CN111154762B - 与鸡脂肪代谢相关的lncRNA、其调控靶点及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及鸡抗病遗传育种和营养调节技术领域，具体涉及与鸡脂肪代谢相关的lncRNA、其调控靶点及其应用。本发明通过高通量测序技术和lncRNA‑mRNA联合分析，筛选到与鸡脂肪代谢以及脂肪肝形成相关的lncRNA，命名为LNC_006756。LNC_006756可调控羟酸氧化酶1的表达，LNC_006756及其调控靶点羟酸氧化酶1的表达水平与鸡脂肪代谢异常具有高度的相关性，在鸡脂肪肝与正常鸡中呈现显著差异性表达，可作为鸡脂肪代谢异常的分子标记或治疗靶标，用于鸡脂肪肝等脂肪代谢异常的检测、治疗或相关调控靶标的筛选，在鸡脂肪代谢异常性状的抗病系遗传育种以及指导精准营养调节中具有重要的应用价值。

Description

与鸡脂肪代谢相关的lncRNA、其调控靶点及其应用

技术领域

本发明涉及鸡抗病遗传育种和营养调节技术领域，具体涉及与鸡脂肪代谢相关的lncRNA、其调控靶点及其应用。

背景技术

肝脏是维持机体脂类代谢稳态的重要器官。正常情况下，肝脏合成的甘油三酯以极低密度脂蛋白的形式进入血液，运送到各组织被摄取利用。当肝脏脂类合成代谢增强或分解代谢障碍时会引起鸡脂肪肝的发生，导致肝内脂类向肝外组织运输过程异常，最终对鸡体脂分布造成影响。已有证据表明，鸡脂肪肝的发生伴随血脂水平、腹脂以及胸、腿肌肌内脂肪含量的增加，体内多部位脂肪沉积均有不同程度的增加。

鸡脂肪肝综合征(Fatty liver syndrome，FLS)是指各种原因引起肝细胞内脂肪代谢紊乱，以肝脏肿大、发生脂肪变性为特征的一种营养代谢疾病。鸡脂肪肝的发生直接导致腹脂的过量沉积，造成生产效率的降低。鸡脂肪肝综合征不同于脂肪肝出血综合征(FLHS),FLHS除具有肝脏脂肪过度沉积和肝细胞变性特征外，还会伴随血管壁变脆而发生肝脏出血，进而致死。FLS一般不具有致死率，初期无明显临床病状，不易被发现，剖检会发现肝脏肿大、呈暗黄色、油腻、质地柔软易碎，母鸡产蛋率一般只能上升到85％左右，而后下降，很难出现产蛋高峰，给养殖企业带来巨大经济损失。此外，动物脂肪肝综合征模型也是研究脂肪代谢异常的理想素材。开发脂类代谢相关的分子标记，对于优化家禽体脂分布结构、调控脂肪的合理沉积以及家禽脂肪肝的检测和防治具有重要意义。

肝脏脂肪的合成、分解代谢，脂肪酸的摄取以及分泌过程的异常均可能导致脂肪肝的发生，而这些代谢过程受到多个关键基因和表观遗传的调控。长链非编码RNA(lncRNA)是指长度大于200个核苷酸的非编码RNA，具有组织特异性，在表观遗传调控、转录及转录后水平的基因表达调控、细胞周期及分化调控等生命活动中发挥重要作用。lncRNA主要通过lncRNA-mRNA或lncRNA-miRNA-mRNA网络调节相关基因表达，广泛参与体内甘油三酯代谢、脂肪酸氧化等过程，是人类和动物脂类代谢过程的关键调节因子。已有研究报道，lncRNA可通过调控靶基因的表达减缓肝脏脂肪变性，抑制脂肪肝的发生。

单纯通过生物信息预测筛选核心lncRNA，其准确性无疑会大打折扣。针对特定时期、特定组织进行lncRNA与mRNA深度测序，根据lncRNA的反式调控原理，构建共表达网络和功能注释，可极大地减小核心lncRNA的筛选范围。

综上所述，利用分子标记辅助选择法对脂肪肝等脂代谢异常疾病进行分析，并筛选相关调控因子及其关键靶向基因，为辅助抗病系的选育或利用营养手段进行精准饲喂，提高生产效率提供了有效的方法。

发明内容

为解决现有技术中的技术问题，本发明的目的在于提供与鸡脂肪代谢相关的lncRNA、其调控靶点及其应用。

为实现上述目的，本发明通过高通量测序技术和lncRNA-mRNA联合分析，筛选到与鸡脂肪代谢以及脂肪肝形成相关的lncRNA，命名为LNC_006756，并初步确定羟酸氧化酶1(HAO1)等基因为LNC_006756的靶标基因。进一步通过实验验证证明，LNC_006756与HAO1在脂肪肝组与正常个体对照组样本间显著性差异表达；LNC_006756能够通过上调HAO1基因的表达，调控鸡脂肪肝的形成。

具体地，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供与禽类脂肪代谢相关的lncRNA，其为LNC_006756，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示或为与如SEQ ID NO.1所示的序列具有至少70％同源性、具有相同功能且来源于禽类的核苷酸序列。

如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列为LNC_006756的核苷酸序列，其来源于鸡。作为优选，所述同源性为至少85％；更优选为至少95％；最优选为至少98％。

本发明中，所述禽类包括但不限于鸡、鸭、鹅、火鸡、鸽、鹌鹑。优选为鸡。

第二方面，本发明提供包含所述lncRNA的生物材料，所述生物材料为表达盒、载体、宿主细胞或转基因细胞系。

上述包含所述lncRNA的生物材料可为包含所述lncRNA或其编码基因的生物材料。

所述lncRNA的编码基因为所有能够编码产生所述lncRNA的DNA。所述lncRNA的编码基因的核苷酸序列可如SEQ ID NO.2所示。

本发明中，所述表达盒可为包含所述lncRNA以及启动子和/或转录终止子的核酸。

本发明中，所述载体包括但不限于克隆载体、表达载体、转座子等，所有包含所述lncRNA的载体均在本发明的保护范围内。所述宿主细胞可以为来源于微生物、植物或动物的细胞。

第三方面，本发明提供用于扩增所述lncRNA的特异性引物。

作为优选，所述特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。

第四方面，本发明提供所述lncRNA、其编码基因或所述生物材料在靶向调控羟酸氧化酶1表达或制备用于治疗与羟酸氧化酶1表达异常相关的疾病的产品中的应用。

所述与羟酸氧化酶1表达异常相关的疾病包括但不限于脂肪代谢异常疾病、肝脏疾病等。

羟酸氧化酶1为已知酶分子，本领域技术人员可通过常用数据库获取禽类羟酸氧化酶1的登录号或序列，例如，鸡的羟酸氧化酶1的Ensembl(http://jul2018.archive.ensembl.org/index.html)登录号为ENSGALG00000008845。

第五方面，本发明提供所述lncRNA、其编码基因或其调控靶点在作为禽类脂肪代谢异常的分子标记中的应用。

第六方面，本发明提供所述lncRNA、其编码基因、其调控靶点或用于检测所述lncRNA或其调控靶点表达的产品在检测禽类脂肪代谢水平或制备用于检测禽类脂肪代谢异常产品中的应用。

上述第六方面中的应用可通过检测待测样本中所述lncRNA、其编码基因或其调控靶点的表达水平，判断脂肪代谢水平或脂肪代谢异常。

具体地，若待测样本的所述lncRNA、其编码基因或其调控靶点的表达水平显著高于正常样本，则待测样本的脂肪代谢异常。所述脂肪代谢异常优选为脂肪肝。

第七方面，本发明提供所述lncRNA、其编码基因、其调控靶点、所述lncRNA或其调控靶点的表达抑制剂或表达促进剂或所述生物材料在调节禽类脂肪代谢或禽类体脂分布、或制备用于治疗禽类脂肪代谢异常的产品、或筛选禽类脂肪代谢异常的调控靶点中的应用。

本发明中，所述lncRNA或其调控靶点的表达抑制剂为能够抑制所述lncRNA或其调控靶点表达的物质，例如，可为能够抑制所述lncRNA或其调控靶点表达的核酸(DNA或调控RNA)或蛋白质。

本发明中，所述lncRNA或其调控靶点的表达促进剂为能够增强所述lncRNA或其调控靶点表达的物质，例如，可为能够增强所述lncRNA或其调控靶点表达的核酸(DNA或调控RNA)或蛋白质。

第八方面，本发明提供所述lncRNA、其编码基因、其调控靶点、用于检测所述lncRNA或其调控靶点表达的产品或所述lncRNA或其调控靶点的表达抑制剂在辅助禽类脂肪代谢异常的抗病系育种或指导禽类精准营养靶向调节中的应用。

本发明中，所述禽类脂肪代谢异常优选为禽类脂肪肝。

本发明中，所述lncRNA的调控靶点优选为羟酸氧化酶1或其编码基因。

本发明中，所述用于检测所述lncRNA或其调控靶点表达的产品包括利用PCR技术、杂交技术、芯片技术或高通量测序技术检测所述lncRNA或其调控靶点表达水平的产品。其中，利用PCR技术检测所述lncRNA或其调控靶点表达的产品至少包括用于特异性扩增所述lncRNA或其调控靶点的引物和/或探针。利用杂交技术检测所述lncRNA或其调控靶点的产品可包括与所述lncRNA或其调控靶点特异性结合的抗体或核酸。利用芯片技术检测所述lncRNA或其调控靶点表达的产品可包括蛋白芯片或核酸芯片。

作为优选，所述特异性扩增所述lncRNA的引物序列如SEQ ID NO.3-4所示。所述特异性扩增所述lncRNA的调控靶点羟酸氧化酶1基因的引物序列如SEQ ID NO.5-6所示。

第九方面，本发明提供检测禽类脂肪肝的试剂盒，包含用于检测所述lncRNA的试剂和/或用于检测禽类羟酸氧化酶1表达的试剂。

作为优选，所述试剂包括特异性引物，其中，用于检测所述lncRNA的特异性引物的序列如SEQ ID NO.3-4所示；用于检测禽类羟酸氧化酶1表达的特异性引物的序列如SEQ IDNO.5-6所示。

作为本发明的一种实施方式，所述试剂盒包括反转录试剂、反转录引物、序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物、内参引物、荧光定量PCR反应液。

作为本发明的另一种实施方式，所述试剂盒包括反转录试剂、反转录引物、序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物、序列如SEQ ID NO.5-6所示的引物、内参引物、荧光定量PCR反应液。

上述试剂盒适用于目前市场上所有类型的荧光定量基因扩增仪，灵敏度高，定量快速准确、稳定性好，具有良好的应用前景。

第十方面，本发明提供用于治疗禽类脂肪代谢异常的产品，其包含所述lncRNA的表达抑制剂和/或禽类羟酸氧化酶1的表达抑制剂。

第十一方面，本发明提供一种检测禽类脂肪代谢异常的方法，包括：检测所述禽类中所述lncRNA和/或羟酸氧化酶1的表达水平，根据表达水平判断所述禽类是否存在脂肪代谢异常。

具体地，所述判断是否含有肌内脂肪或肌内脂肪含量高低的标准如下：若待测样本中所述lncRNA、所述羟酸氧化酶1的表达水平显著高于正常样本，则判断所述待测样本的脂肪代谢异常。所述脂肪代谢异常优选为脂肪肝。

具体地，所述lncRNA表达水平的检测方法可包括如下步骤：

(1)提取待测鸡肝脏样本的总RNA；

(2)以oligo-dT为3’引物，利用反转录酶进行lncRNA的反转录；

(3)采用如SEQ ID NO.3-4所示的引物进行所述lncRNA的荧光定量PCR检测。

本发明通过扩大群体和后代群体等多项实验证实，LNC_006756的表达水平与鸡脂肪肝具有高度相关性，可用于作为分子标记检测鸡脂肪肝。LNC_006756的调控靶点HAO1的表达水平也与鸡脂肪肝具有明显的相关性，也可用于作为分子标记检测鸡脂肪肝，在应用时，可单独使用LNC_006756，也可将LNC_006756和HAO1两者联合使用以进一步提高检测的准确性。

本发明的有益效果在于：本发明发现LNC_006756可调控羟酸氧化酶1的表达，参与鸡脂肪代谢。LNC_006756及其调控靶标羟酸氧化酶1的表达水平与鸡脂肪肝等脂肪代谢异常性状具有高度的相关性，在鸡脂肪肝与正常鸡中呈现显著差异性表达，可作为鸡脂肪代谢异常的分子标记或治疗靶标，用于鸡脂肪肝等脂肪代谢异常的检测、治疗或相关靶标筛选，在鸡脂肪肝等脂肪代谢异常性状的抗病系遗传育种以及指导精准营养调节中具有重要的应用价值。

附图说明

图1为本发明实施例2中LNC_006756在F3代脂肪肝组及对照组中相对表达量的检测结果。

图2为本发明实施例2中HAO1在F3代脂肪肝组及对照组中相对表达量的检测结果。

图3为本发明实施例2中F3代肝脏指数的检测结果。

图4为本发明实施例2中F3代的肝脏样本中LNC_006756与HAO1基因表达相关分析结果。

图5为本发明实施例2中F3代的肝脏样本中LNC_006756表达量与肝脏指数相关分析结果。

图6为本发明实施例2中F3代的肝脏样本中HAO1表达量与肝脏指数相关分析结果。

图7为本发明实施例3中LNC_006756在F4代脂肪肝组及对照组中相对表达量的检测结果。

图8为本发明实施例3中HAO1在F4代脂肪肝组及对照组中相对表达量的检测结果。

图9为本发明实施例3中F4代肝脏指数检测结果。

图10为本发明实施例3中F4代的肝脏样本中LNC_006756与HAO1基因表达相关分析结果。

图11为本发明实施例3中F4代的肝脏样本中LNC_006756表达量与肝脏指数相关分析结果。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1基于高通量测序技术的lncRNA和mRNA联合分析获得脂肪肝发生相关的lncRNA及其调控靶点

本实施例利用基于高通量测序技术的lncRNA和mRNA联合分析方法筛选与脂肪肝发生相关的靶标，具体方法如下：

1、实验动物和样本准备

采用矮脚京星黄鸡品系作为试验动物，采用高脂肪日粮诱导的方法诱导F0代公鸡发生脂肪肝。之后利用脂肪肝公鸡与健康母鸡交配产生后代脂肪肝组，健康公鸡与健康母鸡交配产生后代对照组。其中采用先繁育后屠宰的方式，根据屠宰后鸡脂肪肝发生情况选择性地保留相应组别的后代。利用此繁育方法可使得脂肪肝组群体中40％左右个体发生脂肪肝，而对照组不发生或很小概率的发生脂肪肝。在F3代中，将42周龄脂肪肝组中患脂肪肝个体和对照组中正常个体进行屠宰、收集肝脏样本，检测肝脏脂肪沉积情况，并将剩余样品于-80℃保存。根据肝脏HE切片与油红O切片的结果，区分出脂肪肝组和对照组的样本用于后续研究。其中，将脂肪变性面积大于1/3且具有明显脂肪沉积的表型的个体判断为脂肪肝个体；无明显脂肪变性、肝细胞形态正常、排列整齐，并且油红O切片显示无明显脂肪沉积的个体判断为正常个体。

在脂肪肝组中挑选4份脂肪肝个体样本，在对照组中挑选4份正常个体样本，使用商品化试剂盒提取肝脏组织的总RNA，并对RNA总量及纯度进行检测，分别构建用于lncRNA和mRNA测序的cDNA文库。将cDNA文库送测序公司利用HiSeq X Ten平台进行测序。

2、基于高通量测序结果分析差异表达lncRNA和mRNA

利用DESeq2软件分析脂肪肝组与对照组样本的差异表达lncRNA和mRNA。将在脂肪肝组与对照组样本中差异表达倍数绝对值大于1.5、矫正后p-value<0.05的lncRNA定义为差异表达lncRNA；将在脂肪肝组与对照组样本中差异表达倍数绝对值大于1.5、p-value<0.05的mRNA定义为差异表达mRNA。

3、差异表达lncRNA和mRNA联合分析筛选脂肪肝相关的关键lncRNA

(1)对所有差异表达lncRNA与差异表达mRNA进行联合分析，即进行Pearson相关性分析，构建共表达网络。将相关系数绝对值大于0.95、p-value<0.05定义为显著相关；

(2)对共表达网络进行分析，将每对lncRNA-mRNA定义为一个度(degree)，表示在共表达网络中的地位。发现LNC_006756具有最高的度(45)，表明其处于网络最核心地位(表1)。最后对LNC_006756的靶基因进行功能注释，LNC_006756的靶基因包括FABP1、HSD17B122、HAO1等，其中，FABP1与HSD17B122基因为已知参与脂肪代谢的相关基因；同时根据相关数据库的注释结果，HAO1基因可能参与肝脏的氧化还原过程和脂肪酸α氧化过程。

上述靶基因预测结果表明，LNC_006756为脂肪肝与健康肝脏中最核心的差异lncRNA，而FABP1、HSD17B122和HAO1为LNC_006756潜在调控的靶基因，且与脂类代谢过程可能相关，因此推测LNC_006756能够通过调节FABP1、HSD17B122或HAO1的表达，参与脂肪肝的发生过程。

表1LNC_006756的调控靶基因及其富集分析结果

实施例2利用不同群体对LNC_006756及其预测靶基因与脂肪肝的相关性进行验证

利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对实施例1中鉴定获得的与鸡脂肪肝相关的关键lncRNA LNC_006756及其调控靶基因FABP1、HSD17B122和HAO1的表达水平进行扩大样本验证。

1、实验样本准备

以42周龄矮脚京星黄鸡脂肪肝组与对照组群体(F3代)作为试验动物。每组样本数>10。取样过程同实施例1，记录体重、肝脏指数等表型指标，采集肝脏组织，放于-80℃保存。

2、LNC_006756和HAO1的差异表达验证

采用TRIzol法提取肝脏组织的总RNA，LNC_006756、FABP1、HSD17B122和HAO1的qRT-PCR检测方法如下：

(1)LNC_006756的qRT-PCR检测：利用FastKing cDNA第一链合成试剂盒(TIANGEN,中国)进行反转录；以反转录得到的cDNA为模板，利用试剂盒KAPA SYBR FAST UniversalqPCR Kit(KAPA,美国)进行qRT-PCR。

qRT-PCR使用的上、下游引物序列如下：

SEQ ID NO.3：F:5’-CTGGGGGCATGCAATGATTC-3’；

SEQ ID NO.4：R:5’-GCGTGAAGGATGGAAAACAAC-3’。

qRT-PCR检测每次设置3个平行管反应，以β-actin(ENSGALG00000009621)与RPS6(ENSGALG00000015082)作为内参。qRT-PCR反应程序为：95℃30s；95℃3s，60℃34s，40个循环。

(2)FABP1、HSD17B12或HAO1的qRT-PCR检测：利用FastKing cDNA第一链合成试剂盒进行反转录；以反转录得到的cDNA为模板，利用试剂盒KAPA SYBR FAST Universal qPCRKit进行qRT-PCR。

FABP1基因qRT-PCR使用的上、下游引物序列如下：

SEQ ID NO.7：F:5'-GGGGAAGAGTGTGAGATGGA；

SEQ ID NO.8：R:5'-GTTGAGTTCGGTCACGGATT；

HSD17B12基因qRT-PCR使用的上、下游引物序列如下：

SEQ ID NO.9：F:5'-TCAAAGCAGGACTGGAAGGC；

SEQ ID NO.10：R:5'-GCAGCACCAATCGTGTCATC；

HAO1基因qRT-PCR使用的上、下游引物序列如下：

SEQ ID NO.5：F:5'-CGGTTTGTGTTGCTGATTT-3'；

SEQ ID NO.6：R:5'-TGCTGCTACATTATCTGCTA-3'。

qRT-PCR检测每次设置3个平行管反应，以β-actin与RPS6作为内参。qRT-PCR反应程序为：95℃30s；95℃3s，60℃34s，40个循环。

3、实验结果分析

肝脏指数检测：根据每个个体的肝重与活体重计算肝脏指数，计算公式为：肝脏指数＝肝脏重量/活体重×100％。

LNC_006756与HAO1及表型指标的关联分析：根据线性回归计算原理，将肝脏LNC_006756的表达量分别与HAO1的表达量及肝脏指数进行相关分析，p<0.05定义为显著相关。

统计学分析：采用SPSS 25.0软件(SPSS,Chicago,IL,USA)进行分析。均数间比较采用t检验或曼惠特尼检验，p<0.05定义为有差异显著性，具有统计学意义。分析各表型组间表达差异。

qRT-PCR结果表明，脂肪肝组LNC_006756的表达量是对照组的27.9倍，表达水平差异极显著(图1)；脂肪肝组HAO1的表达量是对照组的1.9倍，表达水平差异极显著(图2)。肝脏指数检测结果表明，脂肪肝组个体的肝脏指数是对照组的1.4倍，差异显著(图3)。相关分析结果表明，LNC_006756与HAO1表达量显著相关(r＝0.45，p<0.05)(图4)；LNC_006756与肝脏指数极显著相关(r＝0.76，p<0.0001)(图5)；HAO1与肝脏指数显著相关(r＝0.49，p<0.05)(图6)。

而另外两个预测靶基因FABP1和HSD17B12基因，虽然在脂肪肝组和对照组间呈现差异表达，但是与LNC_006756表达的相关性不显著。因此还不能确定其为LNC_006756作用的靶基因。

实施例3在后代群体中验证LNC_006756及其预测靶基因与脂肪肝的相关性

在后代群体中利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对实施例1中鉴定获得的LNC_006756及其调控靶基因HAO1与鸡脂肪肝的相关性进行验证。

1、实验样本准备

以45周龄矮脚京星黄鸡脂肪肝组与对照组群体(F4代)作为试验动物。每组样本数>10。取样过程同实施例1，采集肝脏组织，放于-80℃保存。

2、LNC_006756和HAO1的差异表达验证

验证方法同实施例2，具体如下：

采用TRIzol法提取肝脏组织的总RNA，LNC_006756和HAO1的qRT-PCR检测方法如下：

(1)LNC_006756的qRT-PCR检测：利用FastKing cDNA第一链合成试剂盒(TIANGEN,中国)进行反转录；以反转录得到的cDNA为模板，利用试剂盒KAPA SYBR FAST UniversalqPCR Kit(KAPA,美国)进行qRT-PCR。

qRT-PCR使用的上、下游引物序列如下：

SEQ ID NO.3：F:5’-CTGGGGGCATGCAATGATTC-3’；

SEQ ID NO.4：R:5’-GCGTGAAGGATGGAAAACAAC-3’。

qRT-PCR检测每次设置3个平行管反应，以β-actin与RPS6作为内参。qRT-PCR反应程序为：95℃30s；95℃3s，60℃34s，40个循环。

(2)HAO1的qRT-PCR检测：利用FastKing cDNA第一链合成试剂盒进行反转录；以反转录得到的cDNA为模板，利用试剂盒KAPA SYBR FAST Universal qPCR Kit进行qRT-PCR。

qRT-PCR使用的上、下游引物序列如下：

SEQ ID NO.5：F:5'-CGGTTTGTGTTGCTGATTT-3'；

SEQ ID NO.6：R:5'-TGCTGCTACATTATCTGCTA-3'。

qRT-PCR检测每次设置3个平行管反应，以β-actin与RPS6作为内参。qRT-PCR反应程序为：95℃30s；95℃3s，60℃34s，40个循环。

3、实验结果分析

结果分析方法同实施例2，具体如下：

LNC_006756与HAO1及表型指标的关联分析：根据线性回归计算原理，将肝脏LNC_006756的表达量分别与HAO1的表达量及肝脏指数进行相关分析，p<0.05定义为显著相关。

统计学分析：采用SPSS 25.0软件(SPSS,Chicago,IL,USA)进行分析。均数间比较采用t检验或曼惠特尼检验，p<0.05定义为有差异显著性，具有统计学意义。分析各表型组间表达差异。

qRT-PCR结果表明，在F4代中，脂肪肝组LNC_006756的表达量是对照组的5倍，表达水平差异显著(图7)；脂肪肝组HAO1的表达量是对照组的1.6倍，表达水平差异显著(图8)。肝脏指数检测结果表明F4代脂肪肝组个体的肝脏指数是对照组的1.4倍，差异显著(图9)。相关分析结果表明，F4代中LNC_006756与HAO1表达量极显著相关(r＝0.72，p<0.0001)(图10)；LNC_006756的表达量与肝脏指数极显著相关(r＝0.61，p<0.01)(图11)。

实施例4一种鸡脂肪肝检测试剂盒及其检测方法(1)

本实施例提供一种鸡脂肪肝检测试剂盒，其包括如表2所示的组分。

表2鸡脂肪肝检测试剂盒的组分

本实施例还提供一种鸡脂肪肝的检测方法，具体如下：

(1)提取待测鸡肝脏样本的总RNA；

(2)以oligo-dT为3’引物，利用反转录酶进行lncRNA的反转录；

(3)采用如SEQ ID NO.3-4所示的引物进行LNC_006756的qRT-PCR检测；

(4)以正常鸡肝脏样本作为对照，根据LNC_006756的表达水平，判断待测鸡是否患有脂肪肝；判断依据为：若待测鸡的LNC_006756表达水平显著高于正常鸡，则判断待测鸡患有脂肪肝。

实施例5一种鸡脂肪肝检测试剂盒及其检测方法(2)

本实施例提供一种鸡脂肪肝检测试剂盒，其包括如表3所示的组分。

表3鸡脂肪肝检测试剂盒的组分

本实施例还提供一种鸡脂肪肝的检测方法，具体如下：

(1)提取待测鸡肝脏样本的总RNA；

(2)以oligo-dT为3’引物，利用反转录酶进行lncRNA的反转录；

(3)采用如SEQ ID NO.3-4和如SEQ ID NO.5-6所示的引物进行LNC_006756和HAO1的qRT-PCR检测；

(4)以正常鸡肝脏样本作为对照，根据LNC_006756和HAO1的表达水平，判断待测鸡是否患有脂肪肝；判断依据为：若待测鸡的LNC_006756和HAO1的表达水平均显著高于正常鸡，则判断待测鸡患有脂肪肝。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

<120> 与鸡脂肪代谢相关的lncRNA、其调控靶点及其应用

<130> KHP201110197.2

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 10386

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gcuacaccaa agugagacau cucaguuacu ucagugcuca gagucucaag uguagaaaau 60

aaaauuuuac cuuccuuagg cuucaguucc ccggcacagg gcucgcugcu cauuacaaca 120

gcccugacua gaagcucacg gggugaggag gacgacgaug ccucauuccc agugaagggg 180

aaggggugca gagcuggugc ugccucuggu gagaucugcg guagccuuca gcugucaguc 240

auucucauuu guucugccau ugagcuuacc gggauuacug gggugcuuaa agcuaagcaa 300

aaacgcagau guuugcaagg ugaaggccca agaggcuuuu aagagcacag gcuguaguua 360

auugcuucug ccaggacaga gcaguugggg guauuuaaaa cucaacagga guaauaguaa 420

gagcucccuc ucuagaagua gagcuuguua ugauaguauu cagaagaauu uguuaguuca 480

aagaaacugu agccugaaag acacagacuu uauccuucua uucauauuuu aaugcuuuau 540

caaacuaaua gauucacauu uguuugcacu guucucucug ggaggucauu aaacaaauuu 600

cugucagugg agugcuguga acugcucauc uucugccccu ugcugguguu ucaugugcug 660

gagaaacauu gcuuucuuuu auuuuuuaaa ugucuuugcu ugacuuuuuc cuuuugugau 720

gaagcaacug uaauuuguac aaauuaugca gcugauuuaa uuuaugguga auaauuuucu 780

uacagauuuu guaacuagau gcuaauaaau uucuuccgug cuucauauag caaacucucu 840

cauuccuaaa cuuaauugcu augcuacaau acacuaaaaa auaacuaaaa gagaucuguu 900

aaguuaaacu uauauacaua uacuauacac aaauauaaua uuaaacaaau auauguauac 960

aaaauuuaac uucuguaauu uuuugugaua uaauucagga uaccauauug auucagugug 1020

aagaagucua agagcaaagu ggaauucuau acucugugua uugaaaugaa cuuaacuuaa 1080

gaauauuuau aaaagugucc caacuggagc agaauuauag ugagaguuuu gucuaaguuu 1140

ucugcauguc ugcagaagca aagaugagcu cuuuuaggaa gcagcaaagg gacacuuuga 1200

gcauguaugc uccccaguca gaugauugag cucacaucuu ugcucagcaa caauauuccc 1260

uuuacauaua aauuaaugcc aaauucuaua acugagcaga acucuacuuc aagcauuaaa 1320

guugcaugag auagugguau gauaacucug caaagacugg cagagcuuau uuagcagguc 1380

aauaaaauga aaaauuaaga aaaugcauau auuggauuuu uuuccucuau uuuuucuuca 1440

uguuuugauu uauauacuuc acacacugca uaggagguag gaacuccagu cauugguguu 1500

ugacagcgcc auugagcacu gaaugcuuga aaauaauacc uaccuaaagu uuaugcaucc 1560

uaaauauaaa acaauagguu agugauacaa agugccagag aacaugugag auaacaggac 1620

cauguugguc uccagcacuu uaagaggaug ggagauuucc cuucucccuu cagagagcga 1680

gacugcugcu gcauggugac accguguuuu cuagaagcuc cugccauagu caggacagga 1740

acauuugaug cuuagccaca ucuugaguac ugugucuagu uuugggcucc ucaguugggg 1800

aaaaaaaaau aauaaaaaaa aagaucuucu agagagaccc cagaggaggg ugaugaagau 1860

gaugagggcc cuggagcauc uccuguauga ugaaaggcug agagaucugg ugcuguucag 1920

ccuggagaag agaaagcuca aaggggaucu uaucaaugcc uauaaacgcc uaaugggugg 1980

gaggcaggug gauugggcca ggcucuuuuc agaggugccu agugacagaa caaguggcag 2040

ugggcacaaa cuggaaugca ugaaguucca ucuaaacaug agaaagaaca ucuuuacugu 2100

gagggugaug gagcacuaca acagucuuuc cagagagguu guggacuuuc cucuggagac 2160

auucaaaacc ugccuggaag cuuuccugug uaaccuacug uagggaacuc ucuuuagcag 2220

gagguuggac uggaugaucc ccagaagucc uuuccaaucc cuccaauacu gugauuuccu 2280

ggaggaugcc acacgaaggu gcaggggaga cccagguugu ccugagcucu accagggcca 2340

guuuuacugc agagcuugcu uuggauuugu gcuaucuccc uucuagcagg aaaauaagga 2400

aauacacauu cuuggaagug auuacaauuc aggucguguu ucuggcauug uuaguucugu 2460

uuucuagcag aagaaaauau ggccuggacu acauggaguc accugugcuu acaaggugaa 2520

gaaauagccu uuguuucuau cuuaauauau ugugcagugu uccuugcagu uguacaugug 2580

ugcugauuuc caacccagag gggucuauau uucagcauga augcagugau ccauauacug 2640

uuauuaucac accaugcaau gcaaucucua aagcaccuug ggguccaucu cucuuggcug 2700

aaaagcauua uaaaaaugaa agguauguuc auaaugguua ggagcagaau acugcauuag 2760

ccuccuuggg cuacaaugau ggauuaaggg gagcuguugc ccucaagaag aaaaggcuug 2820

aguuaugcgc uuccuccuca augcacucag agugugcaua uauuaggagu aguuuuguca 2880

gacucuggca gaaggcugaa ggaguguggg aaggugacca gcuuuuuugu aauagaucuu 2940

gaacguuauu ugucauacuc guaacucucu ucgaaguaca ugcagagauu cccuccuggg 3000

uagagaggaa aacagaaaga uaauguuuga aaggaaacau gauuuuauau gugcuugauu 3060

gaaagaaaac uugaaaagga uuagcuuccu aaauuaucaa aaugcuuuuu gagauauuuc 3120

cuuuaaauga cuuaauugga ggucacaguu ugagaagggg gacagaacug gaagcacaac 3180

acuaucuuua gccucacagc cuauuacuuu auucccugcu gacagcagug aaugcuuuuu 3240

uauagaguaa agcauccugu gggacuaugu uagucgcagu aaaacuuuca uggggagaca 3300

uuuccuaaaa gagagagaaa gggaggucug guuuggggca gacugcagac cugggaggua 3360

ggagagcuug gcuugucagc gcugugcucu aauucagaaa auaccaaaac aucccagaug 3420

aguaucucuu ucucuauccc acuacuugua ucccuuuauu uucuuaaaag ucagaaguuu 3480

ugggcuugcu ccagcccaag cagaggaugu uuuugugacc uuagcacguu cucuagagca 3540

ggaaaaugca uuuccuguuc cacuguacuc uucccagggc ugauaauccu ggggugagaa 3600

cacaguuaua uuggcauuau auauauauaa aaaguaucua acugggccac guugaggauu 3660

uggcuuuaau guuuuuaauu uuacauccua aguugcuugu cagaaacugc uuauuuuccu 3720

gaaauacaaa caaaucaaau gcagcuuuuc augaaguaca agagaugcug ggaaagcagc 3780

uggauugcau uucgaucagu cugcacaacg gacugcacau cugaggagga aauguccuuu 3840

agaaagcccu gagggaacug uggaucagau cagaaacugg cuugccccaa gcuaagagaa 3900

ggcccaguga acugaguauu aagcagugua auuuguuccc cuguucugug uuguuguagg 3960

uuuggauuga auaauugucu agaagcucuu uuucuuucau uuucaaugua uucuauauuu 4020

uucauuuuua auuuuagccu uuagccuauc acacacagaa ucacagaaua uccaucaucc 4080

uucagaucca uaugguauau cugauguuuc aucuucauuu ucuccuucug uucuuuuauc 4140

uuugucucua aucauugauu uuuuuuguaa cauuuaauua auauuucaau guauuauucg 4200

uuugugugac auuuuacaau ccaugcaguu aaaucacagc agacuucuug aaauuaccag 4260

cuguguaagu caaugacacu aacuuuccaa ggagaaacug ucagaaacac aacagaaaag 4320

ccuuugaccc uguggaagua aucaaguuca ugucuccaaa auaacucaag gaauagaauu 4380

uuuuuuuugc uuuaauuuuc uuaaugcuga uuaagaacac agucauuccc aaaaguaccu 4440

ucuacaaguc aucugcauag uuagcuauga agcugaaacu cuauccuuag uguauuuaua 4500

uccuggcaag ggagcuaggc acuguguuag uucaccugug ugggaccucg ucuuucuggg 4560

uuagugccuu ucccucuggg cuuucaauag auagcuuucc uccagcaaaa ugacuuuuga 4620

ucaugccucc acuaagagaa acggagaaua auaagcugga gaagagccua acaggaaguu 4680

ugguagagca gagaucaucc uaugggaggg acagcugagg ucguauguuu aggggcuuug 4740

uacugugagu uagaaaugau ugcuuaaugg uuuagaggaa gcaaauauca ucugcaucac 4800

acucuuucag gacucagcaa auaugaaugu agggcaugaa caauguacau accugauauu 4860

ucaacuaacg aagcauuagu uauaagauca aaucuuauua uuauauugua uugaauguua 4920

uauuuuacaa uuauaaagaa cuacagucuu auugcuuaug acuuggaucu ugcacaugca 4980

auauauaacu gccuuacacu acacaacagc ucuguacacg cuuaaaauua guuuuguaua 5040

aauacccaaa gaagagggau uuauuuuacc aguguuaaug uacagcccag gaaaaucggu 5100

auuuucuccc uuuugccagu agauggcaau aaguuauaaa cuuguggaau uauaaaaucc 5160

aacguuaaua uugcuggguu cccaagaagc uguuugaaac auuaauuuca augaagagau 5220

auuaaaugca ggaaaaguaa accaaaaguu auuaaguuau uuaaaauauc uuucugugug 5280

uguaccucua auucaauggg aaaguauugc agcaaaaaau gaacaaagag uucucuccag 5340

gaugcaacau uacaugugaa uuuuaagcag aacagaagaa uugcuacaca auuccuuuuu 5400

augugagauu auaaauaccu accuauaaug uaaucacuga auaaucacug ugagagcauu 5460

gcaguaaagu caacauuuaa aaaugugaga gaagagugac cugagaaaag aaauaaaauc 5520

cugucuggga gaaggaagga gaugaacaga gacagagguu uguuucaguu uuagcaagau 5580

auucucuguu accagaaaau gaugaacaca ggcuaaguuu augauugcug aaugaguaaa 5640

uguguugaac aguaugaaca aaggggcgga aaagguguuu cugguuccug gauuucaaca 5700

ugugaccuuu acuggcccau uagcauugcc ccagcuucac uacuuguuug uguuucucuu 5760

guggacauca ggggaaaaaa gagcaggagc uuuacaugca cucugguuca caguguugga 5820

agucugcaag aagugaguug cuuucgugca ucccuugggg aacugcagcu gcaggaucau 5880

auuggaguag gcacagagcu gcagcaggga acugggucuu ucgugcauua aaaugcucuu 5940

uucugucaca cuuugugcug uuauaaaaga uauaaacaac acaaauauuc caagagcaaa 6000

acuaacaugu ccagcagaac augucacuau aaaaguuuga caccauauga acauucauuu 6060

uuauuuuaaa aggaaagaaa acaaaacaaa acaaaacaaa caaacaaaca aaaaaaacac 6120

guagaaugaa aaucaaggua auccauagcu aaauauuaag agaaaucuug uuuuugaggg 6180

gauggcauga gaugaaaucu gucuuugcuu uaggaaauaa ccccuacaca caugaaaauu 6240

uuuauuucag uaagguugcu ucauuuaguu gcaacuguuu ggauuucuca ggaucuaugu 6300

ucacugcugu uugagauguu uucauaguug gaagcgauua uagaacucau uacuuguggg 6360

uuugucugga aguuugugaa aaugaaagcu gaauuuaaaa gucaacaguc aguuaaaaaa 6420

auccauuuuu aaugcccauu aauuguuccu uucuuaucaa auacgcccac uuuuaaaggu 6480

uucuuucuaa acaguaugca cuaaaaagaa gauaaaaucu acugccugaa gaacaaggcc 6540

ugaagcagag auuacagagu uggaauucag cuggcagguu ugcuaauggu gcauaacaug 6600

aaauaaagga aaaggaggcu uucuguaaca guaacauacu gacuuuagag agcagucagc 6660

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auauauauau auauauauau auuagucuuu uuguucaaag cuaguuuaaa auuauuacaa 6780

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uaccaucaug cugauaauug gcagaaaaug ccaacaguga aagacaaaua ggaagaacgc 6900

uguccuuuug aacuccagaa gucacauuaa aaaaauaaaa uaaaaaaaua aaaccauuua 6960

guuuagaaua caauauaguu uggaauauac uggaguauau gguauuguaa accuuaaguu 7020

aggggcuuag agacuaagag auauuacuua gagcucaaaa caaaacugua uuuucuguuu 7080

auugcauuuu uuaggacaug gcugauaagg ccacuacaaa uacauaaaga augggguccu 7140

uaucuuacua uagcucagaa agaaauucag uugaauuggg ugccuuauau ucaauugaga 7200

gacagaaugc augauuccca guccucacua aauccagccg uucuaagauu ucauucccuc 7260

aaaaaagaaa gcuuuggauu uugcuguaac cucaagcuag agagagauua auuauuauau 7320

ucagagcucc cauacuucug ccugugacuu ugggaaauuc gcgcagaugc ugugcugggg 7380

gcaugcaaug auucuacugc aucugagaug cacagaacug uguggauaaa cugugcuuuu 7440

uccaggagga ucaacaacag aaguaucgua gaaucacagg guuggaaagg accuacaaga 7500

ccaucuaguc caaccauccu cccauuaccc uugcugccac aagccacuaa accauaucuc 7560

guagcuccuc auccagaugc cucuugaaca cugccaggga caaaguguuc augugcaucu 7620

auuaauguac aucuugaguc cauaaagacu caacgcucug aguguucugg uaaaguuguu 7680

uuccauccuu cacgcugcug ggcuucgucg ugcuggcaga aagugacaaa agucugaaua 7740

caacauguug cagcuugcau cucagcuucu uccucagcuc ugggaucuga gggccuuuug 7800

gggaaggugg agaggaacag agaaagagaa aaaaaaagug auaaguagau guugaaacug 7860

cagauaguaa uaaauauugc acugcacccu cuuagcaaau aaguggaggg gcaaaccaua 7920

cagacugagc uggaauucuu ccagcuuuau cuguucuuca agggugaguc uugcaagaug 7980

cccugaauuc aaucaccaaa ucacuuaagg acguuuccuc gugggaauac uuacauggua 8040

aaguuaauag uauuaaaugu ugugcuucgu uagauaaugu agaugugagu gaaauggcuu 8100

ucaaagucca aaucaaucau gaugccugau auuucuuuga uuccuuuagc agaaacagug 8160

caccaaugga uguuacugug agcaccuagg cagagucuca aaaggaugcu gaaucccugc 8220

agcugaaucc cugcagagga ugcacaagca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaggau 8280

caauuuguaa ugcaaauuac ugcucuccua cugcucucuu gccaugcacu gacaaauagg 8340

aauacugugc uucugagagu uacaaaagca aacaaacaaa aaaauccccu guaauuuagc 8400

uuuccauuuu guuguuuuca gugugguuua ucauccaaag ucauguaucu cuaguucuuu 8460

ucuaucuaga acaagcaaga uaaaaauaac aaauguacaa gccaaugaua aauccugcug 8520

uguccauaaa guuucugcuu auguuguuac aagcaagaga gcugauaaau ugggaaaucc 8580

cugaagcacc auuuaguacc cagcacaaaa aauauuauuu auguagauaa auagcacucc 8640

cuuaaugcgg uaaaucugcu agagagaaau cuguguggau ucaguauuug uaaugugagc 8700

auuucagaag cauaaguacc aauuuaugca aauagguccc aaacucauca guuuuaccua 8760

ccuuauuauu gauaucuauc uucauugaag ccguguacug agugcacuuc auuaagaccg 8820

acaagccaaa ggcugcuccu ucucccuggg aaaugccauc uucuuuauaa ugcaaaagcc 8880

auuaaauaag cuuuuuacag uaagucaacu cucuguuucu cucccacagu aggggguauu 8940

uuuuuuauuu gacuccacaa auccugcuua aagagacaua ggaagauucu cuacaaugaa 9000

aaaaucgcac cuuugcccuu ccucagugga auguguuuau uccccauggu cccagcuaca 9060

ccauaagaca uuaaccauga ccuuguaguu aaacccugug cgggaaguuu uacacacauu 9120

uuuauuuuuu auauuuuaaa uauccauagc acagaaaugu uuguuuuggu uuuuuuuuuu 9180

uuccuaucca cugcuucuaa aaaucuuuua uuuuucucua caacauguua uaauucaacu 9240

gucacacagu gauauuuaaa aguaaaauga aacaaagucc ucuguacaca guacucuggc 9300

uagaaccucu gaaaggggca gaucuuacag guuugguguu ugcagauguu guuccagagc 9360

cuuuucacac agguuucuug cuugaucacu uacuaucugu agcaugugag agagggaaug 9420

ugcugacuuc ucuuacaguc caguuuagua ucuugcuuac agagaaaagu auuuccuuug 9480

ggcugauguu aaaagaaaca aacucugcuu uagauugcua auacaaacca auuuuuguau 9540

uuuacaaacc aggcccuuuc cugccuuaaa aaaauaaaaa uaaaucuaaa acuguugcua 9600

ccuucuguac ucuuaucuaa auauaugacu guuucugugg cugcaugauu ccacaucagg 9660

uaccagagcu ggaauauggu auucaaguuc uuuuuuuaau gauaaucaua aaccucccag 9720

aauguuuacc aguuccuuuc uuucuaaccu gcugcucaaa cccuauaaca uuacauuuua 9780

uuguguucug ugugcucuuc ugucaugugu acuguuacuu cuugggcuaa ccacauuagg 9840

gacacugugg aguauugcaa augauaaaau gauagaauca uagaaucauu aauguuggaa 9900

aaggccucua aggucaucua gugcaaccgu caguccaucc ccaccaugcc cacuaaccau 9960

gccacuaagu accauaucuc caugcuuagg gaugguacuc caucaccucc cugggcagcc 10020

ugugccacug ccucacuacu ccuucuggga agaaauuuuu ccuaauauuc aaccugaaug 10080

gugcuuuuga ucaaaauaag aaacuuugcc uuaaucucug agguuuuuuu guaagaauau 10140

cacacaguua uuuggucugg cuuuuuuucu gauguguucu auugccugca gugagacaga 10200

gaugaauuug ugcaucuuga ugugccuggu gagcacagag gcugcagccc augagcugac 10260

aguugaggag agggugcucu guucugcaug cacuuccuuc aggcagaagu aacugcucuc 10320

aaggauuuaa cuggauuauu aguuuggaga gaagcaaaga ggauuuagga uuaggucccu 10380

auggua 10386

<210> 2

<211> 10386

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

gctacaccaa agtgagacat ctcagttact tcagtgctca gagtctcaag tgtagaaaat 60

aaaattttac cttccttagg cttcagttcc ccggcacagg gctcgctgct cattacaaca 120

gccctgacta gaagctcacg gggtgaggag gacgacgatg cctcattccc agtgaagggg 180

aaggggtgca gagctggtgc tgcctctggt gagatctgcg gtagccttca gctgtcagtc 240

attctcattt gttctgccat tgagcttacc gggattactg gggtgcttaa agctaagcaa 300

aaacgcagat gtttgcaagg tgaaggccca agaggctttt aagagcacag gctgtagtta 360

attgcttctg ccaggacaga gcagttgggg gtatttaaaa ctcaacagga gtaatagtaa 420

gagctccctc tctagaagta gagcttgtta tgatagtatt cagaagaatt tgttagttca 480

aagaaactgt agcctgaaag acacagactt tatccttcta ttcatatttt aatgctttat 540

caaactaata gattcacatt tgtttgcact gttctctctg ggaggtcatt aaacaaattt 600

ctgtcagtgg agtgctgtga actgctcatc ttctgcccct tgctggtgtt tcatgtgctg 660

gagaaacatt gctttctttt attttttaaa tgtctttgct tgactttttc cttttgtgat 720

gaagcaactg taatttgtac aaattatgca gctgatttaa tttatggtga ataattttct 780

tacagatttt gtaactagat gctaataaat ttcttccgtg cttcatatag caaactctct 840

cattcctaaa cttaattgct atgctacaat acactaaaaa ataactaaaa gagatctgtt 900

aagttaaact tatatacata tactatacac aaatataata ttaaacaaat atatgtatac 960

aaaatttaac ttctgtaatt ttttgtgata taattcagga taccatattg attcagtgtg 1020

aagaagtcta agagcaaagt ggaattctat actctgtgta ttgaaatgaa cttaacttaa 1080

gaatatttat aaaagtgtcc caactggagc agaattatag tgagagtttt gtctaagttt 1140

tctgcatgtc tgcagaagca aagatgagct cttttaggaa gcagcaaagg gacactttga 1200

gcatgtatgc tccccagtca gatgattgag ctcacatctt tgctcagcaa caatattccc 1260

tttacatata aattaatgcc aaattctata actgagcaga actctacttc aagcattaaa 1320

gttgcatgag atagtggtat gataactctg caaagactgg cagagcttat ttagcaggtc 1380

aataaaatga aaaattaaga aaatgcatat attggatttt tttcctctat tttttcttca 1440

tgttttgatt tatatacttc acacactgca taggaggtag gaactccagt cattggtgtt 1500

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taaatataaa acaataggtt agtgatacaa agtgccagag aacatgtgag ataacaggac 1620

catgttggtc tccagcactt taagaggatg ggagatttcc cttctccctt cagagagcga 1680

gactgctgct gcatggtgac accgtgtttt ctagaagctc ctgccatagt caggacagga 1740

acatttgatg cttagccaca tcttgagtac tgtgtctagt tttgggctcc tcagttgggg 1800

aaaaaaaaat aataaaaaaa aagatcttct agagagaccc cagaggaggg tgatgaagat 1860

gatgagggcc ctggagcatc tcctgtatga tgaaaggctg agagatctgg tgctgttcag 1920

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gaggcaggtg gattgggcca ggctcttttc agaggtgcct agtgacagaa caagtggcag 2040

tgggcacaaa ctggaatgca tgaagttcca tctaaacatg agaaagaaca tctttactgt 2100

gagggtgatg gagcactaca acagtctttc cagagaggtt gtggactttc ctctggagac 2160

attcaaaacc tgcctggaag ctttcctgtg taacctactg tagggaactc tctttagcag 2220

gaggttggac tggatgatcc ccagaagtcc tttccaatcc ctccaatact gtgatttcct 2280

ggaggatgcc acacgaaggt gcaggggaga cccaggttgt cctgagctct accagggcca 2340

gttttactgc agagcttgct ttggatttgt gctatctccc ttctagcagg aaaataagga 2400

aatacacatt cttggaagtg attacaattc aggtcgtgtt tctggcattg ttagttctgt 2460

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tgctgatttc caacccagag gggtctatat ttcagcatga atgcagtgat ccatatactg 2640

ttattatcac accatgcaat gcaatctcta aagcaccttg gggtccatct ctcttggctg 2700

aaaagcatta taaaaatgaa aggtatgttc ataatggtta ggagcagaat actgcattag 2760

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gaacgttatt tgtcatactc gtaactctct tcgaagtaca tgcagagatt ccctcctggg 3000

tagagaggaa aacagaaaga taatgtttga aaggaaacat gattttatat gtgcttgatt 3060

gaaagaaaac ttgaaaagga ttagcttcct aaattatcaa aatgcttttt gagatatttc 3120

ctttaaatga cttaattgga ggtcacagtt tgagaagggg gacagaactg gaagcacaac 3180

actatcttta gcctcacagc ctattacttt attccctgct gacagcagtg aatgcttttt 3240

tatagagtaa agcatcctgt gggactatgt tagtcgcagt aaaactttca tggggagaca 3300

tttcctaaaa gagagagaaa gggaggtctg gtttggggca gactgcagac ctgggaggta 3360

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tgggcttgct ccagcccaag cagaggatgt ttttgtgacc ttagcacgtt ctctagagca 3540

ggaaaatgca tttcctgttc cactgtactc ttcccagggc tgataatcct ggggtgagaa 3600

cacagttata ttggcattat atatatataa aaagtatcta actgggccac gttgaggatt 3660

tggctttaat gtttttaatt ttacatccta agttgcttgt cagaaactgc ttattttcct 3720

gaaatacaaa caaatcaaat gcagcttttc atgaagtaca agagatgctg ggaaagcagc 3780

tggattgcat ttcgatcagt ctgcacaacg gactgcacat ctgaggagga aatgtccttt 3840

agaaagccct gagggaactg tggatcagat cagaaactgg cttgccccaa gctaagagaa 3900

ggcccagtga actgagtatt aagcagtgta atttgttccc ctgttctgtg ttgttgtagg 3960

tttggattga ataattgtct agaagctctt tttctttcat tttcaatgta ttctatattt 4020

ttcattttta attttagcct ttagcctatc acacacagaa tcacagaata tccatcatcc 4080

ttcagatcca tatggtatat ctgatgtttc atcttcattt tctccttctg ttcttttatc 4140

tttgtctcta atcattgatt ttttttgtaa catttaatta atatttcaat gtattattcg 4200

tttgtgtgac attttacaat ccatgcagtt aaatcacagc agacttcttg aaattaccag 4260

ctgtgtaagt caatgacact aactttccaa ggagaaactg tcagaaacac aacagaaaag 4320

cctttgaccc tgtggaagta atcaagttca tgtctccaaa ataactcaag gaatagaatt 4380

ttttttttgc tttaattttc ttaatgctga ttaagaacac agtcattccc aaaagtacct 4440

tctacaagtc atctgcatag ttagctatga agctgaaact ctatccttag tgtatttata 4500

tcctggcaag ggagctaggc actgtgttag ttcacctgtg tgggacctcg tctttctggg 4560

ttagtgcctt tccctctggg ctttcaatag atagctttcc tccagcaaaa tgacttttga 4620

tcatgcctcc actaagagaa acggagaata ataagctgga gaagagccta acaggaagtt 4680

tggtagagca gagatcatcc tatgggaggg acagctgagg tcgtatgttt aggggctttg 4740

tactgtgagt tagaaatgat tgcttaatgg tttagaggaa gcaaatatca tctgcatcac 4800

actctttcag gactcagcaa atatgaatgt agggcatgaa caatgtacat acctgatatt 4860

tcaactaacg aagcattagt tataagatca aatcttatta ttatattgta ttgaatgtta 4920

tattttacaa ttataaagaa ctacagtctt attgcttatg acttggatct tgcacatgca 4980

atatataact gccttacact acacaacagc tctgtacacg cttaaaatta gttttgtata 5040

aatacccaaa gaagagggat ttattttacc agtgttaatg tacagcccag gaaaatcggt 5100

attttctccc ttttgccagt agatggcaat aagttataaa cttgtggaat tataaaatcc 5160

aacgttaata ttgctgggtt cccaagaagc tgtttgaaac attaatttca atgaagagat 5220

attaaatgca ggaaaagtaa accaaaagtt attaagttat ttaaaatatc tttctgtgtg 5280

tgtacctcta attcaatggg aaagtattgc agcaaaaaat gaacaaagag ttctctccag 5340

gatgcaacat tacatgtgaa ttttaagcag aacagaagaa ttgctacaca attccttttt 5400

atgtgagatt ataaatacct acctataatg taatcactga ataatcactg tgagagcatt 5460

gcagtaaagt caacatttaa aaatgtgaga gaagagtgac ctgagaaaag aaataaaatc 5520

ctgtctggga gaaggaagga gatgaacaga gacagaggtt tgtttcagtt ttagcaagat 5580

attctctgtt accagaaaat gatgaacaca ggctaagttt atgattgctg aatgagtaaa 5640

tgtgttgaac agtatgaaca aaggggcgga aaaggtgttt ctggttcctg gatttcaaca 5700

tgtgaccttt actggcccat tagcattgcc ccagcttcac tacttgtttg tgtttctctt 5760

gtggacatca ggggaaaaaa gagcaggagc tttacatgca ctctggttca cagtgttgga 5820

agtctgcaag aagtgagttg ctttcgtgca tcccttgggg aactgcagct gcaggatcat 5880

attggagtag gcacagagct gcagcaggga actgggtctt tcgtgcatta aaatgctctt 5940

ttctgtcaca ctttgtgctg ttataaaaga tataaacaac acaaatattc caagagcaaa 6000

actaacatgt ccagcagaac atgtcactat aaaagtttga caccatatga acattcattt 6060

ttattttaaa aggaaagaaa acaaaacaaa acaaaacaaa caaacaaaca aaaaaaacac 6120

gtagaatgaa aatcaaggta atccatagct aaatattaag agaaatcttg tttttgaggg 6180

gatggcatga gatgaaatct gtctttgctt taggaaataa cccctacaca catgaaaatt 6240

tttatttcag taaggttgct tcatttagtt gcaactgttt ggatttctca ggatctatgt 6300

tcactgctgt ttgagatgtt ttcatagttg gaagcgatta tagaactcat tacttgtggg 6360

tttgtctgga agtttgtgaa aatgaaagct gaatttaaaa gtcaacagtc agttaaaaaa 6420

atccattttt aatgcccatt aattgttcct ttcttatcaa atacgcccac ttttaaaggt 6480

ttctttctaa acagtatgca ctaaaaagaa gataaaatct actgcctgaa gaacaaggcc 6540

tgaagcagag attacagagt tggaattcag ctggcaggtt tgctaatggt gcataacatg 6600

aaataaagga aaaggaggct ttctgtaaca gtaacatact gactttagag agcagtcagc 6660

tagaggtatt ctggcaattt ttgacaggtg ttgggttttg caaaaggctt atttttaaat 6720

atatatatat atatatatat attagtcttt ttgttcaaag ctagtttaaa attattacaa 6780

gcatttggat tgagaaaact gctggagttc aggagctgat taatgataat tcacatacgt 6840

taccatcatg ctgataattg gcagaaaatg ccaacagtga aagacaaata ggaagaacgc 6900

tgtccttttg aactccagaa gtcacattaa aaaaataaaa taaaaaaata aaaccattta 6960

gtttagaata caatatagtt tggaatatac tggagtatat ggtattgtaa accttaagtt 7020

aggggcttag agactaagag atattactta gagctcaaaa caaaactgta ttttctgttt 7080

attgcatttt ttaggacatg gctgataagg ccactacaaa tacataaaga atggggtcct 7140

tatcttacta tagctcagaa agaaattcag ttgaattggg tgccttatat tcaattgaga 7200

gacagaatgc atgattccca gtcctcacta aatccagccg ttctaagatt tcattccctc 7260

aaaaaagaaa gctttggatt ttgctgtaac ctcaagctag agagagatta attattatat 7320

tcagagctcc catacttctg cctgtgactt tgggaaattc gcgcagatgc tgtgctgggg 7380

gcatgcaatg attctactgc atctgagatg cacagaactg tgtggataaa ctgtgctttt 7440

tccaggagga tcaacaacag aagtatcgta gaatcacagg gttggaaagg acctacaaga 7500

ccatctagtc caaccatcct cccattaccc ttgctgccac aagccactaa accatatctc 7560

gtagctcctc atccagatgc ctcttgaaca ctgccaggga caaagtgttc atgtgcatct 7620

attaatgtac atcttgagtc cataaagact caacgctctg agtgttctgg taaagttgtt 7680

ttccatcctt cacgctgctg ggcttcgtcg tgctggcaga aagtgacaaa agtctgaata 7740

caacatgttg cagcttgcat ctcagcttct tcctcagctc tgggatctga gggccttttg 7800

gggaaggtgg agaggaacag agaaagagaa aaaaaaagtg ataagtagat gttgaaactg 7860

cagatagtaa taaatattgc actgcaccct cttagcaaat aagtggaggg gcaaaccata 7920

cagactgagc tggaattctt ccagctttat ctgttcttca agggtgagtc ttgcaagatg 7980

ccctgaattc aatcaccaaa tcacttaagg acgtttcctc gtgggaatac ttacatggta 8040

aagttaatag tattaaatgt tgtgcttcgt tagataatgt agatgtgagt gaaatggctt 8100

tcaaagtcca aatcaatcat gatgcctgat atttctttga ttcctttagc agaaacagtg 8160

caccaatgga tgttactgtg agcacctagg cagagtctca aaaggatgct gaatccctgc 8220

agctgaatcc ctgcagagga tgcacaagca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaggat 8280

caatttgtaa tgcaaattac tgctctccta ctgctctctt gccatgcact gacaaatagg 8340

aatactgtgc ttctgagagt tacaaaagca aacaaacaaa aaaatcccct gtaatttagc 8400

tttccatttt gttgttttca gtgtggttta tcatccaaag tcatgtatct ctagttcttt 8460

tctatctaga acaagcaaga taaaaataac aaatgtacaa gccaatgata aatcctgctg 8520

tgtccataaa gtttctgctt atgttgttac aagcaagaga gctgataaat tgggaaatcc 8580

ctgaagcacc atttagtacc cagcacaaaa aatattattt atgtagataa atagcactcc 8640

cttaatgcgg taaatctgct agagagaaat ctgtgtggat tcagtatttg taatgtgagc 8700

atttcagaag cataagtacc aatttatgca aataggtccc aaactcatca gttttaccta 8760

ccttattatt gatatctatc ttcattgaag ccgtgtactg agtgcacttc attaagaccg 8820

acaagccaaa ggctgctcct tctccctggg aaatgccatc ttctttataa tgcaaaagcc 8880

attaaataag ctttttacag taagtcaact ctctgtttct ctcccacagt agggggtatt 8940

ttttttattt gactccacaa atcctgctta aagagacata ggaagattct ctacaatgaa 9000

aaaatcgcac ctttgccctt cctcagtgga atgtgtttat tccccatggt cccagctaca 9060

ccataagaca ttaaccatga ccttgtagtt aaaccctgtg cgggaagttt tacacacatt 9120

tttatttttt atattttaaa tatccatagc acagaaatgt ttgttttggt tttttttttt 9180

ttcctatcca ctgcttctaa aaatctttta tttttctcta caacatgtta taattcaact 9240

gtcacacagt gatatttaaa agtaaaatga aacaaagtcc tctgtacaca gtactctggc 9300

tagaacctct gaaaggggca gatcttacag gtttggtgtt tgcagatgtt gttccagagc 9360

cttttcacac aggtttcttg cttgatcact tactatctgt agcatgtgag agagggaatg 9420

tgctgacttc tcttacagtc cagtttagta tcttgcttac agagaaaagt atttcctttg 9480

ggctgatgtt aaaagaaaca aactctgctt tagattgcta atacaaacca atttttgtat 9540

tttacaaacc aggccctttc ctgccttaaa aaaataaaaa taaatctaaa actgttgcta 9600

ccttctgtac tcttatctaa atatatgact gtttctgtgg ctgcatgatt ccacatcagg 9660

taccagagct ggaatatggt attcaagttc tttttttaat gataatcata aacctcccag 9720

aatgtttacc agttcctttc tttctaacct gctgctcaaa ccctataaca ttacatttta 9780

ttgtgttctg tgtgctcttc tgtcatgtgt actgttactt cttgggctaa ccacattagg 9840

gacactgtgg agtattgcaa atgataaaat gatagaatca tagaatcatt aatgttggaa 9900

aaggcctcta aggtcatcta gtgcaaccgt cagtccatcc ccaccatgcc cactaaccat 9960

gccactaagt accatatctc catgcttagg gatggtactc catcacctcc ctgggcagcc 10020

tgtgccactg cctcactact ccttctggga agaaattttt cctaatattc aacctgaatg 10080

gtgcttttga tcaaaataag aaactttgcc ttaatctctg aggttttttt gtaagaatat 10140

cacacagtta tttggtctgg ctttttttct gatgtgttct attgcctgca gtgagacaga 10200

gatgaatttg tgcatcttga tgtgcctggt gagcacagag gctgcagccc atgagctgac 10260

agttgaggag agggtgctct gttctgcatg cacttccttc aggcagaagt aactgctctc 10320

aaggatttaa ctggattatt agtttggaga gaagcaaaga ggatttagga ttaggtccct 10380

atggta 10386

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ctgggggcat gcaatgattc 20

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gcgtgaagga tggaaaacaa c 21

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

cggtttgtgt tgctgattt 19

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tgctgctaca ttatctgcta 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

ggggaagagt gtgagatgga 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

gttgagttcg gtcacggatt 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

tcaaagcagg actggaaggc 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gcagcaccaa tcgtgtcatc 20

Claims (12)

1.与禽类脂肪代谢相关的lncRNA，其特征在于，其为LNC_006756，核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.包含权利要求1所述的lncRNA的生物材料，其特征在于，所述生物材料为表达盒、载体、宿主细胞或转基因细胞系。

3.用于扩增权利要求1所述的lncRNA的特异性引物。

4.根据权利要求3所述的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。

5.权利要求1所述的lncRNA、其编码基因在作为禽类脂肪代谢异常的分子标记中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述禽类脂肪代谢异常为禽类脂肪肝。

7.权利要求1所述的lncRNA、其编码基因或用于检测所述lncRNA表达的产品在制备用于检测禽类脂肪代谢异常的产品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述禽类脂肪代谢异常为禽类脂肪肝。

9.权利要求1所述的lncRNA、其编码基因或权利要求2所述的生物材料在筛选禽类脂肪代谢异常的调控靶点中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述禽类脂肪代谢异常为禽类脂肪肝。

11.检测禽类脂肪肝的试剂盒，其特征在于，包含用于检测权利要求1所述的lncRNA的试剂。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括用于检测权利要求1所述的lncRNA的特异性引物，所述特异性引物的序列如SEQ ID NO.3-4所示。

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