CN111032095B - 鉴定能调节衣物恶臭、发霉恶臭和/或汗液恶臭的化合物的方法 - Google Patents

鉴定能调节衣物恶臭、发霉恶臭和/或汗液恶臭的化合物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及鉴定化合物的方法，该化合物结合、抑制、阻断、限制和/或调节嗅觉受体的活性，该嗅觉受体的活性由引起衣物恶臭的物质、引起发霉恶臭的物质和/或引起汗液恶臭的物质激活。

Description

鉴定能调节衣物恶臭、发霉恶臭和/或汗液恶臭的化合物的 方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年11月22日提交的美国临时专利申请序列号62/589,947、2018年2月21日提交的欧洲专利申请序列号18157790.9和2018年11月2日提交的美国临时专利申请序列号62/754,899的优先权，它们的全部内容通过引用整体并入于此。
技术领域
技术领域针对可用于鉴定气味剂和/或香气化合物，更具体地说是用于鉴定衣物恶臭，发霉的恶臭和/或汗液恶臭的恶臭化合物的抑制剂，调节剂或抵消剂的气味和芳香剂受体和测定，如二甲基三硫(DMTS)、geonol、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基己酸和3-甲基-3-巯基(sulphanyl)己醇(transpirol)。
背景技术
嗅觉是人类感官系统中最复杂、最难理解的一种。从嗅觉受体(OR)激活到感知，还有许多步骤仍需要进一步研究。如果我们能够理解单个气味剂和混合物的OR代码如何转化为感知，那么我们就可以利用这一知识在多个领域带来显著的益处。这些领域包括：气味调节剂，如恶臭拮抗剂，其可阻止令人不快的气味；新的调味料(食用香精)和香料(日化香精)成分，其替代不可生物降解或有毒的化合物；以及气味增强剂，其会限制我们对天然来源难以获取的源化合物的依赖。“嗅觉代码”组合范例的核心是观察到任何单个OR可以被多种气味剂激活，相反，大多数气味剂能够激活几种OR。在小鼠基因组中，有大约1,200种不同的完整OR。相比之下，人类有大约400种。在这两种情况下、OR的所有组成部分都被世界上数以千计的气味剂激活，正是这种组合复杂性使我们能够感知到嗅觉的广泛性。然而，截至2014年，使用传统的脱孤法(deorphanization)仅对82种小鼠(约8％)和17种人类OR(约10％)的气味剂或配体进行了鉴定。此外，尚未测试基本上在体外鉴定的大多数配体对人OR的生理相关性。
在WO2014/210585中描述了一种方法，该方法能够快速且可靠地鉴定存在于生物体中的全体OR中的相对一小部分的OR，所述OR由一种或多种气味剂特异性地激活或抑制。然而，使用这种方法，仍然需要鉴定气味剂受体，更特别地是由特定的引起恶臭的物质激活的恶臭受体。
引起恶臭的化合物，例如二甲基三硫(DMTS)、geonol、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸和transpirol会产生难闻的气味，这些气味例如由于汗水或皮脂引起的衣物或身体异味，或发霉恶臭。
因此，本发明要解决的问题是提供鉴定能结合、抑制、阻断、限制和/或调节一种或多种嗅觉受体的活性的发霉恶臭、衣物恶臭和/或汗液恶臭的调节剂或反作用剂的方法，该嗅觉受体的活性由这类恶臭的特征性恶臭物质(MCS)激活。还需要一种测定方法，其依靠新的恶臭受体或新近鉴定为与引起特定恶臭的物质有关的恶臭受体来鉴定与这些受体结合的新化合物或化合物混合物。
发明内容
通过鉴定出一组(panel)具有衣物恶臭、发霉恶臭或汗液恶臭的特征的MCS和由这种MCS激活的多组嗅觉受体，出乎意料地解决了上述问题，它们可以用作鉴定调节剂物质的靶标，用于抵消这些嗅觉受体通过这类MCS引起的激活。
作为衣物MCS，已鉴定出geonol、DMTS和1-辛烯-3-醇。作为被至少一种所述化合物激活的嗅觉受体多肽，可以鉴定出人受体OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR4S2，小鼠直系同源物Olfr263、Olfr403、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr735、Olfr1193，以及小鼠受体Olfr1487、Olfr339、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364和Olfr937。
作为汗液MCS，已鉴定出丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸和transpirol。作为被至少一种所述化合物激活的嗅觉受体多肽，可以鉴定出人受体OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR5K1、OR51E1、OR51I2，小鼠直系同源物Olfr263、Olfr403、Olfr558Olfr641、Olfr137、Olfr164，以及小鼠受体Olfr1126和Olfr46。
作为发霉MCS，已鉴定出geonol、DMTS和1-辛烯-3-醇。作为被至少一种所述化合物激活的嗅觉受体多肽，可以鉴定出人受体OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR4S2，小鼠直系同源物Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr1193、Olfr96、Olfr137、Olfr173、Olfr164，以及小鼠受体Olfr1487、Olfr339、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364和Olfr937。
本发明进一步提供了测定化合物是否结合、抑制、阻断、限制和/或调节由引起衣物恶臭、发霉恶臭和/或汗液恶臭的物质激活的嗅觉受体的活性的方法，尤其是鉴定此类化合物的方法。
还提供了分离的嗅觉受体多肽，相应的编码核酸序列，包含此类编码序列的重组核酸和相应的表达载体。
还提供了非人宿主生物体或宿主细胞，该宿主生物体或宿主细胞已被修饰以表达被MCS激活的嗅觉受体多肽，MCS是衣物恶臭、发霉恶臭或汗液恶臭的特征。
还提供了这类嗅觉受体多肽的用途，用于鉴定恶臭调节化合物，该嗅觉受体多肽被MCS激活并且是衣物恶臭、发霉恶臭或汗液恶臭的特征。
附图说明
图1显示了根据本文提出的一些形态的某些MCS和嗅觉受体。
图2显示了在高度严格的筛选条件下，拮抗剂1-[(1S,7S)-2,3,4-三甲基三环[5.2.1.0～1.5～]癸-4-基)乙酮肟作为丁酸嗅觉受体OR51E1抑制剂的效力。黑线表示从用81μM丁酸(EC87)和所示浓度[μM]的拮抗剂处理的细胞中观察到的丁酸嗅觉受体活性的抑制百分比。
图3显示了在高度严格的筛选条件下，从根据本文提出的一些形态用化合物处理的细胞中观察到的丁酸嗅觉受体OR51E1的抑制百分比的总结。被测化合物的结构显示在图的侧面。
图4显示了根据本发明一些形态的化合物在人的感官小组测试中降低geonol的所感知强度的能力。这些化合物中的许多化合物均显示出可抑制geonol嗅觉受体的活性。NS，表示在等强度浓度下，与单独使用geonol相比，剩余的geonol感知百分比无统计学差异；星号(*)，表示正在等强度浓度下，与单独使用geonol相比，剩余的geonol感知百分比有统计学差异。
图5显示了根据WO2014/210585以及进一步的“监测OR活性的方法”部分中公开的测定和方法，在基于细胞的测定中，OR11A1、Olfr96、Olfr339、Olfr1487和Olfr1322的geonol浓度依赖性和特异性激活。该检测方法与所述细胞中cAMP的OR依赖性积累有关，这是由于geonol的OR激活的结果。
图6显示了根据WO2014/210585以及进一步的“监测OR活性的方法”部分中公开的测定和方法，在基于细胞的测定中，Olfr93、Olfr398、Olfr120和Olfr1364的1-辛烯-3-醇浓度依赖性和特异性激活。该检测方法与所述细胞中cAMP的OR依赖性积累有关，这是由于1-辛烯-3-醇的OR激活的结果。
图7显示了根据WO2014/210585以及进一步的“监测OR活性的方法”部分中公开的测定和方法，在基于细胞的测定中，OR2W1、Olfr263和Olfr46的transpirol浓度依赖性和特异性激活。该检测方法与所述细胞中cAMP的OR依赖性积累有关，这是由于transpirol的OR激活的结果。
图8显示了根据WO2014/210585以及进一步的“监测OR活性的方法”部分中公开的测定和方法，在基于细胞的测定中，OR51I2、Olfr641、OR2W1和Olfr263的3-甲基-2-己烯酸浓度依赖性和特异性激活。该检测方法与所述细胞中cAMP的OR依赖性积累有关，这是由于3-甲基-2-己烯酸的OR激活的结果。
图9显示了根据WO2014/210585以及进一步的“监测OR活性的方法”部分中公开的测定和方法，在基于细胞的测定中，Olfr1126的3-羟基-3-甲基-己酸的浓度依赖性和特异性激活。该检测方法与所述细胞中cAMP的OR依赖性积累有关，这是由于3-羟基-3-甲基-己酸的OR激活的结果。
图10显示了根据WO2014/210585中所述的方法以及“OR活性的方法”部分，来自响应于geonol的单个OSN的NGS数据。左图显示了OR的相对转录丰度，其中Olfr96显著高于其余的。右图显示了在同一NGS样本中，OSN的关键标记管家基因(omp、actb、cnga2、rtp1、gnal、adcy3)的存在和相对丰度。
图11显示了根据WO2014/210585中所述的方法以及“OR活性的方法”部分，来自响应于1-辛烯-3-醇的单个OSN的NGS数据。左图显示了OR的相对转录丰度，其中Olfr93显著高于其余的。右图显示了在同一NGS样本中，OSN的关键标记管家基因(omp、actb、cnga2、rtp1、gnal、adcy3)的存在和相对丰度。
图12显示了根据WO2014/210585中所述的方法以及“OR活性的方法”部分，来自响应于1-辛烯-3-醇的单个OSN的NGS数据。左图显示了OR的相对转录丰度，其中Olfr120显著高于其余的。右图显示了在同一NGS样本中，OSN的关键标记管家基因(omp、actb、cnga2、rtp1、gnal、adcy3)的存在和相对丰度。
图13显示了根据WO2014/210585中所述的方法以及“OR活性的方法”部分，来自响应于1-辛烯-3-醇的单个OSN的NGS数据。左图显示了OR的相对转录丰度，其中Olfr1364显著高于其余的。右图显示了在同一NGS样本中，OSN的关键标记管家基因(omp、actb、cnga2、rtp1、gnal、adcy3)的存在和相对丰度。
图14显示了根据WO2014/210585中所述的方法以及“OR活性的方法”部分，来自响应于1-辛烯-3-醇的单个OSN的NGS数据。左图显示了OR的相对转录丰度，其中Olfr937显著高于其余的。右图显示了在同一NGS样本中，OSN的关键标记管家基因(omp、actb、cnga2、rtp1、gnal、adcy3)的存在和相对丰度。
图15显示了根据WO2014/210585中所述的方法以及“OR活性的方法”部分，来自响应于transpirol的单个OSN的NGS数据。左图显示了OR的相对转录丰度，其中Olfr263显著高于其余的。右图显示了在同一NGS样品中，OSN的关键标记管家基因的存在和相对丰度。
图16显示了根据WO2014/210585中所述的方法以及“OR活性的方法”部分，来自响应于3-羟基-3-甲基-己酸的单个OSN的NGS数据。左图显示了OR的相对转录丰度，其中Olfr1126显著高于其余的。右图显示了在同一NGS样品中，OSN的关键标记管家基因的存在和相对丰度。
具体实施方式
定义
对于本文和所附权利要求的描述，除非另有说明，否则“或”的使用意味着“和/或”。
类似地，各种时态的“含”、“含有”、“包含”和“包括”是可互换的而不是限制性的。
应进一步理解，在各种实施方案的描述使用术语“包含”的情况下，本领域技术人员将理解，在一些特定情况下，可以使用“基本上由……组成”或“由……组成”的语言来替代地描述实施方案。
除非另有说明，否则以下术语具有归属于它们的含义。
“OR”是指在嗅觉细胞中表达的G蛋白偶联受体(GPCR)家族的一个或多个成员。嗅觉受体细胞也可以基于形态学或通过在嗅觉细胞中特异性表达的蛋白质的表达来鉴定。OR家族成员可以具有充当嗅觉信号转导的受体的能力。
“DMTS OR”是指在嗅觉细胞中表达的G蛋白偶联受体家族的成员，该受体在结合或活性测定中结合和/或被DMTS激活，以鉴定结合和/或激活GPCR的配体。此类测定法描述如下。本文的DMTS受体将包括片段、变体，包括合成的和天然存在的，以及响应于或结合DMTS的嵌合体或重组核酸或蛋白质。类似的定义类似地适用于以下受体：
“Geonol OR”，“1-辛烯-3-醇OR”，“丁酸OR”，“3-甲基-2-己烯酸OR”，“3-羟基-3-甲基-己酸OR”和“Transpirol OR”，
认为“OR”多肽是这样的，它们属于由单个～1kb长外显子编码的7-跨膜结构域G蛋白偶联受体超家族并且表现出特征性嗅觉受体特异性氨基酸基序。这七个结构域被称为“跨膜”或称“TM”结构域TM I～TM VII，其通过三个“内部细胞环”或称“IC”结构域IC I～ICIII，以及三个“外部细胞环”或称“EC”结构域EC I～EC III连接。基序及其变体定义为但不限于与TM III和IC II重叠的MAYDRYVAIC基序(SEQ ID NO:53)，与IC III和TM VI重叠的FSTCSSH基序(SEQ ID NO:54)，TM VII中的PMLNPFIY基序(SEQ ID NO:55)以及EC II中的三个保守C残基，以及TM I中高度保守的GN残基的存在[Zhang,X.&Firestein,S.Nat.Neurosci.5,124–133(2002)；Malnic,B.,et al.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.101,2584–2589(2004)]。
“OR”核酸编码具有七个具有“G蛋白偶联受体活性”的跨膜区的GPCR家族，例如，它们可响应细胞外刺激而结合G蛋白并通过刺激酶如磷脂酶C和腺苷酸环化酶而促进第二信使如IP3、cAMP、cGMP和Ca2+的产生。
“旁系同源”OR基因或“旁系同源物”是基因重复的结果，是指同一物种内密切相关的同源基因。
“直系同源”OR基因或“直系同源物”定义为由共同祖先中存在的基因系统发育连接，并且指其他物种中密切相关的同源基因。
“N末端结构域”区域开始于N末端，并延伸至靠近第一跨膜区起点的区域。
“跨膜区”包含七个“跨膜结构域”，其是指位于质膜内的OR多肽的结构域，并且还可以包括相应的细胞质环(细胞内)和细胞外环。七个跨膜区、细胞外环和细胞质环可以使用标准方法鉴定，例如疏水性分布图，或如Kyte&Doolittle,J.Mol.Biol.,157:105-32(1982)或在Stryer中所描述的。跨膜结构域的一般二级和三级结构，特别是G蛋白偶联受体的七个跨膜结构域，例如嗅觉受体是本领域已知的。因此，可以基于已知的跨膜结构域序列预测一级结构序列，如下文详细描述的。这些跨膜结构域可用于体外配体结合测定。
在测试调节OR家族成员介导的嗅觉转导的化合物的测定的语境中，短语“功能性效应”包括确定间接或直接受到受体影响的任何参数，例如功能性、物理性和化学性效应。它包括配体结合，离子通量、膜电位、电流、转录、G蛋白结合、GPCR磷酸化或去磷酸化、信号转导受体-配体相互作用、第二信使浓度(例如，cAMP、cGMP IP3或细胞内Ca2+)的变化，体外、体内和离体，还包括其他生理作用，例如神经递质或激素释放的增加或减少。
在测定的语境中，“确定功能性效应”或“确认活性”是指化合物的测定，其增加或减少间接或直接受OR家族成员影响的参数，例如功能性、物理性和化学性效应。这些功能性效应可以通过本领域技术人员已知的任何方法测量，例如，光谱特征(例如，荧光、吸光度、折射率)、流体动力学(例如，形状)、色谱或溶解度性质、膜片钳、电压敏感染料、全细胞电流、放射性同位素外排、诱导型标记、卵母细胞OR基因表达的变化；组织培养细胞OR表达；OR基因或活性诱导基因(如egr-1或c-fos)的转录激活；配体结合试验；电压、膜电位和电导变化；离子通量测定；细胞内第二信使如cAMP、cGMP和肌醇三磷酸(IP3)的变化；细胞内钙水平的变化；神经递质释放等。
OR基因或蛋白质的“粘合剂”、“抑制剂”、“阻断剂”、“限制剂”和/或“调节剂”可互换使用，是指结合、抑制、阻断、限制或调节用于鉴定嗅觉转导的体内、体外和离体测定的分子，例如配体、激动剂、拮抗剂、增强剂及它们的同源物和模拟物。
限制剂(inhibitors)是例如结合、部分或完全阻断刺激、减少、抑制、预防、延迟激活、失活、脱敏或下调嗅觉转导的化合物，例如拮抗剂(antagonists)。另一方面，激活剂(activators)是例如结合、刺激、增加、开放激活、促进、增强激活、敏化或上调嗅觉转导的化合物，例如激动剂(agonists)。
调节剂包括例如改变受体与结合激活剂或限制剂的细胞外蛋白质(例如气味结合蛋白质、ebnerin和疏水性载体家族的其他成员、或脂质运载蛋白家族成员)的相互作用的化合物；G蛋白；激酶(例如，视紫红质激酶和β肾上腺素能受体激酶的同源物，其参与受体的失活和脱敏)；和抑制蛋白，其也使受体失活和脱敏。
调节剂还包括改变OR的亲和力或转导功效的化合物，其改变激活剂对OR的作用。调节剂可包括OR家族成员的遗传修饰形式，例如具有改变的活性，以及天然存在的和合成的配体、拮抗剂、激动剂、小化学分子等。限制剂和激活剂的这种测定包括例如，在细胞或细胞膜中表达OR家族成员，在存在或不存在调味料、香料或恶臭分子(例如，如上所述的引起恶臭的物质)的情况下应用推定的调节剂化合物，然后确定对嗅觉转导的功能影响。将包含用潜在激活剂、限制剂或调节剂处理的OR家族成员的样品或测定与不含限制剂、激活剂或调节剂的对照样品进行比较，以检查调节程度。对照样品(未用调节剂处理)的相对最大OR活性值为100％。当OR活性值相对于对照为约80％或更少，70％或更少，60％或更少，50％或更少，40％或更少，30％或更少或25～0％，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10％时，可实现OR的抑制。
本文所用的术语“纯化的”、“基本上纯化的”和“分离的”是指不含本发明化合物通常与其天然状态相关的其他不同化合物的状态，因此“纯化的”、“基本上纯化的”和“分离的”物品占给定样品质量按重量计至少0.5％、1％、5％、10％或20％，或至少50％或75％。在一个特定的实施方案中，这些术语是指本发明的化合物占给定样品质量按重量计至少95％、96％、97％、98％、99％或100％。如本文所用，当提及核酸或蛋白质时，核酸或蛋白质的术语“纯化的”、“基本上纯化的”和“分离的”，也指不同于天然存在于哺乳动物，特别是人体中的该核酸或蛋白质的纯化或浓缩状态。任何纯化程度或浓度，只要大于天然存在于哺乳动物，特别是人体中的纯度或浓度，包括(1)从其他相关结构或化合物中的纯化，或(2)与在哺乳动物，特别是人体中通常不相关的结构或化合物的缔合，都在“分离的”的含义内。根据本领域技术人员已知的各种方法和过程，本文所述的核酸、蛋白质或核酸或蛋白质的类别可以是分离的，或如若不然与它们通常在性质上不相关的结构或化合物相缔合。
如本文所用，术语“进行扩增(amplifying)”和“扩增(amplification)”是指使用任何合适的扩增方法用于产生或检测天然表达的核酸的重组体，如下文详细描述的。例如，本发明提供用于扩增(例如，通过聚合酶链反应，PCR)天然表达的(例如，基因组DNA或mRNA)或本发明在体内、离体或体外的重组的核酸(例如cDNA)的方法和试剂(例如，特异性简并寡核苷酸引物对，寡聚dT引物)。
术语“7-跨膜受体”是指属于跨膜蛋白超家族的多肽，其具有跨越质膜七次的七个结构域(因此，这七个结构域被称为“跨膜”或称“TM”结构域TM I～TM VII)。嗅觉和某些味觉受体的家族都属于这个超级家庭。7-跨膜受体多肽具有相似和特征性的一级、二级和三级结构，如下面进一步详细讨论的。
术语“核酸”或“核酸序列”是指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸寡核苷酸。该术语包括含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，即寡核苷酸。该术语还包括具有合成骨架的核酸样结构。除非另有说明，否则特定核酸序列还隐含地包括其保守修饰的变体(例如简并密码子取代)和互补序列、以及明确指出的序列。具体地，简并密码子取代可以通过产生例如其中一个或多个选定密码子的第三位置被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现。
除了本文公开的序列中显示的基因序列之外，变体还包括可能存在于给定群体内的DNA序列多态性，其可能导致本发明公开的多肽的氨基酸序列的变化，这对于本领域技术人员来说是显而易见的。由于天然等位基因变异，这种遗传多态性可能存在于来自不同群体的细胞或来自一个群体内的细胞中。等位基因变体还可包括功能性等同物。
进一步的实施方案还涉及通过来自具体公开的核酸的此类序列多态性衍生的分子。这些天然变异通常在基因的核苷酸序列或本发明公开的多肽的氨基酸序列中产生约1～5％的变化。如上所述，编码本文实施方案的多肽的核酸是修饰旨在用于本文所述方法的非人宿主生物体或宿主细胞的有用工具。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物，无论是否包含天然存在的氨基酸或聚合物和非天然存在的氨基酸或聚合物。当参考核酸的部分使用时，术语“异源的”表示核酸包含两个或更多个在自然界中彼此不存在相同关系的子序列。例如，核酸通常是重组产生的，具有来自无关基因的两个或更多个序列，其被排列以产生新的功能性核酸，例如来自一个来源的启动子和来自另一个来源的编码区。类似地，异源蛋白质表明该蛋白质包含两个或更多个在自然界中彼此不存在相同关系的子序列(例如，融合蛋白)。
“启动子”定义为指导核酸转录的核酸序列阵列。如本文所用，启动子包括转录起始位点附近的必要核酸序列的TATA盒，例如，在聚合酶II型启动子的情况下。启动子还可选地包括远端增强子或阻遏子元件，其可以位于距转录起始位点数千碱基对的位置。“组成型”启动子是在大多数环境和发育条件下具有活性的启动子。“诱导型”启动子是在环境或发育调节下有活性的启动子。术语“可操作地连接”是指核酸表达控制序列(例如启动子或转录因子结合位点阵列)与第二核酸序列之间的功能性连接，其中表达控制序列指导核酸对应于第二序列的转录。
如本文所用，“重组”是指在体外合成或以其他方式操作的多核苷酸(例如，“重组多核苷酸”)；是指使用重组多核苷酸在细胞或其他生物系统产生基因产物的方法；或是指重组多核苷酸编码的多肽(“重组蛋白质”)。“重组”还意指将具有来自不同来源的各种编码区或结构域或启动子序列的核酸连接到表达盒或载体中，用于表达例如包含本发明的易位结构域的融合蛋白的诱导型或组成型表达和使用引物潜在扩增的核酸序列。“重组”还指通过基因组编辑技术(例如CRISPR/Cas9)获得的导致内源基因(例如本文提及的受体基因)稳定或瞬时表达的细胞的修饰。
术语“表达载体”是指用于在体外、离体或体内、组成型或诱导型地在任何细胞中，包括原核、酵母、真菌、植物、昆虫或哺乳动物细胞内表达本发明核酸序列的任何重组表达系统。该术语包括任何线性或环状表达系统，包括但不限于病毒载体、噬菌体和质粒。技术人员能够根据表达系统选择合适的载体。该术语包括保持附加型或整合到宿主细胞基因组中的表达系统。该表达系统可以具有自我复制或非自我复制的能力，即驱动细胞中的瞬时表达。该术语包括重组“表达盒”，其可含有转录重组核酸所需的最小元素。该术语还涵盖用于通过例如基因组编辑方法(例如CRISPR/Cas9)表达内源基因的盒或载体。
“非人生物体或宿主细胞”是指含有本文所述核酸或表达载体并支持表达载体复制或表达的非人生物体或细胞。宿主细胞可以是原核细胞，例如大肠杆菌，或真核细胞，例如酵母、昆虫、两栖动物或哺乳动物细胞，例如CHO、HeLa、HEK-293等，例如培养的细胞、外植体和体内细胞。
“标签”(tag)或“标签组合”是指可以添加到气味剂受体蛋白质中的短多肽序列。通常，将编码“标签”或“标签组合”的DNA添加到编码受体的DNA中，最终产生融合蛋白，其中“标签”或“标签组合”融合到受体的N-末端或C-末端。Lucy、
Figure BDA0002388830040000141
和/或Rho标签可以增强受体向细胞膜的运输，因此可以帮助表达功能性气味剂受体，用于体外基于细胞的测定[Shepard,B.et al.PLoS One 8,e68758–e68758(2013),以及Zhuang,H.&Matsunami,H.J.Biol.Chem.282,15284–15293(2007)]。
“Geonol”和/或“Geosmin”是指(4S,4aS,8aR)-4,8a-二甲基-1,2,3,4,5,6,7,-八氢萘-4a-酚。
特定实施方案
特别地，本发明利用人嗅觉受体(OR)OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3、OR8G1，和相应的小鼠直系同源物Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164和Olfr558，以及小鼠OR，Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46作为引起恶臭的物质geonol、二甲基三硫(DMTS)、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸和transpirol(3-甲基-3-巯基己醇)的受体，如表1a所示。
表1a：人类气味剂受体和与直系同源小鼠受体的配对以及它们在氨基酸水平上的对应同一性以及其他小鼠OR；以及它们各自的激动剂。
Figure BDA0002388830040000151
表1b列出了根据本发明应用的OR的相应的SEQ ID NO:
表1b：人和小鼠气味剂受体的SEQ ID NO
Figure BDA0002388830040000161
NA＝核酸序列；AA＝氨基酸序列
这些受体以前并没有与从由geonol、二甲基三硫(DMTS)、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸和transpirol构成的群组中选出的引起恶臭的物质相关联。
在一个实施方案中，本文提供了一种分离的核酸分子，其包含与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或它们的反向互补序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。
在一个实施方案中，本文提供了如上所述的分离的核酸序列，其编码多肽，该多肽包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，本文提供了分离的多肽，其包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，非人生物体或宿主细胞经转化以表达多肽，该多肽包含与SEQID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，非人生物体或宿主细胞经转化以表达多肽，该多肽包含与SEQID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75相同的氨基酸序列。
本文还提供了表达载体，其包含编码多肽的核酸，该多肽包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
本文还提供了包含核酸的表达载体，该核酸包含与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或它们的反向互补序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核酸序列。
本文还提供了具有核酸的表达载体，其中该核酸包含与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或它们的反向互补序列相同的核苷酸序列。
更具体而言，本发明涉及以下的具体实施方案：
1.一种鉴定化合物的方法，该化合物结合、抑制、阻断、限制和/或调节嗅觉受体(OR)的活性，该嗅觉受体的活性由引起衣物恶臭、发霉恶臭和/或汗液恶臭的物质激活，该方法包括：
a.使受试物质和所述引起衣物恶臭和/或汗液恶臭的物质接触至少一种，特别是单一一种嗅觉受体多肽，该嗅觉受体多肽从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3、OR8G1、Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46以及它们的嵌合体或功能片段；或接触与上述至少一种，特别是单一一种嗅觉受体多肽具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的至少一种嗅觉受体多肽；并且
b.通过在存在和不存在受试物质的情况下测量所述嗅觉受体的响应，来测量所述至少一种，特别是单一一种嗅觉受体对引起恶臭物质的响应。
OR的特定亚组包括人OR，OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3和OR8G1。
OR的另一特定亚组包括小鼠OR，Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46。
2.实施方案1的方法，进一步包括：
c.根据在存在和不存在该受试物质的情况下所测得的响应，鉴定能调节所述至少一种，特别是单一一种嗅觉受体的响应的受试物质；和
d.选择所鉴定的受试物质作为调节所述至少一种，特别是单一一种嗅觉受体对引起恶臭的物质的响应的化合物。
3.实施方案1或2的方法，其中，所述引起恶臭的物质从由如下构成的群组中选出：geonol，二甲基三硫(DMTS)，1-辛烯-3-醇，丁酸，3-甲基-2-己烯酸，3-羟基-3-甲基-己酸，transpirol，以及至少两种(如两种或三种)所述物质的混合物。
4.前述实施方案中任一项的方法，其中所述至少一种嗅觉受体多肽：
a.包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或
b.由核酸分子编码，该核酸分子包含与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或它们的反向互补序列具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。
该实施方案的OR的特定亚组是或衍生自SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、57、59或61。
该实施方案的OR的另一特定亚组由核酸分子编码，该核酸分子包含SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、56、58、60的核苷酸序列或由其衍生的核苷酸序列。
5.实施方案4的方法，其中该多肽：
a.包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少90％、95％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或
b.由核酸分子编码，该核酸分子包含与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或它们的反向互补序列具有至少90％、95％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。
该实施方案的OR的特定亚组是或衍生自SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、57、59或61。
该实施方案的OR的另一特定亚组由核酸分子编码，该核酸分子包含SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、56、58、60的核苷酸序列或由其衍生的核苷酸序列。
6.实施方案1至5中任一项的方法，其中，所述引起恶臭的物质是引起衣物恶臭的物质，该引起衣物恶臭的物质从由如下构成的群组中选出：geonol，DMTS，1-辛烯-3-醇以及至少两种所述物质的混合物。
7.实施方案1至5中任一项的方法，其中，所述引起恶臭的物质是引起发霉恶臭的物质，该引起发霉恶臭的物质从由如下构成的群组中选出：geonol，DMTS，1-辛烯-3-醇以及至少两种所述物质的混合物。
8.实施方案1至5中任一项的方法，其中，所述引起恶臭的物质是引起汗液恶臭的物质，该引起汗液恶臭的物质从由如下构成的群组中选出：丁酸，3-甲基-2-己烯酸，3-羟基-3-甲基-己酸，transpirol以及至少两种所述物质的混合物。
9.实施方案6或7的方法，其中所述嗅觉受体多肽从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR4S2、Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr1193、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr96、Olfr1322、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364和Olfr937；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。该实施方案的OR的特定亚组选自OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3和OR4S2。
10.实施方式9的方法，其中，该引起恶臭的物质包含1-辛烯-3-醇，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR5K1、OR4Q3、Olfr263、Olfr403、Olfr137、Olfr173、Olfr735、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364和Olfr937；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。该实施方案的OR的特定亚组选自OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR5K1和OR4Q3。
11.实施方案9的方法，其中，该引起恶臭的物质包含geonol，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR1A1、OR11A1、OR2M3、Olfr403、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr96和Olfr1322；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。该实施方案的OR的特定亚组选自OR11A1、OR2M3和OR1A1。
12.实施方案9的方法，其中该引起恶臭的物质包含DMTS，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR5K1、OR4S2、Olfr263、Olfr1193、Olfr173和Olfr403；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。该实施方案的OR的特定亚组选自OR2W1、OR1A1、OR5K1和OR4S2。
13.实施方案8的方法，其中该嗅觉受体多肽从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR5K1、OR51E1、OR51I2、Olfr263、Olfr403、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr1126、Olfr558和Olfr46；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。该实施方案的OR的特定亚组选自OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR5K1、OR51E1和OR51I2。
14.实施方案13的方法，其中该引起恶臭的物质包含丁酸，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR51E1和Olfr558；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。该实施方案的OR的特定亚组是OR51E1。
15.实施方案13的方法，其中该引起恶臭的物质包含3-甲基-2-己烯酸，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR51I2、OR2W1、Olfr641和Olfr263；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
16.实施方案13的方法，其中，该引起恶臭的物质包含3-羟基-3-甲基-己酸，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、Olfr1126和Olfr263；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
17.实施方案13的方法，其中，该引起恶臭的物质包含transpirol，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR5K1、Olfr263、Olfr137、Olfr173、Olfr403和Olfr46。它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。该实施方案的OR的特定亚组选自OR2W1、OR1A1、OR2J3和OR5K1。
18.一种鉴定化合物的方法，该化合物结合、抑制、阻断、限制和/或调节至少一种由引起恶臭的物质激活的嗅觉受体的活性，其中该受体是一种多肽，该多肽：
a.包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或
b.由核酸分子编码，该核酸分子包含与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或它们的反向互补序列具有至少70％，例如75％、80％、85％、90％，特别是95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，
其中，该方法包括：
1.使受体或其嵌合体或片段与化合物接触；
2.确定该化合物是否对该受体的活性有影响；和
其中所述引起恶臭的物质从由如下构成的群组中选出：geonol，DMTS，1-辛烯-3-醇，丁酸，3-甲基-2-己烯酸，3-羟基-3-甲基-己酸，transpirol，以及至少两种所述物质的混合物。
该实施方案的OR的特定亚组是或衍生自SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、57、59或61。
该实施方案的OR的另一特定亚组由核酸分子编码，该核酸分子包含SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、56、58、60的核苷酸序列或由其衍生的核苷酸序列。
19.一种鉴定化合物的方法，该化合物结合、抑制、阻断、限制和/或调节嗅觉受体的活性，该嗅觉受体的活性由引起衣物恶臭、发霉恶臭和/或汗液恶臭的物质激活，所述物质从由如下构成的群组中选出：geonol，DMTS，1-辛烯-3-醇，丁酸，3-甲基-2-己烯酸，3-羟基-3-甲基-己酸，transpirol和至少两种所述物质的混合物，该方法包括：
(i)使细胞系与至少一种化合物接触，该细胞系表达至少一种嗅觉受体多肽，该嗅觉受体多肽从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3、OR8G1、Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46以及它们的嵌合体或功能片段；或与上述至少一种嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的至少一种嗅觉受体多肽；
(ii)筛选出结合、抑制、阻断、限制和/或调节所述嗅觉受体多肽的活性的化合物；和
(iii)如果一化合物结合、抑制、阻断、限制和/或调节所述受体多肽的活性，则鉴定出推定能调节衣物恶臭、发霉恶臭和/或汗液恶臭的化合物。
OR的特定亚组包括OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3和OR8G1。
OR的另一特定亚组是Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46。
20.一种分离的多肽，其包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
21.一种分离的核酸分子、其包含编码实施方案20的多肽的核酸序列。
22.实施方案20的分离的核酸分子，其包含与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或它们的反向互补序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核酸序列。
23.一种重组核酸分子，其包含：
a.包含标签组合的核酸，该标签组合包含Lucy标签、
Figure BDA0002388830040000261
标签和/或Rho标签中的至少一种；和
b.编码受体的核酸，该受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3、OR8G1、Olfr263、Olfr403、Ol735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46，或其互补物。
OR的特定亚组是OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3和OR8G1。
OR的另一特定亚组是Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46。
24.实施方案12的重组核酸分子，其中该Lucy标签包含SEQ ID NO:51，该
Figure BDA0002388830040000271
标签包含SEQ ID NO:47，并且该Rho标签包含SEQ ID NO:49。
25.一种表达载体，其包含实施方案21至24中任一项的核酸。
26.一种非人宿主生物体或宿主细胞，其已被修饰以表达从由如下构成的群组中选出的受体：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3、OR8G1、Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46。
OR的特定亚组是OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3和OR8G1。
OR的另一个特定亚组Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46。
27.实施方案26的非人宿主生物体或宿主细胞，其中该受体包含实施方案19的多肽或由实施方案21至24中任一项的核酸编码的多肽。
28.非人宿主生物体或宿主细胞，其包含：
a.实施方案21至24中任一项的核酸；或者
b.实施方案25的表达载体。
29.实施方案26至28中任一项的非人宿主生物体或宿主细胞，其中该细胞是真核细胞。
30.实施方案26至28中任一项的非人宿主生物体或宿主细胞，其中该细胞是原核细胞。
31.实施方案26至29中任一项的非人宿主生物体或宿主细胞，其中该非人宿主生物体或宿主细胞是从由如下构成的群组中选出的：HEK293、CHO、非洲爪蟾卵母细胞(Xenopus oocytes)、COS、酵母和衍生自嗅觉基板的细胞。
32.可以被一种物质激活的多肽的用途，用于鉴定恶臭调节化合物，该物质从由如下构成的群组中选出：geonol，DMTS，1-辛烯-3-醇，丁酸，3-甲基-2-己烯酸，3-羟基-3-甲基-己酸，transpirol和至少两种上述物质的混合物，该多肽包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
该实施方案的OR的特定亚组是或衍生自SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18或20。
如本文中所说明，根据本发明鉴定的OR对于单一一种MCS是特异性的，或者它们可以由一组结构上不同的MCS激活。因此，本发明允许用于鉴定合适的调节物质的不同策略。
例如，如果感兴趣的是仅用于Geonol的抑制剂，则在本发明的测定方法中使用OR11A1或OR2M3是可取的。
例如，如果感兴趣的是用于DTMS、1-辛烯-3-醇以及可选地Geonol的抑制剂，则在本发明的测定方法中使用OR2W3、OR5K1或可选地OR1A1是可取的。根据本文公开的实验结果，用于鉴定对抗引起衣物恶臭、发霉恶臭或汗液恶臭的物质的调节剂的其他测定策略或甚至用于鉴定对抗引起衣物恶臭、发霉恶臭和汗液恶臭的物质的调节剂的其他测定策略变得显而易见。
还提供了多种恶臭调节化合物中的任何一种，所述化合物结合、抑制、阻断、限制和/或调节嗅觉受体的活性，所述嗅觉受体的活性由引起恶臭的物质激活，所述引起恶臭的物质从由如下构成的群组中选出：geonol，DMTS，1-辛烯-3-醇，丁酸，3-甲基-2-己烯酸，3-羟基-3-甲基-己酸，transpirol和至少两种所述物质的混合物，并且其通过本文公开的方法鉴定。
根据一个实施方案，提供了一种恶臭调节化合物，其结合、抑制、阻断、限制和/或调节至少一种嗅觉受体的活性，该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3、OR8G1、Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46，并且该化合物通过本文公开的方法鉴定。该实施方案的OR的特定亚组是或衍生自OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3和OR8G1。OR的另一特定亚组是Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46。
在本发明的方法中待测试的受试物质没有特别限制。受试物质可以是天然物质或化学或生物合成的人工物质。受试物质可以是一种化合物，或多种化合物的混合物。
为了鉴定对于作为MCS的geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol具有特异性的未知受体，可以使用所述MCS化合物来筛选解离的嗅觉感觉神经元(OSN)。所述MCS化合物可以进一步用于针对所述MCS的特异性受体进行的基于细胞的剂量响应实验，以评估受体的特异性和敏感性。
在一个形态中，本文提供了鉴定用于恶臭调节化合物的哺乳动物气味剂受体的方法，以及该受体用于恶臭调节剂(例如结合、抑制、阻断、限制和/或调节OR活性)的筛选，特别是高通量筛选(HTS)的用途。
监测OR活性的方法
只要不损害OR的功能，就可以在本发明的方法中以任何形式使用它。例如，OR可以如下使用：固有表达OR的组织或细胞，例如从活体及其培养产物分离的嗅觉神经元；带有OR的嗅觉细胞膜；经基因修饰以表达OR及其培养产物的重组细胞；重组细胞的膜；和带有OR的人造脂质双层膜。
在另一个实施方案中，用于监测嗅觉受体活性的指示剂选自荧光钙指示剂染料、钙指示剂蛋白(例如GcaMP，一种遗传编码的钙指示剂)、荧光cAMP指示剂、细胞流动测定、细胞动态质量再分布测定、基于无标记的细胞测定、cAMP反应元件(CRE)介导的报告蛋白、生物化学cAMP HTRF测定、β-抑制蛋白测定或电生理学记录。特别地，选择钙指示剂染料，其可用于监测在嗅觉神经元(例如，Fura-2AM)的膜上表达的嗅觉受体的活性。
在一个具体的实施方案中，使用荧光显微镜或荧光激活细胞分选仪(FACS)依次筛选化合物，并测量钙染料荧光的气味依赖性变化。
在另一个实施方案中，嗅觉受体的分子3D受体模型用于评估计算机中的结合潜力，并鉴定可以激活、模拟、阻断、限制、调节和/或增强嗅觉受体活性的化合物。
例如，使用连接到显微操纵器的玻璃毛细管或FACS机器来分离由geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol激活的嗅觉神经元。通过Ca2+成像筛选小鼠嗅觉感觉神经元，类似于先前描述的程序[Malnic,B.,etal.Cell 96,713–723(1999)；Araneda,R.C.et al.J.Physiol.555,743-756(2004)；和WO2014/210585，其全部内容通过引用并入本文。特别地，使用电动可移动显微镜台来增加每个实验可筛选的数量至至少1,500个细胞。由于小鼠中约有1,200种不同的嗅觉受体，并且每种嗅觉感觉神经元仅表达1,200种嗅觉受体基因中的1种，因此该筛选能力几乎涵盖整个小鼠气味剂受体库。换言之，用于高通量嗅觉感觉神经元筛选的钙成像的组合，可以鉴定出几乎所有对特定气味物质有反应的气味剂受体。在一个特定形态中，可以分离出响应于geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol的气味剂受体。例如，分离出至少一个神经元。
对于嗅觉神经元的钙成像，可以在神经元解离之前从小鼠解剖主要的嗅觉上皮细胞。然后可以将解剖的嗅觉上皮细胞转移到解离缓冲液中进行机械和酶促解离。然后可以将解离的神经元接种到盖玻片上，允许通过荧光显微镜筛选数千个细胞，并且可以在31℃下使细胞加载钙敏感染料(Fura-2AM)例如约30分钟并转移到显微镜准备筛查。通过在解离的嗅觉神经元上灌注稀释的气味剂溶液(在生理盐水中)来刺激细胞。通过例如用50μm的恶臭化合物刺激受体，然后通过监测由Fura-2荧光的变化指示的细胞内Ca2+通量来鉴定响应恶臭化合物的稀有细胞。在分析之后，可以使用抽吸微量移液管从玻璃盖玻片取回响应细胞。然后将分离的细胞合并到一个样品中或单独处理以随后鉴定在响应细胞中表达为mRNA的气味剂受体基因。
在一个特定的实施方案中，根据Marko,N.F.,et al.,(2005)A robust methodfor the amplification of RNA in the sense orientation.BMC genomics,6,27；doi:10.1186/1471-2164-6-27(Eberwine方法)中通常描述的方法纯化和扩增嗅觉神经元的mRNA。使用下一代测序(NGS)技术对至少一部分转录组(直至包括整个转录组)进行测序或使用微阵列技术与已知基因杂交。NGS通常在Metzker,M.L.Nat.Rev.Genet.11,31–46(2010)中讨论和描述。在特定的实施方案中，汇集至少5个呈现相同响应谱的神经元。挑选后立即通过细胞裂解释放mRNA；没有DNA酶，也没有进行纯化步骤。通过连续两轮体外转录(IVT)来扩增mRNA。扩增可以根据MesageAmpII aRNA试剂盒(Ambion，AMA1751)进行，参数如下：两轮连续14小时长IVT。
在另一个实施方案中，使用基于LD-PCR(长距离聚合酶链式反应)的方法，例如在NGS-ready试剂盒中描述的方法(例如，Clontech/Takara，
Figure BDA0002388830040000321
Low InputRNA Kit for Sequencing-v3，目录号634848)，纯化和扩增单个嗅觉神经元的mRNA。首先将单细胞mRNA逆转录成相应的cDNA，随后用18个PCR循环扩增，并用作转录组测序的NGS样品。
在又一个实施方案中，通过将从分离的激活的嗅觉感觉神经元获得的NGS读数的结果与相同物种的参考基因组序列进行比较，确定geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol嗅觉受体的组或基因家族的同一性(例如，多达所挑选的神经元的数量)。特别地，推定的geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol受体将是嗅觉神经元衍生的NGS样品中最高度丰富的嗅觉受体mRNA，或存在于多于一个的独立的生物复制品中。由于嗅觉代码的组合性质(一种化合物激活许多OR，而一种OR可被许多化合物激活)，汇集由给定化合物激活的几种神经元，允许在单个NGS实验中检索几乎所有负责感知这些分子的受体。因此，汇集功能相似的神经元极大地提高了脱孤法的通量和速度。
然后使用标准生物信息学工具在假设同源序列受体保留相似功能的情况下鉴定与其他推定的哺乳动物(非人)的geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol受体最密切相关的人类气味剂受体。几种方法基于该假设[Armelin-Correa and Malnic(2017)]成功鉴定人OR-配体对，并且高达80％的小鼠-人直系同源物似乎保持相似的功能反应谱[Adipietro,K.A,et al.PLoS Genet.8,e1002821–e1002821(2012)]。可以使用BLASTP和/或BLASTN算法的默认参数，或其他直系同源对识别算法，例如InParanoid。
人类或非人类哺乳动物的geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol受体可适用于功能测定，其可用于鉴定结合、抑制、阻断、限制和/或调节嗅觉受体活性的化合物。特别地，该测定可以是基于细胞的测定或结合测定，而用于鉴定化合物的方法可以是高通量筛选测定。更具体地，本发明提供了基于受体的测定，其适于用化合物文库高通量筛选受体，以发现调节化合物(例如，结合、阻断、抑制、限制和掩蔽)。
在一个具体的实施方案中，geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol的受体基因序列从如下对geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol敏感的细胞鉴定：将汇集的神经元加热至75℃10分钟以破坏细胞膜并使其mRNA可用于扩增。当在有限量的起始材料下(通常为1～15个细胞)应用NGS技术时，该扩增步骤是重要的。根据Eberwine方法(IVT)的线性扩增确保维持表达基因的相对转录水平。连续两轮过夜(14h)的体外转录用于产生足够量的cRNA；然后使用扩增的cRNA产生Illumina HiSeq cDNA文库。得到的通常为75～150个碱基对的短序列(通常称为“读段”(reads))与小鼠的参考基因组(例如UCSC版本mm9或mm10)进行比对，以构建这些细胞的完整转录组。转录组数据的定量分析产生了转录的气味剂受体基因列表及其各自的表达水平。显示最丰富的mRNA水平(最丰富的“读段”)或存在于一次以上重复实验中的气味剂受体基因被认为是推定的geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol受体。
然后使用预测的小鼠OR基因挖掘小鼠和人类基因组数据库的最新版本，以鉴定小鼠(旁系同源基因)和人类(直系同源基因)中最密切相关的受体(即最高序列相似性)。该过程可以使用BLAST搜索算法(在NCBI网站上公开获得)，一种序列相似性搜索工具，其中先前从初始转录组分析获得的每个推定的基因序列被用作查询序列。在认为旁系同源和直系同源基因极有可能具有相似活性的假设下，从该数据挖掘过程中鉴定的新鉴定的基因被认为是潜在的geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol受体。在一个具体的实施方案中，进行序列同源性的成对比较以鉴定小鼠和人类中密切相关的受体，并如WO2014/210585中所述鉴定受体。也可以使用其他方法，例如RT-PCR和微阵列方法。
在另一个实施方案中，为了完成脱孤法，进一步在体外表达候选OR基因，以确认针对用于分离嗅觉感觉神经元和其他结构相关的目标化合物的化合物的活性。从对geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol有响应的分离的嗅觉神经元中鉴定的小鼠受体在其N-末端用短多肽序列(例如，
Figure BDA0002388830040000341
(SEQ IDNO:48)、Rho(SEQ ID NO:50；牛视紫红质受体的头20个氨基酸)和/或Lucy(SEQ ID NO:52；可裂解的亮氨酸信号肽序列)标签)修饰，在HEK 293T细胞中瞬时表达，并用geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol分别刺激以证实它们作为真正的geonol、二甲基三硫(DMTS)、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol受体的身份。在另一个实施方案中，无论是通过内源RTP1基因的激活还是通过转化，RTP1基因也可以在细胞系中表达。在该基于细胞的测定中，人类Gα亚基Gαolf的共表达激活Gs转导途径，其导致在与合适的配体结合后内部cAMP增加。或者，在基于细胞的测定中，人类Gα亚基Gα15的共表达激活Gq转导途径，其导致在与合适的配体结合后内部Ca2+增加。上述过程和迄今为止获得的结果用于验证快速和可靠地鉴定geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol的哺乳动物气味剂受体的过程。
进一步提供了用于鉴定与geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol气味剂受体结合的化合物的测定法。在另一个实施方案中，本文提供了一种恶臭调节化合物，其结合、抑制、阻断、限制和/或调节至少一种嗅觉受体的活性，所述嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR11A1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3、OR8G1、Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126、Olfr558、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr1322和Olfr46，并且该化合物通过本文所述方法鉴定，例如下文所述化合物。
在一个实施方案中，化合物的活性通过比较其与geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol的结合来确定。在另一个实施方案中，在允许化合物与geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol结合到受体上的条件下，使受体、或其嵌合体或其片段在geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol存在下与化合物接触。
在另一个实施方案中，使化合物与由geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol激活的受体、或其嵌合体或其片段接触，其中所述受体、或其嵌合体或其片段在经重组修饰以表达受体多肽的细胞中表达。
化合物的活性可以使用体内、离体、体外和合成筛选系统来确定。
在另一个实施方案中，用含有本文所述多肽的脂质体或病毒诱导的芽殖膜(budding membranes)进行接触。
在另一个实施方案中，用于鉴定结合、抑制、阻断、限制和/或调节可由geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol激活的嗅觉受体活性的化合物的方法可以在完整细胞或来自表达本文所述多肽的细胞的膜级分上进行。
因此，本文所述的OR参与由geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol引发的恶臭的感知，并且构成用于鉴定调节剂、拮抗剂和/或阻断剂的有价值的候选受体，所述调节剂、拮抗剂和/或阻断剂将调节、减少、抑制、限制和/或阻断对衣物恶臭、发霉恶臭和/或汗液恶臭的感知。
根据本发明适用的多肽
本发明涉及本文具体描述的多肽的“功能等同物”或“类似物”或“功能突变”。
例如，“功能等同物”是指一种多肽，其在用于OR活性的测试中显示至少1％至10％、或至少20％、或至少50％、或至少75％或至少90％更高或更低如本文所定义的OR活性。
根据本发明，“功能等同物”还涵盖特定的突变体，其在本文所述的氨基酸序列的至少一个序列位置中具有与具体陈述的氨基酸不同的氨基酸，但是仍然具有上述生物活性之一。因此，“功能等同物”包括可通过一个或多个，例如1至20个、1至15个或5至10个氨基酸的添加、取代特别是保守取代、缺失和/或倒置而获得的突变体，其中所述变化可以在任何序列位置上出现，只要它们导致突变体具有本发明特性的概貌。还特别地提供功能等同性，如果活性模式与在突变体和未改变的多肽之间定性地重合，即，如果例如观察到与相同的激动剂或拮抗剂的相互作用，但是速率不同(即，通过EC50或IC50值或任何本技术领域合适的其他参数来表示)。下表显示了合适的(保守)氨基酸取代的例子：
Figure BDA0002388830040000371
上述意义上的“功能等同物”也是所述多肽的“前体”，以及所述多肽的“功能衍生物”和“盐”。
在该情况下，“前体”是具有或不具有所需生物活性的多肽的天然或合成前体。
表述“盐”是指根据本发明的蛋白质分子的羧基的盐以及氨基的酸加成的盐。羧基的盐可以已知的方式生产，包括无机盐，例如钠、钙、铵、铁和锌盐，以及与有机碱例如胺，如三乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、哌啶等形成的盐。酸加成的盐，例如与无机酸例如盐酸或硫酸形成的盐，以及与有机酸例如乙酸和草酸形成的盐，也被本发明所涵盖。
根据本发明的多肽的“功能衍生物”还可以使用已知技术在功能性氨基酸侧基或它们的N末端或C末端产生。这样的衍生物包括例如：羧酸基的脂族酯，羧酸基的酰胺，它们可通过与氨或与伯或仲胺反应获得；游离氨基的N-酰基衍生物，其通过与酰基反应生成；或游离羟基的O-酰基衍生物，其通过与酰基反应生成。
“功能等同物”自然也包括可以从其他生物体获得的多肽以及天然存在的变体。例如，可以通过序列比较来确定同源序列区域的面积，并且等同的多肽可以基于本发明的具体参数来确定。
“功能等同物”还包括根据本发明的多肽(其例如表现出所需的生物学功能)的片段，优选单个结构域或序列基序。
此外，“功能等同物”是融合蛋白，其具有本文所述的多肽序列之一或由其衍生的功能等同物，以及在功能性N-末端或C-末端缔合(即，没有融合蛋白部分的实质性相互功能受损)中具有至少一个另外的功能不同的异源序列。这些异源序列的非限制性例子是例如信号肽、组氨酸锚或酶。
根据本发明还包括的“功能等同物”是与具体公开的多肽的同源物。它们与具体公开的氨基酸序列具有至少60％，优选至少75％，特别是至少80或85％，例如90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％的同源性(或同一性)，其通过Pearson and Lipman,Proc.Natl.Acad,Sci.(USA)85(8),1988,2444-2448的算法计算。根据本发明的同源多肽的以百分比表示的同源性或同一性尤其是指基于本文具体描述的氨基酸序列之一的总长度，以氨基酸残基的百分比表示的同一性。
以百分比表示的同一性数据也可以借助于BLAST比对，算法blastp(蛋白质-蛋白质BLAST)或通过应用本文下面详述的Clustal设置来确定。
在可能的蛋白质糖基化的情况下，根据本发明的“功能等同物”包括本文所述的去糖基化或糖基化形式的多肽，以及可以通过改变糖基化模式获得的经修饰形式的多肽。
根据本发明的多肽的此类功能等同物或同源物可以通过诱变产生，例如通过点突变，延长或缩短蛋白质或如下文更详细描述。
根据本发明的多肽的此类功能等同物或同源物可以通过筛选突变体例如缩短的突变体的组合数据库来鉴定。例如，蛋白质变体的多样性数据库可以通过在核酸水平上的组合诱变，例如通过合成寡核苷酸混合物的酶促连接来产生。有许多方法可用于从简并寡核苷酸序列产生潜在同源物的数据库。简并基因序列的化学合成可以在自动DNA合成仪中进行，然后可以将合成基因连接在合适的表达载体中。简并基因组的使用使得可以提供混合物中的所有序列，其编码所需的潜在蛋白质序列集合。简并寡核苷酸的合成方法是本领域技术人员已知的(例如Narang,S.A.(1983)；Itakura et al.(1984)(a)；Itakura etal.,(1984)(b)；Ike et al.(1983))。
在现有技术中，已知几种技术用于筛选通过点突变或缩短产生的组合数据库的基因产物，以及用于筛选具有选定性质的基因产物的cDNA文库。这些技术可以适用于快速筛选通过根据本发明的同源物的组合诱变产生的基因库。最常用于筛选大型基因库的基于高通量分析的技术包括在可复制的表达载体中克隆基因库，用所得载体数据库转化合适的细胞，以及在特定条件下表达组合基因，在所述条件下，所需活性的检测促进编码基因(其产物被检测)的载体的分离。递归整合诱变(REM)是一种提高数据库中功能突变体频率的技术，其可以与筛选测试结合使用，以鉴定同源物(Arkin and Yourvan(1992)；Delgrave etal.(1993))。
根据本发明适用的编码核酸序列
本发明还涉及编码本文定义的多肽的核酸序列。
本发明还涉及与本文具体公开的序列具有一定程度的“同一性”的核酸。两个核酸之间的“同一性”是指在每种情况下在核酸的整个长度上核苷酸的同一性。
例如，同一性可以通过Informax公司(美国)的Vector NTI Suite 7.1程序使用Clustal方法(Higgins DG,Sharp PM.((1989)))通过以下设置来计算：
多重比对参数：
Figure BDA0002388830040000401
成对比对参数：
Figure BDA0002388830040000411
或者，同一性可以根据Chenna et al.(2003)，网页：http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw/index.html#的方法和以下设置来确定：
Figure BDA0002388830040000412
本文提及的所有核酸序列(单链和双链DNA和RNA序列，例如cDNA和mRNA)可以以已知方式通过化学合成从核苷酸结构单元产生，例如通过双螺旋的各个重叠的互补核酸结构单元的片段缩合来实现。寡核苷酸的化学合成例如可以通过磷酰胺法(Voet,Voet,2ndedition,Wiley Press,New York,pages 896-897)以已知的方式进行。合成寡核苷酸的积累，和借助于DNA聚合酶的Klenow片段和连接反应的空位的填补，以及一般的克隆技术描述于Sambrook et al.(1989)，请参阅下文。
本发明还涉及编码上述多肽之一及其功能等同物的核酸序列(单链和双链DNA和RNA序列，例如cDNA和mRNA)，其可以例如使用人工核苷酸类似物获得。
本发明涉及编码根据本发明的多肽或其生物活性区段的分离的核酸分子，并且涉及核酸片段，其可以例如用作杂交探针或引物，用于鉴定或扩增根据本发明的编码核酸。
根据本发明的核酸分子可以另外包含来自编码遗传区域的3'和/或5'末端的非翻译序列。
本发明进一步涉及与具体描述的核苷酸序列或其区段互补的核酸分子。
根据本发明的核苷酸序列使得可以产生可用于鉴定和/或克隆其他细胞类型和生物体中的同源序列的探针和引物。此类探针或引物通常包含在“严格”条件下(参见下文)与根据本发明的核酸序列的有义链或相应的反义链的至少约12个，优选至少约25个，例如约40、50或75个连续核苷酸杂交的核苷酸序列区域。
“分离的”核酸分子与存在于核酸天然来源中的其他核酸分子分离，并且如果通过重组技术生产，则可以基本上不含其他细胞材料或培养基，或者如果通过化学合成，则可以不含化学前体或其他化学物质。
可以借助于分子生物学的标准技术和根据本发明提供的序列信息来分离根据本发明的核酸分子。例如，可以使用具体公开的完整序列之一或其片段作为杂交探针和标准杂交技术(例如，描述于Sambrook,(1989))从合适的cDNA文库中分离cDNA。另外，包含所公开的序列之一或其片段的核酸分子可以使用基于该序列构建的寡核苷酸引物，通过聚合酶链反应来分离。以此方式扩增的核酸可以克隆到合适的载体中，并可以通过DNA测序来表征。根据本发明的寡核苷酸也可以通过标准的合成方法，例如使用自动DNA合成仪制备。
根据本发明的核酸序列或其衍生物，这些序列的同源物或部分可以例如通过常规的杂交技术或PCR技术从其他细菌中，例如通过基因组或cDNA文库分离出来。这些DNA序列在标准条件下与根据本发明的序列杂交。
“杂交”是指多核苷酸或寡核苷酸在标准条件下结合几乎互补的序列的能力，而在这些条件下非互补配对者之间不发生非特异性结合。为此，序列可以是90～100％互补的。能够彼此特异性结合的互补序列的性质被用于例如Northern印迹或Southern印迹或PCR或RT-PCR中的引物结合。
保守区的短寡核苷酸有利地用于杂交。然而，也可能使用更长的本发明核酸片段或完整序列进行杂交。这些标准条件取决于所使用的核酸(寡核苷酸，更长的片段或完整序列)或用于杂交的核酸类型(DNA或RNA)而有所不同。例如，DNA:DNA杂交种的解链温度比相同长度的DNA:RNA杂交种低约10℃。
例如，根据特定核酸的不同，标准条件是指温度在42至58℃，在浓度为0.1至5 xSSC(1 X SSC＝0.15M NaCl，15mM柠檬酸钠，pH 7.2)的缓冲水溶液中，或另外在50％甲酰胺(例如42℃，5 x SSC，50％甲酰胺)的存在下。有利地，用于DNA:DNA杂交种的杂交条件是0.1×SSC，温度为约20℃至45℃，优选约30℃至45℃。对于DNA:RNA杂交种，杂交条件有利地为0.1×SSC，并且温度为约30℃至55℃，优选约45℃至55℃。这些所述的杂交温度是对于长度约100个核苷酸的核酸，以及在不存在甲酰胺的情况下G+C含量为50％的经计算的解链温度值的例子。DNA杂交的实验条件已在相关的遗传学教科书(例如Sambrook et al.,1989)中进行了描述，并且可以使用本领域技术人员已知的分子式来计算，例如取决于核酸的长度，杂交种的类型或G+C含量。本领域技术人员可以从以下教科书中获得有关杂交的更多信息：Ausubel et al.(eds),(1985),Brown(ed)(1991)。
“杂交”尤其可以在严格条件下进行。这样的杂交条件例如描述于Sambrook(1989)，或Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6。
如本文所用，术语“杂交或在一定条件下杂交”旨在描述杂交和洗涤的条件，在所述条件下彼此显著相同或同源的核苷酸序列保持彼此结合。该条件可以使得至少约70％，例如至少约80％和例如至少约85％、90％或95％同一性的序列保持彼此结合。本文提供了低严格度、中等和高严格度杂交条件的定义。
本领域技术人员可以通过例如Ausubel等人(1995,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,sections 2,4,and 6)所举例说明的那样以最少的实验来选择合适的杂交条件。另外，严格条件在Sambrook等人(1989,Molecular Cloning:ALaboratory Manual,2nd ed.,Cold Spring Harbor Press,chapters 7,9,and 11)中描述。
如本文所用，所限定的低严格度条件如下。含有DNA的滤膜在含有35％甲酰胺，5xSSC，50mM Tris-HCl(pH 7.5)，5mM EDTA，0.1％PVP，0.1％Ficoll，1％BSA和500μg/ml变性鲑鱼精子DNA的溶液中于40℃预处理6小时。杂交在相同的溶液中进行，并进行以下修改：0.02％PVP，0.02％Ficoll，0.2％BSA，100μg/ml鲑鱼精子DNA，10％(wt/vol)硫酸葡聚糖，并使用5-20x106 32P标记的探针。将滤膜在杂交混合物中于40℃孵育18～20小时，然后于55℃洗涤1.5小时。在含有2x SSC，25mM Tris-HCl(pH 7.4)，5mM EDTA和0.1％SDS的溶液中。用新鲜溶液代替洗涤溶液，并在60℃下再孵育1.5小时。将滤膜吸干并进行放射自显影。
如本文所用，所限定的中等严格度条件如下。含有DNA的滤膜在含有35％甲酰胺，5x SSC，50mM Tris-HCl(pH 7.5)，5mM EDTA，0.1％PVP，0.1％Ficoll，1％BSA和500μg/ml变性鲑鱼精子DNA的溶液中于50℃预处理7小时。杂交在相同的溶液中进行，并进行以下修改：0.02％PVP，0.02％Ficoll，0.2％BSA，100μg/ml鲑鱼精子DNA，10％(wt/vol)硫酸葡聚糖，并使用5-20x106 32P标记的探针。将滤膜在杂交混合物中于50℃孵育30小时，然后于55℃洗涤1.5小时。在含有2x SSC，25mM Tris-HCl(pH 7.4)，5mM EDTA和0.1％SDS的溶液中。用新鲜溶液代替洗涤溶液，并在60℃下再孵育1.5小时。将滤膜吸干并进行放射自显影。
如本文所用，所限定的高严格度条件如下。含DNA的滤膜在由6x SSC，50mM Tris-HCl(pH 7.5)，1mM EDTA，0.02％PVP，0.02％Ficoll，0.02％BSA和500μg/ml变性鲑鱼精子DNA组成的缓冲液中于65℃下预杂交8小时至过夜。在含有100μg/ml变性鲑鱼精子DNA和5-20x106 cpm 32P标记探针的预杂交混合物中，将滤膜在65℃下杂交48小时。滤膜在含有2xSSC，0.01％PVP，0.01％Ficoll和0.01％BSA的溶液中于37℃洗涤1小时。然后在0.1x SSC中于50℃洗涤45分钟。
如果上述条件不合适(例如，如用于种间杂交)，则可以使用本领域众所周知的其他低、中等和高严格度条件(例如，用于种间杂交)。
本发明还涉及具体公开的或可衍生的核酸序列的衍生物。
因此，根据本发明的其他核酸序列可以衍生自本文具体公开的序列，并且可以通过添加、取代、插入或缺失单个或几个核苷酸而与之不同，并且还编码具有所需特性概貌的多肽。
本发明还涵盖这样的核酸序列，其包含所谓的沉默突变，或根据具体原始或宿主生物体的密码子使用，与具体所述的序列相比已经改变，以及其天然存在的变体，例如剪接变体或等位基因变体。
还涉及可通过保守核苷酸取代(即，所讨论的氨基酸被具有相同电荷、大小、极性和/或溶解度的氨基酸取代)获得的序列。
本发明还涉及通过序列多态性从具体公开的核酸衍生的分子。由于自然变异，这些遗传多态性可存在于种群中的个体之间。这些自然变异通常会在基因的核苷酸序列中产生1～5％的变异。
根据本发明的核酸序列的衍生物是指例如等位基因变体，在所衍生的氨基酸水平上，其具有至少60％的同源性，优选至少80％的同源性，非常特别优选在整个氨基酸范围至少90％的同源性(关于氨基酸水平的同源性，应参考以上对于多肽给出的详细信息)。有利地，同源性可以在序列的部分区域上更高。
此外，衍生物也应理解为根据本发明的核酸序列的同源物，例如动物、植物、真菌或细菌的同源物，缩短的序列，编码和非编码DNA序列的单链DNA或RNA。例如，在DNA水平上，同源物在本文具体公开的序列中给定的整个DNA区域中具有至少40％，优选至少60％，特别优选至少70％，非常特别优选至少80％的同源性。
此外，衍生物应理解为例如与启动子的融合体。尽管不损害启动子的功能或功效，添加至所述核苷酸序列的启动子可以通过至少一种核苷酸交换、至少一种插入、倒位和/或缺失来修饰。而且，启动子的功效可以通过改变它们的序列来增加，或者可以与更有效的启动子甚至是不同属的生物体的启动子完全交换。
功能性多肽突变体的产生
此外，本领域技术人员熟悉用于产生功能性突变体的方法，也就是说，编码多肽的核苷酸序列，该多肽与SEQ ID NO.2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75中的任何序列有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性；和/或由核酸分子编码，该核酸分子包含与SEQ IDNO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或它们的反向互补序列具有至少70％序列同一性的核苷酸序列。
取决于所使用的技术，本领域技术人员可以将完全随机的或更有针对性的突变引入到基因或非编码核酸区域(例如对于调节表达很重要)中，并随后产生遗传文库。为此目的所需的分子生物学方法是技术人员已知的，例如描述于Sambrook and Russell,Molecular Cloning.3rd Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press 2001。
修饰基因并由此修饰由其编码的多肽的方法是本领域技术人员长期已知的，举例而言例如：
-位点特异性诱变，其中基因的单个或多个核苷酸以定向方式被替换(Trower MK(Ed.)1996；In vitro mutagenesis protocols.Humana Press,New Jersey)，
-饱和诱变，其中任何氨基酸的密码子都可以在基因的任何位点交换或添加(Kegler-Ebo DM,Docktor CM,DiMaio D(1994)Nucleic Acids Res 22:1593；BarettinoD,Feigenbutz M,Valcárel R,Stunnenberg HG(1994)Nucleic Acids Res 22:541；BarikS(1995)Mol Biotechnol 3:1)，
-易错聚合酶链反应，其中核苷酸序列被易错DNA聚合酶突变(Eckert KA,KunkelTA(1990)Nucleic Acids Res 18:3739)；
-SeSaM法(序列饱和法)，其中优选的交换被聚合酶阻止。Schenk et al.,Biospektrum,Vol.3,2006,277-279，
-突变株中的基因传代，其中例如由于DNA修复机制缺陷，核苷酸序列的突变率增加(Greener A,Callahan M,Jerpseth B(1996)An efficient random mutagenesistechnique using an E.coli mutator strain.In:Trower MK(Ed.)In vitromutagenesis protocols.Humana Press,New Jersey)，或
-DNA改组，其中形成并消化一组密切相关的基因，并将这些片段用作聚合酶链反应的模板，其中通过重复的链分离和重新结合，最终生成了全长的镶嵌基因(Stemmer WPC(1994)Nature 370:389；Stemmer WPC(1994)Proc Natl Acad Sci USA91:10747)。
使用所谓的定向进化(尤其描述于Reetz MT and Jaeger K-E(1999),TopicsCurr Chem 200:31；Zhao H,Moore JC,Volkov AA,Arnold FH(1999),Methods foroptimizing industrial polypeptides by directed evolution,In:Demain AL,DaviesJE(Ed.)Manual of industrial microbiology and biotechnology.American Societyfor Microbiology)，熟练的工人可以以定向的方式大规模生产功能性突变体。为此，在第一步中，首先，例如使用上文给出的方法，产生各个多肽的基因文库。基因文库以合适的方式表达，例如通过细菌或噬菌体展示系统来表达。
表达功能性突变体的宿主生物的相关基因(其功能在很大程度上与所需的特性相对应)可以提交给另一个突变周期。突变和选择或筛选的步骤可以迭代地重复，直到本发明的功能性突变体具有足够程度的所需特性。使用该迭代过程，可以分阶段进行有限数量的突变，例如1、2、3、4或5个突变，并评估和选择它们对所研究活性的影响。然后可以以相同的方式将所选择的突变体进行进一步的突变步骤。这样，可以显著减少待研究的单个突变体的数量。
根据本发明的结果还提供了与相关多肽的结构和序列有关的重要信息，这是以靶向方式产生具有所需修饰特性的其他多肽所必需的。特别地，可以定义所谓的“热点”，即潜在地适合于通过引入靶向突变来修饰特性的序列区段。
也可以推导出有关氨基酸序列位置的信息，在该区域中可以发生可能对活性几乎没有影响的突变，并且可以将其指定为潜在的“沉默突变”。
用于制备本发明多肽的构建体
如上所述的核苷酸序列可以是表达盒的一部分。术语表达盒和表达构建体同义使用。优选的重组表达构建体包含这样的核苷酸序列，其编码根据本发明的多肽并且在调节核酸序列的遗传控制之下。
在根据本发明应用的方法中，表达盒可以是表达载体，特别是重组表达载体的一部分。
根据本发明，“表达单位”应理解为是指具有表达活性的核酸，其包含如本文所定义的启动子，并且在与待表达的核酸或基因功能性连接后调节表达，即所述核酸或所述基因的转录和翻译。因此在这方面也被称为“调节核酸序列”。除启动子外，还可以存在其他调节元件，例如增强子。
根据本发明，“表达盒”或“表达构建体”应理解为在功能上与要表达的核酸或要表达的基因连接的表达单元。因此，与表达单元相反，表达盒不仅包含调节转录和翻译的核酸序列，而且还包含由于转录和翻译而作为蛋白质表达的核酸序列。
在本发明的语境中，术语“表达”或“过表达”描述了微生物中一种或多种由相应DNA编码的多肽的细胞内活性的产生或增加。为此，例如可以将基因导入到生物体中，用另一个基因替代现有基因，增加基因的拷贝数，使用强启动子或使用编码具有高活性的相应多肽的基因。可选地，这些措施可以组合。
优选地，根据本发明的此类构建体包含各自编码序列5'上游的启动子和3'下游的终止子序列，以及可选地其他常见的调控元件，在每种情况下均与编码序列可操作地连接。
根据本发明，“启动子”、“具有启动子活性的核酸”或“启动子序列”应理解为是指这样一种核酸，当与要转录的核酸功能性连接时，其调节所述核酸的转录。
在本文中，“功能性”或“可操作地”连接被理解为例如如下物质的顺序排列：具有启动子活性的核酸之一，和待转录的核酸序列以及可选的其他调控元件(例如确保核酸转录的核酸序列)和例如终止子，该顺序排列的方式为使得每个调控元件都能在核酸序列转录后执行其功能。这不一定需要化学意义上的直接连接。遗传控制序列，例如增强子序列，甚至可以从更远的位置甚至从其他DNA分子上对目标序列发挥作用。优选的排列是这样的，其中待转录的核酸序列位于启动子序列的后面(即3'端)，从而使两个序列共价连接在一起。启动子序列和待重组表达的核酸序列之间的距离可以小于200个碱基对，或小于100个碱基对或小于50个碱基对。
除启动子和终止子外，还可以提及以下作为其他调控元件的例子：靶向序列，增强子，聚腺苷酸化信号，选择标记，扩增信号，复制起点等。合适的调节序列描述于例如Goeddel,Gene Expression Technology:Methods in Enzymology 185,Academic Press,San Diego,CA(1990)。
根据本发明的核酸构建体特别地包含编码例如衍生自SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或其反向互补序列的多肽，或其衍生物和同源物，以及核酸序列，该核酸序列可由其衍生，并已与一个或多个调节信号可操作地或功能性连接，用于有利地控制例如增加基因表达。
除了这些调控序列之外，这些序列的天然调控可能仍存在于实际的结构基因之前，并且可选地可能已经进行了遗传修饰，因此天然调控已被关闭，基因的表达得到了增强。然而，核酸构建体也可以具有更简单的构建，即，在编码序列之前没有插入额外的调节信号，并且具有调节作用的天然启动子尚未去除。相反，天然调节序列被突变，使得不再发生调节并且基因表达增加。
优选的核酸构建体有利地还包含与启动子功能性连接的一个或多个已经提及的“增强子”序列，该序列使得增强核酸序列的表达成为可能。还可以在DNA序列的3'末端插入其他有利的序列，例如其他调控元件或终止子。根据本发明的核酸的一个或多个拷贝可以存在于构建体中。在该构建体中，还可以任选存在其他标计物，例如与营养缺陷性或抗生素抗性互补的基因，以便选择该构建体。
合适的调控序列的例子存在于启动子中，例如cos、tac、trp、tet、trp-tet、lpp、lac、lpp-lac、lacIq、T7、T5、T3、gal、trc、ara、rhaP(rhaPBAD)SP6、lambda-PR或lambda-PL启动子中，它们有利地用于革兰氏阴性细菌中。其他有利的调节序列存在于例如革兰氏阳性启动子amy和SPO2中，酵母或真菌启动子ADC1、MFalpha、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28、ADH中。人工启动子也可以用于调节。
为了在宿主生物体中表达，将核酸构建体有利地插入到载体，例如质粒或噬菌体中，这使得基因在宿主中的最佳表达成为可能。除了质粒和噬菌体，载体还应理解为是本领域技术人员已知的所有其他载体，即例如病毒，例如SV40、CMV、杆状病毒和腺病毒、转座子、IS元件、噬粒、粘粒和线性或环状DNA。这些载体能够在宿主生物体中自主复制或通过染色体复制。这些载体是本发明的进一步发展。
合适的质粒是例如在大肠杆菌pLG338、pACYC184、pBR322、pUC18、pUC19、pKC30、pRep4、pHS1、pKK223-3、pDHE19.2、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-III113-B1、λgt11或pBdCI中，在链霉菌pIJ101、pIJ364、pIJ702或pIJ361中，在芽孢杆菌pUB110、pC194或pBD214中，在棒状杆菌pSA77或pAJ667中，在真菌pALS1、pIL2或pBB116中，在酵母2alphaM、pAG-1、YEp6、YEp13或pEMBLYe23中，或在植物pLGV23、pGHlac+、pBIN19、pAK2004或pDH51中。上述质粒是可能的质粒的少量选择。其他质粒是技术人员众所周知的，并且可以在例如书籍Cloning Vectors(Eds.Pouwels P.H.et al.Elsevier,Amsterdam-New York-Oxford,1985,ISBN 0 444 904018)中找到。
在载体的进一步开发中，包含本发明的核酸构建体或本发明的核酸的载体也可以有利地以线性DNA的形式引入到微生物中并通过异源或同源重组整合到宿主生物体的基因组中。该线性DNA可以由线性化的载体例如质粒组成，或者仅由本发明的核酸构建体或核酸组成。
为了在生物体中异源基因的最佳表达，有利的是修饰核酸序列以匹配生物体中使用的特定“密码子使用”。“密码子使用”可以通过对所讨论的生物体的其他已知基因的计算机评估来容易地确定。
根据本发明的表达盒通过将合适的启动子融合到合适的编码核苷酸序列和终止子或聚腺苷酸化信号来产生。为此目的使用常规的重组和克隆技术，例如描述于T.Maniatis,E.F.Fritsch and J.Sambrook,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY(1989)和T.J.Silhavy,M.L.Berman and L.W.Enquist,Experiments with Gene Fusions,Cold Spring HarborLaboratory,Cold Spring Harbor,NY(1984)和Ausubel,F.M.et al.,Current Protocolsin Molecular Biology,Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience(1987)。
为了在合适的宿主生物体中表达，将重组核酸构建体或基因构建体有利地插入到宿主特异性载体中，这使得基因在宿主中的最佳表达成为可能。载体是技术人员众所周知的，并且可以在例如"cloning vectors"(Pouwels P.H.et al.,Ed.,Elsevier,Amsterdam-New York-Oxford,1985)中找到。
交叉引用的文献内容通过引用并入。
本文鉴定和/或使用的核酸和氨基酸序列列于下：
OR2W1
Homo sapiens_OR2W1_1-辛烯-3-醇,transpirol,3-羟基-3-甲基己酸,3-甲基-2-己烯酸和DMTS嗅觉受体(GI:26692)
DNA:SEQ ID NO:1
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PROT:SEQ ID NO:2
MDQSNYSSLHGFILLGFSNHPKMEMILSGVVAIFYLITLVGNTAIILASLLDSQLHTPMYFFLRNLSFLDLCFTTSIIPQVLVNLWGPDKTISYVGCIIQLYVYMWLGSVECLLLAVMSYDRFTAICKPLHYFVVMNPHLCLKMIIMIWSISLANSVVLCTLTLNLPTCGNNILDHFLCELPALVKIACVDTTTVEMSVFALGIIIVLTPLILILISYGYIAKAVLRTKSKASQRKAMNTCGSHLTVVSMFYGTIIYMYLQPGNRASKDQGKFLTLFYTVITPSLNPLIYTLRNKDMKDALKKLMRFHHKSTKIKRNCKS
OR1A1
Homo sapiens_OR1A1_1-辛烯-3-醇,transpirol,DMTS,和geonol嗅觉受体(GI:8383)
DNA:SEQ ID NO:3
atgagggaaaataaccagtcctctacactggaattcatcctcctgggagttactggtcagcaggaacaggaagatttcttctacatcctcttcctgttcatttaccccatcacattgattggaaacctgctcatcgtcctagccatttgctctgatgttcgccttcacaaccccatgtattttctccttgccaacctctccttggttgacatcttcttctcatcggtaaccatccctaagatgctggccaaccatctcttgggcagcaaatccatctcttttgggggatgcctaacgcagatgtatttcatgatagccttgggtaacacagacagctatattttggctgcaatggcatatgatcgagctgtggccatcagccgcccacttcactacacaacaattatgagtccacggtcttgtatctggcttattgctgggtcttgggtgattggaaatgccaatgccctcccccacactctgctcacagctagtctgtccttctgtggcaaccaggaagtggccaacttctactgtgacattacccccttgctgaagttatcctgttctgacatccactttcatgtgaagatgatgtacctaggggttggcattttctctgtgccattactatgcatcattgtctcctatattcgagtcttctccacagtcttccaggttccttccaccaagggcgtgctcaaggccttctccacctgtggttcccacctcacggttgtctctttgtattatggtacggtcatgggcacgtatttccgccctttgaccaattatagcctaaaagacgcagtgatcactgtaatgtacacggcagtgaccccaatgttaaattctttcatctacagtctgagaaatcgggacatgaaggctgccctgcggaaactcttcaacaagagaatctcctcgtaa
PROT:SEQ ID NO:4
MRENNQSSTLEFILLGVTGQQEQEDFFYILFLFIYPITLIGNLLIVLAICSDVRLHNPMYFLLANLSLVDIFFSSVTIPKMLANHLLGSKSISFGGCLTQMYFMIALGNTDSYILAAMAYDRAVAISRPLHYTTIMSPRSCIWLIAGSWVIGNANALPHTLLTASLSFCGNQEVANFYCDITPLLKLSCSDIHFHVKMMYLGVGIFSVPLLCIIVSYIRVFSTVFQVPSTKGVLKAFSTCGSHLTVVSLYYGTVMGTYFRPLTNYSLKDAVITVMYTAVTPMLNSFIYSLRNRDMKAALRKLFNKRISS
OR2J3
Homo sapiens_OR2J3_1-辛烯-3-醇,和transpirol嗅觉受体(GI:442186)
DNA:SEQ ID NO:5
atgaatgatgatggaaaagtcaatgctagctctgaggggtactttattttagttggattttctaattggcctcatctggaagtagttatctttgtggttgtcttgatcttctacttgatgacactgataggaaacctgttcatcatcatcctgtcatacctggactcccatctgcacacaccaatgtacttcttcctttcaaacctctcatttctggatctctgctacaccaccagctctatccctcagttgctggtcaatctctggggcccggaaaagaccatctcttatgctggttgcatgattcaactttactttgttctcgcactgggaaccgcagagtgtgtcctactggtggtgatgtcctatgaccgttatgcagctgtgtgtagacctttgcattacactgtcctcatgcaccctcgtttctgccacctgctggctgtggcttcttgggtaagtggttttaccaactcagcacttcattcctccttcaccttctgggtacctctgtgtggacaccgccaagtagatcactttttctgtgaagttccagcacttctgcgattatcgtgtgttgatacccatgtcaatgagctgaccctcatgatcacaagctccatatttgttctcatacctctcatcctcattctcacttcttatggtgccatcgtccgagctgtactgaggatgcagtcaaccactgggcttcagaaagtgtttggaacatgtggagctcatcttatggctgtatctctctttttcattccggccatgtgcatatatctccagccaccatcaggaaattctcaagatcaaggcaagttcattgccctcttttatactgttgtcacacctagtcttaaccctctaatctacaccctcagaaacaaagttgtaagaggggcagtgaagagactaatggggtgggaatga
PROT:SEQ ID NO:6
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OR4Q3
Homo sapiens_OR4Q3_1-辛烯-3-醇嗅觉受体(GI:441669)
DNA:SEQ ID NO:7
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PROT:SEQ ID NO:8
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OR5K1
Homo sapiens_OR5K1_1-辛烯-3-醇,transpirol,和DMTS嗅觉受体(GI:26339)
DNA:SEQ ID NO:9
atggctgaagaaaatcataccatgaaaaatgagtttatcctcacaggatttacagatcaccctgagctgaagactctgctgtttgtggtgttctttgccatctatctgatcaccgtggtggggaatattagtttggtggcactgatatttacacaccgtcggcttcacacaccaatgtacatctttctgggaaatctggctcttgtggattcttgctgtgcctgtgctattacccccaaaatgttagagaacttcttttctgagaacaaaaggatttccctctatgaatgtgcagtacagttttattttctttgcactgtggaaactgcagactgctttcttctggcagcaatggcctatgaccgctatgtggccatatgcaacccactgcagtaccacatcatgatgtccaagaaactctgcattcagatgaccacaggggccttcatagctggaaacctgcattccatgattcatgtagggcttgtatttaggttagttttctgtggatcgaatcacatcaaccacttttactgtgatattcttcccttgtatagactctcttgtgttgatccttatatcaatgaactggttctattcatcttctcaggttcagttcaagtctttaccataggtagtgtcttaatatcttatctctatattcttcttactattttcaaaatgaaatccaaagagggaagggccaaagctttttctacctgtgcatcccactttttgtcagtttcattattctatggatctcttttcttcatgtacgttagaccaaatttgcttgaagaaggggataaagatataccagctgcaattttatttacaatagtagttcccttactaaatcctttcatttatagcctgagaaatagggaagtaataagtgtcttaagaaaaattctgatgaagaaataa
PROT:SEQ ID NO:10
MAEENHTMKNEFILTGFTDHPELKTLLFVVFFAIYLITVVGNISLVALIFTHRRLHTPMYIFLGNLALVDSCCACAITPKMLENFFSENKRISLYECAVQFYFLCTVETADCFLLAAMAYDRYVAICNPLQYHIMMSKKLCIQMTTGAFIAGNLHSMIHV
GLVFRLVFCGSNHINHFYCDILPLYRLSCVDPYINELVLFIFSGSVQVFTIGSVLISYLYILLTIFKMKSKEGRAKAFSTCASHFLSVSLFYGSLFFMYVRPNLLEEGDKDIPAAILFTIVVPLLNPFIYSLRNREVISVLRKILMKK
OR11A1
Homo sapiens_OR11A1_geonol嗅觉受体(GI:26531)
DNA:SEQ ID NO:11
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PROT:SEQ ID NO:12
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OR2M3
Homo sapiens_OR2M3_geonol嗅觉受体(GI:127062)
DNA:SEQ ID NO:13
atggcaagggagaattcgaccttcaactccgacttcatcctcctgggaatcttcaatcacagccccacccacaccttcctcttctttctggtcctggccatcttttcagtggccttcatgggaaactctgtcatggttctcctcatctacctggacacccagctccacacccccatgtacctcctcctcagccaactgtccctcatggacctcatgctcatctgcaccaccgtacccaagatggccttcaactacctgtctggcagcaagtccatttctatggctggttgtgccacacaaattttcttctatacatcactgcttggctctgaatgctttcttttggctgttatggcttatgaccgctacactgccatttgccaccctctaagatacaccaatctcatgagccctaaaatttgtggacttatgactgccttttcctggatcctgggctctacggatggaattattgatgttgtagcaacattttccttctcctactgtgggtctcgggaaatagcccacttcttctgtgacttcccctccctactaatcctctcatgcagtgacacatcaatatttgaaaagattcttttcatctgctgtatagtaatgattgttttccctgttgcaatcatcattgcttcctatgctcgagttatcctggctgtcattcacatgggatctggagagggtcgtcgcaaagcttttactacttgttcctctcacctcttggtggtgggaatgtactatggagcagctttgttcatgtacatacggcccacatctgatcgctccccaacacaggacaagatggtgtctgtattctacaccatcctcactcccatgttgaatcccctcatctacagcctccgcaacaaggaggtgaccagagcattcatgaagatcttaggaaagggcaagtctggagagtga
PROT:SEQ ID NO:14
MARENSTFNSDFILLGIFNHSPTHTFLFFLVLAIFSVAFMGNSVMVLLIYLDTQLHTPMYLLLSQLSLMDLMLICTTVPKMAFNYLSGSKSISMAGCATQIFFYTSLLGSECFLLAVMAYDRYTAICHPLRYTNLMSPKICGLMTAFSWILGSTDGIIDVVATFSFSYCGSREIAHFFCDFPSLLILSCSDTSIFEKILFICCIVMIVFPVAIIIASYARVILAVIHMGSGEGRRKAFTTCSSHLLVVGMYYGAALFMYIRPTSDRSPTQDKMVSVFYTILTPMLNPLIYSLRNKEVTRAFMKILGKGKSGE
OR51E1
Homo sapiens_OR51E1_丁酸嗅觉受体(GI:14503)
DNA:SEQ ID NO:15
atggtggatcccaatggcaatgaatccagtgctacatacttcatcctaataggcctccctggtttagaagaggctcagttctggttggccttcccattgtgctccctctaccttattgctgtgctaggtaacttgacaatcatctacattgtgcggactgagcacagcctgcatgagcccatgtatatatttctttgcatgctttcaggcattgacatcctcatctccacctcatccatgcccaaaatgctggccatcttctggttcaattccactaccatccagtttgatgcttgtctgctacagatgtttgccatccactccttatctggcatggaatccacagtgctgctggccatggcttttgaccgctatgtggccatctgtcacccactgcgccatgccacagtacttacgttgcctcgtgtcaccaaaattggtgtggctgctgtggtgcggggggctgcactgatggcaccccttcctgtcttcatcaagcagctgcccttctgccgctccaatatcctttcccattcctactgcctacaccaagatgtcatgaagctggcctgtgatgatatccgggtcaatgtcgtctatggccttatcgtcatcatctccgccattggcctggactcacttctcatctccttctcatatctgcttattcttaagactgtgttgggcttgacacgtgaagcccaggccaaggcatttggcacttgcgtctctcatgtgtgtgctgtgttcatattctatgtacctttcattggattgtccatggtgcatcgctttagcaagcggcgtgactctccactgcccgtcatcttggccaatatctatctgctggttcctcctgtgctcaacccaattgtctatggagtgaagacaagggagattcgacagcgcatccttcgacttttccatgtggccacacacgcttcagagccctag
PROT:SEQ ID NO:16
MVDPNGNESSATYFILIGLPGLEEAQFWLAFPLCSLYLIAVLGNLTIIYIVRTEHSLHEPMYIFLCMLSGIDILISTSSMPKMLAIFWFNSTTIQFDACLLQMFAIHSLSGMESTVLLAMAFDRYVAICHPLRHATVLTLPRVTKIGVAAVVRGAALMAPLPVFIKQLPFCRSNILSHSYCLHQDVMKLACDDIRVNVVYGLIVIISAIGLDSLLISFSYLLILKTVLGLTREAQAKAFGTCVSHVCAVFIFYVPFIGLSMVHRFSKRRDSPLPVILANIYLLVPPVLNPIVYGVKTREIRQRILRLFHVATHASEP
OR4S2
Homo sapiens_OR4S2_DMTS嗅觉受体(GI:219431)
DNA:SEQ ID NO:17
atggaaaaaataaacaacgtaactgaattcattttctggggtctttctcagagcccagagattgagaaagtttgttttgtggtgttttctttcttctacataatcattcttctgggaaatctcctcatcatgctgacagtttgcctgagcaacctgtttaagtcacccatgtatttctttctcagcttcttgtcttttgtggacatttgttactcttcagtcacagctcccaagatgattgttgacctgttagcaaaggacaaaaccatctcctatgtggggtgcatgttgcaactgtttggagtacatttctttggttgcactgagatcttcatccttactgtaatggcctatgatcgttatgtggctatctgtaaacccctacattatatgaccatcatgaaccgggagacatgcaataaaatgttattagggacgtgggtaggtgggttcttacactccattatccaagtggctctggtagtccaactacccttttgtggacccaatgagatagatcactacttttgtgatgttcaccctgtgttgaaacttgcctgcacagaaacatacattgttggtgttgttgtgacagccaacagtggtaccattgctctggggagttttgttatcttgctaatctcctacagcatcatcctagtttccctgagaaagcagtcagcagaaggcaggcgcaaagccctctccacctgtggctcccacattgccatggtcgttatctttttcggcccctgtacttttatgtacatgcgccctgatacgaccttttcagaggataagatggtggctgtattttacaccattatcactcccatgttaaatcctctgatttatacactgagaaatgcagaagtaaagaatgcaatgaagaaactgtggggcagaaatgttttcttggaggctaaagggaaatag
PROT:SEQ ID NO:18
MEKINNVTEFIFWGLSQSPEIEKVCFVVFSFFYIIILLGNLLIMLTVCLSNLFKSPMYFFLSFLSFVDICYSSVTAPKMIVDLLAKDKTISYVGCMLQLFGVHFFGCTEIFILTVMAYDRYVAICKPLHYMTIMNRETCNKMLLGTWVGGFLHSIIQVALVVQLPFCGPNEIDHYFCDVHPVLKLACTETYIVGVVVTANSGTIALGSFVILLISYSIILVSLRKQSAEGRRKALSTCGSHIAMVVIFFGPCTFMYMRPDTTFSEDKMVAVFYTIITPMLNPLIYTLRNAEVKNAMKKLWGRNVFLEAKGK
OR51I2
Homo sapiens_OR51I2_3-甲基-2-己烯酸嗅觉受体(GI:507078)
DNA:SEQ ID NO:19
atggggttgttcaatgtcactcaccctgcattcttcctcctgactggtatccctggtctggagagctctcactcctggctgtcagggcccctctgcgtgatgtatgctgtggcccttgggggaaatacagtgatcctgcaggctgtgcgagtggagcccagcctccatgagcccatgtactacttcctgtccatgttgtccttcagtgatgtggccatatccatggccacactgcccactgtactccgaaccttctgcctcaatgcccgcaacatcacttttgatgcctgtctaattcagatgtttcttattcacttcttctccatgatggaatcaggtattctgctggccatgagttttgaccgctatgtggccatttgtgaccccttgcgctatgcaactgtgctcaccactgaagtcattgctgcaatgggtttaggtgcagctgctcgaagcttcatcacccttttccctcttccctttcttattaagaggctgcctatctgcagatccaatgttctttctcactcctactgcctgcacccagacatgatgaggcttgcctgtgctgatatcagtatcaacagcatctatggactctttgttcttgtatccacctttggcatggacctgttttttatcttcctctcctatgtgctcattctgcgttctgtcatggccactgcttcccgtgaggaacgcctcaaagctctcaacacatgtgtgtcacatatcctggctgtacttgcattttatgtgccaatgattggggtctccacagtgcaccgctttgggaagcatgtcccatgctacatacatgtcctcatgtcaaatgtgtacctatttgtgcctcctgtgctcaaccctctcatttatagcgccaagacaaaggaaatccgccgagccattttccgcatgtttcaccacatcaaaatatga
PROT:SEQ ID NO:20
MGLFNVTHPAFFLLTGIPGLESSHSWLSGPLCVMYAVALGGNTVILQAVRVEPSLHEPMYYFLSMLSFSDVAISMATLPTVLRTFCLNARNITFDACLIQMFLIHFFSMMESGILLAMSFDRYVAICDPLRYATVLTTEVIAAMGLGAAARSFITLFPLPFLIKRLPICRSNVLSHSYCLHPDMMRLACADISINSIYGLFVLVSTFGMDLFFIFLSYVLILRSVMATASREERLKALNTCVSHILAVLAFYVPMIGVSTVHRFGKHVPCYIHVLMSNVYLFVPPVLNPLIYSAKTKEIRRAIFRMFHHIKI
Olfr263
Mus musculus_Olfr263_1-辛烯-3-醇,DMTS,3-羟基-3-甲基己酸,transpirol,和3-甲基-2-己烯酸嗅觉受体(GI:18341)
DNA:SEQ ID NO:21
atggacccaagcaattacagtactttgcatgtttttatcctgcttggattctctgaccaccctcacctggaaatgatcctctctggagttgtcaccttcttttacattattacactggtgggtaacactgctataattcttgcatccctcctggatccccatctccatacaccaatgtactttttcctcaggaatctatctttcctggatttgtgtttcacaacaagcattgtccctcagatgctggttaacttgtggggacccgaaaagaccattagctctgtgggctgtattgttcagctctatgtgtatatgtggctgggctccattgagtgtctgctcctagctgtcatgtcctatgatcgtttcacagctatttgtaagcccttgcattactttgtaatcatgaatccacgtctatgcgtcaagatgatagtcatggtctggggtattagtttggccaactctgtaatattatgcacactcactgtgaatttgcctcgatgtggacacaacatcctggaccacttcctgtgtgagttgccagccatggtcaggatagcttgtgtagacacgacaacagttgaattgtctgtttttgctctaggcattgtcattgtccttacacctctcatccttattcttatttcctatggctacatagccaaaactgtgctcaacatgaagtcaaaggcagggcaacaaaaagcaatgaatacctgtggatcccatctcactgtggtctccatattctatggaactatcatctacatgtatctacaacccggtaacagggcctctaaggaccagggcaagttcctcaccctcttttacaccatcatcactccaagtctcaaccccctcatttacaccctaaggaacagagacatgaaagatgcactgaaaaaactcatgaggttttaccacagatttgccgaagtaaggagaaactag
PROT:SEQ ID NO:22
MDPSNYSTLHVFILLGFSDHPHLEMILSGVVTFFYIITLVGNTAIILASLLDPHLHTPMYFFLRNLSFLDLCFTTSIVPQMLVNLWGPEKTISSVGCIVQLYVYMWLGSIECLLLAVMSYDRFTAICKPLHYFVIMNPRLCVKMIVMVWGISLANSVILCTLTVNLPRCGHNILDHFLCELPAMVRIACVDTTTVELSVFALGIVIVLTPLILILISYGYIAKTVLNMKSKAGQQKAMNTCGSHLTVVSIFYGTIIYMYLQPGNRASKDQGKFLTLFYTIITPSLNPLIYTLRNRDMKDALKKLMRFYHRFAEVRRN
Olfr403
Mus musculus_Olfr403_1-辛烯-3-醇,DMTS,transpirol,和geonol嗅觉受体(GI:404316)
DNA:SEQ ID NO:23
atgagagaagaaaatgagtcttctaccatagatttcactctcctgggagttacaaggcagcgggagcaggaatatttcttcttcatcctcttcctgttcatttaccccatcacagtgtttgggaacatgctcatcatcctagccattcactctgacactcgcctccataaccctatgtactttttcctggccaacctctcccttgttgacatcttcttctcctctgtaactattcccaagatgctggccaaccatctcctaggtagcaaggccatctcctttgggggatgtatggcacagatgtacttcatgatatcattgggaaacacagacagttatatactagctgcaatggcatatgaccgagctgtggctatcagtcgcccgcttcattatgcaacaattatgagtccacaactttgtgtcctgctggttgctgggtcctgggtgattgcaaatgctaatgcactgccccacaccctactcacagctagattgtccttctgtggcaataaggatgtggccaacttctactgtgacattacacctttgctccagctgtcctgttctgacatccgcttcaatgtgaagatgatgtaccttggggtgggggtcttctctgtgccactgctgtgcatcatcatctcctatgtccgggtcttttccacagtcttgcgggttccatctaccaagggcttcctgaaggccttgtccacctgtggctctcacctgacagtggtgtccttgtattatgggacagtcatgggcatgtatttccggcccctgaccagttacagtctgaagcatgcattgataactgtgatgtacacggcagtgaccccaatgctgaaccctttcatctacagcctgaggaaccgggacatgaaggctgctctgaagaaactcttccactgccactcttcctcttcttccctcatgtga
PROT:SEQ ID NO:24
MREENESSTIDFTLLGVTRQREQEYFFFILFLFIYPITVFGNMLIILAIHSDTRLHNPMYFFLANLSLVDIFFSSVTIPKMLANHLLGSKAISFGGCMAQMYFMISLGNTDSYILAAMAYDRAVAISRPLHYATIMSPQLCVLLVAGSWVIANANALPHTLLTARLSFCGNKDVANFYCDITPLLQLSCSDIRFNVKMMYLGVGVFSVPLLCIIISYVRVFSTVLRVPSTKGFLKALSTCGSHLTVVSLYYGTVMGMYFRPLTSYSLKHALITVMYTAVTPMLNPFIYSLRNRDMKAALKKLFHCHSSSSSLM
Olfr735
Mus musculus_Olfr735_1-辛烯-3-醇嗅觉受体(GI:257909)
DNA:SEQ ID NO:25
atggtacacgcagacaagcaagaagtactttctcataatttttcatttttgtttaatttaacctacttagtccagtttaatttttcttccactaggtcgcttgatactcttggcttggagaaaaacaaaaacagctctgatgtgtcacgatttgtgcttctgggcctgtcgtcttcctgggagctccagttgtttctcttcttcacatttttgttgatttacctggttattgtcctgggaaaccttttgatagtgatggtcgtccaagctgatgctcacctgttccagtcacccatgtactattttctaagccatctgtctttcattgacctttgcctgagctgtgtggctgtacccaaaatgctaggagatttcctacagaaggagaagacaatatctttttcaggatgcctggcccaggtattctttcttcactttcttggagccagtgagatgttcctgttgactgttatggcctatgataggtatgttgccatatgcaaccctttgcactacctgacggtcatgaataaccacctgcgacttcggttggtgtttggctgctggtgtggaggtttcattcactctatcacacaggtcatgattgtcattcagctgcctttttgtggtcccaatgaactggacaacttctactgtgatgtcccccaggttgtcaagctggcctgcatggacacttacttggttgaggtgctgatggtctctaacagtggcatactgtctcttgtctgcttcttggtcctgctcttctcctatgctctcatcttgattactctgagaactcacctccaccggggccagagcaaggcactgtccacctgtgcttctcacttgacggtggtcagcctgatctttgtaccctgtgtattcatttacttgaggcctttctgtaccttctctgtggataaagtagtctctgtgttttacacagtgatcacacctatgctgaaccccctcatctatacactcagaaatgcagacatgaagcaagccatagaaaagctgagaaagaagcaagtggcatcccactgctttgctaaaggatga
PROT:SEQ ID NO:26
MVHADKQEVLSHNFSFLFNLTYLVQFNFSSTRSLDTLGLEKNKNSSDVSRFVLLGLSSSWELQLFLFFTFLLIYLVIVLGNLLIVMVVQADAHLFQSPMYYFLSHLSFIDLCLSCVAVPKMLGDFLQKEKTISFSGCLAQVFFLHFLGASEMFLLTVMAY
DRYVAICNPLHYLTVMNNHLRLRLVFGCWCGGFIHSITQVMIVIQLPFCGPNELDNFYCDVPQVVKLACMDTYLVEVLMVSNSGILSLVCFLVLLFSYALILITLRTHLHRGQSKALSTCASHLTVVSLIFVPCVFIYLRPFCTFSVDKVVSVFYTVITPMLNPLIYTLRNADMKQAIEKLRKKQVASHCFAKG
Olfr96
Mus musculus_Olfr96_geonol嗅觉受体(GI:258507)
DNA:SEQ ID NO:27
atgggaatcctttccacaggaaatcaaactgtcactgagtttgtacttcttggtttccatgaagtccctgggctgcacctcctgtttttttctgtgttcaccatcctctatgcctccatcatcacagggaacatgctcattgcagtggtggtggtgagctcccagaggcttcacacacccatgtatttctttctggtgaatctgtccttcatagagattgtctatacctccacagtggtgcccaaaatgctggaaggcttcttacaggaggccaccatatctgtggctggctgcttgctccagttctttgtttttggctctctggccacagatgagtgttttctgctggctgtgatggcatatgatcgatatctcgcaatttgtcaccctctacgatacccacacctcatggggcctcaatggtgcctggggttggtgctcacagtctggctgtctggcttcatggtagatggactagttgttgctctgatggcccagttgagattctgtggccccaacttagttgatcacttttactgtgatttttcacctttgatggtcctggcttgctcagatacccaagtggcccaggtgactacatttgttctctctgtggtcttcctgactgtcccctttgggctggttctgatctcctatgctcagattgtagtgactgtgctgagagttccttctgggaccagaagaaccaaggccttctccacatgctcctctcacctggctgtggtgtccacgttctatggaacactcatggtattgtacattgtgccctctgctgttcattctcagctcctctccaaggtcattgccctgctctacacagtggtcactcccatcttcaaccctgtcatctacaccttgaggaaccaggaggtgcagcaggcactaagaaggcttctctactgcaaaccaactgaaatgtga
PROT:SEQ ID NO:28
MGILSTGNQTVTEFVLLGFHEVPGLHLLFFSVFTILYASIITGNMLIAVVVVSSQRLHTPMYFFLVNLSFIEIVYTSTVVPKMLEGFLQEATISVAGCLLQFFVFGSLATDECFLLAVMAYDRYLAICHPLRYPHLMGPQWCLGLVLTVWLSGFMVDGLVVALMAQLRFCGPNLVDHFYCDFSPLMVLACSDTQVAQVTTFVLSVVFLTVPFGLVLISYAQIVVTVLRVPSGTRRTKAFSTCSSHLAVVSTFYGTLMVLYIVPSAVHSQLLSKVIALLYTVVTPIFNPVIYTLRNQEVQQALRRLLYCKPTEM
Olfr558
Mus musculus_Olfr558_丁酸嗅觉受体(GI:259097)
DNA:SEQ ID NO:29
atggtgggcttcaatagcaatgaatccagtgccacatatttcatcttaataggccttccaggattggaagaggttcagttttggctggctttccctttgtgttccctctaccttattgctgtgctaggtaacttgacaatcatctacattgtgaggacagagcacagcctgcatgagcccatgtatatctttctttgcatgctttctggcctagacatcctcatttccacctcatccatgccaaaaatgatggccatcttttggttcaattccactaccatccagtttgatgcttgtctggtacagatgtttgccatccattccttgtctggcatggagtccacagtgctgctggccatggcctttgaccgctatgtggccatttgccatcctctacggcatgccactgtgctgacattgcctcgtgttgccaagattggcatggctgctgtggtcaggggtgcagtactaatggcacccttacctgtcttcatcaaaaggttgcctttctgtcgttccaacatcctttctcattcctactgcctacaccaagatgtcatgaagctggcctgtgctgacatccgtgtcaatatcatttatggactcattgtcatcatctcagccattggtttggactcacttctcatttccttctcatatttgctcatcctcaagactgtgttgggcttgacacgtgaagcccaggcaaaagcgtttggcacttgtgtttcacatgtgtgtgctgttttcatcttctatgtgcctttcattggattgtcgatggtgcaccgtttcagcaagaggcgtgactctctcctgcctgtcattatggctaacatctatctgctagttcctcctgtgctcaaccccattgtctatggagtaaagacaaaggagatccggcagcgcattcttcgtcttttcctcgtgaccacacacacttcagatcactag
PROT:SEQ ID NO:30
MVGFNSNESSATYFILIGLPGLEEVQFWLAFPLCSLYLIAVLGNLTIIYIVRTEHSLHEPMYIFLCMLSGLDILISTSSMPKMMAIFWFNSTTIQFDACLVQMFAIHSLSGMESTVLLAMAFDRYVAICHPLRHATVLTLPRVAKIGMAAVVRGAVLMAPLPVFIKRLPFCRSNILSHSYCLHQDVMKLACADIRVNIIYGLIVIISAIGLDSLLISFSYLLILKTVLGLTREAQAKAFGTCVSHVCAVFIFYVPFIGLSMVHRFSKRRDSLLPVIMANIYLLVPPVLNPIVYGVKTKEIRQRILRLFLVTTHTSDH
Olfr1193
Mus musculus_Olfr1193_DMTS_嗅觉受体(GI:329460)
DNA:SEQ ID NO:31
atggcctcaaggacttattccatggaagaagtaaataatgtcactgaattcattttcttgggtctttctcagaaccctgaggttgaaaaagtgtgctttgtggtgttctccttcttttacatggtcattctgctaggaaacctcctcatcatgttgacagtttgcagtggcaatcttttcaagtttcccatgtattttttcctcaactttctgtcttttgtggacatttgctactcctcagtcacagcacccaagatgattattgacctgttagtgaagaaaaagactatatcctatgtggggtgcatgttacaactctttgtggttcatttctttggttgcactgagatcttcattcttactgtcatggcctatgatagatatgtggccatttgtaaacctctccactatatgactatgatggaccgggaaagatgcaataagatgttgctcggaacatggatcggtggcttcttacattctattatccaagtggctcttgtggtccagctccccttttgtggaccgaatgagattgatcactatttctgtgatgtacatcctgtactgaaacttgcctgcactgacacttacattgttggtatttttgtgacagcaaacagtggcaccattgcattgggaagttttgtcatcttgctgatctcatacacagtcattctcatgtctctgagaaagcagtcatctgaaggcagacgcaaagctctctccacttgtggatcccacattgctgttgtcatcattttttttggcccctgtacttttatgtatatgcggcctgacactaccttctctgaggacaagatggtagctatattttacaccattatcactcccatgctgaatcctctaatttacactctaagaaatgcagaagtaaagaatgcaatgagaaaactgtgggctagaaagttttcctgggaaactactgggaaatag
PROT:SEQ ID NO:32
MASRTYSMEEVNNVTEFIFLGLSQNPEVEKVCFVVFSFFYMVILLGNLLIMLTVCSGNLFKFPMYFFLNFLSFVDICYSSVTAPKMIIDLLVKKKTISYVGCMLQLFVVHFFGCTEIFILTVMAYDRYVAICKPLHYMTMMDRERCNKMLLGTWIGGFLHSIIQVALVVQLPFCGPNEIDHYFCDVHPVLKLACTDTYIVGIFVTANSGTIALGSFVILLISYTVILMSLRKQSSEGRRKALSTCGSHIAVVIIFFGPCTFMYMRPDTTFSEDKMVAIFYTIITPMLNPLIYTLRNAEVKNAMRKLWARKFSWETTGK
Olfr641
Mus musculus_Olfr641_3-甲基-2-己烯酸嗅觉受体(GI:25075)
DNA:SEQ ID NO:33
atggcgctgttcaatgtcactcaccctgcctcctttctcctgactggtatccctggtctggagagcctccacccctggctggcaggacccctttgtgtgatgtatgccgtggccctcggggcaaatactgtgattctgcaggctgtgagagtggagcccatcctccatgctcccatgtactatttcctgtccatgttgtctttcagtgatgtggccatgtcaatggccacactgcccaccgtgctgagaaccttctgctttgatgcccgcagcattgcttttgacgcctgtctagtccagatgttcctcattcattctttctcgatgatggagtcagggattctgctggctatgagttttgaccgctatgtggccatatgcaatcccttgcattatgccactgtcctcaccaatgaattcattgctgggatgggcttagctgtgactgctcgaagcttcatcacccttttccctctgcccttcctcatcaaaaggctacctatctgcaaatccaatgttctttcccactcctactgcctgcacccagacatgatgaagcttgcctgtgctgacatcaccatcaacagtatttatggactctttgttcttgtgtctacctttggcatggacctgctttttattttcctctcctatgtgctcattctgcgttctgttatggccattgcttctcatgaggaacgccttaaagctctcaacacatgtgtatcacatatcttggctgtgcttgcattttatgtgccaatgataggggtctctacagttcaccgttttgggaagcatgccccacgatacatacatgtcctcatgtccaatgtctacctctttgtgcctcctgttctcaaccctctcatttacagtgccaagacaaaggagatccgccgtgccatattccgcatgtttcgccgtatcaaactgtga
PROT:SEQ ID NO:34
MALFNVTHPASFLLTGIPGLESLHPWLAGPLCVMYAVALGANTVILQAVRVEPILHAPMYYFLSMLSFSDVAMSMATLPTVLRTFCFDARSIAFDACLVQMFLIHSFSMMESGILLAMSFDRYVAICNPLHYATVLTNEFIAGMGLAVTARSFITLFPLPFLIKRLPICKSNVLSHSYCLHPDMMKLACADITINSIYGLFVLVSTFGMDLLFIFLSYVLILRSVMAIASHEERLKALNTCVSHILAVLAFYVPMIGVSTVHRFGKHAPRYIHVLMSNVYLFVPPVLNPLIYSAKTKEIRRAIFRMFRRIKL
Olfr137
Mus musculus_Olfr137_1-辛烯-3-醇,和transpirol嗅觉受体(GI:258481)
DNA:SEQ ID NO:35
Atggtggaaaatttcaatgcaagttgggaagggtactttatttttctgggtttttctaaatggcctcatctggaagttgttctctttgtggtgatattgatattctacatgatgacactgatgggcaatctcttcatcataattttgtcacacctagattcccacctgcatacccctatgtacttcttcctctcaaatctctctgctttggatctctgttataccactagctctgtcccccagctgctatttaacctctggggcccaaagaaaacaatatcttatgctggttgcatgcttcagctctattttgtccttgctctgggtaccacagagtgtgttctgttggtggtgatgtcctatgaccgctatgtagctgtgtgtaaacccttgcattactctgtacttatgaatcctcgtttttgccaactgctggctgcagcatcctgggtatgtggctttaccacttcagcccttcactcttcctttaccttctgggtacccctgtgtggccatcgcaaagtagaccacttcttctgtgaagtgcctgcactgttgcagttgtcctgtgttgatatccatgcaaatgagatgactctcatggtcatgagtgctatttttgttgtcataccacttattctcatcctgagctcctatgctgccattgcatggactgtcctggaaatgcaatcaaccactcgacttcagaaagttttcgggacctgtggagcccatcttactgttgtttctctctttttcattccaatcatgtgcatttatcttcagccttcaacaaaaagttctcaagatcatgccaagttcattgctctcttctacaccgttgtcacacctagcctcaaccctctcatttatactctaagaaacaaagatgtgagaggggcaataaggaggctgagtaggtatgagagggagaaatga
PROT:SEQ ID NO:36
MVENFNASWEGYFIFLGFSKWPHLEVVLFVVILIFYMMTLMGNLFIIILSHLDSHLHTPMYFFLSNLSALDLCYTTSSVPQLLFNLWGPKKTISYAGCMLQLYFVLALGTTECVLLVVMSYDRYVAVCKPLHYSVLMNPRFCQLLAAASWVCGFTTSALHSSFTFWVPLCGHRKVDHFFCEVPALLQLSCVDIHANEMTLMVMSAIFVVIPLILILSSYAAIAWTVLEMQSTTRLQKVFGTCGAHLTVVSLFFIPIMCIYLQPSTKSSQDHAKFIALFYTVVTPSLNPLIYTLRNKDVRGAIRRLSRYEREK
Olfr173
Mus musculus_Olfr173_1-辛烯-3-醇,transpirol,和DMTS嗅觉受体(GI:259002)
DNA:SEQ ID NO:37
atggttgaagaaaaccacaccatgaaacgtgagtttgtcctcacaggatttacagaccaccctgaaatgaagggccttctgtttgcagtattctttttcatctatctgattaccatgatagggaatatgggtctggtgattctgatttccaaagaacgttctcttcacaccccaatgtacatctttctgggcaacctggcttttatagattcttgttgtgcctgtgctattacccctaaaatgttggagaactttttctctgaggacagaataatctctctgtatgaatgtatggcacagttttattttctgtgcactgttgaaactgcagactgctttcttctgtcagcaatggcctatgaccgctatgtggccatatgcaacccactgcagtaccacaccacgatgtccaagaagctctgccttcagatgacgacgggagctttcatagctggaaacctgcattctatggttcatgtggggctattatttagactagcattctgtgggtctaatcaaatcaaccacttttattgtgatattcttcctttgtacagactctcctgtgttgacccctatatcaacgagcttgtattatttgtcttttcaggctcaatccaagtcttcacaataggttgtgtcctcatatcttaccttttcattgtttatacaattttccaaatgaaatccaaagagggaaggatcaaagccttctccacctgtgcatcccactttctgtctgtttcactattctatggatctcttttgtttatgtacattagaccaaatttgctagaagaaggtgataaggacatgccagctgctattttgtttacaatagtggttcccttactaaacccatttatttatagcttgagaaataaagaagtaaagaatgtcttgcagaaaattctgcagaaaaaaataatttcaaaaaattttaaacaagcatctattattgtgtaa
PROT:SEQ ID NO:38
MVEENHTMKREFVLTGFTDHPEMKGLLFAVFFFIYLITMIGNMGLVILISKERSLHTPMYIFLGNLAFIDSCCACAITPKMLENFFSEDRIISLYECMAQFYFLCTVETADCFLLSAMAYDRYVAICNPLQYHTTMSKKLCLQMTTGAFIAGNLHSMVHVGLLFRLAFCGSNQINHFYCDILPLYRLSCVDPYINELVLFVFSGSIQVFTIGCVLISYLFIVYTIFQMKSKEGRIKAFSTCASHFLSVSLFYGSLFFMYIRPNLLEEGDKDMPAAILFTIVVPLLNPFIYSLRNKEVKNVLQKILQKKIISKNFKQASIIV
Olfr164
Mus musculus_Olfr164_geonol嗅觉受体(GI:258443)
DNA:SEQ ID NO:39
atgatacaatggaacaactggaccaggaactctgatttcatcctactaggattatttgatcacagtcctcttcatacttttttcttttccctaattctgggtatcttcttcatggccttcataggaaattctatcatggtgattctcatctacttggatgctcatctccacacccccatgtacatccttctcagccaactttctctcatggatctcatgctcatctgtactacagtaccccaaatggccttcaacttcctttctggaaacaagtccatctccatggttggctgtggaatccagatattcttctatgtatctctacttggagctgagtgttttttgttggccgcaatggcttatgaccgttatgtagctatttgctacccattaaggtaccctattctcatgagtgacaaaatatgtggcctcatggctgcctcctcttgggttcttggctctcttgatggtataatagaagttgcagctgcattgtctttttcatattgtggtgccagagaaatacctcattttttctgtgatgttcctgccttactcacactttcatgtagtaataccttgatatttgaaagaattatatttttctgctgtgtaattatgcttactttacctgtagcaatcattattgcttcctatactcgtgtgattctgaccgttcttcatatgagctcagctgagagtcgccacaaagcttttgccacctgttcctctcacctcatggtggtgggaatgtactatggggcagccatgttcatatacatgcggccttcttctggtcgttctcccacccaggacaaaatagtgtcagctttctacactatccttacgccaatgttgaaccccctcatttatagtctccggaacaaagaagtagccagagcattcatgaaagtgttagggattgataaggcagcagcatga
PROT:SEQ ID NO:40
MIQWNNWTRNSDFILLGLFDHSPLHTFFFSLILGIFFMAFIGNSIMVILIYLDAHLHTPMYILLSQLSLMDLMLICTTVPQMAFNFLSGNKSISMVGCGIQIFFYVSLLGAECFLLAAMAYDRYVAICYPLRYPILMSDKICGLMAASSWVLGSLDGIIEVAAALSFSYCGAREIPHFFCDVPALLTLSCSNTLIFERIIFFCCVIMLTLPVAIIIASYTRVILTVLHMSSAESRHKAFATCSSHLMVVGMYYGAAMFIYMRPSSGRSPTQDKIVSAFYTILTPMLNPLIYSLRNKEVARAFMKVLGIDKAAA
Olfr1487
Mus Musculus_Olfr1487_geonol嗅觉受体(GI:258629)
DNA:SEQ ID NO:41
Atgattcagaatatttcagaattgtctgaatttattcttgttgggttaacagatgcaccattcctgcaaattcctttatttatcatctttactctcatttatttgacaacattgtttgggaatcttgggatgattttgctgattctgctggactccagactccacactcccatgtactttttcctcagtaacctctctctggtggactgtgtttatgcctcagctgtcactcccaaggtgatggaagggtttctcacaggaaataagatcatatcctacaatgcatgtgctgcccagatgttcttctttgcagcctttgctactgttgaaagtttcatgctggcctcaatggcctatgaccgtcatgcagcagtgtgcaaacccttgcattactccactactatgacaactacgatatgtgtcctgcttcttgctggatcttatgtcagtggactcttacaatcttccattcatgtttccttcacatttcaactctccttctgccattctaatgtagtcaatcactttttctgtgatatcccaccactattagccctttcttgctccagtattcacacaaatgaaattatactctttatgttggcagcattcaatgttgcttttactctattagttatattgtcctcttacttactaatttttgttgcaattctgagaatgcgctctgctgagagcaggaagaaggccatttccacctgtgcatcccaccttaccactgtttccatcttctatggcacaattatcttcatgtacttacagcccagctccaatcactccatggatactgacaagatggcatctgttttctacaccatggtcattcccatgctgaaccctcttgtatatagcctgagaaataaagaagtcaagaatgcattcaagaaggttgctggaaaagcagtgctttcactgggattagtcaattaa
PROT:SEQ ID NO:42
MIQNISELSEFILVGLTDAPFLQIPLFIIFTLIYLTTLFGNLGMILLILLDSRLHTPMYFFLSNLSLVDCVYASAVTPKVMEGFLTGNKIISYNACAAQMFFFAAFATVESFMLASMAYDRHAAVCKPLHYSTTMTTTICVLLLAGSYVSGLLQSSIHVSFTFQLSFCHSNVVNHFFCDIPPLLALSCSSIHTNEIILFMLAAFNVAFTLLVILSSYLLIFVAILRMRSAESRKKAISTCASHLTTVSIFYGTIIFMYLQPSSNHSMDTDKMASVFYTMVIPMLNPLVYSLRNKEVKNAFKKVAGKAVLSLGLVN
Olfr339
Mus musculus_Olfr339_geonol嗅觉受体(GI:258951)
DNA:SEQ ID NO:43
atgaggatggataatgacagcgctctgtctgagttcatcctcctggggctccccattcgagcagaagaccaagctttgtactctgtcctgatcctggccatgtacctgacaactgtgctggggaacctgctcatcatcctactcatcaggctggactctcacctccacacccccatgtacttcttcctcagccacttggccttcacagacatctctttttcatcagtcacagctcctaagatgctcgtgaatatgctgacacacagtaagtccatcccatatacagggtgtgtttcccaggtgtattttttcactgtttttgcaagcattgatagctttcttctaacatccatggcatatgacaggtatgtggccatctgccatcctctgcattataacatcatcatgaatctgaggctctgtgttcttctagtagtaatatcatgggccttatctttaaccaatgctcttgcgcacacccttctcttggctcgcctatctcactttagaaacaataccatcccccactatttctgtgacctctctaccttgctgaagctgtctagctcagacaccaccatcaatgagctggtcatctttgttttaggtaatgtggtcattaccctgccattcatatgcattctggtttcttatggctacattggtgtcaccattctgaaaactccctccatcaagggaatccacaaagccttgtccacgtgtggctctcacctctgtgtggtatccttgtactatggggccatcattggactatattttgtcccctcatctaataacactaatgacaaagatgtcattgtggctgtgatgtacactgtggtcatacccatgctgaatccctttatttatagtctgaggaatcgggatatgaaaagaacactgagaaatatcctcagcagaacaaaatga
PROT:SEQ ID NO:44
MRMDNDSALSEFILLGLPIRAEDQALYSVLILAMYLTTVLGNLLIILLIRLDSHLHTPMYFFLSHLAFTDISFSSVTAPKMLVNMLTHSKSIPYTGCVSQVYFFTVFASIDSFLLTSMAYDRYVAICHPLHYNIIMNLRLCVLLVVISWALSLTNALAHTLLLARLSHFRNNTIPHYFCDLSTLLKLSSSDTTINELVIFVLGNVVITLPFICILVSYGYIGVTILKTPSIKGIHKALSTCGSHLCVVSLYYGAIIGLYFVPSSNNTNDKDVIVAVMYTVVIPMLNPFIYSLRNRDMKRTLRNILSRTK
Olfr1126
Mus musculus_Olfr1126_3-羟基-3-甲基己酸嗅觉受体(GI:258834)
DNA:SEQ ID NO:45
atgaaattcacagaaatcagggcagaggacaatgcttccactgtgacagagtttctcctcctgggattttctgaccttcctaacttacaagggattttgtttgggttgttctccataatttacttgatcatattgattggaaatagtttcataattgtgataactagaattgatcctgcactacagaagcccatgtattttttcctggcaaatttttcttctctggaaatctgttatgtatcagtcactctccctaggattctgtttaacattgctactcaagacagaagcatttctgtggtgagctgtgccacacaaatgtgtttcttccttatgctgggagctactgagtgtttcctgctggctgtgatgtcctatgatcgctatgtggccatctgcaatcctctgcactatcctctggtcatgaacccaacaaagtgcactcagctggcagcagcctcctggcttggaggcatccctgtccagataggacaaacctgtcagatattttctctacatttctgcaattctaaccaaatagatcacttcttttgtgacttacctcccattctcaagctggcctgtggagatacttcaatacacgagttgtctgtctacttagtagctatgctgtttgttgcattccctttcttgttgatacttgcctcttataccaaaatcattgccaccattctgaagttgccaacagccacaggacgggcaaaagccttctcaacatgttcttcccatttgcttgtggtgtttttgttttttggatcagctactattacctacttgaggccaaagtccacccattctccaggaactgataaactactctctttgttttacaccattgtgactcccatgttcaatcctctgatatacagtcttagaaataaggaggtgattgctgcactgagaaaactgttacatatcaagtag
PROT:SEQ ID NO:46
MKFTEIRAEDNASTVTEFLLLGFSDLPNLQGILFGLFSIIYLIILIGNSFIIVITRIDPALQKPMYFFLANFSSLEICYVSVTLPRILFNIATQDRSISVVSCATQMCFFLMLGATECFLLAVMSYDRYVAICNPLHYPLVMNPTKCTQLAAASWLGGIPVQIGQTCQIFSLHFCNSNQIDHFFCDLPPILKLACGDTSIHELSVYLVAMLFVAFPFLLILASYTKIIATILKLPTATGRAKAFSTCSSHLLVVFLFFGSATITYLRPKSTHSPGTDKLLSLFYTIVTPMFNPLIYSLRNKEVIAALRKLLHIK
Figure BDA0002388830040000661
标签
DNA-SEQ ID NO:47
gattacaaggacgacgacgataag
蛋白质-SEQ ID NO:48
DYKDDDDK
Rho标签
DNA-SEQ ID NO:49
atgaacgggaccgagggcccaaacttctacgtgcctttctccaacaagacgggcgtggtg
蛋白质-SEQ ID NO:50
MNGTEGPNFYVPFSNKTGVV
Lucy标签
DNA-SEQ ID NO:51
atgagaccccagatcctgctgctcctggccctgctgaccctaggcctggct
蛋白质-SEQ ID NO:52
MRPQILLLLALLTLGLA
SEQ ID NO:53
基序
MAYDRYVAIC
SEQ ID NO:54
基序
FSTCSSH
SEQ ID NO:55
基序
PMLNPFIY
OR2H1
Homo sapiens_OR2H1_1-辛烯-3-醇嗅觉受体(GI:937628050)
DNA:SEQ ID NO:56
ATGGTTAACCAAAGCTCCCCCATGGGCTTCCTCCTTCTGGGCTTCTCTGAACACCCAGCACTGGAAAGGACTCTCTTTGTGGTTGTCTTCACTTCCTACCTCTTGACCCTGGTGGGCAACACACTCATCATCCTGCTGTCTGTACTGTACCCCAGGCTCCACTCTCCAATGTACTTTTTCCTCTCTGACCTCTCCTTCTTGGACCTCTGCTTTACCACAAGTTGTGTCCCCCAGATGCTGGTCAACCTCTGGGGCCCAAAGAAGACCATCAGCTTCCTGGGATGCTCTGTCCAGCTCTTCATCTTCCTGTCCCTGGGGACCACTGAGTGCATCCTCCTGACAGTGATGGCCTTTGACCGATACGTGGCTGTCTGCCAGCCCCTCCACTATGCCACCATCATCCACCCCCGCCTGTGCTGGCAGCTGGCATCTGTGGCCTGGGTTATGAGTCTGGTTCAATCGATAGTCCAGACACCATCCACCCTCCACTTGCCCTTCTGTCCCCACCAGCAGATAGATGACTTTTTATGTGAGGTCCCATCTCTGATTCGACTCTCCTGTGGAGATACCTCCTACAATGAAATCCAGTTGGCTGTGTCCAGTGTCATCTTCGTGGTTGTGCCTCTCAGCCTCATCCTTGCCTCTTATGGAGCCACTGCCCAGGCAGTGCTGAGGATTAACTCTGCCACAGCATGGAGAAAGGCCTTTGGGACCTGCTCCTCCCATCTCACTGTGGTCACCCTCTTCTACAGCTCAGTCATTGCTGTCTACCTCCAGCCCAAAAATCCGTATGCCCAAGGGAGGGGCAAGTTCTTTGGTCTCTTCTATGCAGTGGGCACTCCTTCACTTAACCCTCTCGTATACACCCTGAGGAACAAGGAGATAAAGCGAGCACTCAGGAGGTTACTAGGGAAGGAAAGAGACTCCAGGGAAAGCTGGAGAGCTGCTTAA
PROT:SEQ ID NO:57
MVNQSSPMGFLLLGFSEHPALERTLFVVVFTSYLLTLVGNTLIILLSVLYPRLHSPMYFFLSDLSFLDLCFTTSCVPQMLVNLWGPKKTISFLGCSVQLFIFLSLGTTECILLTVMAFDRYVAVCQPLHYATIIHPRLCWQLASVAWVMSLVQSIVQTPSTLHLPFCPHQQIDDFLCEVPSLIRLSCGDTSYNEIQLAVSSVIFVVVPLSLILASYGATAQAVLRINSATAWRKAFGTCSSHLTVVTLFYSSVIAVYLQPKNPYAQGRGKFFGLFYAVGTPSLNPLVYTLRNKEIKRALRRLLGKERDSRESWRAA
OR2W3
Homo sapiens_OR2W3_1-辛烯-3-醇嗅觉受体(GI:937628231)
DNA:SEQ ID NO:58
ATGGATGGAACCAATGGCAGCACCCAAACCCATTTCATCCTACTGGGATTCTCTGACCGACCCCATCTGGAGAGGATCCTCTTTGTGGTCATCCTGATCGCGTACCTCCTGACCCTCGTAGGCAACACCACCATCATCCTGGTGTCCCGGCTGGACCCCCACCTCCACACCCCCATGTACTTCTTCCTCGCCCACCTTTCCTTCCTGGACCTCAGTTTCACCACCAGCTCCATCCCCCAGCTGCTCTACAACCTTAATGGATGTGACAAGACCATCAGCTACATGGGCTGTGCCATCCAGCTCTTCCTGTTCCTGGGTCTGGGTGGTGTGGAGTGCCTGCTTCTGGCTGTCATGGCCTATGACCGGTGTGTGGCTATCTGCAAGCCCCTGCACTACATGGTGATCATGAACCCCAGGCTCTGCCGGGGCTTGGTGTCAGTGACCTGGGGCTGTGGGGTGGCCAACTCCTTGGCCATGTCTCCTGTGACCCTGCGCTTACCCCGCTGTGGGCACCACGAGGTGGACCACTTCCTGCGTGAGATGCCCGCCCTGATCCGGATGGCCTGCGTCAGCACTGTGGCCATCGACGGCACCGTCTTTGTCCTGGCGGTGGGTGTTGTGCTGTCCCCCTTGGTGTTTATCCTGCTCTCTTACAGCTACATTGTGAGGGCTGTGTTACAAATTCGGTCAGCATCAGGAAGGCAGAAGGCCTTCGGCACCTGCGGCTCCCATCTCACTGTGGTCTCCCTTTTCTATGGAAACATCATCTACATGTACATGCAGCCAGGAGCCAGTTCTTCCCAGGACCAGGGCATGTTCCTCATGCTCTTCTACAACATTGTCACCCCCCTCCTCAATCCTCTCATCTACACCCTCAGAAACAGAGAGGTGAAAGGGGGCACTGGGAAGGTTGCTTCTGGGGAAGAGAGAGCTAGGAAAGGAGTA
PROT:SEQ ID NO:59
MDGTNGSTQTHFILLGFSDRPHLERILFVVILIAYLLTLVGNTTIILVSRLDPHLHTPMYFFLAHLSFLDLSFTTSSIPQLLYNLNGCDKTISYMGCAIQLFLFLGLGGVECLLLAVMAYDRCVAICKPLHYMVIMNPRLCRGLVSVTWGCGVANSLAMSPVTLRLPRCGHHEVDHFLREMPALIRMACVSTVAIEGTVFVLAVGVVLSPLVFILLSYSYIVRAVLQIRSASGRQKAFGTCGSHLTVVSLFYGNIIYMYMQPGASSSQDQGMFLMLFYNIVTPLLNPLIYTLRNREVKGALGRLLLGKRELGKE
OR8G1
Homo sapiens_OR8G1_1-辛烯-3-醇嗅觉受体(GI:937628054)
DNA:SEQ ID NO:60
ATGTCAGGAGAAAATAATTCCTCAGTGACTGAGTTCATTCTGGCTGGGCTCTCAGAACAGCCAGAGCTCCAGCTGCCCCTCTTCCTCCTGTTCTTAGGAATCTATGTGGTCACAGTGGTGGGCAACCTGGGCATGACCACACTGATTTGGCTCAGTTCTCACCTGCACACCCCTATGTACTATTTCCTCAGCAGTCTGTCCTTCATTGACTTCTGCCATTCCACTGTCATTACCCCTAAGATGCTGGTGAACTTTGTGACAGAGAAGAACATCATCTCCTACCCTGAATGCATGACTCAGCTCTACTTCTTCCTCGTTTTTGCTATTGCAGAGTGTCACATGTTGGCTGCAATGGCGTATGACCGTTACATGGCCATCTGTAGCCCCTTGCTGTACAGTGTCATCATATCCAATAAGGCTTGCTTTTCTCTGATTTTAGGGGTGTATATAATAGGCCTGGTTTGTGCATCAGTTCATACAGGCTGTATGTTTAGGGTTCAATTCTGCAAATTTGATTTGATTAACCATTATTTCTGTGATCTTCTTCCCCTCCTAAAGCTCTCTTGCTCTAGTATCTATGTCAACAAACTACTTATTCTATGTGTTGGTGCATTTAACATCCTTGTCCCCAGCCTGACCATCCTTTGCTCTTACATCTTTATTATTGCCAGCATCCTCCACATTCGCTCCACTGAGGGCAGGTCCAAAGCCTTCAGCACTTGTAGCTCCCACATGTTGGCGGTTGTAATCTTTTTTGGATCTGCAGCATTCATGTACTTGCAGCCATCTTCAATCAGCTCCATGGACCAGGGGAAAGTATCCTCTGTGTTTTATACTATTATTGTGCCCATGTTGAACCCTCTGATTTATAGCCTGAGGAATAAAGATGTCCATGTTTCCCTGAAGAAAATGCTACAGAGAAGAACATTATTGTAA
PROT:SEQ ID NO:61
MSGENNSSVTEFILAGLSEQPELQLPLFLLFLGIYVVTVVGNLGMTTLIWLSSHLHTPMYYFLSSLSFIDFCHSTVITPKMLVNFVTEKNIISYPECMTQLYFFLVFAIAECHMLAAMAYDRYMAICSPLLYSVIISNKACFSLILGVYIIGLVCASVHTGCMFRVQFCKFDLINHYFCDLLPLLKLSCSSIYVNKLLILCVGAFNILVPSLTILCSYIFIIASILHIRSTEGRSKAFSTCSSHMLAVVIFFGSAAFMYLQPSSISSMDQGKVSSVFYTIIVPMLNPLIYSLRNKDVHVSLKKMLQRRTLL
Olfr93
Mus musculus_Olfr93_1-辛烯-3-醇嗅觉受体(GI:32060027)
DNA:SEQ ID NO:62
ATGGTCAACCAGAGCACCCCCGTGGGCTTCCTCCTCCTGGGCTTCTCTGAACACCCACAACTGGAAAAGGTTCTCTTCGTCGTTGTCTTGTGCTCCTACCTCCTCACCCTCCTAGGAAACACACTCATCCTCCTGCTGTCCACCCTGGACCCCAGGCTCCACTCTCCAATGTACTTCTTCCTCTCTAACCTCTCCTTCTTGGACCTCTGCTTCACCACAACCTGTGTTCCCCAGATGTTGTTCAACCTCTGGGGCCCCACAAAGACCATCAGCTTCCTGGGATGCTCTGTCCAGCTCTTCATCTTCATGCTCCTGGGGACAACAGAGTGCATCCTGTTGACAGTAATGGCCTTTGACCGCTATGTGGCTGTCTGTCAGCCCCTGCACTATGCCACCATAATCCACCCCCGCCTATGTCGCCAGTTGGCAGGTGTGGCCTGGGCTATAGGTTTGGTCCAATCCATAGTTCAAATACCACCCACCCTCACACTGCCCTTCTGTTCCCATAGGCAAATAGATGACTTTCTGTGTGAAGTCCCATCTCTAATCCGACTCTCTTGTGGGGACACCACTTTTAATGAGATTCAGTTGTCAGTTGCAGGTGTCATCTTCCTGCTTGTACCTCTGAGCCTCATCATTGTCTCTTATGGTGTCATTGCCAGGGCTGTACTAAAAACTAACTCTTCAAAAGGGCGCAGAAAAGCTTTTGGGACCTGTTCATCCCACCTCATTGTGGTTACCCTCTTTTACAGCTCAGTCATTGCTGTCTATCTGCAGCCCAAAAATCCCTATGCCCAAGAGAGGAGCAAGTTCTTTGGTCTCTTTTATGCAGTGGGCACCCCCACACTCAACCCTCTTGTATATACCCTGAGGAACAAGGAGGTAAAGAGGGCATTCTGGAGGCTGCTGGGGAAGGATGCGGCTTCTGGAGGAAACTAA
PROT:SEQ ID NO:63
MVNQSTPVGFLLLGFSEHPQLEKVLFVVVLCSYLLTLLGNTLILLLSTLDPRLHSPMYFFLSNLSFLDLCFTTTCVPQMLFNLWGPTKTISFLGCSVQLFIFMLLGTTECILLTVMAFDRYVAVCQPLHYATIIHPRLCRQLAGVAWAIGLVQSIVQIPPTLTLPFCSHRQIDDFLCEVPSLIRLSCGDTTFNEIQLSVAGVIFLLVPLSLIIVSYGVIARAVLKTNSSKGRRKAFGTCSSHLIVVTLFYSSVIAVYLQPKNPYAQERSKFFGLFYAVGTPTLNPLVYTLRNKEVKRAFWRLLGKDAASGGN
Olfr398
Mus musculus_Olfr398_1-辛烯-3-醇嗅觉受体(GI:32049056)
DNA:SEQ ID NO:64
ATGGCTGTGACCAACCTCACATACAAACCACAGTTCCAGCTCCTCGGCTTGATGGATGGCACAGATCCCCACCCGCTGCTGTTTCTTCTTTTCCTTAGCATTTACCTACTCAATGCCCTGGGCAATCTGAGCATGGTGGTGCTGGTGAGGTCTGATGGGGCTCTGTGCTCCCCCATGTATTATTTCCTGGGTCACCTGAGCCTCGTGGATGTCTGCTTTACCACAGTCACTGTCCCCAGACTGCTGGCCACCTTGCTCCATCCTGGCCAGGCCATATCCTTCCAGGCTTGTTTTGCCCAGATGTACTTCTTTGTAGCTCTGGGTATCACCGAGAGCTACCTTCTGGCAGCCATGTCTTATGACCGTGCGGTGGCTGTGTGTAGACCGCTGCACTATGGTGCAGTCATGACACCCTGGCGCTGCTTTTTGTTGGTGGCTGCATCCTGGGCTGTGGCCCATCTGCACTCTCTTCTACATACACTGCTCATCTCTGCTCTCACCTACCCTCCCTCTGCCCCAGTGCGCCACTTCTTTTGTGACATGACTGTAATGCTGAGCTTGGCAACCTCTGACACATCAGCTGCAGAGACTGCCATCTTCTCAGAGGGGCTAACAGTGGTGTTGACCCCTCTGCTCCTCGTGTCCCTTTCCTATGCACGCATCCTTGTGGCAGTGCTTGGAATTCGGACCACAGGAGGCCGGCACCGTGTCTTCTCCACCTGTGGGGCCCACCTGGTGGTAGTGTCACTTTTCTTTGGCTCAGTCCTCTCCGTCTACTTCCGTCCATCATCTGCCTACTCAGCTCGTTATGACCGCATGGCCAGTGTGGTCTATGCGGTAGTCACACCGACCTTGAACCCTTTTATCTACAGTCTTCGTAACAAAGAGGTCAAGAGTGCCCTAAAAAGGGGTTTCAGATGGAGAGCAGCACCCCAAGATGAGTAA
PROT:SEQ ID NO:65
MAVTNLTYKPQFQLLGLMDGTDPHPLLFLLFLSIYLLNALGNLSMVVLVRSDGALCSPMYYFLGHLSLVDVCFTTVTVPRLLATLLHPGQAISFQACFAQMYFFVALGITESYLLAAMSYDRAVAVCRPLHYGAVMTPWRCFLLVAASWAVAHLHSLLHTLLISALTYPPSAPVRHFFCDMTVMLSLATSDTSAAETAIFSEGLTVVLTPLLLVSLSYARILVAVLGIRTTGGRHRVFSTCGAHLVVVSLFFGSVLSVYFRPSSAYSARYDRMASVVYAVVTPTLNPFIYSLRNKEVKSALKRGFRWRAAPQDE
Olfr120
Mus musculus_Olfr120_1-辛烯-3-醇嗅觉受体(GI:32060790)
DNA:SEQ ID NO:66
ATGAGTGTCAACTGCTCTCTGTGGCAGGAAAATAAGTTGTCTGTCAAACACTTTGCATTTGCCAAGTTCTCTGAGGTTCCTGAAGAATGCTTCCTCCTGTTTACCCTGATTCTCCTCATGTTCTTAGTATCACTGACAGGAAATGCACTTATAACCCTTGCCATATGCACCAGTCCAGCCCTACACACCCCCATGTACTTCTTTCTGGCCAACTTGTCTCTCCTGGAAATTGGCTACACTTGTTCTGTCATACCGAAGATGTTGAAGAACCTTGTAACTGAGGCCCGAGGGATCTCTCGGGAAGGGTGTGCCACACAGATGTTTTTCTTTATATTCTTTGGTATAACTGAGTGTTGCCTACTGGCAGCTATGGCCTTTGACCGCTACATGGCCATATGCTCCCCACTCCACTATGCAACCCGAATGAGTCGTGAGGTATGTGCCCATTTGGCAATAGTTTCATGGGGAATGGGATGCATAGTAGGGTTGGGACAGACCAATTTTATTTTCTCCTTAAACTTCTGTGGACCCTGTGAGATAGACCACTTCTTCTGTGACCTTCCACCTGTCCTGGCACTTGCCTGTGGAGATACATCCCAAAATGAGGCTGCAATCTTCGTGACAGTAGTTCTCTGCATATCTAGCCCATTTTTGTTGATCATTTATTCCTATGTCAGAATTTTGTTTGCAGTGCTGGTGATGCCTTCACCTGAGGGGCGCCATAAAGCTCTCTCCACCTGTTCCTCCCATCTACTTGTAGTCACATTGTTCTATGGCTCAGCATCTATTACCTACTTGAGGCCCAAGTCTAGCCACTCACCAGGAATAGATAAACTCTTGGCCCTTTTCTACACCGCGGTGACTTCCATGCTGAACCCCATCATCTATAGCTTAAGGAACAAGGAAGTGAAGGCAGCACTGAGAAGAACTCTGAGTCTGAAGAAACCTCTGGCAATAAATAGGTAA
PROT:SEQ ID NO:67
MSVNCSLWQENKLSVKHFAFAKFSEVPEECFLLFTLILLMFLVSLTGNALITLAICTSPALHTPMYFFLANLSLLEIGYTCSVIPKMLKNLVTEARGISREGCATQMFFFIFFGITECCLLAAMAFDRYMAICSPLHYATRMSREVCAHLAIVSWGMGCIVGLGQTNFIFSLNFCGPCEIDHFFCDLPPVLALACGDTSQNEAAIFVTVVLCISSPFLLIIYSYVRILFAVLVMPSPEGRHKALSTCSSHLLVVTLFYGSASITYLRPKSSHSPGIDKLLALFYTAVTSMLNPIIYSLRNKEVKAALRRTLSLKKPLAINR
Olfr1364
Mus musculus_Olfr1364_1-辛烯-3-醇嗅觉受体(GI:32078800)
DNA:SEQ ID NO:68
ATGATCAACCAGAGCTGCCAGGAACAGTTCATCCTGCTGGGCTTCTCAGACAGACCGAGGCTAGAATCCATCCTCTTTGTGTTTGTCCTCATCTTCTACCTGGTGACTTTAGTGGGCAACATCATCATTATCTTAGTTTCCTATCTGGACCCCTGTCTTCACACCCCCATGTACTTCTTCCTCACCAACTTGTCCTTTCTTGACCTCTGTTTCACTACCAGTTCCATCCCTCAATTGCTCTTCAACTTAGGAGGCCAGGACAAGAGCATCAGTTACATTGGCTGTGCAGTCCAGCTGTTCATGTTTCTTGGCCTAGGAGGTACTGAGTGTGTTTTGCTGGCTGTCATGGCTTACGACCGTTTCACTGCAATCTGCAAGCCCCTTCACTACTCGGTCATTATGCATTCTCAGCTCTGCTGGACATTGGTGTCTGTAGCCTGGAGTGTGGGACTCCTCAACTCCCTGGTCATGTCTCCTGTGACCATGAAGCTGCCTCGATGTGGCAGATGTCAGGTGAGGCACTTCCTGTGTGAGATGCCAGCTCTGATAAAAATTGCCTGTGTGGACACTGTGGCTGTGGAAAGCACTGTTTTCATTTTATCGGTGATAATCGTGCTGGTGCCTTTGACTCTCATCCTCATTTCTTACAGCTATATTGCTCTAGCAGTGATGAGGATCAAGTCGGCCTCAGGAAGGAGGAAGGCTTTCAACACGTGTGGGTCTCACCTCACCGTAGTCTCCTTGTTTTACGGGAATATCATCTATATGTATATGCAGCCTGGACACAAGGCTTCCCAGGACCAAGGGAAATTTCTTACCCTCTTCTACAACTTGGTAACCCCCATGTTAAACCCTGTCATCTATACACTGAGAAACAAGGATGTAAAGGGCGCACTGAAGAGGCTTGTGACTACGAAATAA
PROT:SEQ ID NO:69
MINQSCQEQFILLGFSDRPRLESILFVFVLIFYLVTLVGNIIIILVSYLDPCLHTPMYFFLTNLSFLDLCFTTSSIPQLLFNLGGQDKSISYIGCAVQLFMFLGLGGTECVLLAVMAYDRFTAICKPLHYSVIMHSQLCWTLVSVAWSVGLLNSLVMSPVTMKLPRCGRCQVRHFLCEMPALIKIACVDTVAVESTVFILSVIIVLVPLTLILISYSYIALAVMRIKSASGRRKAFNTCGSHLTVVSLFYGNIIYMYMQPGHKASQDQGKFLTLFYNLVTPMLNPVIYTLRNKDVKGALKRLVTTK
Olfr937
Mus musculus_Olfr937_1-辛烯-3-醇嗅觉受体(GI:32064616)
DNA:SEQ ID NO:70
ATGGCAACAGGAAACTATTGCATGTTACCTGAGTTCATTCTGACTGGGCTCTCAAAGAAGCCACAACTCCAGATGCCTCTCTTCCTCCTCTTCCTAGGAATCTATGTGGTCACTGTAGTGGGGAATTTGGGCATGATTACACTGATTAAGCTCAGTTCTCACCTGCATACCCCCATGTACTATTTCCTCAGTAGTTTGTCCTTTATTGATCTCTGCCATTCCACTGTCATTACCCCCAAAATGTTGGTGAACTTTGTGATAGAGAAAAACATCATTTCCTACACTGGATGCATGGCTCAGCTCTATTTCTTTCTAATTTTTGCTATTGCAGAGTGTCATATGTTAGCTGCAATGGCATATGATCGCTATGTTGCCATCTGTAACCCCTTGCTTTACAATGTAACCATGTCCTATCAGATTTACACTTCCCTGATCTTTGGAGTCTATATTATTGGTGTGGTTTGTGCATCAGCTCACACAGGCTTCATGATCAGAATACAGTTTTGTAACTTAGAGGTGATCAACCACTATTTCTGTGATCTTCTTCCCCTGCTGGAGCTTGCTCACTCTAGTACTTATGTTAATGAATTGTTAGTTTTATGTTTTGGTACATTTAACATTGTTGTTCCAACCATGACTATTCTTACTTCTTACATCTTCATCATTGCCAACATCTTACGCATTCGTTCTACTGGAGGCAGGTCCAAAGCCTTCAGTACCTGCAGCTCCCACATCTTAGCTGTTGCTGTGTTCTTTGGGTCTGCTGCATTCATGTACCTTCAACCATCATCAGTCAGCTCCATGGACCAAGGGAAAGTGTCCTCTGTGTTTTATACCATTGTTGTTCCCATGCTGAACCCCTTGATCTATAGTCTGAGGAATAAGGATGTCAGTGTTGCCCTGAAGAAAATACTAGAAAGAAAATTATTCATGTAA
PROT:SEQ ID NO:71
MATGNYCMLPEFILTGLSKKPQLQMPLFLLFLGIYVVTVVGNLGMITLIKLSSHLHTPMYYFLSSLSFIDLCHSTVITPKMLVNFVIEKNIISYTGCMAQLYFFLIFAIAECHMLAAMAYDRYVAICNPLLYNVTMSYQIYTSLIFGVYIIGVVCASAHTGFMIRIQFCNLEVINHYFCDLLPLLELAHSSTYVNELLVLCFGTFNIVVPTMTILTSYIFIIANILRIRSTGGRSKAFSTCSSHILAVAVFFGSAAFMYLQPSSVSSMDQGKVSSVFYTIVVPMLNPLIYSLRNKDVSVALKKILERKLFM
Olfr1322
Mus musculus_Olfr1322_geonol嗅觉受体(GI:46404727)
DNA:SEQ ID NO:72
ATGACTCAAATTTCAGAAATTATTCTTTTGGGTTTTGGAGATCTCCATGGCCTTCAGTTTCTTCTTTTTGGGCTATTTCTAGCCATTTATGTTATGACTCTCCTGGGTAACATTGTAATTCTCACCGTAGTATCCACTGATTGCTCCCTTCACACACCCATGTATTTCTTTCTTGGCCACTTCTCCTTCCTAGAGATCAGCTACACCACAACAATTGAGCCTGTAATGCTGTGGACATTGTTATCGGCTCATGTGCCTATCTCCTTGCCAGCCTGTGCTTGTCAGTTTTACTTTTTTGCATCTTTGGTGGCAACAGAATGCTTCCTCCTTGCTGTAATGTCTTATGATAGATACATAGCCATTTGTAACCCACTACACTATTCCAGTATCATGGACTCCTGGGGTTGTTTCCAGCTAGCATTGGCCTCTTGGTTGGCTGGATTTCTGGCACCTATCTTACTCATGATCTTGATTTTTCGCTTAACATTTTGTTCTGCCAATGAGATTGACCACTTCTTCTGTGATTTGAAGCCCATCATGAAACTGGCCTGCACTAATACTCAAGTAGCTGAAATGACTTCTTTTATATGTACCTCATTATTCGCTCTTGGTCCCTTCATACTGACCTTGGCTTCCTATATTCACATCATTTGCACCATTCTGAGGATCCCTTCGACCACAGGGAAGCAGAGGGCTTTCTCCACCTGTTCATCTCACCTTATAGTGGTCAGTCTTTATTATGGGACTCTGGGCATTGTCTATGGCTTCCCATCAATGCCTCAATATGAAAGTATATTGAAGTTGCTTTCTCTTCTGTATACAGTGTTTACCCCTGCTGCCAATCCTATCATTTACACCCTAAGGAACAAGGATGTGAAGGTAGCTCTGAGAAAATTGACACAATGGCATACATACCTGGTCAAAGAAGGCTAA
PROT:SEQ ID NO:73
MTQISEIILLGFGDLHGLQFLLFGLFLAIYVMTLLGNIVILTVVSTDCSLHTPMYFFLGHFSFLEISYTTTIEPVMLWTLLSAHVPISLPACACQFYFFASLVATECFLLAVMSYDRYIAICNPLHYSSIMDSWGCFQLALASWLAGFLAPILLMILIFRLTFCSANEIDHFFCDLKPIMKLACTNTQVAEMTSFICTSLFALGPFILTLASYIHIICTILRIPSTTGKQRAFSTCSSHLIVVSLYYGTLGIVYGFPSMPQYESILKLLSLLYTVFTPAANPIIYTLRNKDVKVALRKLTQWHTYLVKEG
Olfr46
Mus musculus_Olfr46_transpirol嗅觉受体(GI:32054916)
DNA:SEQ ID NO:74
ATGGTCAGTCCCAACCAGACAGTAGTGACAGAGTTTGTGCTGCAAGGGTTCTCAGAGCACCCAAGTCTAAGACTGTTCCTGATGGGCTGTTTCCTGTCCCTGTACACAGTGGCTTTAATGGGCAACATGGTGATCATTGCTTTGATCACCTCAAGCACTGGGCTCCACAGTCCCATGTACTTTTTCCTGTGCAACTTAGCGACCATGGATATTATCTGCACCTCCTCTGTACTGCCCAAGGCGCTGGTTGGTCTACTGTCTGAGGAAAACACCATCTCCTTCAAAGGGTGCATGACTCAGCTCTTCTTTCTTGTGTGGTCTGGATCCTCTGAGCTGCTGCTGCTCACAGTCATGGCCTATGACCGCTATGTGGCCATCTGTTTGCCCCTGCATTACAGCTCTAGGATGAGTCCACAGCTCTGTGGGACCTTTGCCGTGGGTGTATGGTCCATCTGCGCACTAAATGCATCTATCAACACTGGTCTGATGACACGGCTGTCATTCTGTGGCCCCAAGGTCATCACCCACTTCTTCTGTGAGATTCCCCCACTCCTCCTGCTCTCCTGTAGTCCTACATATATAAATAGCGTTATGACTCTTGTGGCAGATGCCTTTTATGGAGGCATCAATTTTTTACTTACCTTGCTATCCTATGGCTGCATCATTGCCAGCATCCTGCGCATGCGTTCTGCTGAGGGCAAGAGGAAGGCCTTTTCTACCTGCTCATCCCACCTCATCGTGGTCTCTGTGTACTACTCATCTGTGTTCTGTGCCTATATCAGTCCTGGTTCCAGCTACAGCCCAGAAAGAAGCAAATTTACCTCGGTTTTGTACTCAGTCCTCAGCCCAACCCTCAACCCCCTCATCTATACACTGAGGAACAAGGATGTCAAGCTTGCCCTGAGAAGACTCTTCCCCTCTTTCTCAAATTAA
PROT:75
MVSPNQTVVTEFVLQGFSEHPSLRLFLMGCFLSLYTVALMGNMVIIALITSSTGLHSPMYFFLCNLATMDIICTSSVLPKALVGLLSEENTISFKGCMTQLFFLVWSGSSELLLLTVMAYDRYVAICLPLHYSSRMSPQLCGTFAVGVWSICALNASINTGLMTRLSFCGPKVITHFFCEIPPLLLLSCSPTYINSVMTLVADAFYGGINFLLTLLSYGCIIASILRMRSAEGKRKAFSTCSSHLIVVSVYYSSVFCAYISPGSSYSPERSKFTSVLYSVLSPTLNPLIYTLRNKDVKLALRRLFPSFSN
下列实施例仅是说明性的，并不意味着限制摘要、说明书或权利要求书中所述的发明范围。
在考虑了本文提供的公开内容之后，对于本领域技术人员而言将立即显而易见的多种可能的变化也落入本发明的范围内。
使用的所有材料和微生物或细胞都是可商购的产品。
除非另有说明，否则重组蛋白是通过标准方法克隆和表达的，所述方法例如描述于Sambrook,J.,Fritsch,E.F.and Maniatis,T.,Molecular cloning:A LaboratoryManual,2nd Edition,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor LaboratoryPress,Cold Spring Harbor,NY,1989。
实施例
实施例1：由Geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸和Transpirol激活的小鼠和人的气味剂受体的鉴定和功能表征
根据WO2014/210585中公开的方法进行新的气味剂受体的鉴定。简而言之，将鼠嗅觉感觉神经元暴露于以下MCS中：geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol，然后使用Ca2+成像技术进行筛选。进一步分离了由DMTS激活的神经元，以进行完整的转录组分析，以鉴定响应性气味剂受体。通过基于PCR的方法(Clontech/Takara,
Figure BDA0002388830040000741
Low Input RNA Kit for Sequencing-v3,cat.634848)产生并扩增对应于分离的细胞mRNA的cDNA。然后使用扩增出的cDNA生成Illumina cDNA文库，用于下一代测序(Next-Generation-Sequencing)和100个碱基对的单独读段序列的生成。将序列与小鼠参考基因组(例如UCSC版本mm10)进行比对，以生成完整的转录组。由于每种嗅觉感觉神经元仅强烈转录一种单一的气味剂受体(OR)，因此可以实现MCS响应性OR的后续鉴定。然后使用序列相似性搜索进行系统发育关系评估，以鉴定相应的人OR。鉴定了以下OR：Olfr263，Olfr96，Olfr1487，Olfr339，Olfr641，Olfr1126，Olfr46，Olfr1322，Olfr93，Olfr398，Olfr120，Olfr1364和Olfr937。
在第二种方法中，将包含400种推定功能的人类受体库的一组气味剂受体转染到WO2014/210585中所述的表达人类嗅觉G蛋白α亚基(Golf–SEQ.ID No.49)的经培养的人类HEK293T细胞系中，并耦合到环状AMP报告基因。将所述一组体外气味剂受体暴露于MCS，并测量每种受体的cAMP信号水平。随后在功能剂量响应实验中测试显示信号明显不同于基线的受体。参考图1，鉴定了以下人类气味剂受体：OR11A1，OR2M3，OR4S2，OR2J3，OR4Q3，OR51E1，OR2W1，OR1A1，OR5K1和OR51I2。
根据WO2014/210585中公开的测定法和方法，使用geonol、DMTS、1-辛烯-3-醇、丁酸、3-甲基-2-己烯酸、3-羟基-3-甲基-己酸或transpirol进行了功能剂量响应实验，以评估表达单个推定的气味剂受体的修饰细胞系的MCS诱导的活性水平。
实施例2：丁酸嗅觉受体抑制剂的鉴定
将表达OR51E1嗅觉受体的细胞系用作拮抗剂筛选平台，以鉴定具有降低丁酸诱导的受体活性的特性的化合物。用挥发性化合物文库筛选细胞系的抑制特性和潜在的丁酸气味抑制作用。首先，将丁酸与每种受试化合物的单独二元混合物呈现给细胞。
在存在或不存在受试化合物的情况下，丁酸诱导的细胞活性的单一浓度监测可以鉴定具有推定限制或抑制作用的化合物。在抑制剂量响应测定中进一步证实了这些命中，以评估相对于基线激动剂活性标准化的抑制百分比。
在单一激活浓度的丁酸(EC87)存在下，随着受试化合物浓度的增加，记录到受体活性的剂量依赖性降低，并获得了相应的剂量响应抑制曲线。图2显示了所受试化合物的最大抑制百分比总结。
设计该测定系统以选择高度选择性的拮抗剂，因为使用高丁酸浓度(EC87)获得了数据。这些数据证明式(I)的化合物是丁酸嗅觉受体拮抗剂。但是，正如丁酸嗅觉受体的相对抑制量所表明的，某些化合物的性能优于其他化合物。
实施例3：Geonol嗅觉受体抑制剂的鉴定
基于细胞的筛选：将表达OR11A1或OR2M3嗅觉受体的细胞系用作拮抗剂筛选平台，以鉴定具有降低geonol诱导的受体活性的特性的化合物。用挥发性化合物文库筛选每种细胞系的抑制特性和潜在的geonol气味抑制作用。首先，将geonol与每种受试化合物的单独二元混合物呈现给细胞。
在存在或不存在受试化合物的情况下，通过对geonol诱导的细胞活性进行单点监测，可以鉴定具有推定限制或抑制作用的化合物。在抑制剂量响应曲线测定中进一步证实了这些命中，以IC50的量度(由给定受试化合物的半数最大抑制功效水平抑制的受体活性的抑制剂浓度)评估抑制活性的效能。
在单一激活浓度的geonol(EC80)存在下，随着受试化合物浓度的增加，记录到受体活性的剂量依赖性降低，并获得了相应的剂量响应抑制曲线。表2中列出的化合物是降低geonol诱导的至少一种嗅觉受体活性的化合物的例子。
感官评估：向小组成员呈现了五个16盎司玻璃瓶，分别装有REF(仅geonol)，仅含geonol的对照品，仅拮抗剂，geonol与等强度拮抗剂的混合物，或geonol与低强度拮抗剂的混合物(将最后四个样品随机分配给与小组成员)。要求小组成员首先熟悉REF广口瓶的泥土/苔藓气味品质，然后以0～10线性等级对接下来四个样品的舒适度、泥土/苔藓气味强度和总体气味强度进行评分。样品之间的刺激间隔为2分钟，以避免适应。结果叠加在图4中，其中该图显示了在geonol与REF样品的25种不同拮抗剂的二元等强度混合物中残留的geonol恶臭(泥土/苔藓气味)的百分比。
进行了单向方差分析(ANOVA)和95％置信度水平下的Duncan均值比较，以比较仅含geonol的样品，仅含拮抗剂的样品以及以两种不同比率混合的Geonol参考/拮抗剂的平均泥土/苔藓气味强度。表2和图4显示了基于细胞的筛选和感官评估的结果。
*表示在等强度混合物和拮抗剂之间没有发现泥土/苔藓气味强度的显著差异，而在95％的置信度水平下，其显著低于仅含geonol的样品。
*表示等强度混合物中的泥土/苔藓气味强度显著高于仅含拮抗剂的样品，而在95％置信度水平下，其显著低于仅含geonol的样品。
NS表示在等强度混合物和拮抗剂之间没有发现泥土/苔藓气味强度的显著差异，而在95％置信水平下，在等强度混合物和仅含geonol的样品之间也没有发现显著差异。
NS表示等强度混合物中的泥土/苔藓气味强度显著高于仅含拮抗剂的样品，而在95％置信水平下，在等浓度混合物和仅含geonol的样品之间没有发现显著差异。
表2：Geonol嗅觉受体拮抗剂
Figure BDA0002388830040000781
Figure BDA0002388830040000791
实施例4：1-辛烯-3-醇嗅觉受体抑制剂的鉴定
将表达OR2W1或OR1A1嗅觉受体的细胞系用作拮抗剂筛选平台，以鉴定具有降低1-辛烯-3-醇诱导的受体活性的特性的化合物。用挥发性化合物文库筛选每种细胞系的抑制特性和潜在的1-辛烯-3-醇气味抑制作用。首先，将1-辛烯-3-醇与每种受试化合物的单独二元混合物呈现给细胞。
在存在或不存在受试化合物的情况下，对1-辛烯-3-醇诱导的细胞活性进行单一浓度监测，可以鉴定具有推定限制或抑制作用的化合物。在抑制剂量响应测定中进一步证实了这些命中，以IC50的量度(由给定受试化合物的半数最大抑制功效水平抑制的受体活性的抑制剂浓度)评估活性抑制的效力和功效以及抑制百分比(相对于基线激动剂活性标准化)。
在单一激活浓度的1-辛烯-3-醇(EC80)存在下，随着受试化合物浓度的增加，记录到受体活性的剂量依赖性降低，并获得了相应的剂量响应抑制曲线。表3中列出的化合物是降低至少一种受体的1-辛烯-3-醇诱导的活性的化合物的例子。
表3：1-辛烯-3-醇嗅觉受体拮抗剂
Figure BDA0002388830040000801
实施例5：丁酸嗅觉受体抑制剂的鉴定
将表达OR51E1嗅觉受体的细胞系用作拮抗剂筛选平台，以鉴定具有降低丁酸诱导的受体活性的特性的化合物。用挥发性化合物文库筛选细胞系的抑制特性和潜在的丁酸气味抑制作用。首先，将丁酸与每种受试化合物的单独二元混合物呈现给细胞。
在存在或不存在受试化合物的情况下，丁酸诱导的细胞活性的单一浓度监测可以鉴定具有推定限制或抑制作用的化合物。在抑制剂量响应测定中进一步证实了这些命中，以IC50的量度(由给定受试化合物的半数最大抑制功效水平抑制的受体活性的抑制剂浓度)评估活性抑制的效力。
在单一激活浓度的丁酸(EC94)存在下，随着受试化合物浓度的增加，记录到受体活性的剂量依赖性降低，并获得了相应的剂量响应抑制曲线。表4中列出的化合物是降低丁酸诱导的至少一种受体的活性的化合物的例子。
表4：丁酸嗅觉受体拮抗剂
Figure BDA0002388830040000811
Figure BDA0002388830040000821
Figure BDA0002388830040000831
表5：丁酸嗅觉受体拮抗剂
Figure BDA0002388830040000832
实施例6：DMTS嗅觉受体抑制剂的鉴定
将表达OR52N5、OR2L13、OR2AJ1、OR4C15、OR5AC2、OR8H3、OR11G2、OR52N2或OR5T1气味剂受体的细胞系用作拮抗剂筛选平台，以根据WO2014/210585中公开的测定和方法来鉴定具有降低DMTS诱导的受体活性的特性的化合物。用挥发性化合物文库筛选表达人类气味剂受体的每种细胞系的抑制特性和潜在的DMTS气味抑制作用。首先，将DMTS与每种受试化合物的单独二元混合物呈现给细胞。在存在或不存在受试化合物的情况下，对DMTS诱导的细胞活性进行单点监测可以鉴定具有推定限制或抑制作用的化合物。在抑制剂量响应曲线测定中进一步证实了这些命中，以IC50的量度(由给定受试化合物的半数最大抑制功效水平抑制的受体活性的抑制剂浓度)评估抑制活性的效力。在单一激活浓度的DMTS(EC80)存在下，随着受试化合物浓度的增加，记录到受体活性的剂量依赖性降低，并获得了相应的剂量响应抑制曲线。表5中列举的化合物是降低DMTS诱导的至少一种受体的活性的化合物的例子。
表6：DMTS嗅觉受体拮抗剂
Figure BDA0002388830040000841

Claims (16)

1.一种鉴定化合物的方法，该化合物结合、抑制、阻断、限制和/或调节嗅觉受体的活性，该嗅觉受体的活性由引起衣物恶臭的物质、引起发霉恶臭的物质和/或引起汗液恶臭的物质激活，该方法包括：
a.使受试物质和所述引起衣物恶臭和/或汗液恶臭的物质接触至少一种嗅觉受体多肽，该嗅觉受体多肽从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR2M3、OR51E1、OR4S2、OR51I2、OR2H1、OR2W3、OR8G1、Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr96、Olfr1193、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr1126和Olfr558、Olfr1322、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937、Olfr46以及它们的嵌合体或功能片段；或接触与上述至少一种嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的至少一种嗅觉受体多肽；并且
b.通过在存在和不存在受试物质的情况下测量所述嗅觉受体的响应，来测量所述至少一种嗅觉受体对引起恶臭的物质的响应，
其中，所述引起恶臭的物质从由如下构成的群组中选出：geonol，二甲基三硫(DMTS)，1-辛烯-3-醇，丁酸，3-甲基-2-己烯酸，3-羟基-3-甲基-己酸，3-甲基-3-巯基己醇(transpirol)以及至少两种所述物质的混合物。
2.权利要求1的方法，进一步包括：
c.根据在存在和不存在该受试物质的情况下所测得的响应，鉴定能调节所述至少一种嗅觉受体的响应的受试物质；和
d.选择所鉴定的受试物质作为调节所述至少一种嗅觉受体对引起恶臭的物质的响应的化合物。
3.前述权利要求中任一项的方法，其中所述至少一种嗅觉受体多肽：
a.包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和/或
b.由核酸分子编码，该核酸分子包含与SEQ ID NO:1、3、5、7、11、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或它们的反向互补序列具有至少70％序列同一性的核苷酸序列。
4.权利要求3的方法，其中该多肽：
a.包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、57、59、61、63、65、67、69、71、73或75具有至少90％、95％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或
b.由核酸分子编码，该核酸分子包含与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74或它们的反向互补序列具有至少90％、95％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。
5.权利要求1至4中任一项的方法，其中，所述引起恶臭的物质是引起衣物恶臭的物质，该引起衣物恶臭的物质从由如下构成的群组中选出：geonol，DMTS，1-辛烯-3-醇以及至少两种所述物质的混合物。
6.权利要求1至4中任一项的方法，其中，所述引起恶臭的物质是引起发霉恶臭的物质，该引起发霉恶臭的物质从由如下构成的群组中选出：geonol，DMTS，1-辛烯-3-醇以及至少两种所述物质的混合物。
7.权利要求1至4中任一项的方法，其中，所述引起恶臭的物质是引起汗液恶臭的物质，该引起汗液恶臭的物质从由如下构成的群组中选出：丁酸，3-甲基-2-己烯酸，3-羟基-3-甲基-己酸，transpirol以及至少两种所述物质的混合物。
8.权利要求5或6的方法，其中该嗅觉受体多肽从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR2M3、OR4S2、Olfr263、Olfr403、Olfr735、Olfr1193、Olfr137、Olfr173、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr96、Olfr1322、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364和Olfr937；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
9.权利要求8的方法，其中，该引起恶臭的物质包含geonol，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR1A1、OR2M3、Olfr403、Olfr164、Olfr1487、Olfr339、Olfr96和Olfr1322；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
10.权利要求8的方法，其中该引起恶臭的物质包含1-辛烯-3-醇，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR4Q3、OR5K1、OR2H1、OR2W3、OR8G1、Olfr263、Olfr137、Olfr735、Olfr173、Olfr93、Olfr398、Olfr120、Olfr1364、Olfr937；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
11.权利要求8的方法，其中该引起恶臭的物质包含DMTS，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR5K1、OR4S2、Olfr263、Olfr1193、Olfr173和Olfr403；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
12.权利要求7的方法，其中，该嗅觉受体多肽从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR5K1、OR51E1、OR51I2、Olfr263、Olfr403、Olfr641、Olfr137、Olfr173、Olfr1126、Olfr558和Olfr46；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
13.权利要求12的方法、其中该引起恶臭的物质包含丁酸，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR51E1和Olfr558；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
14.权利要求12的方法，其中，该引起恶臭的物质包含3-甲基-2-己烯酸，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR51I2、Olfr641、OR2W1和Olfr263；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
15.权利要求12的方法，其中该引起恶臭的物质包含3-羟基-3-甲基-己酸，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、Olfr1126和Olfr263；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
16.权利要求12的方法，其中该引起恶臭的物质包含transpirol，并且该嗅觉受体从由如下构成的群组中选出：OR2W1、OR1A1、OR2J3、OR5K1、Olfr263、Olfr137、Olfr173、Olfr403和Olfr46；它们的嵌合体或功能片段；以及与至少一种上述嗅觉受体多肽具有至少70％氨基酸序列同一性的嗅觉受体多肽。
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