CN111297763B

CN111297763B - 一种具有美白淡斑功效的组合物及其应用

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Publication number: CN111297763B
Application number: CN202010288916.7A
Authority: CN
Inventors: 张丽
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2020-04-14
Filing date: 2020-04-14
Publication date: 2022-02-22
Anticipated expiration: 2040-04-14
Also published as: CN111297763A

Abstract

本发明涉及一种美白淡斑组合物及其应用，并提供了一种功效显著的美白淡斑面膜。本发明所述的一种具有美白淡斑功效的组合物，包括冻梨提取物0.001‑0.008%和二月兰提取物0.001‑0.008%。申请人通过研究发现，冻梨提取物与未经冷冻的白梨提取物相比，具有更好的酪氨酸酶抑制活性。将冻梨提取物和二月兰提取物复配，具有显著的协同增效的作用。在面膜中进一步添加营养成分，能够有效促进冻梨提取物和二月兰提取物美白淡斑功效的发挥，明显提高面膜的美白淡斑功效。

Description

一种具有美白淡斑功效的组合物及其应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种具有美白淡斑功效的组合物及其应用。

背景技术

近年来，随着生活节奏的加快以及环境污染的加剧，人们面对的皮肤问题越来越多，肤色暗沉、色素沉着已成为普遍问题。

对于上述肤色暗沉、色素沉着问题的发生机制，还有部分不明确的地方，一般认为激素的异常或来自日光的紫外线刺激导致黑色素过速增长和分布不均是主要原因。黑色素代谢途径目前已经比较清晰：在黑色素细胞中，酪氨酸在酪氨酸酶等酶系的作用下经多巴、多巴醌、多巴色素、二羟基吲哚等中间体逐步转化为真黑色素，随后经黑色素细胞树突顶部转移到表皮基底层细胞,随着细胞的新陈代谢而进入角质层,最后随角质化细胞脱落。

对于抑制上述黑色素生成的美白剂，一直以来是化妆品行业的研究重点，目前公认的美白剂有传明酸、苯乙基间苯二酚、阿魏酸、曲酸及其衍生物、光甘草定、熊果苷、维生素C及其衍生物等。市面上针对美白的活性物种类繁多，但是很多人仍无法为自己选择一种满意的产品。究其原因，主要是功效单一、各组分协同性差、效果不明显、渗透性差和有刺激等。其作用原理单一，产生的美白效果也有限，需要复配才能达到更佳的美白效果。

充分开发天然植物原料，获得具有美白祛斑功效的化妆品，一直是化妆品领域研究的热点难点。申请人多年来一直致力于美白祛斑的研究，经过大量实验筛选，发现了冻梨提取物以及二月兰提取物所具有的美白淡斑功效，并对此开展了一系列研究。

冻梨，又名冻秋梨，由普通白梨冰冻变成乌黑色制成，其特点是色变而味愈佳，宜久存不易腐烂，不怕严寒冷冻，其果汁具有润肺止咳、清胃泻火、醒酒提神等功效。本发明的冻梨采用白梨(Pyrus bretschneideri)，蔷薇科梨属果树的果实制备。

目前，冻梨主要应用于食品领域，是我国北方尤其是东北地区一种常见的食品。冻梨原料开发季节性强，储藏条件要求严格，储存不当易发生霉变、氧化等现象，在化妆品中的应用较少，尚处于起步阶段。发明专利CN107982158A公开了一种玻尿酸水润原液，首次提出了冻梨提取物在化妆品中的应用，其中冻梨提取物的加入能够提高护肤品的滋润、营养、清脂、养颜功效。然而，冻梨在化妆品中具体发挥的功效尚不明确，对于冻梨的保湿机理以及冻梨发挥的其他功效缺乏明确的研究。目前，市场上仍旧多采用未加工的白梨作为化妆品的添加组分。

二月兰，又叫诸葛菜(Orychophragmus violaceus)，十字花科植物，广泛分布于中国东北、华北到华东、华中及西北地区。茎、叶可食，富含胡萝卜素和B族维生素，具有降血脂血压功效。二月兰种子油具有润滑、保护皮肤的功能，是一种多效型的皮肤调理剂。

目前，对于二月兰功效成分的研究主要集中于二月兰种子油及其作为油脂的润滑、护肤功效，化妆品中对于二月兰的应用也局限于二月兰种子油，关于二月兰全草的研究较少。对于二月兰全草的美容护肤功效，尤其以二月兰全草为原料开发的天然护肤品的应用研究及功效测试甚少，二月兰与其他组分的配伍更是缺乏明确的研究。

发明内容

为解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种具有美白淡斑功效的组合物，确定了各组分的最佳复配比例，并提供了一种功效显著的美白淡斑面膜。

申请人多年来一直致力于美白祛斑的研究，希望通过天然植物原料的开发，获得具有美白祛斑功效的化妆品。经过大量实验筛选，首次发现冻梨以及二月兰提取物具有良好的美白功效。与普通白梨相比，将白梨加工成冻梨能够显著提高其美白效果。申请人进一步研究了冻梨提取物和二月兰提取物的美白机理，经测试，本发明的冻梨提取物和二月兰提取物均具有良好的酪氨酸酶抑制活性。进一步将冻梨提取物和二月兰提取物复配，可获得明显的酪氨酸酶抑制活性的提高，证明了二者同时使用具有协同增效的作用。本发明还提供了一种包含冻梨提取物和二月兰提取物的美白淡斑面膜，通过实验证明了该面膜的美白祛斑功效，并通过肌肤营养成分的添加，改善肌肤状况，进一步提高了美白淡斑组合物的吸收效果，获得了具有更好的美白淡斑功效的面膜产品。

本发明提供了一种具有美白淡斑功效的组合物，以质量百分含量计，包括冻梨提取物0.001-0.008％和二月兰提取物0.001-0.008％。

所述冻梨提取物的制备方法为：取成熟的白梨，于-12～-18℃下冷冻60～75天，取出后置于冷水，浸泡25～30分钟，褪去果实外的冰壳，将果实榨取汁液，所得汁液真空浓缩，用冷冻干燥机干燥，即得冻梨提取物。

所述二月兰提取物的制备方法为：取干燥的二月兰全草，用甲醇在室温下浸泡10～12小时，过滤，提取液减压浓缩、干燥成粉末，即得二月兰提取物。

实验结果表明，冻梨提取物和二月兰提取物均具有良好的酪氨酸酶抑制活性，从而证明了冻梨提取物和二月兰提取物的美白机理。申请人通过对比实验发现，将白梨加工成冻梨能够显著提高其美白效果。特别的，将冻梨提取物和二月兰提取物复配，所得组合物获得明显的酪氨酸酶抑制活性的提高，证明了冻梨提取物和二月兰提取物同时使用，具有显著的协同增效的作用。

本发明提供了一种包含所述具有美白淡斑功效的组合物的美白淡斑面膜，作为具有美白淡斑功效的组合物的应用。一种含有具有美白淡斑功效的组合物的美白淡斑面膜，以质量百分含量计，组成如下：冻梨提取物0.002、二月兰提取物0.002、异鲸蜡硬脂醇聚醚-20 1.70、聚甘油-3-月桂酸酯1.50、鲸蜡硬脂醇2.00、1,3-丁二醇5.00、泛醇0.20、海藻糖0.50、羟丙基瓜尔胶0.20、卡波姆0.30、精氨酸0.10、精制水余量。

所述的美白淡斑面膜，其制备方法如下：(1)按重量百分比取异鲸蜡硬脂醇聚醚-20 1.70、聚甘油-3-月桂酸酯1.50、鲸蜡硬脂醇2.00，加热到75～80℃，搅拌均匀；(2)按重量百分比取1,3-丁二醇5.00、海藻糖0.50、羟丙基瓜尔胶0.20、卡波姆0.30，加精制水搅拌溶解，加热到70～80℃，加入步骤(1)的油相组合物，搅拌均匀；(3)冷却至25～35℃，加入冻梨提取物0.002、二月兰提取物0.002、泛醇0.20、精氨酸0.10，加入精制水至100，搅拌均匀；(4)冷却至室温，得到美白淡斑面膜，密封保存。

其中，冻梨提取物发挥了美白保湿、活肤抗皱、清热去脂的功效，与常用的白梨相比，美白功效更加显著。二月兰提取物具有美白淡斑、润肤养颜的功效。冻梨提取物和二月兰提取物共同使用，协同增效，有助于更好的实现斑点淡化、暗沉改善、肌肤白净的效果，达到亮颜嫩肤的目的。1,3-丁二醇、泛醇均属于高效的保湿剂，海藻糖、羟丙基瓜尔胶、卡波姆在调节体系黏度的同时，进一步发挥了保水补水的作用。精氨酸作为小分子氨基酸，可以增加皮肤营养，抵抗肌肤衰老，用于面膜基质，能够促进冻梨提取物和二月兰提取物所具有的美白淡斑功效的发挥，进一步提高面膜的美白淡斑功效。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1、通过对天然植物的系统研究，申请人发现冻梨提取物和二月兰提取物具有显著的美白淡斑功效。并且，与普通白梨相比，将白梨加工成冻梨能够显著提高美白效果。

2、创造性的将冻梨提取物和二月兰提取物复配使用，获得了显著的协同增效的作用，有助于组合物美白功效的提升。解决了植物提取物功效单一、各组分协同性差、效果不明显的技术问题。

3、本发明的美白淡斑面膜可快速被皮肤全面吸收，深入肌肤底层补充水份，明显改善皮肤干燥粗糙的情况，具有良好的斑点淡化、暗沉改善、肌肤白净的效果，达到亮颜嫩肤的目的；在面膜基质中添加精氨酸，可以营养肌肤，改善皮肤状态，促进冻梨提取物和二月兰提取物的吸收，从而使其美白淡斑功效更好的发挥，显著提高面膜的美白祛斑功效；本发明提供的美白淡斑面膜各组分相互协同，多重修复肌肤，安全无刺激，制备方法简单，条件可控，工艺稳定。

具体实施方式

本发明提供一种美白淡斑组合物及美白淡斑面膜，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数。需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的原料来源如下：

本发明采用的白梨为北京市门头沟区出产的京白梨，挑选8月下旬成熟的优质白梨果实；

本发明采用的二月兰取自河北省定州市的苗圃场，4月中旬采摘全草；

本发明采用的其他试剂、材料无特殊说明，均为普通市售产品。

以下通过实施例对本发明作进一步说明，阐述冻梨提取物和二月兰提取物在美白祛斑防治中的有益效果：

一、提取物对纯化蘑菇酪氨酸酶的抑制作用：

为了研究冻梨提取物对酪氨酸酶的抑制作用，申请人分别制备了冻梨提取物与未经冷冻的白梨提取物，未经冷冻的白梨提取物作为对照，测试了二者的酪氨酸酶抑制活性。同时，申请人采用相同的测试方法测试了二月兰提取物的酪氨酸酶抑制活性，以及冻梨提取物和二月兰提取物构成的组合物的酪氨酸酶的抑制作用。

实施例1：冻梨提取物的制备

冻梨提取物通过以下方法制备：取成熟的白梨果实，于-16℃下冷冻70天，取出后置于冷水，浸泡30分钟，褪去果实外的冰壳，将果实榨取汁液，所得汁液真空浓缩，用冷冻干燥机干燥，即得冻梨提取物。

对比例1：白梨提取物的制备

白梨提取物通过以下方法制备：将成熟的白梨果实放入榨汁机中榨取汁液，所得汁液真空浓缩，用冷冻干燥机干燥，即得白梨提取物。

实施例2：二月兰提取物的制备

取干燥的二月兰全草，用甲醇在室温下浸泡10小时，过滤，提取液减压浓缩、干燥成粉末，即得二月兰提取物。

组合物1：组合物1的制备

将实施例1与实施例2的提取物按照质量比1：1称量，混合均匀，即得到组合物1。

试验方法：将蘑菇酪氨酸酶用于研究实施例1、对比例1和实施例2制备的提取物的酪氨酸酶抑制活性。将酪氨酸酶溶解于1/15M的磷酸缓冲液，所述缓冲液pH＝6.8，使酶溶液的浓度为368U/mL。作为底物，在1/15M、pH＝6.8的磷酸缓冲液中溶解L-3，4-二羟基苯丙氨酸(L-DOPA)，使L-DOPA浓度为5mM/mL。将实施例和对比例的提取物用蒸馏水配制成0.01、0.02、0.04、0.08g/L 4个浓度。在25℃，依次向试管中加入5mM的L-DOPA 0.8mL、1/15M、pH＝6.8的磷酸缓冲液1.2mL以及0.1mL的受试物，阴性对照组加入等量无菌水，37℃孵育5min，再加入368U/mL的蘑菇酪氨酸酶0.3mL，调节紫外分光光度计的波长为A475，测定反应0.5min和2min后的光吸收值，用L-DOPA的自身氧化作参比，实验重复3次。

根据以下公式计算酶抑制率＝[(A-B)-(C-D)]/(A-B)；

其中：A：阴性对照2分钟时475nm处吸光度；B：阴性对照0.5分钟时475nm处吸光度；C：受试物2分钟时475nm处吸光度；D：受试物0.5分钟时475nm处吸光度。

实验数据经统计后显示0.01-0.08g/L的提取物对酪氨酸酶活性具有抑制作用，且随浓度增加，抑制作用也逐渐增加，试验结果见表1。

表1：提取物对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用

通过对实验结果的分析可见，实施例1、2和对比例1的提取物均具有一定的酪氨酸酶抑制活性，证明了本申请的冻梨提取物和二月兰提取物所具有的美白淡斑效果机理。实施例1和对比例1的酶抑制率比较表明，冻梨提取物比未经冷冻的白梨提取物相比，具有更好的酪氨酸酶抑制活性。申请人惊喜的发现，将冻梨提取物和二月兰提取物复配，所得组合物在0.01～0.08g/L的浓度范围内，获得了明显的酪氨酸酶抑制活性的提高。从原理上证明了冻梨提取物和二月兰提取物同时使用，能够取得比单一组分更好的美白淡斑效果。

二、提取物的组合物对B16小鼠黑色素瘤细胞内酪氨酸酶活性的抑制作用：

在实验一研究的基础上，申请人进一步测试了冻梨提取物、二月兰提取物及其组合物对B16小鼠黑色素瘤细胞内酪氨酸酶活性的抑制作用。

实施例1、对比例1、实施例2和组合物1的制备方法与实验一相同。

试验方法：取B16小鼠黑色素瘤细胞，将培养的细胞消化配置成单个细胞悬液后，以1×10⁵/mL细胞密度接种于6孔板，将6孔板放入CO₂孵箱，在37℃、5％CO₂及饱和湿度条件下，培养24小时后添加含受试物的培养液2mL，72h后消化并收集细胞。用离心机以1000r/min频率离心5min，用磷酸缓冲液洗2次，加入磷酸缓冲液制成细胞悬液。计数细胞密度后，调整细胞密度为1×10⁶/mL。取1mL细胞悬液离心后弃去上清液，加入1％Triton X-100(用PH＝7.4的磷酸缓冲液配制)1mL，迅速放入-80℃冰箱冷冻，30min后取出在37℃溶解，加入5mM的L-DOPA 2mL。调节紫外分光光度计的波长为A475，测定即时反应的光吸收值；再置于37℃条件下30min后测定光吸收值，均用L-DOPA的自身氧化作为参比，实验重复3次。

根据以下公式计算酶抑制率＝[(A-B)-(C-D)]/(A-B)；

其中：A：阴性对照组37℃孵育30分钟后475nm处吸光度；B：阴性对照组37℃孵育前475nm处吸光度；C：受试物组37℃孵育30分钟后475nm处吸光度；D：受试物组37℃孵育前475nm处吸光度；试验结果见表2。

表2：冻梨提取物和二月兰提取物对B16细胞酪氨酸酶活性的影响。

受试物	浓度(g/L)	酶抑制率(％)
			阴性对照	0	0
实施例1	0.01	6.33±1.05
				0.02	25.15±2.42
	0.04	41.57±3.09
				0.08	45.87±1.09
对比例1	0.01	2.74±1.88
				0.02	13.23±1.62
	0.04	20.82±2.26
				0.08	24.45±2.31
实施例2	0.01	5.92±1.37
				0.02	24.15±3.51
	0.04	39.57±1.42
				0.08	42.87±2.50
组合物1	0.01	10.55±3.51
				0.02	46.57±1.24
	0.04	81.82±1.60
				0.08	95.38±2.01

实验数据表明，0.01～0.08g/L的冻梨提取物和二月兰提取物对活体B16细胞的酪氨酸酶的活性和细胞内黑素含量有较为明显抑制作用，且随着浓度的增加其对活体细胞酪氨酸酶活性的抑制作用越强。特别的，将冻梨提取物和二月兰提取物组合使用时，比使用单一组分或者将两种组分简单叠加，所得对活体B16细胞的酪氨酸酶的活性的抑制作用有了明显的提高，进一步证明了冻梨提取物和二月兰提取物组合使用能够获得协同增效的作用。

三、皮肤刺激性试验

家兔急性皮肤刺激试验：白色家兔4只，剪去脊柱两侧的被毛，去毛面积两侧各为2×3cm²，24h后确认无皮肤损伤，取0.08g/L的组合物1涂布在已去毛的兔背右侧皮肤上，左侧用蒸馏水作对照，覆盖2层纱布和称量纸，胶布固定。持续4h后，取下纱布，洗去残留物，观察去除受试物后的1h、24h、48h、72h的皮肤刺激反应和恢复情况，计算刺激反应的平均分值，作出评价。评价结果见表3。

表3组合物1对家兔皮肤刺激试验结果。

结果表明，本申请所述的含有冻梨提取物和二月兰提取物的组合物1，对家兔急性皮肤刺激反应的红斑、水肿形成评分之和的均值最高为0。根据评判标准，表明组合物1对家兔皮肤无刺激性。本申请所述的具有美白淡斑功效的组合物无皮肤刺激性，使用安全。

四、美白淡斑面膜的制备及功效评价

为了证明本发明的美白淡斑组合物在实际应用中的有效性，本申请提供了一种含有美白淡斑组合物的美白淡斑面膜。

采用问卷调查的方式，通过消费者评价测试面膜的美白淡斑功效。设计了含有美白淡斑组合物的美白淡斑面膜1、2和对照例1、2进行效果对比，以证明冻梨提取物和二月兰提取物以及其他添加组分在面膜中发挥的作用。

按质量百分含量计，美白淡斑面膜的组成如表4：

表4：美白淡斑面膜组分表

所述的美白淡斑面膜，其制备方法如下：(1)按表4所述的重量百分比，取异鲸蜡硬脂醇聚醚-20、聚甘油-3-月桂酸酯、鲸蜡硬脂醇，加热到75～80℃，搅拌均匀；(2)按表4所述重量百分比取1,3-丁二醇、海藻糖、羟丙基瓜尔胶、卡波姆，加精制水搅拌溶解，加热到70～80℃，加入步骤(1)的油相组合物，搅拌均匀；(3)冷却至25～35℃，加入冻梨提取物、二月兰提取物、泛醇、精氨酸，加入精制水至100，搅拌均匀；(4)冷却至室温，得到美白淡斑面膜，密封保存。

为了评估本发明面膜1、2和对照例1、2的功效，将面膜1、2和对照例1、2在志愿者身上进行测试。选取40名脸上有雀斑、黄褐斑、老年斑、妊娠斑、日晒斑及色素沉着等皮肤问题的年龄18～45岁的志愿者，随机分成4组，每组10人。志愿者均身体健康，生活规律，无皮肤病，测试期间禁用其他化妆品或是药物。清洁脸部皮肤后，擦干，将美白祛斑面膜液敷在脸部实验区域上，用量为0.1g/cm²，保持20min，清水洗净，每日一次。作为测试对比，在使用样品前后在相同环境下拍照对比，连续使用30天查看使用效果，并填写调查问卷。

评判标准：

有效：相对使用前，斑点淡化、暗沉改善、肌肤白净；

无效：相对使用前，斑点无淡化迹象、暗沉没有改善、肤色未变白。

试用结果如表5。

表5：试用结果表

由表5数据分析可知，本发明的面膜1、2均具有良好的美白淡斑效果，证明了本发明的美白淡斑组合物在实际应用中的有效性。通过本发明面膜1、2和对照组1的数据结合可知，在相同时间内，在含有美白淡斑组合物的面膜中添加精氨酸所得的面膜2有效人数更多，而仅添加精氨酸的对照组1不具有明显的美白淡斑功效。通过对比可知，在面膜基质中添加精氨酸，可以增加皮肤营养，改善皮肤状态，有效促进冻梨提取物和二月兰提取物有效成分的吸收，促进其美白淡斑功效的发挥，进一步提高本申请所述美白淡斑面膜的美白淡斑功效。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种具有美白淡斑功效的组合物，以质量百分含量计，包括冻梨提取物0.001-0.008%和二月兰提取物0.001-0.008%；

其中，所述冻梨提取物的制备方法为：取成熟的白梨，于-12～-18℃下冷冻60～75天，取出后置于冷水，浸泡25～30分钟，褪去果实外的冰壳，将果实榨取汁液，所得汁液真空浓缩，用冷冻干燥机干燥，即得冻梨提取物；

其中，所述二月兰提取物的制备方法为：取干燥的二月兰全草，加入甲醇在室温下浸泡10～12小时，过滤，提取液减压浓缩、干燥成粉末，即得二月兰提取物。

2.如权利要求1所述的一种具有美白淡斑功效的组合物在美白淡斑化妆品中的应用。

3.一种含有权利要求1所述的具有美白淡斑功效的组合物的美白淡斑面膜，以质量百分含量计，组成如下：冻梨提取物 0.002、二月兰提取物 0.002、异鲸蜡硬脂醇聚醚-201.70、聚甘油-3-月桂酸酯 1.50、鲸蜡硬脂醇 2.00、1,3-丁二醇 5.00、泛醇 0.20、海藻糖0.50、羟丙基瓜尔胶 0.20、卡波姆 0.30、精氨酸 0.10、精制水余量。

4.如权利要求3所述的美白淡斑面膜，其制备方法如下：（1）按重量百分比取异鲸蜡硬脂醇聚醚-20 1.70、聚甘油-3-月桂酸酯 1.50、鲸蜡硬脂醇 2.00，加热到 75～80℃，搅拌均匀；（2）按重量百分比取1,3-丁二醇 5.00、海藻糖 0.50、羟丙基瓜尔胶 0.20、卡波姆0.30，加精制水搅拌溶解，加热到 70～80℃，加入步骤（1）的油相组合物，搅拌均匀；（3）冷却至25～35℃，加入冻梨提取物 0.002、二月兰提取物 0.002、泛醇 0.20、精氨酸 0.10，加入精制水至100，搅拌均匀；（4）冷却至室温，得到美白淡斑面膜，密封保存。