CN111057762A - 检测基因在制备检测食管鳞癌对顺铂敏感性的制剂中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种检测基因在制备检测食管鳞癌细胞对顺铂敏感性的制剂中的用途，所述制剂用于对从生物体中分离的试样进行检测，所述检测基因为TLR9(蛋白/核酸)和PU.1(蛋白/核酸)或IRF1(蛋白/核酸)和miR‑574‑5p(核酸)；所述式样为组织试样。所述制剂，通过TLR9含量的高低可以预测食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性。随着TLR9含量的增加，肿瘤细胞对于顺铂的敏感性降低。结合PU.1和IRF1/miR‑574‑5p，可以更加准确的评估TLR9含量与顺铂敏感性的关系，能够预测食管鳞癌细胞对于顺铂的效果。

Description

检测基因在制备检测食管鳞癌对顺铂敏感性的制剂中的用途
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种检测基因在制备检测食管鳞癌对顺铂敏感性的制剂中的用途。
背景技术
食管癌是一类高度侵袭性的肿瘤，在世界范围内是发病率第八高、死亡率第六高的肿瘤(1)。根据病理特征食管癌可以分为两类：食管腺癌(esophageal adenocarcinoma-ECA)和食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma-ESCC)(2)。顺铂(Cisplatin)是治疗ESCC的临床一线化疗药(3)，但很多肿瘤细胞对顺铂耐受，其中的机制并不明确，因此目前尚没有分子标记物可以用来预测顺铂治疗的适用性以及检验顺铂处理的有效性。Toll-like receptor(TLR)属于I型膜蛋白，主要负责识别病源相关的物质，包括蛋白与核酸(4).目前为止，共有10个TLR蛋白被鉴定出来，分别是TLR1～10。其中， TLR9是唯一识别DNA片段中低甲基化CpG寡脱氧核苷酸的TLR蛋白。虽然有报道显示TLR9在一些肿瘤中呈现高表达，但其中的临床意义并不明确。
发明内容
本发明的目的是针对上述不足，提供一种检测基因在制备检测食管鳞癌对顺铂敏感性的制剂中的用途。所述制剂，通过TLR9含量的高低可以预测肿瘤细胞对顺铂的敏感性。随着TLR9含量的增加，肿瘤细胞对于顺铂的敏感性降低。结合PU.1和IRF1/miR-574-5p，可以更加准确的评估TLR9含量与顺铂敏感性的关系，能够预测食鳞管癌细胞对于顺铂的效果。
本发明的技术方案是，
检测基因在制备检测食管鳞癌对顺铂敏感性的制剂中的用途，所述制剂用于对从生物体中分离的试样进行检测，
所述检测基因为TLR9(蛋白或核酸)和PU.1(蛋白或核酸)或IRF1(蛋白或核酸)和miR-574-5p(核酸)；
所述试样为组织试样。
所述组织试样为人类的组织试样。
当TLR9和PU.1在肿瘤组织试样中的表达量高于在肿瘤周边组织试样中的表达量，而IRF1和miR-574-5p在肿瘤组织试样中的表达量低于来自肿瘤周边组织试样中的表达量时，则检测为对顺铂耐受(表达量的高低可以根据相同实验条件下免疫组化染色的深浅来判断，染色越深则表达量越高。)。
当TLR9和PU.1在肿瘤组织试样中的表达量高于在肿瘤周边组织试样中的表达量，而IRF1和miR-574-5p在肿瘤组织试样中的表达量高于在肿瘤周边组织试样中的表达量时，则检测为对顺铂敏感。
上TLR9和PU.1在肿瘤组织试样中的表达量低于在肿瘤周边组织试样中的表达量，而IRF1和miR-574-5p在肿瘤组织试样中表达量高于在肿瘤周边组织试样中的表达量时，则检测为对顺铂高敏感。
当TLR9和PU.1在肿瘤组织试样中的表达量低于在肿瘤周边组织试样中的表达量，而IRF1和miR-574-5p在肿瘤组织试样中的表达量低于在肿瘤周边组织试样中的表达量时，则检测为对顺铂敏感。
TLR9和PU.1在肿瘤组织试样中的表达量高于在肿瘤周边组织试样中的表达量，而IRF1和miR-574-5p在肿瘤组织试样中的表达量低于来自肿瘤周边组织试样中的表达量时，则检测为对顺铂耐受。
高PU.1结合TLR9可以预示肿瘤对于顺铂更加耐受，经顺铂处理后，高表达IRF1和miR-574-5p结合低表达TLR9可以预示肿瘤对于顺铂处理的反应性较好。
由于TLR9高表达能够激活上皮-间质转化(Epithelial-MesenchymalTransition，EMT)，该通路被认为是耐药的重要机制。申请人通过实验验证TLR9 在食管癌中高表达，高表达TLR9的ESCC患者生存时间显著缩短，而且高表达 TLR9的细胞更加耐受顺铂的处理。申请人的实验说明，TLR9在ESCC细胞中的表达受PU.1的调控，PU.1和TLR9在ESCC中的表达显著正相关，同样预示较差的预后。经顺铂处理后，会诱导IRF1的表达，IRF1进而会促进miR574-5p的表达，miR-574-5p可以靶向TLR9的mRNA，从而导致TLR9的降低，促进顺铂杀死肿瘤细胞。申请人用顺铂和顺铂结合羟基氯喹(TLR9的抑制剂)分别处理实验小鼠，其检测结果显示羟基氯喹结合顺铂可以比顺铂单独使用更加有效的促进小鼠的生存。
对于肿瘤患者而言，正确使用包括顺铂在内的化疗药物对于控制肿瘤的发展具有十分重要的意义。如果顺铂的使用剂量过低，不但不会起到抑制肿瘤的作用，而且会造成肿瘤的耐药，不利于后续治疗。如果顺铂的使用量过高，又会对患者的身体造成较大的伤害。目前，临床上对于顺铂的使用主要按照患者的体重给药，并未考虑患者本身所的肿瘤的特点，也缺乏能够预测肿瘤对于顺铂敏感性的指标。申请人的研究发现了TLR9含量的高低可以成为预测患者肿瘤细胞对于顺铂的敏感性的指标。随着TLR9含量的增加，肿瘤细胞对于顺铂的敏感性降低。结合PU.1和IRF1/miR-574-5p，可以更加准确的评估TLR9含量与顺铂敏感型的关系。
附图说明
图1为TLR9在食管癌中的表达；其中，图1A为TLR9蛋白在肿瘤组织中的表达量比对应的非肿瘤组织显著升高；图1B为TLR9 mRNA在肿瘤组织中的表达量比对应的非肿瘤组织显著升高；图1C为高表达TLR9的患者比低表达TLR9的患者生存时间更短；图1D为TCGA数据库中的食管鳞癌数据分析显示高表达 TLR9的患者比低表达TLR9的患者生存时间更短；图1E为动物实验显示高表达 TLR9的荷瘤小鼠比低表达TLR9的荷瘤小鼠生存时间更短；
图2为TLR9在两种食管鳞癌细胞中的过表达；其中，图2A为文氏图显示两株高表达TLR9的细胞都引起了EMT信号通路的富集；图2B为基因富集分析显示EC109食管鳞癌细胞株中，高表达TLR9与EMT信号通路正相关；图2C为基因富集分析显示KYSE150食管鳞癌细胞株中，高表达TLR9与EMT信号通路正相关；图2D为文氏图显示两株高表达TLR9的细胞中变化方向一致的蛋白集合；图2E为被TLR9上调的蛋白的聚类与相互作用网络；图2F为被TLR9下调的蛋白的聚类与相互作用网络；
图3为PU.1调控TLR9的表达；其中，图3A为PU.1敲低抑制TLR9 mRNA 的表达；图3B为PU.1敲低抑制TLR9蛋白的表达；图3C为TCGA数据库中的食管鳞癌数据分析显示高表达PU.1的患者比低表达PU.1的患者生存时间更短；图3D为TCGA数据库中的食管鳞癌数据分析显示PU.1和TLR9表达显著正相关；
图4为顺铂治疗食管鳞癌细胞的效果与TLR9关系；其中，图4A为不同浓度的顺铂降低了TLR9 mRNA的表达，但并未改变PU.1mRNA；图4B为不同浓度的顺铂降低了TLR9蛋白的表达，但并未改变PU.1蛋白；图4C为高表达TLR9 的细胞对于顺铂更加耐受；图4D为联合使用TLR9抑制剂(HCQ)与顺铂(CP) 更好的抑制小鼠体内的肿瘤，延长荷瘤小鼠的生存；
图5为miR-574-5p靶向TLR9 mRNA抑制TLR9的表达；其中，图5A为多个 microRNA数据库联合分析揭示miR-574-5p是特异性最强的靶向TLR9 mRNA的 miRNA；图5B为miR-574-5p在食管癌组织中低表达；图5C为miR-574-5p在食管癌组织中随级别升高而降低；图5D为荧光素酶反应证明miR-574-5p可以靶向TLR9 mRNA的3’UTR区，从而抑制TLR9 mRNA的表达；图5E为miR-574-5p 类似物处理食管癌细胞导致TLR9蛋白的下降；
图6为顺铂通过IRF1促进miR-574-5p的表达，其中，图6A.顺铂处理食管鳞癌细胞诱导miR-574-5p表达；图6B为顺铂处理食管鳞癌细胞诱导IRF1表达；图6C为IRF1增强miR-574启动子活性，从而促进miR-574-5p表达；图6D 为模式图显示PU.1可以促进TLR9的表达对抗顺铂的作用，而顺铂可以通过诱导IRF1/miR-574-5p信号轴抑制TLR9的表达；TLR9通过调控线粒体功能和EMT 来促进食管鳞癌细胞的顺铂耐受和肿瘤进展。
具体实施方式
本发明的实验方法采用酶联免疫吸附测定(ELISA)、聚合酶链式反应(PCR)、蛋白印迹(Western Blotting)、原位杂交(In Situ Hybridization)、免疫组化(Immunohistochemistry)以及其他对核酸和蛋白水平的检测方法。
酶联免疫吸附测定(ELISA)：利用食管鳞癌的肿瘤组织以及相匹配的肿瘤周边正常食管组织的匀浆液分别提取蛋白，利用包被TLR9抗体、PU.1抗体、IRF1 抗体的培养板，与蛋白提取液孵育，再利用标准的ELISA方法进行检测上述蛋白的含量。
聚合酶链式反应(PCR)：利用食管鳞癌的肿瘤组织以及相匹配的肿瘤周边正常食管组织的匀浆液提取mRNA，进行反转录获得cDNA作为PCR的模板。通过标准PCR实验方法检测TLR9、PU.1、IRF1、miR-574-5p，并经过实时定量PCR 仪进行数据采集与分析，获得患者样本内相应基因的mRNA表达量。
蛋白印迹(Western Blotting)：利用食管鳞癌的肿瘤组织以及相匹配的肿瘤周边正常食管组织的匀浆液提取蛋白，进行SDS-PAGE胶分离，并用TLR9抗体、PU.1抗体、IRF1抗体进行标准Western实验，进行上述蛋白的检测。
原位杂交(In Situ Hybridization)：对食管鳞癌的肿瘤组织以及相匹配的肿瘤周边正常食管组织进行切片处理，并分别合成针对TLR9、PU.1、IRF1、 miR-574-5p核酸序列的探针，进行原位杂交实验，检测肿瘤样本及相关周边非肿瘤组织中上述基因的核酸含量。
免疫组化(Immunohistochemistry)：对食管鳞癌的肿瘤组织以及相匹配的肿瘤周边正常食管组织进行切片处理，并用TLR9抗体、PU.1抗体、IRF1抗体进行标准免疫组化实验，检测肿瘤样本及相关周边非肿瘤组织中上述基因的蛋白含量。
实施例1 TLR9在食管癌中的表达(参见图1)
采用标准免疫组化方法。收集福尔马林(37％甲醛水溶液)固定、石蜡包埋的食管鳞癌标本的4mm切片，进行脱蜡(二甲苯浸泡两次，每次5分钟)、复水处理(按顺序连续进行无水乙醇浸泡两次、95％乙醇浸泡一次、90％乙醇浸泡一次、75％乙醇浸泡一次、50％乙醇浸泡一次，每次5分钟)。3％过氧化氢37℃处理切片30分钟。用TLR9抗体(Abcam,USA)4℃处理切片12–18小时。之后加入辣根过氧化物酶标记二抗(Cell Signaling Technology,USA)进行组织显色。对显色的组织进行病理评分。
A、根据评分统计的肿瘤和配对的非肿瘤对照的TLR9表达量。评分方式如下：(1)计算染色区域：染色阳性区域的面积≤5％评分0，面积5％-25％(含) 评分1，面积25％-50％(含)评分2，面积50％-75％评分3，面积≥75％评分4；(2) 计算染色强度：阳性细胞染色强度根据染色颜色分成高(记为3)、中(记为2)、低(记为1)和阴性(记为0)；(3)计算最终的染色评分：用(染色强度)x(染色区域)得到0-12的评分值，作为最终该抗体在组织切片中的评分。***代表P ＜0.001。
B、TLR9 mRNA表达水平的统计结果。收集细胞，用Trizol法裂解细胞，抽提出RNA，再通过SuperScriptIII反转录酶试剂盒(赛默飞公司)将RNA反转录成cDNA作为PCR的模板。根据TLR9 mRNA序列设计引物，使PCR片段长度为 200bp左右。利用Bio-Rad CFX96TMC1000TM Thermal Cycler仪器通过PCR方法检测TLR9的表达量。
C、以评分3作为分辨值，大于3的组织切片定义为低表达，小于等于3的组织切片定义为高表达。通过Kaplan-Meier Plotter统计法分析TLR的高表达和低表达与食管鳞癌患者生存时间的关系。n代表样本数。
D、从TCGA_食管癌数据库中筛选出食管鳞癌，共95例。计算95例食管鳞癌的TLR9表达值的中位数，高于中位数的48例定义为TLR9高表达(TLR9-H)，低于中位数的47例定义为TLR9低表达(TLR9-L)。通过Kaplan-Meier Plotter 统计法分析TLR9的高表达和低表达与食管鳞癌患者生存时间的关系。n代表样本数。
E、将高表达TLR9的EC109细胞或转入对照载体(GFP)的EC109分别接种到裸鼠的皮下，当肿瘤体积达到1800mm3时，作为结束点。通过Kaplan-Meier Plotter统计法分析TLR9高表达细胞和对照细胞对肿瘤生长以及动物生存的影响。n代表样本数。
结论：TLR9在食管癌中高表达，预示预后较差，即是生存时间较短。
实施例2 TLR9在两种食管鳞癌细胞中的过表达(参见图2)
在两个食管鳞癌细胞株(EC109和KYSE150)中用Lipofectamine 2000(赛默飞公司)的方法转入带有潮霉素抵抗基因的TLR9过表达质粒或配对的空载体 (重庆泽恒生物)，通过潮霉素(Invivogen，USA)筛选的方法获得稳定表达TLR9 的细胞株(EC/T9和KY/T9)或对照细胞株(EC/EV和KY/EV)。收集这四种细胞各1x107个细胞，进行RNA测序，得到每个细胞中的全RNA表达谱，进行后续分析。
A、用基因富集分析(GSEA)方法分别分析EC/T9的RNA表达vs.EC/EV的 RNA表达以及KY/T9的RNA表达vs.KY/EV的RNA表达。上皮-间质转化 (Epithelial-MesenchymalTransition)信号通路在两种细胞中都得到了富集，显示TLR9能够促进该通路的活化。
B和C、两种细胞中上皮-间质转化信号通路的富集图。
D、筛选TLR9过表达后表达显著增加(P＜0.05)的蛋白，输入Cytoscape，通过Sting聚类的插件进行分析，显示TLR9的增加可以促进细胞黏附以及线粒体的功能，这都可以增加肿瘤的恶性程度。
E、筛选TLR9过表达后表达显著降低(P＜0.05)的蛋白，输入Cytoscape，通过Sting聚类的插件进行分析，显示TLR9的增加可以降低高尔基体的运输以及蛋白的降解。
结论：在两种食管鳞癌细胞中的过表达TLR9可以增强肿瘤细胞的恶性程度。
实施例3 PU.1调控TLR9(参见图3)
在两个食管鳞癌细胞株EC109中用Lipofectamine 2000(赛默飞公司)的方法转入带有嘌呤霉素抵抗基因的靶向PU.1mRNA的shRNA质粒(上海生博生物医药科技有限公司)或不靶向任何基因的对照shRNA质粒(上海生博生物医药科技有限公司)，通过嘌呤霉素筛选的方法获得稳定敲低PU.1的细胞株 (EC/shPU)或对照细胞株(EC/shCL)。
A、TLR9 mRNA表达水平的统计结果。收集细胞，用Trizol法裂解细胞，抽提出RNA，再通过SuperScriptIII反转录酶试剂盒(赛默飞公司)将RNA反转录成cDNA作为PCR的模板。根据TLR9 mRNA序列设计引物，使PCR片段长度为 200bp左右。利用Bio-Rad CFX96TMC1000TM Thermal Cycler仪器通过PCR方法检测TLR9的表达量。**表示P＜0.01。
B、TLR9蛋白表达水平的统计结果。收集细胞，用RIPA法裂解细胞，抽提出蛋白，进行western实验。显色后对结果进行定量分析。**表示P＜0.01。
C、从TCGA_食管癌数据库中筛选出食管鳞癌，共95例。计算95例食管鳞癌的PU.1表达值的中位数，高于中位数的48例定义为PU.1高表达(PU.1_H)，低于中位数的47例定义为PU.1低表达(PU.1_L)。通过Kaplan-Meier Plotter 统计法分析PU.1的高表达和低表达与患者生存时间的关系。
D、从TCGA_食管癌数据库中筛选出食管鳞癌，共95例。用Pearson方法统计95例食管鳞癌中TLR9和PU.1表达的相关性，结果证明这两个基因的表达在食管鳞癌中显著正相关。
结论：PU.1促进TLR9的表达，与TLR9的表达显著正相关。
实施例4 顺铂处理食管鳞癌细胞的效果(参见图4)
A、顺铂处理后，EC109细胞(中国科学院上海生命科学研究院)中PU.1和 TLR9mRNA表达水平的统计结果。分别用0、1、3、10μM的顺铂处理食管癌细胞EC109。处理48小时后，收集细胞，用Trizol法裂解细胞，抽提出RNA，再通过SuperScriptIII反转录酶试剂盒(赛默飞公司)将RNA反转录成cDNA作为PCR的模板。根据PU.1和TLR9 mRNA序列分别设计引物，使PCR片段长度为 200bp左右。利用Bio-Rad CFX96TM C1000TM Thermal Cycler仪器通过PCR方法检测TLR9的表达量。**表示P＜0.01。
B、顺铂处理后，EC109细胞中PU.1和TLR9蛋白的表达。分别用0、1、3、 10μM的顺铂处理食管癌细胞EC109。处理48小时后，收集细胞，用RIPA法裂解细胞，抽提出蛋白，进行western实验。
C、高表达TLR9增加了食管癌细胞对于顺铂的耐受，具有较高的IC50值。分别用1.25、2.5、5、10、20μM的顺铂处理食管癌细胞EC109。处理48小时后，用MTT方法测定细胞的活力，所的数值用CompuSyn软件分析，计算出抑制细胞活力50％时所需的顺铂的剂量，也即IC50。
D、将高表达TLR9的EC109细胞或转入对照载体(GFP)(重庆泽恒生物) 的EC109分别接种到裸鼠的皮下，并一周两次通过腹腔分别注射2.5μM的顺铂(CP)或2.5μM顺铂(CP)结合1uM的羟基氯喹(TLR9的抑制剂，HCQ)。当肿瘤体积达到1800mm3时，作为结束点。通过Kaplan-Meier Plotter统计法分析TLR9高表达细胞和对照细胞在药物处理条件下对肿瘤生长以及动物生存的影响。
结论：TLR9高表达量会对顺铂产生耐受，需要更高的顺铂剂量。
实施例5 miR-574-5p靶向TLR9 mRNA抑制TLR9的表达(参见图5)
A、用四个microRNA数据库分析靶向TLR9的潜在microRNA，发现四个数据库都指向miR-574-5p这一microRNA。
B、收集20例食管鳞癌患者新鲜肿瘤样本，匀浆后，用Trizol法裂解组织匀浆液，抽提出RNA，再通过SuperScriptIII反转录酶试剂盒(赛默飞公司) 将RNA反转录成cDNA作为PCR的模板。根据miR-574-5p序列设计引物。利用 Bio-Rad CFX96TM C1000TM ThermalCycler仪器通过PCR方法检测miR-574-5p 的表达量。
C、对上述结果根据患者所得肿瘤的级别进行进一步的统计分析。
D、miR-574-5p靶向TLR9 3’非翻译区(UTR)的示意图。根据靶向的序列，设计突变的TLR9 3’UTR，这样TLR9将不会再被miR-574-5p靶向。将野生型的 TLR9 3’UTR和突变的TLR9 3’UTR插入pSI-check2质粒(Addgene，USA)中。将构建好的质粒用Lipofectamine2000(赛默飞公司)导入食管癌细胞中，24 小时后，收集细胞，用双荧光素酶检测方法进行分析。分别测量Renilla-TLR9 3’UTR和Firefly的荧光酶活性，然后用Renilla-TLR9 3’UTR的值/Firefly 的值，得到相对荧光素酶活性值。如果Renilla-TLR9 3’UTR能够被miR-574-5p 靶向，则Renilla-TLR9 3’UTR会被降解，相应的活性值则下降。通过分析，我们发现突变的TLR9 3’UTR能够阻止miR-574-5p的功能。
E、不处理或转入对照microRNA(Invitrogen，产品号：4464060)不会影响TLR9蛋白的表达量，但转入miR-574-5p类似物(赛默飞)则会显著抑制TLR9 蛋白的表达量。转入相应的microRNA 48小时候后，收集细胞，用RIPA法裂解细胞，抽提出蛋白，进行Western实验。显色后对结果进行定量分析。**表示P ＜0.01。
结论：miR-574-5p是TLR9的抑制因子，可以通过靶向TLR9 mRNA抑制TLR9 蛋白的表达。
实施例6 顺铂可以通过诱导IRF1/miR-574-5p信号轴(参见图6)
实施例5第A和B步骤和顺铂处理后，EC109细胞(中国科学院上海生命科学研究院)中miR-574-5p和IRF1 mRNA表达水平的统计结果。分别用0、1、3、 10μM的顺铂处理食管癌细胞EC109。处理48小时后，收集细胞，用Trizol 法裂解细胞，抽提出RNA，再通过SuperScriptIII反转录酶试剂盒(赛默飞公司)将RNA反转录成cDNA作为PCR的模板。根据miR-574-5p和IRF1 mRNA序列分别设计引物。利用Bio-Rad CFX96TM C1000TM ThermalCycler仪器通过PCR 方法检测表达量。**表示P＜0.01。
C、通过转录因子结合位点预测软件分析，发现在miR-574-5p启动子区域存在IRF1的结合位点。将完整的miR-574-5p启动子或删除IRF1结合位点的突变miR-574-5p启动子分别插入pGL3荧光素酶报告质粒(Promega，USA)中，将质粒用Lipofectamine 2000转入EC109细胞(中国科学院上海生命科学研究院)中，49小时候收集细胞，进行荧光素酶实验。实验显示删除IRF1结合位点可以抑制miR-574-5p启动子的活性，证明IRF1是miR-574-5p的转录因子。** 表示P＜0.01。
D、调控网络示意图。
结论：顺铂可以通过诱导IRF1/miR-574-5p信号轴，从而参与对TLR9的抑制作用。

Claims (6)

1.检测基因在制备检测食管鳞癌对顺铂敏感性的制剂中的用途，所述制剂用于对从生物体中分离的试样进行检测，
所述检测基因为TLR9(蛋白或核酸)和PU.1(蛋白或核酸)或IRF1(蛋白或核酸)和miR-574-5p(核酸)；
所述试样为组织试样。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述组织试样为人的组织试样。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：当TLR9和PU.1在肿瘤组织试样中的表达量高于在肿瘤周边组织试样中的表达量，而IRF1和miR-574-5p在肿瘤组织试样中的表达量低于来自肿瘤周边组织试样中的表达量时，则检测为对顺铂耐受。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：当TLR9和PU.1在肿瘤组织试样中的表达量高于在肿瘤周边组织试样中的表达量，而IRF1和miR-574-5p在肿瘤组织试样中的表达量高于在肿瘤周边组织试样中的表达量时，则检测为对顺铂敏感。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：上TLR9和PU.1在肿瘤组织试样中的表达量低于在肿瘤周边组织试样中的表达量，而IRF1和miR-574-5p在肿瘤组织试样中表达量高于在肿瘤周边组织试样中的表达量时，则检测为对顺铂高敏感。
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：当TLR9和PU.1在肿瘤组织试样中的表达量低于在肿瘤周边组织试样中的表达量，而IRF1和miR-574-5p在肿瘤组织试样中的表达量低于在肿瘤周边组织试样中的表达量时，则检测为对顺铂敏感。
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