CN111304058A - 一种革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片及检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片及检测方法。微流控芯片包括：芯体，其上设有反应腔，反应腔有进口和出口；进液流道，与反应腔的进口相连；排液流道，与反应腔的出口相连；承载体，设于反应腔中，承载体上设有捕获肽，捕获肽可与待测液体中革兰氏阴性菌细胞表面的脂多糖结合，以捕获待测液体中的革兰氏阴性菌；盖体，密封盖装在所述芯体上，并封闭所述反应腔、进液流道和排液流道，盖体和/或芯体包括透光部分，透光部分与所述反应腔对应，以对液体进行透光检测；芯体和/或盖体上设有注液孔，注液孔与所述进液流道相连。微流控芯片能够实现在同一个芯片上实现革兰氏阴性菌的捕获、洗涤、扩增和检测，使用方便。

Description

一种革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片及检测方法

技术领域

本发明涉及一种革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片及检测方法。

背景技术

革兰氏阴性菌是指革兰氏染色反应呈红色的细菌，由于革兰氏阴性菌细胞壁中肽聚糖含量低、脂类含量高，用乙醇处理时脂类物质溶解，细胞壁通透性增强，使龙胆紫极易溶出而使细胞脱色，再经红色染料复染后革兰氏阴性菌即呈红色。革兰氏阴性菌最常见的有沙门氏菌、大肠杆菌和副溶血性弧菌等，它们感染人体或动物，能产生各种毒素、溶血素等致病因子，是多种传染病的病因。传统的革兰氏阴性菌检测方法包括增菌培养筛选及后续计数检测、生化反应鉴定或血清学鉴定等环节，这些传统方法技术成熟、准确性高，所需设备简单，但实验操作繁琐，检测周期长，准备和收尾工作繁重、特异性不足、灵敏度低，而且需要专业操作人员。

申请公布号为CN103484354A的中国发明专利申请提供了一种可提取革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌核酸的核酸提取芯片，该芯片能够将革兰氏阴性菌中的DNA提取出来，但是还需要在实验室内进行PCR扩增和电泳检测，不适用于临床快速检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，解决现有技术中的芯片无法完成检测而不适用于临床快速检测的技术问题；还提供一种革兰氏阴性菌基因检测方法，以实现对革兰氏阴性菌的快速检测。

为实现上述目的，本发明革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片的技术方案是：一种革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，包括：

芯体，其上设有反应腔，反应腔有进口和出口；

进液流道，设于芯体上，与反应腔的进口相连；

排液流道，设于芯体上，与反应腔的出口相连；

承载体，设于反应腔中，承载体上设有捕获肽，当待测液体流经反应腔时，捕获肽与待测液体中革兰氏阴性菌细胞表面的脂多糖结合，以捕获待测液体中的革兰氏阴性菌；

盖体，密封盖装在所述芯体上，并封闭所述反应腔、进液流道和排液流道，盖体和/或芯体包括透光部分，透光部分与所述反应腔对应，以对液体进行透光检测；

芯体和/或盖体上设有注液孔，注液孔与所述进液流道相连。

本发明的有益效果是：反应腔内有承载体，承载体上有捕获肽，当待测液体流过时，捕获肽能够捕获待测液体中的革兰氏阴性菌，将革兰氏阴性菌保持在承载体上，之后可以进行后续的洗涤、PCR扩增(PCR反应液中有荧光标记的探针)等步骤。本发明中，在盖体和/或芯体上有透光部分，在后续的检测过程中能够供光源穿过，对革兰氏阴性菌进行荧光检测。本发明的微流控芯片能够实现在同一个芯片上实现革兰氏阴性菌的捕获、洗涤、扩增和检测，使用方便，自动化程度高，大大减少人为操作和干扰，降低了出现污染和结果偏差的可能性。能够高效的完成临床快速检测。

进一步地，所述承载体上具有被等离子体处理过的固化区域，该捕获肽涂抹于承载体的该固化区域上。承载体等离子体处理后，能够保证捕获肽能够牢固地固化于承载体上。

进一步地，所述承载体一体成型于所述芯体上；

承载体设有两排，两排承载体的排布方向垂直于反应腔进口、出口的直线排布方向；

两排承载体自反应腔的进口至反应腔的出口依次错位交替布置，以在反应腔内形成弯曲的流道；

两排承载体中相向的一端端面形成所述固化区域，且两排承载体中的各固化区域位于同一直线上；

芯体包括沿该直线分割而成的两部分，两部分拼合形成所述芯体。设置依次错位交替布置的两排承载体后，一方面能够减缓液体流动的速度，同时不耽误液体的流动；另一方面能够增加捕获肽的数量，尽可能多的富集革兰氏阴性菌。而将芯体设计为两部分，是为了保证各排承载体的端面均能够被等离子体处理。

进一步地，芯体上还设有废液室，排液通道连通反应腔的出口与废液室，所述盖体或芯体上设有与废液室连通的透气孔。设置废液室后能够防止液体露出，设置透气孔中保证液体能够被顺利地注入反应腔中。

进一步地，所述排液通道为蛇形流道，其具有至少一个弯曲延伸的弯曲段，弯曲段用于防止废液室内的液体倒流至反应腔中。设置弯曲段后有利于防止废液室内的液体倒流，从而避免在使用时影响反应腔内的PCR试剂对革兰氏阴性菌的扩增。

进一步地，所述排液通道的出口处以及废液室均具有使用时位于下侧的内平面，所述废液室的内平面位于排液通道的出口处内平面的下方，以在排液通道的出口处形成下沉台阶。设置下沉台阶后，废液室内的液体不易倒流至反应腔内。

进一步地，所述排液通道包括位于排液通道出口处的收口渐变段，收口渐变段由反应腔至废液室流道逐渐变窄。收口渐变段能够防止废液室内的液体倒流至反应腔内。

进一步地，所述盖体为覆盖于芯体上的薄膜。由于薄膜有一定的柔软性，能够保证薄膜与芯体的各处之间均紧密贴合，防止反应腔内的液体外漏。

进一步地，所述注液孔包括待测液体注液孔、清洗液注液孔和PCR反应液注液孔；

待测液体注液孔用于经进液流道向反应腔加入待测液体；

清洗液注液孔用于经进液流道向反应腔加入革兰氏阴性菌清洗液；

PCR反应液注液孔用于经进液流道向反应腔加入PCR反应液，PCR反应液中有荧光标记的探针；

所述待测液体注液孔位于清洗液注液孔的靠近反应腔的下游位置。待测液体注液孔位于清洗液注液孔的下游，在加入清洗液时能够将进液流道内的待测液体全部冲入反应腔内，避免有待测液体残留在进液流道中，从而导致检测结果不准的情况发生。

本发明革兰氏阴性菌基因快速检测方法的技术方案是：一种革兰氏阴性菌基因快速检测方法，

通过反应腔内凸起上的捕获肽捕获革兰氏阴性菌，并在反应腔内依次对革兰氏阴性菌进行清洗、高温裂解、扩增和荧光检测；

在对革兰氏阴性菌进行高温裂解、扩增时，首先在反应腔内加入带有荧光标记探针的PCR反应液，再进行高温加热以依次进行高温裂解、扩增。

本发明的有益效果是：本发明的微流控芯片能够实现在同一个芯片上实现革兰氏阴性菌的捕获、洗涤、扩增和检测，使用方便，自动化程度高，大大减少人为操作和干扰，降低了出现污染和结果偏差的可能性。能够高效的完成临床快速检测。而且，在具体使用时，先加入带有荧光标记探针的PCR反应液，再进行高温加热进行高温裂解、扩增，防止先裂解后加入PCR反应液时，PCR反应液容易将部分裂解出的DNA冲走，从而影响检测结果。

附图说明

图1为本发明革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片实施例的立体图(图中未画出薄膜)；

图2为本发明革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片实施例的右视图；

图3为本发明革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片实施例中芯体在未拼装时的示意图；

附图标记说明：100-芯体；11-进液流道；12-反应腔；13-排液流道；14-废液室；15-凸起；16-第一注液孔；17-第二注液孔；18-第三注液孔；19-透气孔；110-芯体分块；111-第一侧面；112-第二侧面；200-薄膜。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，即所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。

因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

需要说明的是，术语“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

本发明的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片的具体实施例1：

如图1至图3所示，本实施例中将革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片简称为微流控芯片，微流控芯片包括芯体100和薄膜200，薄膜200覆盖在芯体100上，在芯体100上开设有微流道、反应腔12和废液室14，其中，微流道包括与反应腔12的进口相连的进液流道11，还包括连接反应腔12和废液室14的排液流道13。在反应腔12中设置有交错排列的凸起15，凸起15的端部固化有捕获肽，捕获肽能够与革兰氏阴性菌细胞表面的脂多糖进行结合，以在反应腔12中富集革兰氏阴性菌。本实施例中，芯体100采用聚二甲基硅氧烷材质制成，而薄膜200采用聚甲基丙烯酸甲酯材质制成。

如图1所示，反应腔12的进口与进液流道11之间、出口与排液流道13之间均弧形过渡，即进口处由进液流道11至反应腔12逐渐变宽，反应腔12至排液流道12逐渐变宽。这样设置的目的在于，一方面，避免液体在相交处有死角而导致液体残留；另一方面，进液流道11的流道宽小于反应腔12的流道宽，降低液体的流动速度，延长液体流经反应腔12的时间，有利于捕获肽更好的捕获革兰氏阴性菌；还有，排液流道13的流道宽小于反应腔12的流道宽，能够避免废液室14内的液体倒流至反应腔12内，对反应腔12内的检测产生影响。而且，由图1可以看出，排液流道13的出口处逐渐变窄，进一步防止液体倒流。

如图1所示，排液流道13为蛇形流道，有多个弯曲段，而且排液流道13的与废液室14相连处有下沉台阶，下沉台阶的目的是进一步避免废液倒流。具体地，废液室14和排液流道13均有使用时位于下方的内平面，废液室14的内平面低于排液流道13的内平面。本实施例中，排液流道13设计为蛇形流道的目的还是为了防止液体倒流。另外，在废液室14中还容纳有吸水材料，此处的吸水材料为高分子吸水树脂，吸水后转变为水凝胶状态，避免废液渗出。

如图1所示，芯体100包括两面，薄膜200在组装后覆盖在其中一面上，定义该面为第一侧面111，则相对的另一面则为第二侧面112。使用时，第一侧面111朝上、第二侧面112朝下。无论是微流道、反应腔12还是废液室14，均设置在芯体100的第一侧面111上，未覆盖薄膜200时处于敞开的状态。如图1和图2所示，在芯体100的第二侧面112上开设有注液孔，其中，由图1可以看出，进液流道11实际上为“Y”字形的流道，进液流道11的主干流道与反应腔12相连。注液孔包括与进液流道11的两个分支流道相连的第一注液孔16和第二注液孔17，还有与进液流道11的主干流道相连的第三注液孔18，其中，第三注液孔18更加靠近反应腔12。在薄膜200上开设有透气孔19，开设透气孔19的目的是保证微流道整体能够与外部相连通，方便液体的注入，透气孔19与废液室14相连通，使用时在透气孔19上覆盖透气不透水的滤膜。本实施例中的滤膜由多层高密度玻璃纤维制成，具体为聚四氟乙烯膜PTFE材质。

如以上所言，本发明中，在凸起15的表面固化有捕获肽，捕获肽为能够与革兰氏阴性菌细胞表面的脂多糖结合的抗菌肽，凸起15上固化有捕获肽的一端端面为圆弧面。固化的方式是，先将凸起15的圆弧端面进行等离子体处理，在凸起15的该圆弧端面获得羟基表面官能团，然后再在该圆弧端面涂抹捕获肽。而对圆弧端面进行等离子体处理的方式通常为高能活性基因轰击表面的方式。

如图1所示，上述的凸起15有两排，两排凸起15的有捕获肽的一端位于同一直线上，两排凸起15的排布方向垂直于液体的整体流动方向(此处的整体流动方向是相对于反应腔12的进口和出口的直线排布方向而言的)，而且由于凸起15为交错排列布置的形式，使得当液体流动时，液体呈现弯曲流动的形式。

如图3所示，为了在每个凸起15上均固化捕获肽，本实施例中，芯体100包括分体相连的两个芯体分块110，芯体100沿着上述的直线分为两个芯体分块110，而使得各排凸起15都位于各自芯体分块110的边缘处。这样设置的目的在于，凸起15在进行等离子处理时，需要进行表面轰击，凸起15位于边缘处能够保证各凸起15的端部均能够被离子轰击到。

如图3所示，进液流道11也位于两芯体分块110的相交直线上，在每个芯体分块110的相对的侧面上均开设有凹槽，两个凹槽对拼后形成完整的进液流道11。其中，第三注液孔18也位于该相交直线上，使得第三注液孔18也由位于两芯体分块110上的两个凹槽一起形成。

本发明中的微流控芯片的制备步骤如下所示：

(1)采用SolidWorks设计芯片模型；其中，芯体100厚度为4mm-8mm，长40mm-70mm，宽50mm-60mm。各注液孔和透气孔19的直径为0.5mm-2mm；反应腔12长为10mm-30mm、宽为3mm-10mm、高为0.3mm-1mm，凸起15为带有圆弧形凸起的柱体，圆弧直径为0.8mm-2mm，总长度为1.5mm-5mm。其中，芯体100中微流道宽为0.5mm-1.5mm、高为0.3mm-1mm；废液室14的腔体长20mm-40mm、宽10mm-20mm，高为2mm-5mm。

优选地，芯片厚度为5mm,长55mm,宽55mm。各注液孔和透气孔19直径为1mm；反应腔长为22mm、宽为5mm、高为0.5mm；凸起15的圆弧直径为1mm，凸起15总长度2.4mm；芯体100中进液流道11宽为1mm、高为0.5mm、长为10mm；排液流道13为蛇形通道，宽为0.3mm、高为0.5mm，与废液室14相邻的直流道宽0.5mm；废液室14长40mm、宽20mm，高为3mm。

(2)应用光刻与湿法腐蚀技术制作玻璃母模，然后采用热压成型技术制作得到芯体100所对应的两块聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)阳模。

(3)将重量比为10:1的聚二甲基硅氧烷(PDMS)和固化剂的混合物放置在混合机内以2000rpm的转速混胶1分钟，然后以2200rpm的转速去气2分钟；将混合物缓慢浇注在上述的模具中，置于真空箱内去气处理，直至没有气泡为止；然后置于65℃烘箱中静置固化8小时。将两个芯体分块110脱模后，在芯体分块110上打孔、开槽。

(4)将两个芯体分块110均以凸起14的圆弧端面朝上的方式放入等离子体机内，以以1％O₂、100mW的条件等离子体处理1分钟，获得羟基表面官能团。然后用4％的3-MPS(3-三甲氧基巯丙基硅烷)乙醇溶液在室温下硅烷化30分钟，之后用乙醇洗涤芯片，在室温下与1mM 4-GMBS溶液一起温育30分钟(GMBS：异型双功能交联剂，4-马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯)；完成上述步骤后在凸起14的圆弧端面涂抹抗菌肽，然后放入4℃冰箱内静置12小时，使抗菌肽与凸起14表面的GMBS充分反应完成固化。

(5)使用粘连剂粘接两块芯体分块110，在废液室14中放置高分子吸水树脂。

(5)将薄膜200键合在芯体100上。

其中，在步骤(3)中，抗菌肽的浓度需要根据微流控芯片的使用要求进行定量。

本发明以对尿液中的大肠杆菌为例说明微流控芯片的使用过程：

(1)从第三注液孔18中缓慢注入待检尿液，尿液流经反应腔12时弯曲流动，凸起15上的捕获肽对尿液中的大肠杆菌进行富集，尿液沿排液流道13流至废液室14中。

(2)从第二注液孔17加入清洗缓冲液WB(如75％-80％乙醇)，对富集在反应腔12中的大肠杆菌进行洗涤处理，之后冲洗进液流道11多次并吹干反应腔，以充分清洗进液流道11中的杂质，废液排至废液室14。

(3)从第一注液孔16中加入20-25ul核酸扩增/检测试剂(如除模板外的实时荧光PCR反应液，主要成分包括DNA聚合酶、dNTP混合物、特定引物及荧光标记的探针、Mg2+等)，与凸起上富集的大肠杆菌接触。

(4)将微流控芯片置在外部平台控制装置，启动温度控制模块开始核酸扩增过程。设置热循环为：预变性95℃5min；变性94℃30s、退火57℃30s、延伸72℃40s，循环30-40次；终延伸72℃5min。

(5)核酸扩增完成后，启动外部平台的信号检测模块，利用CCD光源进行荧光检测与分析。

应当说明的是，本实施例中，在进行荧光检测时，薄膜200位于芯体100的上方。

本实施例中，第一注液孔16用来向反应腔12中注入PCR反应液，从而形成PCR反应液注液孔；第二注液孔17用来向反应腔12中注入清洗液，从而形成清洗液注液孔；第三注液孔18用来向反应腔12中注入待测液体，从而形成待测液体注液孔。

本实施例中，排液流道中的出口处逐渐变窄，从而形成收口渐变段。

本实施例中，每个芯体分块110均构成芯体的分割而成的两部分。而凸起15的弧形端面形成用来固化捕获肽的固化区域。而凸起15作为捕获肽的承载体。

本实施例中，薄膜200的作用是能够与芯体100配合，而封闭反应腔12和微流道，从而使得薄膜200形成了盖体。

本发明的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片的具体实施例2：

本实施例中，芯体、薄膜、滤膜的材质与实施例1的不同，其中，芯体选用单晶硅片、石英玻璃、聚碳酸酯等材质；薄膜选用聚丙烯、聚二甲基硅氧烷、聚酯薄膜PET等材质；滤膜选用聚偏氟乙烯PVDF、parafilm封口膜等材质。

本发明的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片的具体实施例3：

实施例1中，在芯体上仅设置有一个反应腔，本实施例中，可以在芯体上设置多个反应腔，各个反应腔可以共用一个废液室，也可以单独设置废液室。使用时，可以对多种待测液体进行同时检测。同样地，也可以在不同的反应腔对同一待测液体的不同性质进行检测。

本发明的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片的具体实施例4：

实施例1中，在反应腔内设有两排承载体，承载体一体成型在芯体上，两排承载体位于芯体不同部分的边缘处，保证可以进行等离子体处理。本实施例中，承载体的形状可以根据实际情况进行改变。另外，承载体与芯体之间的固定方式可以进行更改，比如采用粘接等。当采用粘接的方式连接承载体与芯体时，芯体可以为完整的整体，将每个承载体分别单独等离子体处理后再粘接到芯体上。

本发明的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片的具体实施例5：

实施例1中，排液流道为蛇形流道，排液流道的出口处为内收渐变段，排液流道的出口处有下沉台阶，以及废液室的吸水材料这四处设计的目的均是在于为了防止废液室内高分析吸水树脂吸收液体后倒流回渗。本实施例中，可以仅采用以上四处设计的其中一处或任意两处。再或者，本实施例中，可以将废液室取消，使得液体直接能够排出芯片外部。

本发明的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片的具体实施例6：

实施例1中，薄膜形成盖体，薄膜整体均为透明材质，其中与反应腔对应的部分形成透光部分。本实施例中，用玻璃盖板来代替薄膜，玻璃盖板可以为整体透明的材质，也可以仅在与反应腔对应之处有透光部分。当盖体为玻璃等硬质材料时，可以将注液孔开设在盖体上，或者也可以同时在盖体和芯体上设置注液孔。或者，当将下沉台阶取消后，可以将微流控芯片倒置使用，此时可以将透气孔设置在芯体上。

本发明的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片的具体实施例7：

实施例1、实施例6中，透光部分均位于盖体上，本实施例中，可以将透光部分设置在芯体上，对应的，需要用透光的材质来制作芯体。如高透聚丙烯PP材质，也可通过减薄与反应腔相对的芯体厚度来增强透光性。

本发明的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片的具体实施例8：

实施例1中，待测液体、清洗液和PCR反应液均对应有各自的注液孔，本实施例中，仅设置一个注液孔，各液体均可由该注液孔注入。

本发明的革兰氏阴性菌基因检测方法的具体实施例，检测方法与上述实施例中的一致，在此不再赘述。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，本发明的专利保护范围以权利要求书为准，凡是运用本发明的说明书及附图内容所作的等同结构变化，同理均应包含在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，其特征在于：包括：

芯体，其上设有反应腔，反应腔有进口和出口；

进液流道，设于芯体上，与反应腔的进口相连；

排液流道，设于芯体上，与反应腔的出口相连；

承载体，设于反应腔中，承载体上设有捕获肽，当待测液体流经反应腔时，捕获肽与待测液体中革兰氏阴性菌细胞表面的脂多糖结合，以捕获待测液体中的革兰氏阴性菌；

盖体，密封盖装在所述芯体上，并封闭所述反应腔、进液流道和排液流道，盖体和/或芯体包括透光部分，透光部分与所述反应腔对应，以对液体进行透光检测；

芯体和/或盖体上设有注液孔，注液孔与所述进液流道相连。

2.根据权利要求1所述的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，其特征在于：所述承载体上具有被等离子体处理过的固化区域，该捕获肽涂抹于承载体的该固化区域上。

3.根据权利要求2所述的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，其特征在于：所述承载体一体成型于所述芯体上；

承载体设有两排，两排承载体的排布方向垂直于反应腔进口、出口的直线排布方向；

两排承载体自反应腔的进口至反应腔的出口依次错位交替布置，以在反应腔内形成弯曲的流道；

两排承载体中相向的一端端面形成所述固化区域，且两排承载体中的各固化区域位于同一直线上；

芯体包括沿该直线分割而成的两部分，两部分拼合形成所述芯体。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，其特征在于：芯体上还设有废液室，排液通道连通反应腔的出口与废液室，所述盖体或芯体上设有与废液室连通的透气孔。

5.根据权利要求4所述的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，其特征在于：所述排液通道为蛇形流道，其具有至少一个弯曲延伸的弯曲段，弯曲段用于防止废液室内的液体倒流至反应腔中。

6.根据权利要求4所述的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，其特征在于：所述排液通道的出口处以及废液室均具有使用时位于下侧的内平面，所述废液室的内平面位于排液通道的出口处内平面的下方，以在排液通道的出口处形成下沉台阶。

7.根据权利要求4所述的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，其特征在于：所述排液通道包括位于排液通道出口处的收口渐变段，收口渐变段由反应腔至废液室流道逐渐变窄。

8.根据权利要求1-3中任意一项所述的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，其特征在于：所述盖体为覆盖于芯体上的薄膜。

9.根据权利要求1-3中任意一项所述的革兰氏阴性菌基因检测用微流控芯片，其特征在于：所述注液孔包括待测液体注液孔、清洗液注液孔和PCR反应液注液孔；

待测液体注液孔用于经进液流道向反应腔加入待测液体；

清洗液注液孔用于经进液流道向反应腔加入革兰氏阴性菌清洗液；

PCR反应液注液孔用于经进液流道向反应腔加入PCR反应液，PCR反应液中有荧光标记的探针；

所述待测液体注液孔位于清洗液注液孔的靠近反应腔的下游位置。

10.一种革兰氏阴性菌基因快速检测方法，其特征在于：通过反应腔内凸起上的捕获肽捕获革兰氏阴性菌，并在反应腔内依次对革兰氏阴性菌进行清洗、高温裂解、扩增和荧光检测；

在对革兰氏阴性菌进行高温裂解、扩增时，首先在反应腔内加入带有荧光标记探针的PCR反应液，再进行高温加热以依次进行高温裂解、扩增。

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