CN111217748B

CN111217748B - 一种螺环二氢异喹啉甲酰胺类衍生物的晶型及其制备方法

Info

Publication number: CN111217748B
Application number: CN201911153377.XA
Authority: CN
Inventors: 陆伟栋; 曹笑立; 邵启云; 李心
Original assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2018-11-23
Filing date: 2019-11-22
Publication date: 2022-04-12
Anticipated expiration: 2039-11-22
Also published as: CN111217748A

Abstract

本发明涉及一种螺环二氢异喹啉甲酰胺类衍生物的晶型及其制备方法。具体而言，本发明涉及式(I)所示化合物的A晶型，该晶型具备良好的稳定性，可更好地用于临床治疗。

Description

一种螺环二氢异喹啉甲酰胺类衍生物的晶型及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种螺环二氢异喹啉甲酰胺类衍生物的晶型及其制备方法。

背景技术

维甲酸相关孤儿核受体(ROR)是核受体家族的成员之一，它能够调控多种生理和生活过程。ROR家族包含三种类型RORα、RORβ以及RORγ。三种不同的ROR可以在不同的组织中表达并且控制不同的生理过程，RORα主要分布在肝脏、骨骼肌、皮肤、肺、脂肪组织、肾脏、胸腺和大脑，RORβ作用范围很小，主要作用于中枢神经系统，RORγ可以在许多组织中表达，包括肝脏、动物脂肪和骨骼肌。哺乳动物缺乏RORγ表现出血糖降低的现象。

RORγ，特别是RORγt型，已确定是Th17细胞的分化的一个重要的转录调节因子。2006年Vanov等人的研究发现，在小鼠实验中，RORγt是Th17细胞分化的一个重要的转录因子。他们的研究显示小鼠在缺乏RORγt时很难诱导形成EAE模型。而在人类Th17细胞分化过程中，RORγt也很快被证实有类似的重要作用，开创性的发现引起了人们对RORγt高度重视。

专利申请PCT/CN2018/087781(申请日2018.05.22)中研究了一类ROR调节剂，其中式(I)所示的化合物，化学名称为N-(4-(乙磺酰基)苄基)-2’-(4-(三氟甲基)苯基)-2’,3’-二氢-1’H-螺[环丙烷-1,4’-异喹啉]-7’-甲酰胺，其显示出了优异的ROR调节作用，是一种用于治疗RORγt介导的疾病的潜在新药。

众所周知，化合物可以以多种形式存在，例如无定形、晶型等。药用活性成分的晶型结构往往影响到药物的化学稳定性，结晶条件及储存条件的不同有可能导致化合物的晶型结构的变化。一般来说，无定型的药物产品没有规则的晶型结构，往往具有其它缺陷，比如产物稳定性较差，析晶较细，过滤较难，易结块，流动性差等。因此，改善上述产物的各方面性质是很有必要的，我们需要深入研究找到晶型纯度较高并且具备良好化学稳定的新晶型。

发明内容

本发明的目的在于提供一种式(I)所示化合物新的晶型，其具备良好的稳定性，可更好地应用于临床。

本发明一方面提供了一种式(I)所示化合物的A晶型，其特征在于：其X-射线粉末衍射图谱在2θ角为7.998、12.923、14.777、16.127、17.514、19.564、21.296、22.485、24.447、25.252、26.107、26.754和28.828处有特征峰。

在某些实施方式中，本发明提供一种式(I)所示化合物的A晶型，其X-射线粉末衍射图谱在2θ角为7.998、12.923、14.777、16.127、17.514、18.013、19.564、20.518、21.296、22.485、23.749、24.447、25.252、26.107、26.754、28.295和28.828处有特征峰。

在某些的实施方案中，本发明提供一种式(I)所示化合物的A晶型，其特征在于：其X-射线粉末衍射图谱如图1所示。

本发明进一步提供一种制备式(I)所示化合物的A晶型的方法，所述方法包括：

(1)方法一，式(I)所示化合物加热溶解于适量的有机溶剂中，冷却、析晶、过滤，所述有机溶剂可以是羧酸酯和醇类溶剂中的一种或多种，优选羧酸酯和C₁～C₆烷基醇中的一种或多种，更优选乙酸乙酯、甲醇和乙醇中的一种或多种；或

(2)方法二，将式(I)所示化合物溶解于适量的良溶剂中，加入反溶剂析晶，过滤结晶，所述良溶剂可以为卤代烷，例如二氯甲烷等，所述的反溶剂可以为石油醚、环己烷、正庚烷、正己烷中的一种或多种；或

(3)方法三，将式(I)所示化合物与适量的溶剂混合打浆，过滤结晶，所述溶剂可以为异丙醇、乙酸异丙酯、异丙醚、正庚烷、乙醚、甲苯、二氧六环、乙腈和丙酮中的一种或多种。

本发明进一步涉及一种药物组合物，包含式(I)所示化合物的A晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明进一步涉及一种药物组合物，其由本发明所述的式(I)所示化合物的A晶型与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制得。

本发明进一步涉及一种包含式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物的制备方法，包括将式(I)所示化合物的A晶型与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。

本发明所述药物组合物可以制成药学上可接受的任一剂型。例如，本发明的晶型或药物制剂可以配制为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、栓剂、吸入剂或喷雾剂。

本发明进一步涉及式(I)所示化合物的A晶型或本发明所述的药物组合物在制备用于治疗炎症、自身免疫性疾病、肿瘤或癌症的药物中的用途。

通过X-射线粉末衍射图谱(XRPD)、差示扫描量热分析(DSC)对本发明所得到晶型进行结构测定、晶型研究。

本发明中晶型的析晶方法是常规的，例如挥发析晶、降温析晶或室温下析晶。

本发明晶型制备方法中所用的起始原料可以是任意形式的式(I)所示化合物，具体形式包括但不限于：无定形、任意晶型、水合物、溶剂合物等。

在本申请的说明书和权利要求书中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。然而，为了更好地理解本发明，下面提供了部分相关术语的定义和解释。另外，当本申请所提供的术语的定义和解释与本领域技术人员所通常理解的含义不一致时，以本申请所提供的术语的定义和解释为准。

本发明所述的“打浆”是指利用物质在溶剂中溶解性差，但杂质在溶剂中溶解性好的特性进行纯化的方法，打浆提纯可以去色、改变晶型或去除少量杂质。

本发明所述的“X-射线粉末衍射图谱或XRPD”是指根据布拉格公式2d sinθ＝nλ(式中，λ为X射线的波长，

衍射的级数n为任何正整数，一般取一级衍射峰，n＝1)，当X射线以掠角θ(入射角的余角，又称为布拉格角)入射到晶体或部分晶体样品的某一具有d点阵平面间距的原子面上时，就能满足布拉格方程，从而测得了这组X射线粉末衍射图。

本发明所述的“X-射线粉末衍射图谱或XRPD”是通过在X-射线粉末衍射仪中使用Cu-Kα辐射得到的图谱。

本发明所述的“差示扫描量热分析或DSC”是指在样品升温或恒温过程中，测量样品与参考物之间的温度差、热流差，以表征所有与热效应有关的物理变化和化学变化，得到样品的相变信息。

本发明所述的“2θ或2θ角度”是指衍射角，θ为布拉格角，单位为°或度，2θ的误差范围为±0.3或±0.2或±0.1。

本发明所述的“晶面间距或晶面间距(d值)”是指空间点阵选择3个不相平行的连结相邻两个点阵点的单位矢量a，b，c，它们将点阵划分成并置的平行六面体单位，称为晶面间距。空间点阵按照确定的平行六面体单位连线划分，获得一套直线网格，称为空间格子或晶格。点阵和晶格是分别用几何的点和线反映晶体结构的周期性，不同的晶面，其面间距(即相邻的两个平行晶面之间的距离)各不相同；单位为

或埃。

发明的有益效果

本发明制备的式(I)所示化合物的A晶型纯度高，在光照、高温、高湿的条件下晶型稳定性良好，HPLC纯度变化小、化学稳定性高，几乎无引湿性，更有利于药物发挥作用。本发明得到的式(I)所示化合物新的晶型能够满足生产运输储存的药用要求，生产工艺稳定、可重复可控，能够适应于工业化生产。

附图说明

图1为式(I)所示化合物的A晶型的XRPD图谱；

图2为式(I)所示化合物的A晶型的DSC图谱；

图3为式(I)所示化合物的A晶型的TGA图谱；

图4为式(I)所示化合物的A晶型的DVS图谱；

图5为式(I)所示化合物的A晶型经DVS检测前后的XRPD图谱对比。

具体实施方式

以下将结合实施例更详细地解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质和范围。

试验所用仪器的测试条件：

1、差示扫描量热仪(Differential Scanning Calorimeter,DSC)

仪器型号：MettlerToledo DSC 3⁺STAR^e System

吹扫气：氮气

升温速率：10.0℃/min

温度范围：25-300℃

2、X-射线衍射谱(X-ray Powder Diffraction,XRPD)

仪器型号：BRUKER D8 X-射线粉末衍射仪

射线：单色Cu-Kα射线(λ＝1.5406)

扫描方式：θ/2θ，扫描范围：3～64°

电压：40KV，电流：40mA

3、TGA热重分析

仪器型号：METTLER TOLEDO TGA 2

升温速率10℃/min

氮气吹扫速度20mL/min

4、DVS动态水分吸附

仪器型号：SMS DVS Advantage

温度：25℃；

溶剂：水

湿度变化：50％-95％-0％-95％-50％RH，dm/dt不大于0.02％；

实施例1

N-(4-(乙磺酰基)苄基)-2’-(4-(三氟甲基)苯基)-2’,3’-二氢-1’H-螺[环丙烷-1,4’-异喹啉]-7’-甲酰胺的制备

第一步

1-(7’-溴-1’H-螺[环丙烷-1,4’-异喹啉]-2’(3’H)-基)-2,2,2-三氟乙酮1b

将N-((1-(4-溴苯基)环丙基)甲基)-2,2,2-三氟乙酰胺1a(22g，68.3mmol，采用专利申请“WO2011124093”公开的方法制备而得)溶于150mL预制的乙酸和硫酸(V/V＝2:3)的混合溶剂中，加入多聚甲醛(7.96g，264.99mmol)，搅拌反应12小时。反应液倒入500mL冰水中，用乙酸乙酯(500mL×2)萃取，合并有机相，依次用水，饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物1b(4.5g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

第二步

2’-(2,2,2-三氟乙酰基)-2’,3’-二氢-1’H-螺[环丙烷-1,4’-异喹啉]-7’-羧酸乙酯1c

将粗品化合物1b(4g，11.97mmol)溶于40mL乙醇和二甲亚砜(V/V＝1:1)的混合溶剂中，加入1,3-双(二苯基膦)丙烷(987.5mg，2.39mmol)，三乙胺(1.21g，11.97mmol)和醋酸钯(537.53mg，2.39mmol)，一氧化碳氛围下，升温至60℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，倒入100mL水中，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(正己烷/乙酸乙酯体系)纯化所得残余物，得到标题化合物1c(2.5g，产率：63.8％)。

第三步

2’,3’-二氢-1’H-螺[环丙烷-1,4’-异喹啉]-7’-羧酸乙酯1d

将1c(2.5g，7.64mmol)溶于100mL乙醇和水(V/V＝1:1)的混合溶剂中，加入碳酸钾(1.58g，11.46mmol)，室温搅拌反应12小时。反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物1d(2g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

第四步

2’-(4-(三氟甲基)苯基)-2’,3’-二氢-1’H-螺[环丙烷-1,4’-异喹啉]-7’-羧酸乙酯1f

将粗品化合物1d(2g，8.65mmol)和1-溴-4-(三氟甲基)苯1e(2.33g，10.38mmol，采用公知的方法“Organic Letters,2014,16(16),4268-4271”制备而得)溶于50mL1,4-二氧六环中，加入碳酸铯(8.45g，25.94mmol)，2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(412.22mg，864.72umol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(791.83mg，864.72umol)，升温至90℃搅拌反应3小时。反应液冷却至室温，倒入100mL水中，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(正己烷/乙酸乙酯体系)纯化所得残余物，得到标题化合物1f(1.7g，产率：52.37％)。

第五步

2’-(4-(三氟甲基)苯基)-2’,3’-二氢-1’H-螺[环丙烷-1,4’-异喹啉]-7’-羧酸1g

将化合物1f(1.5g，4mmol)溶于60mL乙醇和水(V/V＝5:1)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(799.12mg，19.98mmol)，升温至回流搅拌反应2小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物中滴加1M盐酸至pH<2，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物1g(1.5g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

第六步

N-(4-(乙磺酰基)苄基)-2’-(4-(三氟甲基)苯基)-2’,3’-二氢-1’H-螺[环丙烷-1,4’-异喹啉]-7’-甲酰胺I

将粗品化合物1g(1.4g，4.03mmol)和(4-(乙磺酰基)苯基)甲胺1h(1.2g，6.05mmol，采用专利申请“WO2015017335”公开的方法制备而得)溶于30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(3.06g，8.06mmol)和三乙胺(1.22g，12.09mmol)，搅拌反应12小时。反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物I(1.1g，产率：51.63％)。

MS m/z(ESI):529.5[M+1]

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.11(s,1H),7.80-7.85(m,3H),7.69-7.71(m,1H),7.55-7.57(m,2H),7.49-7.50(m,2H),7.11-7.13(m,2H),6.93-6.95(m,1H),4.65(s,2H),4.56-4.57(m,2H),3.54(s,2H),3.23-3.28(m,2H),1.05-1.09(m,7H).

实施例2

将式(I)所示化合物(100mg，0.2mmol)加入到5mL乙酸乙酯中，升温回流，搅拌溶清，缓慢降至室温。反应液过滤，收集滤饼，真空干燥，得到式(I)所示化合物的A晶型。其X-射线衍射图谱见图1，其DSC谱图见图2，TGA谱图见图3，其特征峰位置如下表所示：

实施例3

将式(I)所示化合物(100mg，0.2mmol)加入到5mL甲醇中，升温回流，搅拌溶清，缓慢降至室温。反应液过滤，收集滤饼，真空干燥，得到，得到式(I)所示化合物的A晶型。

实施例4

将式(I)所示化合物(80.5g，152mmol)加入到3400mL乙醇中，升温回流，搅拌溶清，缓慢降至室温。反应液过滤，滤饼用500mL异丙醇淋洗，收集滤饼，真空干燥，得到式(I)所示化合物的A晶型。

实施例5

将式(I)所示化合物(50mg，0.1mmol)溶于到0.5mL二氯甲烷中，加入到5mL正己烷中，混合液过滤，收集滤饼，真空干燥，得到式(I)所示化合物的A晶型。

实施例6

将式(I)所示化合物(50mg，0.1mmol)加入到0.8mL异丙醚中，为白色浑浊液，室温打浆搅拌96小时。反应液过滤，收集滤饼，真空干燥，得到式(I)所示化合物的A晶型。

实施例7

将式(I)化合物晶型A进行3个月的长期(25℃、60％RH)、加速(40℃、75％RH)稳定性考察。所述晶型纯度通过Agilent 1200DAD高效液相色谱系统检测，其检测色谱柱为Agilent SB-C18，250*4.6mm，5μm(带保护柱)，流动相：TFA/ACN/H₂O，检测波长：214nm。

从表中可以看出，晶型A长期(25℃、60％RH)、加速(40℃、75％RH)稳定性条件下放置3个月的物理、化学稳定性好。

实施例8

对A晶型检测DVS后的样品检测XRPD，对比检测DVS前后晶型的XRPD结果，如图4、5所示。

DVS结果显示：A晶型几乎无引湿性，且在检测DVS前后晶型不变。

实施例9

以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。

测试例1、式(I)所示化合物对RORγ体外活性的测定

一、实验材料及仪器

1.

TR-FRET RORγ共激活体系(Life Technologies)

2.RORγLBD(AB Vector)

3.DMSO(SigmaAldrich)

4.酶标仪(Tecan)

二、实验步骤

采用LanthaScreen TR-FRET(时间分辨荧光能量共振转移)RORγ共激活体系筛选本发明的化合物对RORγ活性的调节。

首先配制完整缓冲液D(complete TR-FRET Coregulator)(Life Technologies)包含终浓度5mM DTT。DMSO终浓度为2％。将待测化合物在含有2％DMSO的完整缓冲液D中连续稀释为2x终浓度，最高剂量为的60μm。10μl/孔加入384孔板的试验孔(PerkinElmer)。每个检测化合物在相同浓度下设置2个平行对照孔。准备4X RORγLBD(AB Vector)。使用完整缓冲液D稀释RORγLBD浓度为1ng/μL。5μl/孔加入384孔测定板的试验孔。阴性对照孔为5μL完整缓冲液D，无RORγLBD。使用完全缓冲液D配制含有0.6μM荧光素-D22(4X)和8nM铽(Tb)标记的抗GST抗体(4X)(Life Technologies)混合液，将5μL混合液加入到384孔板中。总反应体系为20μL。在振荡器上轻轻混匀该384孔板并在室温下避光孵育2-4小时。

使用Tecan Infinite M1000检测荧光读数,通过GraphPad Prism 6.0软件绘制发射波长520nm/495nm的比值与化合物浓度的对数曲线，计算待测化合物的IC₅₀值。

式(I)所示化合物对RORγ体外活性通过以上的试验进行测定，测得的IC₅₀值为6nM。

测试例2、式(I)所示化合物对IL-17A酶联免疫定量分析活性测定

一、实验材料及仪器

1.人外周血单核细胞(PBMC)(Zenbio)

2.淋巴细胞培养基(Zenbio)

3.TexMACS(Miltenyi Biotec)

4.人Cytostim(Miltenyi Biotec)

5.人IL-17酶联免疫试剂盒(R&D系统)

6.CO₂培养箱(Fisher Scientific)

7.离心机(Fisher Scientific)

8.96孔细胞培养板(Fisher Scientific)

9.酶标仪(Tecan)

二、实验步骤

将冻存的人外周血单核细胞(PBMC)在预热的淋巴细胞培养基中快速复苏，离心1000rpm，10min，除去细胞培养上清，将细胞轻轻悬浮于TexMACS培养基中，计数细胞。在细胞悬液中按比例加入T细胞激活试剂cytostim(10μl/ml)，然后以1×105外周血单核细胞/孔的密度将细胞种植于96孔细胞培养板中。使用TexMACS培养基梯度稀释待测化合物，分别加入各实验孔中，每组2-3个平行孔。准备只含细胞不含cytostim的阴性对照孔，以得到背景读数。将细胞培养板放置于5％二氧化碳37℃培养箱孵育3天。药物处理3天后收取细胞培养上清液，离心去除悬浮物。然后使用IL-17A酶联免疫试剂盒定量上清液中IL-17A。使用GraphPad Prism 6.0计算待测化合物的IC₅₀值。

式(I)所示化合物对IL-17A酶联免疫定量分析通过以上的试验进行测定，测得的IC₅₀值为22nM。

Claims

1.一种式(I)所示化合物的A晶型，其X-射线粉末衍射图谱在2θ角为7.998、12.923、14.777、16.127、17.514、19.564、21.296、22.485、24.447、25.252、26.107、26.754和28.828处有特征峰，

2.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物的A晶型，其特征在于，其X-射线粉末衍射图谱在2θ角为7.998、12.923、14.777、16.127、17.514、18.013、19.564、20.518、21.296、22.485、23.749、24.447、25.252、26.107、26.754、28.295和28.828处有特征峰。

3.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物的A晶型，其特征在于，其X-射线粉末衍射图谱如图1所示。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的式(I)所示化合物的A晶型，其特征在于：所述2θ角的误差范围为±0.2。

5.药物组合物，其由权利要求1-4任意一项所述的式(I)所示化合物的A晶型与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制得。

6.药物组合物，包含权利要求1-4任意一项所述的式(I)所示化合物的A晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

7.一种制备如权利要求1-4任意一项所述的式(I)所示化合物的A晶型的方法，所述方法包括：

(1)将式(I)所示化合物加热溶解于适量的有机溶剂中，冷却、析晶、过滤，所述有机溶剂是羧酸酯和醇类溶剂中的一种或多种，其中所述羧酸酯为乙酸乙酯，所述醇类溶剂为C₁～C₆烷基醇；或

(2)将式(I)所示化合物溶解于适量的良溶剂中，加入反溶剂析晶，过滤结晶，所述良溶剂为卤代烷，其中所述卤代烷为二氯甲烷，所述的反溶剂为石油醚、环己烷、正庚烷、正己烷中的一种或多种；或

(3)将式(I)所示化合物与适量的溶剂混合打浆，过滤结晶，所述溶剂为异丙醇、乙酸异丙酯、异丙醚、正庚烷、乙醚、甲苯、二氧六环、乙腈和丙酮中的一种或多种。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述C₁～C₆烷基醇为甲醇和乙醇中的一种或多种。

9.一种包含式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物的制备方法，包括将权利要求1-4任意一项所述的式(I)所示化合物的A晶型与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。

10.权利要求1-4任意一项所述的式(I)所示化合物的A晶型或权利要求5、权利要求6任意一项所述的药物组合物在制备用于治疗炎症、自身免疫性疾病、肿瘤或癌症的药物中的用途。