CN111122724A - 阿卡波糖及有关物质的分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种阿卡波糖及有关物质的分析方法，该分析方法包括如下步骤：配制阿卡波糖供试品溶液；将阿卡波糖供试品溶液注入液相色谱中进行分析；其中，液相色谱的条件包括：流动相包括水相，水相中含有浓度为0.2mg/mL～0.9mg/mL的焦磷酸盐。本发明的阿卡波糖及有关物质的分析方法，在流动相中引入适量焦磷酸盐，由于焦磷酸盐与铜、铁、锰以及碱土金属等金属离子络合能力强，使得分析过程中存在的金属离子被焦磷酸盐络合，从而有效减少金属离子对色谱柱填料及阿卡波糖的影响，阿卡波糖主峰的拖尾明显减小，改善了阿卡波糖的峰的对称性，提高了阿卡波糖与杂质I的分离度，并提高了柱效。

Description

阿卡波糖及有关物质的分析方法

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，特别是涉及一种阿卡波糖及有关物质的分析方法。

背景技术

阿卡波糖(Acarbose)的分子式为C₂₅H₄₃NO₁₈，分子量为645.63，其结构式如下：

阿卡波糖是一种α-葡萄糖苷酶抑制剂，是复杂的低聚糖，结构类似寡糖，这种非寡糖的“假寡糖”可在小肠上部细胞刷状缘处和寡糖竞争而与α-葡萄糖苷酶可逆地结合，抑制各种α-葡萄糖苷酶如麦芽糖酶、异麦芽糖酶、葡萄糖淀粉酶及蔗糖酶的活性，使淀粉分解成寡糖如麦芽糖(双糖)、麦芽三糖及糊精(低聚糖)进而分解成葡萄糖的速度减慢，使蔗糖分解成葡萄糖和果糖的速度减慢，因此造成肠道葡萄糖的吸收减缓，从而缓解餐后高血糖，达到降低血糖的作用。长期服用，可降低空腹血糖和糖化血红蛋白的浓度。

有关物质的检测是控制药物质量的关键指标，是指在原料药生产中带入的起始物料、试剂、中间体、副产物和异构体等物质，也可能是制剂在生产、储藏和运输过程中产生的降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。经研究发现阿卡波糖原料药及其制剂中主要含有4种已知杂质，分别为结构式如下所示的杂质I～杂质IV：

根据文献报道及国家药品标准，阿卡波糖及有关物质的分析方法有美国药典方法USP39，欧洲药典方法EP8.5以及中国药典2015版中收载的阿卡波糖含量方法高效液相色谱法。这三个高效液相分析的药典方法非常相似，以中国药典2015版为例：色谱柱为氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾600mg与无水磷酸氢二钠279mg，加水溶解并稀释至1000mL)-乙腈(25:75)为流动相；流速为每分钟2.0mL；检测波长为210nm；柱温35℃。取阿卡波糖约200mg，置10mL量瓶中，加少量水使溶解，加0.1mol/L氢氧化钠溶液1mL，混匀，室温放置1小时，加0.1mol/L盐酸溶液1mL，用水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液，取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，杂质I峰相对阿卡波糖峰的保留时间约为0.9，杂质I的峰高(Hp，从基线至杂质I峰的最高点)与杂质I和阿卡波糖两峰之间的峰谷(Hv，从基线至两峰之间的最低点)之比(Hp/Hv)不得低于2.0；理论板数按阿卡波糖峰计算不得低于2000。然而在用标准方法分析阿卡波糖的过程中，阿卡波糖主峰拖尾严重，影响其与关键杂质之间的有效分离，无法达到对阿卡波糖及杂质准确、有效的检测和监控。

发明内容

基于此，有必要针对传统的分析方法无法将阿卡波糖与杂质有效分离的问题，提供一种阿卡波糖及有关物质的分析方法。

一种阿卡波糖及有关物质的分析方法，包括如下步骤：

配制阿卡波糖供试品溶液；

将所述阿卡波糖供试品溶液注入液相色谱中进行分析；

其中，液相色谱的条件包括：流动相包括水相，所述水相中含有浓度为0.2mg/mL～0.9mg/mL的焦磷酸盐。

本发明对阿卡波糖及有关物质的检测进行了系统的研究并发现：现有技术中在通过液相色谱分析阿卡波糖时，色谱柱填料的氨基官能团会受到流动相、液相色谱仪、金属柱管及筛板中渗出的微量金属离子的影响；同时阿卡波糖的氨基官能团与金属离子也具有较强的相互作用。因此，上述两个因素均会造成阿卡波糖的峰拖尾，影响到阿卡波糖与关键杂质的有效分离，进而影响对阿卡波糖及有关物质的分析结果。

基于如上发现，本发明的阿卡波糖及有关物质的分析方法，在流动相中引入焦磷酸盐，由于焦磷酸盐与铜、铁、锰以及碱土金属等金属离子络合能力强，使得分析过程中存在的金属离子被焦磷酸盐络合，从而有效减少金属离子对色谱柱填料及阿卡波糖的影响，使阿卡波糖主峰的拖尾明显减小，改善了阿卡波糖的峰的对称性，并且提高了阿卡波糖与杂质I的分离度，并提高了柱效，达到了对阿卡波糖及有关物质的准确、有效的检测和监控。

在其中一个实施例中，所述水相中焦磷酸盐的浓度为0.4mg/mL～0.8mg/mL。

在其中一个实施例中，所述焦磷酸盐选自焦磷酸钠、焦磷酸钾和焦磷酸铵中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述水相中还含有浓度为0.2mg/mL～0.5mg/mL的磷酸氢二盐和浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢盐。

在其中一个实施例中，所述水相中还含有浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢盐。

在其中一个实施例中，所述液相色谱的条件还包括：流动相包括所述水相与乙腈；所述水相与乙腈的体积比为(2～3):(7～8)；采用等度洗脱，流速为1mL/min～2mL/min；色谱柱的填料为氨基键合硅胶；柱温为30℃～40℃；采用紫外检测器进行检测，检测波长为210nm～250nm。

在其中一个实施例中，所述填料的粒径为3μm～10μm，所述色谱柱的柱长为100mm～300mm，所述色谱柱的内径为2mm～10mm。

在其中一个实施例中，所述阿卡波糖供试品溶液为阿卡波糖样品的水溶液，所述阿卡波糖样品的水溶液中阿卡波糖原料药的浓度为10mg/mL～30mg/mL，进样量为5μL～20μL。

在其中一个实施例中，所述阿卡波糖样品为阿卡波糖原料药或包含阿卡波糖原料药的制剂。

在其中一个实施例中，所述有关物质为杂质I～杂质IV：

附图说明

图1为实施例3分析得到的阿卡波糖及有关物质的液相色谱图；

图2为对比例1分析得到的阿卡波糖及有关物质的液相色谱图；

图1和图2中的横坐标的单位为min，纵坐标的单位为mV。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

有关物质是指在原料药生产中带入的起始物料、试剂、中间体、副产物和异构体等物质，也可能是制剂在生产、储藏和运输过程中产生的降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。它们的存在严重影响了人们用药的安全和身体健康，甚至会引发影响长远的要害事件，因此，系统研究药物中存在的杂质尤其是有关物质，并严格控制其含量，在新药研发、药品评价工作中极为重要。

阿卡波糖的有关物质主要为杂质I～杂质IV，其与阿卡波糖的结构十分相似，其极性也很接近，通过液相色谱很难将其分离，因此，将其与阿卡波糖有效分离对阿卡波糖纯度的测定极为重要。

本发明提供一实施方式的阿卡波糖及有关物质的分析方法，包括如下步骤：

S10、配制阿卡波糖供试品溶液；

S20、将阿卡波糖供试品溶液注入液相色谱中进行分析；

其中，液相色谱的条件包括：流动相包括水相，水相中含有浓度为0.2mg/mL～0.9mg/mL的焦磷酸盐。

本发明的阿卡波糖及有关物质的分析方法，在流动相中引入适量焦磷酸盐，由于焦磷酸盐与铜、铁、锰以及碱土金属等金属离子络合能力强，使得分析过程中存在的金属离子被焦磷酸盐络合，从而有效减少金属离子对色谱柱填料及阿卡波糖的影响，使阿卡波糖主峰的拖尾明显减小，改善了阿卡波糖的峰的对称性，并且提高了阿卡波糖与杂质I的分离度，并提高了柱效，达到了对阿卡波糖及有关物质的准确、有效的检测和监控。

优选地，水相中焦磷酸盐的浓度为0.4mg/mL～0.8mg/mL。进一步地，水相中焦磷酸盐的浓度为0.4mg/mL、0.416mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.624mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL。

更优选地，水相中焦磷酸盐的浓度为0.416mg/mL或者0.624mg/mL。

在一实施例中，焦磷酸盐选自焦磷酸钠、焦磷酸钾和焦磷酸铵中的至少一种。

优选地，焦磷酸盐为焦磷酸钠。焦磷酸钠(sodium pyrophosphate)，分子式Na₄P₂O₇，相对分子质量265.90。又称二磷酸四钠，有无水物与十水物之分。十水物为无色或白色结晶或结晶性粉末，无水物为白色粉末，溶于水，不溶于乙醇和其他有机溶剂。与铜、铁、锰以及碱土金属等金属离子络合能力强。其1％的水溶液的pH值为10.0-10.2。在本发明中，焦磷酸钠采用其无水物或其十水物均可。

在一实施例中，水相中还含有浓度为0.2mg/mL～0.5mg/mL的磷酸氢二盐和浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL磷酸二氢盐。

可以理解的，水相中含有浓度为0.2mg/mL～0.9mg/mL的焦磷酸盐、浓度为0.2mg/mL～0.5mg/mL的磷酸氢二盐和浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢盐。

在本发明中，磷酸氢二盐包括但不限于磷酸氢二钠、磷酸氢二钾和磷酸氢二铵；磷酸二氢盐包括但不限于磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和磷酸二氢铵。

优选地，水相为含有浓度为0.2mg/mL～0.9mg/mL的焦磷酸钠、浓度为0.2mg/mL～0.5mg/mL的磷酸氢二盐和浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢盐的水溶液。更优选地，水相为含有浓度为0.2mg/mL～0.9mg/mL的焦磷酸钠、浓度为0.2mg/mL～0.5mg/mL的磷酸氢二钠和浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢钾的水溶液。

在一实施例中，水相中还含有浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢盐。可以理解的，水相中含有浓度为0.2mg/mL～0.9mg/mL的焦磷酸盐和浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢盐。

优选地，水相为含有浓度为0.2mg/mL～0.9mg/mL的焦磷酸钠和浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢盐的水溶液。更优选地，水相为含有浓度为0.2mg/mL～0.9mg/mL的焦磷酸钠和浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢钾的水溶液。

在一实施例中，液相色谱的条件还包括：流动相包括上述水相与乙腈；上述水相与乙腈的体积比为(2～3):(7～8)；采用等度洗脱，流速为1mL/min～2mL/min；色谱柱的填料为氨基键合硅胶；柱温为30℃～40℃；采用紫外检测器进行检测，检测波长为210nm～250nm。

进一步地，水相与乙腈的体积比可以为2.2:7.8、2.6:7.4或2.8:7.2。优选地，水相与乙腈的体积比为2.5:7.5。

进一步地，流速可以为1.2mL/min、1.3mL/min、1.4mL/min、1.6mL/min或1.8mL/min。优选地，流速为2mL/min。

可以理解的，线性流速为6.0cm/min～12.0cm/min(以4.6mm规格的色谱柱内径换算，当流速为1mL/min时，线性流速为6.0cm/min)。

进一步地，柱温可以为31℃、32℃、33℃、35℃、36℃或38℃。优选地，柱温为35℃。检测波长为210nm、220nm、230nm或240nm。优选地，检测波长为210nm。

在一实施例中，填料的粒径为3μm～10μm，色谱柱的柱长为100mm～300mm，色谱柱的内径为2mm～10mm。

优选地，填料的粒径为5μm，色谱柱的柱长为250mm，色谱柱的内径为4.6mm。

在一实施例中，阿卡波糖供试品溶液为阿卡波糖样品水溶液，阿卡波糖样品水溶液中阿卡波糖原料药的浓度为10mg/mL～30mg/mL，进样量为5μL～20μL，如可以为5μL、7μL、10μL、12μL、14μL、15μL、16μL、18μL。优选地，进样量为10μL。

在一实施例中，阿卡波糖样品为阿卡波糖原料药或包含阿卡波糖原料药的制剂。其中，制剂为片剂、胶囊、口服液等。

在一实施例中，阿卡波糖样品水溶液的制备步骤为：取阿卡波糖原料药10mg～30mg，加去离子水1mL溶解并定量，作为供试品溶液。

本发明的分析方法可直接采用阿卡波糖样品配制的供试品溶液，相对于现有的药典法省去了将阿卡波糖样品先碱化后中和的步骤。

且本发明的分析方法还适用于在USP，EP和ChP等标准方法流动相中的引入适量的焦磷酸盐，以改善分析物的峰形和分离度。

以下为具体实施例

实施例1

色谱条件：

色谱柱：ChromCore NH₂-Acarbose,5μm(4.6×250mm)

流动相：乙腈与水相的体积比为75:25，水相：600mg磷酸二氢钾、279mg磷酸氢二钠和208mg焦磷酸钠溶于1000mL水中配制而成；

柱温：35℃

流速：2mL/min

进样量：10μL

检测器：紫外检测器

检测波长：210nm

供试品溶液的制备：取阿卡波糖原料药20mg，加去离子水1mL溶解并定量；

按照上述色谱条件，精确量取供试溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例2

与实施例1基本相同，区别在于，焦磷酸钠为416mg。

实施例3

与实施例1基本相同，区别在于，焦磷酸钠为624mg，分析得到的色谱图如图1所示。

实施例4

与实施例1基本相同，区别在于，焦磷酸钠为832mg。

对比例1

与实施例1基本相同，区别在于，焦磷酸钠为1040mg。

中国药典法2015版

与实施例1基本相同，区别在于，未加入焦磷酸钠，分析得到的色谱图如图2所示。

实施例1～4、对比例1及药典法分析得到的色谱峰处理结果如表1所示。

表1

从图1的色谱峰可以明显的看出，在流动相中引入焦磷酸钠后，阿卡波糖主峰的拖尾明显减小，且峰形更加对称。从图2的色谱峰看出，流动相中未引入焦磷酸钠，阿卡波糖主峰拖尾严重。

从表1结果看出，在流动相中引入焦磷酸钠后，各杂质相对于药典方法测试下的选择性均未改变，阿卡波糖主峰的拖尾明显减小，在焦磷酸钠加入400mg以上后，主峰的不对称因子(As)被控制在2.0以内。另一方面，随着焦磷酸钠浓度的提升，主峰与前杂(杂质I)的分离度显著改善且优于药典法分析的分离度；主峰与后杂(杂质III)的分离度有所减小，在加入量为832mg时，分离度仍可达到基线分离(分离度大于2.0)；在加入量为1040mg时，杂质I和III与主峰的分离效果不佳；药典法的流动相中未引入焦磷酸钠，阿卡波糖主峰拖尾严重，影响到与杂质I之间的分离度。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种阿卡波糖及有关物质的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

配制阿卡波糖供试品溶液；

将所述阿卡波糖供试品溶液注入液相色谱中进行分析；

其中，所述液相色谱的条件包括：流动相包括水相，所述水相中含有浓度为0.2mg/mL～0.9mg/mL的焦磷酸盐。

2.根据权利要求1所述的阿卡波糖及有关物质的分析方法，其特征在于，所述水相中焦磷酸盐的浓度为0.4mg/mL～0.8mg/mL。

3.根据权利要求1所述的阿卡波糖及有关物质的分析方法，其特征在于，所述焦磷酸盐选自焦磷酸钠、焦磷酸钾和焦磷酸铵中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的阿卡波糖及有关物质的分析方法，其特征在于，所述水相中还含有浓度为0.2mg/mL～0.5mg/mL的磷酸氢二盐和浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢盐。

5.根据权利要求1所述的阿卡波糖及有关物质的分析方法，其特征在于，所述水相中还含有浓度为0.4mg/mL～0.7mg/mL的磷酸二氢盐。

6.根据权利要求1所述的阿卡波糖及有关物质的分析方法，其特征在于，所述液相色谱的条件还包括：流动相包括所述水相与乙腈；所述水相与乙腈的体积比为(2～3):(7～8)；采用等度洗脱，流速为1mL/min～2mL/min；色谱柱的填料为氨基键合硅胶；柱温为30℃～40℃；采用紫外检测器进行检测，检测波长为210nm～250nm。

7.根据权利要求6所述的阿卡波糖及有关物质的分析方法，其特征在于，所述填料的粒径为3μm～10μm，所述色谱柱的柱长为100mm～300mm，所述色谱柱的内径为2mm～10mm。

8.根据权利要求1所述的阿卡波糖及有关物质的分析方法，其特征在于，所述阿卡波糖供试品溶液为阿卡波糖样品的水溶液，所述阿卡波糖样品的水溶液中阿卡波糖原料药的浓度为10mg/mL～30mg/mL，进样量为5μL～20μL。

9.根据权利要求8所述的阿卡波糖及有关物质的分析方法，其特征在于，所述阿卡波糖样品为阿卡波糖原料药或包含阿卡波糖原料药的制剂。

10.根据权利要求1～9任一项所述的阿卡波糖及有关物质的分析方法，其特征在于，所述有关物质为杂质I～杂质IV：

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