Gly Ile Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 63

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-65抗体LC

<400> 63

Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val

1 5 10 15

Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp

20 25 30

Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Ser Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Trp

35 40 45

Asn Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys

50 55 60

Ser Gly Ser Thr His Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp

65 70 75 80

Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly

85 90 95

Tyr Val Gly Val Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser

100 105 110

Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu

115 120 125

Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro

130 135 140

Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly

145 150 155 160

Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His

180 185 190

Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val

195 200 205

Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 64

<211> 211

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-28抗体LC

<400> 64

Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Leu Glu Gly Thr Val

1 5 10 15

Glu Ile Thr Cys Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln

20 25 30

Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Gln Asn Asp Lys

35 40 45

Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser

50 55 60

Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala Val

65 70 75 80

Tyr Tyr Cys Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile Phe Gly

85 90 95

Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val

100 105 110

Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser

115 120 125

Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln

130 135 140

Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val

145 150 155 160

Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu

165 170 175

Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu

180 185 190

Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg

195 200 205

Gly Glu Cys

210

<210> 65

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> EP1表位

<400> 65

Ile Val Thr Leu Asp

1 5

<210> 66

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> EP2表位

<400> 66

Asp Ser Ser Gln Pro

1 5

<210> 67

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> EP3表位

<400> 67

Arg Thr Ile Ala Arg

1 5

<210> 68

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> EP4表位

<400> 68

Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys

1 5

<210> 69

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> EP5表位

<400> 69

Ala Arg Pro Ala

1

<210> 70

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> EP6表位

<400> 70

Lys Thr Lys Gln Trp Cys Asp Met Leu

1 5

<210> 71

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> EP7表位

<400> 71

Gly Cys Asp Leu Leu Ile Asn Arg

1 5

<210> 72

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> EP8表位

<400> 72

Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg

1 5

<210> 73

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-01-BSA (#1)

<400> 73

Thr Ala Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 74

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-02-BSA (#2)

<400> 74

Thr Leu Ala Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 75

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-03-BSA (#3)

<400> 75

Thr Leu Asp Arg Ala Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 76

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-04-BSA (#4)

<400> 76

Thr Leu Asp Arg Asp Ala Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 77

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-05-BSA (#5)

<400> 77

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ala Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 78

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-06-BSA (#6)

<400> 78

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Ala Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 79

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-07-BSA (#7)

<400> 79

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Ala Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 80

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-08-BSA (#8)

<400> 80

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Ala Thr Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 81

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-09-BSA (#9)

<400> 81

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Ala Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 82

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-10-BSA (#10)

<400> 82

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ala Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 83

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-11-BSA (#11)

<400> 83

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Arg Arg Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 84

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-12-BSA (#12)

<400> 84

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Ala Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Cys

20

<210> 85

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2-12-BSA (#13)

<400> 85

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

1 5 10 15

Thr Val Arg Cys

20

<210> 86

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 野生型FAM19A5同种型2（无信号肽）

<400> 86

Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val

1 5 10 15

Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

20 25 30

Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

35 40 45

Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp

50 55 60

Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile

65 70 75 80

Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr

85 90 95

Thr Thr Val Ser

100

<210> 87

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1突变体

<400> 87

Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Val Ile

1 5 10 15

Ala Ala His Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

20 25 30

Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

35 40 45

Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp

50 55 60

Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile

65 70 75 80

Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr

85 90 95

Thr Thr Val Ser

100

<210> 88

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M2突变体

<400> 88

Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val

1 5 10 15

Thr Leu Asp Arg Cys Cys Asn Lys Asn Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln

20 25 30

Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg

35 40 45

Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp

50 55 60

Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile

65 70 75 80

Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr

85 90 95

Thr Thr Val Ser

100

<210> 89

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12抗体VH CDR1

<400> 89

Thr Tyr Ala Val Thr

1 5

<210> 90

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12抗体VH CDR2

<400> 90

Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 91

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12抗体VH CDR3

<400> 91

Asp Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro

1 5 10 15

<210> 92

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12抗体VL CDR1

<400> 92

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 93

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12抗体VL CDR2

<400> 93

Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 94

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12抗体VL CDR3

<400> 94

Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Thr Asn Val Trp Asn Ala

1 5 10

<210> 95

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13B4抗体VH CDR1

<400> 95

Ser Ser Asn Trp Trp Ser

1 5

<210> 96

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13B4抗体VH CDR2

<400> 96

Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly

1 5 10 15

<210> 97

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13B4抗体VH CDR3

<400> 97

Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val

1 5

<210> 98

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13B4抗体VL CDR1

<400> 98

Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala Ser

1 5 10

<210> 99

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13B4抗体VL CDR2

<400> 99

Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser

1 5

<210> 100

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13B4抗体VL CDR3

<400> 100

Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala Val

1 5

<210> 101

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13F7抗体VH CDR1

<400> 101

Gly Tyr Ser Trp Thr

1 5

<210> 102

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13F7抗体VH CDR2

<400> 102

Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 103

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13F7抗体VH CDR3

<400> 103

Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 104

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13F7抗体VL CDR1

<400> 104

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 105

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13F7抗体VL CDR2

<400> 105

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 106

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13F7抗体VL CDR3

<400> 106

Met Gln Ala Arg Gln Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 107

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15A9抗体VH CDR1

<400> 107

Ser Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 108

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15A9抗体VH CDR2

<400> 108

Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 109

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15A9抗体VH CDR3

<400> 109

Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val

1 5 10

<210> 110

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15A9抗体VL CDR1

<400> 110

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser Leu Asn

1 5 10

<210> 111

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15A9抗体VL CDR2

<400> 111

Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser

1 5

<210> 112

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15A9抗体VL CDR3

<400> 112

Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg Thr

1 5

<210> 113

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A03抗体VH CDR1

<400> 113

Ser Asp Tyr Met Ser

1 5

<210> 114

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A03抗体VH CDR2

<400> 114

Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 115

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A03抗体VH CDR3

<400> 115

Gly Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu

1 5 10

<210> 116

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A03抗体VL CDR1

<400> 116

Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser

1 5 10

<210> 117

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A03抗体VL CDR2

<400> 117

Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 118

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A03抗体VL CDR3

<400> 118

Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser Thr Gly Leu Thr

1 5 10

<210> 119

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A08抗体VH CDR1

<400> 119

Thr Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 120

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A08抗体VH CDR2

<400> 120

Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 121

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A08抗体VH CDR3

<400> 121

Gly Asp Ser Phe Gly Tyr Gly Leu

1 5

<210> 122

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A08抗体VL CDR1

<400> 122

Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala Ser

1 5 10

<210> 123

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A08抗体VL CDR2

<400> 123

Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser

1 5

<210> 124

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A08抗体VL CDR3

<400> 124

Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn Tyr Gln Tyr Val

1 5 10

<210> 125

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-F02抗体VH CDR1

<400> 125

Asn Tyr Tyr Met Gly

1 5

<210> 126

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-F02抗体VH CDR2

<400> 126

Ile Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 127

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-F02抗体VH CDR3

<400> 127

Ile Asp Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp

1 5 10 15

Leu

<210> 128

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-F02抗体VL CDR1

<400> 128

Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser

1 5 10

<210> 129

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-F02抗体VL CDR2

<400> 129

Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 130

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-F02抗体VL CDR3

<400> 130

Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser Ile Thr

1 5 10

<210> 131

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A01抗体VH CDR1

<400> 131

Gly Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 132

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A01抗体VH CDR2

<400> 132

Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 133

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A01抗体VH CDR3

<400> 133

Val Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile

1 5 10 15

<210> 134

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A01抗体VL CDR1

<400> 134

Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser

1 5 10

<210> 135

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A01抗体VL CDR2

<400> 135

Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 136

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A01抗体VL CDR3

<400> 136

Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser Thr Gly Thr His Leu Thr

1 5 10

<210> 137

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A03抗体VH CDR1

<400> 137

Asn Tyr Asp Met Ser

1 5

<210> 138

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A03抗体VH CDR2

<400> 138

Phe Met Asp Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 139

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A03抗体VH CDR3

<400> 139

Arg Gly Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile

1 5 10

<210> 140

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A03抗体VL CDR1

<400> 140

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 141

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A03抗体VL CDR2

<400> 141

Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 142

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A03抗体VL CDR3

<400> 142

Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala Ala Tyr Val Gly Asn Ala

1 5 10

<210> 143

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F07抗体VH CDR1

<400> 143

Ser Tyr Tyr Met Asn

1 5

<210> 144

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F07抗体VH CDR2

<400> 144

Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 145

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F07抗体VH CDR3

<400> 145

Thr Val Ser Gly Tyr Phe Asp Ile

1 5

<210> 146

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F07抗体VL CDR1

<400> 146

Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala Leu Ala

1 5 10

<210> 147

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F07抗体VL CDR2

<400> 147

Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 148

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F07抗体VL CDR3

<400> 148

Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 149

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F11抗体VH CDR1

<400> 149

Ser Tyr Gly Val Ser

1 5

<210> 150

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F11抗体VH CDR2

<400> 150

Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Asn Pro His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 151

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F11抗体VH CDR3

<400> 151

Asp Asn Tyr Gly Met Asp Pro

1 5

<210> 152

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F11抗体VL CDR1

<400> 152

Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Lys Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 153

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F11抗体VL CDR2

<400> 153

Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 154

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F11抗体VL CDR3

<400> 154

Gln Gly Glu Phe Ser Cys Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala

1 5 10

<210> 155

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12抗体VH

<400> 155

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala

20 25 30

Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met

65 70 75 80

Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp

85 90 95

Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly

100 105 110

Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 156

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13B4抗体VH

<400> 156

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Asn Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Lys Thr Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 157

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13F7抗体VH

<400> 157

Gln Val Gln Leu Gln Glu Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Asn Ala Glu Ser Phe Asn Gly Tyr

20 25 30

Ser Trp Thr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 158

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15A9抗体VH

<400> 158

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Asn Leu Lys Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 159

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A03抗体VH

<400> 159

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asp Tyr

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Glu Leu Lys Met

65 70 75 80

Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly

85 90 95

Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 160

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A08抗体VH

<400> 160

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Tyr

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Thr Ala Ser Thr Thr Val Asp Leu Met Ile Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asp

85 90 95

Ser Phe Gly Tyr Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser

<210> 161

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-F02抗体VH

<400> 161

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Tyr

20 25 30

Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr

65 70 75 80

Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ile Asp

85 90 95

Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp Leu Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 162

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A01抗体VH

<400> 162

Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr

1 5 10 15

Pro Leu Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Phe Leu Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile

65 70 75 80

Thr Thr Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Val

85 90 95

Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu

115 120

<210> 163

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A03抗体VH

<400> 163

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr Asp

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Phe Met Asp Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Gly

85 90 95

Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Pro Val

100 105 110

Thr Val Ser Leu

115

<210> 164

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F07抗体VH

<400> 164

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Tyr

20 25 30

Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Thr Val

85 90 95

Ser Gly Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Leu

<210> 165

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F11抗体VH

<400> 165

Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Asn Pro His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys

65 70 75 80

Met Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg

85 90 95

Asp Asn Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 166

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12抗体VL

<400> 166

Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Thr Asn

85 90 95

Val Trp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 167

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13B4抗体VL

<400> 167

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Thr Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Lys Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala Val

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 168

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13F7抗体VL

<400> 168

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ala Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Val Gln Lys Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Arg Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 169

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15A9抗体VL

<400> 169

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys

100 105

<210> 170

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A03抗体VL

<400> 170

Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser

85 90 95

Thr Gly Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 171

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A08抗体VL

<400> 171

Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Gln Val Asn Leu Gly Gln

1 5 10 15

Thr Val Ser Leu Thr Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn

85 90 95

Tyr Gln Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Thr

100 105 110

<210> 172

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-F02抗体VL

<400> 172

Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 173

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A01抗体VL

<400> 173

Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser

85 90 95

Thr Gly Thr His Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 174

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A03抗体VL

<400> 174

Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala

85 90 95

Ala Tyr Val Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu

100 105 110

<210> 175

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F07抗体VL

<400> 175

Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 176

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F11抗体VL

<400> 176

Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn

20 25 30

Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val

65 70 75 80

Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys

85 90 95

Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile

100 105 110

Leu

<210> 177

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12抗体VH

<400> 177

cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60

tgcaccgtct ctggattctc cctcagtacc tatgcagtga cctgggtccg ccaggctcca 120

gggaaggggc tggaatggat cggatacatt aattggcgtg gtgggacatc ctacgcgaac 180

tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240

accagtccga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagatgc tagtagtggt 300

gctgcttttg ggtcttacgg catggacccc tggggcccag ggaccctcgt caccgtctct 360

tca 363

<210> 178

<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12抗体VL

<400> 178

gagctcgata tgacccagac tccatcctcc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60

atcaagtgcc aggccagtca gagcattagt agctacttat cctggtatca gcagaaacca 120

gggcagcctc ccaagctcct gatctatgaa gcatccaaac tggcctctgg ggtcccatcg 180

cggttcagcg gcagtggata tgggacagag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240

gccgatgctg ccacttacta ctgtcaacag ggttatagta gtactaatgt ttggaatgct 300

ttcggcggag gcaccaatgt ggaaatcaaa 330

<210> 179

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12 HC

<400> 179

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala

20 25 30

Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met

65 70 75 80

Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp

85 90 95

Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly

100 105 110

Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 180

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13B4 HC

<400> 180

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Asn Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Lys Thr Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 181

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13F7 HC

<400> 181

Gln Val Gln Leu Gln Glu Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Asn Ala Glu Ser Phe Asn Gly Tyr

20 25 30

Ser Trp Thr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

340 345 350

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

370 375 380

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

385 390 395 400

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

405 410 415

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

420 425 430

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 182

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15A9 HC

<400> 182

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Asn Leu Lys Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 183

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A03 HC

<400> 183

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asp Tyr

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Glu Leu Lys Met

65 70 75 80

Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly

85 90 95

Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 184

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A08 HC

<400> 184

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Tyr

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Thr Ala Ser Thr Thr Val Asp Leu Met Ile Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asp

85 90 95

Ser Phe Gly Tyr Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

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Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

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Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

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Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp Leu Trp

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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

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<220>

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Pro Gly Lys

450

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<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 188

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

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Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

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Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

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Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F11 HC

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245 250 255

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275 280 285

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Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 190

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-C12 LC

<400> 190

Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly

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Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

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Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

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<210> 191

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13B4 LC

<400> 191

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala

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Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Thr Leu Val Ile Tyr

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Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

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Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

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Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

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Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

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210

<210> 192

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 13F7 LC

<400> 192

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ala Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Val Gln Lys Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Arg Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 193

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15A9 LC

<400> 193

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 194

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A03 LC

<400> 194

Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser

85 90 95

Thr Gly Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser

100 105 110

Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu

115 120 125

Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro

130 135 140

Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly

145 150 155 160

Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His

180 185 190

Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val

195 200 205

Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 195

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-A08 LC

<400> 195

Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Gln Val Asn Leu Gly Gln

1 5 10 15

Thr Val Ser Leu Thr Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn

85 90 95

Tyr Gln Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Thr Arg Ser

100 105 110

Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu

115 120 125

Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro

130 135 140

Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly

145 150 155 160

Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His

180 185 190

Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val

195 200 205

Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 196

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P1-F02 LC

<400> 196

Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 197

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A01 LC

<400> 197

Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser

85 90 95

Thr Gly Thr His Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 198

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-A03 LC

<400> 198

Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala

85 90 95

Ala Tyr Val Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu

100 105 110

Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 199

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F07 LC

<400> 199

Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 200

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2-F11 LC

<400> 200

Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn

20 25 30

Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val

65 70 75 80

Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys

85 90 95

Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile

100 105 110

Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

Claims (15)

1.一种针对序列相似家族19成员A5(FAM19A5)蛋白的拮抗剂(“FAM19A5拮抗剂”)，其用于治疗有需要的受试者的组织纤维化。

2.根据权利要求1所述的FAM19A5拮抗剂的用途，其中所述纤维化选自由肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、骨髓纤维化、胰腺纤维化、皮肤纤维化、心脏纤维化、动脉纤维化、关节纤维化、乳腺纤维化、肌肉纤维化、腹膜后纤维化、甲状腺纤维化、淋巴结纤维化、膀胱纤维化、系统性纤维化和胸膜纤维化组成的群组。

3.根据权利要求1或2所述的FAM19A5拮抗剂的用途，其中所述FAM19A5拮抗剂降低组织内细胞外基质蛋白(例如胶原蛋白)的积累。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的FAM19A5拮抗剂的用途，其中所述FAM19A5拮抗剂是特异性结合FAM19A5蛋白的抗体或其抗原结合部分(“抗FAM19A5抗体”)。

5.根据权利要求4所述的FAM19A5拮抗剂的用途，其中所述抗FAM19A5抗体为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

6.根据权利要求4或5所述的FAM19A5拮抗剂的用途，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、12和13，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、24和25。

7.根据权利要求4或5所述的FAM19A5拮抗剂的用途，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：14、15和16，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：26、27和28。

8.根据权利要求4或5所述的FAM19A5拮抗剂的用途，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：17、18和19，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：29、30和31。

9.根据权利要求4或5所述的FAM19A5拮抗剂的用途，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：20、21和22，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：32、33和34。

10.一种体外诊断纤维化或纤维化相关疾病的方法，所述方法包括使FAM19A5拮抗剂与所述受试者的生物样品接触，并测量所述样品中的FAM19A5蛋白水平或FAM19A5 mRNA水平。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述FAM19A5拮抗剂是抗FAM19A5抗体。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、12和13，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、24和25。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：14、15和16，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：26、27和28。

14.根据权利要求11所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：17、18和19，并且所述轻链CDR1，CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：29、30和31。

15.根据权利要求11所述的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：20、21和22，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：32、33和34。

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