CN111154806A

CN111154806A - 一种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统及其在药物中的应用

Info

Publication number: CN111154806A
Application number: CN202010019228.0A
Authority: CN
Inventors: 束永前; 刘牧龙
Original assignee: Shenzhen Pufico Life Technology Co Ltd
Current assignee: Shenzhen Pufico Life Technology Co Ltd
Priority date: 2020-01-08
Filing date: 2020-01-08
Publication date: 2020-05-15

Abstract

本发明属于生物医药领域，涉及一种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统；一种如所述的载体系统在制备用于杀死异常增生性细胞、诱导促进抗肿瘤免疫反应或消除肿瘤组织微环境免疫抑制的药物方面的应用；一种如所述的载体系统联合免疫检查点抑制剂的组合物在制备抗恶性肿瘤药物中的应用；一种治疗肿瘤的药物组合物；一种药品套装及一种抗肿瘤用药系统。

Description

一种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统及其在药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其涉及种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统及其在药物中的应用。

背景技术

我们都知道癌症的发病与危害，癌症长期居于各种死因之首。虽然若干恶性肿瘤的治愈率已得到显著改善，但在过去的数十年中晚期实体瘤患者的结果仍残酷地维持不变，这强调需要新疗法，目前已经投入到实体瘤临床使用的就是肿瘤免疫检查点的抗体，例如抗体治疗，这些有效拮抗免疫检查点分子的单克隆抗体的关键点在于单位体积有效产能。除此之外，抗体药面临耐药性的问题亟待解决，目前肿瘤免疫治疗的研究进展受到各国关注。衍生出包括T细胞节点抑制剂、溶瘤病毒、嵌合抗原受体T细胞等多种免疫相关的肿瘤治疗策略。众所周知，高效的免疫疗法需要具备以下几大特点：诱导产生持久的临床反应；没有典型的耐药性；诱导产生自体免疫样毒性。

目前在众多免疫治疗方式中，病毒介导的免疫疗法的直接破坏肿瘤组织的能力是最强的，新一代的溶瘤病毒载体经过改造后也实现了包括静脉给药的多种给药途径，进一步可以通过血液和淋巴系统循环到达肿瘤局部，实现对实体瘤内部的破坏，产生具备的抗肿瘤免疫反应，肿瘤局部释放出的肿瘤抗原经过抗原递呈，激活机体的适应性免疫应答，促进活化的免疫细胞浸润到肿瘤局部，加速对肿瘤细胞的杀伤，最终达到控制或治愈实体瘤的目的。

尽管已经有很多针对多种临床适应症的药品上市使用，不过此类药品仍然面临用药周期长、耐药性、昂贵等诸多不足之处。

发明内容

本发明实施例提供了一种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统及其在药物中的应用，其采用溶瘤病毒介导超级细胞因子改造体进行免疫调节，提高机体的抗肿瘤免疫，在肿瘤治疗中可以取得很好的疗效。

第一方面，本发明提供一种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统，所述溶瘤病毒载体系统由复制/复制缺陷的溶瘤病毒载体介导编码所述超级细胞因子构成，所述溶瘤病毒载体的骨架可以表达所述外源超级细胞因子，且所述超级细胞因子具备改变肿瘤组织微环境的特性。

在一些较佳的实施方式中，所述超级细胞因子受体包括：IL2R、IL15R、GMCSF-R、sIL-6R、sIL-11R、OSM-R、CNTF-R及CT-I-R中的一种或多种。

在一些较佳的实施方式中，所述超级细胞因子为具备选择性激活IL2Rβ、γc的二聚受体、且丢失了天然IL2作为IL2Rα(CD25)受体激动剂的活性的IL2改造体。

在一些较佳的实施方式中，所述IL2改造体为IL2*15，所述IL2改造体IL2*15为SEQID NO：1所示核苷酸序列，且编码所述IL2*15的核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

在一些较佳的实施方式中，所述溶瘤病毒载体的骨架为AVS-M3，通过溶瘤病毒编码M基因产生的三个位点非同义突变获得。

在一些较佳的实施方式中，所述AVS-M3的M基因突变的位点为氨基酸位点M51R、V221F和S226R。

在一些较佳的实施方式中，所述M基因的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

在一些较佳的实施方式中，所述溶瘤病毒载体为减毒的溶瘤病毒载体，且所述溶瘤病毒载体为RNA病毒。

在一些较佳的实施方式中，所述溶瘤病毒载体选自弹状病毒科；优选地，所述溶瘤病毒载体包括水疱型口炎病毒属、狂犬病病毒属、短暂热病毒属、非毒粒弹状病毒中的至少一种；优选地，所述的溶瘤病毒载体包括水疱型口炎病毒、马拉巴病毒、牛痘病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、弹状病毒、甲病毒、细小病毒、肠道病毒株及保留所述溶瘤病毒活性的相应病毒中的至少一种。

第二方面，本发明还提供一种所述的载体系统在制备用于杀死异常增生性细胞、诱导促进抗肿瘤免疫反应或消除肿瘤组织微环境免疫抑制的药物方面的应用。

所述异常增生性细胞被包含在患者体内，优选的，其中所述异常增生性细胞选自肿瘤细胞或肿瘤组织相关细胞；优选的，所述肿瘤细胞是癌细胞；更优选的，所述癌细胞是转移性癌细胞。

在一些较佳的实施方式中，所述肿瘤和/或癌症为肺癌、黑色素瘤、头颈部癌症、肝癌、脑癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、淋巴癌、胃癌、食道癌、肾癌、前列腺癌、胰腺癌或白血病中的一种或多种。

第三方面，本发明还提供一种如所述载体系统联合免疫检查点抑制剂的组合物在制备抗恶性肿瘤药物中的应用。

在一些较佳的实施方式中，所述免疫检查点抑制剂为CTLA-4、PD-1/PD-L1、LAG-3、TIM-3中的至少一种。

在一些较佳的实施方式中，所述药物中的活性成分还包括用于控制或治疗肿瘤的活性物质，所述活性物质至少包括氯贝特类、胆碱、蛋氨酸、烟酸类或熊去氧胆酸中的一种。

在一些较佳的实施方式中，所述药物包含临床施用剂量的所述载体系统，且所述载体系统含有1×10⁸PFU～1×10¹²PFU的单次施用剂量，所述的免疫检查点抑制剂含有1～50mg/kg的单次使用剂量。

第四方面，本发明还提供一种治疗肿瘤的药物组合物，包含：

(a)所述的载体系统；

(b)免疫检查点抑制剂，所述免疫检查点抑制剂包括：CTLA-4、PD-1/PD-L1、LAG-3、TIM-3中的至少一种；

所述的溶瘤病毒选自水疱型口炎病毒、马拉巴病毒、牛痘病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、弹状病毒、甲病毒、细小病毒、肠道病毒株及保留所述溶瘤病毒活性的相应病毒中的至少一种；

所述肿瘤选自肺癌、黑色素瘤、头颈部癌症、肝癌、脑癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、淋巴癌、胃癌、食道癌、肾癌、前列腺癌、胰腺癌或白血病中的至少一种。

在一些较佳的实施方式中，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体，所述载体优选地选自冻干粉针、注射剂、片剂、胶囊、试剂盒或贴剂。

第五方面，本发明还提供一种药品套装，包括：

(a)所述的载体系统；

所述肿瘤选自肺癌、黑色素瘤、头颈部癌症、肝癌、脑癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、淋巴癌、胃癌、食道癌、肾癌、前列腺癌、胰腺癌或白血病中的至少一种；

在所述的药品套装中载体系统和免疫检查点抑制剂被分开包装。

在一些较佳的实施方式中，所述的药物组合物/药品套装，所述载体系统的瘤内给药剂量为每100mm³肿瘤对应2×10⁷PFU的单次施用剂量，所述免疫检查点抑制剂含有10mg/kg的单次使用剂量。

在一些较佳的实施方式中，所述载体系统含有1×10⁸PFU～1×10¹²PFU的单次施用剂量，所述的免疫检查点抑制剂含有1～50mg/kg的单次使用剂量。

第六方面，本发明还提供一种抗肿瘤用药系统，包括：

(a)所述的载体系统；

在一些较佳的实施方式中，所述药物系统还包含第二种溶瘤病毒，所述第二种溶瘤病毒至少包括牛痘病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、弹状病毒、甲病毒、细小病毒或肠道病毒株中的一种或多种。

所述的应用中：所述药物的递送方法包括肌注、静脉注射、瘤内给药、器官组织微创介入、微型机器人智能递送中的至少一种。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：

本发明提供一种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统、一种如所述的载体系统在制备用于杀死异常增生性细胞、诱导促进抗肿瘤免疫反应或消除肿瘤组织微环境免疫抑制的药物方面的应用、一种如所述的载体系统联合免疫检查点抑制剂的组合物在制备抗恶性肿瘤药物中的应用；一种治疗肿瘤的药物组合物；一种药品套装及一种抗肿瘤用药系统，该载体系统由复制/复制缺陷的溶瘤病毒载体介导编码所述超级细胞因子构成，溶瘤病毒载体的骨架可以表达所述外源超级细胞因子，且超级细胞因子具备改变肿瘤组织微环境的特性，该载体系统显著抑制恶性肿瘤的生长，同时通过有效激活患者自身免疫系统，改变肿瘤微环境，激活机体的特异性抗肿瘤免疫反应，阻止肿瘤的生长、扩散和复发，达到清除或控制肿瘤的目的，解除了肿瘤微环境中免疫抑制作用，进一步增强免疫细胞的全身性杀伤肿瘤活性，与已有的传统疗法相比在疗效上具有显著的优异性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1、超级细胞因子IL2*15真核表达载体构建示意图。

图2、嵌合了IL2*15超级细胞因子的表达鉴定，其中，图2A所示的是IL2*15在细胞裂解液和细胞培养上清中的表达。如图2B所示ELISA法检测IL2*15在培养上清中的浓度。

图3、IL2*15在体外对于T细胞的增殖作用；图3A所示的是IL2*15对于CD8 T细胞的增殖作用；图3B所示的是IL2*15在小鼠体内对于CD25 Treg的增殖作用。

图4、IL2*15在体外对于NK自然杀伤细胞的增殖作用。

图5、AVS系统介导新型重组细胞因子的AVS-rIL2*15减毒株；图5A为AVS-rIL2*15；图5B为AVS-rIL2*15感染细胞24小时后照片；图5C为AVS-rIL2*15和对照AVS-3M复制生长曲线比较。

图6、AVS-rIL2*15减毒株在肺癌动物模型中的作用评价，图6A是肺癌模型建立的方法；图6B是实验组及对照组治疗的小鼠肺癌组织的大小；图6C是小鼠生存率情况。

图7、AVS-rIL2*15减毒株在结肠癌动物模型中的作用评价，图7A是结肠癌模型建立的方法；图7B是实验组及对照组治疗的小鼠结肠癌组织的大小；图7C是小鼠生存率情况。

图8、AVS-rIL2*15减毒株在乳腺癌动物模型中的作用评价，图8A是乳腺癌模型建立的方法；图8B是实验组及对照组治疗的小鼠乳腺癌组织的大小；图8C是小鼠生存率情况。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明详细描述了一种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统，具体定义为改变肿瘤微环境的减毒溶瘤病毒载体系统具备选择性激活IL2Rβ、γc的二聚受体、而没有CD25/CD215受体活性的多肽激动剂。这个激动剂命名为IL-2*15超级细胞因子，该因子的多肽序列有100个左右的氨基酸，可以高强度结合IL2Rβ、γc，但与CD25(IL2Rα识别受体)、CD215(IL15Rα识别受体)无结合，与天然的IL2比这个多肽热稳定性更好、活性更高、免疫原性更低、安全窗口更大。在实施案例中新型的IL-2*15超级细胞因子在转移性非小细胞肺癌、直肠癌、乳腺癌等动物模型显示出极佳的药物活性。

已知的IL2和IL15是两个重要的细胞因子，对于T细胞增殖，产生细胞毒性T淋巴细胞，刺激B细胞合成免疫球蛋白及NK细胞的活化和存活，都具有重要的意义，是目前潜在肿瘤治疗的热门靶点。

IL2和IL15的细胞受体是三聚体，二者共用IL2Rβ、γc受体，但IL2Rα(CD25)和IL15Rα(CD215)表现为细胞因子独特性高亲和。IL2是最早上市的免疫疗法药物，但因其半衰期较短、系统给药的毒副性很大，所以在临床用药不多，只批准用于肾癌和恶黑等肿瘤适应症。虽然人体毒性来源目前机制不是十分清楚，但动物实验表明IL2产生的CD25活性是其毒性的主要来源。而传统的去除CD25活性主要靠化学修饰如PEG化和点突变的方式，但这样的改造选择性改善有限，有时还会到影响活性、稳定性等。融合蛋白虽然延长半衰期，但因为分子太大有可能影响改造后的细胞因子组织渗透。另外因为PEG修饰或突变体的结构与天然IL2过于接近，如果一旦机体产生中和抗体会中和掉内源性IL2，进一步会产生持续的耐药性。IL2*15超级细胞因子因为无CD25活性所以扩增Treg能力不如IL2，CD8/Treg比例显著高于天然IL2。这对肿瘤免疫疗法很重要，因为Treg被认为是免疫抑制性T细胞、而CD8是具备肿瘤杀伤活性的。

采取全新的策略对骨架进行改造后的IL2Rβ、γc激动剂可以同时解决这些问题。已知内源性信号分子通常会与很多受体相结合，如5HT有14个已知受体。机体通过局部合成和清除这些信号分子来达到选择性，因此不存在系统给药的潜在毒性问题。所以这些内源性分子本身成药性较差，但选择性受体亚型激动剂或拮抗剂却是药物的主要来源，在大分子药物和激酶抑制剂大规模来袭之前市场上50％药物是GPCR型配体。这些药物分子虽然与内源性结构上有相似之处、但有时也可以相差极大，所以系统给药也有足够的选择性。而在本发明创造中新的IL-2*15与天然IL2只有20％左右同源性。

目前能够有效打破实体肿瘤的屏障的方式主要是通过溶瘤病毒载体系统来实现，该系统可以特异性在肿瘤细胞中完成病毒复制的同时表达外泌型超级细胞因子，释放肿瘤抗原激活免疫细胞产生抗肿瘤的特异性免疫应答的同时，外泌的超级细胞因子打破了肿瘤微环境的免疫抑制，促进杀伤性T细胞对肿瘤细胞的清除，同时促进机体产生系统性的特异性抗肿瘤免疫记忆反应，有效控制清除游离或具备转移能力的肿瘤细胞。一些基因编辑修饰的重组病毒作为一种新的肿瘤治疗制剂，通过病毒对肿瘤细胞的杀伤作用和诱导全身性抗肿瘤免疫反应两种作用机制引发抗肿瘤免疫反应。其具体的分子机制尚不明确，部分已有的研究结果显示机制是病毒在肿瘤细胞中的复制增殖而诱导细胞死亡、与肿瘤细胞抗病毒元件的相互作用、促进内在自发的或特异性抗肿瘤免疫反应等多种作用因素。

本发明通过设计开发能够快速高效嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统(AVS去免疫抑制的溶瘤病毒载体系统)，填补了国内外在这一需求长期得不到解决的问题。

本发明将编码IL2*15等超级细胞因子的核苷酸序列通过基因编辑的手段插入到修饰过的病毒表达载体中，在特定的真核细胞中基因重组拯救获得稳定表达嵌合超级细胞因子的减毒病毒，筛选得到能够在瘤体组织中高效表达新型重组细胞因子的AVS-rIL2*15病毒，同时利用该载体系统进一步在实体瘤模型中对该重组系统的重构体的疗效进行评价，为开发实体瘤的治疗产品提供了新的技术方案和选择。

本发明的各实施案例涉及一种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统及其在实体瘤中的实际应用。溶瘤病毒载体系统本身的核心结构基因位置可以嵌合一个或多个编码的超级细胞因子的嵌合区域，该类超级细胞因子的特性在于可以有效改变肿瘤微环境中的免疫抑制作用，恢复CD8+T杀伤肿瘤细胞的能力，本发明还涉及使用一种或多种此类组合物联合治疗肿瘤的方法。

核苷酸和氨基酸序列的相似性，即序列同一性百分比，可通过序列比对来测定。这样的比对可通过本领域熟知的几种算法进行，优选hmmalign(HMMER包，http://hmmer.wustl.edu/)或CLUSTAL算法(Thompson J.D.等，1994)，所用的优选参数是默认参数，其设置如http://www.ebi.ac.uk/clustalw/index.html#所示。序列同一性(序列匹配)的程度可使用例如BLAST、BLAT或BlastZ(或BlastX)计算。优选地，序列匹配分析可通过公认的同源性图谱分析技术如Shuffle-LAGAN(Brudno M.，2003)或者Markov random fields进一步补充。当在本发明情形下计算序列同一性百分比时，如果没有另外具体指明，则这些百分比是相对于较长序列的全长计算的。

本发明上下文中的“肽接头”指1-100个氨基酸的氨基酸序列。在优选的实施方案中，本发明的肽接头的最小长度为至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸。在进一步优选的实施方案中，本发明的肽接头的最大长度为100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16或15个氨基酸或更少。在特别优选的实施方案中，上述优选的最小长度和最大长度的本发明肽接头可进行组合，只要这种组合具有算术意义即可。在进一步优选的实施方案中，本发明的肽接头是无免疫原性的，在特别优选的实施方案中，所述肽接头对人是无免疫原性的。

下面将进一步描述本发明。在下面段落中，将更详细描述本发明的不同方面。除非明确给出了相反的教导，否则所述的每个方面都可以与任何其它方面相组合。特别是，被认为是优选的或有利的任何特征均可与任何其它被认为是优选的或有利的特征组合。

一方面，本发明提供嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统，其中的溶瘤病毒载体具有靶向肿瘤组织的能力；所述外源细胞因子改造体具备改变肿瘤组织微环境的特性；溶瘤病毒载体的骨架可以表达所述外源细胞因子改造体。

在一些较佳的实施方式中，所述的外源细胞因子改造体嵌合基因整合位置是溶瘤病毒载体的囊膜基因G和聚合酶基因L的间隔序列。

在一些较佳的实施方式中，所述的外源细胞因子改造体至少包括两种不同的人源化细胞因子。

在一些较佳的实施方式中，所述细胞因子受体至少包括：

(a)、IL2R、IL15R、GMCSF-R、sIL-6R、sIL-11R、OSM-R、CNTF-R及CT-I-R中的至少一种；或；

(b)、表现出与(a)的多肽具有至少90％序列同一性的多肽。

在一些较佳的实施方式中，所述细胞因子至少包括：

(c)、IL2、IL15、IL-6、IL-11、OSM、CNTF及CT-I中的一种或多种；或；

(d)、表现出与(c)的多肽具有至少90％序列同一性的多肽。

在一些较佳的实施方式中，所述的细胞因子为具有超级细胞因子活性的改造体。

在一些较佳的实施方式中，所述超级细胞因子为IL2改造体，所述的改造体优选自计算机模拟设计，所述IL2改造体具备选择性激活IL2Rβ、γc的二聚受体，且丢失了天然IL2作为IL2Rα(CD25)受体激动剂的活性。

在一些较佳的实施方式中，所述超级细胞因子为IL2*15，所述超级细胞因子为SEQID NO：1所示核苷酸序列，且编码所述IL2*15的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

在一些较佳的实施方式中，所述溶瘤病毒载体的骨架为AVS-M3，通过溶瘤病毒载体编码M基因产生的三个位点非同义突变获得。

在一些较佳的实施方式中，所述M基因的氨基酸序列与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少存在90％的相同。

在一些较佳的实施方式中，所述溶瘤病毒载体为减毒溶瘤病毒载体，且所述溶瘤病毒载体为RNA病毒，其至少包括减毒的牛痘病毒、减毒的疱疹病毒、减毒的麻疹病毒、减毒的新城疫病毒、减毒的弹状病毒、减毒的甲病毒、减毒的细小病毒、减毒的肠道病毒株中的一种。

在一些较佳的实施方式中，所述溶瘤病毒载体包括水疱型口炎病毒属、狂犬病病毒属、短暂热病毒属、非毒粒弹状病毒中的至少一种。

在一些较佳的实施方式中，所述减毒弹状病毒株AVS-M3为M基因突变的水疱型口炎病毒、马拉巴病毒、保留所述水疱性口炎病毒或马拉巴病毒的生物活性的重组水疱性口炎病毒或重组马拉巴病毒。

因为期望本发明中涉及到组合物可以进一步增强抗肿瘤免疫应答，所以该组合物可进一步包含疫苗中常用于增强免疫效果的佐剂。优选的佐剂选自：未甲基化DNA，尤其是包含CpG二核苷酸(CpG基序)的未甲基化DNA，特别是具有硫代磷酸酯(PTO)骨架的CpG ODN(CpG PTO ODN)或具有磷酸二酯(PO)骨架的CpG ODN(CpG PO ODN)；氢氧化铝(明矾)的胶状沉淀；来自革兰氏阴性菌外膜的细菌产物，特别是单磷酰脂质A(MPLA)、脂多糖(LPS)、胞壁酰二肽及其衍生物；合成的脂肽衍生物，特别是Pam3Cys；脂阿拉伯甘露聚糖；肽聚糖；酵母多糖；热休克蛋白(HSP)，尤其是HSP70；dsRNA及其合成衍生物，特别是聚肌苷酸:聚胞苷酸；聚阳离子肽，特别是聚L-精氨酸；紫杉醇；纤连蛋白；鞭毛蛋白；咪唑并喹啉；具有佐剂活性的细胞因子，特别是GM-CSF，白细胞介素-(IL-)2，IL-6，IL-7，IL-18，I型和II型，干扰素，尤其是干扰素-γ，TNF-α；水包油型乳化剂，特别是由鲨烯组成的MF59；Tween 80、Span 85(失水山梨醇三油酸酯)和QS-21，Quil A的纯度更高的衍生物，非离子型嵌段聚合物，特别是Poloxamer 401，皂苷及其衍生物，特别是皂苷的免疫刺激性片段；聚磷腈；N-(2-脱氧-2-L-亮氨酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖基)-N-十八烷基十二酰胺氢化醋酸盐(BAY R1005)，25-二羟维生素D3(钙三醇)；DHEA；murametide[MDP(Gln)-OMe]；murapalmitine；乳酸和/或羟基乙酸的聚合物；聚甲基丙烯酸甲酯；失水山梨醇三油酸酯；角鲨烷；硬脂酰酪氨酸；角鲨烯；多维素矿物质片(theramide)；合成寡肽，特别是MHC II类分子呈递的肽。可包含在本发明组合物中的特别优选的佐剂选自未甲基化DNA，尤其是包含CpG二核苷酸(CpG基序)的未甲基化DNA、特别是具有硫代磷酸酯(PTO)骨架的CpG ODN(CpG PTOODN)或具有磷酸二酯(PO)骨架的CpG ODN(CpG PO ODN)，以及合成的脂肽衍生物，特别是Pam3Cys。

第二方面，本发明还提供一种所述载体系统在制备用于杀死异常增生性细胞、诱导促进抗肿瘤免疫反应或消除肿瘤组织微环境免疫抑制的药物方面的应用。

在一些较佳的实施方式中，所述药物的递送方法包括肌注、静脉注射、瘤内给药、器官组织微创介入、微型机器人智能递送及多种定点给药中的一种或多种。

在一些较佳的实施方式中，所述异常增生的细胞为肿瘤和/或癌症的细胞。

可知，本发明涉及用于医学的本发明组合物，本发明涉及一种药物组合物，其包含本发明组合物，还包含可药用稀释剂、载体、赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、崩解剂、吸附剂和/或防腐剂。优选地，所述药物组合物配制成肠胃外施用，优选以灭菌水溶液的形式施用，该灭菌水溶液还可含有其它物质，比如使该溶液与血液等渗的足量的盐或葡萄糖。必要时，所述水溶液应被适当缓冲(优选至pH为3-9)。特别优选的水溶液是磷酸盐缓冲液(PBS)。

在一些较佳的实施方式中，所述药物中的活性成分还包括用于控制或治疗肿瘤的其它活性物质，所述活性物质至少包括氯贝特类、胆碱、蛋氨酸、烟酸类或熊去氧胆酸中的一种。

在一些较佳的实施方式中，所述药物还包含第二种溶瘤病毒，所述第二种溶瘤病毒至少包括牛痘病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、弹状病毒、甲病毒、细小病毒或肠道病毒株中的一种或多种。

在一些较佳的实施方式中，所述药物包含临床施用剂量的所述嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统，且所述溶瘤病毒载体嵌合外源细胞因子改造体载体系统含有1×108PFU～1×1012PFU的单次施用剂量，所述的免疫检查点抑制剂含有1～50mg/kg的单次使用剂量。

在一些较佳的实施方式中，所述嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统含有1×109PFU的单次施用剂量，所述的免疫检查点抑制剂含有10mg/kg的单次使用剂量。

可用本发明组合物治疗或预防的癌症优选自：胃肠道癌，结肠直肠癌，肝癌，胰腺癌，肾癌，膀胱癌，前列腺癌，子宫内膜癌，头颈癌，卵巢癌，睾丸癌，前列腺癌，皮肤癌，眼癌，黑素瘤，发育异常的口腔粘膜，侵入性口腔癌，小细胞和非小细胞肺癌，激素依赖型乳癌，非激素依赖型乳癌，变移鳞状上皮细胞癌，神经恶性肿瘤，包括成神经细胞瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤，骨肉瘤，软组织肉瘤，血管瘤，内分泌肿瘤，血液瘤，包括白血病、淋巴瘤、其它骨髓增生和淋巴细胞增殖性疾病，原位癌，增生性病变，腺瘤及纤维瘤。特别优选的是治疗或预防黑素瘤、胰腺癌和肾癌。

另外，本发明组合物可用于治疗和/或预防各种不同的癌症，然而，本发明可治疗或预防的癌症优选选自：胃肠道癌，结肠直肠癌，肝癌，胰腺癌，肾癌，膀胱癌，前列腺癌，子宫内膜癌，头颈癌，卵巢癌，睾丸癌，前列腺癌，皮肤癌，眼癌，黑素瘤，发育异常的口腔粘膜，侵入性口腔癌，小细胞和非小细胞肺癌，激素依赖型乳癌，非激素依赖型乳癌，变移鳞状上皮细胞癌，神经恶性肿瘤，包括成神经细胞瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤，骨肉瘤，软组织肉瘤，血管瘤，内分泌肿瘤，血液瘤，包括白血病、淋巴瘤、其它骨髓增生和淋巴细胞增殖性疾病，原位癌，增生性病变，腺瘤及纤维瘤。

特别优选的是预防或治疗黑素瘤、胰腺癌和肾癌。

特别是，在治疗和/或预防癌症的情形中，设想患者在出现任何疾病症状之前用“癌症疫苗”免疫接种，即接受保护性免疫接种；或者患者在出现疾病症状之后进行免疫接种，即接受治疗性免疫接种。

通过表达超级细胞因子(优选超IL-2)的第一和/或第二细胞来表达至少另外一种其它细胞因子(特别是IL6)可在某些肿瘤(特别是黑素瘤和肾癌)中提供比仅表达超级细胞因子的细胞甚至更强的体内抗肿瘤应答。因此，在一个优选的用途中，经修饰以表达至少一种其它细胞因子的表达超级细胞因子的第一和/或第二细胞用于制备预防或治疗增殖性疾病的药物的用途。

本文中特别优选的是当所述第一和第二细胞来自相同类型的组织(优选肿瘤组织)，但是其具有与所述第一和/或第二细胞部分或完全不同的HLA类型。

另外，本发明还提供一种抑制和/或杀死受试者中异常增生的细胞的方法，该方法包括对受试者依次进行以下步骤：

1)、对受试者施用嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统，所述溶瘤病毒载体嵌合外源细胞因子改造体的载体系统选择性地在肿瘤细胞中复制；

2)、对所述受试者施用免疫检查点抑制剂。

所述溶瘤病毒载体嵌合外源细胞因子改造体的载体系统的瘤内给药剂量为每100mm³肿瘤对应2×10⁷PFU的单次施用剂量，所述免疫检查点抑制剂含有10mg/kg的单次使用剂量。

所述溶瘤病毒载体嵌合外源细胞因子改造体的载体系统的施用剂量为临床施用剂量，每3天1次，连续施用3-7次；所述免疫检查点抑制剂的施用剂量为每2天用药1次，连续施用3-5次。

所述溶瘤病毒载体嵌合外源细胞因子改造体的载体系统重组体、包含分离的重组溶瘤病毒载体嵌合外源细胞因子改造体的载体系统重组体的组合物或疫苗通过包括腹膜内、静脉内、动脉内、肌肉内、皮肤内、瘤内、皮下或鼻内给药中的一种或多种的给药方式而被施用；优选的，所述给药方式的给药途径包括内镜、腔镜、介入、微创、传统手术中的一种或多种。

所述方法进ー步包括施用第二抗肿瘤疗法的步骤。

其中所述第二抗肿瘤疗法施用第二溶瘤病毒，所述第二溶瘤病毒选自包含弹状病毒、牛痘病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、弹状病毒、甲病毒、细小病毒、肠道病毒株的一种或多种。

所述第二溶瘤病毒为减毒的溶瘤病毒

所述第二溶瘤病毒为减毒的痘病毒。

下文中将通过非限定性实施例更详细地说明本发明：

具体实施案例

实施案例1:IL2*15超级细胞因子的真核表达

我们通过全基因合成的方法，合成了IL2*15的DNA序列，如SEQ ID NO：1所示所示，在IL2*15的N端我们设计了6个组氨酸的His标签，便于后续检测和纯化，我们通过BamHI和xhoI酶切位点，将编码IL2*15的DNA序列克隆到真核表达载体pcDNA3.1上，得到pcDNA-sIL2*15真核表达质粒，具体构建方法参照图1。

进一步，如图2所示，我们在10cm的培养皿中培养5x10⁶ HEK293T细胞，利用Invitrogen公司Lipofectamine2000转染试剂，转染10ug质粒pcDNA-sIL2*15到细胞中，在转染后48小时，收取细胞上清，浓缩，通过western blot的方法，利用His标签抗体，检测到超级细胞因子在转染的细胞和细胞上清中得到了表达，分子量大小符合预期在14kD左右(图2A),同时我们也通过抗His的酶联吸附反应ELISA试剂盒，检测到上清中IL2*15的含量约为85ng/mL(图2B)。

实施案例2:IL2*15超级细胞因子的功能鉴定

如图3所示，为了验证IL2*15的生物学功能，我们利用美天旎分离小鼠CD8T的试剂盒对小鼠脾脏来源的CD8T细胞进行了分离，然后用商品化的IL-2，我们自己制备的IL2*15进行扩增培养，检验其对CD8 T的扩增影响，5天后发现小鼠50ng IL-2确实对CD8T扩增有效果，但是IL-2*15的有效剂量高于IL-2五倍，约为10ng左右能刺激相同数目的CD8T细胞，说明IL2*15确实能够发挥IL-2功能，促进CD8T细胞的增殖(图3A)。此外，我们给予小鼠尾静脉注射IL2*15，1，3，5天，10ng/只；在第7天处死老鼠，检测老鼠脾脏细胞中CD25+的抑制性T细胞CD25 Treg,发现给药组CD25 Treg和对照组无明显的差别，说明IL2*15对CD25+的抑制型T细胞无刺激作用(图3B)。

已经人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞系NK92的增殖需要IL-15，我们接下来看了IL2*15对NK92自然杀伤细胞扩增的影响。如图4所示，3天后含有IL-15和IL-2细胞因子的完全培养基(完培)中NK细胞生长良好，成团扩增；而缺乏IL-15细胞因子的基本培养基(基培)中细胞单个生长，并出现凋亡，而我们基培加了10ng或者50ng IL-2*15细胞生长和完全培养基类似，出现成团扩增。最后统计活细胞个数，完全培养基和加了IL-2*15超级细胞因子的接近，超过90％的细胞都是活细胞，而基培中的细胞只有5.9％是活细胞(图4)，此部分结果说明了IL2*15能够促进NK细胞的扩增。

实施案例3:嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统AVS-rIL2*15的构建

迄今为止使用的病毒骨架来源的表达载体系统仅用于极少数的细胞类型。相反，本发明的AVS载体系统宿主细胞来源是很广泛的。因为它包含了糖蛋白(GP)，不需要特定的受体介导就能进入宿主细胞，能够感染几乎所有的哺乳动物的细胞，同时完成病毒复制和实现外源嵌合基因的高效表达，极大的提高了外源嵌合的类抗体的体内外的表达效率。

在设计方案中首先构建利用我们已经构建的AVS减毒病毒株作为载体骨架递送IL-2*15。具体实施方案中，使用在水泡性口炎病毒VSV M基因M51R，V221F，S226R突变的病毒，在病毒G和L基因之间，通过分子克隆的方法，把编码IL-2*15的DNA序列，通过xhoI和NheI酶切位点，插入病毒基因组(图5A)。在BHK细胞中，利用VSV病毒反向遗传学系统，拯救出表达IL-2*15的新型减毒弹状病毒AVS-rIL2*15,在病毒感染BHK细胞24小时后，我们发现明显的细胞病变(图5B)，同时对于野生型VSV病毒，我们在BHK细胞也做了一个病毒72小时复制生长曲线的比较，发现对于野生型VSV，我们的减毒株复制能力较低(图5C)。

实施案例4:AVS-rIL2*15对小鼠非小细胞肺癌治疗中的应用

本案例是利用专利中涉及到的AVS系统对实体瘤治疗的效果评价，利用溶瘤病毒载体系统表达具有功能的超级细胞因子结合肿瘤组织中免疫检查点抗原，打破肿瘤局部的免疫抑制作用。具体实施案例中涉及用特定的纯化的重组非节段、负链RNA溶瘤病毒载体表达的抗体治疗实施。所涉及到的超级细胞因子与免疫检查点抗原IL2*15分子特异性结合，阻断了肿瘤细胞的免疫抑制作用，提高增强了免疫细胞的杀伤活性。

涉及到的超级细胞因子IL2*15的氨基酸序列见SEQ ID NO:1，所述的sIL2*15的超级细胞因子具备人鼠同源性，因此用非人源化的小鼠肿瘤模型就可以直接来验证AVS-rIL2*15的治疗效果。

具体技术细节：首先是转移型非小细胞肺癌模型的建立，按每只CB7BL/6皮下接种4.0*10^5(200uL)LLC细胞。每隔1天测量肿瘤大小，按如下公式计算：M12*M2/2(M1：短径，M2：长径)。待每组小鼠肿瘤体积生长超过50mm3后，分别在day8，day10和day12给予107PFU(20ul)的瘤内注射病毒进行治疗，连续观察记录肿瘤体积的变化情况(图6A)。

AVS-rIL2*15免疫治疗的药效性能测试，如图6所示连续3次隔天的瘤内注射治疗，AVS-rIL2*15和对照病毒VSV-3M比较，能有效抑制肿瘤的生长趋势，大大延缓小鼠的生命周期，通过分析PBS未接受治疗小鼠组肿瘤大小在接种后第25天为1750mm³,VSV-3M治疗组大小为510mm³左右，而小鼠接受AVS-rIL2*15治疗组大小约为85mm3左右(图6B)。通过小鼠生存曲线，发现VSV-scFV-PDL1治疗组约50％的小鼠肿瘤缩小直至消失，完全缓解，存活小鼠肿瘤的生长速度得到有效抑制，部分缓解，最后生存率为75％(6/8),大大优于VSV-3M治疗组(3/8；37.5％)，PBS未治疗组(0％)，如图6C所示。

实施案例5:AVS-rIL2*15对小鼠结肠癌模型的治疗中的应用

由于我们的AVS-rIL2*15没有携带肿瘤特异性抗原，我们推测AVS-rIL2*15对其他类型的肿瘤也有治疗作用。参照具体实施案例3，我们在C57BL/6小鼠建立结肠癌模型，按每只CB7BL/6皮下接种2.0*10^5(200uL)MC38细胞。每隔1天测量肿瘤大小，按如下公式计算：M12*M2/2(M1：短径，M2：长径)。待每组小鼠肿瘤体积生长超过50mm3后，分别在day8，day10和day12给予107PFU(20ul)的瘤内注射病毒进行治疗，连续观察记录肿瘤体积的变化情况(图7A)。

和在非小细胞肺癌模型类似，我们看到了AVS-rIL2*15对于小鼠结肠癌模型良好的治疗效果，如图7B所示，PBS非治疗组在25天肿瘤体积大小为1300mm³,而用AVS-rIL2*15治疗组小鼠肿瘤大小在100mm3以下，优于对照组AVS-3M 430mm³。想对应的AVS-rIL2*15生存率62.5％，优于PBS组和AVS-3M组老鼠(图7B和7C)。

实施案例6:AVS-rIL2*15对小鼠乳腺癌模型的治疗中的应用

乳腺癌是妇女中发生率最高的肿瘤，为了检验AVS-rIL2*15对乳腺癌治疗的效果，我们建立了小鼠乳腺癌模型。按每只CB7BL/6皮下接种5.0*10^5(200uL)4T1细胞。每隔1天测量肿瘤大小，按如下公式计算：M12*M2/2(M1：短径，M2：长径)。待每组小鼠肿瘤体积生长超过50mm³后，分别在day6，day8和day10给予107PFU(20ul)的瘤内注射病毒进行治疗，连续观察记录肿瘤体积的变化情况(图8A)。

我们也同样看到了AVS-rIL2*15对于小鼠乳腺癌具有良好的治疗效果，如图8B所示，PBS非治疗组在25天肿瘤体积大小为2200mm³,而用AVS-rIL2*15治疗组小鼠肿瘤大小在400mm³以下，优于对照组AVS-3M 1100mm³(图7B)，相对应的AVS-rIL2*15生存率为57.1％(4/7)，由于AVS-3M 14.2％(1/7)(图7C)。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 深圳普菲科生命科技有限公司

<120> 一种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统及其在药物中的应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 366

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atgggcagct cccaccatca ccatcaccac agcagcggac tggtgcccag aggaagccac 60

atgcccaaga agaagatcca gctccacgcc gagcacgccc tctacgatgc tctgatgatc 120

ctcaacatcg tgaagaccaa cagccctccc gccgaggaga agctggagga ctacgccttc 180

aacttcgagc tcattctgga ggagatcgcc agactgtttg agagcggcga ccagaaggat 240

gaggccgaga aggccaagag gatgaaggag tggatgaaga gaatcaagac cacagcctcc 300

gaggatgagc aagaggagat ggccaacgcc atcatcacca ttctgcagag ctggatcttc 360

agctga 366

<210> 2

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Leu Val Pro

1 5 10 15

Arg Gly Ser His Met Pro Lys Lys Lys Ile Gln Leu His Ala Glu His

20 25 30

Ala Leu Tyr Asp Ala Leu Met Ile Leu Asn Ile Val Lys Thr Asn Ser

35 40 45

Pro Pro Ala Glu Glu Lys Leu Glu Asp Tyr Ala Phe Asn Phe Glu Leu

50 55 60

Ile Leu Glu Glu Ile Ala Arg Leu Phe Glu Ser Gly Asp Gln Lys Asp

65 70 75 80

Glu Ala Glu Lys Ala Lys Arg Met Lys Glu Trp Met Lys Arg Ile Lys

85 90 95

Thr Thr Ala Ser Glu Asp Glu Gln Glu Glu Met Ala Asn Ala Ile Ile

100 105 110

Thr Ile Leu Gln Ser Trp Ile Phe Ser

115 120

<210> 3

<211> 690

<212> PRT

<213> 天然序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Ala Thr Gly Ala Gly Thr Thr Cys Cys Thr Thr Ala Ala Ala Gly Ala

1 5 10 15

Ala Gly Ala Thr Thr Cys Thr Cys Gly Gly Thr Cys Thr Gly Ala Ala

20 25 30

Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly Thr Ala Ala Gly Ala Ala Ala

35 40 45

Thr Cys Thr Ala Ala Gly Ala Ala Ala Thr Thr Ala Gly Gly Gly Ala

50 55 60

Thr Cys Gly Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys Cys Cys Cys Thr Thr Ala

65 70 75 80

Thr Gly Ala Ala Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys Thr Ala Gly Cys

85 90 95

Ala Thr Gly Gly Ala Gly Thr Ala Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly Ala

100 105 110

Gly Cys Gly Cys Thr Cys Cys Ala Ala Thr Thr Gly Ala Cys Ala Ala

115 120 125

Ala Thr Cys Cys Thr Ala Thr Thr Thr Thr Gly Gly Ala Gly Thr Thr

130 135 140

Gly Ala Cys Gly Ala Gly Ala Gly Gly Gly Ala Cys Ala Cys Cys Thr

145 150 155 160

Ala Thr Gly Ala Thr Cys Cys Gly Ala Ala Thr Cys Ala Ala Thr Thr

165 170 175

Ala Ala Gly Ala Thr Ala Thr Gly Ala Gly Ala Ala Ala Thr Thr Cys

180 185 190

Thr Thr Cys Thr Thr Thr Ala Cys Ala Gly Thr Gly Ala Ala Ala Ala

195 200 205

Thr Gly Ala Cys Gly Gly Thr Thr Ala Gly Ala Thr Cys Thr Ala Ala

210 215 220

Thr Cys Gly Thr Cys Cys Gly Thr Thr Cys Ala Gly Ala Ala Cys Ala

225 230 235 240

Thr Ala Cys Thr Cys Ala Gly Ala Thr Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly

245 250 255

Cys Cys Gly Cys Thr Gly Thr Ala Thr Cys Cys Cys Ala Thr Thr Gly

260 265 270

Gly Gly Ala Thr Cys Ala Cys Ala Thr Gly Thr Ala Cys Ala Thr Cys

275 280 285

Gly Gly Ala Ala Thr Gly Gly Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala Cys

290 295 300

Gly Thr Cys Cys Cys Thr Thr Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Ala Thr

305 310 315 320

Cys Thr Thr Gly Gly Cys Thr Thr Thr Thr Thr Thr Gly Gly Gly Thr

325 330 335

Thr Cys Thr Thr Cys Thr Ala Ala Thr Cys Thr Ala Ala Ala Gly Gly

340 345 350

Cys Cys Ala Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Gly Gly Thr Ala Thr Thr

355 360 365

Gly Gly Cys Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala Gly Gly Thr Cys Ala Ala

370 375 380

Cys Cys Ala Gly Ala Gly Thr Ala Thr Cys Ala Cys Gly Cys Thr Cys

385 390 395 400

Ala Cys Thr Gly Cys Gly Ala Ala Gly Gly Cys Ala Gly Gly Gly Cys

405 410 415

Thr Thr Ala Thr Thr Thr Gly Cys Cys Ala Cys Ala Thr Ala Gly Gly

420 425 430

Ala Thr Gly Gly Gly Gly Ala Ala Gly Ala Cys Cys Cys Cys Thr Cys

435 440 445

Cys Cys Ala Thr Gly Cys Thr Cys Ala Ala Thr Gly Thr Ala Cys Cys

450 455 460

Ala Gly Ala Gly Cys Ala Cys Thr Thr Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala

465 470 475 480

Cys Cys Ala Thr Thr Cys Ala Ala Thr Ala Thr Ala Gly Gly Thr Cys

485 490 495

Thr Thr Thr Ala Cys Ala Ala Gly Gly Gly Ala Ala Cys Gly Ala Thr

500 505 510

Thr Gly Ala Gly Cys Thr Cys Ala Cys Ala Ala Thr Gly Ala Cys Cys

515 520 525

Ala Thr Cys Thr Ala Cys Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly Ala Gly Thr

530 535 540

Cys Ala Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Cys Ala Gly Cys Thr Cys Cys

545 550 555 560

Thr Ala Thr Gly Ala Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Thr Cys Ala Thr

565 570 575

Thr Thr Cys Ala Ala Thr Thr Cys Thr Thr Cys Cys Ala Ala Ala Thr

580 585 590

Thr Thr Thr Cys Thr Gly Ala Thr Thr Thr Cys Ala Gly Ala Gly Ala

595 600 605

Gly Ala Ala Gly Gly Cys Cys Thr Thr Ala Ala Thr Gly Thr Thr Thr

610 615 620

Gly Gly Cys Cys Thr Gly Ala Thr Thr Gly Thr Cys Gly Ala Gly Ala

625 630 635 640

Ala Ala Ala Ala Gly Gly Cys Ala Thr Cys Thr Gly Gly Ala Gly Cys

645 650 655

Gly Thr Gly Gly Thr Thr Cys Cys Thr Gly Gly Ala Cys Thr Cys Thr

660 665 670

Ala Thr Cys Cys Gly Cys Cys Ala Cys Thr Thr Cys Ala Ala Ala Thr

675 680 685

Gly Ala

690

Claims

1.一种嵌合外源超级细胞因子的溶瘤病毒载体系统，其特征在于：所述溶瘤病毒载体系统由复制/复制缺陷的溶瘤病毒载体介导编码所述超级细胞因子构成，所述溶瘤病毒载体的骨架可以表达所述外源超级细胞因子，且所述超级细胞因子具备改变肿瘤组织微环境的特性。

2.根据权利要求1所述的载体系统，其特征在于：所述超级细胞因子受体包括：IL2R、IL15R、GMCSF-R、sIL-6R、sIL-11R、OSM-R、CNTF-R及CT-I-R中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的载体系统，其特征在于：所述超级细胞因子为具备选择性激活IL2Rβ、γc的二聚受体、且丢失了天然IL2作为IL2Rα(CD25)受体激动剂的活性的IL2改造体。

4.根据权利要求3所述的载体系统，其特征在于：所述IL2改造体为IL2*15，所述IL2改造体IL2*15为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列，且编码所述IL2*15的核苷酸序列为SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。

5.根据权利要求1至4任意一项所述的载体系统，其特征在于：所述溶瘤病毒载体的骨架为AVS-M3，通过溶瘤病毒编码M基因产生的三个位点非同义突变获得。

6.根据权利要求5所述的载体系统，其特征在于：所述AVS-M3的M基因突变的位点为氨基酸位点M51R、V221F和S226R。

7.根据权利要求5所述的载体系统，其特征在于：所述M基因的氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示。

8.根据权利要求5所述的载体系统，其特征在于：所述溶瘤病毒载体为减毒的溶瘤病毒载体，且所述溶瘤病毒载体为RNA病毒。

9.根据权利要求8所述的载体系统，其特征在于：所述溶瘤病毒载体选自弹状病毒科；优选地，所述溶瘤病毒载体包括水疱型口炎病毒属、狂犬病病毒属、短暂热病毒属、非毒粒弹状病毒中的至少一种；优选地，所述的溶瘤病毒载体包括水疱型口炎病毒、马拉巴病毒、牛痘病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、弹状病毒、甲病毒、细小病毒、肠道病毒株及保留所述溶瘤病毒活性的相应病毒中的至少一种。

10.一种如权利要求1～9任一项所述的载体系统在制备用于杀死异常增生性细胞、诱导促进抗肿瘤免疫反应或消除肿瘤组织微环境免疫抑制的药物方面的应用。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于：所述异常增生性细胞被包含在患者体内；优选的，其中所述异常增生性细胞选自肿瘤细胞或肿瘤组织相关细胞；优选的，所述肿瘤细胞是癌细胞；更优选的，所述癌细胞是转移性癌细胞。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于：所述肿瘤和/或癌症为肺癌、黑色素瘤、头颈部癌症、肝癌、脑癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、淋巴癌、胃癌、食道癌、肾癌、前列腺癌、胰腺癌或白血病中的一种或多种。

13.一种如权利要求1～9任一项所述的载体系统联合免疫检查点抑制剂的组合物在制备抗恶性肿瘤药物中的应用。

14.根据权利要求13所述的组合物在制备抗恶性肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述免疫检查点抑制剂为CTLA-4、PD-1/PD-L1、LAG-3、TIM-3中的至少一种。

15.根据权利要求13所述的组合物在制备抗恶性肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述药物中的活性成分还包括用于控制或治疗肿瘤的活性物质，所述活性物质至少包括氯贝特类、胆碱、蛋氨酸、烟酸类或熊去氧胆酸中的一种。

16.根据权利要求13所述的组合物在制备抗恶性肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述药物包含临床施用剂量的所述载体系统，且所述载体系统含有1×10⁸PFU～1×10¹²PFU的单次施用剂量，所述的免疫检查点抑制剂含有1～50mg/kg的单次使用剂量。

17.一种治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：包含：

(a)如权利要求1～9所述的载体系统；

(b)免疫检查点抑制剂，所述免疫检查点抑制剂包括：CTLA-4、PD-1/PD-L1、LAG-3、TIM-3中的至少一种；。

18.根据权利要求17所述的一种治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物还包含药学上可接受的载体，所述载体优选地选自冻干粉针、注射剂、片剂、胶囊、试剂盒或贴剂。

19.一种药品套装，其特征在于，包括：

(a)如权利要求1～9所述的载体系统；

(b)免疫检查点抑制剂，所述免疫检查点抑制剂包括CTLA-4、PD-1/PD-L1、LAG-3、TIM-3中的至少一种。

20.根据权利要求17或19所述的药物组合物/药品套装，其特征在于：所述溶瘤病毒载体嵌合外源细胞因子改造体的载体系统的瘤内给药剂量为每100mm³肿瘤对应2×10⁷PFU的单次施用剂量，所述免疫检查点抑制剂含有10mg/kg的单次使用剂量。

21.根据权利要求17或19所述的药物组合物/药品套装，其特征在于：

所述载体系统含有1×10⁸PFU～1×10¹²PFU的单次施用剂量，所述的免疫检查点抑制剂含有1～50mg/kg的单次使用剂量。

22.一种抗肿瘤用药系统，其特征在于：包括：

(a)如权利要求1～9所述的载体系统；

23.根据权利要求22抗肿瘤用药系统，其特征在于，所述药物系统还包含第二种溶瘤病毒，所述第二种溶瘤病毒至少包括牛痘病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、弹状病毒、甲病毒、细小病毒或肠道病毒株中的一种或多种。

24.根据权利要求10、13、17、19、22所述的应用，其特征在于：所述药物的递送方法包括肌注、静脉注射、瘤内给药、器官组织微创介入、微型机器人智能递送中的至少一种。