CN111184701A - 一种靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体及其制备方法，属于生物医用高分子材料技术领域。本发明的制备方法，以单‑6‑脱氧‑6‑乙二胺‑β‑环糊精修饰的透明质酸和酯基键合的姜黄素‑顺铂为原料，利用β‑环糊精和姜黄素之间的主客体包合作用形成超分子聚合物；以超分子聚合物为原料，利用所述超分子聚合物的两亲性自组装形成亲水性透明质酸为壳层、疏水性姜黄素‑顺铂为内核的超分子纳米组装体。本发明的双药超分子纳米组装体，可实现药物的靶向递送，特异响应性释放以及协同的联合治疗，增强对肿瘤组织的治疗效果，降低对正常组织的毒副作用，解决了目前化疗药物利用率不高，缺乏靶向性，具有毒副作用的问题。

Description

一种靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体及其 制备方法
技术领域
本发明属于生物医用高分子材料技术领域，尤其是一种靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体及其制备方法。
背景技术
不断增高的癌症发病率严重威胁着人类健康，目前，化学药物治疗是最有效的治疗方式之一，但由于药物本身水溶性差、生物相容性差以及缺乏靶向性等特点，从而表现出一定的毒副作用和低的生物利用率。因此，设计并制备药物输送体系以增强对肿瘤组织的治疗效果并减小对正常组织的毒副作用是迫切需要的。基于肿瘤组织区别于正常组织的细胞微环境，如增强渗透和滞留(EPR)效应，酸性内涵体/溶酶体(pH 5.0-5.5)环境，以及过度表达的受体/酶/蛋白质、细胞内物种(如酯酶、活性氧、谷胱甘肽)等，设计带有肿瘤靶向分子并且尺寸合适的刺激响应型纳米组装体能够以受体介导的主动靶向作用内吞进入肿瘤细胞并在特定环境下有效释放药物。
发明内容
本发明的目的在于解决现有的化疗药物利用率不高、缺乏靶向性及具有毒副作用问题，提供一种靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体及其制备方法。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
一种靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体的制备方法：
以单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸和酯基键合的姜黄素-顺铂为原料，利用β-环糊精和姜黄素之间的主客体包合作用形成超分子聚合物；
以超分子聚合物为原料，利用所述超分子聚合物的两亲性自组装形成亲水性透明质酸为壳层、疏水性姜黄素-顺铂为内核的超分子纳米组装体。
进一步的，具体操作为：
将单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸溶于pH为7.4的缓冲液中，得到混合液A；将酯基键合的姜黄素-顺铂溶于N,N-二甲基甲酰胺，得到混合液B；
将混合液B滴加混合液A中，混合均匀，避光反应，直至反应液变为胶体，反应完成，得到靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体。
进一步的，单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸中的透明质酸的分子量为10KDa；
平均一条透明质酸分子链上修饰5.8个单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精，取代度为23％。
进一步的，混合液A中的β-环糊精和混合液B中的姜黄素的物质的量之比为1:(0.8-1.2)。
进一步的，磷酸盐缓冲液与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为100：1。
进一步的，酯基键合的姜黄素-顺铂的合成方法为：
将氧化顺铂和N,N-二甲基甲酰胺混合，并去除混合液中的空气，得到混合液C；
将单端羧基化的姜黄素和4-二甲氨基吡啶溶于N,N-二甲基甲酰胺，得到混合液D，将混合液D滴加到混合液A中；
滴加完成后，加入N,N’-二异丙基碳二亚胺，并去除空气，之后密封保存，在室温条件下避光反应6-24h，得到反应液；
将反应液进行提纯，得到反应产物，即酯基键合的姜黄素-顺铂。
进一步的，单端羧基化的姜黄素与氧化顺铂的物质的量之比为(1.5-2.5)：1。
进一步的，单端羧基化的姜黄素结构式为：
Figure BDA0002368417340000031
氧化顺铂的结构式为：
Figure BDA0002368417340000032
本发明制备方法制备的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体。
进一步的，粒径为80-200nm。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体的制备方法，
控制反应条件，利用原料之间的互相作用力，进行自组装，制备方法简单易行。
本发明的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体，以疏水Cur-Pt为内核、亲水透明质酸为壳层，单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸在酸性内涵体/溶酶体环境下仲胺氮原子被质子化产生的库伦斥力可引起组装体解组装，透明质酸赋予组装体以主动靶向的能力；姜黄素与顺铂通过酯基键合，在肿瘤组织酯酶过度表达的环境下，酯基被水解还原，姜黄素与顺铂两种药物释放，实现了药物的靶向递送，可控释放以及协同的联合治疗；本发明的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体，可实现药物的靶向递送，特异响应性释放以及协同的联合治疗，增强对肿瘤组织的治疗效果，降低对正常组织的毒副作用，解决了目前化疗药物利用率不高，缺乏靶向性，具有毒副作用的问题。
进一步的，pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体粒径为80-200nm，在肿瘤组织EPR效应下，可进入肿瘤组织并长时间滞留，同时避免进入正常组织细胞。
附图说明
图1为本发明的超分子纳米组装体的合成路线示意图；
图2为实施例1的超分子纳米组装体的荧光发射光谱图，其中，2(a)为Cur-Pt随HA-CD浓度递增的荧光发射光谱图；2(b)为Cur-Pt的荧光强度随β-CD浓度变化的线性拟合图；
图3为实施例1的超分子纳米组装体在不同环境下的形貌和尺寸结果，其中，3(a)、3(e)、3(i)为HCPNs在pH＝7.4环境下的TEM,AFM和DLS图；3(b)、3(f)、3(j)为HCPNs在pH＝7.4并加入30U/mL酯酶环境下的TEM,AFM和DLS图；3(c)、3(j)、3(k)为HCPNs在pH＝5.0环境下的TEM,AFM和DLS图；3(d)、3(h)、3(l)为HCPNs在pH＝5.0并加入30U/mL酯酶环境下的TEM,AFM和DLS图；
图4为实施例1的超分子纳米组装体的体外累计释放率，其中，4(a)姜黄素的体外累计释放率图，4(b)顺铂的体外累计释放率图；
图5为实施例1的超分子纳米组装体的体外细胞毒性实验结果，其中，5(a)HA-CD培养PC-3和LO-2细胞48h的细胞毒性结果；5(b)为姜黄素、顺铂、姜黄素+顺铂1:1混合物、HCPNs和HCPNs+HA分别培养PC-3细胞48h的细胞毒性结果；5(c)为姜黄素、顺铂、姜黄素+顺铂1:1混合物、HCPNs和HCPNs+HA分别培养LO-2细胞48h的细胞毒性结果；
图6为实施例1的超分子纳米组装体的细胞摄取结果，从左到右分别为：DAPI、姜黄素和两个图片的叠加，其中，6(a)为HCPNs孵育PC-3细胞4h的激光共聚焦图片，6(b)为HCPNs孵育PC-3细胞24h的激光共聚焦图片，6(c)为姜黄素孵育PC-3细胞24h的激光共聚焦图片，6(d)为HCPNs+HA孵育PC-3细胞24h的激光共聚焦图片，6(e)为HCPNs孵育LO-2细胞24h时的激光共聚焦图片。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
带有肿瘤靶向分子并且尺寸合适的刺激响应型纳米组装体能够以受体介导的主动靶向作用内吞进入肿瘤细胞并在特定环境下有效释放药物。两种药物的联合使用能够提高治疗效果并在一定程度上克服单一药物长期使用所产生的多药耐药性。超分子聚合物以非共价键作用力作为构筑驱动力，具有动态可逆以及多种环境的刺激响应性。其中以主客体包合作用构筑的超分子聚合物表现出外界环境刺激下的包合-解包合特性，以及合适条件下进行“模块化”组分配比可自发形成的简单制备方法而被关注。其中，β-环糊精(β-cyclodextrin,β-CD)是常用的一种大环主体分子，具有良好的生物相容性，在生物利用率方面能增强细胞膜吸收，促进在细胞膜的渗透。
透明质酸(Hyaluronic acid,HA)是一种能够特异性识别肿瘤细胞表面过度表达的CD44受体并具有良好水溶性、生物相容性以及可降解性的天然多聚糖高分子，引入透明质酸作为亲水端可赋予纳米组装体以主动靶向的能力。姜黄素(Curcumin,Cur)是从植物姜黄的根茎中提取的天然多酚类化合物，具有广谱抗肿瘤作用，能通过多种机制抑制肿瘤细胞增殖，已被美国国立肿瘤研究所列为第三代肿瘤治疗药，但是，姜黄素拥有差的稳定性及水溶性且易降解，其临床应用受到限制，由于姜黄素能够与β-环糊精形成主客体包合物，从而其水溶性和生物利用率可得到改善。顺铂(Cisplatin)为当前联合化疗中最常用的药物之一，为无机金属络合物，有较强的广谱抗癌作用以及一定的毒副作用。将单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰到透明质酸上，得到HA-CD；将姜黄素与顺铂以酯基键合，得到Cur-Pt；通过β-环糊精与姜黄素的主客体包合作用构筑的超分子聚合物，可进一步自组装，形成以疏水Cur-Pt为内核、亲水透明质酸为壳层的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体HCPNs。该超分子纳米组装体同时被赋予HA受体介导的主动靶向作用，酸性内涵体/溶酶体环境诱导的单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸上仲胺氮原子的质子化产生的库伦斥力引起的组装体解组装，以及酯酶诱导的酯基水解的特性，从而可实现药物的靶向递送，特异响应性释放以及协同的联合治疗，增强对肿瘤组织的治疗效果，降低对正常组织的毒副作用。
下面结合附图对本发明做进一步详细描述：
实施例1
1)合成姜黄素-顺铂有机-无机杂化前药分子
将氧化顺铂(18.08mg,0.054mmol)和0.6mL干燥的N,N-二甲基甲酰胺混合，并通入氮气15min，得到混合液；将单端羧基化的姜黄素(48mg,0.103mmol)和4-二甲氨基吡啶(6.59mg,0.054mmol)溶于0.3mL干燥的N,N-二甲基甲酰胺，并逐滴滴加进入上述混合液中，滴加完成后，加入N,N’-二异丙基碳二亚胺(13.61mg,0.108mmol)，继续通入氮气15min，密封体系，于25℃条件下避光反应12h，得到反应液；将反应液置于截留分子量为500的透析袋中，使用N,N-二甲基甲酰胺透析，8h后换水透析2天，随后冷冻干燥，得到固体产物，即为通过酯基键合的姜黄素-顺铂；
检测实施例1制备的姜黄素-顺铂的核磁氢谱表征如下：1H NMR(DMSO-d6，TMS)：δ＝7.65-7.55,6.54-6.44(4H,—CH＝CH—)，δ＝7.18-6.90(6H,in Ar)，δ＝6.07-5.78(1H,—CH＝C(OH)—),δ＝4.0-3.73(6H,—OCH3),δ＝3.0-2.62(4H,—CH2CH2—).
2)制备超分子纳米组装体
将单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸(2.4mg,0.15μmol,含β-环糊精0.84μmol)溶于3mL pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，得到混合液1；将姜黄素-顺铂(0.66mg,0.84μmol)前药分子溶于30μL N,N-二甲基甲酰胺，得到混合液2；将混合液2并滴加到混合液1中，超声10min，避光搅拌8-12h进行反应，即得到靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体HCPNs。
实施例2
1)合成姜黄素-顺铂有机-无机杂化前药分子
将氧化顺铂(18.08mg,0.054mmol)和0.6mL干燥的N,N-二甲基甲酰胺混合，并通入氮气15min，得到混合液；将单端羧基化的姜黄素(27.05mg,0.081mmol)和4-二甲氨基吡啶(6.59mg,0.054mmol)溶于0.3mL干燥的N,N-二甲基甲酰胺，并逐滴滴加进入上述混合液中；滴加完成后，加入N,N’-二异丙基碳二亚胺(13.61mg,0.108mmol)，继续通入氮气15min，密封体系，于25℃条件下避光反应12h，得到反应液；将反应液置于截留分子量为500的透析袋中，使用N,N-二甲基甲酰胺透析，8h后换水透析2天，随后冷冻干燥，得到固体产物，即为通过酯基键合的姜黄素-顺铂；
2)制备超分子纳米组装体
将单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸(2.4mg,0.15μmol,含β-环糊精0.84μmol)溶于3mL pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，得到混合液1；将姜黄素-顺铂(0.53mg,0.67μmol)前药分子溶于30μL N,N-二甲基甲酰胺，得到混合液2，将混合液2滴加到混合液1中，超声10min，避光搅拌8-12h进行反应，即得到靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体HCPNs。
实施例3
1)合成姜黄素-顺铂有机-无机杂化前药分子
将氧化顺铂(18.08mg,0.054mmol)和0.6mL干燥的N,N-二甲基甲酰胺混合，并通入氮气15min，得到混合液；将单端羧基化的姜黄素(48mg,0.135mmol)和4-二甲氨基吡啶(6.59mg,0.054mmol)溶于0.3mL干燥的N,N-二甲基甲酰胺，并逐滴滴加进入上述混合液中，滴加完成后，加入N,N’-二异丙基碳二亚胺(17.01mg,0.135mmol)，继续通入氮气15min；密封体系，于25℃条件下避光反应12h，得到反应液；将反应液置于截留分子量为500的透析袋中，使用N,N-二甲基甲酰胺透析，8h后换水透析2天，随后冷冻干燥，得到固体产物，即为通过酯基键合的姜黄素-顺铂；
2)制备超分子纳米组装体
将单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸(2.4mg,0.15μmol,含β-环糊精0.84μmol)溶于3mL pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，得到混合液1；将姜黄素-顺铂(0.78mg,1.0μmol)的前药分子溶于30μL的N,N-二甲基甲酰胺中，得到混合液2；将混合液2滴加到混合液1中，超声10min，避光搅拌8-12h进行反应，即得到靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体HCPNs。
参见图1，图1为本发明的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体HCPNs的合成路线图；单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸(HA-CD)与姜黄素-顺铂(Cur-Pt)通过主客体包合作用形成超分子聚合物，所构筑的超分子聚合物具有两亲性的特质，因此，在亲、疏水作用下，自组装形成疏水姜黄素-顺铂为内核，亲水透明质酸链为壳层的球形胶束。
参见图2，图2(a)为实施例1制备的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体HCPNs的荧光发射光谱图；采用F-7000FL型荧光分光光度计于25℃测定，激发波长420nm，发射光谱测定范围435～650nm，狭缝宽度2.5nm。固定Cur-Pt的浓度为6×10-6mmol/mL，随HA-CD的不断加入，β-CD的浓度逐渐增大，Cur的最大吸收峰波长由500nm向489nm低波方向发生偏移，并且荧光强度显著增强。这是由于作为Cur荧光基团的苯环部分进入了β-CD的空腔，减小了荧光的猝灭，增强了荧光强度。此外为了研究HA-CD的浓度与荧光强度之间的关系，以1/I-I0对1/[β-CD]作图(I0表示纯水的荧光强度，I表示加入不同浓度β-CD的荧光强度，[β-CD]表示加入不同浓度HA-CD中β-CD的浓度)，如图2(b)所示，根据曲线可知，随着HA-CD的不断加入，曲线的相关系数R2＝0.99，表明了Cur-Pt与HA-CD之间形成的是1:1的包合物，包合常数Kt＝498M-1。
参见图3，为实施例1制备的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体HCPNs在不同环境下的形貌和尺寸结果，其中，2(a)-2(d)为TEM图，采用Hitachi-760型透射电子显微镜测定，加速电压为75KV；2(e)-2(h)为AFM图，采用Park XE7原子力显微镜测定；2(i)-(l)为DLS图，采用Nano Brook 90Plus Zeta型多角度激光粒度仪(DLS)测定，测试温度25℃，散射光由垂直极化的He-Ne激光器发射，测试角度90°。图2(a)可知，在pH＝7.4的环境下，纳米组装体为球形胶束，平均尺寸为114nm，图2(e)可知，AFM测得结果为106nm的球形胶束，图2(i)可知，DLS的平均粒径是135nm，三者结果保持一致。
加入30U/mL酯酶，由图2(b)和2(f)可知，组装体尺寸增大到350nm左右，图2(j)中DLS为583nm，这是由于酯基被水解还原，此时疏水的内核被分为两部分，即姜黄素和顺铂，但β-环糊精和姜黄素的主客体包合作用未被破坏，因此顺铂被包裹在新形成的HA-CD/Cur组装体的内核中。
在pH＝5.0环境下，由于单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸中仲胺氮原子被质子化，产生了库伦斥力，使得自组装体变得不稳定并进一步解组装；图2(c)、图2(g)、图2(k)对应pH＝5.0的环境下的TEM图、AFM图及DLS图，图2(d)、图2(h)、图2(l)对应pH＝5.0及加入酯酶环境下对应的TEM图、AFM图及DLS图，解组装后疏水的Cur-Pt形成不规则的聚集体。
参见图4，为实施例1制备的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体HCPNs在pH＝7.4和5.0两种环境以及有无酯酶存在时姜黄素与顺铂两种药物的体外累计释放率图。如图4(a)所示，在pH＝7.4时，姜黄素和顺铂48h的累计释放率仅为10.9％和16.4％，说明基于HA-CD和Cur-Pt所制备的超分子纳米组装体在生理环境下是稳定存在的；而加入30U/mL的酯酶后，累计释放率为13.8％和21.6％，变化可忽略；但在pH＝5.0并加入30U/mL的酯酶环境下，姜黄素和顺铂的累计释放率明显增加，分别为82.6％和85.1％，充分说明两种药物的释放具有pH和酯酶的响应性。肿瘤细胞内有区别于正常细胞的酸性内涵体/溶酶体环境以及过度表达的酯酶，为两种药物的响应性释放提供了条件。
参见图5，为实施例1制备的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体HCPNs在体外对肿瘤细胞的抑制效果，采用MTT法评价。首先，使用HA-CD培养细胞48h后，对正常细胞LO-2和癌细胞PC-3均没有杀伤作用，具有良好的生物相容性，如图5(a)所示。然而，游离的姜黄素、顺铂、姜黄素与顺铂1:1的混合物对正常细胞和癌细胞均有很强的毒性，表现出强的毒副作用，如图5(b)所示。图5(c)所示，HCPNs纳米组装体对PC-3细胞表现出比原药更强的细胞抑制效果，而对正常细胞几乎没有毒性，表明组装体是以受体介导的内吞作用进入细胞，释放药物，达到了协同联合治疗的目的。同时，对先使用HA预处理，再使用HCPNs培养的两种细胞几乎没有表现出毒性，原因是游离的透明质酸与CD44受体特异性结合，占据了靶向作用点，使得HCPNs以受体介导的主动靶向作用进入肿瘤细胞的过程受到阻碍，进一步说明HCPNs是以CD44受体介导的主动靶向作用进入肿瘤细胞的。
参见图6，为实施例1制备的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体HCPNs的体外细胞摄取结果，采用激光共聚焦监测摄取行为，使用PC-3细胞为模型细胞，从图6(b)到6(c)，姜黄素Cur的荧光强度随孵育时间的延长而增加，证明超分子纳米组装体可以被内吞进入PC-3细胞，并且在细胞酸性及酯酶过度表达的环境下实现药物的释放，图6(d)和6(e)几乎观察不到姜黄素的荧光，可进一步说明所制备的超分子纳米组装体是以CD44受体介导的主动靶向作用内吞进入细胞的。
以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体的制备方法，其特征在于：
以单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸和酯基键合的姜黄素-顺铂为原料，利用β-环糊精和姜黄素之间的主客体包合作用形成超分子聚合物；
以超分子聚合物为原料，利用所述超分子聚合物的两亲性自组装形成亲水性透明质酸为壳层、疏水性姜黄素-顺铂为内核的超分子纳米组装体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，具体操作为：
将单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸溶于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，得到混合液A；将酯基键合的姜黄素-顺铂溶于N,N-二甲基甲酰胺，得到混合液B；
将混合液B滴加到混合液A中，混合均匀，避光反应，直至反应液变为胶体，反应完成，得到靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精修饰的透明质酸中的透明质酸的分子量为10KDa；
平均一条透明质酸分子链上修饰5.8个单-6-脱氧-6-乙二胺-β-环糊精，取代度为23％。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，混合液A中的β-环糊精和混合液B中的姜黄素的物质的量之比为1:(0.8-1.2)。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为100：1。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，酯基键合的姜黄素-顺铂的合成方法为：
将氧化顺铂和N,N-二甲基甲酰胺混合，并去除混合液中的空气，得到混合液C；
将单端羧基化的姜黄素和4-二甲氨基吡啶溶于N,N-二甲基甲酰胺，得到混合液D，将混合液D滴加到混合液A中；
滴加完成后，加入N,N’-二异丙基碳二亚胺，并去除空气，之后密封保存，在室温条件下避光反应6-24h，得到反应液；
将反应液进行提纯，得到反应产物，即酯基键合的姜黄素-顺铂。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，单端羧基化的姜黄素与氧化顺铂的物质的量之比为(1.5-2.5)：1。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，单端羧基化的姜黄素结构式为：
Figure FDA0002368417330000021
氧化顺铂的结构式为：
Figure FDA0002368417330000022
9.一种靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体，其特征在于，根据权利要求1-8任一项所述的制备方法制备得到。
10.根据权利要求9所述的靶向的pH/酯酶双重响应的双药超分子纳米组装体，其特征在于，粒径为80-200nm。
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