CN111184731A

CN111184731A - 人参皂苷Rg5在制备用于改善睡眠的药物组合物中的用途

Info

Publication number: CN111184731A
Application number: CN202010069694.XA
Authority: CN
Inventors: 范代娣; 邵晶晶; 惠俊峰; 朱晨辉; 马晓轩
Original assignee: Xi'an Giant Biogene Technology Co ltd
Current assignee: Xi'an Giant Biogene Technology Co ltd
Priority date: 2020-01-21
Filing date: 2020-01-21
Publication date: 2020-05-22

Abstract

本发明涉及人参皂苷Rg5在制备用于改善睡眠的药物组合物中的用途。动物实验研究结果表明，人参皂苷Rg5具有显著的改善睡眠的作用。因此，人参皂苷Rg5可用于制备用于改善睡眠的药物组合物。

Description

人参皂苷Rg5在制备用于改善睡眠的药物组合物中的用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及特定稀有人参皂苷单体在制备用于改善睡眠的药物组合物中的用途。

背景技术

失眠症常被定义为由于长时间的睡眠潜伏期过长或睡眠持续时间过短引起的睡眠质量差而导致白天活动受到干扰的状态。一项调查显示，世界总人口中有35％的人患有慢性失眠症，其中多达17％的人患有严重的失眠症。在中国，大约有38％的成年人患有睡眠障碍，失眠会严重影响了人们的日常工作和生活并且通常会伴随多种伤害，包括生活质量下降，认知功能受损以及未来精神疾病的风险增加。此外，失眠也是免疫功能受损、焦虑和药物滥用的重大危险因素。

药物治疗是所有失眠治疗中最有效和广泛使用的方法。目前主流的治疗失眠的药物为苯二氮卓类药物。苯二氮卓类药物包括艾司唑仑(舒乐安定)、阿普唑仑(佳乐定)、地西泮(安定)、劳拉西泮、氯硝西泮、三唑仑、咪达唑仑等。地西泮(DZP)是目前用于治疗失眠的最常见的药物。尽管其疗效显着，但是地西泮会对GABAa受体的α亚基非特异性的作用机制导致明显的不良反应，如激动α2亚基导致肌松风险，直接体现在老年人身上的跌倒等。此外激动α5亚基会导致认知和记忆功能损害，与痴呆风险的升高也联系到了一起。并且它还会显著缩短慢波深度睡眠，增加浅睡眠时间，因此对正常的睡眠结构有破坏，危害人们的身心健康。因此国家药监局对BZDs的监控相当严格，三甲医院对BZDs的处方量有着严苛的控制。因此，迫切需要寻找副作用小的天然植物化学物质来治疗失眠。

人参属于五加科多年生草本植物，在中国医学历史上已经有超过2000多年的使用历史。人参的药理学作用主要来自于其主要活性成分人参皂苷，人参皂苷分为三类，分别为齐墩果酸型，原人参二醇型和原人参三醇型。临床显示针对不同类型的神经衰弱患者给予人参皂苷Rd治疗后，可消除患者的体重骤降，全身无力、头痛、失眠等症状。从黑参中提取的稀有人参皂苷Rg1和Rb1可以显着逆转乙醇诱导的记忆功能障碍，并能通过抑制谷氨酸来减少兴奋性神经细胞的损伤。

但是，目前尚未见关于具有改善睡眠功能的人参皂苷单体的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供具有改善睡眠功能的人参皂苷单体在制备用于改善睡眠的药物中的用途。

发明人通过动物实验证实，人参皂苷Rk1和Rg5具有显著的改善睡眠的作用，从而完成了本发明。

即，本发明包括：

1.人参皂苷Rg5在制备用于改善睡眠的药物组合物中的用途。

2.根据项1所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5为1重量份以上。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5为10重量份以上。

4.根据项1～3中任一项所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5为50重量份以上。

5.根据项1～4中任一项所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5为100重量份。

6.根据项1～5中任一项所述的用途，其中，所述药物组合物仅包含人参皂苷Rg5作为改善睡眠的有效成分。

7.根据项1～6中任一项所述的用途，其中，所述药物组合物还包含人参皂苷Rk1和/或人参皂苷Rg1。

8.根据项7所述的用途，其中，所述药物组合物仅包含人参皂苷Rg5、以及选自人参皂苷Rk1和人参皂苷Rg1中的任一种或两种作为改善睡眠的有效成分。

9.根据项7或8所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5、以及选自人参皂苷Rk1和/或人参皂苷Rg1中的任一种或两种的合计量为1重量份以上。

10.根据项7～9中任一项所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5、以及选自人参皂苷Rk1和/或人参皂苷Rg1中的任一种或两种的合计量为100重量份。

附图说明

图1为显示人参皂苷Rg5和Rk1对NMDA受体的拮抗作用的图。

图2为显示人参皂苷Rg5对昆明小鼠的睡眠数量的作用的图。

图3为显示人参皂苷Rg5对昆明小鼠的睡眠状态的作用的图。

图4为显示人参皂苷Rg5对昆明小鼠的运动活性的作用的图。

图5为显示人参皂苷Rg5对昆明小鼠血清中相关神经递质的作用的图。

图6为显示人参皂苷Rk1对昆明小鼠的睡眠数量的作用的图。

图7为显示人参皂苷Rk1对昆明小鼠的睡眠状态的作用的图。

图8为显示人参皂苷Rk1对昆明小鼠的运动活性的作用的图。

图9为显示人参皂苷Rk1对昆明小鼠血清中相关神经递质的作用的图。

图10为显示苦毒素对人参皂苷Rg5和Rk1诱导的催眠小鼠的作用的图。

图11为显示GABA_B受体拮抗剂SCH50911对人参皂苷Rg5和Rk1诱导的催眠小鼠的作用的图。

图12为显示5-HTP对人参皂苷Rg5和Rk1诱导的催眠小鼠的作用的图。

图13为显示各种人参皂苷的改善睡眠效果的图。

在上述图1-13中，如无特殊说明，未标注表示无显著差异，*表示有显著差异，P<0.05；**表示有显著差异，P<0.01；***表示有显著差异，P<0.001。

发明的具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。在无冲突的情况下，本说明书中的科学术语具有本领域技术人员通常理解的含义，如有冲突应以本说明书中的定义为准。

首先，在一个方面中，本发明提供人参皂苷Rg5在制备用于改善睡眠的药物组合物中的用途。即，所述用于改善睡眠的药物组合物包含人参皂苷Rg5。

在本说明书中，人参皂苷Rg5是指下述化学式1所述的化合物。

【化学式1】

所述药物组合物可以包含各种人参皂苷。所述药物组合物中包含的人参皂苷Rg5可以为1重量份以上、优选为2重量份以上、更优选为5重量份以上、更优选为10重量份以上、更优选为20重量份以上、更优选为30重量份以上、更优选为40重量份以上、更优选为50重量份以上、更优选为60重量份以上、更优选为70重量份以上、更优选为80重量份以上、更优选为90重量份以上、更优选为95重量份以上、更优选为99重量份以上、更优选100重量份(即所述药物组合物中仅包含人参皂苷Rg5这一种人参皂苷)，以该药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计。

所述药物组合物可以仅包含人参皂苷Rg5作为改善睡眠的有效成分，也可以进一步包含其它对改善睡眠有效的成分，例如化学合成药物成分、天然药物成分、生物药物成分等。特别是，所述药物组合物还可以包含人参皂苷Rk1。所述药物组合物可以仅包含人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1作为改善睡眠的有效成分。

在本说明书中，人参皂苷Rk1是指下述化学式2所述的化合物，其为人参皂苷Rg5的同分异构体。

【化学式2】

所述药物组合物中包含的人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的合计量可以为1重量份以上、优选为2重量份以上、更优选为5重量份以上、更优选为10重量份以上、更优选为20重量份以上、更优选为30重量份以上、更优选为40重量份以上、更优选为50重量份以上、更优选为60重量份以上、更优选为70重量份以上、更优选为80重量份以上、更优选为90重量份以上、更优选为95重量份以上、更优选为99重量份以上、更优选100重量份(即所述药物组合物中仅包含人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1这两种人参皂苷)，以该药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计。

所述人参皂苷Rk1、Rg5均为稀有人参皂苷，其在天然人参提取物中含量低或不存在。但在本发明的用于改善睡眠的药物组合物中，所述人参皂苷Rk1和/或Rg5的含量高。所述总人参皂苷的含量可以采用香草醛法测定，所述人参皂苷Rk1、Rg5的含量均可以采用HPLC法测定。

需要说明的是，虽然人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1互为同分异构体，但发明人发现两者在神经生物活性方面存在显著差异——具体而言，如本申请实施例2所示，发明人发现人参皂苷Rk1是NMDA受体拮抗剂，而人参皂苷Rg5不是。NMDA受体(N-methyl-D-asparticacid receptor，NMDAR)即N-甲基-D-天冬氨酸受体，是离子型谷氨酸受体的一个亚型，有研究表明NMDA受体是学习和记忆过程中一类至关重要的受体。

另一方面，发明人发现人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1都具有改善睡眠的作用。因此，本发明也提供人参皂苷Rk1在制备用于改善睡眠的药物组合物中的用途。所述药物组合物中人参皂苷Rk1的含量可以同前述的所述药物组合物中人参皂苷Rg5的含量。人参皂苷Rk1也可以作为所述药物组合物中的唯一人参皂苷成分或者唯一改善睡眠有效成分。

但是，正如前述，人参皂苷Rk1是NMDA受体拮抗剂，而人参皂苷Rg5不是。这说明，人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1改善睡眠的机制不是基于NMDA受体相关途径，至少人参皂苷Rg5不是基于NMDA受体相关途径。

上述人参皂苷Rk1和Rg5是已知化合物，可以采用本技术领域已知的方法来制备。上述人参皂苷Rk1和Rg5可以通过制备级HPLC来进行纯化。

本发明的用于改善睡眠的药物组合物中还可以包含辅料。对于本发明的用于改善睡眠的药物组合物中的辅料，没有特殊限制，例如可以使用本技术领域通常用于药品或保健品的辅料。具体地，所述辅料为淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、羟丙甲纤维素钠、黄原胶、蛋白糖等。

对所述用于改善睡眠的药物组合物的剂型没有特殊限制，例如可以是口服剂型或注射剂型。所述口服剂型可以是液体剂型，也可以是固体剂型。所述口服剂型可以为例如硬胶囊、软胶囊、缓控释放胶囊、压片、糖衣片、粉剂、颗粒剂、滴丸、水蜜丸、糖浆或口服液；所述注射剂型可以为例如溶液型、混悬液型、乳浊液型或冻干粉。所述用于改善睡眠的药物组合物的给药方式可以为例如口服、滴注或注射。

制备口服用固体制剂时，可以在向主药中加入赋形剂以及视需要而定的粘合剂、崩解剂、滑润剂、着色剂、矫味剂等后，按照常规方法制成片剂、包衣片剂、颗粒剂、细粒剂、散剂、胶囊剂等。

作为赋形剂，可使用例如乳糖、玉米淀粉、白糖、葡萄糖、山梨糖醇、结晶纤维素、二氧化硅等；作为粘合剂，可使用例如聚乙烯醇、乙基纤维素、甲基纤维素、阿拉伯胶、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素等；作为滑润剂，可使用例如硬脂酸镁、滑石、二氧化硅等；作为着色剂，可使用允许在药品中添加的着色剂；作为矫味剂，可使用可可粉、薄荷脑、芳香酸、薄荷油、龙脑、桂皮粉。当然，也可以在上述片剂、颗粒剂上包覆糖衣、明胶衣、以及其它的必要外衣。

制备注射剂时，可以根据需要向主药中添加pH调节剂、缓冲剂、悬助剂、增溶剂、稳定剂、等渗剂、防腐剂等，再按照常规方法制成静脉、皮下、肌肉内注射剂。此时，也可以根据需要，利用常规方法制成冷冻干燥物。

作为悬助剂，可列举例如甲基纤维素、吐温80、羟基乙基纤维素、阿拉伯胶、黄蓍树胶粉、羧甲基纤维素钠、聚氧乙烯山梨糖醇单月桂酸盐等。

作为增溶剂，可列举例如聚氧化乙烯氢化蓖麻油、吐温80、烟酰胺、聚氧乙烯山梨糖醇单月桂酸盐、聚乙二醇、蓖麻油脂肪酸乙酯等。

另外，作为稳定剂，可列举例如亚硫酸钠、偏亚硫酸钠等；作为防腐剂，可列举例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚等。

将本发明的用于改善睡眠的药物组合物施用于对象，可以治疗或预防对象的失眠症。所述对象可以是哺乳动物，例如可以是人、大鼠、兔、羊、猪、牛、猫、狗、猴等，优选为人。

本发明的用于改善睡眠的药物组合物，可以口服或非口服施用。施用量因症状程度、患者年龄、性别、体重、敏感性差异、施用方法、施用时期、施用间隔、药物制剂的性质、有效成分的种类等而异，无特殊限制，但通常成人(体重60Kg)每日1mg～3000mg、优选10mg～1000mg、更优选100mg～500mg，上述施用量通常可每日分1～3次施用。

实施例

下面给出的实施例，是为了便于理解本发明，并不以任何方式限定本发明的权利要求的范围。

实施例1

人参皂苷Rg5胶囊

按照如下配比制胶囊剂(6000粒，人参皂苷Rg5含量：100mg/粒)

名称	质量(g)	备注
			人参皂苷Rg5	600	纯度≥95％，符合药典要求
竹芋淀粉	1400	药用级
			α-含水乳糖	120	药用级
羟甲基纤维素钠	120	药用级
			玉米糊精	60	药用级

人参皂苷Rk1胶囊

按照如下配比制胶囊剂(1000粒，人参皂苷Rk1含量：100mg/粒)

实施例2 NDMA受体拮抗实验

NMDA(N-Methyl-D-aspartic acid)是一种特异性NMDA受体激动剂，只与NMDA受体结合，而不会影响其他谷氨酸受体，刺激非特异性阳离子通道的打开，使Ca²⁺和Na⁺进入细胞，K⁺输出细胞。NMDA受体的激活能够产生兴奋性突触后电位(EPSP)，触发细胞内Ca²⁺含量的增加，这可能进一步参与多种不同的信号转导途径。NMDA受体对多种生理(如长时间增强作用和神经可塑性)和病理过程(如兴奋性毒性和癫痫)起着关键的作用。

1.实验材料

实施例1所制备的人参皂苷Rg5胶囊、Rk1胶囊；KM小鼠，雄性，体重18-22g。

2.实验方法

2.1正常小鼠60只，平均分成6组，即空白对照组，NMDA对照组，Rg5胶囊组(60mg/kg)，Rg5(60mg/kg)+NMDA(100mg/kg)剂量组，Rk1胶囊组(60mg/kg)，Rk1(60mg/kg)+NMDA(100mg/kg)剂量组。将上述胶囊溶解于去离子水中，各组均按0.2mL/10g体重灌胃给药。每日一次，连续给药7天，空白对照组给予去离子水。

2.2以上组小鼠均连续给药7天，在末次给药后30分钟后腹腔注射抑制剂NMDA，并在15分钟后使用戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠并记录每只小鼠的睡眠潜伏期和睡眠时长。睡眠潜伏期为注射戊巴比妥钠后至小鼠翻正反应消失时间的时间；睡眠时长为小鼠翻正反应消失后至其苏醒之间的时间。在注射戊巴比妥钠30分钟后未进入睡眠状态的小鼠被剔除。

2.3本次实验数据以Mean±SD表示，以SPSS19.0统计软件处理，用One-way ANOVA方法。

3.实验结果

实验结果见图1。该结果显示，与空白对照组相比，单独使用NMDA对小鼠的睡眠状态并没有影响。人参皂苷Rg5/Rk1胶囊组(60mg/kg)与对照组相比，可明显缩短睡眠潜伏期(P<0.01)并增加睡眠时间(P<0.001)。当将Rg5与NMDA联合治疗时，与Rg5胶囊组相比睡眠潜伏期显着增加(P<0.05)且睡眠时间显着减少(P<0.001)。当Rk1与NMDA合并使用时，与单独使用Rk1胶囊组相比，睡眠潜伏期和睡眠时间没有显着差异。以上结果表明，Rk1是NMDA受体的拮抗剂而Rg5不是NMDA受体的拮抗剂。

实施例3：阈下剂量的戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠实验1

1.实验材料

实施例1所制备的人参皂苷Rg5胶囊；地西泮片(山东信谊制药有限公司)；戊巴比妥钠(中国医药集团上海化学试剂有限公司)；KM小鼠，雄性，体重18-22g。

2.实验方法

2.1正常小鼠40只，平均分成4组，即空白对照组，阳性药地西泮组2.5mg/kg、Rg5胶囊30mg/kg、60mg/kg剂量组。将上述胶囊溶解于去离子水中，各组均按0.2mL/10g体重灌胃给药。每日一次，连续给药7天，空白对照组给予去离子水。

2.2以上组小鼠均连续给药7天，在末次给药后30分钟后进行实验。使用阈下剂量的戊巴比妥钠(32mg/kg)麻醉小鼠并记录小鼠的入睡只数。小鼠是否入睡的判定规则为其翻正反应是否消失。

2.3统计方法

本次实验数据使用SPSS19.0统计软件处理，所使用的检验方法为卡方检验。

3.实验结果

实验结果见图2。该结果显示，与空白对照组对比，人参皂苷Rg5可显著增加阈下剂量戊巴比妥钠所诱导的小鼠睡眠数量增加。

实施例4：戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠实验1

1.实验材料

2.实验方法

2.1动物分组及给药方式、剂量、时间同实施例3。

2.2以上组小鼠均连续给药7天，在末次给药后30分钟后进行实验。腹腔注射戊巴比妥钠(45mg/kg)诱导其睡眠，记录每只小鼠的睡眠潜伏期以及睡眠时长。睡眠潜伏期为注射戊巴比妥钠后至小鼠翻正反应消失时间的时间；睡眠时长为小鼠翻正反应消失后至其苏醒之间的时间。在注射戊巴比妥钠30分钟后未进入睡眠状态的小鼠被剔除。

2.3统计方法

本次实验数据以Mean±SD表示，以SPSS19.0统计软件处理，用One-way ANOVA方法

3.实验结果

实验结果见图3。该结果显示，与空白对照组相比，人参皂苷Rg5可显著降低小鼠的睡眠潜伏期并且显著增加小鼠的睡眠时长，且效果与阳性药DZP相当。

实施例5：小鼠旷场实验1

1.实验材料

实施例1所制备的人参皂苷Rg5胶囊；地西泮片(山东信谊制药有限公司)；戊巴比妥钠(中国医药集团上海化学试剂有限公司)；KM小鼠，雄性，体重18-22g；动物轨迹检测系统(北京诺尔德斯信息技术有限公司)。

2.实验方法

2.1动物分组及给药方式、剂量、时间同实施例3。

2.2以上组小鼠均连续给药7天，在末次给药后30分钟后进行实验。在进行试验前，将小鼠放置于旷场中央使其适应环境5分钟，之后使用视频监测系统监测每只小鼠的运动轨迹并记录其运动距离。在每只小鼠进行实验后需使用75％的酒精仔细擦拭场地防止影响下一只小鼠的实验结果。

2.3统计方法

本次实验数据以Mean±SD表示，以SPSS19.0统计软件处理，用One-way ANOVA方法。

3.实验结果

实验结果见图4。该结果显示，与空白对照组相比，人参皂苷Rg5可显著降低小鼠的自主运动活性。高剂量的人参皂苷Rg5的效果与阳性药DZP相当。

实施例6：小鼠血清中相关神经递质检测1

1.实验材料

实施例1所制备的人参皂苷Rg5胶囊；地西泮片(山东信谊制药有限公司)；KM小鼠，雄性，体重18-22g；GABA Elisa试剂盒，Glu Elisa试剂盒(上海酶联生物技术有限公司)。

2.实验方法

2.1正常小鼠30只，平均分成3组，即空白对照组，Rg5胶囊30mg/kg、60mg/kg剂量组。将上述胶囊溶解于去离子水中，各组均按0.2mL/10g体重灌胃给药。每日一次，连续给药7天，空白对照组给予去离子水。

2.2以上组小鼠均连续给药7天，在末次给药后30分钟后进行实验。将小鼠进行安乐死并迅速收集小鼠的眼眶血并离心(12000r，4℃)，提取离心后的上清液用于指标检测。GABA和Glu的检测参考试剂盒所携带的说明书。

3.实验结果

实验结果见图5，该结果显示，与空白对照组相比，人参皂苷Rg5可显著增加小鼠血清中抑制性神经递质GABA以及显著降低兴奋性神经递质Glu的含量且具有剂量依赖性。

以上实验数据表明，人参皂苷Rg5可显著增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠数量的增加；并且通过戊巴比妥钠诱导的睡眠实验可发现人参皂苷Rg5可改善小鼠的睡眠状态；通过旷场实验可发现人参皂苷Rg5具有良好的镇静作用；通过检测神经递质也发现人参皂苷Rg5可提高抑制性神经递质并且减少兴奋性神经递质的增加。以上均表明人参皂苷Rg5具有显著的改善睡眠作用。

实施例7：阈下剂量的戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠实验2

1.实验材料

实施例1所制备的人参皂苷Rk1胶囊；地西泮片(山东信谊制药有限公司)；戊巴比妥钠(中国医药集团上海化学试剂有限公司)；KM小鼠，雄性，体重18-22g。

2.实验方法

2.1正常小鼠40只，平均分成4组，即空白对照组，阳性药地西泮组2.5mg/kg、Rk1胶囊30mg/kg、60mg/kg剂量组。将上述胶囊溶解于去离子水中，各组均按0.2mL/10g体重灌胃给药。每日一次，连续给药7天，空白对照组给予去离子水。

2.3统计方法

3.实验结果

实验结果见图6，该结果显示，与空白对照组对比，人参皂苷Rk1可显著增加阈下剂量戊巴比妥钠所诱导的小鼠睡眠数量增加。

实施例8：戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠实验2

1.实验材料

实施例1所制备的人参皂苷Rk1胶囊；地西泮片(山东信谊制药有限公司)；戊巴比妥钠(中国医药集团上海化学试剂有限公司)KM小鼠，雄性，体重18-22g。

2.实验方法

2.1动物分组及给药方式、剂量、时间同实施例7。

2.3统计方法

3.实验结果

实验结果见图7。该结果显示，与空白对照组相比，人参皂苷Rk1可显著降低小鼠的睡眠潜伏期并且显著增加小鼠的睡眠时长，且效果与阳性药DZP相当。

实施例9：小鼠旷场实验2

1.实验材料

实施例1所制备的人参皂苷Rk1胶囊；地西泮片(山东信谊制药有限公司)；戊巴比妥钠(中国医药集团上海化学试剂有限公司)KM小鼠，雄性，体重18-22g。动物轨迹检测系统(北京诺尔德斯信息技术有限公司)。

2.实验方法

2.1动物分组及给药方式、剂量、时间同实施例7。

2.2以上组小鼠均连续给药7天，在末次给药后30分钟后进行实验。在进行试验前，将小鼠放置于旷场中央使其适应环境5分钟，之后使用视屏监测系统监测每只小鼠的运动轨迹并记录其运动距离。在每只小鼠进行实验后需使用75％的酒精仔细擦拭场地防止影响下一只小鼠的实验结果。

2.3统计方法

3.实验结果

实验结果见图8。该结果显示，与空白对照组相比，人参皂苷Rk1可显著降低小鼠的自主运动活性。高剂量的人参皂苷Rk1的效果与阳性药DZP相当。

实施例10：小鼠血清中相关神经递质检测2

1.实验材料

实施例1所制备的人参皂苷Rk1胶囊；地西泮片(山东信谊制药有限公司)；KM小鼠，雄性，体重18-22g。GABA Elisa试剂盒，Glu Elisa试剂盒(上海酶联生物技术有限公司)。

2.实验方法

2.1正常小鼠30只，平均分成3组，即空白对照组，Rk1胶囊30mg/kg、60mg/kg剂量组。将上述胶囊溶解于去离子水中，各组均按0.2mL/10g体重灌胃给药。每日一次，连续给药7天，空白对照组给予去离子水。

2.3本次实验数据以Mean±SD表示，以SPSS19.0统计软件处理，用One-wayANOVA方法。

3.实验结果

实验结果见图9。该结果显示，与空白对照组相比，人参皂苷Rk1可显著增加小鼠血清中抑制性神经递质GABA以及显著降低兴奋性神经递质Glu的含量且具有剂量依赖性。

以上实验数据表明，人参皂苷Rk1可显著增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠数量的增加；并且通过戊巴比妥钠诱导的睡眠实验可发现人参皂苷Rk1可改善小鼠的睡眠状态；通过旷场实验可发现人参皂苷Rk1具有良好的镇静作用；通过检测神经递质也发现人参皂苷Rk1可提高抑制性神经递质并且减少兴奋性神经递质的增加。以上均表明人参皂苷Rk1具有显著的改善睡眠作用。

实施例11：多种相互作用的化学物质对人参皂苷Rg5和Rk1诱导的催眠小鼠的作用

首先，为了确认人参皂苷Rg5/Rk1如何作用于GABA能神经系统并影响其受体，对人参皂苷Rg5/Rk1处理的小鼠进行了苦毒素的预处理，该毒素是GABA_A受体的选择性拮抗剂。结果显示在图10中。与对照组相比，人参皂苷Rg5/Rk1(60mg/kg)显着缩短了睡眠潜伏期(P<0.01)，并延长了睡眠时间(P<0.001)。将Rg5/Rk1与苦毒素联合使用时，睡眠潜伏期显着增加(P<0.01，P<0.05)，睡眠时间明显减少(P<0.001)，对比于单独使用Rg5/Rk1组。但是，单独使用苦毒素时，与对照组相比，睡眠潜伏期和睡眠时间无显着差异(P>0.05)。这些结果表明人参皂苷Rg5/Rk1确实作用于GABA能神经系统并影响GABA_A受体。

除了验证人参皂苷Rg5/Rk1对GABA_B受体的作用外，我们还选择了GABA_B受体拮抗剂SCH50911，以确认人参皂苷是否影响GABA_B受体。如图11所示，与空白组相比，用人参皂苷Rg5/Rk1治疗的小鼠的睡眠潜伏期(P<0.01)明显减少，并且睡眠持续时间(P<0.001)大大增加。与单独使用Rg5/Rk1治疗的组相比，将Rg5/Rk1与SCH50911共同治疗可增加小鼠的睡眠潜伏期，并显着减少睡眠时间。这些结果表明人参皂苷Rg5/Rk1作用于GABA能神经系统并影响了GABA_B受体。

5-HT在调节睡眠中起着重要作用，为了研究人参皂苷Rg5/Rk1的催眠活性与5-羟色胺能系统之间的关系，我们使用了5-HT的前体5-HTP来验证人参皂苷Rg5/Rk1是否可以与5-HTP协同增强睡眠状态。结果显示在图12中，单独施用5-HTP不影响睡眠潜伏期或睡眠持续时间。当Rg5与5-HTP联合治疗时，睡眠潜伏期显着减少(P<0.05)，睡眠时间显着延长(P<0.05)，与Rg5组相比。当Rk1联合5-HTP治疗时，与Rk1相比，睡眠潜伏期无显着差异，但睡眠时间显着增加(P<0.05)。因此，这些结果表明，人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的催眠作用可能与血清素能系统有关。

实施例12：人参皂苷改善睡眠药效比较

1.实验材料

人参皂苷Rg5胶囊，Rk1胶囊，Rb1胶囊，Rg1胶囊；KM小鼠，雄性，体重18-22g。

2.实验方法

2.1正常小鼠60只，平均分成6组，即空白对照组，Rg5胶囊组(60mg/kg)，Rk1(60mg/kg)胶囊组，Rb1胶囊组(60mg/kg)，Rg1(60mg/kg)胶囊组，DZP阳性药组(2mg/kg)。将上述胶囊溶解于去离子水中，各组均按0.2mL/10g体重灌胃给药。每日一次，连续给药7天，空白对照组给予去离子水。

2.2以上组小鼠均连续给药7天，在末次给药后30分钟后使用戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠并记录每只小鼠的睡眠潜伏期和睡眠时长。睡眠潜伏期为注射戊巴比妥钠后至小鼠翻正反应消失时间的时间；睡眠时长为小鼠翻正反应消失后至其苏醒之间的时间。在注射戊巴比妥钠30分钟后未进入睡眠状态的小鼠被剔除。

3.实验结果

实验结果见图13。结果显示，人参皂苷Rg5/Rk1胶囊组(60mg/kg)与空白对照组相比，可明显缩短睡眠潜伏期(P<0.01)并增加睡眠时间(P<0.001)。并且人参皂苷Rg5与Rk1的效果较Rb1相比有显著的优越性(P<0.001)。人参皂苷Rg5与Rk1的效果与Rg1效果相似，但Rg5/Rk1与Rg1的作用机制不同：人参皂苷Rg1是通过调节蓝藻背叶核中的去甲肾上腺素能系统和背核中的血清素能系统促进睡眠(Biomedicine&Pharmacotherapy,2019.116:p.109009)，而人参皂苷Rg5和Rk1则是通过影响GABA能神经系统来达到改善睡眠的效果。

还需要说明的是，在可实施且不明显违背本发明的主旨的前提下，在本说明书中作为某一技术方案的构成部分所描述的任一技术特征或技术特征的组合同样也可以适用于其它技术方案；并且，在可实施且不明显违背本发明的主旨的前提下，作为不同技术方案的构成部分所描述的技术特征之间也可以以任意方式进行组合，来构成其它技术方案。本发明也包含在上述情况下通过组合而得到的技术方案，并且这些技术方案相当于记载在本说明书中。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了说明，但本领域技术人员应该理解的是，这些并非意图对本发明的范围进行限定，本发明的范围应由权利要求书确定。

工业实用性

根据本发明，将人参皂苷Rg5用于制备用于改善睡眠的药物组合物，可提供一种毒副作用小且疗效显著的能够治疗例如失眠症的药物。

Claims

1.人参皂苷Rg5在制备用于改善睡眠的药物组合物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5为1重量份以上。

3.根据权利要求1所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5为10重量份以上。

4.根据权利要求1所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5为50重量份以上。

5.根据权利要求1所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5为100重量份。

6.根据权利要求1所述的用途，其中，所述药物组合物仅包含人参皂苷Rg5作为改善睡眠的有效成分。

7.根据权利要求1所述的用途，其中，所述药物组合物还包含人参皂苷Rk1和/或人参皂苷Rg1。

8.根据权利要求7所述的用途，其中，所述药物组合物仅包含人参皂苷Rg5、人参皂苷Rk1和/或人参皂苷Rg1作为改善睡眠的有效成分。

9.根据权利要求7所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5、人参皂苷Rk1和/或人参皂苷Rg1的合计量为1重量份以上。

10.根据权利要求7所述的用途，其中，以所述药物组合物中包含的总人参皂苷为100重量份计，该药物组合物中包含的人参皂苷Rg5、人参皂苷Rk1和/或人参皂苷Rg1的合计量为100重量份。