CN111057128B - 一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物及其制备方法 - Google Patents

一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111057128B
CN111057128B CN201911356659.XA CN201911356659A CN111057128B CN 111057128 B CN111057128 B CN 111057128B CN 201911356659 A CN201911356659 A CN 201911356659A CN 111057128 B CN111057128 B CN 111057128B
Authority
CN
China
Prior art keywords
thi
product
boc
ile
added
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201911356659.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN111057128A (zh
Inventor
金英学
王志强
吴静婉
赵立双
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Harbin Normal University
Original Assignee
Harbin Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Harbin Normal University filed Critical Harbin Normal University
Priority to CN201911356659.XA priority Critical patent/CN111057128B/zh
Publication of CN111057128A publication Critical patent/CN111057128A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111057128B publication Critical patent/CN111057128B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Abstract

本发明公开了一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物及其制备方法，属于合成药物化学技术领域。本发明提供一种可以抑制p53‑MDM2的相互作用从而释放功能型p53，达到抑制肿瘤的目的，实现分子精准靶向肿瘤治疗的多肽药物衍生物及其制备方法，及该衍生物在抗肿瘤领域的用途。本方法将含硫代脯氨酸的直链寡肽以异吲哚酮相连环合，通过催化诱导环合反应、柱层析纯化得到含硫代脯氨酸的异吲哚酮并环肽衍生物。该衍生物结构式为：

Description

一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物及其制备方法，属于合成药物化学技术领域。
背景技术
在抗肿瘤领域，多肽药物由于其高的靶向性、安全性受到重视，而含脯氨酸的多肽由于易形成特定二级结构，有助于相关肽与靶点的结合，进而提高靶向性和结合能力。此外，在肿瘤研究领域，肿瘤抑制因子p53在肿瘤细胞信号通路中起了相当重要作用，能够对主要细胞通路进行调控，阻止细胞癌变。
MDM2是细胞内p53的主要调节因子。正常细胞中，p53蛋白水平被MDM2以一负反馈通路紧密调控。此外，MDM2作为一种E3链接酶，特异性地使p53链接泛素小分子，使其在蛋白酶体作用下进行降解。在人肿瘤细胞中，MDM2蛋白会由于各种原因产生过量表达累积，从而抑制p53的抑癌能力。鉴于MDM2是p53稳定性的关键调节因子，因此，提供一种可以抑制p53-MDM2的相互作用从而释放功能型p53，达到抑制肿瘤的目的，实现分子精准靶向肿瘤治疗的多肽药物衍生物是十分必要的。
发明内容
本发明目的是在于提供一种可以抑制p53-MDM2的相互作用从而释放功能型p53，达到抑制肿瘤的目的，实现分子精准靶向肿瘤治疗的多肽药物衍生物及其制备方法。
本发明的技术方案：
一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物，该异吲哚酮并环肽衍生物中含有一个或多个硫代脯氨酰，异吲哚酮C-3位手性为R或S构型；
该衍生物的结构通式为：
Figure GDA0004180785910000011
式中，R1和R2分别代表氨基酸侧链，所述的氨基酸为除脯氨酸之外的混旋的或光学纯的天然氨基酸，具体为甘氨酸、缬氨酸、丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或酪氨酸；X1、X2和X3为硫或碳，并且X1、X2和X3中至少有一个为硫；Y为氧或硫；n1和n2的取值为0、1、2、3或4，m1、m2和m3的取值为0、1或2，并且n1、n2、m1、m2和m3不全为0；
上述衍生物的化学名称为3-羟基-异吲哚酮并环(甘氨酰-(脯氨酰或硫代脯氨酰)m3-(某氨酰)n2-(脯氨酰或硫代脯氨酰)m2-(某氨酰)n1-(脯氨酰或硫代脯氨酰)m1)苄胺。
上述衍生物的可以用于癌症治疗，包括但不限于肝癌和宫颈癌等。
上述含硫的异吲哚酮并环肽衍生物的制备方法，该方法包括以下步骤：
步骤一、(1)将Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸溶解在溶剂Ⅰ中，在缩合剂Ⅰ催化下与N-三甲基硅甲基苄胺缩合，再采用三氟乙酸脱去氨基端的Boc保护，得到中间产物Ⅰ1；(2)将Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸溶解在溶剂Ⅰ中，在缩合剂Ⅰ催化下与中间产物Ⅰ1缩合，再采用三氟乙酸脱去氨基端的Boc保护，得到中间产物Ⅰ2；重复上述步骤，获得中间产物Ⅰm1；
步骤二、(1)将Boc-氨基酸-R2溶解在溶剂Ⅱ中，在缩合剂Ⅱ催化下与中间产物Ⅰm1缩合，再采用三氟乙酸脱去氨基端的Boc保护，得到中间产物Ⅱ1；(2)将Boc-氨基酸-R2溶解在溶剂Ⅱ中，在缩合剂Ⅱ催化下与中间产物Ⅱ1缩合，再采用三氟乙酸脱去氨基端的Boc保护，得到中间产物Ⅱ2；重复上述步骤，获得中间产物Ⅱn1；
步骤三、(1)将Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸溶解在溶剂Ⅲ中，在缩合剂Ⅲ催化下与中间产物Ⅱn1缩合，再采用三氟乙酸脱去氨基端的Boc保护，得到中间产物Ⅲ1；(2)将Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸溶解在溶剂Ⅲ中，在缩合剂Ⅲ催化下与中间产物Ⅲ1缩合，再采用三氟乙酸脱去氨基端的Boc保护，得到中间产物Ⅲ2；重复上述步骤，获得中间产物Ⅲm2；
步骤四、(1)将Boc-氨基酸-R1溶解在溶剂Ⅳ中，在缩合剂Ⅳ催化下与中间产物Ⅲm2缩合，再采用三氟乙酸脱去氨基端的Boc保护，得到中间产物Ⅳ1；(2)将Boc-氨基酸-R1溶解在溶剂Ⅳ中，在缩合剂Ⅳ催化下与中间产物Ⅳ1缩合，再采用三氟乙酸脱去氨基端的Boc保护，得到中间产物Ⅳ2；重复上述步骤，获得中间产物Ⅳn2；
步骤五、(1)将Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸溶解在溶剂Ⅴ中，在缩合剂Ⅴ催化下与中间产物Ⅳn2缩合，再采用三氟乙酸脱去氨基端的Boc保护，得到中间产物V1；(2)将Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸溶解在溶剂Ⅴ中，在缩合剂Ⅴ催化下与中间产物V1缩合，再采用三氟乙酸脱去氨基端的Boc保护，得到中间产物V2；重复上述步骤，得到中间产物Vm3，即线性肽N-末端三甲基硅甲基苄基取代的直链肽；
步骤六、将线性肽N-末端三甲基硅甲基苄基取代的直链肽溶解在溶剂中，在催化剂作用下反应2h-48h，反应液浓缩后，残余物加入水，使用有机溶剂萃取，干燥有机层，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析分离纯化，冻干干燥处理后，获得含硫的异吲哚酮并环肽衍生物。
进一步限定，步骤一的每次缩合反应中的Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸与缩合剂Ⅰ的摩尔比均为1:(1～3)，缩合反应温度为10℃～50℃；Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸与N-三甲基硅甲基苄胺的量的关系为等当量；所述的Boc-硫代脯氨酸的构型为纯的L型或D型；所述的Boc-脯氨酸的构型为纯的L型或D型；所述的溶剂Ⅰ为卤代烃或四氢呋喃；所述的缩合剂Ⅰ为2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉或二环己基碳二亚胺。
进一步限定，步骤二的每次缩合反应中Boc-氨基酸-R2与缩合剂Ⅱ的摩尔比为1:(1～3)，缩合反应温度为10℃～50℃；Boc-氨基酸-R2与中间产物Ⅰm1的量的关系为等当量；所述的溶剂Ⅱ为卤代烃或四氢呋喃；所述的Boc-氨基酸-R2中的氨基酸为光学纯的或混旋的氨基酸；所述缩合剂Ⅱ为2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉或二环己基碳二亚胺。
进一步限定，步骤三的每次缩合反应中Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸与缩合剂Ⅲ的摩尔比为1:(1～3)，缩合反应温度为10℃～50℃；Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸与中间产物Ⅱn1的量的关系为等当量；所述的Boc-硫代脯氨酸的构型为纯的L型或D型；所述的Boc-脯氨酸的构型为纯的L型或D型；所述溶剂Ⅲ为卤代烃或四氢呋喃；所述的缩合剂Ⅲ为2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉或二环己基碳二亚胺。
进一步限定，步骤四的每次缩合反应中Boc-氨基酸-R1与缩合剂Ⅳ的摩尔比为1:(1～3)，缩合反应温度为10℃～50℃；Boc-氨基酸-R1与中间产物Ⅲm2的量的关系为等当量；所述的溶剂Ⅳ为卤代烃或四氢呋喃；所述的Boc-氨基酸-R1中的氨基酸为光学纯的或混旋的氨基酸；所述缩合剂Ⅳ为2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉或二环己基碳二亚胺。
进一步限定，步骤五的每次缩合反应中Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸与缩合剂Ⅴ的摩尔比为1:(1～3)，缩合反应温度为10℃～50℃；Boc-硫代脯氨酸或Boc-脯氨酸与中间产物Ⅳn2的量的关系为等当量；所述的Boc-硫代脯氨酸的构型为纯的L型或D型；所述的Boc-脯氨酸的构型为纯的L型或D型；所述的缩合剂Ⅴ为卤代烃或四氢呋喃；所述的缩合剂Ⅴ为2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉或二环己基碳二亚胺。
更进一步限定，卤代烃为二氯甲烷、三氯甲烷或1,2-二氯乙烷。
进一步限定，步骤六中催化剂为氢化铝锂，所述的线性肽N-末端三甲基硅甲基苄基取代的直链肽与催化剂的摩尔比为20:1。
进一步限定，步骤六中柱层析的洗脱液为乙酸乙酯和石油醚按照体积比为1:(1～10)配制、由二氯甲烷和石油醚按照体积比为1:(1～10)配制、由乙醚和石油醚按照体积比1:(1～5)配制或由乙醚和正己烷按照体积比为1:(1～5)配制。
本发明具有以下有益效果：本发明提供了一种含硫代脯氨酸的异吲哚酮并环肽衍生物，该衍生物中含有电负性较大的硫原子，可以进一步增强含异吲哚酮基团的多肽与靶点结合能力，改善活性。且本发明将小分子药效团、硫代脯氨酸及寡肽结合，从而得到新型结构的产物，其手性特征对活性有明显影响，有很高的医学价值；活性实验表明，与紫杉醇和不含硫的异吲哚酮并环肽衍生物相比，本发明所得部分产物具有更好的抗肿瘤活性，对药物开发有重要的推动作用。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明均为常规方法。
具体实施方式一：
本实施方式异吲哚酮并环肽衍生物的化学名称为3-羟基-异吲哚酮并环(甘氨酰-(脯氨酰或硫代脯氨酰)m3-(某氨酰)n2-(脯氨酰或硫代脯氨酰)m2-(某氨酰)n1-(脯氨酰或硫代脯氨酰)m1)苄胺，其中异吲哚酮C-3位手性为R或S构型，结构中含有一个或多个硫代脯氨酰，结构式为：
Figure GDA0004180785910000041
式中，R1和R2分别代表氨基酸侧链，所述的氨基酸为除脯氨酸之外的混旋的或光学纯的天然氨基酸，具体为甘氨酸、缬氨酸、丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或酪氨酸；X1、X2和X3为硫或碳，并且X1、X2和X3中至少有一个为硫；Y为氧或硫；n1和n2的取值为0、1、2、3或4，m1、m2和m3的取值为0、1或2，并且n1、n2、m1、m2和m3不全为0。
本实施方式异吲哚酮并环肽衍生物的制备方法的一般合成途径按如下反应过程实现：
Figure GDA0004180785910000051
具体实施方式二：
①将Boc-L-异亮氨酸(2.15g，0.01mol)溶于30mL二氯甲烷中，加入等当量的EEDQ(3.78g，15mmol)和N-(三甲基硅基甲基)苄胺(1.93g，10mmol)，室温搅拌过夜。减压除去二氯甲烷，加入15mL水，用60mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到浅黄色油状物；将上步产物溶于10mL二氯甲烷中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌2h脱去Boc保护。产物经柱层析纯化(洗脱液为V乙酸乙酯:V正己烷＝1:7)得2.75g浅黄色油状物N-(三甲基硅基甲基)苄基-L-异亮氨酰胺。
②然后将Boc-L-亮氨酸(1.62g，7mmol)溶解在20mL二氯甲烷中，加入10.5mmolEEDQ，和(7mmol)上步产物N-(三甲基硅基甲基)苄基-L-异亮氨酰胺，室温搅拌10h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，合并浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸室温搅拌2h，脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到2.35g白色固体Ile-Thi-Si(CH3)3。
③然后将Boc-L-硫代脯氨酸(5.6mmol)溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和(5.6mmol)上步产物Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Leu-Thi-Si(CH3)3，产率85.0％。
④将Boc-L-硫代脯氨酸(4.7mmol)溶解在二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和(4.7mmol)上步产物Ile-Leu-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入15mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Leu-Thi-Thi-Si(CH3)3，产率71.0％。
⑤将上步产物Ile-Leu-Thi-Thi-Si(CH3)3(0.75g，10mmol)和三乙胺(3mL)溶于20mL干燥二氯甲烷中，冷却到0℃，在搅拌下将邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液(0.25g，10mmol先溶于3mL二氧六环)滴入到反应液中。然后搅拌1h，反应液用20mL水洗两次，用无水硫酸钠干燥有机层，减压浓缩，粗产品用柱层析分离纯化(洗脱液为V乙酸乙酯:V正己烷＝1:1)，得到白色固体，即为N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-L-异亮-L-亮-L-硫代脯-L-硫代脯酰胺，产率86％。
⑥然后将0.5g的N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-L-异亮-L-亮-L-硫代脯-L-硫代脯酰胺溶解在50ml的甲醇中，加入0.05当量的氢化锂铝催化剂，在氮气保护下，反应2小时。反应结束后使用用硅胶柱层析分离提纯化得目标环肽化产物3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-L-硫代脯-L-硫代脯-L-亮-L-异亮酰苄胺)(化合物1)。化合物1的结构式如下：
Figure GDA0004180785910000061
3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-L-硫代脯-L-硫代脯-L-亮-L-异亮酰苄胺)(化合物1)：white solid(yield 40％).1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:0.55～0.90(m,12H,CH3),1.15～1.24(m,2H,CH2CH3),1.26～1.46(m,2H,CHCH2CH)1.60～1.82,(m,2H,CH(CH3)2,CHCH2CH3),2.50～3.30(m,4H,NCH2SCH2CH),3.55～3.85(m,2H,COCH2C(OH)N),3.90～4.05(m,2H,NHCH2CON),4.20～4.40(m,1H,CH2CHNH(CO)4.55～4.80(m,4H,NCH2SCH2CH),4.85～5.05(m,2H,CH2Ph),5.10～5.20(m,1H,CHCHNH(CO),),5.30～5.75(m,2H,NCH2SCH2CH),7.01～7.33(m,5H,ArH),7.50～7.85(m,4H,Phthaloyl).13C NMR(CDCl3,400MHz)δ:12.58,16.96,24.98,26.02,28.73,32.71,34.07,37.54,39.46,39.73,50.94,54.37,58.93,59.22,60.45,70.69,71.22,85.41,123.86,124.81,127.82,128.02,129.05,129.82,130.04,131.76,133.66,137.27,166.02,166.37,169.36,170.40,171.62,171.69.HRMS(ESI)m/z calcd for C38H49N6O7S2+(M+H)+765.30987,found 765.30975
具体实施方式三：
①将Boc-L-异亮氨酸(2.15g，0.01mol)溶于30mL二氯甲烷中，加入等当量的EEDQ(3.78g，15mmol)和N-(三甲基硅基甲基)苄胺(1.93g，10mmol)，室温搅拌过夜。减压除去二氯甲烷，加入15mL水，用60mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到浅黄色油状物；将上步产物溶于10mL二氯甲烷中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌2h脱去Boc保护。产物经柱层析纯化(洗脱液为V乙酸乙酯:V正己烷＝1:7)得2.75g浅黄色油状物N-(三甲基硅基甲基)苄基-L-异亮氨酰胺。
②然后将Boc-L-硫代脯氨酸(5.6mmol)溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和(5.6mmol)上步产物Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Leu-Si(CH3)3。
③然后将Boc-L-硫代脯氨酸(5.6mmol)溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和(5.6mmol)上步产物Ile-Leu-Si(CH3)3，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Leu-Leu-Si(CH3)3。
④然后将Boc-L-亮氨酸(1.62g，7mmol)溶解在20mL二氯甲烷中，加入10.5mmolEEDQ，和(7mmol)上步产物Ile-Leu-Leu-Si(CH3)3，室温搅拌10h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，合并浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸室温搅拌2h，脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Thi-Leu-Leu-Si(CH3)3。
⑤将Ile-Thi-Leu-Leu-Si(CH3)3(0.75g，10mmol)和三乙胺(3mL)溶于20mL干燥二氯甲烷中，冷却到0℃，在搅拌下将邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液(0.25g，10mmol先溶于3mL二氧六环)滴入到反应液中。然后搅拌1h，反应液用20mL水洗两次，用无水硫酸钠干燥有机层，减压浓缩，粗产品用柱层析分离纯化(洗脱液为V乙酸乙酯:V正己烷＝1:1)，得到白色固体5，即为N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-L-异亮-L-硫代脯-L-硫代脯-L-亮氨酰胺。
⑥然后将0.5g的N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-L-异亮-L-硫代脯-L-硫代脯-L-亮氨酰胺溶解在50ml的甲醇中，加入0.05当量的氢化锂铝催化剂，在氮气保护下，反应2小时。反应结束后使用用硅胶柱层析分离提纯化得目标环肽化产物3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-L-亮-(L-硫代脯)2-L-异亮酰苄胺)(化合物2)。化合物2的结构式如下：
Figure GDA0004180785910000081
3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-L-亮-(L-硫代脯)2-L-异亮酰苄胺)(化合物2)：white solid(yield 45％).1HNMR(CDCl3,400MHz)0.25～1.00(m,12H,CH3),1.15～1.30(m,2H,CH2CH3),1.45～1.60(m,2H,CHCH2CH)1.70～1.80,(m,2H,CH(CH3)2,CHCH2CH3),2.50～3.40(m,4H,NCH2SCH2CH),3.55～4.00(m,4H,COCH2C(OH)N,NHCH2CON),4.00～4.55(m,4H,NCH2SCH2CH),4.65～5.00(m,3H,CH2CHNH(CO),CH2Ph),5.00～5.55(m,3H,CHCHNH(CO),NCH2SCH2CH),7.01～7.33(m,5H,ArH),7.50～7.85(m,4H,Phthaloyl)；13CNMR(CDCl3)δ:12.56,17.05,23.96,25.10,26.12,32.80,33.18,39.57,41.07,43.89,51.05,53.97,54.41,59.28,64.15,70.52,71.35,85.15,124.01,124.83,128.12,128.17,129.13,129.91,130.13,131.75,133.92,137.38,166.11,166.53,169.43,170.58,171.74,171.82.HRMS(ESI)m/z calcd for C38H48N6O7S2Na+(M+Na)+787.29181,found 787.29126.
具体实施方式四：
①将Boc-D-硫代脯氨酸(2.33g，0.01mol)溶于30mL二氯甲烷中，加入等当量的EEDQ(3.78g，15mmol)和N-(三甲基硅基甲基)苄胺(1.93g，10mmol)，室温搅拌过夜。减压除去二氯甲烷，加入15mL水，用60mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到浅黄色油状物；将上步产物溶于10mL二氯甲烷中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌2h脱去Boc保护。产物经柱层析纯化(洗脱液为V乙酸乙酯:V正己烷＝1:7)得2.75g浅黄色油状物N-(三甲基硅基甲基)苄基-D-硫代脯氨酰胺(简写为Thi-Si(CH3)3)。
②然后将Boc-L-异亮氨酸(5.6mmol)溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和(5.6mmol)上步产物N-(三甲基硅基甲基)苄基-D-硫代脯氨酰胺，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Thi-Si(CH3)3。
③然后将Boc-L-硫代脯氨酸(5.6mmol)溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和(5.6mmol)上步产物Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3。
④然后将Boc-L-亮氨酸(1.62g，7mmol)溶解在20mL二氯甲烷中，加入10.5mmolEEDQ，和(7mmol)上步产物Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌10h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，合并浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸室温搅拌2h，脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3。
⑤然后将Boc-D-硫代脯氨酸(5.5mmol)溶解在15mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和(5.5mmol)上步产物Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌过夜，减压除去溶剂，得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Thi-Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3。
⑥将Thi-Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3(10mmol)和三乙胺(3mL)溶于20mL干燥二氯甲烷中，冷却到0℃，在搅拌下将邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液(0.25g，10mmol先溶于3mL二氧六环)滴入到反应液中。然后搅拌1h，反应液用20mL水洗两次，用无水硫酸钠干燥有机层，减压浓缩，粗产品用柱层析分离纯化(洗脱液为V乙酸乙酯:V正己烷＝1:1)，得到白色固体5，即为N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮--D-硫代脯氨酰胺。
⑦然后将0.5g的N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮--D-硫代脯氨酰胺溶解在50ml的甲醇中，加入0.05当量的氢化锂铝催化剂，在氮气保护下，反应2小时。反应结束后使用用硅胶柱层析分离提纯化得目标环肽化产物3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮--D-硫代脯酰苄胺)(化合物3)。化合物3的结构式如下：
Figure GDA0004180785910000101
3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮--D-硫代脯酰苄胺)(化合物3)：white solid(yield 30％)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ0.25～1.00(m,12H,CH3)，1.15～1.30(m,2H,CH2CH3),1.45～1.60(m,2H,CHCH2CH)1.70～1.80,(m,2H,CH(CH3)2,CHCH2CH3)，2.50～3.45(m,6H,NCH2SCH2CH),3.55～4.00(m,4H,COCH2C(OH)N,NHCH2CON),4.00～4.60(m,6H,NCH2SCH2CH),4.65～5.00(m,3H,CH2CHNH(CO),CH2Ph),5.00～5.60(m,4H,CHCHNH(CO),NCH2SCH2CH),7.01～7.33(m,5H,ArH),7.50～7.85(m,4H,Phthaloyl)；13CNMR(CDCl3)δ:12.56,17.05,23.96,25.10,26.12,32.80,33.18,39.57,41.07,43.89,51.05,53.97,54.41,59.28,64.15,70.52,71.35,85.15,124.01,124.83,128.12,128.17,129.13,129.91,130.13,131.75,133.92,137.38,166.11,166.53,169.43,170.58,171.74,171.82.HRMS(ESI)m/z calcd for C38H48N6O7S2Na+(M+Na)+902.30151,found902.30122.
具体实施方式五：
以具体实施方式四的制备方式制备3-R-羟基-异吲哚酮并环(甘-L-硫代脯-L-异亮-L-硫代脯-L-亮-L-硫代脯酰苄胺)(化合物4)，化合物4的结构式如下：
Figure GDA0004180785910000111
具体实施方式六：
以具体实施方式五的制备方式制备3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-L-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮-L-硫代脯酰胺苄胺)(化合物5)，化合物5的结构式如下：
Figure GDA0004180785910000112
具体实施方式七：
以具体实施方式六的制备方式制备3-R-羟基-异吲哚酮并环(甘-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮-L-硫代脯酰胺苄胺)(化合物6)，化合物6的结构式如下：
Figure GDA0004180785910000121
对比例1：
①将Boc-D-脯氨酸(2.15g，0.01mol)溶于30mL二氯甲烷中，加入等当量的EEDQ(3.78g，15mmol)和N-(三甲基硅基甲基)苄胺(1.93g，10mmol)，室温搅拌过夜。减压除去二氯甲烷，加入15mL水，用60mL乙酸乙酯萃取三次,合并有机层并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到浅黄色油状物；将上步产物溶于10mL二氯甲烷中,加入10mL三氟乙酸,室温搅拌2h脱去Boc保护。产物经柱层析纯化(洗脱液∶V乙酸乙酯:V正己烷＝1:2)得2.76g浅黄色油状物N-(三甲基硅基甲基)苄基-D-脯氨酰胺。
②将Boc-L-异亮氨酸(1.62g，7mmol)溶解在20mL二氯甲烷中，加入10.5mmolEEDQ，和上步产物N-(三甲基硅基甲基)苄基-D-脯氨酰胺，室温搅拌10h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，合并浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸室温搅拌2h，脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到2.32g白色固体Ile-D-Pro-Si(CH 3)3。
③将Boc-L-脯氨酸(5.5mmol)溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和上步产物，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体L-Pro-Ile-D-Pro-Si(CH 3)3，产率85.0％。
④将Boc-L-亮氨酸(4.67mmol)溶解在二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和上步产物，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入15mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体L-Leu-D-Pro-Ile-D-Pro-Si(CH 3)3，产率71.0％。
⑤将Boc-D-脯氨酸(3.26mmol)溶解在二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和上步产物，室温搅拌10h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层，粗品再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到N-末端三甲基硅甲基苄基取代的五肽D-Pro-L-Leu-L-Pro-L-Ile-D-Pro-Si(CH 3)3(白色固体)，产率76％。
⑥将线性肽N-末端三甲基硅甲基苄基取代的五肽(0.75g，9.3mmol)和三乙胺(3mL)溶于20mL干燥二氯甲烷中，冷却到0℃，在搅拌下将邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液(0.23g，9.3mmol，先溶于3mL二氧六环)滴入到反应液中。然后搅拌1h，反应液用20mL水洗两次，用无水硫酸钠干燥有机层，减压浓缩，粗产品用柱层析分离纯化(洗脱液∶V乙酸乙酯:V正己烷＝1:1)，得到白色固体，即为N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-D-脯-L-亮-L-脯-L-异亮-D-脯氨酰胺，产率86％。
⑦取所得的N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-D-脯-L-亮-L-脯-L-异亮-D-脯氨酰胺0.5g溶解在甲醇中，通氮气20min，在氮气保护下用Pyrex管过滤中压汞灯照射20min，撤光源并结束反应。反应液浓缩，用硅胶柱层析分离提纯化得环肽化产物3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-D-脯-L-亮-L-脯-L-异亮-D-脯氨酰苄胺)(化合物7)，化合物7结构式如下：
Figure GDA0004180785910000131
化合物抗肿瘤活性实验：
选择人肝癌HepG2细胞和HeLa细胞，以四唑盐比色法(MTT法)，计算本发明所得药物、对比例化合物7和对照药物紫醇作用HeLa细胞48小时后的细胞存活率，以此计算化合物的半数抑制浓度(IC50)。
表1为采用基于本发明制备的六个化合物进行抗肿瘤活性实验时，对照药物浓度、本发明所要求药物浓度与肝癌细胞HepG2细胞、宫颈癌HeLa细胞、鼠成纤维细胞L929生存率的试验数据。肝癌细胞HepG2细胞和宫颈癌HeLa细胞用来评价药物对肿瘤的抑制活性，鼠成纤维细胞L929则用以评价药物对正常细胞的毒性。细胞存活率(％)用下面的公式计算：
存活率(％)＝A490(样品)/A490(对照)×100％；
在A490(样品)代表不同浓度样品处理细胞的吸光度值，A490(对照)代表用DMEM+10％胎牛血清细胞的吸光度值。
通过药理活性数据表明，本发明所述的含硫代脯氨酸的异吲哚酮并环肽衍生物多数对肝癌细胞HepG2细胞和HeLa细胞有很好的抑制作用，显示优于对比例化合物7和对照药物紫杉醇。说明发明提供的衍生物中含有电负性较大的硫原子，可以进一步增强含异吲哚酮基团的多肽与靶点结合能力，改善活性。
另外，对照品紫杉醇对正常的L929细胞显示较强毒性，其IC50为34.96μg/mL，对两种肿瘤细胞的活性比对正常细胞的活性显示较差的活性，其IC50为102.05μg/mL和409.95μg/mL，而本发明所述的化合物则显示对肿瘤细胞较强的活性，而对正常细胞L929则显示较弱的毒性，因而本发明所述环肽具有很好的应用开发价值。
表1.不同化合物对Hela、HepG-2cells和L929细胞的IC50值(μg/mL)
cells 1 2 3 4 5 6 7 紫杉醇
HepG-2 10.40 30.554 1.12 26.20 0.29 5.61 11.10 102.05
HeLa 18.88 49.139 2.13 20.40 2.32 9.32 23.36 409.95
L929 47.12 61.16 42.21 46.21 60.28 52.21 69.86 34.96

Claims (2)

1.一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物，其特征在于，所述的异吲哚酮并环肽衍生物中含有一个或多个硫代脯氨酰，异吲哚酮C-3位手性为R或S构型；
所述的衍生物的结构式如下：
Figure FDA0004180785900000011
Figure FDA0004180785900000012
分别命名为化合物1、化合物3、化合物5和化合物6。
2.一种权利要求1所述的含硫的异吲哚酮并环肽衍生物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
其中，化合物1的制备方法为：
①将0.01mol的Boc-L-异亮氨酸溶于30mL二氯甲烷中，加入等当量的EEDQ和N-(三甲基硅基甲基)苄胺，室温搅拌过夜，减压除去二氯甲烷，加入15mL水，用60mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到浅黄色油状物；将上步产物溶于10mL二氯甲烷中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌2h脱去Boc保护，产物经柱层析纯化，得浅黄色油状物N-(三甲基硅基甲基)苄基-L-异亮氨酰胺；
②然后将7mmol的Boc-L-亮氨酸溶解在20mL二氯甲烷中，加入10.5mmol的EEDQ，和7mmol的上步产物N-(三甲基硅基甲基)苄基-L-异亮氨酰胺，室温搅拌10h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，合并浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸室温搅拌2h，脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Thi-Si(CH3)3；
③然后将5.6mmol的Boc-L-硫代脯氨酸溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和5.6mmol的上步产物Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Leu-Thi-Si(CH3)3；
④将4.7mmol的Boc-L-硫代脯氨酸溶解在二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和4.7mmol的上步产物Ile-Leu-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入15mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Leu-Thi-Thi-Si(CH3)3；
⑤将10mmol的上步产物Ile-Leu-Thi-Thi-Si(CH3)3和3mL三乙胺溶于20mL干燥二氯甲烷中，冷却到0℃，在搅拌下将邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液滴入到反应液中，邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液由10mmol邻苯二甲酰甘氨酰氯溶于3mL二氧六环中得到，然后搅拌1h，反应液用20mL水洗两次，用无水硫酸钠干燥有机层，减压浓缩，粗产品用柱层析分离纯化，得到白色固体，即为N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-L-异亮-L-亮-L-硫代脯-L-硫代脯酰胺；
⑥然后将0.5g的N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-L-异亮-L-亮-L-硫代脯-L-硫代脯酰胺溶解在50ml的甲醇中，加入0.05当量的氢化锂铝催化剂，在氮气保护下，反应2小时，反应结束后使用硅胶柱层析分离提纯化得目标环肽化产物3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-L-硫代脯-L-硫代脯-L-亮-L-异亮酰苄胺)，即为化合物1；
化合物3的制备方法为：
①将0.01mol的Boc-D-硫代脯氨酸溶于30mL二氯甲烷中，加入等当量的EEDQ和N-(三甲基硅基甲基)苄胺，室温搅拌过夜，减压除去二氯甲烷，加入15mL水，用60mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到浅黄色油状物；将上步产物溶于10mL二氯甲烷中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌2h脱去Boc保护，产物经柱层析纯化，得浅黄色油状物N-(三甲基硅基甲基)苄基-D-硫代脯氨酰胺，简写为Thi-Si(CH3)3；
②然后将5.6mmol的Boc-L-异亮氨酸溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和5.6mmol的上步产物N-(三甲基硅基甲基)苄基-D-硫代脯氨酰胺，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Thi-Si(CH3)3；
③然后将5.6mmol的Boc-L-硫代脯氨酸溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和5.6mmol的上步产物Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3；
④然后将7mmol的Boc-L-亮氨酸溶解在20mL二氯甲烷中，加入10.5mmol EEDQ，和7mmol的上步产物Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌10h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，合并浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸室温搅拌2h，脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3；
⑤然后将5.5mmol的Boc-D-硫代脯氨酸溶解在15mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和5.5mmol的上步产物Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌过夜，减压除去溶剂，得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Thi-Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3；
⑥将10mmol的Thi-Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3和3mL三乙胺溶于20mL干燥二氯甲烷中，冷却到0℃，在搅拌下将邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液滴入到反应液中，邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液由10mmol邻苯二甲酰甘氨酰氯溶于3mL二氧六环中得到，然后搅拌1h，反应液用20mL水洗两次，用无水硫酸钠干燥有机层，减压浓缩，粗产品用柱层析分离纯化，得到白色固体N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮-D-硫代脯氨酰胺；
⑦然后将0.5g的N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮-D-硫代脯氨酰胺溶解在50ml的甲醇中，加入0.05当量的氢化锂铝催化剂，在氮气保护下，反应2小时，反应结束后使用硅胶柱层析分离提纯化得目标环肽化产物3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮--D-硫代脯酰苄胺)，即为化合物3；
化合物5的制备方法为：
①将0.01mol的Boc-L-硫代脯氨酸溶于30mL二氯甲烷中，加入等当量的EEDQ和N-(三甲基硅基甲基)苄胺，室温搅拌过夜，减压除去二氯甲烷，加入15mL水，用60mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到浅黄色油状物；将上步产物溶于10mL二氯甲烷中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌2h脱去Boc保护，产物经柱层析纯化，得浅黄色油状物N-(三甲基硅基甲基)苄基-L-硫代脯氨酰胺，简写为Thi-Si(CH3)3；
②然后将5.6mmol的Boc-L-异亮氨酸溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和5.6mmol的上步产物N-(三甲基硅基甲基)苄基-L-硫代脯氨酰胺，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Thi-Si(CH3)3；
③然后将5.6mmol的Boc-L-硫代脯氨酸溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和5.6mmol的上步产物Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Thi-Ile--Thi-Si(CH3)3；
④然后将7mmol的Boc-L-亮氨酸溶解在20mL二氯甲烷中，加入10.5mmol EEDQ，和7mmol的上步产物Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌10h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，合并浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸室温搅拌2h，脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3；
⑤然后将5.5mmol的Boc-L-硫代脯氨酸溶解在15mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和5.5mmol的上步产物Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌过夜，减压除去溶剂，得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Thi-Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3；
⑥将10mmol的上步产物Thi-Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3和3mL三乙胺溶于20mL干燥二氯甲烷中，冷却到0℃，在搅拌下将邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液滴入到反应液中，邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液由10mmol邻苯二甲酰甘氨酰氯溶于3mL二氧六环中得到，然后搅拌1h，反应液用20mL水洗两次，用无水硫酸钠干燥有机层，减压浓缩，粗产品用柱层析分离纯化，得到白色固体N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-L-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮-L-硫代脯氨酰胺；
⑦然后将0.5g的N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-L-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮-L-硫代脯氨酰胺溶解在50ml的甲醇中，加入0.05当量的氢化锂铝催化剂，在氮气保护下，反应2小时，反应结束后使用硅胶柱层析分离提纯化得目标环肽化产物3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-L-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮-L-硫代脯酰苄胺)，即为化合物5；
化合物6的制备方法为：
①将0.01mol的Boc-L-硫代脯氨酸溶于30mL二氯甲烷中，加入等当量的EEDQ和N-(三甲基硅基甲基)苄胺，室温搅拌过夜，减压除去二氯甲烷，加入15mL水，用60mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到浅黄色油状物；将上步产物溶于10mL二氯甲烷中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌2h脱去Boc保护，产物经柱层析纯化，得浅黄色油状物N-(三甲基硅基甲基)苄基-L-硫代脯氨酰胺，简写为Thi-Si(CH3)3；
②然后将5.6mmol的Boc-L-异亮氨酸溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和5.6mmol的上步产物N-(三甲基硅基甲基)苄基-L-硫代脯氨酰胺，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Ile-Thi-Si(CH3)3；
③然后将5.6mmol的Boc-L-硫代脯氨酸溶解在16mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和5.6mmol的上步产物Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌12h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3；
④然后将7mmol的Boc-L-亮氨酸溶解在20mL二氯甲烷中，加入10.5mmol EEDQ，和7mmol的上步产物Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌10h，减压除去溶剂，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取，合并浓缩有机层得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸室温搅拌2h，脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3；
⑤然后将5.5mmol的Boc-D-硫代脯氨酸溶解在15mL二氯甲烷中，加入等当量EEDQ和5.5mmol的上步产物Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3，室温搅拌过夜，减压除去溶剂，得到浅黄色油状物，再采用三氟乙酸脱去Boc保护，以柱层析方法纯化产物，得到白色固体Thi-Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3；
⑥将10mmol的上步产物Thi-Leu-Thi-Ile-Thi-Si(CH3)3和3mL三乙胺溶于20mL干燥二氯甲烷中，冷却到0℃，在搅拌下将邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液滴入到反应液中，邻苯二甲酰甘氨酰氯溶液由10mmol邻苯二甲酰甘氨酰氯溶于3mL二氧六环中得到，然后搅拌1h，反应液用20mL水洗两次，用无水硫酸钠干燥有机层，减压浓缩，粗产品用柱层析分离纯化，得到白色固体N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮-L-硫代脯氨酰胺；
⑦然后将0.5g的N-三甲基硅甲基-N-苄基-邻苯二甲酰甘氨酰-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮-L-硫代脯氨酰胺溶解在50ml的甲醇中，加入0.05当量的氢化锂铝催化剂，在氮气保护下，反应2小时，反应结束后使用硅胶柱层析分离提纯化得目标环肽化产物3-S-羟基-异吲哚酮并环(甘-D-硫代脯-L-亮-L-硫代脯-L-异亮-L-硫代脯酰苄胺)，即为化合物6。
CN201911356659.XA 2019-12-25 2019-12-25 一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物及其制备方法 Active CN111057128B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911356659.XA CN111057128B (zh) 2019-12-25 2019-12-25 一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911356659.XA CN111057128B (zh) 2019-12-25 2019-12-25 一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111057128A CN111057128A (zh) 2020-04-24
CN111057128B true CN111057128B (zh) 2023-05-16

Family

ID=70303450

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911356659.XA Active CN111057128B (zh) 2019-12-25 2019-12-25 一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111057128B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018178691A1 (en) * 2017-03-28 2018-10-04 Astex Therapeutics Limited Isoindolinone inhibitors of the mdm2-p53 interaction and process for making them
CN110240631A (zh) * 2019-06-25 2019-09-17 哈尔滨师范大学 手性异吲哚酮并环六肽衍生物、其制备办法及用途
CN110437128A (zh) * 2019-08-17 2019-11-12 齐鲁工业大学 一种3-硫醚基异吲哚啉酮类化合物的合成方法
CN111454329A (zh) * 2020-04-07 2020-07-28 哈尔滨师范大学 一种具有抗癌活性的异茚哚酮桥连环九肽及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018178691A1 (en) * 2017-03-28 2018-10-04 Astex Therapeutics Limited Isoindolinone inhibitors of the mdm2-p53 interaction and process for making them
CN110678462A (zh) * 2017-03-28 2020-01-10 阿斯泰克斯治疗有限公司 Mdm2-p53相互作用的异吲哚啉酮抑制剂和其制造方法
CN110240631A (zh) * 2019-06-25 2019-09-17 哈尔滨师范大学 手性异吲哚酮并环六肽衍生物、其制备办法及用途
CN110437128A (zh) * 2019-08-17 2019-11-12 齐鲁工业大学 一种3-硫醚基异吲哚啉酮类化合物的合成方法
CN111454329A (zh) * 2020-04-07 2020-07-28 哈尔滨师范大学 一种具有抗癌活性的异茚哚酮桥连环九肽及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Design, Preparation of 3-Hydroxy Isoindolinone Cyclotripeptides, and the Fenestin A: Synthesis and Antitumor Activity;Huanli Zhang;《ACS Medicinal Chemistry Letters》;20220629(第13期);第1118-1124页 *
Design, Preparation of 3-Hydroxy Isoindolinone Cyclotripeptides, and the In Vitro Antitumor Activities Against Cervical Carcinoma HeLa Cells;Lishuang Zhao;《J. Heterocyclic Chem.》;20180323;第55卷(第5期);第1205-1218页 *
基于光诱导单电子转移反应的三环异吲哚酮并环肽的合成;董超;《有机化学》;20131106;第34卷(第3期);第578-583页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111057128A (zh) 2020-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4082522B2 (ja) ペプチドと、その製造方法
CA3062265A1 (en) Process for preparing intermediate of antibody drug conjugate
CN103476789A (zh) 大环缩酚酸肽类和新中间体的制备方法
JP7296396B2 (ja) アマニチン類抗体複合物
CN104703997A (zh) 用于制备大环缩酚酸肽类和新中间体的液相方法
CN111574592B (zh) 一类具有拮抗pd-1/pd-l1相互作用的环肽类化合物及其应用
WO2021002408A1 (ja) ペプチド及びその製造方法
RU2696276C2 (ru) Способы получения аналогов окситоцина
CN110240631B (zh) 手性异吲哚酮并环六肽衍生物、其制备办法及用途
CN109096388A (zh) 一种特立帕肽的制备方法
CN111057128B (zh) 一种含硫的异吲哚酮并环肽衍生物及其制备方法
Singh et al. Synthesis and characterization of selenium (I/II) and tellurium (IV) derivatives of amino acids
CN111040020A (zh) 一种烯烃硫醚类订书肽及其制备方法与应用
Williams et al. Asymmetric Synthesis of. gamma.-D-and-L-Glutamyl-L-meso-diaminopimelic Acid Dipeptide
US20040142851A1 (en) Hydrazinopeptoids and their uses for treating cancers
JP7335260B2 (ja) 非天然アマニチン類抗体複合物
CN101823990B (zh) 氨基酸酯基二硫代甲酸酯类化合物及其制备方法和用途
EP3950700A1 (en) Peptide complex and production method therefor, and use of said peptide complex
RU2394836C2 (ru) Пептид, обладающий нейротропной активностью
JP4734656B2 (ja) Ｐｆ１０２２類の製造法
RU2798981C2 (ru) Конъюгат антитела с аматоксином неприродного типа
CN101289426B (zh) 一种制备利什曼原虫病抑制剂的方法
Li et al. Preparation and characterization of tripeptide chiral stationary phases with varying amino acid sequences and terminal groups
CN116574154A (zh) 一种环肽-来那度胺类protac衍生物及其制备方法和在抗癌药物中的应用
Fernández et al. Ring Closing Methatesis Mediated Synthesis of D-Galactose Derived β-Amino Acids

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant