CN111138559B - 一种磷酸化莲藕多糖的制备方法及抗氧化剂或抗肿瘤药物 - Google Patents

一种磷酸化莲藕多糖的制备方法及抗氧化剂或抗肿瘤药物 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种磷酸化莲藕多糖的制备方法及抗氧化剂或抗肿瘤药物，涉及高分子多糖技术领域。通过将湿的莲藕粗多糖进行纯化，得中性莲藕多糖洗脱液，然后醇沉，离心收沉淀，即得到纯化莲藕多糖；将纯化莲藕多糖溶解后，加入硫酸钠和磷酸化试剂，得到磷酸化莲藕多糖溶液；再进行透析、醇沉、离心收沉淀，真空干燥，即得到磷酸化莲藕多糖。相对于现有技术的莲藕多糖，本发明制备得到的所述磷酸化莲藕多糖取代度高，且具有比莲藕多糖更好的水溶性，并在抗氧化性上明显提高，由磷酸化莲藕多糖制得的抗氧化剂或抗肿瘤药物具有较好的功效和市场竞争力。

Description

一种磷酸化莲藕多糖的制备方法及抗氧化剂或抗肿瘤药物
技术领域
本发明涉及高分子多糖技术领域，特别涉及一种磷酸化莲藕多糖的制备方法及抗氧化剂或抗肿瘤药物。
背景技术
莲藕属木兰亚纲，山龙野目。藕的营养价值很高，富含铁、钙等微量元素，植物蛋白质、维生素以及淀粉含量也很丰富；莲藕生用性寒，有清热凉血作用，可用来治疗热性病症；通便止泻、健脾开胃；藕含有大量的单宁酸，有收缩血管作用，可用来止血。它的根叶、花须果实，都可滋补入药。莲藕多糖具有抗氧化、免疫调节、降血糖和抗疲劳等功效。
但莲藕多糖的水溶性和抗氧化性较差，从而使莲藕多糖作为抗氧化剂或抗肿瘤药物的市场竞争力较差。
发明内容
本发明的主要目的是提出一种磷酸化莲藕多糖及抗氧化剂、抗肿瘤药物的制备方法，旨在解决莲藕多糖的水溶性和抗氧化性较差的问题。
为实现上述目的，本发明提出一直磷酸化莲藕多糖的制备方法，包括以下步骤：
S10、取湿的莲藕粗多糖溶于水，离心得上清，将上清莲藕多糖溶液进行纯化，得中性莲藕多糖洗脱液，然后醇沉，离心收沉淀，即得到纯化莲藕多糖；
S20、取所述纯化莲藕多糖，加入水进行溶解，在40～60℃下搅拌反应1～3h得到莲藕多糖溶液；
S30、向所述莲藕多糖溶液加入硫酸钠和磷酸化试剂，在50～90℃下搅拌反应3～7h，调节PH至10～12，得到磷酸化莲藕多糖溶液；
S40、将所述磷酸化莲藕多糖溶液进行透析，醇沉，然后离心收多糖沉淀，将所述多糖沉淀真空干燥，得磷酸化莲藕多糖。
可选地，步骤S10中，将上清莲藕多糖溶液进行纯化，得中性莲藕多糖洗脱液的步骤包括：将上清莲藕多糖溶液进行纤维素柱层析，用水对纤维素柱进行洗脱，得中性莲藕多糖洗脱液。
可选地，步骤S10中，所述离心得上清的离心条件为6000～8000r/min，5～10min；
所述离心收沉淀的离心条件为6000～8000r/min，5～10min。
可选地，步骤S10中，醇沉包括：向所述中性莲藕多糖洗脱液中加入体积百分比浓度为95％的乙醇，静置15～24h，其中，所述中性莲藕多糖洗脱液与所述乙醇的体积之比为1:4～6。
可选地，步骤S30中，所述磷酸化试剂包括三聚磷酸钠和三偏磷酸钠的混合试剂。
可选地，步骤S30中，所述硫酸钠、三聚磷酸钠和三偏磷酸钠之间的质量比(5～8):(4～6):2。
可选地，步骤S40中，将所述磷酸化莲藕多糖溶液进行透析包括：将所述磷酸化莲藕多糖溶液置于截留分子量为5000的透析袋中，透析时间为18～24h。
可选地，步骤S40中，所述醇沉包括：向透析之后的所述磷酸化莲藕多糖溶液中加入体积百分比浓度为95％的乙醇，静置15～24h，其中，所述磷酸化莲藕多糖溶液与所述乙醇的体积之比为1:4～6。
可选地，步骤S40中，所述离心收多糖沉淀的离心条件为6000～8000r/min，5～10min；和/或，
步骤S40中，所述真空干燥的干燥温度为30～40℃，干燥时间为10～18h。
此外，本发明还提出一种抗氧化剂或抗肿瘤药物，所述抗氧化剂或抗肿瘤药物包括磷酸化莲藕多糖，所述磷酸化莲藕多糖由如上任一项所述的磷酸化莲藕多糖的制备方法制得。
本发明提供的技术方案中，通过将湿的莲藕粗多糖进行纯化，得中性莲藕多糖洗脱液，然后醇沉，离心收沉淀，即得到纯化莲藕多糖；将纯化莲藕多糖溶解后，加入硫酸钠和磷酸化试剂，得到磷酸化莲藕多糖溶液；再进行透析、醇沉、离心收沉淀，真空干燥，即得到磷酸化莲藕多糖。相对于现有技术的莲藕多糖，本发明制备得到的所述磷酸化莲藕多糖取代度高，且具有比莲藕多糖更好的水溶性，并在抗氧化性上明显提高，由磷酸化莲藕多糖制得的抗氧化剂或抗肿瘤药物具有较好的功效和市场竞争力。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为抗氧化活性测定中实施例1制备的磷酸化莲藕多糖以及现有莲藕多糖对ABTS自由基的清除率变化趋势图；
图2为抗氧化活性测定中实施例1制备的磷酸化莲藕多糖以及现有莲藕多糖对超氧根离子的清除率变化趋势图；
图3为抗氧化活性测定中实施例1制备的磷酸化莲藕多糖以及现有莲藕多糖对Fe2+的清除率变化趋势图。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。
需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
莲藕多糖具有抗氧化、免疫调节、降血糖和抗疲劳等功效，但莲藕多糖的水溶性和抗氧化性较差，从而使莲藕多糖作为抗氧化剂或抗肿瘤药物的市场竞争力较差。鉴于此，本发明提出一种磷酸化莲藕多糖的制备方法，可以制备得到磷酸化莲藕多糖，所述磷酸化莲藕多糖的水溶性和抗氧化性得到明显提高。所述磷酸化莲藕多糖的制备方法包括以下步骤：
S10、取湿的莲藕粗多糖溶于水，离心得上清，将上清莲藕多糖溶液进行纯化，得中性莲藕多糖洗脱液，然后醇沉，离心收沉淀，即得到纯化莲藕多糖。
为了提高所述湿的莲藕粗多糖的水溶性，先对湿的莲藕粗多糖进行纯化。由于粗多糖中，中性莲藕多糖所占比例最高，为80％以上，且中性莲藕多糖水溶性较好，因此，纯化的目的为得到水溶性较好，且杂质少的中性莲藕多糖。将上清莲藕多糖溶液进行纯化，得中性莲藕多糖洗脱液的步骤包括：将上清莲藕多糖溶液进行纤维素柱层析，用水对纤维素柱进行洗脱，得中性莲藕多糖洗脱液。其中，所述纤维素柱用的为DEAE-52纤维素。
为了使去除所述湿的莲藕粗多糖中杂质的效果较好，所述离心收上清的离心条件为6000～8000r/min，5～10min。此外，所述醇沉包括：向所述中性莲藕多糖洗脱液中加入体积百分比浓度为95％的乙醇，静置15～24h，其中，所述中性莲藕多糖洗脱液与所述乙醇的体积之比为1:4～6。由于中性莲藕多糖溶于水，不溶于乙醇，因此，醇沉后离心的沉淀为中性莲藕多糖，此处所述离心收沉淀的离心条件为6000～8000r/min，5～10min。此时，红棕色的莲藕粗多糖经过纯化后变成乳白色的纯化莲藕多糖，水溶性比莲藕粗多糖好。
需要说明的是，莲藕粗多糖可以在市面上购买，也可以自行制备。自行制备时，其制备方法可以如下：向莲藕粉中加入乙醇，回流、抽滤，得脱脂莲藕粉并加水，回流，得多糖提取液；将多糖提取液离心，取上清液浓缩，得浓缩液，向所述浓缩液中加入savage试剂，静置分层，得去蛋白液；将去蛋白液醇沉，得莲藕粗多糖沉淀，即湿的莲藕粗多糖。
S20、取所述纯化莲藕多糖，加入水进行溶解，在40～60℃下搅拌反应1～3h得到莲藕多糖溶液。
S30、向所述莲藕多糖溶液加入硫酸钠和磷酸化试剂，在50～90℃下搅拌反应3～7h，调节PH至10～12，得到磷酸化莲藕多糖溶液。
为了使制备得到的磷酸化莲藕多糖的水溶性效果更好，所述磷酸化试剂包括三聚磷酸钠和三偏磷酸的混合试剂。进一步地，为了避免所述经修饰的千层塔多糖结构被破坏，从而导致副产物增多、反应收率降低的问题。本发明对所述千层塔多糖的碱化程度加以控制，具体地，所述硫酸钠、三聚磷酸钠和三偏磷酸钠之间的质量比(5～8):(4～6):2，即质量比可以为5:5:2、6:4:2、7:6:2、7:5:2等，优选7:5:2。在此范围内，磷酸根含量较高，也就是磷酸化效果较好。在碱性环境下，所述磷酸化试剂可以使莲藕多糖结构磷酸化。需要说明的是，所述磷酸化试剂并不仅限于三聚磷酸钠和三偏磷酸的混合试剂，只要可以使千层塔多糖结构磷酸化的试剂都可以为本发明的磷酸化试剂。
S40、将所述磷酸化莲藕多糖溶液进行透析，醇沉，然后离心收多糖沉淀，将所述多糖沉淀真空干燥，得磷酸化莲藕多糖。
具体地，将所述磷酸化莲藕多糖溶液置于截留分子量为5000的透析袋中，透析时间为18～24h，然后向透析之后的所述磷酸化莲藕多糖溶液中加入体积百分比浓度为95％的乙醇，静置15～24h，其中，所述磷酸化莲藕多糖溶液与所述乙醇的体积之比为1:4～6。离心收多糖沉淀原理如步骤S10，在此不做赘述。最后将所述多糖沉淀进行真空干燥，得磷酸化莲藕多糖，其中，所述真空干燥的干燥温度为30～40℃，干燥时间为10～18h。需要说明的是，上述S40步骤的离心条件、真空干燥的干燥温度和干燥时间的可选方案，可以同时存在，也可以择一存在，具体视实际需要而定。
本发明提供的技术方案中，通过将湿的莲藕粗多糖进行纯化，得中性莲藕多糖洗脱液，然后醇沉，离心收沉淀，即得到纯化莲藕多糖；将纯化莲藕多糖溶解后，加入硫酸钠和磷酸化试剂，得到磷酸化莲藕多糖溶液；再进行透析、醇沉、离心收沉淀，真空干燥，即得到磷酸化莲藕多糖。相对于现有技术的莲藕多糖，本发明制备得到的所述磷酸化莲藕多糖取代度高，且具有比莲藕多糖更好的水溶性，并在抗氧化性上明显提高，由磷酸化莲藕多糖制得的抗氧化剂或抗肿瘤药物具有较好的功效和市场竞争力。
此外，本发明还提出一种抗氧化剂或抗肿瘤药物，所述抗氧化剂或抗肿瘤药物包括磷酸化莲藕多糖，所述磷酸化莲藕多糖由如上任一项所述的磷酸化莲藕多糖的制备方法制得。
磷酸化莲藕多糖溶解性好，且抗氧化活性明显提高，以磷酸化莲藕多糖为活性成分可以制备抗氧化类的药物、保健品。具体地，可以将磷酸化莲藕多糖作为组分之一，与其他活性成分或者辅料混合制成组合物使用；由于磷酸化多糖水溶性好，因此制得的抗肿瘤药物具有较好的功效和市场竞争力。
以下结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作进一步详细说明，应当理解，以下实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
(1)取上述湿的莲藕粗多糖溶于水，在6000r/min的转速下离心10min，收集上清，将上清莲藕多糖溶液进行纤维素柱层析，用水对纤维素柱进行洗脱，得中性莲藕多糖洗脱液，向中性多糖洗脱液中加入体积百分比浓度为95％的乙醇，且乙醇体积为中性多糖洗脱液的4倍，静置24h，然后在6000r/min的转速下离心10min，收集沉淀，即得到纯化莲藕多糖。
(2)向纯化莲藕多糖加水进行溶解，在60℃下搅拌反应1h得到莲藕多糖溶液。
(3)向莲藕多糖溶液加入质量比为7:5:2的硫酸钠、三聚磷酸钠和三偏磷酸钠，在50℃下搅拌反应7h，调节PH至10，得到磷酸化莲藕多糖溶液。
(4)将磷酸化莲藕多糖溶液置于截留分子量为5000的透析袋中，透析时间为24h，然后向透析之后的磷酸化莲藕多糖溶液中加入4倍体积的体积百分比浓度为95％的乙醇，静置24h，然后在6000r/min的转速下离心10min，收集多糖沉淀，将多糖沉淀真空干燥(干燥温度为40℃，干燥时间为10h)，得到磷酸化莲藕多糖。
实施例2
(1)取上述湿的莲藕粗多糖溶于水，在8000r/min的转速下离心5min，收集上清，将上清莲藕多糖溶液进行纤维素柱层析，用水对纤维素柱进行洗脱，得中性莲藕多糖洗脱液，向中性多糖洗脱液中加入体积百分比浓度为95％的乙醇，且乙醇体积为中性多糖洗脱液的5倍，静置18h，然后在8000r/min的转速下离心5min，收集沉淀，即得到纯化莲藕多糖。
(2)向纯化莲藕多糖加水进行溶解，在40℃下搅拌反应3h得到莲藕多糖溶液。
(3)向莲藕多糖溶液加入质量比为5:4:2的硫酸钠、三聚磷酸钠和三偏磷酸钠，在90℃下搅拌反应3h，调节PH至11，得到磷酸化莲藕多糖溶液。
(4)将磷酸化莲藕多糖溶液置于截留分子量为5000的透析袋中，透析时间为18h，然后向透析之后的磷酸化莲藕多糖溶液中加入5倍体积的体积百分比浓度为95％的乙醇，静置18h，然后在8000r/min的转速下离心5min，收集多糖沉淀，将多糖沉淀真空干燥(干燥温度为35℃，干燥时间为15h)，得到磷酸化莲藕多糖。
实施例3
(1)取上述湿的莲藕粗多糖溶于水，在7000r/min的转速下离心8min，收集上清，将上清莲藕多糖溶液进行纤维素柱层析，用水对纤维素柱进行洗脱，得中性莲藕多糖洗脱液，向中性多糖洗脱液中加入体积百分比浓度为95％的乙醇，且乙醇体积为中性多糖洗脱液的6倍，静置15h，然后在7000r/min的转速下离心8min，收集沉淀，即得到纯化莲藕多糖。
(2)向纯化莲藕多糖加水进行溶解，在50℃下搅拌反应2h得到莲藕多糖溶液。
(3)向莲藕多糖溶液加入质量比为8:6:2的硫酸钠、三聚磷酸钠和三偏磷酸钠，在70℃下搅拌反应6h，调节PH至12，得到磷酸化莲藕多糖溶液。
(4)将磷酸化莲藕多糖溶液置于截留分子量为5000的透析袋中，透析时间为20h，然后向透析之后的磷酸化莲藕多糖溶液中加入6倍体积的体积百分比浓度为95％的乙醇，静置15h，然后在7000r/min的转速下离心8min，收集多糖沉淀，将多糖沉淀真空干燥(干燥温度为30℃，干燥时间为18h)，得到磷酸化莲藕多糖。
实施例4
(1)取上述湿的莲藕粗多糖溶于水，在7500r/min的转速下离心7min，收集上清，将上清莲藕多糖溶液进行纤维素柱层析，用水对纤维素柱进行洗脱，得中性莲藕多糖洗脱液，向中性多糖洗脱液中加入体积百分比浓度为95％的乙醇，且乙醇体积为中性多糖洗脱液的5倍，静置20h，然后在7500r/min的转速下离心7min，收集沉淀，即得到纯化莲藕多糖。
(2)向纯化莲藕多糖加水进行溶解，在50℃下搅拌反应2h得到莲藕多糖溶液。
(3)向莲藕多糖溶液加入质量比为6:5:2的硫酸钠、三聚磷酸钠和三偏磷酸钠，在80℃下搅拌反应5h，调节PH至10，得到磷酸化莲藕多糖溶液。
(4)将磷酸化莲藕多糖溶液置于截留分子量为5000的透析袋中，透析时间为22h，然后向透析之后的磷酸化莲藕多糖溶液中加入5倍体积的体积百分比浓度为95％的乙醇，静置20h，然后在7500r/min的转速下离心7min，收集多糖沉淀，将多糖沉淀真空干燥(干燥温度为35℃，干燥时间为15h)，得到磷酸化莲藕多糖。
对比例1
除向莲藕多糖溶液加入质量比为7:3:2的硫酸钠、三聚磷酸钠和三偏磷酸钠外，其余步骤与实施例1相同。
对比例2
除在40℃下搅拌反应2h，调节PH至8，得到磷酸化莲藕多糖溶液外，其余步骤与实施例1相同。
(一)取代度测定
1、将上述实施例与对比例制备的磷酸化莲藕多糖进行如下检测
取实施例1至4以及对比例1和2制备的磷酸化莲藕多糖按如下方法测定取代度：
取10mg的样品于烧杯中，依次加入1mL浓硫酸和浓硝酸，加热至冒烟，待冷却至室温后加入1mL30％的过氧化氢溶液，再缓慢加热，重复以上的步骤直至瓶内不再冒烟，以完全分解有机物，此时溶液呈无色透明或淡黄色。冷却后加入1mL 6mol/L盐酸，并加热使酸彻底分解，转移至50mL的容量瓶中定容。在进行测试时，取5mL置于比色管中，依次加入2.0mL5％钼酸铵溶液，摇匀，静置几秒后，分别加入1.0mL 2％亚硫酸钠溶液和1.0mL 0.5％的对苯二酚溶液，摇匀，加水至刻度，静置30min后，以参比调零，在波长660nm处测定吸光度，以磷酸根标准液(以P计)质量浓度为横坐标、相对应吸光度为纵坐标作标准曲线，得出标准曲线方程。
按下列公式进行计算，记录结果如表1所示。
建立标准曲线方程为：
y＝0.0004x+0.0001，R2＝0.9997
其中y为吸光度、x为磷酸根标准液质量浓度
表1磷酸化莲藕多糖实施例及对比例取代度对比
检测项目 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 对比例1 对比例2
取代度/％ 9.68 8.44 8.34 8.97 6.62 6.95
从表1可知，各实施例制得的磷酸化莲藕多糖的磷酸化取代度普遍在8％以上，而对比例1中，在硫酸钠、三聚磷酸钠和三偏磷酸钠的质量比不在本发明的范围内时，相同的条件得到的磷酸化莲藕多糖的取代度仅为6.62，说明本发明提出的制备方法制得的磷酸化莲藕多糖在磷酸化取代度上有显著优势。同时，对比例2中磷酸化莲藕多糖中的磷酸化取代度也低于所有实施例，也说明了对各参数优化后的本发明制备方法制得的磷酸化莲藕多糖具有更高的磷酸化取代度。
(二)抗氧化活性测定
(1)分别取实施例1制备的磷酸化莲藕多糖以及现有的莲藕多糖(即步骤S10中未经处理的莲藕粗多糖原料)按如下方法测定其对ABTS自由基的清除性能
取浓度为1mg/mL，2mg/mL，4mg/mL，8mg/mL的莲藕多糖(LP)、磷酸化莲藕多糖(PLP)各400μL至试管中，每支试管中分别加入ABTS+储备液1600μL，摇匀，在室温条件下反应10min，得到4组样品，分别将样品在734nm测定吸光度，记为A1。以蒸馏水作空白对照。按下列公式计算清除率并绘制清除率变化图如图1所示。
清除率＝[1－(A1－A2)/A0]×100％。
式中A0为对照组的吸光度；A1为样品吸光度；A2为样品的本底吸光度值(蒸馏水替代ABTS+储备液)。
(2)分别取实施例1制备的磷酸化莲藕多糖以及现有的莲藕多糖(即步骤S10中未经处理的莲藕粗多糖原料)按如下方法测定其对超氧根离子清除性能
取浓度为1mg/mL，2mg/mL，4mg/mL，8mg/mL莲藕多糖(LP)、磷酸化莲藕多糖(PLP)各300μL至试管中，每支试管中分别加入Tirs-盐酸缓冲液900μL，邻苯三酚900μL，10mol/L浓盐酸300μL，摇匀，在室温条件下反应20min，得到4组样品，分别将样品在420nm测定吸光度，记为A1。以蒸馏水作空白对照。按下列公式计算清除率并绘制清除率变化图如图2所示。
清除率＝[1－(A1－A2)/A0]×100％。
式中A0为对照组的吸光度；A1为样品吸光度；A2为样品的本底吸光度值(蒸馏水替代Tirs-盐酸缓冲液900μL，邻苯三酚90μL，10mol/L浓盐酸300μL)。
(3)分别取实施例1制备的磷酸化莲藕多糖以及现有的莲藕多糖(即步骤S10中未经处理的莲藕粗多糖原料)按如下方法测定其对Fe2+的清除性能
取浓度为1mg/mL，2mg/mL，4mg/mL，8mg/mL莲藕多糖(LP)、磷酸化莲藕多糖(PLP)溶液各400μL至试管中，每支试管中分别加入40μL的5mmol/L的氯化亚铁溶液，80μL的菲啰嗪溶液，1080μL的蒸馏水，摇匀，得到4组样品，分别将样品在562nm处测吸光度，记为A1。以蒸馏水作空白对照。按下列公式计算清除率并绘制清除率变化图如图3所示。
清除率＝[1－(A1－A2)/A0]×100％。
式中A0为对照组的吸光度；A1为样品吸光度；A2为样品的本底吸光度值(蒸馏水替代氯化亚铁)。
从图1可以看出，本发明制备的磷酸化莲藕多糖比现有莲藕多糖对ABTS自由基的清除能力好；从图2可以看出，整体而言，本发明制备的莲藕多糖比莲藕多糖对超氧根离子的清除占优势；从图3可以看出，本发明制备的磷酸化莲藕多糖比莲藕多糖对Fe2+的清除占显著优势。因此，本发明制备的磷酸化莲藕多糖相对于莲藕多糖而言，对ABTS自由基、超氧根离子以及Fe2+的清除作用均更好，即可说明本发明制备得到的磷酸化莲藕多糖比莲藕多糖具有更好的抗氧化活性。
综上所述，以本发明的参数范围内制备的磷酸化莲藕多糖的磷酸化取代度较高；且本发明实施例制备的磷酸化莲藕多糖具有比现有的莲藕多糖更好的抗氧化活性，可以有效清除ABTS自由基、超氧根离子以及Fe2+，能够广泛用于制备具有抗氧化功效和增强免疫活性的产品中；且本发明制备的磷酸化莲藕多糖的水溶性较好，因此，由磷酸化莲藕多糖制得的抗氧化剂或抗肿瘤药物具有较好的功效和市场竞争力。
以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (4)

1.一种磷酸化莲藕多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S10、取湿的莲藕粗多糖溶于水，离心得上清莲藕多糖溶液，将所述上清莲藕多糖溶液进行纤维素柱层析，用水对纤维素柱进行洗脱，得中性莲藕多糖洗脱液，然后向所述中性莲藕多糖洗脱液中加入体积百分比浓度为95%的乙醇，静置15~24h，离心收沉淀，即得到纯化莲藕多糖，其中，所述中性莲藕多糖洗脱液与所述乙醇的体积之比为1:4~6；
S20、取所述纯化莲藕多糖，加入水进行溶解，在40~60℃下搅拌反应1~3h得到莲藕多糖溶液；
S30、向所述莲藕多糖溶液加入硫酸钠和磷酸化试剂，在50~90℃下搅拌反应3~7h，调节pH至10~12，得到磷酸化莲藕多糖溶液；
S40、将所述磷酸化莲藕多糖溶液置于截留分子量为5000的透析袋中，透析18~24h，向透析之后的磷酸化莲藕多糖溶液中加入体积百分比浓度为95%的乙醇，静置15~24h，然后离心收多糖沉淀，将所述多糖沉淀真空干燥，得磷酸化莲藕多糖，其中，所述透析之后的磷酸化莲藕多糖溶液与所述乙醇的体积之比为1:4~6；
其中，所述磷酸化试剂包括三聚磷酸钠和三偏磷酸钠，且所述硫酸钠、三聚磷酸钠和三偏磷酸钠之间的质量比（5~8）:（4~6）:2。
2.如权利要求1所述的磷酸化莲藕多糖的制备方法，其特征在于，步骤S10中，所述离心得上清莲藕多糖溶液的离心条件为6000~8000r/min，5~10min；
所述离心收沉淀的离心条件为6000~8000r/min，5~10min。
3.如权利要求1所述的磷酸化莲藕多糖的制备方法，其特征在于，步骤S40中，所述离心收多糖沉淀的离心条件为6000~8000r/min，5~10min；和/或，
步骤S40中，所述真空干燥的干燥温度为30~40℃，干燥时间为10~18h。
4.一种磷酸化莲藕多糖在制备抗氧化药物中的应用，其特征在于，所述磷酸化莲藕多糖由如权利要求1至3任一项所述的磷酸化莲藕多糖的制备方法制得。
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