CN111269299B

CN111269299B - Bbr8蛋白及其编码基因和应用

Info

Publication number: CN111269299B
Application number: CN201811472284.9A
Authority: CN
Inventors: 江光怀; 翟文学; 朱立煌; 刘栋峰; 尹德东
Original assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Current assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Priority date: 2018-12-04
Filing date: 2018-12-04
Publication date: 2021-10-08
Anticipated expiration: 2038-12-04
Also published as: CN111269299A

Abstract

本发明公开了BBR蛋白及其编码基因和应用。本发明提供了一种蛋白质，获自水稻(Oryza sativa)，命名为BBR8蛋白，为序列表中序列1所示的蛋白质。编码BBR8蛋白的核酸分子也属于本发明的保护范围。本发明还保护BBR8蛋白的应用，为如下(c1)或(c2)：(c1)调控植物对白叶枯病的抗性；(c2)增加植物对白叶枯病的抗性。本发明还保护编码BBR8蛋白的核酸分子的应用，为如下(d1)或(d2)：(d1)培育对白叶枯病的抗性改变的转基因植物；(d2)培育对白叶枯病的抗性增高的转基因植物。本发明对于培育抗白叶枯病植物具有重大的应用价值。

Description

BBR8蛋白及其编码基因和应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及BBR8蛋白及其编码基因和应用。

背景技术

植物在生长发育进程中，容易遭受细菌、真菌、病毒和昆虫等侵袭。植物一旦受到侵害后，其细胞或组织就会发生病理性变化，阻碍植株的正常生长和发育进程，进而影响经济效益。近年来，我国农作物病虫害总体处于重发、频发态势，各类主要病虫害年平均发生面积比1996-2005年的10年平均值增加20.82％。从病虫危害造成损失的统计结果来看，水稻、小麦、玉米为首的三大主要粮食作物占据绝大部分，实际造成的损失比例分别占到总损失量的33.67％、23.31％和35.13％。面对病原菌的侵袭，植物进化出了一套复杂的防御系统,受到抗病和抗病相关基因的调控。

由黄单胞菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae(Xoo)引起的水稻白叶枯病(bacterial blight)是水稻生产上的主要病害之一，在世界各地的栽培区都有不同程度的发生。水稻一旦感病，叶片会枯萎，损害光合作用，从而影响籽粒的充实，造成不实粒增加、千粒重减轻等，一般减产20-30％，严重的可达50％，甚至绝收(Huang et al.,1997)。防治该病的关键在于发掘新的抗源，种植抗病品种多样化以及克隆更多的抗病基因。

发明内容

本发明的目的是提供BBR蛋白及其编码基因和应用。

本发明提供了一种蛋白质，获自水稻(Oryza sativa)，命名为BBR8蛋白，为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：

(a1)序列表中序列1所示的蛋白质；

(a2)在(a1)所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

(a3)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与植物抗白叶枯病相关的蛋白质；

(a4)来源于水稻且与(a1)具有98％以上同一性且与植物抗白叶枯病相关的蛋白质。

标签具体如表1所示。

表1标签的序列

蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

编码BBR8蛋白的核酸分子也属于本发明的保护范围。

所述核酸分子具体为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)或(b5)：

(b1)编码区如序列表中序列2第396-1856位核苷酸所示的DNA分子；

(b2)序列表中序列2所示的DNA分子；

(b3)序列表中序列3所示的DNA分子；

(b4)来源于水稻且与(b1)或(b2)或(b3)具有95％以上同一性且编码所述蛋白质的DNA分子；

(b5)在严格条件下与(b1)或(b2)或(b3)限定的核苷酸序列杂交且编码所述蛋白质的DNA分子。

所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min。

含有所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物均属于本发明的保护范围。

可用现有的表达载体构建含有所述核酸分子的重组表达载体。使用所述核酸分子构建重组表达载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用所述核酸分子构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物或转基因微生物进行鉴定及筛选，可对所用表达载体进行加工，如加入在植物或微生物中表达可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因、具有抗性的抗生素标记物或是抗化学试剂标记基因等。从转基因安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以表型筛选转化植物或微生物。

所述重组载体具体可为重组表达载体。所述重组表达载体具体可为如下重组质粒：以pCAMBIA2300载体为出发载体，用序列表的序列2自5’末端第396至2766位核苷酸所示的DNA分子取代了出发载体的SalI和BamH I酶切位点之间的小片段，用序列表的序列3自5’末端第1至957位核苷酸所示的DNA分子(启动子)取代了出发载体的Hind III和Pst I酶切位点之间的小片段。

本发明还保护BBR8蛋白的应用，为如下(c1)或(c2)：

(c1)调控植物对白叶枯病的抗性；

(c2)增加植物对白叶枯病的抗性。

本发明还保护编码BBR8蛋白的核酸分子的应用，为如下(d1)或(d2)：

(d1)培育对白叶枯病的抗性改变的转基因植物；

(d2)培育对白叶枯病的抗性增高的转基因植物。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入编码BBR8蛋白的核酸分子，得到对白叶枯病的抗性增高的转基因植物。所述核酸分子具体可通过以上任一所述重组表达载体导入所述出发植物。携带有所述核酸分子的重组表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化到出发植物中。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中BBR8蛋白的含量和/或活性，从而增高目的植物对白叶枯病的抗性。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：抑制出发植物中编码BBR8蛋白的核酸分子的表达，得到对白叶枯病的抗性降低的转基因植物。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：降低目的植物中BBR8蛋白的含量和/或活性，从而降低目的植物对白叶枯病的抗性。

以上任一所述植物为双子叶植物或单子叶植物。所述单子叶植物可为禾本科植物。所述禾本科植物可为水稻属植物。所述水稻具体可为水稻秋光或水稻Kasalath。

以上任一所述白叶枯病为黄单胞菌引起的白叶枯病。以上任一所述白叶枯病为白叶枯病致病菌引起的白叶枯病。以上任一所述白叶枯病为菲律宾生理小种PXO86引起的白叶枯病。

本发明对于培育抗白叶枯病植物具有重大的应用价值。

附图说明

图1为实施例1中的序列比较差异示意图。

图2为重组质粒P₉₅₇-BBR8的结构示意图。

图3为重组质粒pZh01-BBR8i的结构示意图。

图4为实施例2中的示例性照片。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

水稻品种“秋光”，简称水稻秋光，为白叶枯病抗病品种。水稻品种Kasalath，简称水稻Kasalath，为白叶枯病感病品种。提及pZh01载体的文献：Xiao et al.PlantMolecular Biology 52:957–966,2003.。水稻白叶枯病致病菌菲律宾生理小种PXO86，简称菲律宾生理小种PXO86。

实施例1、BBR基因的发现

水稻秋光与水稻Kasalath杂交，获得含BBR8基因的F2单株，与水稻Kasalath杂交再自交后分别产生1000个单株的F2：2群体，利用这些群体进行BBR8基因的精细遗传和物理定位，最终将BBR8基因限定在第8染色体的BAC克隆AP003914上的47.4kb物理区间内。通过分析该区间6个编码基因的序列，发现其中一个蛋白的编码基因在水稻秋光和水稻Kasalath之间有20个核苷酸的差异，特别是第15处的核苷酸差异造成了蛋白翻译提前终止，是BBR8最可能的候选基因。序列比较差异示意图见图1。

BBR8蛋白如序列表的序列1所示。BBR8基因的cDNA如序列表的序列2所示，其中第396-1856位为编码框(1461bp)。BBR8基因的基因组DNA如序列表的序列3所示。

实施例2、功能验证

一、过表达水稻的制备

(一)重组质粒P_Q-BBR8的构建

1、提取水稻秋光的总RNA并反转录为cDNA。

2、以步骤1得到的cDNA为模板，用F1和R1组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。

F1：5′-aaGTCGACatgaaggacctcaaggctgtcgcc-3′；

R1：5′-aaGGATCCccaatcttaatgaaattggcc-3′。

3、用限制性内切酶SalI I和BamH I双酶切步骤2得到的PCR扩增产物，回收酶切产物。

4、用限制性内切酶Sal I和BamH I双酶切pCAMBIA2300载体，回收约8.7kb的载体骨架。

5、将步骤3得到酶切产物和步骤4得到的载体骨架连接，得到重组质粒。

6、提取水稻秋光的基因组DNA。

7、以步骤6提取的基因组DNA为模板，用F2和R2组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。

F2：5′-AAGCTTctagcttttgagaacctctc-3′；

R2：5′-CTGCAGccagcgcttgacggcggggttggtc-3′。

8、用限制性内切酶HindIII和Pst I双酶切步骤7的PCR扩增产物，回收酶切产物。

9、用限制性内切酶HindIII和Pst I双酶切步骤5得到的重组质粒，回收约11.1kb的载体骨架。

10、将步骤8的酶切产物和步骤9的载体骨架连接，得到重组质粒P₉₅₇-BBR8。重组质粒P₉₅₇-BBR8的结构示意图见图2。根据测序结果，对重组质粒P₉₅₇-BBR8进行结构描述如下：以pCAMBIA2300载体为出发载体，用序列表的序列2自5’末端第396至2766位核苷酸所示的DNA分子取代了出发载体的SalI和BamH I酶切位点之间的小片段，用序列表的序列3自5’末端第1至957位核苷酸所示的DNA分子(启动子)取代了出发载体的Hind III和Pst I酶切位点之间的小片段。重组质粒P₉₅₇-BBR8中，Hind III和BamH I酶切位点之间的DNA分子如序列表的序列4所示。

(二)进行功能互补试验的Kasalath转基因水稻制备

1、将重组质粒P₉₅₇-BBR8导入农杆菌EHA105，得到重组农杆菌。

2、将步骤1得到的重组农杆菌与水稻Kasalath的成熟胚愈伤组织共培养，采用40-60mg/L卡那霉素筛选抗性愈伤组织，然后经过预分化、分化、生根后得到T₀代植株。

3、T₀代植株自交获得T₁代种子，T₁代种子长成的植株即为T₁代植株。

4、提取T₁代植株的基因组DNA，用NPT_F和NPT_R组成的引物对进行PCR鉴定，目的条带约411bp，PCR鉴定中扩增得到目的条带的植株即为转基因植株。转基因植株即为BBR8过表达植株。

NPT_F：5′-GCAGGCATCGCCATGGG-3′；

NPT_R：5′-GCCCTGAATGAACTGCA-3′。

(三)转pCAMBIA2300载体水稻的制备

用pCAMBIA2300载体代替重组质粒P₉₅₇-BBR8，按照步骤(二)进行操作，得到转pCAMBIA2300载体植株。

二、抑制表达水稻的制备

(一)重组质粒pZh01-BBR8i的构建

1、提取水稻秋光的总RNA并反转录为cDNA。

2、以步骤1得到的cDNA为模板，用F3和R3组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。

F3：5′-aaGTCGACGGCGACCGCCGCAAGCTGGAGCGCC-3′；

R3：5′-aaGGATCCATTGTAATTAAAACTTTATTTC-3′。

4、用限制性内切酶SalI I和BamH I双酶切pZh01载体，回收约10kb的载体骨架。

5、将步骤3的酶切产物和步骤4的载体骨架连接，得到重组质粒pZh01-BBR8i。重组质粒pZh01-BBR8i的结构示意图见图3。根据测序结果，对重组质粒pZh01-BBR8i进行结构描述如下：以pZh01载体为出发载体，用序列表的序列5所示的DNA分子取代了出发载体的SalI和BamH I酶切位点之间的小片段。

(二)抑制表达水稻的制备

1、将重组质粒pZh01-BBR8i导入农杆菌EHA105，得到重组农杆菌。

2、将步骤1得到的重组农杆菌与水稻秋光的成熟胚愈伤组织共培养，采用50mg/L潮霉素筛选抗性愈伤组织，然后经过预分化、分化、生根后得到T₀代植株。

4、提取T₁代植株的基因组DNA，用Hyg_F和Hyg_R组成的引物对进行PCR鉴定，目的条带约1035bp，PCR鉴定中扩增得到目的条带的植株即为转基因植株。转基因植株即为BBR8反向抑制植株。

Hyg_F：5′-TAGGAGGGCGTGGATATGTC-3′；

Hyg_R：5′-TACACAGCCATCGGTCCAGA-3′。

(三)转pZh01载体水稻的制备

用pZh01载体代替重组质粒pZh01-BBR8i，按照步骤(二)进行操作，得到转pZh01载体植株。

三、植株对白叶枯病菌的抗性鉴定

供试植株为：T₁代BBR8反向抑制植株8株、T₁代转pZh01载体植株8株、水稻秋光8株、T₁代BBR8过表达植株8株、T₁代转pCAMBIA2300载体植株8株、水稻Kasalath8株。

将供试植株正常培养至分蘖盛期，然后采用人工剪叶接种法(Kauffman等，1973年)接种菲律宾生理小种PXO86(菌液是无菌水和菲律宾生理小种PXO86制备的，菌浓度为10⁹个细胞/ml)，14天后调查照相。

示例性照片见图4。水稻Kasalath的病斑长度为8.1±0.2cm。BBR8过表达植株的病斑长度为2.5±0.6cm。水稻秋光的病斑长度为1.6±0.5cm。转pZh01载体植株的病斑长度为1.5±0.3cm。BBR8反向抑制植株的病斑长度为5.5±0.6cm。结果表明，将BBR8基因导入水稻Kasalath，显著地提高了植株的抗病性。抑制水稻秋光中BBR8基因的表达，极大地降低了植株的抗病性。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120> BBR8蛋白及其编码基因和应用

<130> GNCYX182434

<160> 5

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 486

<212> PRT

<213> Oryza sativa

<400> 1

Met Lys Asp Leu Lys Ala Val Ala Tyr Glu Ala Asp Asp Val Leu Asp

1 5 10 15

Asp Phe Glu Tyr Glu Ala Leu Arg Arg Glu Val Lys Ile Gly Asp Ser

20 25 30

Thr Thr Arg Lys Val Leu Gly Tyr Phe Thr Pro His Ser Pro Leu Leu

35 40 45

Phe Arg Val Thr Met Ser Arg Lys Leu Gly Asp Val Leu Lys Lys Ile

50 55 60

Asn Asp Leu Val Glu Glu Met Asn Lys Phe Gly Leu Met Glu His Thr

65 70 75 80

Glu Ala Pro Gln Leu Pro Tyr Arg Leu Thr His Ser Gly Leu Asp Glu

85 90 95

Ser Ala Asp Ile Phe Gly Arg Glu His Asp Lys Glu Val Leu Val Lys

100 105 110

Leu Met Leu Asp Gln His Asp Gln Gln Asn Leu Gln Val Leu Pro Ile

115 120 125

Val Gly Met Gly Gly Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Lys Met Val Tyr

130 135 140

Asn Asp Pro Ile Val Gln Lys His Phe Gln Leu Lys Met Trp His Cys

145 150 155 160

Val Ser Glu Asn Phe Glu Pro Ile Ser Ile Val Lys Ser Ile Ile Glu

165 170 175

Leu Ala Thr Asn Arg Lys Cys Asp Leu Pro Asp Ser Ile Glu Leu Leu

180 185 190

Arg Arg Arg Leu Glu Gly Val Ile Asp Arg Lys Arg Phe Leu Leu Val

195 200 205

Leu Asp Asp Val Trp Asn Glu Asp Asp Asn Lys Trp Asn Glu His Leu

210 215 220

Arg Pro Leu Leu Asn Ser Val Gly Gly Pro Gly Ser Ile Ile Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Arg Asn Arg Arg Val Ala Ser Ile Met Glu Thr Leu Gln Pro

245 250 255

Tyr Lys Pro Ala Cys Leu Ser Glu Asp Glu Ser Trp Glu Leu Phe Ser

260 265 270

Lys Arg Ala Phe Gly Arg Asp Val Gln Glu Gln Glu Asp Leu Val Thr

275 280 285

Ile Gly Lys Cys Ile Val His Lys Cys Lys Gly Leu Pro Leu Ala Leu

290 295 300

Lys Thr Met Gly Gly Leu Met Ser Ser Lys His Gln Val Lys Glu Trp

305 310 315 320

Glu Ala Ile Ala Arg Ser Asn Ile Gly Asp Ser Val Lys Gly Lys Asp

325 330 335

Glu Ile Leu Ser Ile Leu Lys Leu Ser Tyr Lys His Leu Pro Ser Glu

340 345 350

Met Lys Gln Cys Phe Thr Phe Cys Ala Ile Phe Cys Lys Asp Tyr Glu

355 360 365

Met Glu Lys Asp Met Leu Ile Gln Leu Trp Ile Ala Asn Gly Phe Ile

370 375 380

Gln Glu Glu Gly Thr Ile Glu Leu Ser Gln Lys Gly Glu Phe Val Phe

385 390 395 400

Asn Glu Leu Val Trp Arg Ser Phe Leu Gln Asp Val Lys Thr Ile Leu

405 410 415

Phe Arg Ser Leu Asp Tyr Asp Phe Val Val Cys Lys Met His Asp Leu

420 425 430

Met His Asp Leu Ala Lys Asp Val Ser Ser Glu Cys Ala Thr Thr Glu

435 440 445

Glu Leu Ile Gln Gln Lys Ala Pro Ser Glu Asp Val Trp His Val Gln

450 455 460

Ile Ser Glu Gly Glu Leu Lys Gln Ile Ser Gly Ser Phe Lys Gly Glu

465 470 475 480

Leu Arg Ser Ser Asn Ser

485

<210> 2

<211> 2790

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 2

gaattacgga ccagagtgcc cagagcgctt catgctttgc ctttcatctt cattcattcc 60

accgtgcttt gcagctgaga acgcaacatg gcggaatcgc ttcccggtgg tgcgcggggt 120

ggctggcaag gcggcgaacg cgctcgtcca gagcgtcacg cgcgtgtgcg gcgtcgacgg 180

cgaccgccgc aagctggagc gccagcttct ggcagtccag tgcaagctgg ccgatgccaa 240

ggcgaagagc gagactaagg gtgtaagtgg gtcagccgcg aacctactta taggtcaaaa 300

taagcgggct cgcggcttat tttagcctat aagtgggttt cacgggttag ccacttacaa 360

ccctaagcga gaccaacccc gccgtcaagc gctggatgaa ggacctcaag gctgtcgcct 420

acgaggccga cgacgtcctc gacgacttcg agtacgaggc tctgcgccgc gaggtcaaga 480

tcggcgactc caccacccgc aaggtactcg gctacttcac gccgcatagc ccactcctgt 540

tccgtgttac catgagtagg aagctgggcg atgtcctcaa gaagatcaac gatctggttg 600

aagagatgaa caagtttggc ctgatggagc acacagaggc gccacagctt ccttatcggc 660

taacacactc ggggctggac gagtcagcag acatatttgg gcgagagcat gacaaggagg 720

tgttggttaa actgatgctg gatcagcatg atcaacagaa tttgcaggtt ctccccatcg 780

tggggatggg cggtttgggc aagacaacgc ttgcgaagat ggtgtacaac gatccgattg 840

tccagaaaca tttccaactg aagatgtggc actgtgtttc ggagaacttt gaacctattt 900

ctattgtgaa atccatcatt gagttggcta caaatagaaa atgtgaccta cctgactcaa 960

ttgagttgtt gcgaaggcga cttgaaggag tcattgacag gaaaaggttt ctacttgttc 1020

ttgatgatgt atggaatgag gacgacaaca agtggaatga acacctaagg ccacttctga 1080

attctgtcgg gggtccaggg agcattatag tcatcacaac tcgcaatcgg cgggtggcat 1140

ctataatgga aacccttcaa ccctataagc cagcatgtct aagtgaagat gaatcatggg 1200

aattgttctc gaagagagcg tttggtagag acgtacaaga gcaagaagat ttggtcacca 1260

ttggcaaatg tattgtacat aaatgcaagg ggctgccact tgctctgaag acgatgggcg 1320

gtctaatgag ttccaaacac caagtcaagg aatgggaagc catcgcaaga agtaatattg 1380

gtgatagtgt caaaggaaaa gacgaaatct tatcaatact aaaattgagc tacaaacact 1440

tgccatctga aatgaaacaa tgcttcacct tctgtgcaat tttctgcaag gactatgaga 1500

tggagaagga catgttgatc caactatgga tagcaaatgg ttttattcaa gaagagggca 1560

caattgagtt gtcacaaaaa ggcgagtttg ttttcaatga gttggtttgg agatcatttc 1620

ttcaagatgt taaaacaata ttattcagaa gcttagatta tgactttgtt gtatgtaaaa 1680

tgcatgattt aatgcatgac ttagcaaaag acgtttcaag tgaatgtgca actacagaag 1740

aactgattca acagaaagca ccatctgaag atgtttggca tgtgcaaata tcagaaggtg 1800

aattaaaaca aatcagtgga tcattcaaag gggaattgag gagctcaaac agttgagata 1860

ccttaccaat atgttggggc tgtacaattt gagaaaaata aagagtacat cgaacgcgaa 1920

agaagccaat ctccatcaga aacaagagct gagtatatta cgattatttt ggggctgcat 1980

gtcatcctac atgcctggag acaaagacaa taatgaggaa gaaatgttgg aatctcttaa 2040

acctcacagc aagcttaaaa ttttggattt atatggttat ggtggaagta aagcctcagt 2100

gtggatgaga gaccctcaaa tgttccggtg cttaaaaagg ctcattattg aacgatgtcc 2160

aagatgtaag gacattccaa cagtgtggct atcagcctct cttgagtatt tgtccttgtc 2220

ttatatgact agtttgatct cattatgtaa gaacattgat gggaacaccc cagtgcagtt 2280

atttccaaag ttgaaggagt tgatattatt tgttttaccg aacttggaga ggtgggcaga 2340

aaacagtgag ggggagaata atgatgtgat cattttcccg gagcttgaaa gcctagaatt 2400

gaagagttgc atgaaaattt caagtgttcc ggaaagcccg gctctcaaaa ggctggaggc 2460

tctggggtgt cacagcctct caattttctc actttcacat ctcacatcat tgtctgacct 2520

ttattacaaa gcaggtgata ttgactctat gaggatgcct ttggaccctt gttgggcttc 2580

tcccgtgagc ttagatgtta gctcaccagc gaacatgatg gtgcctctgg aagacaagaa 2640

aagccgtaga cccttcgaag ccctacggag cttgactctg cgtggttcta actgcttctt 2700

agcaacgtgc agtttgtttt ttgccgggac ggccaaaggt aggccggcca atttcattaa 2760

gattggggga aataaagttt taattacaat 2790

<210> 3

<211> 3761

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 3

ctagcttttg agaacctctc tgaccaagta acttgagttg gaaggtacta cggcatattg 60

tgatgaaaat gtttccgcct tactgaaact tgttgctgat tatatctgac ccaagtggtt 120

tgagatgtaa aggttctcgt tattgggtat tcccatggaa atggttggtt tcgtgctctg 180

tttttttttg ggagaattcg tcatgtttgt ttgggatttg ttcgttggaa gtatgtttag 240

caaatatttc atccagactt tgtcaaaatt tggcctttgc tattctgaat tctgatgcat 300

tcgtctcaac aggatcatat tcgaagccca ggatttgccg actgccgtgc cagtttgttt 360

cagcaaagta tgtttttgct gataagaaaa gacggcgagg gccgaggaga tttcaacgaa 420

actgccaacc aaactggtgg attccacgac atgaatgcac tacgcaaaag ttagtctttt 480

ttttttttga gaaggacgca aaagtaagtc aagttgtaaa ttttctccat attatactca 540

tacgggccaa acatgcccac ttgaattacg gaccagagtg cccagagcgc ttcatgcttt 600

gcctttcatc ttcattcatt ccaccgtgct ttgcagctga gaacgcaaca tggcggaatc 660

gcttcccggt ggtgcgcggg gtggctggca aggcggcgaa cgcgctcgtc cagagcgtca 720

cgcgcgtgtg cggcgtcgac ggcgaccgcc gcaagctgga gcgccagctt ctggccgtcc 780

agtgcaagct ggccgatgcc aaggcgaaga gcgagactaa gggtgtaagt gggtcagccg 840

cgaacctact tataggtcaa aataagcggg ctcgcggctt attttagcct ataagtgggt 900

ttcacgggtt agccacttac aaccctaagc gagaccaacc ccgccgtcaa gcgctggatg 960

aaggacctca aggctgtcgc ctacgaggcc gacgacgtcc tcgacgactt cgagtacgag 1020

gctctgcgcc gcgaggtcaa gatcggcgac tccaccaccc gcaaggtact cggctacttc 1080

acgccgcata gcccactcct gttccgtgtt accatgagta ggaagctggg cgatgtcctc 1140

aagaagatca acgatctggt tgaagagatg aacaagtttg gcctgatgga gcacacagag 1200

gcgccacagc ttccttatcg gctaacacac tcggggctgg acgagtcagc agacatattt 1260

gggcgagagc atgacaagga ggtgttggtt aaactgatgc tggatcagca tgatcaacag 1320

aatttgcagg ttctccccat cgtggggatg ggcggtttgg gcaagacaac gcttgcgaag 1380

atggtgtaca acgatccgat tgtccagaaa catttccaac tgaagatgtg gcactgtgtt 1440

tcggagaact ttgaacctat ttctattgtg aaatccatca ttgagttggc tacaaataga 1500

aaatgtgacc tacctgactc aattgagttg ttgcgaaggc gacttgaagg agtcattgac 1560

aggaaaaggt ttctacttgt tcttgatgat gtatggaatg aggacgacaa caagtggaat 1620

gaacacctaa ggccacttct gaattctgtc gggggtccag ggagcattat agtcatcaca 1680

actcgcaatc ggcgggtggc atctataatg gaaacccttc aaccctataa gccagcatgt 1740

ctaagtgaag atgaatcatg ggaattgttc tcgaagagag cgtttggtag agacgtacaa 1800

gagcaagaag atttggtcac cattggcaaa tgtattgtac ataaatgcaa ggggctgcca 1860

cttgctctga agacgatggg cggtctaatg agttccaaac accaagtcaa ggaatgggaa 1920

gccatcgcaa gaagtaatat tggtgatagt gtcaaaggaa aagacgaaat cttatcaata 1980

ctaaaattga gctacaaaca cttgccatct gaaatgaaac aatgcttcac cttctgtgca 2040

attttctgca aggactatga gatggagaag gacatgttga tccaactatg gatagcaaat 2100

ggttttattc aagaagaggg cacaattgag ttgtcacaaa aaggcgagtt tgttttcaat 2160

gagttggttt ggagatcatt tcttcaagat gttaaaacaa tattattcag aagcttagat 2220

tatgactttg ttgtatgtaa aatgcatgat ttaatgcatg acttagcaaa agacgtttca 2280

agtgaatgtg caactacaga agaactgatt caacagaaag caccatctga agatgtttgg 2340

catgtgcaaa tatcagaagg tgaattaaaa caaatcagtg gatcattcaa aggtacaaca 2400

tctctccgca ctttgttgat ggaattacca ttatacaggg gtcttgaagt gttggaactg 2460

aggtcatttt tcttagaaag gttaaaactg aggtcgttga gaggactgtg gtgtcactgt 2520

aggtacgatt cttctattat cactagccat ctcataaata caaaacaatt atgatatctt 2580

gacctttcta ggtctaatat acatagactg ccagattcaa tatgtgcatt gtataactta 2640

caatcactga ggctcaatgg ctgcagctat ctagaatgtt tacctgaagg catggcaaat 2700

ctaaggaaac tcaaccacct ttatctgttg ggatgcgata gattaaaacg gatgccccca 2760

aattttagtc tactgaacaa tctattgaca ctaacaacgt ttgtcgtgga caccgatgct 2820

ggcaggggaa ttgaggagct caaacagttg agatacctta ccaatatgtt ggggctgtac 2880

aatttgagaa aaataaagag tacatcgaac gcgaaagaag ccaatctcca tcagaaacaa 2940

gagctgagta tattacgatt attttggggc tgcatgtcat cctacatgcc tggagacaaa 3000

gacaataatg aggaagaaat gttggaatct cttaaacctc acagcaagct taaaattttg 3060

gatttatatg gttatggtgg aagtaaagcc tcagtgtgga tgagagaccc tcaaatgttc 3120

cggtgcttaa aaaggctcat tattgaacga tgtccaagat gtaaggacat tccaacagtg 3180

tggctatcag cctctcttga gtatttgtcc ttgtcttata tgactagttt gatctcatta 3240

tgtaagaaca ttgatgggaa caccccagtg cagttatttc caaagttgaa ggagttgata 3300

ttatttgttt taccgaactt ggagaggtgg gcagaaaaca gtgaggggga gaataatgat 3360

gtgatcattt tcccggagct tgaaagccta gaattgaaga gttgcatgaa aatttcaagt 3420

gttccggaaa gcccggctct caaaaggctg gaggctctgg ggtgtcacag cctctcaatt 3480

ttctcacttt cacatctcac atcattgtct gacctttatt acaaagcagg tgatattgac 3540

tctatgagga tgcctttgga cccttgttgg gcttctcccg tgagcttaga tgttagctca 3600

ccagcgaaca tgatggtgcc tctggaagac aagaaaagcc gtagaccctt cgaagcccta 3660

cggagcttga ctctgcgtgg ttctaactgc ttcttagcaa cgtgcagttt gttttttgcc 3720

gggacggcca aaggtaggcc ggccaatttc attaagattg g 3761

<210> 4

<211> 3340

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 4

ctagcttttg agaacctctc tgaccaagta acttgagttg gaaggtacta cggcatattg 60

tgatgaaaat gtttccgcct tactgaaact tgttgctgat tatatctgac ccaagtggtt 120

tgagatgtaa aggttctcgt tattgggtat tcccatggaa atggttggtt tcgtgctctg 180

tttttttttg ggagaattcg tcatgtttgt ttgggatttg ttcgttggaa gtatgtttag 240

caaatatttc atccagactt tgtcaaaatt tggcctttgc tattctgaat tctgatgcat 300

tcgtctcaac aggatcatat tcgaagccca ggatttgccg actgccgtgc cagtttgttt 360

cagcaaagta tgtttttgct gataagaaaa gacggcgagg gccgaggaga tttcaacgaa 420

actgccaacc aaactggtgg attccacgac atgaatgcac tacgcaaaag ttagtctttt 480

ttttttttga gaaggacgca aaagtaagtc aagttgtaaa ttttctccat attatactca 540

tacgggccaa acatgcccac ttgaattacg gaccagagtg cccagagcgc ttcatgcttt 600

gcctttcatc ttcattcatt ccaccgtgct ttgcagctga gaacgcaaca tggcggaatc 660

gcttcccggt ggtgcgcggg gtggctggca aggcggcgaa cgcgctcgtc cagagcgtca 720

cgcgcgtgtg cggcgtcgac ggcgaccgcc gcaagctgga gcgccagctt ctggccgtcc 780

agtgcaagct ggccgatgcc aaggcgaaga gcgagactaa gggtgtaagt gggtcagccg 840

cgaacctact tataggtcaa aataagcggg ctcgcggctt attttagcct ataagtgggt 900

ttcacgggtt agccacttac aaccctaagc gagaccaacc ccgccgtcaa gcgctggctg 960

caggtcgaca tgaaggacct caaggctgtc gcctacgagg ccgacgacgt cctcgacgac 1020

ttcgagtacg aggctctgcg ccgcgaggtc aagatcggcg actccaccac ccgcaaggta 1080

ctcggctact tcacgccgca tagcccactc ctgttccgtg ttaccatgag taggaagctg 1140

ggcgatgtcc tcaagaagat caacgatctg gttgaagaga tgaacaagtt tggcctgatg 1200

gagcacacag aggcgccaca gcttccttat cggctaacac actcggggct ggacgagtca 1260

gcagacatat ttgggcgaga gcatgacaag gaggtgttgg ttaaactgat gctggatcag 1320

catgatcaac agaatttgca ggttctcccc atcgtgggga tgggcggttt gggcaagaca 1380

acgcttgcga agatggtgta caacgatccg attgtccaga aacatttcca actgaagatg 1440

tggcactgtg tttcggagaa ctttgaacct atttctattg tgaaatccat cattgagttg 1500

gctacaaata gaaaatgtga cctacctgac tcaattgagt tgttgcgaag gcgacttgaa 1560

ggagtcattg acaggaaaag gtttctactt gttcttgatg atgtatggaa tgaggacgac 1620

aacaagtgga atgaacacct aaggccactt ctgaattctg tcgggggtcc agggagcatt 1680

atagtcatca caactcgcaa tcggcgggtg gcatctataa tggaaaccct tcaaccctat 1740

aagccagcat gtctaagtga agatgaatca tgggaattgt tctcgaagag agcgtttggt 1800

agagacgtac aagagcaaga agatttggtc accattggca aatgtattgt acataaatgc 1860

aaggggctgc cacttgctct gaagacgatg ggcggtctaa tgagttccaa acaccaagtc 1920

aaggaatggg aagccatcgc aagaagtaat attggtgata gtgtcaaagg aaaagacgaa 1980

atcttatcaa tactaaaatt gagctacaaa cacttgccat ctgaaatgaa acaatgcttc 2040

accttctgtg caattttctg caaggactat gagatggaga aggacatgtt gatccaacta 2100

tggatagcaa atggttttat tcaagaagag ggcacaattg agttgtcaca aaaaggcgag 2160

tttgttttca atgagttggt ttggagatca tttcttcaag atgttaaaac aatattattc 2220

agaagcttag attatgactt tgttgtatgt aaaatgcatg atttaatgca tgacttagca 2280

aaagacgttt caagtgaatg tgcaactaca gaagaactga ttcaacagaa agcaccatct 2340

gaagatgttt ggcatgtgca aatatcagaa ggtgaattaa aacaaatcag tggatcattc 2400

aaaggggaat tgaggagctc aaacagttga gataccttac caatatgttg gggctgtaca 2460

atttgagaaa aataaagagt acatcgaacg cgaaagaagc caatctccat cagaaacaag 2520

agctgagtat attacgatta ttttggggct gcatgtcatc ctacatgcct ggagacaaag 2580

acaataatga ggaagaaatg ttggaatctc ttaaacctca cagcaagctt aaaattttgg 2640

atttatatgg ttatggtgga agtaaagcct cagtgtggat gagagaccct caaatgttcc 2700

ggtgcttaaa aaggctcatt attgaacgat gtccaagatg taaggacatt ccaacagtgt 2760

ggctatcagc ctctcttgag tatttgtcct tgtcttatat gactagtttg atctcattat 2820

gtaagaacat tgatgggaac accccagtgc agttatttcc aaagttgaag gagttgatat 2880

tatttgtttt accgaacttg gagaggtggg cagaaaacag tgagggggag aataatgatg 2940

tgatcatttt cccggagctt gaaagcctag aattgaagag ttgcatgaaa atttcaagtg 3000

ttccggaaag cccggctctc aaaaggctgg aggctctggg gtgtcacagc ctctcaattt 3060

tctcactttc acatctcaca tcattgtctg acctttatta caaagcaggt gatattgact 3120

ctatgaggat gcctttggac ccttgttggg cttctcccgt gagcttagat gttagctcac 3180

cagcgaacat gatggtgcct ctggaagaca agaaaagccg tagacccttc gaagccctac 3240

ggagcttgac tctgcgtggt tctaactgct tcttagcaac gtgcagtttg ttttttgccg 3300

ggacggccaa aggtaggccg gccaatttca ttaagattgg 3340

<210> 5

<211> 2612

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 5

ggcgaccgcc gcaagctgga gcgccagctt ctggcagtcc agtgcaagct ggccgatgcc 60

aaggcgaaga gcgagactaa gggtgtaagt gggtcagccg cgaacctact tataggtcaa 120

aataagcggg ctcgcggctt attttagcct ataagtgggt ttcacgggtt agccacttac 180

aaccctaagc gagaccaacc ccgccgtcaa gcgctggatg aaggacctca aggctgtcgc 240

ctacgaggcc gacgacgtcc tcgacgactt cgagtacgag gctctgcgcc gcgaggtcaa 300

gatcggcgac tccaccaccc gcaaggtact cggctacttc acgccgcata gcccactcct 360

gttccgtgtt accatgagta ggaagctggg cgatgtcctc aagaagatca acgatctggt 420

tgaagagatg aacaagtttg gcctgatgga gcacacagag gcgccacagc ttccttatcg 480

gctaacacac tcggggctgg acgagtcagc agacatattt gggcgagagc atgacaagga 540

ggtgttggtt aaactgatgc tggatcagca tgatcaacag aatttgcagg ttctccccat 600

cgtggggatg ggcggtttgg gcaagacaac gcttgcgaag atggtgtaca acgatccgat 660

tgtccagaaa catttccaac tgaagatgtg gcactgtgtt tcggagaact ttgaacctat 720

ttctattgtg aaatccatca ttgagttggc tacaaataga aaatgtgacc tacctgactc 780

aattgagttg ttgcgaaggc gacttgaagg agtcattgac aggaaaaggt ttctacttgt 840

tcttgatgat gtatggaatg aggacgacaa caagtggaat gaacacctaa ggccacttct 900

gaattctgtc gggggtccag ggagcattat agtcatcaca actcgcaatc ggcgggtggc 960

atctataatg gaaacccttc aaccctataa gccagcatgt ctaagtgaag atgaatcatg 1020

ggaattgttc tcgaagagag cgtttggtag agacgtacaa gagcaagaag atttggtcac 1080

cattggcaaa tgtattgtac ataaatgcaa ggggctgcca cttgctctga agacgatggg 1140

cggtctaatg agttccaaac accaagtcaa ggaatgggaa gccatcgcaa gaagtaatat 1200

tggtgatagt gtcaaaggaa aagacgaaat cttatcaata ctaaaattga gctacaaaca 1260

cttgccatct gaaatgaaac aatgcttcac cttctgtgca attttctgca aggactatga 1320

gatggagaag gacatgttga tccaactatg gatagcaaat ggttttattc aagaagaggg 1380

cacaattgag ttgtcacaaa aaggcgagtt tgttttcaat gagttggttt ggagatcatt 1440

tcttcaagat gttaaaacaa tattattcag aagcttagat tatgactttg ttgtatgtaa 1500

aatgcatgat ttaatgcatg acttagcaaa agacgtttca agtgaatgtg caactacaga 1560

agaactgatt caacagaaag caccatctga agatgtttgg catgtgcaaa tatcagaagg 1620

tgaattaaaa caaatcagtg gatcattcaa aggggaattg aggagctcaa acagttgaga 1680

taccttacca atatgttggg gctgtacaat ttgagaaaaa taaagagtac atcgaacgcg 1740

aaagaagcca atctccatca gaaacaagag ctgagtatat tacgattatt ttggggctgc 1800

atgtcatcct acatgcctgg agacaaagac aataatgagg aagaaatgtt ggaatctctt 1860

aaacctcaca gcaagcttaa aattttggat ttatatggtt atggtggaag taaagcctca 1920

gtgtggatga gagaccctca aatgttccgg tgcttaaaaa ggctcattat tgaacgatgt 1980

ccaagatgta aggacattcc aacagtgtgg ctatcagcct ctcttgagta tttgtccttg 2040

tcttatatga ctagtttgat ctcattatgt aagaacattg atgggaacac cccagtgcag 2100

ttatttccaa agttgaagga gttgatatta tttgttttac cgaacttgga gaggtgggca 2160

gaaaacagtg agggggagaa taatgatgtg atcattttcc cggagcttga aagcctagaa 2220

ttgaagagtt gcatgaaaat ttcaagtgtt ccggaaagcc cggctctcaa aaggctggag 2280

gctctggggt gtcacagcct ctcaattttc tcactttcac atctcacatc attgtctgac 2340

ctttattaca aagcaggtga tattgactct atgaggatgc ctttggaccc ttgttgggct 2400

tctcccgtga gcttagatgt tagctcacca gcgaacatga tggtgcctct ggaagacaag 2460

aaaagccgta gacccttcga agccctacgg agcttgactc tgcgtggttc taactgcttc 2520

ttagcaacgt gcagtttgtt ttttgccggg acggccaaag gtaggccggc caatttcatt 2580

aagattgggg gaaataaagt tttaattaca at 2612

Claims

1.BBR8蛋白在调控水稻属植物对白叶枯病的抗性中的应用，所述BBR8蛋白为序列表中序列1所示的蛋白质。

2.编码BBR8蛋白的核酸分子在培育对白叶枯病的抗性增高的转基因水稻属植物中的应用，所述编码BBR8蛋白的核酸分子为编码区如序列表中序列2第396-1856位核苷酸所示的DNA分子。

3.一种制备转基因水稻属植物的方法，包括如下步骤：在水稻属植物中导入编码BBR8蛋白的核酸分子，得到对白叶枯病的抗性增高的转基因水稻属植物，所述编码BBR8蛋白的核酸分子为编码区如序列表中序列2第396-1856位核苷酸所示的DNA分子。

4.一种水稻属植物育种方法，包括如下步骤：增加水稻属植物中BBR8蛋白的含量，从而增高水稻属植物对白叶枯病的抗性，所述BBR8蛋白为序列表中序列1所示的蛋白质。

5.一种制备转基因水稻属植物的方法，包括如下步骤：抑制水稻属植物中编码BBR8蛋白的核酸分子的表达，得到对白叶枯病的抗性降低的转基因水稻属植物，所述编码BBR8蛋白的核酸分子为编码区如序列表中序列2第396-1856位核苷酸所示的DNA分子。

6.一种水稻属植物育种方法，包括如下步骤：降低水稻属植物中BBR8蛋白的含量，从而降低水稻属植物对白叶枯病的抗性，所述BBR8蛋白为序列表中序列1所示的蛋白质。