CN111032087A - 用于dectin-2刺激和癌症免疫治疗的方法和组合物 - Google Patents

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马修·周
雪莱·艾琳·阿克曼
埃德加·乔治·英格曼
迈克尔·纳撒尼尔·阿隆索
卡罗琳·R·贝托兹
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Abstract

提供用于治疗患有癌症或感染性疾病的个体的方法和组合物。提供多价Dectin‑2刺激剂，其包括：(a)与Dectin‑2结合并刺激Dectin‑2信号传导的试剂；(b)抗体和/或免疫调节剂，其中(a)和(b)彼此缀合。在一些情况下，(a)是与Dectin‑2结合的甘露二糖糖多肽。在一些情况下，(b)是TLR(例如，TLR7、TLR8、TLR7/8、TLR2等)的刺激配体。治疗患有癌症和/或感染性疾病的个体的方法可包括向所述个体给药有效量的Dectin‑2刺激性组合物。在一些情况下，所述Dectin‑2刺激性组合物包含Dectin‑2刺激性含糖聚合物。在一些情况下，所述Dectin‑2刺激性组合物包含多价Dectin‑2刺激剂。

Description

用于DECTIN-2刺激和癌症免疫治疗的方法和组合物
交叉引用
本申请要求于2017年6月28日提交的美国临时专利申请号62/526,266的权益，该申请的全部内容通过引用合并于此。
政府支持
本发明是根据美国国立卫生研究院授予的合同CA196657在政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。
引言
尽管免疫系统具有检测肿瘤细胞与正常组织之间细微差异的能力，但癌症仍倾向于生长和扩散，通常导致其宿主死亡。在这种情况下可以发生针对肿瘤相关抗原(TAA)的适应性免疫应答，从而导致肿瘤控制或消退。然而，侵袭性肿瘤最终会通过免疫编辑和其他抑制抗肿瘤免疫细胞和介质的机制逃离免疫控制。
免疫细胞是大多数癌症中基质间隔(stromal compartment)的主要组成部分，并在塑造肿瘤的发生和发展中起至关重要的作用。癌症免疫疗法(例如检查点抑制剂、癌症疫苗、CAR T细胞等)已被证明对多种癌症有效；然而，许多患者和癌症类型均无法对这些干预措施做出反应，这表明应该探索其他的免疫治疗策略。
包括粒细胞、单核细胞(Mo)、巨噬细胞(Mφ)和树突状细胞(DC)的髓样细胞在大多数肿瘤中特别丰富，并已显示出在一系列恶性肿瘤上并以各种方式促进疾病进展。尽管如此，但是在临床开发中只有相对很少的疗法针对这种主要的基质细胞群，并且大多数旨在抑制这些细胞的积累而不是调节其活性。
发明内容
提供了用于治疗患有癌症或感染性疾病的个体的方法和组合物。提供多价Dectin-2刺激剂，其包括：(a)与Dectin-2结合并刺激Dectin-2信号传导的试剂；(b)抗体和/或免疫调节剂，其中(a)和(b)彼此缀合。在一些情况下，(a)是抗Dectin-2抗体或其抗原结合区。在一些情况下，(a)是与Dectin-2结合的甘露二糖糖多肽(mannobioseglycopolypeptide)(例如，包括肽的甘露二糖糖多肽，所述肽例如长度为20至250个氨基酸的粘蛋白样肽)。在一些情况下，甘露二糖糖多肽的聚糖密度为至少25％。在一些情况下，(b)是TLR的刺激配体(例如，TLR7/8激动剂诸如T785或786，TLR7激动剂诸如784，TLR8激动剂，TLR2激动剂诸如Pam3Cys等)。在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，并且(b)为TLR激动剂。
如上所述，还提供了治疗患有癌症和/或感染性疾病的个体的方法。这样的方法可以包括向个体给药有效量的Dectin-2刺激性组合物。在一些情况下，Dectin-2刺激性组合物包含Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，如上所述)。在一些情况下，Dectin-2刺激性组合物包含多价Dectin-2刺激剂，例如，如上所述。还提供了刺激抗原呈递细胞(APC)的方法，并且该方法可以包括在体外或离体使APC与包含Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，甘露二糖糖多肽)的Dectin-2刺激性组合物以足以增强APC中Dectin-2信号传导的剂量和时段进行接触，从而产生经刺激的APC。在一些情况下，Dectin-2刺激性组合物包含多价Dectin-2刺激剂，例如，如上所述。
附图说明
当结合附图阅读时，根据以下详细描述可以最好地理解本发明。要强调的是，根据惯例，附图的各个特征未按比例绘制。相反，为了清楚起见，各种特征的尺寸被任意扩大或缩小。附图中包括下图。
图1A至图1B。肿瘤相关的髓样细胞表达高水平的Dectin-2。(图1A至图1B)用指示的抗体对鼠和人(Hu)胰腺导管腺癌(PDAC)的组织进行染色，并通过荧光(图1A)或光学(图1B)显微镜法进行成像。(图1A)来自被注射LMP或Panc02鼠肿瘤细胞系的免疫活性小鼠的原发性胰腺肿瘤组织和肝转移样品。LMP细胞(最初获自Pdx1-Cre；KrasLSL-G12D/+；Trp53LSL -R172H/+小鼠，并在所有这些研究中使用)以突变体p53的累积为标志。(图1B)来自人PDAC以及PDAC的基因工程小鼠模型(GEMM)(Pdx1-Cre；KrasLSLG12D/+；Cdkn2a-/-)的原发肿瘤和转移组织。比例尺，100μm。
图2A至图2G。天然的Dectin-2激动剂激活肿瘤相关的髓样细胞，并诱导抗肿瘤免疫反应。(图2A至图2C)用PDAC条件培养基培养鼠骨髓单核细胞以产生TAM样细胞。在用糠秕马拉色菌(M.furfur的细胞壁提取物(furfurman)刺激过夜后，分析细胞因子产生和共刺激分子表达。在一些实验中(图2B)，用Dectin-2-阻断性抗体预处理细胞。ND是未检测到。(图2D)在连续两天中向皮下PDAC肿瘤注射furfurman或媒介物，然后在第3天通过流式细胞术进行分析。门控肿瘤浸润免疫细胞中的总CD3+T细胞。(图2E至图2G)在肿瘤植入后第7天和第10天，对荷有皮下PDAC肿瘤的小鼠瘤内注射furfurman(+/-IFNγ)或媒介物，然后用检查点抑制剂(图2E)、吉西他滨(Gem)(图2F)或CD40激动抗体(ip，q3d，从第7天开始)全身处理。显示平均肿瘤体积±SEM(n＝3至5只小鼠/组)。通过单因素方差分析和事后Tukey检验，*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001，利用所显示的最后一个时间点的肿瘤体积的结果。
图3A至图3H。天然的Dectin-2配体激活小鼠和人类细胞，并在多种肿瘤类型中具有抗癌作用。(图3A)PDAC TAM用所示的抗体预处理然后用板结合的酿酒酵母(S.cerevisiae)甘露聚糖刺激过夜产生的TNFα。(图3B，图3C)人单核细胞用GM-CSF预处理然后用furfurman(图3B)或甘露聚糖(图3C)刺激产生的TNFα。显示了n＝3个供体的平均值±SEM。(图3D至图3F)从肿瘤植入后6至9天开始，用甘露聚糖(i.v.)和/或αCTLA-4与αPD-1抗体的组合(i.p.)处理荷s.c.PDAC(图3D)、肺腺癌(图3E)或CT26结肠癌的小鼠。显示了平均肿瘤体积±SEM(每组n＝3至5)。通过未配对学生t检验(图3B)或双因素方差分析和事后Tukey检验(图3D至图3F)，*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001。(图3G)在将甘露聚糖(10mg/kg，i.v.)注射入小鼠后6小时，通过PDAC TAMs表达CD86和MHC-II。(图3H)Dectin-2激动剂与化学疗法和其他免疫疗法协同作用-用所示试剂处理的荷瘤的小鼠的肿瘤生长曲线。使肿瘤生长7至9天，然后Dectin-2刺激物i.t.(furfurman，10mg/kg q3d x 2)或i.v.(甘露聚糖，10mg/kg q2d x 3wk)单独给药或与i.p.吉西他滨(100mg/kg q3d x3wk)或激动性αCD40抗体(10mg/kg q3d x 3)联合给药。通过双因素方差分析和事后Tukey检验，*，p<0.05；***，p<0.001；****，p<0.0001。
图4A至图4D。GM-CSF诱导Dectin-2表达并使肿瘤对Dectin-2刺激物敏感。(图4A至图4C)将鼠(图4A、图4B)和人(图4C)单核细胞在补充或未补充GM-CSF(50ng/mL)的培养基中培养24小时，然后用流式细胞术分析Decfur-2表达(图4A、图4C)或用furfurman刺激并分析TNFα产生(图4B)。(图4C)显示了n＝3个供体的平均MFI±SEM。(图4D)从肿瘤植入后第6天开始，用甘露聚糖(i.v.)和/或GM-CSF(i.t.)处理荷有s.c.CT26肿瘤的小鼠。显示了平均肿瘤体积±SEM(每组n＝3至4)。通过学生t检验(图4C)或双因素方差分析和事后Tukey检验(图4D)，*，p<0.05；**，p<0.01。
图5A至图5D。用几夫碱(Kifunensine)的甘露糖苷酶抑制诱导高甘露糖聚糖显示并增加肿瘤细胞免疫原性。(图5A至图5C)PDAC细胞用几夫碱处理3天，然后进行流式细胞术分析(图5A)或与TAM共培养(图5B、图5C)。(图5A)用结合甘露糖的凝集素即伴刀豆球蛋白A染色PDAC细胞。(图5B、图5C)经预处理的PDAC细胞用CSFE标记并与TAM共培养过夜以评估表达Dectin-2的TAM的细胞因子产生(图5B)和肿瘤细胞摄取(图5C)。在一些实验中，TAM在与PDAC细胞共培养之前，用Dectin-2-阻断性抗体进行处理(图5C)。根据学生t检验，*，p<0.05。(图5D)通过流式细胞术分析来自几夫碱处理的小鼠(i.p.，q2d，7天)的皮下PDAC肿瘤。门控在总的肿瘤浸润免疫细胞中的CD8 T细胞(CD8+CD90+)。
图6A至图6B。Dectin-2抗体(例如可溶性或固定化的Dectin-2抗体)激活肿瘤相关的髓样细胞。(图6A、图6B)鼠骨髓单核细胞以PDAC条件培养基培养以产生TAM样细胞，然后将其接种在包被有针对各种细胞表面分子的抗体的孔中。18小时后评估细胞因子产生(图6A)和共刺激分子表达(图6B)。
图7A至图7C。能够激活Dectin-2的合成含糖聚合物的设计。(图7A)可以设计多官能含糖聚合物以在肿瘤环境中激活Dectin-2。含糖聚合物显示在聚合物主链上的结合Dectin-2的聚糖，具有最佳的间距以实现受体聚集和激活。其他官能团可以沿聚合物主链整合，也可以作为端基整合，以靶向、成像、刺激其他细胞途径或进行药理优化。(图7B)一个实施方案的一个实施例，其中甘露二糖基用作连接于多肽主链内的丝氨酸残基的Dectin-2配体。这些糖多肽可以通过氨基酸N-羧基环内酸酐(NCA)的聚合来合成。(图7C)将合成的糖肽连接至抗体从而产生糖肽-抗体缀合物的一种可能的缀合策略(已成功使用)的示意实施例。抗体上的赖氨酸残基用NHS-环辛炔化合物处理，然后与叠氮化物末端的糖肽进行生物正交共价反应。
图8A至图8C。合成的甘露二糖含糖聚合物和糖缀合物激活髓样细胞以达到治疗效果。(图8A、图8B)PDAC TAM用所示抗体预处理，然后用板固定化的(图8A)不同聚糖密度(35％或65％)的甘露糖(Man1)或甘露二糖(Man2)糖多肽(250-mers)进行刺激，或用(图8B)与乳糖(Lac)或Man2糖多肽(65％糖基化的100-mers)偶联的αEpCAM抗体进行刺激产生的TNFα。(图8C)从肿瘤植入后10天开始，使用Man2糖多肽(65％糖基化的100-mers)i.v.处理荷有s.c.PDAC肿瘤的小鼠。显示了平均肿瘤体积±SEM(每组n＝3至5)。采用双因素方差分析和事后Tukey检验，***，p<0.001；****，p<0.0001。
图9A至图9C。数据证明，本公开的合成甘露二糖糖肽通过Dectin-2刺激肿瘤相关巨噬细胞(TAM)并抑制肿瘤生长。
图10。源自鼠单核细胞的树突状细胞用对照或Dectin-2-阻断性抗体预处理，然后用具有不同聚糖密度(30％或65％)的板结合的乳糖(Lac)或甘露二糖(Man2)糖肽(100-mer合成糖肽)刺激20小时产生的细胞因子。
图11。PDAC TAM用对照或Dectin-2-阻断性抗体预处理，然后用具有不同聚糖密度(35/65/100％)的可溶性或板结合的糖肽(20-mer/250-mer合成糖肽)刺激20小时产生的细胞因子。
图12A至图12C。示意性图示糖肽-抗体缀合物的产生，数据显示甘露二糖糖肽-抗体缀合物激活TAM，并通过Dectin-2刺激肿瘤细胞摄取。
图13。抗Epcam抗体用BCN-NHS试剂(10x或25x BCN:抗体)标记，并缀合到甘露二糖糖肽(65％100-mers)以制备抗体-糖肽缀合物(αEpM)。PDAC TAM用或不用Dectin-2-阻断性抗体(αD2)预处理，然后用板结合的(左上图)或可溶的(右上图和下图)抗体缀合物进行刺激(单独或与羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记的PDAC细胞共培养(下图；“Mo-肿瘤共培养物”))。20个小时后评估细胞因子产生。
图14。抗Epcam抗体用BCN-NHS试剂(10x或25x BCN:抗体)标记，并与甘露二糖糖肽(65％100-mers)缀合以制备抗体-糖肽缀合物(αEpM)。PDAC TAM用或不用Dectin-2-阻断性抗体(αDectin-2)进行预处理，然后在与CFSE标记的PDAC细胞共培养时用可溶性抗体缀合物刺激。20个小时后，通过流式细胞术评估TAM对CFSE的摄取。
图15A至图15B。数据显示，Man2糖多肽与抗体的缀合产生Dectin-2刺激性抗体缀合物，该缀合物的可溶性形式具有很高的活性。(图15A)GM-CSF预处理的单核细胞用通过赖氨酸缀合偶联到65％Man2 100-mer的αEpCAM抗体(DAR～1-2；2.5ug/mL抗体浓度)+/-αDectin-2(20ug/mL)或等量未缀合的αEpCAM和Man2聚合物的混合物刺激18小时产生的细胞因子。(图15B)用相同的αEpCAM-Man2缀合物或组分混合物刺激的GM-CSF预处理的单核细胞的剂量反应曲线。
图16。数据显示，使用不同抗体和不同长度(低至25个残基)的Man2聚合物制备的抗体缀合物可以通过Dectin-2刺激细胞。
图17。Dectin-2激动剂与其他免疫刺激物协同作用。该图显示了用furfurman+/-所示试剂处理24小时的鼠PDAC TAM的共刺激分子表达。
图18。Dectin-2激动剂与其他免疫刺激物协同作用。该图显示了用furfurman+/-所示试剂处理24小时的鼠PDAC TAM产生的细胞因子和一氧化氮。
图19。Dectin-2激动剂与其他免疫刺激物协同作用。该图显示了从肿瘤植入后第8天或第9天开始，用单独的甘露聚糖(q2d i.v.)或者与IFNγ(q2d i.v.)或所示的抗体(q3di.p.)组合进行处理的荷有s.c.PDAC的小鼠的肿瘤生长曲线。
图20。通过瘤内注射，经主题多价试剂：缀合至免疫刺激剂(在这种情况下为TLR7/8激动剂T785)的Dectin-2激动剂(在这种情况下为65％Man2 100-mer)处理–该多价试剂称为“Man2-T785”，或仅用Man2(“Man2”)处理的患有胰腺癌小鼠(PDAC小鼠)的数据。
图21。数据显示当Dectin-2激动剂(在这种情况下为65％Man2 100-mer)与免疫刺激剂(在这种情况下为TLR7/8激动剂T785)缀合时的协同作用，产生以可溶性形式的强烈刺激细胞的糖肽缀合物(Man2-T785)。
图22A至图22C。(图22A)Man2糖肽-T785缀合物的合成：用于产生图20和图21中使用的Man2-T785缀合物的合成的示意代表图。T785结构含有具有伯胺的咪唑并喹啉衍生物。为了缀合，T785可以与SMCC反应，SMCC是含有NHS-酯(胺反应性)和马来酰亚胺(硫醇反应性，然后与SATA反应)的异型双官能交联剂。(图22B)描绘了T785和SMCC修饰的T785。(图22C)图22A的合成还可用于被描绘的、与R848的缀合物。
图23A至图23C。(图23A)与使用多价试剂有关的数据，该多价试剂为Dectin-2激动剂(在这种情况下为65％Man2 100-mer)与免疫刺激剂(在此情况下为TLR2激动剂)缀合，从而产生可溶形式具有活性的糖肽缀合物。(图23B)用于产生用于图23A的缀合物的反应图式。(图23C)N-α-棕榈酰基-S-[2,3-双(棕榈酰氧基)-(2RS)-丙基]-L-半胱氨酸，棕榈酰基-Cys((RS)-2,3-二(棕榈酰氧基)-丙基)-OH(Pam3Cys-OH)的示意性描述。
图24。数据显示，当将Dectin-2激动剂(在这种情况下为αDectin-2抗体)与免疫刺激剂(在这种情况下为TLR7/8激动剂，T785)缀合时，产生表现出协同效应并以可溶形式强烈激活细胞的αDectin-2抗体缀合物，因此多价试剂具有活性。
图25。显示了人单核细胞用GM-CSF(50ng/mL)预处理然后用可溶性furfurman(20ug/mL)或板结合的甘露聚糖(10ug/孔)刺激24小时的细胞因子产生和共刺激分子表达。
图26A至图26D。Dectin-2刺激通过T细胞介导的抗肿瘤免疫来抑制PDAC进程。如所示处理的荷s.c.LMP小鼠的肿瘤生长曲线。(图26A、图26B)使肿瘤生长7至10天，然后再用甘露聚糖(12.5mg/kg iv q2d x 2wk；25mg/kg i.t.q3d x 2)+/-Dectin-2阻断性或对照抗体(10mg/kg ip q2d)处理。(图26C、图26D)在甘露聚糖处理(10mg/kg i.v.q2d x 3wk)期间用CD4-或CD8-耗竭性(图26C)或检查点阻断性抗体(图26D)(10mg/kg ip q3d)处理的小鼠。通过双因素方差分析和事后Sidak(A、B)或Tukey(C、D)检验，**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001。
图27A至图27G。GM-CSF驱动Dectin-2表达并使TAM对Dectin-2刺激敏感。(图27A、图27B)在补充或未补充GM-CSF的培养基中培养18小时的小鼠(图27A)或人(图27B)单核细胞的Dectin-2表达。(C-E)用3T3成纤维细胞条件培养基+/-GM-CSF(图27C)或LMP肿瘤条件培养基+/-GM-CSF中和抗体(图27D)预处理的小鼠单核细胞或者如图所示(图27E)预处理的人单核细胞产生的TNFα。(图27F)用甘露聚糖(12.5mg/kg i.v.q2d×2wk)和所示抗体(10mg/kg i.p.q2d)处理的荷LMP小鼠。(图27G)热图描绘了人癌组织中Dectin-2的表达与所示基因之间的相关性。从TCGA获得基因表达数据，并进行分析以获得Spearman的相关系数。通过学生t检验(B)或双因素方差分析和事后Tukey(F)检验，**，p<0.01；****，p<0.0001。
图28A至图28D。KRAS驱动的肿瘤产生GM-CSF，并对Dectin-2免疫疗法产生反应。(图28A)获自癌细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia)的具有野生型KRAS(WT)或密码子12、13或61处具有突变(Mut)的人肿瘤细胞系的GM-CSF表达值。箱形图描绘了中位数和四分位距。Mann-Whitney U检验，****，p<0.0001。(图28B)培养24小时后肿瘤上清液中的GM-CSF水平。(图28C、图28D)用甘露聚糖(10mg/kg i.v.q2d)处理的患有s.c.238N1或MOC2肿瘤的小鼠的肿瘤生长曲线。3/5经处理的小鼠238N1肿瘤被治愈。通过双因素方差分析和事后Sidak检验，*，p<0.05；**，p<0.01；****，p<0.0001。
图29A至图29B。数据显示了经GM-CSF预处理的单核细胞与包含与免疫刺激剂(在这种情况下为TLR7激动剂784)缀合的Dectin-2激动剂(在这种情况下为65％Man2100-mer)的主题多价试剂–称为“Man2-784缀合物”接触，或与784和Man2的未缀合混合物(“Man2+784混合物”)接触，或与对照(“Man2-784缀合物”加阻断Dectin-2的抗体的混合物，从而抵消由缀合物提供的Dectin-2刺激)接触所产生的TNFα。(图29A)数据显示了经GM-CSF预处理的单核细胞与包含与免疫刺激剂(在这种情况下为TLR7/8激动剂786)缀合的Dectin-2激动剂(在这种情况下为65％Man2 100-mer)的主题多价试剂–称为“Man2-786缀合物”接触所产生的TNFα。(图29B)
图30是示出图29A至图29B中的多价试剂的结构的示意图。
具体实施方式
I.引言
本文描述了用于治疗癌症和/或感染性疾病的方法、组合物和试剂盒。一些方法、组合物和试剂盒是基于发明人的发现，即Dectin-2刺激令人惊讶地对治疗癌症是有效的。Dectin-2刺激也可用于疫苗和/或佐剂，以治疗感染性疾病。例如，发明人发现在髓样细胞(肿瘤相关的髓样细胞，诸如树突状细胞和巨噬细胞)中刺激Dectin-2信号传导可以增强/刺激对癌症的免疫反应。
综上所述，提供了多价Dectin-2刺激剂，其包括：(a)结合Dectin-2并刺激Dectin-2信号传导的试剂；(b)抗体和/或免疫调节剂，其中(a)和(b)彼此缀合。在一些情况下，(a)是抗Dectin-2抗体或其抗原结合区。在一些情况下，(a)是与Dectin-2结合的甘露二糖糖多肽(例如，包含肽的甘露二糖糖多肽，所述肽，例如黏蛋白样肽，在一些情况下肽的长度为20至250个氨基酸)。在一些情况下，甘露二糖糖多肽的聚糖密度为至少25％。在一些情况下，(b)是TLR的刺激配体(例如，TLR7/8激动剂如T785或786，TLR7激动剂如784，TLR8激动剂，TLR2激动剂如Pam3Cys，等)。在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，并且(b)为TLR激动剂。
在一些情况下，提供了多价Dectin-2刺激剂，包括：(a)与Dectin-2结合并刺激Dectin-2信号传导的试剂；(b)抗体和免疫调节剂，其中(a)和(b)彼此缀合(例如，多价Dectin-2刺激剂可以例如通过一种或更多种接头与抗体和/或免疫调节剂缀合)。在一些情况下，(a)是与Dectin-2结合的甘露二糖糖多肽(例如，包括肽的甘露二糖糖多肽，所述肽，例如粘蛋白样肽，在一些情况下肽的长度为20至250个氨基酸)。在一些情况下，甘露二糖糖多肽的聚糖密度为至少25％。在一些情况下，免疫调节剂是TLR的刺激配体(例如，TLR7/8激动剂如T785或786，TLR7激动剂如784，TLR8激动剂，和TLR2激动剂如Pam3Cys，等)。在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，并且免疫调节剂(b)是TLR激动剂。在一些情况下，抗体结合癌抗原。在一些情况下，抗体结合选自以下的癌抗原：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD47、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、EpCam、EGFR、17-1A、HER2、CD117、C-Met、PTHR2、HAVCR2(TIM3)和SIRPA。在一些情况下，抗体结合HER2癌抗原。
在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，免疫调节剂为TLR激动剂，并且抗体结合癌抗原。在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，免疫调节剂为TLR激动剂，并且抗体结合癌抗原。在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，免疫调节剂为TLR7激动剂、TLR8激动剂或TLR7/8激动剂，并且抗体结合癌抗原。在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，免疫调节剂为T785、784或786，并且抗体结合癌抗原。
在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，免疫调节剂为TLR激动剂，并且抗体结合癌抗原。在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，免疫调节剂为TLR激动剂，并且抗体结合HER2癌抗原。在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，免疫调节剂为TLR7激动剂、TLR8激动剂或TLR7/8激动剂，并且抗体结合HER2癌抗原。在一些情况下，(a)包含甘露二糖糖多肽，免疫调节剂为T785、784或786，并且抗体结合HER2癌抗原。
还提供了治疗患有癌症和/或感染性疾病的个体的方法。这种方法可以包括向个体给药有效量的Dectin-2刺激性组合物。在一些情况下，Dectin-2刺激性组合物包括Dectin-2刺激性含糖聚合物(stimulating glycopolymer)(例如，如上所述)。在一些情况下，Dectin-2刺激性组合物包括多价Dectin-2刺激剂，例如，如上所述。还提供刺激抗原递呈细胞(APC)的方法，并且这种方法可以包括在体外或离体使APC与Dectin-2刺激性组合物以足以增强APC中Dectin-2信号传导的剂量和时段进行接触，从而产生经刺激的APC，其中所述Dectin-2刺激性组合物包括Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，甘露二糖糖多肽)。在一些情况下，Dectin-2刺激性组合物包括多价Dectin-2刺激剂，例如，如上所述。
在描述本发明的方法和组合物之前，应当理解，本发明不限于所描述的特定方法或组合物，其当然可以改变。还应理解，本文中使用的术语仅用于描述特定实施方案，并且不意图限制，因为本发明的范围将仅根据所附权利要求受到限制。
在提供值的范围的情况下，应理解，除非上下文另有明确规定，否则还具体公开了该范围的上下限之间的每个中间值，直到下限的单位的十分之一。在所述范围内的任何所述值或中间值与该所述范围内的任何其他所述值或中间值之间的每个较小范围包含在本发明中。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在该范围内或排除在该范围外，并且在所述较小范围内包括任一限值、两个限值或不包括两个限值的每个范围也涵盖在本发明内，遵从所述范围内任何特定排除的限值。在所述范围包括一个或两个限值的情况下，排除所包括限值中的一个或两个限值的范围也包括在本发明中。
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。尽管与本文描述的方法和材料类似或等效的任何方法和材料可用于本发明的实践或测试，但现在描述一些可能的和优选的方法和材料。本文提及的所有出版物通过引用并入本文，以结合所引用出版物来公开和描述方法和/或材料。应理解，在存在矛盾的情况下，本公开取代所并入的出版物的任何公开。
本领域技术人员在阅读本公开时将清楚地看到，本文所描述和示出的各个单独的实施方案中的每一个都具有离散的组件和特征，这些组件和特征可以容易地与其他若干实施方案中的任何一个的特征分离或组合，而不脱离本发明的范围或精神。任何叙述的方法可以按照叙述的事件的顺序或在逻辑上可能的任何其他顺序进行。
必须注意，如本文和所附权利要求中所使用的，除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一个/种”和“所述/该”包括复数指称。因此，例如，提及“细胞”包括多个这样的细胞，提及“肽”包括提及一种或更多种本领域技术人员已知的肽及其等同物，例如，多肽，等。
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II.定义
术语“特异性结合的”、“特异性结合”等是指相对于溶液或反应混合物中的其他分子或部分，非共价或共价的优先结合一种分子(例如，相对于其他可用多肽，抗体特异性结合特定的多肽或表位)。例如，相对于其他可用的抗原，抗Dectin-2抗体优先结合Dectin-2。在一些实施方案中，一个分子对与其特异性结合的另一分子的亲和力的特征在于KD(解离常数)为10-5M或更小(例如，10-6M或更小，10-7M或更小，10-8M或更小，10-9M或更小，10-10M或更小，10-11M或更小，10-12M或更小，10-13M或更小，10-14M或更小，10-15M或更小或者10-16M或更小)。“亲和力”是指结合强度。例如，可以通过较低的KD表示提高的结合亲和力。在一些情况下，提高的结合亲和力与较低的KD相关。
如本文所用，术语“特异性结合成员”是指特异性结合对的成员(即，两个分子，通常是两个不同分子，其中一个分子，例如第一特异性结合成员，通过非共价方式特异性结合至另一分子，例如第二特异性结合成员)。
如本文所用，术语“特异性结合剂”是指特异性结合生物分子(例如标志物，例如核酸标志物分子、蛋白质标志物分子，等)的任何试剂。在一些情况下，使用标志物分子(例如，树突状细胞标志物分子)的“特异性结合剂”。特异性结合剂可以是任何类型的分子。在一些情况下，特异性结合剂是抗体或其片段。在一些情况下，特异性结合剂是核酸探针(例如，RNA探针；DNA探针；RNA/DNA探针；经修饰的核酸探针，例如，锁核酸(LNA)探针、吗啉代探针(morpholino probe)；等)。
如本文所用，“标志物分子”不必是确定的(即，标志物不必一定将细胞明确地标记为特定类型)。例如，通过一种细胞的标志物分子的表达可以指示(即暗示)该细胞属于特定细胞类型。例如，如果3种细胞类型(A型、B型和C型)表达特定的标志物分子(例如特定的mRNA，特定的蛋白质等)，则通过一种细胞的该标志物分子的表达不一定能自身用来明确地确定该细胞是A型细胞。然而，这种标志物的表达可以暗示该细胞是A型细胞。在一些情况下，此类标志物的表达与其他证据结合，可以明确显示该细胞为A型细胞。作为另一说明性实例，如果已知特定细胞类型表达两种或更多种特定标志物分子(例如，mRNA、蛋白质，其组合等)，则通过一种细胞的所述两种或更多种特定标志物分子之一的表达可以暗示(但不是确定)该细胞是所讨论的特定类型。在这种情况下，该标志物仍被认为是标志物分子。
“抗体”是指包含免疫球蛋白基因或其片段中的抗原结合区(包括互补决定区(CDR))的多肽，所述抗体特异性结合并识别抗原。已识别的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及各式各样的免疫球蛋白可变区基因。轻链分类为κ或λ。重链分类为γ、μ、α、δ或ε，这又分别定义了免疫球蛋白类别，IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。IgG抗体是由四个肽链组成的约150kDa的大分子。IgG抗体包含两条相同的约50kDa的γ类重链和两条相同的约25kDa的轻链，因此是四聚体四级结构。两条重链彼此连接并且分别通过二硫键与轻链连接。所得的四聚体具有两个相同的半部分，它们一起形成Y形。叉子的每个末端包含相同的抗原结合位点。人类中有四个IgG亚类(IgG1、2、3和4)，以其在血清中的丰度(IgG1最丰富)的顺序命名。通常，抗体的抗原结合区在结合的特异性和亲和力方面会是最关键的。
示例性的免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚体。每个四聚体由两个相同的多肽链对组成，每对具有一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50至70kD)。每条链的N端定义了约100至110个或更多个氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。术语可变轻链(VL)和可变重链(VH)分别是指这些轻链和重链。
抗体例如以完整的免疫球蛋白形式存在或以经各种肽酶消化所产生的许多充分表征的片段形式存在。因此，例如，胃蛋白酶在铰链区中二硫键下方将抗体消化以产生F(ab)’2，其是Fab的二聚体，它本身是一条通过二硫键与VH-CH1连接的轻链。F(ab)’2可以在温和的条件下还原，以破坏铰链区的二硫键，从而将F(ab)’2二聚体转化为Fab’单体。Fab’单体基本上是具有部分铰链区的Fab(见Fundamental Immunology(基础免疫学)(Pauled.，3d ed.1993))。虽然根据完整抗体的消化定义了各种抗体片段，但本领域的技术人员将理解这样的片段可以化学地或通过重组DNA方法从头合成。因此，如本文所用，术语抗体还包括通过修改整个抗体所产生的抗体片段，或使用重组DNA方法从头合成的抗体片段(例如，单链Fv)或使用噬菌体展示库鉴定的抗体片段(参见，例如McCafferty et al.，Nature348:552-554(1990))。
术语“抗体”以最广义使用，涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的生物学活性(例如，特异性结合到靶抗原)。如本文所用，“抗体片段”及其所有语法变体定义为完整抗体的一部分，其包含完整抗体的抗原结合位点或可变区，其中该部分不含完整抗体的Fc区的恒定的重链结构域(即CH2、CH3和CH4，具体取决于抗体同种型)。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、Fab'-SH，F(ab')2和Fv片段；双抗体(diabodies)；任何抗体片段，其为具有由连续氨基酸残基的一个不间断序列组成的一级结构的多肽(在本文中称为“单链抗体片段”或“单链多肽”)，包括但不限于(1)单-链Fv(scFv)分子；(2)仅包含一个轻链可变域的单链多肽，或其片段，该片段包含该轻链可变域的三个CDR，而没有相关的重链部分；(3)仅包含一个重链可变区的单链多肽，或其片段，该片段包含该重链可变区的三个CDR，而没有相关的轻链部分；(4)纳米抗体，包含来自非人类物种的单个Ig结构域或其他特定的单结构域结合模块；和(5)由抗体片段形成的多特异性或多价的结构。在包含一个或更多个重链的抗体片段中，该一个或更多个重链可以包含在完整抗体的非Fc区中发现的任何恒定结构域序列(例如IgG同种型的CH1)，和/或可以包含在完整抗体中发现的任何铰链区序列，和/或可以包含与重链的铰链区序列或恒定结构域序列融合或位于其中的亮氨酸拉链序列。在一些情况下，抗体(例如抗Dectin-2抗体)是人源化抗体(例如可以是IgG4同种型人源化抗体，例如在铰链区具有突变例如S241P突变的IgG4同种型抗体，所述突变降低有时在嵌合小鼠/人IgG4抗体中发现的异质性)(例如，见Angal et al.，Mol Immunol.1993Jan；30(1):105-8)。
如本公开中所使用的，术语“表位”是指与抗体的互补位结合的抗原上的任何抗原决定基。表位决定基(epitopic determinant)通常由分子的化学活性表面基团组成，例如氨基酸或糖侧链，并常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物。该术语还适用于其中一个或更多个氨基酸残基是对应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。
术语“聚合物”是指由单体构件组成的低聚物，并且可以构成线性、支化或树枝状结构。例如，“含糖聚合物”是包括糖结构单元的聚合物结构，“糖多肽”是包括糖和氨基酸结构单元的聚合物结构。
如本文所用，术语“APC”或“抗原呈递细胞”是指这样的细胞，所述细胞在其细胞膜表面上表达主要组织相容性复合体II类(MHC II类)蛋白并且能够将与MHC II类复合的抗原呈递给T细胞，从而激活针对所呈现的抗原的T细胞。在一些实施方案中，APC是树突状细胞。在一些实施方案中，APC是巨噬细胞。在一些实施方案中，APC是B细胞。在一些实施方案中，APC是树突状细胞、巨噬细胞或B细胞。在一些实施方案中，APC是树突状细胞或巨噬细胞。在一些实施方案中，APC是树突状细胞或B细胞。在一些情况下，APC不是巨噬细胞。在一些情况下，APC不是B细胞。
如本文所用，术语“髓样细胞”涵盖粒细胞、单核细胞(Mo)、巨噬细胞(Mφ)和树突状细胞(DC)。这些细胞通常在肿瘤中丰富。因此，髓样细胞有时在本文中称为肿瘤相关髓样(TAM)细胞。
在细胞培养的语境中，术语“传代”(passaging或passage)(即，分裂的或分裂)是本领域已知的，并且是指将少量细胞转移到新的容器中。如果细胞定期分裂，则可以进行培养，因为它避免了与高细胞密度相关的衰老。对于贴壁细胞，作为传代方案的一部分，使细胞从生长表面脱离。脱离通常利用胰蛋白酶和/或其他可商购的试剂(例如，TrypLE、EDTA(乙二胺四乙酸)、用于从表面上物理刮除细胞的淀帚(policemen)(例如，橡胶淀帚)等来进行。然后，例如在用其他培养基稀释后，少量已脱离的细胞(例如，少至一个细胞)可用于接种新的细胞群体。因此，传代细胞群体意味着分离细胞群体的至少一部分细胞，稀释被分离的细胞，并对经稀释的分离细胞铺板(即，接种新的细胞群体)。
术语“培养基”(“media”and“medium”)在本文中可互换使用。细胞培养基是在体外培养过程中洗浴细胞的液体混合物。
如本文所用，术语“群体”，例如“细胞群体”或“细胞的群体”是指与其他细胞和/或细胞组群分离(即隔离)的两个或更多个细胞的群组(即群体)。例如，一个6孔培养皿可以包含6个细胞群体，每个群体都位于一个单独的孔中。一个细胞群体中的细胞可以是但不必是彼此的克隆衍生物。一个细胞群体可以源自一个单独的细胞。例如，如果将单独的细胞分别放置在6孔培养皿的单个孔中，并且每个细胞分裂一次，则该皿将包含6个细胞群体。细胞群体可以是任何所需大小，并且可以包含大于一个细胞的任意数量的细胞。例如，细胞群体可以是2个或更多细胞，10个或更多，100个或更多，1000个或更多，5000个或更多，104个或更多，105个或更多，106个或更多，107个或更多，108个或更多，109个或更多，1010个或更多，1011个或更多，1012个或更多，1013个或更多，1014个或更多，1015个或更多，1016个或更多，1017个或更多，1018个或更多，1019个或更多，或者1020个或更多的细胞。
如本文所用，术语“多个”是指大于一个。例如，多个可以是2个或更多，5个或更多，10个或更多，25个或更多，50个或更多，100个或更多，500个或更多，1000个或更多，2000个或更多，5000个或更多，104个或更多，105个或更多，106个或更多，107个或更多，等。
“Dectin-2”是具有细胞外C型凝集素样结构域折叠的II型膜受体。与Dectin-1不同，Dectin-2在其胞质结构域中缺乏免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)。人Dectin-2(NCBI参考序列NP_001007034.1)也称为CLEC6A，“C型凝集素结构域家族6成员A”、CLEC4N和CLECSF10。人Dectin-2的蛋白质序列是：
MMQEQQPQSTEKRGWLSLRLWSVAGISIALLSACFIVSCVVTYHFTYGETGKRLSELHSYHSSLTCFSEGTKVPAWGCCPASWKSFGSSCYFISSEEKVWSKSEQNCVEMGAHLVVFNTEAEQNFIVQQLNESFSYFLGLSDPQGNNNWQWIDKTPYEKNVRFWHLGEPNHSAEQCASIVFWKPTGWGWNDVICETRRNSICEMNKIYL(SEQ ID NO:1)
III.方法和组合物
本公开内容的方面包括用于治疗患有癌症的个体的方法和组合物(例如，通过向个体给药刺激髓样细胞中的Dectin-2信号传导的组合物，例如，通过诱导细胞表面上的Dectin-2簇集，从而刺激个体的抗癌免疫反应)。在一些情况下，髓样细胞是肿瘤相关的髓样(TAM)细胞。Dectin-2刺激可通过Dectin-2簇集来实现，其类似于在与显示低聚甘露糖(oligomannose)聚糖的微生物接触时在吞噬细胞表面上发生的簇集簇集。这种刺激也可以通过与具有高密度Dectin-2配体的微生物(如糠秕马拉色菌、酿酒酵母)和其他微生物物种(例如，几种病原菌种类)类似的Dectin-2刺激性抗体或配体(例如富含甘露二糖的糖肽、甘露聚糖多糖(mannan polysaccharide)和/或其他低聚甘露糖聚糖(例如Man-9))来实现。
刺激髓样细胞中Dectin-2信号传导的试剂(例如，通过增加细胞表面上的Dectin-2密度，例如通过诱导细胞表面上的Dectin-2簇集)在本文中称为“Dectin-2刺激剂”。Dectin-2刺激剂可以是“直接”试剂(例如，它们直接结合(例如特异性结合)髓样细胞上的Dectin-2)或可以是“间接”试剂(例如，它们增加诸如癌细胞的细胞表面上的Dectin-2配体的量)。直接Dectin-2刺激剂的实例包括但不限于：(a)非植物来源的天然存在的Dectin-2配体(例如，甘露聚糖多糖，甘露聚糖提取物，低聚甘露糖/高甘露糖聚糖，真菌提取物例如来自糠秕马拉色菌、酿酒酵母、白色念珠菌的细胞壁提取物，等)；(b)合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物或其模拟物(例如糖多肽)(例如，其直接与髓样细胞上的Dectin-2结合，或与任何(例如，特异性结合癌抗原的抗体)缀合)；和(c)Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体(例如，抗Dectin-2抗体-在一些情况下可溶并在一些情况下固定化在固体支持物上，多价抗Dectin-2抗体，例如也特异性结合癌抗原的抗体等)。
在一些情况下，可以使用直接Dectin-2刺激剂来接触髓样细胞(例如，体外、离体或体内，例如，通过将该试剂给药于个体)，从而触发(刺激)髓样细胞中的Dectin-2信号传导。在一些情况下，直接Dectin-2刺激剂可以与癌细胞结合剂(例如，抗肿瘤抗原的抗体)缀合，从而提高直接Dectin-2刺激剂在靶细胞(例如癌细胞)表面上的水平。
间接Dectin-2刺激剂的实例包括但不限于：1类α-甘露糖苷酶抑制剂(例如，几夫碱)；和可以减少甘露糖苷酶表达和/或活性的基因编辑剂和/或RNAi试剂；所有这些都可以提高靶细胞(例如癌细胞)表面上的末端甘露糖/甘露二糖残基的显示和/或密度，从而提高了对正在治疗的癌症的免疫反应的敏感性/强度。
因此，在一些实施方案中，主题方法是通过刺激髓样细胞中的Dectin-2信号传导来治疗患有癌症的个体的方法，例如，通过诱导细胞表面上的Dectin-2簇集，从而刺激该个体中的抗癌免疫反应，该方法包括向该个体给药以下组合物，其包含主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂如包含Dectin-2结合性含糖聚合物(例如低聚甘露糖糖多肽)和/或Dectin-2抗体的组合物；或间接Dectin-2刺激剂如I类α-甘露糖苷酶抑制剂，减少甘露糖苷酶表达和/或活性的基因编辑剂，可减少甘露糖苷酶表达和/或活性的RNAi试剂，等)。
在一些实施方案中，治疗患有癌症的个体的方法，其通过刺激髓样细胞中的Dectin-2信号传导(例如，通过增大细胞表面上的Dectin-2密度，例如，通过诱导细胞表面上的Dectin-2簇集)从而刺激个体的抗癌免疫反应，并且该方法包括向该个体给药Dectin-2刺激性组合物，所述组合物包含一种或更多种选自以下的Dectin-2刺激剂：(a)非植物来源的天然存在的Dectin-2配体(例如，甘露聚糖多糖，甘露聚糖提取物如来自酿酒酵母的提取物，真菌细胞壁提取物如来自糠秕马拉色菌和/或白色念珠菌的细胞壁提取物)；(b)合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物或其模拟物(例如糖多肽，例如低聚甘露糖糖多肽如富含甘露二糖的糖蛋白，例如富含O-连接和/或N-连接的甘露二糖的糖蛋白)；(c)Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体(例如，抗Dectin-2抗体-在一些情况下可溶并在一些情况下固定化在固相支持物上，也可特异性地结合癌抗原的多价抗Dectin-2抗体)；和(d)1类α-甘露糖苷酶抑制剂(例如，癌细胞与抑制剂接触，从而提高其表面上的Dectin-2配体的水平)。
(a)非植物来源的天然存在的Dectin-2配体
在一些实施方案中，治疗患有癌症的个体的方法包括向该个体给药包含“天然存在的Dectin-2配体”的组合物。该术语涵盖以下讨论的非植物来源的天然存在的Dectin-2配体，但也涵盖了植物来源的Dectin-2刺激性配体，例如低聚甘露糖糖多肽、低聚甘露糖/高甘露糖聚糖、富含甘露二糖的糖蛋白、富含O-连接和/或N-连接的甘露二糖的糖蛋白，和得自自然资源的甘露聚糖多糖(例如大豆凝集素)。
在一些实施方案中，治疗患有癌症的个体的方法包括向该个体给药包含非植物来源的天然存在的Dectin-2配体(即，非植物来源的天然存在的Dectin-2刺激剂)的组合物。在一些情况下，包含非植物来源的天然存在的Dectin-2配体的主题组合物包括真菌细胞壁提取物，所述真菌细胞壁提取物包含一种或更多种刺激髓样细胞中Dectin-2信号传导的糖蛋白(例如通过增大细胞表面上的Dectin-2密度，例如通过诱导在细胞表面上的Dectin-2簇集)。在一些情况下，这样的真菌细胞壁提取物包括Dectin-2刺激性含糖聚合物或其模拟物(例如，糖多肽)(例如，Dectin-2刺激性低聚甘露糖糖多肽如富含甘露二糖的糖蛋白，例如，富含O-连接的和/或N-连接的甘露二糖的糖蛋白)。例如，参见Ishikawa et al.，CellHost Microbe，2013Apr 17；13(4):477-88。
在一些情况下，包含非植物来源的天然存在的Dectin-2配体的主题组合物包括甘露聚糖多糖(例如，酿酒酵母甘露聚糖如碱性甘露聚糖提取物，例如参见Sigma-Aldrich的产品m7504，或白色念珠菌(C.albicans)甘露聚糖)。例如，参见Uryu et al.，Blood，2015May 7；125(19):3014-23；和Saijo et al.，Immunity，2010May 28；32(5):681-91。包含非植物来源的天然存在的Dectin-2配体的组合物可以包括从自然资源获得的低聚甘露糖/高甘露糖聚糖(甘露寡糖)(例如来自猪甲状腺球蛋白的man-9等)。在一些情况下，它不是从自然资源获得的，而是实验室产生的产物(例如，合成的)，但在结构上不同于植物来源的天然产物。包含非植物来源的天然存在的Dectin-2配体的组合物可以包括低聚甘露糖聚糖，例如可以在酿酒酵母的甘露聚糖提取物中找到。在一些情况下，甘露聚糖(例如甘露聚糖多糖，包含低聚甘露糖/高甘露糖聚糖的组合物)被全身输送至个体(例如人)，并且可以治疗多种肿瘤类型(例如癌症，如胰腺癌、肺癌和结肠癌)。参见例如下面的实施例部分。
如本文所用，术语“包含Dectin-2结合性低聚甘露糖糖多肽的组合物”意在涵盖这样的组合物其包含非植物来源的天然存在的Dectin-2配体(例如，Dectin-2刺激性细胞壁提取物，如糠秕马拉色菌(Malassezia furfur，M.furfur)Dectin-2刺激性细胞壁提取物，例如这样的提取物，其包含Dectin-2刺激性低聚甘露糖糖多肽，如富含甘露二糖的糖蛋白，例如富含O-连接和/或N-连接的甘露二糖的糖蛋白)。同样地，短语“与Dectin-2结合的糖多肽”意在涵盖可以在糠秕马拉色菌的细胞壁提取物中发现的Dectin-2刺激性糖多肽(例如低聚甘露糖糖蛋白，例如富含甘露二糖的糖蛋白，例如，富含O-连接和/或N-连接的甘露二糖的糖蛋白)。
在一些情况下，包括非植物来源的天然存在的配体的主题组合物包括一种或更多种糖蛋白(例如，低聚甘露糖糖蛋白，如富含甘露二糖的糖蛋白，例如，富含O-连接和/或N-连接的甘露二糖的糖蛋白)(在一些情况下从真菌细胞壁提取物中分离)，其独立或组合地刺激Dectin-2信号传导。在一些情况下，细胞壁提取物是糠秕马拉色菌细胞壁提取物。在一些情况下，细胞壁提取物来自糠秕马拉色菌和/或白色念珠菌。在一些情况下，包含非植物来源的天然存在的配体的主题组合物包含来自以下一种或更多种的提取物：糠秕马拉色菌，白色念珠菌(C.albicans)，曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)，结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)，粉尘螨(Dermatophagoides farina)，光滑念珠菌(Candida glabrata)，皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)，新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)，裴氏着色真菌(Fonsecaea pedrosoi)和烟曲霉(A.fumigatus)，其中所述提取物包含一种或更多种刺激Dectin-2信号传导的糖蛋白。
可以使用任何方便的方法制备细胞壁提取物。例如，参见Ishikawa et al.，CellHost Microbe.2013Apr 17；13(4):477-88；和McGreal et al.，Glycobiology.2006May；16(5):422-30，其通过引用整体并入本文。在一些情况下，合适的细胞壁提取物可商购。例如，在一些情况下，合适的细胞壁提取物是市售的糠秕马拉色菌的细胞壁提取物(例如，furfurman；Invivogen)。
在一些情况下，一种治疗患有癌症的个体的方法包括向该个体给药这样的组合物其包括非植物来源的天然存在的Dectin-2配体(例如，来自糠秕马拉色菌的真菌细胞壁提取物；甘露聚糖，例如甘露聚糖多糖，包含低聚甘露糖/高甘露糖聚糖的组合物；来自酿酒酵母的甘露聚糖，等)。在一些情况下，治疗患有癌症的个体的方法包括向该个体给药这样的组合物其包括非植物来源的天然存在的Dectin-2刺激性糖蛋白(例如，低聚甘露糖糖多肽，如富含甘露二糖的糖蛋白，例如富含O-连接和/或N-连接的甘露二糖的糖蛋白，例如诸如可以在来自糠秕马拉色菌的真菌细胞壁提取物中找到的糖蛋白)。在一些情况下，治疗患有癌症的个体的方法包括向该个体给药这样的组合物其包括非植物来源的高甘露糖糖缀合物(含糖聚合物)如糖脂或N-糖肽或蛋白质片段。
(b)合成的含糖聚合物(例如糖多肽，例如低聚甘露糖糖多肽)
富含密集O-糖基化的丝氨酸的蛋白质采用延伸的刚性结构，具有以特定的几何排列显示的聚糖(例如，在一些情况下构成Dectin-2识别的离散模式)。该结构可以使用化学结构明确的含糖聚合物来模拟，所述聚合物为有效的Dectin-2激活而量身定制并针对其他特性(例如肿瘤靶向和免疫细胞激活)而被功能化(图7A)。合成的含糖聚合物可以设计成具有各种主链结构、聚糖结构、长度、刚性、几何形状和末端官能度。例如，Dectin-2激活性含糖聚合物可以包括通过氨基酸N-羧基环内酸酐(NCA)的聚合产生的多肽主链(例如，参见图7B)。糖多肽包括糖基化氨基酸结构单元，如甘露糖基丝氨酸，所述结构单元单独或与其他氨基酸共混以实现各种聚糖密度和模式。对于合成方法的实例，参见例如Kramer et al.，Proc Natl Acad Sci U S A.2015Oct 13；112(41):12574-9和Zhou，et al.，Angew.Chem.Int.Ed.，57:3137-3142(2018)，其全部内容通过引用合并于此。
如本文所用，合成的Dectin-2刺激性糖多肽可以包括甘露二糖修饰的丝氨酸。在一些情况下，合成的Dectin-2刺激性糖多肽是带有高密度的丝氨酸O-糖基化(与Manα1,2Man(甘露二糖，Man2))的黏蛋白样糖蛋白，例如，如来自糠秕马拉色菌提取物的天然糖多肽，并充当强效的Dectin-2激动剂。在一些情况下，主题的合成糖多肽仅在被固定化时才激活Dectin-2。在一些情况下，主题的合成糖多肽仅在可溶形式时才激活Dectin-2。在一些情况下，主题的合成糖多肽在被固定化或在可溶形式时激活Dectin-2。主题的合成糖多肽可以像天然配体一样使用，例如，如上所述，或者可以被纳入到多价Dectin-2刺激剂(例如，肿瘤靶向糖缀合物(含糖聚合物)，在下面更详细地描述)。对于可用于将合成糖肽与抗体缀合的一种可能的缀合策略(已成功使用)的实例，参见图7C(例如，抗体上的赖氨酸残基可以用NHS-环辛炔化合物处理，然后与叠氮化物末端糖肽进行生物正交共价反应)。
另外，混合的氨基酸结构单元可以用组织靶向、成像、替代的免疫激活配体和其他所需功能性的部分(moieties)进行功能化。合成方法允许改变聚糖结构、密度和介入官能度(intervening functionalities)，从而可以鉴别Dectin-2激活的最佳构建体。因此，Dectin-2刺激性糖多肽可以具有不同的长度和聚糖结构/密度。例如，可以产生一系列含有各种密度的与丝氨酸结合的甘露糖(Man1)或甘露二糖(Man2)残基的糖肽(参见例如图9A)。将氨基酸结构单元(例如，甘露糖基丝氨酸、乳糖基丝氨酸等)单独地或与其他氨基酸共混使用以获得各种聚糖密度和模式，可以产生各种长度、聚糖结构和聚糖密度的糖肽(例如，通过NCA聚合)(例如，参见图7A至图7B和图9A)。单体还可以包括常见的氨基酸例如丙氨酸，以及亲水性残基例如谷氨酸，例如以在低糖基化密度下保持糖肽溶解度。使用带有叠氮化物的镍催化剂的聚合提供带有反应性胺和叠氮化物链端的双官能化糖肽，从而使得容易通过N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯或点击反应利用市售的荧光染料和其他部分(例如并入细胞膜的脂质)进行修饰。糖肽长度(20至300个氨基酸)、糖基化密度和肽组成可以通过改变反应中催化剂与单体的比例以及不同单体的比例来精确调节。可以使用各种长度(例如25、50、100个残基，例如，参见下文)和聚糖密度(例如，35％，65％，100％，例如，参见下文)的Dectin-2刺激性Man2糖肽(例如，单独或与第二种试剂缀合，所述第二种试剂例如肿瘤结合抗体或免疫调节抗体，例如通过赖氨酸偶联，或另一种免疫调节剂)。
与治疗进展有关的其他性质也可以进行调节。含糖聚合物的功能性可以包括成像探针，用于附着于抗体或整合到脂质体中的基团，或其他所需的要素。在一些情况下，主题的合成Dectin-2刺激性糖多肽包括肽(例如，黏蛋白样肽)(例如，在一些情况下是固定化在固体支持物上的肽，在一些情况下是可溶性肽，在一些情况下是与诸如抗体的肿瘤靶向部分缀合的肽，等)，所述肽的长度范围为8至400个氨基酸(例如，8至350、8至300、8至250、8至200、8至150、8至125、8至100、8至75、8至50、8至35、8至25、8至20、8至15、10至400、10至350、10至300、10至250、10至200、10至150、10至125、10至100、10至75、10至50、10至35、10至25、20至400、20至350、20至300、20至250、20至200、20至150、20至125、20至100、20至75、20至50、20至35、20至25、35至400、35至350、35至300、35至250、35至200、35至150、35至125、35至100、35至75、35至50、50至400、50至350、50至300、50至250、50至200、50至150、50至125、50至100、50至75、75至400、75至350、75至300、75至250、75至200、75至150、75至125、75至100、100至400、100至350、100至300、100至250、100至200、100至150或125至400、125至350、125至300、125至250、125至200或125至150个氨基酸)。
在一些情况下，主题的合成Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)包括肽(例如，黏蛋白样肽)，所述肽的长度范围为20至300个氨基酸(20-mer至300-mer)(例如，20至250、20至225、20至200、20至175、20至150、20至100、35至300、35至250、35至225、35至200、35至175、35至150、35至100、50至300、50至250、50至225、50至200、50至175、50至150或50至100个氨基酸)。在一些情况下，主题的合成Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)包括肽(例如黏蛋白样肽)，所述肽的长度范围为30至200个氨基酸(30-mer至200-mer)(例如，30至175、30至150、30至100、40至200、40至175、40至150、40至100、50至200、50至175、50至150或50至100个氨基酸)。
在一些情况下，主题的合成Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)包括肽(例如黏蛋白样肽)，所述肽的长度范围为50至150个氨基酸(50-mer至150-mer)(例如，50至125、50至100、50至75、75至150、75至125、75至100、100至150或125至150个氨基酸)。在一些情况下，主题的合成Dectin-2刺激性糖多肽包括肽(例如，黏蛋白样肽)，所述肽的长度范围为20至100个氨基酸(20-mer至100-mer)(例如，20至80、20至70、20至60、20至50、30至100、30至80、30至70、30至60、30至50、40至100、40至80、40至70、40至60或40至50个氨基酸)。
主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)可以具有任何所需的聚糖密度，并且可以使用任何方便的方法来控制/产生这样的密度，并且合适的方法对于本领域的普通技术人员来说是已知的。在一些情况下，主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度为至少10％(例如，至少15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％)。在一些情况下，主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度为至少25％(例如，至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％)。在一些情况下，主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度为至少30％(例如，至少35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％)。在一些情况下，主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度为至少50％(例如，至少55％，60％，65％，70％或75％)。在一些情况下，主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度为至少60％(例如，至少65％、70％或75％)。在一些情况下，主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度为60％。
在一些情况下，主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度范围为10％至100％(例如，10％至90％，10％至80％，10％至70％，10％至65％，10％至60％，20％至100％，20％至90％，20％至80％，20％至75％，20％至70％，20％至65％，25％至100％，25％至90％，25％至85％，25％至80％，25％至75％，25％至70％，25％至65％，30％至100％，30％至90％，30％至85％，30％至80％，30％至75％，30％至70％，或30％至65％)。在一些情况下，主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度范围为20％至85％(例如，20％至80％，20％至75％，20％至70％，20％至65％，25％至85％，25％至80％，25％至75％，25％至70％，25％至65％，30％至85％，30％至80％，30％至75％，30％至70％或30％至65％)。在一些情况下，主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度范围为25％至70％(例如25％至65％，30％至70％或30％至65％)。
Dectin-2的拟糖配体(Glycomimetic ligands)也可以代替天然糖用于聚合物构建物中。拟糖物可包括与Dectin-2结合并激活Dectin-2的不可水解的糖类似物或非糖的合成配体(例如，类似于聚糖配体)。
(c)Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体(例如，固定化在固体支持物上或可溶的)
在一些实施方案中，治疗患有癌症的个体的方法包括向该个体给药这样的组合物其包含Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体(例如，人源化抗体，抗Dectin-2抗体的抗原结合区，等)。在一些情况下，主题的Dectin-2刺激剂是抗Dectin-2单特异性多价抗体。在一些情况下，抗Dectin-2抗体(例如，单克隆抗Dectin-2抗体)是可溶的(未固定化在固体支持物上)。在一些情况下，抗Dectin-2抗体被固定化在固体支持物(例如，纳米颗粒)上。可以使用任何方便的固体支持物。合适的固体支持物包括但不限于：板，管，珠子(玻璃或聚苯乙烯珠子)，尼龙，硝酸纤维素，醋酸纤维素，玻璃纤维，任何方便的多孔聚合物，胶体颗粒，金属纳米材料如纳米颗粒、纳米板或纳米壳，乳胶珠子，等。在一些实施方案中，固体支持物是药学上可接受的固体支持物(例如，批准用于治疗用途的纳米颗粒)。
在一些情况下，主题的Dectin-2刺激性抗体被固定化在为纳米载体的固体支持物上。用于输送主题的Dectin-2刺激剂的纳米载体的实例包括但不限于：(a)聚合物纳米颗粒，其中药物与聚合物缀合或封装在聚合物中；(b)聚合物胶束：在水溶液中形成纳米级核/壳结构的两亲性嵌段共聚物(疏水性核区充当疏水性药物的储存库，而亲水性壳区稳定所述疏水性核并使聚合物变为水溶性)；(c)树枝状聚合物：纳米尺寸的合成聚合物大分子，由从中心核起呈现放射状的多个高度分支的单体组成；(d)脂质体：由脂质双层组成的自组装结构，其中水体积完全被膜状脂质双层包围；(e)基于病毒的纳米颗粒：一般的结构是蛋白质笼，其是多价的、自组装的结构；和(f)碳纳米管：由苯环组成的碳圆柱体。
微粒(例如，珠子)可以用作固体支持物或底物，其他材料例如主题的抗Dectin-2抗体可以与之偶联/缀合。取决于使用的性质(例如，在体外接触细胞如髓样细胞或癌细胞相对于给药到个体中)，可以使用各种珠子大小。例如，固体支持物珠子的直径尺寸可以为0.01μm至1000μm(例如，0.1μm至100μm，1μm至100μm，1μm至10μm等)。在一些实施方案中，珠子的直径尺寸范围可为2.5μm至3μm(例如，2.7μm至2.9μm，2.5μm，2.6μm，2.7μm，2.8μm，2.9μm或3.0μm)。在一些情况下，使用更大的珠子可能是有利的。在一些实施例中，珠子的直径尺寸可以为4.3μm至5.5μm(例如，直径为4.4μm至4.6μm，4.3μm，4.4μm，4.5μm，4.6μm，4.7μm，4.9μm至5.1μm，4.9μm，5.0μm，5.1μm，5.2μm，5.3μm，5.4μm或5.5μm)。在一些实施方案中，固体支持物珠子的直径尺寸范围可以为2μm至15μm(例如，直径为2μm至12μm、2μm至10μm、2μm至8μm、2μm至6μm、2μm至5μm、2μm至4μm、3μm至15μm、3μm至12μm、3μm至10μm、3μm至8μm、3μm至6μm、3μm至5μm、3μm至4μm、4μm至15μm、4μm至12μm、4μm至10μm、4μm至8μm、4μm至6μm、4μm至5μm、5μm至15μm、5μm至12μm、5μm至10μm、5μm至8μm、5μm至6μm)。
主题的珠子可以由任何方便的材料(或其组合)制成，包括但不限于：无机物，如金属、硅石(silica，例如，SiO2)、玻璃、氧化铝(alumina)、氧化钛(titania)、陶瓷等；有机物，如聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)；三聚氰胺，聚乳酸(polyactide)等；和磁性材料，诸如硅石、聚苯乙烯、右旋糖酐等。商业上可获得的磁性珠包括但不限于：ProMag，COMPEL，BioMag，BioMagPlus和Dynabeads。多种尺寸和聚合物组成的微粒适用于被固定化在固体支持物上的主题抗Dectin-2抗体的制备。微粒也可以例如用荧光染料染色。合适的珠子的组成及其制备方法可以在专利和非专利科学文献(例如，美国专利号8,283,037；5,597,531；5,635,574；和8,163,183，其通过引用并入本文)中找到。
还构思了多价、单特异性抗Dectin-2抗体。已经描述了用于产生多价、单特异性抗体的各种方法，并且这些方法可以用于产生Dectin-2-特异性抗体复合物。
多价Dectin-2刺激剂
在一些实施方案中，Dectin-2刺激剂是多价的(例如，多官能的)。例如，在一些情况下，直接Dectin-2刺激剂(“第一试剂”)与“第二试剂”缀合。第一试剂可以是任何直接Dectin-2刺激剂(即与Dectin-2结合并刺激髓样细胞中的Dectin-2信号传导的试剂，例如抗Dectin-2抗体的抗原结合区，含糖聚合物如与Dectin-2结合的糖多肽，天然的Dectin-2配体如富含甘露二糖的糖蛋白或甘露聚糖等)。因此，在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第一试剂是抗Dectin-2抗体或抗Dectin-2抗体的抗原结合区。在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第一试剂是含糖聚合物，如与Dectin-2结合的糖多肽(例如，Man2含糖聚合物)。在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第一试剂是天然的Dectin-2配体(例如，非植物来源的天然存在的Dectin-2配体，例如真菌细胞壁提取物，如来自糠秕马拉色菌(Malassezia furfur，M.furfur)和/或白色念珠菌(Candida albicans)的细胞壁提取物；甘露聚糖，例如甘露聚糖提取物，如碱的提取物，例如来自酿酒酵母(S.cerevisiae)的甘露聚糖提取物；等)。正如本文所述的其他Dectin-2刺激剂一样，多价Dectin-2刺激剂可用于治疗癌症。
如上所述，主题的多价Dectin-2刺激剂的第一试剂可以是含糖聚合物(例如，Man2)。第一试剂可以是氨基酸结构单元的共混物，其可以用组织靶向、成像、替代的免疫激活配体和其他所需功能性的部分进行功能化。合成方法允许改变聚糖结构、密度和介入官能度。因此，Dectin-2刺激性糖多肽可以具有不同的长度和聚糖结构/密度。例如，可以产生一系列含有各种密度的与丝氨酸结合的甘露糖(Man1)或甘露二糖(Man2)残基的糖肽(参见例如图9A)。将氨基酸结构单元(例如，甘露糖基丝氨酸、乳糖基丝氨酸等)单独地或与其他氨基酸共混使用以获得各种聚糖密度和样式，可以产生各种长度、聚糖结构和聚糖密度的糖肽(例如，通过NCA聚合)(例如，参见图7A至图7B和图9A)。单体还可以包括常见的氨基酸如丙氨酸，以及亲水性残基如谷氨酸，例如以在低糖基化密度下保持糖肽溶解度。使用带有叠氮化物的镍催化剂的聚合提供带有反应性胺和叠氮化物链端的双官能化糖肽，从而使得容易通过N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯或点击反应用市售的荧光染料和其他部分(例如并入细胞膜的脂质)进行修饰。糖肽长度(20至300个氨基酸)、糖基化密度和肽组成可以通过改变反应中催化剂与单体的比例以及不同单体的比例来精确调节。可以使用各种长度(例如25、50、100个残基，例如，参见下文)和聚糖密度(例如，35％，65％，100％，例如，参见下文)的Dectin-2刺激性Man2糖肽(例如，单独或缀合至第二试剂如肿瘤结合抗体，例如通过赖氨酸偶联)。
与治疗进展有关的其他性质也可以进行调节。含糖聚合物的功能可以包括成像探针，用于附着于抗体或整合到脂质体中的基团，或其他所需的要素。在一些情况下，第一试剂是主题的合成Dectin-2刺激性糖多肽，其包括肽(例如，黏蛋白样肽)(例如，在一些情况下是固定化在固体支持物上的肽，在一些情况下是可溶性肽，在一些情况下是与诸如抗体的肿瘤靶向部分缀合的肽，等)，所述肽的长度范围为8至400个氨基酸(8-mer至400-mer)(例如，8至350、8至300、8至250、8至200、8至150、8至125、8至100、8至75、8至50、8至35、8至25、8至20、8至15、10至400、10至350、10至300、10至250、10至200、10至150、10至125、10至100、10至75、10至50、10至35、10至25、20至400、20至350、20至300、20至250、20至200、20至150、20至125、20至100、20至75、20至50、20至35、20至25、35至400、35至350、35至300、35至250、35至200、35至150、35至125、35至100、35至75、35至50、50至400、50至350、50至300、50至250、50至200、50至150、50至125、50至100、50至75、75至400、75至350、75至300、75至250、75至200、75至150、75至125、75至100、100至400、100至350、100至300、100至250、100至200、100至150或125至400、125至350、125至300、125至250、125至200或125至150个氨基酸)。
在一些情况下，主题的第一试剂是合成的Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)，其包括肽(例如黏蛋白样肽)，所述肽的长度范围为20至300个氨基酸(20-mer至300-mer)(例如，20至250、20至225、20至200、20至175、20至150、20至100、35至300、35至250、35至225、35至200、35至175、35至150、35至100、50至300、50至250、50至225、50至200、50至175、50至150或50至100个氨基酸)。在一些情况下，主题的第一试剂是合成的Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)，其包括肽(例如黏蛋白样肽)，所述肽的长度范围为30至200个氨基酸(30-mer至200-mer)(例如，30至175、30至150、30至100、40至200、40至175、40至150、40至100、50至200、50至175、50至150或50至100个氨基酸)。
在一些情况下，主题的第一试剂是合成的Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)，其包括肽(例如黏蛋白样肽)，所述肽的长度范围为50至150个氨基酸(50-mer至150-mer)(例如，50至125、50至100、50至75、75至150、75至125、75至100、100至150或125至150个氨基酸)。在一些情况下，主题的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)，其包括肽(例如，黏蛋白样肽)，所述肽的长度范围为20至100个氨基酸(20-mer至100-mer)(例如，20至80、20至70、20至60、20至50、30至100、30至80、30至70、30至60、30至50、40至100、40至80、40至70、40至60或40至50个氨基酸)。在一些情况下，主题的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)，其包括肽(例如，黏蛋白样肽)，所述肽的长度范围为20至250个氨基酸(20-mer至250-mer)(例如，20至200、20至150、20至100、20至80、20至70、20至60、20至50、30至250、30至200、30至150、30至100、30至80、30至70、30至60、30至50、40至250、40至200、40至150、40至100、40至80、40至70、40至60、或40至50个氨基酸)。
如上所述，主题的Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)可以具有任何期望的聚糖密度，并且这种密度可以使用任何方便的方法来控制/产生，并且合适的方法对本领域普通技术人员来说是已知的。在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)时，第一试剂的聚糖密度为至少10％(例如，至少15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％)。在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)时，第一试剂的聚糖密度为至少25％(例如，至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％)。在一些情况下，Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度为至少30％(例如，至少35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％)。在一些情况下，Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度为至少50％(例如，至少55％，60％，65％，70％或75％)。在一些情况下，Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度为至少60％(例如，至少65％、70％或75％)。在一些情况下，Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度为60％。
在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)时，第一试剂的聚糖密度范围为10％至100％(例如，10％至90％，10％至80％，10％至70％，10％至65％，10％至60％，20％至100％，20％至90％，20％至80％，20％至75％，20％至70％，20％至65％，25％至100％，25％至90％，25％至85％，25％至80％，25％至75％，25％至70％，25％至65％，30％至100％，30％至90％，30％至85％，30％至80％，30％至75％，30％至70％，或30％至65％)。在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)时，第一试剂的聚糖密度范围为20％至85％(例如，20％至80％，20％至75％，20％至70％，20％至65％，25％至85％，25％至80％，25％至75％，25％至70％，25％至65％，30％至85％，30％至80％，30％至75％，30％至70％或30％至65％)。在一些情况下，Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)的聚糖密度范围为25％至70％(例如25％至65％，30％至70％或30％至65％)。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是免疫刺激剂，如模式识别受体(PRR)的刺激性配体(激动剂)。PRR的实例包括但不限于Toll样受体(TLR)(例如，TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR7/8、TLR9、TLR10、TLR11)，核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLR)，C型凝集素受体(CLR)和RIG-I样受体(RLR)。因此，在一些情况下，第二试剂选自：Toll样受体(TLR)，核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLR)，C型凝集素受体(CLR)和RIG-1样受体(RLR)。在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是Toll样受体(例如TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR7/8、TLR9、TLR10、TLR11)的刺激性配体(激动剂)。在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是TLR7/8激动剂(例如，T785，参见例如图22A和图22B，其描绘了T785)。T785也可以称为1-(4-氨基丁基)-2-丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺[Smiles：C1C(CCCC1)C(＝O)NCCCC[N]2C3＝C(N＝C2CCCC)C(＝NC4＝CC＝CC＝C34)N])。TLR7/8激动剂的实例包括但不限于：加地喹莫特(gardiquimod，1-(4-氨基-2-乙基氨基甲基咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇)，咪喹莫特(imiquimod，R837–TLR7的激动剂)，洛索立滨(loxoribine，TLR7的激动剂)，IRM2(2-甲基-1-[2-(3-吡啶-3-基丙氧基)乙基]-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺)(TLR8的激动剂)，IRM3(N-(2-{2-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]乙氧基}乙基)-N-甲基环己烷甲酰胺)(TLR8的激动剂)，CL307，786和CL097。在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是TLR7激动剂(例如，784)。在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是TLR8激动剂。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是T785(多价Dectin-2刺激剂的第一试剂与T785缀合)。在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是784。在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是786。在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是T785、784或786。
在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)时，第二试剂是免疫刺激剂，如模式识别受体(PRR)的刺激性配体(激动剂)。在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)时，第二试剂是Toll样受体(例如，TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR7/8、TLR9、TLR10、TLR11)的刺激性配体(激动剂)。在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)时，第二试剂是TLR7/8激动剂。在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)时，第二试剂是：T785，加地喹莫特(1-(4-氨基-2-乙基氨基甲基咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇)，咪喹莫特(R837–TLR7的激动剂)，洛索立滨(TLR7的激动剂)，IRM2(2-甲基-1-[2-(3-吡啶-3-基丙氧基)乙基]-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺)(TLR8的激动剂)，IRM3(N-(2-{2-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]乙氧基}乙基)-N-甲基环己烷甲酰胺)(TLR8的激动剂)，CL307，784(TLR7的激动剂)，786(TLR7/8的激动剂)，或CL097。
在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)时，第二试剂是784。在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如甘露二糖糖多肽)时，第二试剂是786。在一些情况下，当Dectin-2刺激性多价试剂的第一试剂是Dectin-2刺激性糖多肽(例如，甘露二糖糖多肽)时，第二试剂是T785。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000251
其中
J1为CH或N，
Q1具有下式：
Figure BDA0002393478650000252
T1、T2和每个RH独立地具有下式：
Figure BDA0002393478650000253
每个V都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
每个W都任选地存在，并且独立地为直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个X都任选地存在，并且独立地是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
每个Y都任选地存在，并且独立地为-CO-或直链或支链、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个Z都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
U任选地存在，并且为
Figure BDA0002393478650000261
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
波浪线
Figure BDA0002393478650000262
表示Q1、T1、T2和RH的连接点，
点(“●”)表示U的连接点，和
虚线
Figure BDA0002393478650000263
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000264
其中
Q1具有下式：
Figure BDA0002393478650000265
RH具有下式：
Figure BDA0002393478650000266
每个V都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
每个W都任选地存在，并且独立地为直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个X都任选地存在，并且独立地是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
每个Y都任选地存在，并且独立地为-CO-或直链或支链、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个Z都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
U任选地存在，并且为
Figure BDA0002393478650000271
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
波浪线
Figure BDA0002393478650000272
表示Q1和RH的连接点，
点(“●”)表示U的连接点，和
虚线
Figure BDA0002393478650000273
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000274
其中
RH具有下式：
Figure BDA0002393478650000275
V任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
W任选地存在，并且独立地为直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个X都任选地存在，并且独立地是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
每个Y都任选地存在，并且独立地为-CO-或直链或支链、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个Z都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
波浪线
Figure BDA0002393478650000281
表示RH的连接点，
虚线
Figure BDA0002393478650000282
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000283
其中
每个X都任选地存在，并且独立地是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
Y任选地存在，并且独立地为-CO-或直链或支链、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个Z都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
虚线
Figure BDA0002393478650000284
代表该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000285
Figure BDA0002393478650000291
其中
Z任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
虚线
Figure BDA0002393478650000292
代表该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000293
其中
J1为CH或N，
J2为CH、CH2、N、NH、O或S，
Q1具有下式：
Figure BDA0002393478650000301
T1、T2、T3和RH独立地具有下式：
Figure BDA0002393478650000302
每个V都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
每个W都任选地存在，并且独立地为直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个X都任选地存在，并且独立地是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
每个Y都任选地存在，并且独立地为-CO-或直链或支链、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个Z都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
U任选地存在，并且为
Figure BDA0002393478650000303
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
Figure BDA0002393478650000304
表示单键或双键，
波浪线
Figure BDA0002393478650000305
表示Q1、T1、T2、T3和RH的连接点，
点(“●”)表示U的连接点，和
虚线
Figure BDA0002393478650000306
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000307
其中
J1为CH或N，
J2为CH2、NH、O或S，
Q1具有下式：
Figure BDA0002393478650000311
T1、T2和RH独立地具有下式：
Figure BDA0002393478650000312
每个V都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
每个W都任选地存在，并且独立地为直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个X都任选地存在，并且独立地是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
每个Y都任选地存在，并且独立地为-CO-或直链或支链、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个Z都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
U任选地存在，并且为
Figure BDA0002393478650000313
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
波浪线
Figure BDA0002393478650000314
表示Q1、T1、T2和RH的连接点，
点(“●”)表示U的连接点，和
虚线
Figure BDA0002393478650000315
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000321
其中
J2为CH2、NH、O或S，
Q1具有下式：
Figure BDA0002393478650000322
RH具有下式：
Figure BDA0002393478650000323
每个V都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
每个W都任选地存在，并且独立地为直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个X都任选地存在，并且独立地是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
每个Y都任选地存在，并且独立地为-CO-或直链或支链、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个Z都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
U任选地存在，并且为
Figure BDA0002393478650000331
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
波浪线
Figure BDA0002393478650000332
表示Q1和RH的连接点，
点(“●”)表示U的连接点，和
虚线
Figure BDA0002393478650000333
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000334
其中
J2为CH2、NH、O或S，
Q1具有下式：
Figure BDA0002393478650000335
RH具有下式：
Figure BDA0002393478650000336
V任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
每个W都任选地存在，并且独立地为直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
X任选地存在，并且是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
Y任选地存在，并且为-CO-或直链或支链、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个Z都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
U任选地存在，并且为
Figure BDA0002393478650000341
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
波浪线
Figure BDA0002393478650000342
表示Q1和RH的连接点，
点(“●”)表示U的连接点，和
虚线
Figure BDA0002393478650000343
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000344
其中
J2为CH2、NH、O或S，
V任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
X任选地存在，并且是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
Z任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
条件是至少存在X或Z，
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
每个n独立地为0至4的整数，和
虚线
Figure BDA0002393478650000351
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000352
其中
V任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
X任选地存在，并且是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
Z任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
条件是至少存在X或Z，
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
每个n独立地为0至4的整数，和
虚线
Figure BDA0002393478650000361
表示连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000362
其中
V任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
R为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
每个n独立地为0至4的整数，和
虚线
Figure BDA0002393478650000363
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000364
其中
Q1具有下式：
Figure BDA0002393478650000371
RH具有下式：
Figure BDA0002393478650000372
V任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
每个W都任选地存在，并且独立地为直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
X任选地存在，并且是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
Y任选地存在，并且为-CO-或直链或支链、饱和或不饱和的二价C1-C8烃基，
每个Z都任选地存在，并且独立地为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
U任选地存在，并且为
Figure BDA0002393478650000373
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
波浪线
Figure BDA0002393478650000374
表示Q1和RH的连接点，
点(“●”)表示U的连接点，和
虚线
Figure BDA0002393478650000375
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000376
Figure BDA0002393478650000381
其中
V任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
X任选地存在，并且是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
Z任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
条件是至少存在X或Z，
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
每个n独立地为0至4的整数，和
虚线
Figure BDA0002393478650000382
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000383
其中
V任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
X任选地存在，并且是一个、两个、三个或四个二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基是连接或稠合的，其中连接的二价环烃基、杂环烃基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
Z任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-或-NR-，
条件是至少存在X或Z，
每个R独立地为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
每个n独立地为0至4的整数，和
虚线
Figure BDA0002393478650000391
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000392
其中
V任选地存在，并且为-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
R为氢，卤素(例如，氟、氯、溴或碘)，腈，-COOH或直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烃基，
每个n独立地为0至4的整数，和
虚线
Figure BDA0002393478650000393
表示该部分的连接点。
在一些情况下，X是选自以下的一种或更多种二价基团：苯，萘，吡咯，吲哚，异吲哚，吲哚嗪，呋喃，苯并呋喃，苯并噻吩，噻吩，吡啶，吖啶，萘啶，喹诺酮，异喹啉，异恶唑，恶唑，苯并恶唑，异噻唑，噻唑，苯并噻唑(benzthiazole)，咪唑，噻二唑，四唑，三唑，恶二唑，苯并咪唑，嘌呤，吡唑，吡嗪，蝶啶，喹恶啉，酞嗪，喹唑啉，三嗪，吩嗪，噌啉，嘧啶，哒嗪，环己烷，十氢化萘，吡咯烷，八氢吲哚，八氢异吲哚，四氢呋喃，八氢苯并呋喃，八氢苯并噻吩，四氢噻吩，哌啶，十四氢吖啶(tetradecahydroacridine)，萘啶，十氢喹啉，十氢异喹啉，异恶唑烷，恶唑烷，八氢苯并恶唑，异噻唑烷，噻唑烷，八氢苯并噻唑，咪唑烷，1,2,3-噻二唑烷，四唑烷(tetrazolidine)，1,2,3-三唑烷，1,2,3-恶二唑烷，八氢苯并咪唑，八氢嘌呤，吡唑烷，哌嗪，十氢蝶啶(dechydropteridine)，十氢喹喔啉，十氢酞嗪(dechydrophthalazine)，十氢喹唑啉，1,3,5-三嗪烷，十四氢吩嗪，十氢噌啉，六氢嘧啶(hexhydropyrimidine)或六氢哒嗪。在一些情况下，X的一个或更多个二价基团是稠合的。在一些情况下，X的一个或更多个二价基团通过键或-CO-连接。
在一些情况下，X具有下式：
Figure BDA0002393478650000401
其中任何上述结构可两侧使用。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000402
其中
V任选地存在，并且为-O-或-NH-，
每个n独立地为0至4的整数，和
虚线
Figure BDA0002393478650000411
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000412
其中
V不存在，
每个n独立地为0至4的整数，和
虚线
Figure BDA0002393478650000413
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000414
其中虚线
Figure BDA0002393478650000415
表示该部分的连接点。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂具有下式：
Figure BDA0002393478650000416
Figure BDA0002393478650000421
Figure BDA0002393478650000431
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是TLR2激动剂，例如试剂其包含N-α-棕榈酰-S-[2,3-双(棕榈酰氧基)-(2RS)-丙基]-L-半胱氨酸，棕榈酰-Cys((RS)-2,3-二(棕榈酰氧基)-丙基)(“Pam3Cys”)(例如参见图23B和图23C)，例如Pam3Cys，Pam3Cys-Ser-(Lys)4[也称为“Pam3Cys-SKKKK”和“Pam3CSK4”)。其他TLR2激动剂包括但不限于OM-174、脂磷壁酸(LTA)、Pam2CSK4，肽聚糖等。
在一些情况下，第一试剂是Dectin-2刺激性含糖聚合物(如上所述的具有多种可能的参数包括肽长度和聚糖密度)(例如，Man2含糖聚合物，Man2糖多肽)，第二试剂是TLR激动剂(例如，TLR7/8激动剂如R848、T785或786，TLR7激动剂如784，TLR2激动剂如Pam3Cys)。例如，在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物)(例如Man2糖多肽)，缀合至第二试剂：TLR7/8激动剂。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物)(例如Man2糖多肽)，缀合至第二试剂：(例如，T785，R848、784、786)。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物)(例如Man2糖多肽)，缀合至第二试剂：TLR2激动剂(例如，Pam3Cys)。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物)(例如，Man2糖多肽)，缀合至第二试剂：包括Pam3Cys的试剂(诸如Pam3Cys)。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物)(例如Man2糖多肽)，缀合至第二试剂：Pam3Cys。
在一些情况下，第一试剂是Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，并且第二试剂是TLR激动剂(例如，TLR7/8激动剂如T785、R848或786，TLR7激动剂如784，TLR8激动剂，或TLR2激动剂如Pam3Cys)。R848也称为瑞喹莫德(resiquimod)，是4-氨基-2-(乙氧基甲基)-α，R-848，R848，S28463，α-二甲基-1H-咪唑并(4,5-c)喹啉-1-乙醇(参见例如，图23C)。例如，在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，其与第二试剂：TLR7/8激动剂缀合。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，其与第二试剂：T785缀合(参见图24)。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，其与第二试剂：784缀合。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，其与第二试剂：786缀合。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，其与第二试剂：TLR2激动剂(例如Pam3Cys)缀合。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，其与第二试剂：为Pam3Cys的试剂缀合。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，其与第二试剂：Pam3Cys缀合。
在一些情况下，第一试剂是Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，Man2糖多肽)，第二试剂是抗体(例如，具有任何特异性的抗体)。例如，在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括第一试剂：Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物)(例如Man2糖多肽)，其与第二试剂：抗体(例如，可以是对癌抗原特异的抗体，也可以是任何特异性的抗体，即，该抗体可以与任何抗原特异性结合)缀合。
一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是免疫调节剂(例如，细胞因子，生长因子，模式识别受体(PRR)的刺激性配体，等)。例如，在一些情况下，第二试剂是细胞因子。细胞因子的实例包括但不限于：在IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-7，IL-9，IL-10，IL-12，IL-15，IL-18，IL-21，IFN-α，IFN-β，IFNγ，G-CSF，TNFα和GM-CSF。因此，在一些情况下，第二试剂选自：IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-7，IL-9，IL-10，IL-12，IL-15，IL-18，IL-21，IFN-α，IFN-β，IFNγ，G-CSF，TNFα和GM-CSF。在一些情况下，第二试剂是GM-CSF。在一些情况下，第二试剂是细胞因子如干扰素γ(IFNγ)、IL-15、IFN-α或IFN-β。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是生长因子。生长因子的实例包括但不限于：集落刺激因子(CSF)，激活素(Ativin)，结缔组织生长因子(CTGF)，表皮生长因子(EGF)，促红细胞生成素，成纤维细胞生长因子(FGF)，半乳凝素，生长激素，肝癌衍生生长因子(HDGF)，肝细胞生长因子(HGF)，胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP-1、-3、-4、-5、-6、7等)，胰岛素，胰岛素样生长因子(例如，IGF-1、-2、-3)，角质形成细胞生长因子(KGF)，瘦素(Leptin)，巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)，黑色素瘤抑制活性蛋白(MIA)，肌肉生长抑制素(Myostatin)，头蛋白(Noggin)，网膜素，抑瘤素-M，骨桥蛋白，骨保护素，血小板衍生生长因子(PDGF)，骨膜蛋白，胎盘生长因子(PLGF)，胎盘催乳素(Placental Lactogen)，催乳素(Prolactin)，RANK配体(RANKL)，视黄醇结合蛋白(RBP)，干细胞因子(SCF)，转化生长因子(TGFβ)和血管内皮生长因子(VEGF)。在一些情况下，第二试剂是诱导Dectin-2表达的因子。在一些情况下，第二试剂是GM-CSF。
在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是NLR(NOD1/2)配体(NOD1/2激动剂)。在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂是干扰素基因刺激蛋白(STING)配体/激动剂(例如MK-1454)。
免疫调节剂(可以用作多价Dectin-2刺激剂的第二试剂)的实例包括但不限于：抗CTLA4抗体(或其抗原结合区)；抗PD-1/PD-L1试剂(例如，抗PD-1抗体或其抗原结合区，PD-1结合试剂如PD-L1或PD-L2胞外域，抗PD-L1抗体或其抗原结合区，PD-L1结合试剂如PD-1胞外域，等)；CD40激动剂(例如，CD40L或抗CD40抗体)；4-1BB调节剂(例如，4-1BB激动剂)；抗CD47/SIRPA试剂(例如，抗CD47抗体或其抗原结合区，CD47结合试剂如SIRPA胞外域，抗SIRPA抗体或其抗原结合区，SIRPA结合试剂如CD47胞外域，等)；TIM3和/或CEACAM1的抑制剂；TIM3和/或CEACAM1的抑制剂；BTLA和/或CD160的抑制剂；等。因此，免疫调节剂可以是检查点阻断剂。
作为一个示例性实例，多价Dectin-2刺激剂的第一试剂是Dectin-2结合性含糖聚合物(或抗Dectin-2抗体，或天然Dectin-2配体诸如甘露聚糖)，第二试剂是粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(即，多价Dectin-2刺激剂是与GM-CSF缀合的第一试剂)。
在一些情况下，直接Dectin-2刺激剂(即与Dectin-2结合并刺激髓样细胞中的Dectin-2信号传导的试剂，例如抗Dectin-2抗体的抗原结合区，含糖聚合物如与Dectin-2结合的糖多肽，天然的Dectin-2配体，等)与靶向剂缀合，该靶向剂使Dectin-2刺激剂靶向靶细胞(例如，癌细胞)，从而使Dectin-2刺激剂显示在靶细胞表面上。因此，在一些情况下，多价Dectin-2刺激剂的第二试剂包括靶向剂(例如，肿瘤抗原抗体的抗原结合部分)，该靶向剂使Dectin-2刺激剂靶向靶细胞(例如癌细胞)。因为这样的试剂可以结合两个不同的靶分子(例如，靶分子诸如癌细胞表面上的癌抗原，和髓样细胞表面上的Dectin-2)，所以与靶向剂缀合的Dectin-2刺激剂有时在本文中称为多价Dectin-2刺激剂。
在一些情况下，主题的Dectin-2刺激剂(例如，用于通过Dectin-2刺激治疗癌症)是多价试剂(例如，多价抗体，抗体-糖缀合物，等)，其包括(i)第一试剂，其是Dectin-2刺激剂，所述Dectin-2刺激剂与髓样细胞表面上的Dectin-2结合(例如，特异性结合)并刺激Dectin-2信号传导(即，直接Dectin-2刺激剂)；(ii)第二试剂，其是癌靶向剂(例如，(a)癌细胞靶向剂，即与癌抗原特异性结合的靶向剂(例如，抗肿瘤抗体，肿瘤结合肽，肿瘤结合适配体，等)；和/或(b)免疫调节剂，即与癌症免疫治疗靶标特异性结合的试剂)。
特异性结合癌抗原的靶向剂(并且可以用作多价Dectin-2刺激剂的第二试剂)的实例是与癌细胞抗原特异性结合的抗体的结合区。合适的癌抗原是与癌症有关的那些抗原。癌抗原(例如，靶向剂可以与其特异性结合)的实例包括但不限于：CD19，CD20，CD22，CD24，CD25，CD30，CD33，CD38，CD44，CD47，CD52，CD56，CD70，CD96，CD97，CD99，CD123，CD279(PD-1)，CD274(PD-L1)，EpCam，EGFR，17-1A，HER2，CD117，C-Met，PTHR2，HAVCR2(TIM3)和SIRPA。特异性结合癌抗原的靶向剂(并可用作多价Dectin-2刺激剂的第二试剂)的其他实例包括但不限于肿瘤结合肽和肿瘤结合适配体。
在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂(例如，用于通过Dectin-2刺激治疗癌症)包括(i)含糖聚合物，如糖多肽(例如，天然存在的或合成的糖多肽如低聚甘露糖糖多肽，例如如上所述)，其用于刺激髓样细胞中的Dectin-2信号传导；(ii)靶向剂，如癌细胞靶向剂(例如，抗癌抗原的抗体的抗原结合区，肿瘤结合肽，肿瘤结合适配体)。在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂(例如，用于通过Dectin-2刺激治疗癌症)包括(i)含糖聚合物，如糖多肽(例如，天然存在的或合成的糖多肽如低聚甘露糖糖多肽，例如如上所述)，其用于刺激髓样细胞中的Dectin-2信号传导；(ii)免疫调节剂(例如，抗检查点抑制剂的抗体的抗癌结合区，CD40激动剂诸如CD40L或抗CD40抗体，T细胞调节的共刺激分子，检查点阻断剂，特异性结合癌症靶标的多肽，例如结合癌抗原的胞外域，特异性结合癌症免疫治疗靶标如PD-1、PD-1L、CD47、SIRPA、CTLA4的胞外域，等)。
具有抗癌靶向元件(例如，肿瘤靶向元件)的糖缀合物(例如，低聚甘露糖糖多肽)可以不损害正常组织，并导致Dectin-2配体(例如，来自抗Dectin-2抗体的Dectin-2结合区，低聚甘露糖糖多肽，甘露聚糖多糖或其他低聚甘露糖聚糖等)在肿瘤细胞上的选择性显示。这些工程化产品的灵活性还为功能优化和针对特定癌症定制产品提供了机会。例如，在一些情况下，主题的多价Dectin-2刺激剂包括与合成或天然的Dectin-2配体缀合的来自抗肿瘤抗体的抗原识别区。在一些情况下，抗Dectin-2抗体用作Dectin-2抗体或配体(例如富含甘露二糖的糖肽和/或其他低聚甘露糖聚糖诸如Man-9)多价复合物，类似于具有高密度Dectin-2配体的微生物，如糠秕马拉色菌(M.furfur)(例如，通过将抗Dectin-2抗体固定化在固体支持物上)。可用于将合成糖肽与抗体缀合的一种可能的缀合策略(已成功使用)的实例，请参见图7C(例如，抗体上的赖氨酸残基可以用NHS-环辛炔化合物处理，然后与叠氮化物末端糖肽进行生物正交共价反应)。
双特异性多价抗体可以包括Dectin-2和肿瘤相关细胞表面分子(例如CD19，CD20，CD22，CD24，CD25，CD30，CD33，CD38，CD44，CD47，CD52，CD56，CD70，CD96，CD97，CD99，CD123，CD279(PD-1)，CD274(PD-L1)，EpCam，EGFR，17-1A，HER2，CD117，C-Met，PTHR2，HAVCR2(TIM3)等)的抗原识别结构域(Fab，scFv，scDb等)。这些工程化抗体可能类似于靶向免疫细胞和肿瘤细胞的双特异性抗体的其他迭代，如正在接受临床开发的二价双特异性T细胞接合剂(BiTE)或四价双特异性抗体(TandAb)。糖缀合物可以包括与Dectin-2识别的聚糖(例如，低聚甘露糖糖肽，甘露聚糖多糖，和/或其他低聚甘露糖聚糖诸如Man-9)结合的肿瘤靶向组分(例如，抗癌抗原的抗体诸如EpCAM抗体，肿瘤结合肽，肿瘤结合适配体，等)(例如主题的Dectin-2刺激性糖多肽)。在一些情况下，肿瘤靶向组分可以直接被修饰以显示Dectin-2配体的多个拷贝，或者经聚糖修饰的蛋白质(例如链霉亲和素)的接头(例如生物素)可以用于增加聚糖化合价和避免由于碳水化合物修饰而导致的肿瘤抗原结合的任何干扰。可以使用任何方便的用碳水化合物修饰蛋白质的方法，例如，用于缀合复合碳水化合物例如低聚甘露糖聚糖的方案(例如，参见Gildersleeve et al，Bioconjug Chem.2008Jul；19(7):1485-90)。因此，被此类分子覆盖的肿瘤细胞将类似于表达Dectin-2配体的微生物，并且像经几夫碱处理的肿瘤细胞一样，在TAM细胞与肿瘤细胞之间的接触点激活Dectin-2信号传导。
Dectin-2激活结构域和肿瘤靶向结构域都可以在特异性、稳定性、亲和力和化合价方面进行修饰，或者与其他分子(例如其他PRR配体、细胞因子、毒素等)结合。例如，可以对基于抗体的糖缀合物进行修饰以显示非常高密度的低聚甘露糖聚糖(例如，Man-9)，以更有效地触发Dectin-2信号传导。同时，可以对抗体组分的可变区进行改变以识别特定的肿瘤抗原，并且可以对恒定区进行修饰(例如通过抗体类别转换或去岩藻糖基化)以更有效地接合TAM细胞上的激活性Fc受体。同时以这种方式激活Dectin-2和Fc受体信号传导可导致更有效的肿瘤细胞杀伤、摄取和抗原呈递，以及随后更强大的适应性免疫应答。
已经描述了产生多价抗体的各种方法，并且它们可以用于产生Dectin-2特异性抗体复合物。类似地，已经描述了基于碳水化合物的化合物的制备(例如，含糖聚合物，糖树枝状分子(glycodendrimer)，糖簇，糖纳米颗粒)，包括纳入由Dectin-2识别的聚糖的几种方法。这些基于抗体和基于碳水化合物的复合物均可用于以Dectin-2依赖性方式直接刺激TAM(即，作为Dectin-2刺激剂)，类似于糠秕马拉色菌(M.furfur)的细胞壁提取物。
接头
在一些情况下，本发明的多价Dectin-2刺激剂包含至少一种接头。可以利用各种化学物进行蛋白质修饰将抗体和/或免疫调节剂与多价Dectin-2刺激剂(例如，与Dectin-2结合并刺激Dectin-2信号传导的试剂)连接，并且本文所述的接头由多价Dectin-2刺激剂与具有反应性接头基团的试剂的反应产生。大量这样的试剂是本领域已知的。这种试剂的实例包括但不限于：N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)酯和N-羟基磺基琥珀酰亚胺基(磺基-NHS)酯(胺反应性)；碳二亚胺(胺和羧基反应性)；羟甲基膦(胺性反应)；马来酰亚胺(硫醇反应性)；卤代乙酰胺，诸如N-碘乙酰胺(硫醇反应性)；芳基叠氮化物(伯胺反应性)；氟化芳基叠氮化物(通过碳-氢(C-H)插入的反应性)；五氟苯基(PFP)酯(胺反应性)；四氟苯基(TFP)酯(胺反应性)；亚氨酸酯(imidoester，胺反应性)；异氰酸酯(羟基反应性)；乙烯基砜(硫醇、胺和羟基反应性)；吡啶基二硫化物(硫醇反应性)；和二苯甲酮衍生物(通过C-H键插入的反应性)。其他试剂包括但不限于Hermanson，Bioconjugate Techniques，2nd Edition(第2版)，Academic Press，2008中描述的那些试剂。
通常，本文所述的接头通过用于将抗体和/或免疫调节剂连接到多价Dectin-2刺激剂的任何化学部分的残基而与多价Dectin-2刺激剂结合。例如，在一些情况下，抗体和/或免疫调节剂经由接头在半胱氨酸残基处连接到多价Dectin-2刺激剂。相应地，抗体和/或免疫调节剂通过接头与多价Dectin-2刺激剂相连，其中该接头通过马来酰亚胺或琥珀酰亚胺亚单元与多价Dectin-2刺激剂相连。在另一个实例中，在一些情况下，抗体和/或免疫调节剂经由接头在赖氨酸残基的胺处连接到多价Dectin-2刺激剂。相应地，抗体和/或免疫调节剂经由接头与多价Dectin-2刺激剂相连，其中该接头经由羰基亚单元与多价Dectin-2刺激剂相连。在另一个实例中，抗体和/或免疫调节剂经由接头在经修饰的氨基酸残基的胺处连接到多价Dectin-2刺激剂。相应地，抗体和/或免疫调节剂经由接头连接到多价Dectin-2刺激剂，其中该接头经由经修饰的氨基酸亚单元和羰基亚单元与多价Dectin-2刺激剂相连。
接头可以具有任何合适的长度，使得当接头与多价Dectin-2刺激剂和抗体和/或免疫调节剂共价结合时，多价Dectin-2刺激剂和抗体和/或免疫调节剂的功能被维持。接头的长度可以为约
Figure BDA0002393478650000481
或更大，例如，约
Figure BDA0002393478650000482
或更大，约
Figure BDA0002393478650000483
或更大，约
Figure BDA0002393478650000484
或更大，约
Figure BDA0002393478650000485
或更大，约
Figure BDA0002393478650000486
或更大，约
Figure BDA0002393478650000487
或更大，约
Figure BDA0002393478650000488
或更大，或约
Figure BDA0002393478650000489
或更大。替代地或除此之外，接头的长度可以为约
Figure BDA00023934786500004810
或更小，例如约
Figure BDA00023934786500004811
或更小，约
Figure BDA00023934786500004812
或更小，约
Figure BDA00023934786500004813
或更小，约
Figure BDA00023934786500004814
或更小，约
Figure BDA00023934786500004815
或更小，约
Figure BDA00023934786500004816
或更小，约
Figure BDA00023934786500004817
或更小，约
Figure BDA00023934786500004818
或更小，约
Figure BDA00023934786500004819
或更小，约
Figure BDA00023934786500004820
或更小，约
Figure BDA00023934786500004821
或更小，或约
Figure BDA00023934786500004822
或更小。因此，接头的长度可以由前述端点中的任何两个所界定。接头的长度可为约
Figure BDA00023934786500004823
至约
Figure BDA00023934786500004824
例如，约
Figure BDA00023934786500004825
至约
Figure BDA00023934786500004826
约
Figure BDA00023934786500004827
至约
Figure BDA00023934786500004828
约
Figure BDA00023934786500004829
至约
Figure BDA00023934786500004830
约
Figure BDA00023934786500004831
至约
Figure BDA00023934786500004832
约
Figure BDA00023934786500004833
至约
Figure BDA00023934786500004834
约
Figure BDA00023934786500004835
至约
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约
Figure BDA00023934786500004837
至约
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约
Figure BDA00023934786500004839
至约
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约
Figure BDA00023934786500004841
至约
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约
Figure BDA00023934786500004843
至约
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约
Figure BDA00023934786500004845
至约
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约
Figure BDA00023934786500004847
至约
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约
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至约
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约
Figure BDA00023934786500004851
至约
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约
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至约
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约
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至约
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约
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至约
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约
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至约
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约
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至约
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约
Figure BDA00023934786500004863
至约
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约
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至约
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至约
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约
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至约
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约
Figure BDA00023934786500004871
至约
Figure BDA00023934786500004872
或约
Figure BDA00023934786500004873
至约
Figure BDA0002393478650000491
在一些情况下，接头的长度为约
Figure BDA0002393478650000492
至约
Figure BDA0002393478650000493
在一些情况下，接头在生理条件下不切断。如本文所用，短语“生理条件”是指20至40摄氏度的温度范围，大气压(即1atm)，约6至约8的pH以及存在一种或更多种的生理酶、蛋白酶、酸和碱。
在一些情况下，至少一个接头在生理条件下切断。例如，可以通过酶促过程或代谢过程来切断接头。
接头可以是任何合适的有机二价连接部分，从而可以实现所需的接头长度。
例如，接头可以具有或包含式S1：
Figure BDA0002393478650000494
其中，R2任选地存在并且是包含1至12个(即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链，G1为CH2、C＝O或键，G2为CH2、C＝O或键，并且a为1至40的整数。在一些情况下，a为1至20的整数。在一些情况下，a为1至10的整数。在一些情况下，a为1至5的整数。在一些情况下，a为1至3的整数。在一些情况下，R2存在并且是包含1至8个(即1、2、3、4、5、6、7或8个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链。
接头可以具有或包含式S2：
Figure BDA0002393478650000495
其中，a为1至40的整数，G1为CH2、C＝O或键，G2为CH2、C＝O或键。在一些情况下，a为1至20的整数。在一些情况下，a为1至10的整数。在一些情况下，a为1至5的整数。在一些情况下，a为1至3的整数。
接头可以具有或包含式S3：
Figure BDA0002393478650000496
其中，R2任选地存在并且是包含1至12个(即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链，G1为CH2、C＝O或键，G2为CH2、C＝O或键，每个A独立地选自任一氨基酸，并且c为1至20的整数。在一些情况下，c为1至10的整数。在一些情况下，c为1至5的整数。在一些情况下，c为1至2的整数。在一些情况下，R2存在并且是包含1至8个(即1、2、3、4、5、6、7或8个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链。
接头可以具有或包含式S4：
Figure BDA0002393478650000501
其中，R2任选地存在并且是包含1至12个(即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链，G1为CH2、C＝O或键，G2为CH2、C＝O或键，并且c为1至20的整数。在一些情况下，c为1至10的整数。在一些情况下，c为1至5的整数。在一些情况下，R2存在并且是包含1至8个(即1、2、3、4、5、6、7或8个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链。
接头可以具有或包含式S5：
Figure BDA0002393478650000502
其中，每个R2任选地存在并且独立地是包含1至12个(即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链，G1为CH2、C＝O或键，G2为CH2、C＝O或键，M任选地存在并且是CH2、NH、O或S，每个A独立地选自任一氨基酸，并且c为1至20的整数。在一些情况下，c为1至10的整数。在一些情况下，c为1至5的整数。在一些情况下，c为1至2的整数。在一些情况下，每个R2存在并且独立地是包含1至8个(即1、2、3、4、5、6、7或8个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链。
接头可以具有或包含式S6：
Figure BDA0002393478650000503
其中，R2任选地存在并且是包含1至12个(即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链，G1为CH2、C＝O或键，G2为CH2、C＝O或键。在一些情况下，R2存在并且是包含1至8个(即1、2、3、4、5、6、7或8个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链。
接头可以具有或包含式S7：
Figure BDA0002393478650000511
其中，每个R2任选地存在并且独立地是包含1至12个(即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链，G1为CH2、C＝O或键，G2为CH2、C＝O或键。在一些情况下，每个R2任选地存在并且独立地是包含1至8个(即1、2、3、4、5、6、7或8个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链。
接头可以具有或包含式S8：
Figure BDA0002393478650000512
其中，R2任选地存在并且是包含1至12个(即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链，G1为CH2、C＝O或键，G2为CH2、C＝O或键，M任选地存在并且是CH2、NH、O或S，并且a为1至40的整数。在一些情况下，a为1至20的整数。在一些情况下，a为1至10的整数。在一些情况下，a为1至5的整数。在一些情况下，a为1至3的整数。在一些情况下，R2存在并且是包含1至8个(即1、2、3、4、5、6、7或8)碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链。
接头可以具有或包含式S9：
Figure BDA0002393478650000513
其中，每个a独立地是1至40的整数，J为–NH–、–NR1–、–CO–、–S(O2)–、–S(O2)NH–、–S(O2)NR1–、–C(O)NR1–或–C(O)NH–，R1为C1-C6烃基或杂烃基基团或者C1-C10芳基或杂芳基基团，G1为CH2、C＝O或键，G2为CH2、C＝O或键。在一些情况下，a为1至20的整数。在一些情况下，a为1至10的整数。在一些情况下，a为1至5的整数。在一些情况下，a为1至3的整数。
接头S1-S9可以两侧使用，这意味着接头可以在任一端，指定通过波浪线
Figure BDA0002393478650000521
与抗体和/或免疫调节剂或者多价Dectin-2刺激剂结合。
在一些情况下，接头包含肽亚单元和/或聚乙二醇亚单元。
当接头包含聚乙二醇亚单元时，聚乙二醇亚单元通常包含约2至约25个聚乙二醇单元。在一些情况下，接头包含至少2个聚乙二醇单元(例如，至少3个聚乙二醇单元，至少4个聚乙二醇单元，至少5个聚乙二醇单元，至少6个聚乙二醇单元，至少7个聚乙二醇单元，至少8个聚乙二醇单元，至少9个聚乙二醇单元，至少10个聚乙二醇单元，至少11个聚乙二醇单元，至少12个聚乙二醇单元，至少13个聚乙二醇单元，至少14个聚乙二醇单元，至少15个聚乙二醇单元，至少16个聚乙二醇单元，至少17个聚乙二醇单元，至少18个聚乙二醇单元，至少19个聚乙二醇单元，至少20个聚乙二醇单元，至少21个聚乙二醇单元，至少22个聚乙二醇单元，至少23个聚乙二醇单元，至少24个聚乙二醇单元或至少25个聚乙二醇单元。相应地，接头可包含二(乙二醇)基团，三(乙二醇)基团或四(乙二醇)基团，5个聚乙二醇单元，6个聚乙二醇单元，8个聚乙二醇单元，10个聚乙二醇单元，12个聚乙二醇单元，24个聚乙二醇单元或25个聚乙二醇单元。在一些情况下，接头包含约2至约16个聚乙二醇单元或约2至约10个聚乙二醇单元。
当接头包含肽亚单元时，该肽亚单元通常包含约2至约50个氨基酸。在一些情况下，接头包含至少2个氨基酸残基(例如，至少3个氨基酸残基，至少4个氨基酸残基，至少5个氨基酸残基，至少6个氨基酸残基，至少7个氨基酸残基，至少8个氨基酸残基，至少9个氨基酸残基，至少10个氨基酸残基，至少11个氨基酸残基，至少12个氨基酸残基，至少13个氨基酸残基，至少14个氨基酸残基，至少15个氨基酸残基，至少16个氨基酸残基，至少17个氨基酸残基，至少18个氨基酸残基，至少19个氨基酸残基，至少20个氨基酸残基，至少21个氨基酸残基，至少22个氨基酸残基，至少23个氨基酸残基，至少24个氨基酸残基或至少25个氨基酸残基。在一些情况下，接头包含2个氨基酸残基，3个氨基酸残基，4个氨基酸残基，5个氨基酸残基，6个氨基酸残基，8个氨基酸残基，10个氨基酸残基，12个氨基酸残基，24个氨基酸残基或25个氨基酸残基。
肽亚单元可包含修饰或未修饰的、天然或非天然的氨基酸。通常，氨基酸是天然或非天然的、未修饰的氨基酸。例如，氨基酸可以是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸(aspartate)、谷氨酸(glutamate)、赖氨酸、精氨酸或组氨酸。在一些情况下，肽亚单元的至少一个氨基酸必须能够被接头和/或佐剂修饰。例如，该氨基酸可以是赖氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、酪氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺。在一些情况下，至少一种氨基酸是赖氨酸。赖氨酸是特别有利的，因为接头和/或试剂可以与氨基酸主链上的氮和/或氨基酸侧链上的氮结合。
在一些情况下，接头包含聚乙二醇亚单元和肽亚单元。
接头还可包含二价亚环己基基团。
在一些情况下，接头选自：
Figure BDA0002393478650000531
其中，R2任选地存在并且是包含1至8个碳单元的线性或支化、环状或直链、饱和或不饱和的烃基、杂烃基、芳基或杂芳基链；a为1至40的整数；每个A独立地选自任一氨基酸；下标c为1至25的整数；G1为CH2、C＝O或键，G2为CH2、C＝O或键，并且波浪线
Figure BDA0002393478650000533
表示连接点。在一些情况下，a为2至25的整数。在一些情况下，c为2至8的整数。
在一些情况下，接头可以具有或包含下式的结构：
Figure BDA0002393478650000532
Figure BDA0002393478650000541
其中，a为1至40的整数。在一些情况下，a为2至25的整数。在一些情况下，a为2、3、4、5、6、8、10、12、24或25。
根据本文的公开，示例性的接头将是明显的。
联合给药和混合物
关于上面的第一试剂和第二试剂，这些试剂也可以作为混合物/组合来给药，其中第一试剂和第二试剂彼此不缀合。因此，上述第一试剂和第二试剂不一定被缀合为多价试剂。因此，对于多价Dectin-2刺激剂的第一试剂和第二试剂，所有以上试剂也可以联合给药(例如，作为非缀合的单独试剂)，并且可以同时给药，以混合物给药，按顺序给药(一个接一个给药)，等。
(d)1类α-甘露糖苷酶(α-甘露糖苷酶I)抑制剂
在一些实施方案中，一种治疗患有癌症的个体的方法包括向该个体给药一种包含1类α-甘露糖苷酶抑制剂的组合物，所述1类α-甘露糖苷酶抑制剂例如，几夫碱；1-脱氧甘露伊霉素(1-deoxymannojirimycin)；RNAi试剂，其特异性地减少选自MAN1B1、MAN1A1、MAN1A2和MAN1C1中的一种或更多种甘露糖苷酶的表达；基因编辑剂，其特异性地减少选自MAN1B1、MAN1A1、MAN1A2和MAN1C1中的一种或更多种甘露糖苷酶的表达。Dectin-2识别包含多个末端甘露糖残基的多种病原体组分，并与高甘露糖型聚糖强烈反应。高甘露糖聚糖是在真核细胞中蛋白质的N-连接糖基化过程中产生的常见中间聚糖物质。在哺乳动物细胞中，这些高甘露糖聚糖被进一步加工成复杂或杂合型N-聚糖，该过程需要各种甘露糖苷酶的作用，这些甘露糖苷酶从最初的高甘露糖前体Man9GlcNAc2(Man-9)切除末端甘露糖残基。相应地，用甘露糖苷酶抑制剂(例如，几夫碱和/或1-脱氧甘露伊霉素，它们是1类α-甘露糖苷酶抑制剂)处理细胞导致N-连接糖基化模式发生转变，导致主要被高甘露糖物质(例如Man-9)修饰的糖蛋白的产生，因此导致在其表面上显示出升高水平的Dectin-2配体的细胞。
小分子I类α-甘露糖苷酶抑制剂(也称为α-甘露糖苷酶I抑制剂)(即几夫碱，1-脱氧甘露伊霉素，等)对哺乳动物细胞的内质网(ER)和高尔基复合体中的多种甘露糖苷酶起作用。在一些情况下，主题的I类α-甘露糖苷酶抑制剂是ERα-甘露糖苷酶I(MAN1B1)的选择性抑制剂，ERα-甘露糖苷酶I是作用于Man-9的第一甘露糖苷酶，Man-9是N-糖基化途径中最高阶的高甘露糖物质。然而，Dectin-2也与低阶高甘露糖聚糖(例如Man-7/-8)结合。因此，在一些情况下，主题的I类α-甘露糖苷酶抑制剂是一种或更多种下游高尔基氏甘露糖苷酶(MAN1A1、MAN1A2、MAN1C1)的选择性抑制剂。
在一些情况下，所述抑制剂是小分子(例如，I类α-甘露糖苷酶抑制剂，诸如几夫碱和/或1-脱氧甘露伊霉素)。在一些情况下，抑制剂(在本文中也称为1类α-甘露糖苷酶减量剂(reduction agent))是靶向甘露糖苷酶(例如，减少选自MAN1B1、MAN1A1、MAN1A2、MAN1C1中的一种或更多种甘露糖苷酶表达)的RNAi试剂或基因编辑剂。可以被1类α-甘露糖苷酶减量剂(诸如RNAi试剂或基因编辑剂)靶向的基因包括：MAN1B1、MAN1A1、MAN1A2和MAN1C1。
RNAi试剂包括shRNA、siRNA和microRNA试剂，这些试剂特异性地靶向对选自MAN1B1、MAN1A1、MAN1A2、MAN1C1的一种或更多种蛋白质进行编码的RNA。在一些情况下，RNAi剂特异性靶向编码MAN1B1的RNA。
基因编辑剂包括可以靶向细胞的基因组以修饰基因表达的试剂。在一些情况下，基因编辑剂是CRISPR/Cas试剂(例如，cas蛋白加上一种或更多种适当的引导RNA，例如Cas9加上引导RNA，cpf1加上引导RNA)。在一些情况下，基因编辑剂是锌指核酸酶(zing fingernuclease)试剂。在一些情况下，基因编辑剂是TALE或TALEN试剂。如本文所用，术语“基因编辑剂”包括切割所靶向的DNA以诱导突变的基因编辑剂(例如，通过同源的定向修复或非同源的末端连接)，并且还包括可以在不存在靶标切割时减少表达的基因编辑剂(例如，与表达调节剂融合或缀合的基因编辑剂，诸如可以抑制/减少表达的转录抑制因子或表观遗传修饰因子)。
本文所用的术语“1类α-甘露糖苷酶抑制剂”还涵盖甘露糖苷酶抑制剂的前药形式，诸如具有肿瘤特异性酶激活式封闭基团(caging groups)的那些，其可用于选择性靶向肿瘤。此外，可以将1类α-甘露糖苷酶抑制剂纳入用于肿瘤输送的抗体-药物缀合物。
在一些实施方案中，治疗患有癌症的个体的方法包括在体外或离体将来自个体的癌细胞与1类α-甘露糖苷酶抑制剂接触，并将经接触的癌细胞引入个体。不受理论的束缚，这是有效的，因为1类α-甘露糖苷酶抑制剂会导致靶细胞(例如癌细胞)表面上的Dectin-2刺激性化合物水平升高(例如，通过增加细胞表面上末端甘露糖/甘露二糖残基的显示和/或密度)，使靶细胞更可能激发免疫反应和/或使靶细胞激发比其他刺激方式更强烈的免疫反应。在一些情况下，经接触的癌细胞全身给药于个体。在一些情况下，将经接触的癌细胞局部给药(例如，s.c.、i.d.、i.m.等给药到个体的肿瘤中)。
在一些实施方案中，治疗患有癌症的个体的方法包括在体内使来自该个体的癌细胞与1类α-甘露糖苷酶抑制剂接触(例如，通过将1类α-甘露糖苷酶抑制剂给药于该个体)。在一些情况下，全身输送1类α-甘露糖苷酶抑制剂。在一些情况下，局部输送1类α-甘露糖苷酶抑制剂(例如，到个体的肿瘤中，到最近切除了肿瘤的区域中，等)。
刺激髓样细胞、APC和/或T细胞
在一些实施方案中(例如，当该方法包括向个体给药包含主题的Dectin-2刺激剂的Dectin-2刺激性组合物时)，使内源性髓样细胞(个体中存在的髓样细胞)(例如，肿瘤相关的髓样(TAM)细胞、树突状细胞(DC)、肿瘤相关的DC、抗原呈递细胞(APC)、肿瘤相关的APC，等)在体内与所给药的组合物接触。因此，该方法可以被认为是治疗患有癌症的个体的体内方法。例如，Dectin-2刺激性组合物可以给药于个体(例如，全身或局部地，例如注射到肿瘤中或肿瘤附近，到肿瘤切除部位中或附近，等)，从而使内源性髓样细胞与Dectin-2刺激性组合物接触。然后，经刺激的髓样细胞可以发动对癌细胞的增强的免疫反应，例如，经刺激的APC可以是负载的(例如，通过APC摄取靶抗原，例如用于呈递给T细胞)，然后可以在体内接触内源性T细胞。
本公开的方面包括用于刺激抗原呈递细胞(APC)(例如，树突状细胞(DC)、巨噬细胞、B细胞)的组合物和方法。在一些实施方案中，这样的方法包括：(a)使癌细胞与1类α-甘露糖苷酶抑制剂在体外或离体接触以产生接触了抑制剂的癌细胞(例如，该癌细胞在细胞表面上具有增加的末端甘露糖/甘露二糖残基显示和/或密度，因此具有增加的Dectin-2配体表面水平)；和(b)使APC与接触了抑制剂的癌细胞接触(例如，可以刺激APC细胞以“负载”癌抗原，例如，可以刺激APC以吞噬癌细胞)。在一些情况下，该方法还包括将经接触的APC引入个体(例如，其然后可以接触癌细胞并接触T细胞以刺激/增强对癌细胞的免疫反应)。在一些情况下，该方法还包括在使APC与接触了抑制剂的癌细胞接触(例如，以使APC“负载”)之后，使T细胞与经接触的(例如，“负载的”)APC接触，从而刺激T细胞。在一些情况下，该方法还包括将经刺激的T细胞引入个体。任何或所有细胞(例如，癌细胞、APC、T细胞)对于正在治疗的个体可以是自体的。例如，在一些情况下，T细胞(例如，仅T细胞)对于正在治疗的个体是自体的。在一些情况下，APC(例如，仅APC)对于正在治疗的个体是自体的。在一些情况下，癌细胞(例如，仅癌细胞)对于正在治疗的个体是自体的。在一些情况下，癌细胞和APC对于正在治疗的个体是自体的。在一些情况下，癌细胞和T细胞对于正在治疗的个体是自体的。在一些情况下，APC和T细胞对于正在治疗的个体是自体的。在一些情况下，癌细胞、APC和T细胞对于正在治疗的个体是自体的。在一些情况下，接触T细胞(例如，个体的)的步骤是在体内。在一些情况下，接触T细胞(例如，个体的)的步骤是在体外。
在一些实施方案中，使T细胞与负载的APC，例如DC接触。在接触期间，负载的APC，例如DC，将抗原呈递给T细胞以产生经接触的T细胞，并且经接触的T细胞产生对所呈递的抗原特异的免疫反应。T细胞可以是CD4+T细胞、CD8+T细胞，或CD4+和CD8+T细胞的组合。
使T细胞与负载的APC(例如DC)接触可以是体外或体内的。因此，短语“使T细胞接触”包括体外和体内接触。如果接触是体内的，则负载的APC，例如DC，可以被施用于个体，然后使APC(例如DC)与个体的内源性T细胞接触从而诱导免疫反应。因此，当在体内进行时，“使个体的T细胞与负载的APC接触”，例如“使个体的T细胞与负载的DC接触”的步骤在一些情况下可以写成：“将负载的DC引入个体”。例如，在一些情况下，主题的方法包括：(a)在体外使来自个体的APC(例如DC)以使得APC例如DC有效摄取靶抗原的剂量和时间段与(i)靶抗原；和(ii)主题的Dectin-2刺激剂进行接触，从而产生负载的APC，例如DC；以及(b)将已负载的APC(例如DC)引入个体。APC(例如DC)和T细胞可以如下文对“施用细胞”所述施用于个体。
在一些情况下，主题的方法可以在体内进行。在一些这样的情况下，接触是在体内的，使内源性APC(例如DC)在体内负载，然后已负载的APC(例如DC)在体内接触T细胞。因此，该方法可以通过体内给药(例如，主题的Dectin-2刺激剂给药)来进行。例如，可以通过向个体给药包含主题的Dectin-2刺激剂的组合物使内源性APC，例如DC(例如，TADC)，在体内负载。
如果接触是体外的，则可以使来自个体的自体T细胞(例如，自体T细胞群体)与已负载的APC(例如，DC)接触以产生经接触的T细胞(例如，经接触的T细胞群体)。可以使T细胞在足以激活T细胞的时段内与已负载的APC例如DC接触，使得当施用于个体时，T细胞可诱导免疫反应。在施用于个体之前，可以将T细胞(在与已负载的APC例如DC接触之前或之后)进行体外扩增和/或修饰(例如遗传修饰)。
在一些情况下，T细胞在体外与已负载的APC(例如DC)接触的时间段的范围为5分钟至24小时(例如，5分钟至18小时，5分钟至12小时，5分钟至8小时，5分钟至6小时，5分钟至4小时，5分钟至2小时，5分钟至60分钟，5分钟至45分钟，5分钟至30分钟，15分钟至18小时，15分钟至12小时，15分钟至8小时，15分钟至6小时，15分钟至4小时，15分钟至2小时，15分钟至60分钟，15分钟至45分钟，15分钟至30分钟，20分钟至18小时，20分钟至12小时，20分钟至8小时，20分钟至6小时，20分钟至4小时，20分钟至2小时，20分钟至60分钟，20分钟至45分钟，30分钟至18小时，30分钟至12小时，30分钟至8小时，30分钟至6小时，30分钟至4小时，30分钟至2小时，30分钟至60分钟，30分钟至45分钟，45分钟至18小时，45分钟至12小时，45分钟至8小时，45分钟至6小时，45分钟至4小时，45分钟至2小时，45分钟至60分钟，1小时至18小时，1小时至12小时，1小时至8小时，1小时至6小时，1小时至4小时，1小时至2小时或1小时至90分钟)。
在一些情况下，使T细胞群体(例如，1x102或更多个细胞(例如，1x103或更多个细胞，1x104或更多个细胞，1x105或更多个细胞或者1x106或更多个细胞))与已负载的APC，例如DC(例如，负载的APC例如DC的群体；具有负载的APC例如DC的群体；等)在体外接触。在一些情况下，使T细胞群体(例如，范围为1x102至1x1010个细胞(1x102至1x108个细胞，1x103至1x107个细胞，1x104至1x106个细胞，5x104至5x105个细胞，或者1x105个细胞))与已负载的APC，例如DC(例如，负载的APC例如DC的群体；具有负载的APC例如DC的群体；等)在体外接触。在一些情况下，使T细胞(例如，T细胞群体)与具有负载的APC例如DC(例如负载的APC例如DC的细胞群体)的细胞群体(例如，1x102或更多个细胞(例如，1x103或更多个细胞，1x104或更多个细胞，1x105或更多个细胞或者1x106或更多个细胞))接触。在一些情况下，使T细胞(例如，T细胞群体)与具有负载的APC例如DC(例如负载的APC例如DC的细胞群体)的细胞群体(例如，范围为1x102至1x1010个细胞(1x102至1x108个细胞，1x103至1x107个细胞，1x104至1x106个细胞，5x104至5x105个细胞，或者1x105个细胞))接触。
经接触的T细胞(例如，经接触的T细胞群体的细胞)可以如下文“施用细胞”所述的方式施用于个体。
树突状细胞。树突状细胞(DC)是哺乳动物免疫系统的一种抗原呈递细胞。如本文所用，术语“树突状细胞”是指在淋巴组织或非淋巴组织中发现的形态相似的细胞类型的多样化群体中的任何成员。这些细胞的特征在于其独特的形态和高水平的表面MHC-II类表达(Steinman，et al.，Ann.Rev.Immunol.9:271(1991)；对于这种细胞的描述通过引用结合到本文中)。
树突状细胞存在于几乎所有组织中，例如皮肤以及鼻、肺、肝、胃和肠的内层，以及骨髓、血液、脾脏和淋巴结中。一旦被激活，DC迁移到淋巴结，在淋巴结中它们与T细胞和B细胞相互作用，从而启动并形成适应性免疫应答。在某些发育阶段，DC长出树枝状突起(树突)，由此得到这些细胞的名称。树突状细胞的实例包括骨髓来源的树突状细胞(BMDC)、浆细胞样树突状细胞、朗格汉斯细胞(Langerhans cell)、并指状细胞、面纱细胞和真皮树突状细胞。在一些情况下，DC表达至少一种选自以下的标志物：CD11(例如，CD11a和/或CD11c)，MHC II类(例如，对于人类，HLA-DR、HLA-DP和HLA-DQ)，CD40，CD80和CD86。在一些情况下，DC对HLA-DR和CD83为阳性，而对CD14为阴性。通常，可以基于以下任何或所有标志物来鉴定DC(例如，可以验证DC的存在)：CD11c+；CD14-/低；CD80+；CD86++；MHC Class I++，MHC Class II+++；CD40++；CD83+/-；CCR7+/-。在一些情况下，DC为CD11b+/Gr1neg/CD11c+/MHCII+/CD64dull。在一些情况下，DC为CD11bneg/CD11chi/MHCII+。
在一些情况下，树突状细胞表达特定的Ig Fc受体。例如，树突状细胞可以表达Fc-γ受体，Fc-γ受体识别IgG抗体或识别包含IgG的Fc区的抗体。作为另一实例，树突状细胞可以表达Fc-α受体，Fc-α受体识别IgA抗体或识别含有IgA的Fc区的抗体。作为又一实例，树突状细胞可以表达Fc-ε受体，Fc-ε受体识别IgE抗体或识别含有IgE的Fc区的抗体。在一些情况下，获得表达特定Fc受体的树突状细胞并使其负载适当的桥接分子(例如，被树突状细胞Fc受体识别的类别的同种异型(allogeneic)Ig)。
在一些实施方案中，主题的方法包括获得或分离DC的步骤(例如，分离DC的富集群体)。DC的分离、产生和培养的技术对于本领域普通技术人员来说是已知的，并且可以使用任何方便的技术。在一些情况下，DC对于正在被治疗的个体是自体的(即，是从个体分离的细胞或是从个体的细胞衍生的细胞)。
在一些情况下，CD34(+)祖细胞(例如，骨髓(BM)祖细胞)用作生成DC的来源(例如，CD34+细胞可以使用抗体结合的磁珠进行富集)，然后其称为骨髓(BM)来源的树突状细胞(BMDC)。例如，可以通过将非贴壁细胞(CD34+细胞)在用作白细胞生长因子(例如，粒细胞-巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)(例如50ng/ml)的细胞因子和细胞因子(例如白介素4(IL-4)，例如20ng/ml)的存在下进行培养来生成BMDC。在一些情况下，CD34+细胞在GM-CSF和/或IL-4的存在下培养的时间段的范围为4天至18天(例如，5天至17天，7天至16天，8天至13天，9天至12天，6天至15天，8天至15天，10天至15天，12天至15天，13天至15天，5天至14天，5天至12天，5天至10天，5天至9天，6天至8天，6天，7天，8天，9天，10天，12天或14天)。当在GM-CSF和/或IL-4存在下培养CD34+细胞时，GM-CSF的浓度范围可为35ng/ml至65ng/ml(35ng/ml至65ng/ml，40ng/ml至60ng/ml，45ng/ml至50ng/ml，或50ng/ml)，并且IL-4的浓度范围可为5ng/ml至35ng/ml(10ng/ml至30ng/ml，15ng/ml至25ng/ml，17.5ng/ml至22.5ng/ml，或20ng/ml)。作为说明性实例，可以用盐溶液(例如，磷酸盐缓冲盐水(PBS))冲洗骨骼，并且可以靠Ficoll梯度将单核细胞从骨髓分离。然后可以分离/富集CD34+细胞(例如，使用缀合抗体的磁珠)，然后在GM-CSF和IL-4的存在下培养(如上所述)。在一些情况下(例如，当细胞是小鼠细胞时)，可以通过在GM-CSF中培养细胞来获得DC。在一些情况下(例如，当细胞是人细胞时)，可以通过在GM-CSF和IL-4中培养细胞来获得DC。
在一些情况下，单核细胞被用作生成DC的来源(有时称为血液来源的DC、血液Mo-DC、单核细胞DC，等)。例如，可以通过将贴壁细胞(单核细胞，例如，骨髓单核细胞、血液单核细胞等)(例如，CD14+血单核细胞)在GM-CSF(例如，以上针对BMDC所述的浓度范围)和/或IL-4(例如，以上针对BMDC所述的浓度范围)存在下培养一时间段其范围为3天至9天(例如4天至8天，5天至7天，3天至6天，4天至5天，6天至8天，或7天)来产生DC。例如，在一些情况下，将单核细胞从血液中分离并针对CD11b+细胞进行富集(例如，使用磁珠)。可以将所述细胞分类为“炎性单核细胞”(FSClo/SSClo/Gr1hi/CD115hi)和/或“巡逻单核细胞”(FSClo/SSClo/Gr1neg/CD115hi)。然后通过将单核细胞在GM-CSF存在下进行培养(例如，在一时间段内，该时间段的范围为3天至6天(例如4天至5天))，可以从各种类型的单核细胞生成DC。在一些情况下(例如，当细胞是小鼠细胞时)，通过在GM-CSF中培养细胞来获得DC。在一些情况下(例如，当细胞是人类细胞时)，通过在GM-CSF和IL-4中培养细胞来获得DC。为了从脾脏获得DC(脾脏DC)，可以将脾细胞针对CD11c+细胞进行富集(例如，使用偶联抗体的磁珠)，并可以使用流式细胞仪(例如FACS)对CD11chi/MHCIIhi细胞进行分类/富集。
在一些情况下，DC是肿瘤相关的DC(TADC)。可以通过任何方便的方法获得TADC。例如，为了从肿瘤中获得DC(肿瘤相关的DC，TADC)，可以消化肿瘤(例如，使用胶原酶和核酸酶)，并且可以富集CD11c+细胞(例如，使用缀合抗体的磁珠)，以及可使用流式细胞仪(例如FACS)对Gr1neg/CD11chi/MHCIIhi细胞进行分类/富集。
分离的和/或获得的DC(例如，如上所述)可以使用各种因子激活，所述因子包括但不限于TNFα(例如50ng/ml)和CD40配体(例如CD40L)(例如500ng/ml)(下面将详细介绍)。
有关树突状细胞以及分离、生成和/或培养DC的方法的更多信息，请参见：Vassalli，J Transplant.2013；2013:761429:“Dendritic Cell-Based Approaches forTherapeutic Immune Regulation in Solid-Organ Transplantation(固体器官移植中基于树突状细胞的治疗性免疫调节方法)”；Syme et al.，Stem cell.2005；23(1):74-81:“Comparison of CD34and monocyte-derived dendritic cells frommobilizedperipheral blood from cancer patients(癌症患者动员外周血中CD34与源自单核细胞的树突状细胞的比较)”；Banchereau et al.，Annu Rev Immunol.2000；18:767-811:”Immunobiology of dendritic cells(树突状细胞的免疫生物学)”；和美国专利申请号20130330822；20130273654；20130130380；20120251561；和20120244620；所有这些文献通过引用以其整体合并于此。
巨噬细胞。巨噬细胞是哺乳动物免疫系统的一种抗原呈递细胞(APC)。如本文所用，术语“巨噬细胞”是指在淋巴组织或非淋巴组织中发现的形态相似的细胞类型的多样化群体中的任何成员。这些细胞的特征在于其独特的形态和高水平的表面MHC-II类表达。巨噬细胞是源自单核细胞的吞噬细胞(这种吞噬细胞不是树突状细胞)或者是来自局部增殖的组织巨噬细胞的细胞。这些细胞在体内是组织特异性的，指的是，例如肝中的肝巨噬细胞、肺中的肺泡巨噬细胞、脑中的小胶质细胞、骨骼中的破骨细胞等。本领域技术人员知道如何鉴定巨噬细胞，如何从人或动物的体内分离巨噬细胞，以及如何针对亚类和亚群来表征巨噬细胞(Kruisbeek，2001；Davies and Gordon 2005a and b；Zhang et al.，2008；Mosser and Zhang，2008；Weischenfeldt and Porse，2008；Ray and Dittel，2010；Martinez et al.，2008；Jenkins et al.，2011)。
巨噬细胞可以通过不同的机制被激活为不同的亚类，包括但不限于M1、M2、M2a、M2b和M2c亚类。术语M1用于描述由于损伤或细菌感染和IFN-γ激活而产生的以经典方式被激活的巨噬细胞，但M2是与M1激活方式不同的多种形式的巨噬细胞的通用术语。M2分类进一步分为亚群(Mantovani et al.，2004)。最具代表性的形式是M2a巨噬细胞，其通常因暴露于蠕虫诱导的Th2细胞因子IL-4和IL-13而出现在蠕虫感染中。其中，M2a巨噬细胞显示出基本上参与保护宿主免于再次感染(Anthony et al.，2006)或有助于伤口愈合和组织重塑(Gordon，2003)。另一亚群是M2b巨噬细胞，它们产生高水平的IL-10和低水平的IL-12，但本身不是抗炎性的(Anderson and Mosser，2002；Edwards et al.，2006)。M2b巨噬细胞是由与Fc-γ受体结合的免疫复合物以及TLR配体所组合诱导的。最后，M2c巨噬细胞代表由IL-10、TGF-β或糖皮质激素诱导的亚型(Martinez et al.,2008)。
因此，“M2a巨噬细胞”是指这样的巨噬细胞，其已经暴露于Th2条件的环境(例如暴露于Th2细胞因子IL-4和IL-13)，并且通过基因精氨酸酶-1和/或基因RELM-α和/或基因CD206和/或基因Ym1的较高的表达而表现出特定表型。类似地，“M2b巨噬细胞”是指已经暴露于免疫复合物以及TLR所组合或TNF-α刺激的环境的巨噬细胞。所述细胞的特征在于基因IL-10和/或基因LIGHT和/或基因SPHK-1的较高的表达。
在一些情况下，本发明涉及“源自患者身体”的巨噬细胞。这意味着指定要么从所述患者的身体获得巨噬细胞，要么从所述患者的身体获得巨噬细胞前体细胞，然后使其在体外分化成巨噬细胞，如下所述：Wahl et al.2006；Davis and Gordon 2005；Smythies etal.，2006；Zhang et al.，2008；Mosser and Zhang，2008。
B细胞。B细胞是哺乳动物免疫系统的一种抗原呈递细胞(APC)。如本文所用，术语“B细胞”是指来自任何发育阶段(例如，B干细胞、B祖细胞、分化的B细胞、浆细胞)以及来自任何来源的B细胞，所述来源包括但不限于外周血，位于肿瘤处、肿瘤中或肿瘤附近的区域，淋巴结，骨髓，脐带血或脾细胞。
B细胞前体存在于产生未成熟B细胞的骨髓中。B细胞发育经历几个阶段，每个阶段代表抗体基因座上基因组含量的变化。在基因组重链可变区中，有三个区段V、D和J，这些区段在称为VDJ重排的过程中随机重组，从而在每个B细胞的免疫球蛋白中产生一个独特的可变区。轻链可变区发生类似的重排，但是仅涉及两个区段V和J。完全重排后，B细胞在骨髓中到达IgM+未成熟阶段。这些未成熟的B细胞在其表面上呈现膜结合的IgM，即BCR，并迁移至脾脏，在这里它们被称为过渡性B细胞。这些细胞中的一些分化为成熟的B淋巴细胞。在其表面表达BCR的成熟B细胞在血液和淋巴系统中循环，发挥免疫监视的作用。直到它们被完全激活，它们才会产生可溶性抗体。每个B细胞都有一个独特的受体蛋白，它将与一种特定的抗原结合。一旦B细胞遇到其抗原并从T辅助细胞接收到附加信号，它就可以进一步分化为表达和分泌可溶性抗体的血浆B细胞或记忆B细胞。
在本公开的上下文中，术语“B细胞”是指在其表面上呈现完全重排(即成熟)的BCR的任何B淋巴细胞。例如，在本发明的上下文中，B细胞可以是未成熟的或成熟的B细胞。在一些情况下，B细胞是初始
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B细胞，即尚未暴露于由所述B细胞表面上的BCR特异性识别的抗原的B细胞。在一些实施方案中，B细胞是CD19+B细胞，即在其表面表达CD19。在一些情况下，在本发明的上下文中，B细胞是CD19+B细胞，并在其表面表达完全重排的BCR。B细胞也可以是CD20+或CD21+B细胞。在一些情况下，CD20+或CD21+B细胞在其表面带有BCR。在一些实施方案中，B细胞是记忆B细胞，例如IgG+记忆B细胞。
治疗
本文所用的术语“治疗/处理(treatment，treating，treat)”通常是指获得所需的药理和/或生理作用。在完全或部分预防疾病或其症状的方面，效果可以是预防性的，和/或在部分或完全稳定或治愈疾病和/或归因于该疾病的副作用方面，效果可以是治疗性的。术语“治疗”涵盖了对哺乳动物，特别是人类的任何疾病的治疗，包括：(a)防止疾病和/或症状在可能易患该疾病或症状但尚未被诊断为患有该疾病或症状的受试者中发生(b)抑制该疾病和/或症状，即，阻止疾病和/或相关症状的发展；或(c)缓解该疾病及相关症状，即，使该疾病和/或症状消退。需要治疗的对象可以包括已经遭受的对象(例如患有癌症的对象，例如患有肿瘤的对象)以及需要预防的对象(例如癌症易感性高的对象；具有癌前肿瘤、癌前病变的对象；怀疑患有癌症的对象；等)。
术语“接受者”、“个体”、“受试者”、“宿主”和“患者”在本文中可互换使用，并且是指希望对其进行诊断、处理或治疗的任何哺乳动物受试者(例如人类)。用于治疗目的“哺乳动物”是指被分类为哺乳动物的任何动物，包括人类、家畜和农场动物，以及动物园、运动会(sports)动物，或宠物，例如狗、马、猫、牛、绵羊、山羊、猪、骆驼等。在一些实施方案中，哺乳动物是人。
治疗性治疗是在施用前受试者已罹患疾病的治疗，而预防性治疗是在施用前受试者还未罹患疾病的治疗。在一些实施方案中，受试者具有增加的罹患疾病的可能性，或怀疑具有增加的罹患疾病的可能性(例如，相对于标准，例如相对于平均个体，例如，受试者可能具有癌症的遗传体质和/或具有表明患癌风险增加的家族史)，在这种情况下，治疗可以是预防性治疗。在一些情况下，术语“疫苗接种”用于描述预防性治疗。例如，在正在治疗的受试者尚未被诊断出患有癌症的一些情况下(例如，受试者具有增加的罹患疾病可能性，被怀疑具有增加的罹患疾病可能性)(例如，受试者可能具有癌症的遗传体质和/或具有表明患癌风险增加的家族史)，受试者可以通过执行一种或更多种主题的方法而接种疫苗(进行治疗以使该治疗为预防性治疗)。
在正在治疗的受试者尚未被诊断出患有癌症的一些情况下(例如，受试者具有增加的罹患疾病的可能性，被怀疑具有增加的罹患疾病的可能性)(例如，受试者可能具有癌症的遗传体质和/或具有表明患癌风险增加的家族史)，受试者可以通过执行一种或更多种主题的方法而接种疫苗(进行治疗以使该治疗为预防性治疗)。
待治疗的个体和“癌细胞”
在一些实施方案中，待治疗的个体是患有癌症或感染性疾病的个体。如本文所用，“癌症”包括任何形式的癌症(例如，白血病；急性髓细胞性白血病(AML)；急性淋巴细胞性白血病(ALL)；淋巴瘤；间皮瘤(MSTO)；微小残留病；实体瘤癌症，例如肺癌，前列腺癌，乳腺癌，膀胱癌，结肠癌，卵巢癌，胰腺癌，肾脏癌，胶质母细胞瘤，髓母细胞瘤，平滑肌肉瘤以及头颈部鳞状细胞癌，黑色素瘤等)，包括原发性和转移性肿瘤；等。在一些情况下，该个体最近接受了癌症治疗(例如，放射疗法、化学疗法、手术切除等)，因此有复发的风险。任何和所有癌症都是适合通过主题的方法、组合物和试剂盒治疗的癌症。
本文所用的术语“癌症”、“新生物(neoplasm)”和“肿瘤”是指表现出自主的、不受调节的生长的细胞，使得它们表现出异常的生长表型，该表型的特征在于对细胞增殖的控制力明显丧失。本公开中用于检测、分析和/或治疗的感兴趣的细胞包括癌细胞(例如，来自患有癌症的个体的癌细胞)，恶性癌细胞，转移前的癌细胞，转移性癌细胞和非转移性癌细胞。几乎所有组织的癌症都是已知的。短语“癌症负担(cancer burden)”是指受试者中癌细胞的数量或癌体积。因此，减少癌症负担是指减少受试者中癌细胞的数量或癌体积。如本文所用，术语“癌细胞”是指任何癌细胞(例如，来自可以治疗的个体的任何癌症，例如，从患有癌症的个体中分离的)或任何源自癌细胞的细胞，例如癌细胞的克隆。例如，癌细胞可以来自已建立的癌细胞系，可以是从患有癌症的个体分离的原代细胞，可以是从患有癌症的个体分离的原代细胞的后代细胞，等。在一些情况下，该术语还可以指癌细胞的一部分，例如癌细胞的亚细胞部分、细胞膜部分或细胞裂解液。本领域技术人员已知许多类型的癌症，包括实体瘤例如上皮癌(carcinomas)、肉瘤、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、骨髓瘤等，和循环癌症(circulating cancer)例如白血病。
如本文所用，“癌症”包括任何形式的癌症，包括但不限于实体瘤癌症(例如，肺癌，前列腺癌，乳腺癌，膀胱癌，结肠癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，肝癌，胶质母细胞瘤，髓母细胞瘤，平滑肌肉瘤，头颈部鳞状细胞癌，黑色素瘤，神经内分泌癌，等)，和液体癌(例如血液癌症)；上皮癌；软组织肿瘤；肉瘤；畸胎瘤；黑色素瘤；白血病；淋巴瘤；和脑癌，包括微小残留病，包括原发性肿瘤和转移性肿瘤。任何癌症都是适合通过主题的方法和组合物治疗的癌症。
上皮癌是起源于上皮组织的恶性肿瘤。上皮细胞覆盖了身体的外表面，内衬于内腔，并形成了腺体组织的衬里。上皮癌的实例包括但不限于：腺癌(始于腺(分泌)细胞的癌症)，例如，乳腺癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌和结肠癌可以是腺癌；肾上腺皮质癌；肝细胞癌；肾细胞癌；卵巢癌；原位癌；导管癌；乳腺癌；基底细胞癌；鳞状细胞癌；移行性细胞癌；结肠癌；鼻咽癌；多房性囊性肾细胞癌；燕麦细胞癌；大细胞肺癌；小细胞肺癌；非小细胞肺癌；等。上皮癌可能会在前列腺、胰腺、结肠、脑(通常是继发性转移瘤)、肺、乳腺、皮肤中等发现。
软组织肿瘤是源于结缔组织的高度多样化的稀有肿瘤。软组织肿瘤的实例包括但不限于：肺泡软组织肉瘤；血管瘤样纤维组织细胞瘤；软骨粘液样纤维瘤(chondromyoxidfibroma)；骨骼软骨肉瘤；骨外粘液样软骨肉瘤；透明细胞肉瘤；促结缔组织增生性小圆细胞瘤；隆突性皮肤纤维肉瘤；子宫内膜间质瘤；尤文氏肉瘤；纤维瘤病(硬纤维瘤(Desmoid))；婴儿纤维肉瘤(fibrosarcoma,infantile)；胃肠道间质瘤；骨巨细胞瘤；腱鞘巨细胞瘤；炎性肌纤维母细胞瘤；子宫平滑肌瘤；平滑肌肉瘤；脂肪母细胞瘤；典型脂肪瘤；梭形细胞或多形性脂肪瘤；非典型脂肪瘤；软骨样脂肪瘤；高分化脂肪肉瘤；黏液样/圆形细胞脂肪肉瘤；多形性脂肪肉瘤；黏液样恶性纤维组织细胞瘤；高度恶性纤维组织细胞瘤；黏液纤维肉瘤；恶性周围神经鞘瘤；间皮瘤；神经母细胞瘤；骨软骨瘤；骨肉瘤；原始神经外胚层肿瘤；肺泡横纹肌肉瘤；胚胎横纹肌肉瘤；良性或恶性神经鞘瘤；滑膜肉瘤；埃文氏肿瘤；结节性筋膜炎；韧带样纤维瘤(desmoid-type fibromatosis)；孤立性纤维性肿瘤；隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)；血管肉瘤；上皮样血管内皮瘤；腱鞘巨细胞瘤(TGCT)；色素绒毛结节性滑膜炎(PVNS)；骨纤维结构发育不良；黏液纤维肉瘤；纤维肉瘤；滑膜肉瘤；恶性周围神经鞘瘤；神经纤维瘤；和软组织的多形性腺瘤；源于成纤维细胞、肌成纤维细胞、组织细胞、血管细胞/内皮细胞和神经鞘细胞的瘤变。
肉瘤是一种罕见类型的癌症，其起源于间充质来源的细胞，例如身体的骨骼或软组织，包括软骨、脂肪、肌肉、血管、纤维组织或其他结缔组织或支持组织。不同类型的肉瘤基于癌症的形成部位。例如，骨肉瘤在骨骼中形成，脂肪肉瘤在脂肪中形成，而横纹肌肉瘤在肌肉中形成。肉瘤的实例包括但不限于：阿斯金氏瘤；葡萄状肉瘤；软骨肉瘤；尤文氏肉瘤；恶性血管内皮瘤；恶性神经鞘瘤；骨肉瘤和软组织肉瘤(例如，肺泡软组织肉瘤；血管肉瘤；乳腺叶状囊肉瘤(cystosarcoma phyllodes)；隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)；硬纤维瘤；促结缔组织增生性小圆形细胞瘤；上皮样肉瘤；骨外软骨肉瘤；骨外骨肉瘤；纤维肉瘤；胃肠道间质瘤(GIST)；血管外皮细胞瘤；血管内皮瘤(更通常称为“血管肉瘤”)；卡波济氏肉瘤；平滑肌肉瘤；脂肪肉瘤；淋巴管肉瘤；恶性周围神经鞘瘤(MPNST)；神经纤维肉瘤；滑膜肉瘤；未分化的多形性肉瘤等)。
畸胎瘤是一种生殖细胞肿瘤，可能包含几种不同类型的组织(例如，可以包括源自三个胚层：内胚层、中胚层和外胚层中任何一个和/或全部的组织)，包括例如毛发、肌肉和骨骼。畸胎瘤最常见于女性的卵巢、男性的睾丸和儿童的尾骨。
黑色素瘤是一种始于黑色素细胞(形成黑色素(pigment melanin)的细胞)的癌症。它可能始于痣(皮肤黑色素瘤)，但也可能始于其他有色组织，例如眼睛或肠内。
白血病是始于血液形成组织(如骨髓)并导致大量异常血细胞生成并进入血流(bloodstream)的癌症。例如，白血病可起源于通常在血液中成熟的、骨髓来源的细胞。白血病以疾病发展和进展的速度(例如，急性与慢性)和受影响的白细胞的类型(例如，髓样与淋巴样)而命名。髓性白血病也称为髓系或成髓细胞白血病。淋巴性白血病也称为淋巴母细胞白血病或淋巴细胞白血病。淋巴性白血病细胞可能聚集在淋巴结中，从而变得肿胀。白血病的实例包括但不限于：急性髓系白血病(AML)，急性淋巴细胞白血病(ALL)，慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia，CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
淋巴瘤是始于免疫系统细胞的癌症。例如，淋巴瘤可起源于通常在淋巴系统中成熟的、骨髓来源的细胞。有两个基本类别的淋巴瘤。一种是霍奇金淋巴瘤(HL)，其标志是存在一种称为Reed-Sternberg细胞的细胞。当前有6种公认的HL类型。霍奇金淋巴瘤的实例包括：结节性硬化经典霍奇金淋巴瘤(CHL)，混合细胞性CHL，淋巴细胞耗竭性CHL，富含淋巴细胞的CHL和结节性淋巴细胞为主的HL。
淋巴瘤的另一种类型是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，其包括免疫系统细胞多种多样的癌症。非霍奇金淋巴瘤可进一步分为具有懒惰(生长缓慢)进程的癌症和具有侵略性(快速生长)进程的癌症。当前有61种公认的NHL类型。非霍奇金淋巴瘤的实例包括但不限于：与AIDS有关的淋巴瘤，间变性大细胞淋巴瘤，血管免疫母细胞淋巴瘤，母细胞性NK细胞淋巴瘤(blastic NK-cell lymphoma)，伯基特氏淋巴瘤，伯基特样淋巴瘤(小无裂细胞淋巴瘤)，慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤，皮肤T细胞淋巴瘤，弥漫性大B细胞淋巴瘤，肠病型T细胞淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，肝脾γ-δT细胞淋巴瘤，T细胞白血病，淋巴母细胞淋巴瘤，套细胞淋巴瘤，边缘区淋巴瘤，鼻T细胞淋巴瘤，小儿淋巴瘤(pediatric lymphoma)，周围性T细胞淋巴瘤，原发性中枢神经系统淋巴瘤，转化型淋巴瘤，与治疗有关的T细胞淋巴瘤，和Waldenstrom巨球蛋白血症。
脑癌包括任何脑组织癌症。脑癌的实例包括但不限于：神经胶质瘤(例如，胶质母细胞瘤，星形细胞瘤，少突胶质细胞瘤，室管膜瘤，等)，脑膜瘤，垂体腺瘤，前庭神经鞘瘤，原始神经外胚层瘤(髓母细胞瘤)等。
癌症的“病理”包括所有损害患者健康的现象。这包括但不限于：异常或无法控制的细胞生长，转移，干扰邻近细胞的正常功能，以异常水平释放细胞因子或其他分泌产物，抑制或加剧炎症或免疫反应，瘤变，癌变前(premalignancy,)，恶性肿瘤，侵袭周围或远处的组织或器官，诸如淋巴结，等。
如本文所用，术语“癌症复发”和“肿瘤复发”及其语法变体是指在诊断出癌症后肿瘤性细胞或癌细胞的进一步生长。特别地，当癌组织中发生癌细胞的进一步生长时，可能会出现复发。同样，当肿瘤之中的细胞扩散到局部或远处的组织和器官时，就会出现“肿瘤扩散”；因此，肿瘤扩散包括肿瘤转移。当肿瘤生长局部扩散到通过抑制、破坏或阻止正常器官功能而损害了所涉及组织的功能时，就会出现“肿瘤侵袭”。
如本文所用，术语“转移”是指癌性肿瘤在器官或身体部位中的生长，该器官或身体部位不直接连接到原始癌性肿瘤的器官。转移将被理解为包括微转移，即在未与原始癌性肿瘤的器官直接连接的器官或身体部位中存在不可检测量的癌细胞。转移也可以定义为一个过程的几个步骤，诸如癌细胞从原始肿瘤部位离开，以及癌细胞向身体其他部位迁移和/或侵袭。
如本文所用，术语“感染”(例如，关于“感染性疾病”)是指生物体(即，受试者)的至少一个细胞被感染原(infectious agent)感染的状态(例如，受试者患有细胞内病原体感染，例如慢性细胞内病原体感染)。如本文所用，术语“感染原”是指引起感染的外来生物实体(即，病原体)。例如，感染原包括但不限于：细菌，病毒，原生动物和真菌。细胞内病原体是特别令人感兴趣的。感染性疾病是由感染原引起的病症。在某些情况下，一些感染原不会引起可识别的症状或疾病，但是在改变的条件下有可能引起症状或疾病。主题的方法可用于治疗慢性病原体感染，例如包括但不限于：病毒感染，例如逆转录病毒，慢病毒，嗜肝DNA病毒(hepadna virus)，疱疹病毒，痘病毒，人乳头状瘤病毒等；细胞内细菌感染，例如分枝杆菌(Mycobacterium)，嗜衣原体(Chlamydophila)，埃里希氏体菌(Ehrlichia)，立克次体(Rickettsia)，布鲁氏菌(Brucella)，军团菌(Legionella)，弗郎西斯氏菌(Francisella)，李斯特菌(Listeria)，柯克斯体菌(Coxiella)，奈瑟氏菌(Neisseria)，沙门氏菌(Salmonella)，耶尔森氏菌(Yersinia sp)，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)等；和细胞内原生动物病原体，例如疟原虫(Plasmodium sp)，锥体虫(Trypanosoma sp.)，贾第虫(Giardia sp.)，弓形虫(Toxoplasma sp.)，利什曼原虫(Leishmania sp.)等。
联合给药
在一些情况下，主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，例如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物如糖多肽(例如低聚甘露糖糖多肽)，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，例如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)(例如，配制成药物组合物)与另一试剂例如癌症治疗药物(例如，肿瘤定向抗体)联合给药。相对于本公开的一种或更多种试剂的给药，这样的给药可涉及药物/抗体的并行(即，同时)、在前或随后给药。对于本公开的特定药物和组合物，本领域普通技术人员将不难确定合适的给药时间、顺序和剂量。在一些情况下，Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，例如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物如糖多肽(例如低聚甘露糖糖多肽)，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，例如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与一种或更多种增强活性或提高治疗效果(如免疫调节剂、肿瘤定向抗体等)的试剂一起配制。
术语“联合给药”和“与...组合”包括两种或更多种治疗剂的同时、并行或顺序(没有特定时限)给药。在一个实施方案中，所述试剂同时存在于细胞或受试者体内，或同时发挥其生物学或治疗作用。在一个实施方案中，治疗剂在同一组合物或单位剂型中。在其他实施方案中，治疗剂为单独的组合物或单位剂型。在某些实施方案中，第一治疗剂可以在第二治疗剂给药之前(例如，分钟，15分钟，30分钟，45分钟，1小时，2小时，4小时，6小时，12小时，24小时，48小时，72小时，96小时，1周，2周，3周，4周，5周，6周，8周或12周之前)给药、与其同时给药或在其之后(例如，5分钟，15分钟，30分钟，45分钟，1小时，2小时，4小时，6小时，12小时，24小时，48小时，72小时，96小时，1周，2周，3周，4周，5周，6周，8周或12周后)给药。
主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，例如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物如糖多肽(例如低聚甘露糖糖多肽)，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)治疗可以与化学疗法、放射疗法和/或其他免疫疗法结合以增强疗效。
在一些情况下，两种或更多种主题的Dectin-2刺激剂可以彼此联合给药。例如，非植物来源的天然存在的Dectin-2配体可与以下中的一种或更多种联合给药：(i)合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物或其模拟物(例如糖多肽)；(ii)Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，和(iii)1类α-甘露糖苷酶抑制剂。在一些情况下，合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物或其模拟物(例如糖多肽)可以与以下中的一种或更多种联合给药：(i)非植物来源的天然存在的Dectin-2配体；(ii)Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，和(iii)1类α-甘露糖苷酶抑制剂。在一些情况下，Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体可以与以下中的一种或更多种联合给药：(i)非植物来源的天然存在的Dectin-2配体；(ii)合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物或其模拟物(例如糖多肽)，和(iii)1类α-甘露糖苷酶抑制剂。在一些情况下，1类α-甘露糖苷酶抑制剂可与以下中的一种或更多种联合给药：(i)非植物来源的天然存在的Dectin-2配体；(ii)合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物或其模拟物(例如糖多肽)，和(iii)Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体。
可以与Dectin-2刺激剂组合使用(联合给药)的一类细胞毒性试剂是化学治疗剂。示例性的化学治疗剂包括但不限于：阿地白介素，六甲蜜胺，氨磷汀，天冬酰胺酶，博来霉素，卡培他滨，卡铂，卡莫司汀，克拉屈滨，西沙必利，顺铂，环磷酰胺，阿糖胞苷，达卡巴嗪(DTIC)，放线菌素，多西他赛，阿霉素，屈大麻酚，duocarmycin(倍癌霉素)，依托泊苷，非格司亭，氟达拉滨，氟尿嘧啶，吉西他滨，格拉司琼，羟基脲，伊达比星，异环磷酰胺，干扰素α，伊立替康，兰索拉唑，左旋咪唑，亚叶酸，甲地孕酮，美司钠，氨甲蝶呤，甲氧氯普胺(metoclopramide,)，丝裂霉素，米托坦，米托蒽醌，奥美拉唑，昂丹司琼，紫杉醇(TAXOLTM)，匹鲁卡品，丙氯拉嗪(prochloroperazine)，利妥昔单抗，皂素(saproin)，他莫昔芬，紫杉醇(taxol)，盐酸托泊替康，曲妥珠单抗，长春碱，长春新碱和酒石酸长春瑞滨。
在一些情况下，主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与癌症靶向剂(例如，特异性结合癌抗原的试剂，例如对肿瘤细胞标志物具有选择性的细胞特异性抗体)用于组合治疗(联合给药)。可以使用任何方便的癌细胞靶向剂。在一些情况下，癌细胞靶向剂是特异性结合癌细胞的癌抗原(例如，CD19，CD20，CD22，CD24，CD25，CD30，CD33，CD38，CD44，CD47，CD52，CD56，CD70，CD96，CD97，CD99，CD123，CD279(PD-1)，CD274(PD-L1)，EpCam，EGFR，17-1A，HER2，CD117，C-Met，PTHR2，HAVCR2(TIM3)和SIRPA)的特异性结合剂(例如，多肽，如抗体，其包括针对癌抗原的特异性抗原结合区)。因此，在一些情况下，主题的方法包括进行主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与癌细胞靶向剂的联合给药，所述癌细胞靶向剂是特异性结合剂(例如，多肽，如抗体，包括针对癌抗原的特异性抗原结合区)，其特异性结合选自以下的抗原(例如癌抗原)：CD19，CD20，CD22，CD24，CD25，CD30，CD33，CD38，CD44，CD47，CD52，CD56，CD70，CD96，CD97，CD99，CD123，CD279(PD-1)，CD274(PD-L1)，EpCam，EGFR，17-1A，HER2，CD117，C-Met，PTHR2，HAVCR2(TIM3)和SIRPA。
在一些情况下，主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与以下中的一种或更多种用于组合治疗(联合给药)：西妥昔单抗(结合EGFR)，帕尼单抗(结合EGFR)，利妥昔单抗(结合CD20)，曲妥珠单抗(结合HER2)，帕妥珠单抗(结合HER2)，阿仑单抗(结合CD52)，苯妥昔单抗(结合CD30)，托西莫单抗，替伊莫单抗，吉妥珠单抗，替伊莫单抗，和依决洛单抗(edrecolomab)(结合17-1A)。
在一些情况下，主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与免疫调节剂用于组合治疗(联合给药)。可以使用任何方便的免疫调节剂。在一些情况下，免疫调节剂选自：抗CTLA4抗体；抗PD-1/PD-L1试剂(例如，抗PD-1抗体，PD-1结合性试剂(诸如PD-L1或PD-L2胞外域)，抗PD-L1抗体，PD-L1结合性试剂诸如PD-1胞外域，等)；CD40激动剂(例如CD40L)；4-1BB调节剂(例如4-1BB激动剂)；抗CD47/SIRPA试剂(例如，抗CD47抗体，CD47结合性试剂诸如SIRPA胞外域，抗SIRPA抗体，SIRPA结合性试剂诸如CD47胞外域，等)；TIM3和/或CEACAM1的抑制剂；TIM3和/或CEACAM1的抑制剂；BTLA和/或CD160的抑制剂；等。
可以与主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)联合给药的合适的试剂包括但不限于：(i)CD40激动剂(例如，CD40L和/或激动性抗CD40抗体)，(ii)促炎细胞因子(例如，TNFα，IL-1α，IL-1β，IL-19，干扰素γ(IFNγ)等)，(iii)Toll样受体(TLR)激动剂(例如，CpG ODN，聚肌苷酸-聚胞苷酸(polyinosinic:polycytidylic acid，“poly I:C”，TLR-3激动剂)等)，(iv)吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂，(v)中和检查点分子的试剂(即，检查点阻断剂)(例如，抗CTLA-4抗体，例如易普利姆玛(Ipilimumab)；抗PD-1抗体；抗PD-L1抗体，等)，(vi)T细胞相关的共刺激分子(例如CD27、CD28、4-BBL等)，(vii)NFkB激活剂；和(viii)诱导髓样细胞Dectin-2表达的试剂(例如TNFα，IFNγ，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等)。
因此，在一些情况下，联合给药的治疗剂之一是包含主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)的组合物，并且其与选自以下的一种或更多种试剂联合给药：(i)CD40激动剂(例如，CD40L和/或激动性抗CD40抗体)，(ii)促炎细胞因子(例如TNFα，IL-1α，IL-1β，IL-19，干扰素γ(IFNγ)等)，(iii)Toll样受体(TLR)激动剂(例如，CpG ODN，聚肌苷酸-聚胞苷酸(“poly I:C”，TLR-3激动剂)等)，(iv)吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂，(v)中和检查点分子的试剂(例如，抗CTLA-4抗体，例如易普利姆玛；抗PD-1抗体；抗PD-L1抗体，等)，(vi)T细胞相关的共刺激分子(例如CD27、CD28、4-BBL等)，(vii)NFkB激活剂；和(viii)诱导髓样细胞Dectin-2表达的试剂(例如TNFα，IFNγ，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等)。在一些情况下，促炎细胞因子是IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-7，IL-9，IL-10，IL-12，IL-15，IL-18，IL-21，TNFα，IL-1α，IL-1β，IL-19，IFN-α，IFN-β，IFN-γ，G-CSF或GM-CSF。在一些情况下，联合给药的治疗剂之一是包含主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)的组合物，并且其与GM-CSF，TNFα，或IFNγ联合给药。在一些情况下，联合给药的治疗剂之一是包含主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)的组合物，其与GM-CSF联合给药。在一些情况下，联合给药的治疗剂之一是包含主题的Dectin-2刺激剂(例如，直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)的组合物，其与IFNγ联合给药。
在一些情况下，主题的治疗剂(例如，包括主题的Dectin-2刺激剂的组合物，所述Dectin-2刺激剂例如：直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与CD40激动剂(例如CD40L和/或激动性抗CD40抗体)联合给药。在一些情况下，主题的治疗剂(例如，包括主题的Dectin-2刺激剂的组合物，所述Dectin-2刺激剂例如：直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与促炎细胞因子(例如，TNFα，IL-1α，IL-1β，IL-19，干扰素γ(IFNγ)等)联合给药。
在一些情况下，主题的治疗剂(例如，包括主题的Dectin-2刺激剂的组合物，所述Dectin-2刺激剂例如：直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与Toll样受体(TLR)激动剂(例如，CpG ODN，聚肌苷酸-聚胞苷酸(“poly I:C”，TLR-3激动剂)等)联合给药。在一些情况下，主题的治疗剂(例如，包括主题的Dectin-2刺激剂的组合物，所述Dectin-2刺激剂例如：直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂联合给药。在一些情况下，主题的治疗剂(例如，包括主题的Dectin-2刺激剂的组合物，所述Dectin-2刺激剂例如：直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与中和检查点分子的试剂(例如，抗CTLA-4抗体，例如易普利姆玛；抗PD-1抗体；抗PD-L1抗体)联合给药。
在一些情况下，主题的治疗剂(例如，包含主题的Dectin-2刺激剂的组合物，所述Dectin-2刺激剂例如：直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与T细胞相关的共刺激分子(例如，CD27，CD28、4-BBL等)联合给药。在一些情况下，主题的治疗剂(例如，包括主题的Dectin-2刺激剂的组合物，所述Dectin-2刺激剂例如：直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与NFkB激活剂联合给药。在一些情况下，主题的治疗剂(例如，包括主题的Dectin-2刺激剂的组合物，所述Dectin-2刺激剂例如：直接Dectin-2刺激剂，诸如包含以下物质的组合物：Dectin-2结合性含糖聚合物例如低聚甘露糖糖多肽，Dectin-2结合性聚糖例如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖，和/或Dectin-2抗体；或间接Dectin-2刺激剂，诸如I类α-甘露糖苷酶抑制剂)与诱导髓样细胞的Dectin-2表达的试剂(例如，TNFα，IFNγ，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等)联合给药。
Dectin-2刺激剂的治疗可以与其他活性剂(诸如抗生素，细胞因子，抗病毒试剂等)进行组合(联合给药)。抗生素的类别包括：青霉素，例如青霉素G，青霉素V，甲氧西林，苯唑西林，羧苄青霉素，萘夫西林，氨苄青霉素等；与β-内酰胺酶抑制剂组合的青霉素，头孢菌素，例如头孢克洛，头孢唑啉，头孢呋辛，拉氧头孢等；碳青霉烯类；单环β-内酰胺类；氨基糖苷类；四环素类；大环内酯类；林可霉素；多粘菌素；磺酰胺类；喹诺酮类；氯霉素(cloramphenical)；甲硝哒唑；壮观霉素；甲氧苄啶；万古霉素等。也可以包括细胞因子，例如干扰素γ，肿瘤坏死因子α，白介素12等。抗病毒剂，例如阿昔洛韦、更昔洛韦等也可以用于治疗。
施用细胞和/或组合物。在一些情况下，将细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)移植到个体中(即，施用于个体)。在一些情况下，细胞在施用之前培养一段时间。将细胞(例如，Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触/经刺激的T细胞)可以单独地或与合适的底物或基质，例如用于支持它们在被移植到的组织(例如，靶器官，肿瘤组织，血流等)中的生长和/或组构，一起提供给个体(即，施用于个体)。在一些实施方案中，基质是支架(例如，器官支架)。在一些实施方案中，将施用1x103或更多个细胞，例如5x103或更多个细胞，1x104或更多个细胞，5x104或更多个细胞，1x105或更多个细胞，5x105或更多个细胞，1x 106或更多个细胞，5x106或更多个细胞，1x107或更多个细胞，5x107或更多个细胞，1x108或更多个细胞，5x108或更多个细胞，1x 109或更多个细胞，5x109或更多个细胞，或者1x1010或更多个细胞。在一些实施方案中，主题的细胞通过微载体(例如，在可生物降解的微载体上生长的细胞)施用于个体。
主题的细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)和/或组合物(例如，包含主题的Dectin-2刺激剂的Dectin-2刺激性组合物)可以以任何生理上可接受的辅料(例如William E培养基)来施用，例如其中移植的细胞可以找到合适位点以生存和起作用(例如器官重建)。可以通过任何方便的方法(例如注射，导管等)来引入细胞和/或组合物(例如，包含主题的Dectin-2刺激剂的Dectin-2刺激性组合物)。可以将细胞和/或组合物封装到脂质体或其他可生物降解的构建物中。在一些情况下，使主题的Dectin-2刺激剂以脂质体、微粒或纳米颗粒给药或与脂质体、微粒或纳米颗粒缀合。
主题的细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)和/或组合物(例如，包含主题的Dectin-2刺激剂的Dectin-2刺激性组合物)可以经由以下任何途径引入个体(即施用于个体)：肠胃外，皮下(s.c.)，静脉内(i.v.)，颅内(i.c.)，脊柱内，眼内，皮内(i.d.)，肌内(i.m.)，淋巴管内(i.l.)；或到脊髓液中。可将细胞和/或组合物全身地(例如，肠胃外，s.c.，i.v.，口服等)或局部地(例如，直接局部注射，局部注射到肿瘤和/或肿瘤切除部位中或者肿瘤和/或肿瘤切除部位附近，等)引入个体。可以通过注射(例如，全身注射、直接局部注射、局部注射到肿瘤和/或肿瘤切除部位中或者肿瘤和/或肿瘤切除部位附近等)、导管等引入细胞和/或组合物。用于局部输送(例如，输送至肿瘤、癌症部位和/或肿瘤切除部位)的方法的实例包括，例如通过团注法(bolus injection)，例如通过注射器，例如到关节、肿瘤或器官中，或到关节、肿瘤或器官附近；例如，通过连续输注，例如通过套管，例如利用对流(参见例如美国申请号20070254842，其通过引用并入本文)；或通过植入其上已经可逆地附着细胞的装置(参见例如美国申请号20080081064和20090196903，其通过引用并入本文)。
主题的细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)和/或组合物(例如，包含主题的Dectin-2刺激剂的Dectin-2刺激性组合物)可以通过任何合适的方式引入个体，包括局部表面(topical)、口服、肠胃外、肺内和鼻内等。肠胃外输注包括肌内、静脉内(团注或缓慢滴注)、动脉内、腹膜内、鞘内或皮下给药。例如，可以以医学上可接受的任何方式施用主题的细胞和组合物。这可以包括注射，通过肠胃外途径诸如静脉内、血管内、动脉内、皮下、肌内、肿瘤内、腹膜内、心室内、硬膜内(intraepidural)或其他途径以及口服、经鼻、眼、直肠或局部表面。本公开特别地包括缓释给药，通过诸如积存注射或可蚀解植入物的方式。还考虑了局部输送，例如，经由导管输送至一个或更多个动脉，例如肾动脉或供应局部肿瘤的血管。
在一些情况下，主题的细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)和/或组合物(例如，包含主题的Dectin-2刺激剂的Dectin-2刺激性组合物)通过局部注射施用到肿瘤和/或肿瘤切除部位中或者肿瘤和/或肿瘤切除部位附近。在一些情况下，主题的细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)和/或组合物(例如，包含主题的Dectin-2刺激剂的Dectin-2刺激性组合物)通过局部注射施用到肿瘤和/或肿瘤切除部位中或者肿瘤和/或肿瘤切除部位附近(例如，在一些情况下，以脂质体、微粒或纳米颗粒的形式)。
对受试者治疗的给药次数可以变化。将细胞和/或组合物引入个体(施用细胞和/或组合物)可能是一次性的事件；但在某些情况下，此类治疗可能会在有限的时间内引发改善，并且需要持续进行一系列的重复治疗。在其他情况下，在观察到效果之前可能需要多次施用细胞和/或组合物。如本领域普通技术人员将容易理解的，确切的方案取决于疾病或病况、疾病的阶段和所治疗个体的参数。
“治疗有效剂量”或“治疗剂量”是足以实现所需临床结果(即达到治疗功效)的量。可以通过一次或多次给药来给予治疗有效剂量。为了本公开的目的，主题的细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)和/或组合物(例如，包含主题的Dectin-2刺激剂的Dectin-2刺激性组合物)的治疗有效剂量是在施用于(例如移植到)个体时足以通过例如诱导针对抗原细胞(例如癌细胞)的免疫反应来减轻、改善、稳定、逆转、预防、减慢或延迟疾病状态进展(例如，减少：癌细胞的数量，肿瘤尺寸，肿瘤生长，肿瘤的存在，癌症的存在，等)的量。
Dectin-2刺激性组合物的治疗有效剂量可能取决于所使用的特定试剂，但通常每种试剂为8mg/kg体重或更多(例如8mg/kg或更多，10mg/kg或更多，15mg/kg或更多，20mg/kg或更多，25mg/kg或更多，30mg/kg或更多，35mg/kg或更多，或40mg/kg或更多)，或每种试剂为10mg/kg至40mg/kg(例如，10mg/kg至35mg/kg，或10mg/kg至30mg/kg)。达到和/或维持特定血清水平所需的剂量与给药之间的时间量成正比，而与给药的剂量成反比。因此，随着给药频率增加，所需剂量减少。本领域普通技术人员将容易地理解和实践给药策略的优化。对于上面列出的所有治疗有效剂量，当使用超过一种的试剂(例如，两种或更多种Dectin-2刺激剂，Dectin-2刺激剂与另外的抗癌剂(诸如肿瘤靶向抗体或免疫调节剂)联合给药)时，每种试剂的剂量可以独立于其它试剂。作为说明性实例(以说明剂量的独立性)，在一种情况下，主题的Dectin-2刺激剂的治疗剂量可以为75ug/ml至250ug/ml，而免疫调节剂的治疗剂量可以为40ug/ml至100ug/ml。
剂量和频率可以根据Dectin-2刺激剂在患者体内的半衰期而变化。本领域技术人员将理解，这样的指导原则将针对活性剂的分子量进行调整，例如在抗体片段的使用中，在Dectin-2刺激剂的使用中。剂量也可以针对局部给药(例如鼻内，吸入等)或全身给药(例如，i.m.，i.p.，i.v.等)而改变。
在一些实施方案中，细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)的治疗有效剂量为1x103或更多个细胞(例如5x103或更多，1x104或更多，5x104或更多，1x105或更多，5x105或更多，1x 106或更多，2x106或更多，5x106或更多，1x107或更多，5x107或更多，1x108或更多，5x108或更多，1x 109或更多，5x109或更多，或者1x1010或更多)。
在一些实施方案中，细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)的治疗有效剂量的范围为1x103个细胞至1x1010个细胞(例如，5x103个细胞至1x1010个细胞，1x104个细胞至1x1010个细胞，5x104个细胞至1x1010个细胞，1x105个细胞至1x1010个细胞，5x105个细胞至1x1010个细胞，1x106个细胞至1x1010个细胞，5x106个细胞至1x1010个细胞，1x107个细胞至1x1010个细胞，5x107个细胞至1x1010个细胞，1x108个细胞至1x1010个细胞，5x108个细胞至1x1010，5x103个细胞至5x109个细胞，1x104个细胞至5x109个细胞，5x104个细胞至5x109个细胞，1x105个细胞至5x109个细胞，5x105个细胞至5x109个细胞，1x106个细胞至5x109个细胞，5x106个细胞至5x109个细胞，1x107个细胞至5x109个细胞，5x107个细胞至5x109个细胞，1x108个细胞至5x109个细胞，5x108个细胞至5x109，5x103个细胞至1x109个细胞，1x104个细胞至1x109个细胞，5x104个细胞至1x109个细胞，1x105个细胞至1x109个细胞，5x105个细胞至1x109个细胞，1x106个细胞至1x109个细胞，5x106个细胞至1x109个细胞，1x107个细胞至1x109个细胞，5x107个细胞至1x109个细胞，1x108个细胞至1x109个细胞，5x108个细胞至1x109，5x103个细胞至5x108个细胞，1x104个细胞至5x108个细胞，5x104个细胞至5x108个细胞，1x105个细胞至5x108个细胞，5x105个细胞至5x108个细胞，1x106个细胞至5x108个细胞，5x106个细胞至5x108个细胞，1x107个细胞至5x108个细胞，5x107个细胞至5x108个细胞，或1x108个细胞至5x108个细胞)。
在一些实施方案中，待施用的细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)的浓度范围为1x 105个细胞/ml至1x 109个细胞/ml(例如，1x105个细胞/ml至1x108个细胞/ml，5x105个细胞/ml至1x108个细胞/ml，5x105个细胞/ml至5x107个细胞/ml，1x106个细胞/ml至1x108个细胞/ml，1x106个细胞/ml至5x107个细胞/ml，1x106个细胞/ml至1x107个细胞/ml，1x106个细胞/ml至6x106个细胞/ml，或2x106个细胞/ml至8x106个细胞/ml)。
在一些实施方案中，待施用的细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)的浓度为1x105个细胞/ml或更多(例如，1x105个细胞/ml或更多，2x105个细胞/ml或更多，3x105个细胞/ml或更多，4x105个细胞/ml或更多，5x105个细胞/ml或更多，6x105个细胞/ml或更多，7x105个细胞/ml或更多，8x105个细胞/ml或更多，9x105个细胞/ml或更多，1x106个细胞/ml或更多，2x106个细胞/ml或更多，3x106个细胞/ml或更多，4x106个细胞/ml或更多，5x106个细胞/ml或更多，6x106个细胞/ml或更多，7x106个细胞/ml或更多，或8x106个细胞/ml或更多)。
本公开的细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)和/或组合物(例如，包含主题的Dectin-2刺激剂的Dectin-2刺激性组合物)(即，主题的细胞和/或主题的组合物)可以以药物组合物的形式提供，包括在足够无菌条件下制备的用于人类给药的等渗辅料。对于药物制剂的一般原理，读者可以参考G.Morstyn&W.Sheridan编辑的Cell Therapy:Stem Cell Transplantation,Gene Therapy,andCellular Immunotherapy(《细胞疗法：干细胞移植、基因疗法和细胞免疫疗法》)，Cambridge University Press(剑桥大学出版社)，1996；和Hematopoietic Stem CellTherapy(《造血干细胞疗法》)，E.D.Ball,J.Lister&P.Law，Churchill Livingstone，2000。所述组合物的细胞辅料和任何伴生要素的选择将根据给药所采用的途径和装置进行调整。该组合物还可以包含一种或更多种促进细胞的植入或功能性动员的其他成分或与之伴生。合适的成分包括支持或促进细胞粘附的基质蛋白，或互补的细胞类型。
如上所述，Dectin-2刺激剂可以与药学上可接受的载体(一种或更多种天然或合成的有机成分或无机成分，主题的试剂与之结合以促进其应用)一起配制。合适的载体包括无菌盐水，但是本领域普通技术人员知晓已知药学上可接受的其他水性和非水性等渗无菌溶液和无菌混悬液。“有效量”是指能够改善或延迟患病、退化或受损状况的进展的量。有效量可以基于个体确定，并且将部分地基于对要治疗的症状和寻求的结果的考虑来确定。本领域普通技术人员可以通过使用这些因素并且仅使用常规实验来确定有效量。
Dectin-2刺激剂可以作为药物组合物给药，该药物组合物包含活性治疗剂和其它的药学上可接受的辅料。优选的类型取决于预期的给药方式和治疗应用。取决于所需的制剂，该组合物还可包含药学上可接受的无毒载体或稀释剂，其被定义为通常用于配制用于动物或人类给药的药物组合物的媒介物。对稀释剂进行选择以不影响组合的生物活性。这样的稀释剂的实例是蒸馏水、生理磷酸盐缓冲盐水、Ringer溶液、葡萄糖溶液和Hank溶液。另外，该药物组合物或制剂还可以包含其他载体，佐剂或无毒、无治疗性、无免疫原性的稳定剂等。
在一些实施方案中，药物组合物还可包含大的、缓慢代谢的大分子诸如蛋白质，多糖诸如壳聚糖，聚乳酸，聚乙醇酸和共聚物(诸如乳胶官能化的SepharoseTM，琼脂糖，纤维素等)，聚合氨基酸，氨基酸共聚物和脂质聚集体(诸如油滴或脂质体)。
载体可以多种方式携带试剂，包括直接或经由接头基团共价键合，以及非共价连接。合适的共价键载体包括蛋白质诸如白蛋白、肽，和多糖诸如氨基葡聚糖，它们各自具有用于连接部分(moieties)的多个位点。载体还可以通过非共价连接，例如非共价键合或通过包封来携带Dectin-2刺激剂。为了本发明的目的，载体的性质可以是可溶的或不溶的。本领域技术人员会知道用于结合Dectin-2刺激剂的其他合适的载体，或者能够使用常规实验确定这种载体。
可接受的载体、辅料或稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且包括：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵，苄索氯铵；苯酚，丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯(alkyl parabens)诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐的反离子，诸如钠；金属络合物(例如，锌蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。体内给药所要使用的制剂必须是无菌的。这通过无菌过滤膜过滤容易实现。
活性成分也可以被包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(分别是羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中，在胶体药物输送系统(例如脂质体，白蛋白微球，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)中，或在粗乳剂(macroemulsion)中。此类技术公开于Remington's Pharmaceutical Sciences(《雷明顿药物科学》)第16版，Osol,A.编(1980)。
组合物可以制备成注射液，如液体溶液或混悬液；也可以制备适合于在注射之前溶解或混悬在液体媒介物中的固体形式。如上所述，该制剂还可以乳化或封装在脂质体或微粒中，诸如聚乳酸、聚乙醇酸或共聚物，以增强佐剂作用。Langer,Science 249:1527,1990和Hanes,Advanced Drug Delivery Reviews(高级药物输送综述)28:97-119,1997。本发明的试剂可以以积存注射或植入物制剂的形式给药，其可以以这种方式配制以允许活性成分的缓释或脉冲释放。通常将药物组合物配制成无菌的，基本等渗的并且完全符合美国食品和药物管理局的所有优质生产规范(GMP)规定。
主题的Dectin-2刺激剂可以使用便利的输送方法进行输送(给药)。例如，为了改善癌症药物的生物分布，已经设计了纳米颗粒来实现最佳尺寸和表面特性，以增加其在血液中的循环时间。它们还能够通过选择性地利用肿瘤独特的病理生理学，例如高渗透性和长滞留效应以及肿瘤的微环境，将负载的活性药物运送到癌细胞中。除了这种被动靶向机制外，利用针对所选肿瘤靶标的配体或抗体的主动靶向策略还增强了这些治疗性纳米颗粒的特异性。(参见，例如，Cho et al.,Clin Cancer Res.2015Oct15；21(20):4499-501)。在一些情况下，使用纳米载体将主题的Dectin-2刺激剂给药到个体。用于输送主题的Dectin-2刺激剂的纳米载体的实例包括但不限于：(a)聚合物纳米颗粒，其中药物与聚合物缀合或封装在聚合物中；(b)聚合物胶束：在水溶液中形成纳米级核/壳结构的两亲性嵌段共聚物(疏水性核区充当疏水性药物的储存库，而亲水性壳区稳定疏水性核并使聚合物变为水溶性的)；(c)树枝状聚合物：纳米尺寸的合成聚合物大分子，由从中心核心放射状出现的多个高度分支的单体组成；(d)脂质体：由脂质双层组成的自组装结构，其中水体积完全被膜状脂质双层包围；(e)基于病毒的纳米颗粒：一般的结构是蛋白质笼，其是多价的、自组装的结构；和(f)碳纳米管：由苯环组成的碳圆柱。
Dectin-2刺激剂的毒性可以通过细胞培养或实验动物中的标准药学规程来确定，例如，通过确定LD50(使群体致死50％的剂量)或LD100(使群体致死100％的剂量)来确定。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数。从这些细胞培养分析法和动物研究中获得的数据可用于进一步优化和/或定义治疗剂量范围和/或亚治疗剂量范围(例如，用于人类)。精确的制剂、给药途径和剂量可以由个体医师根据患者的状况来选择。
主题的方法和组合物中的细胞(例如，其中Dectin-2已被刺激的髓样细胞；其中Dectin-2已被刺激的APC；负载的APC，例如负载的DC；负载的巨噬细胞；负载的B细胞；和/或经接触的/经刺激的T细胞)可以被遗传修饰以提高存活率，控制增殖等。可以通过用合适的载体转染或转导，同源重组或其他合适的技术对细胞进行遗传改变，以使其表达感兴趣的基因。在一些实施方案中，引入选择性的标志物，以提供所需细胞的更高纯度。
对于可用于实施本公开的通用技术的进一步阐述，从业人员可以参考细胞生物学、组织培养和胚胎学中的标准教科书和综述。关于组织培养和干细胞，读者可能希望参考Teratocarcinomas and embryonic stem cells:A practical approach(畸胎瘤和胚胎干细胞：一种实用的方法)(E.J.Robertson,ed.,IRL Press Ltd.1987)；Guide toTechniques in Mouse Development(小鼠发育技术指南)(P.M.Wasserman et al.eds.,Academic Press1993)；Embryonic Stem Cell Differentiation in Vitro(胚胎干细胞的体外分化)(M.V.Wiles,Meth.Enzymol.225:900,1993)；Properties and uses ofEmbryonic Stem Cells:Prospects for Application to Human Biology and GeneTherapy(胚胎干细胞的性质和用途：应用于人类生物学和基因治疗的前景)(P.D.Rathjenet al.,Reprod.Fertil.Dev.10:31,1998)。
试剂盒
还提供了用于主题方法的试剂盒。主题的试剂盒包括用于执行主题方法的组分和组合物的任何组合。在一些实施方案中，试剂盒可包括以下中的一种或更多种：主题的Dectin-2刺激剂(例如，非植物来源的天然存在的Dectin-2配体，诸如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖；非植物来源的天然存在的Dectin-2配体，诸如真菌细胞壁提取物；合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，糖多肽)；Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，诸如可溶性抗体(例如，单克隆抗体)或固定在固体支持物上的抗体；1类α-甘露糖苷酶抑制剂，诸如几夫碱；或1-脱氧甘露伊霉素，或RNAi试剂或基因编辑剂，其特异性地降低一种或更多种选自以下的蛋白的表达：MAN1B1，MAN1A1，MAN1A2和MAN1C1；等)；用于分离、培养、存活或施用APC例如DC和/或T细胞的组分；用于APC(例如DC)接触的试剂(例如缓冲液)；用于T细胞接触的试剂(例如缓冲液)；用于使靶抗原与主题的抗体组合物接触以产生免疫复合物的试剂(例如缓冲液)；及其任何组合。
在一些实施方案中，试剂盒包含直接Dectin-2刺激剂(例如，天然存在的Dectin-2配体；非植物来源的天然存在的Dectin-2配体，诸如甘露聚糖多糖或其它的低聚甘露糖聚糖；非植物来源的天然存在的Dectin-2配体，诸如真菌细胞壁提取物；合成的Dectin-2刺激性含糖聚合物(例如，糖多肽)；Dectin-2刺激性抗Dectin-2抗体，诸如可溶性抗体(例如，单克隆抗体)或固定化在固体支持物上的抗体)和药用辅料。在一些实施方案中，试剂盒包含间接Dectin-2刺激剂(例如，1类α-甘露糖苷酶抑制剂，诸如几夫碱；或1-脱氧甘露伊霉素，或RNAi试剂或基因编辑剂，其特异性降低一种或更多种选自以下的蛋白质的表达：MAN1B1、MAN1A1、MAN1A2和MAN1C1)和药用辅料。
除上述组分外，主题的试剂盒还可以包括(在某些实施方案中)用于实践主题的方法的说明。这些说明可以以多种形式存在于主题的试剂盒中，其中的一种或更多种可以存在于试剂盒中。这些说明可以以一种形式存在，即在适当的介质或基材上印刷的信息，例如，其上印刷有信息的纸张，在试剂盒的包装中，在药品说明书中，等。这些说明的另一种形式是其上已记录信息的计算机可读介质，例如软盘、光盘(CD)、闪存驱动器等。这些说明可能存在的另一种形式是网站地址，可以通过互联网使用该地址来访问远离的站点(removedsite)上的信息。
本公开的示例性非限制性方面
上述本发明主题的各方面，包括实施方案，单独或与一个或更多个其他方面或实施方案组合可以是有利的。在不限制前述描述的情况下，下面提供了编号为1至59的本公开的某些非限制性方面。对于本领域普通技术人员而言，在阅读本公开后将显而易见的是，可以使用每个单独编号的方面或将其与之前或之后的单独编号的方面中的任意方面进行组合。这旨在为各方面的所有此类组合提供支持，并且不仅限于以下明确提供的方面的组合：
1.一种多价Dectin-2刺激剂，包含：(a)与Dectin-2结合并刺激Dectin-2信号传导的试剂；和(b)抗体和/或免疫调节剂，其中(a)和(b)彼此缀合。
2.根据1所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(a)是抗Dectin-2抗体或其抗原结合区。
3.根据1所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(a)是与Dectin-2结合的甘露二糖糖多肽。
4.根据3所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述甘露二糖糖多肽包括长度为20至250个氨基酸的肽。
5.根据4所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述肽是黏蛋白样肽。
6.根据3至5中任一项所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述甘露二糖糖多肽的聚糖密度为至少25％。
7.根据1至6中任一项所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(b)是免疫调节剂。
8.根据1至7中任一项所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(b)是选自以下的细胞因子：IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-7，IL-9，IL-10，IL-12，IL-15，IL-18，IL-21，IFN-α，IFN-β，IFNγ，G-CSF，TNFα和GM-CSF；或者是选自以下的免疫调节剂：抗CTLA4抗体，抗PD-1抗体，抗PD-L1抗体，CD40激动剂，抗CD47/SIRPA试剂和4-1BB激动剂。
9.根据1至7中任一项所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(b)是模式识别受体(PRR)的刺激性配体。
10.根据9所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(b)是TLR激动剂。
11.根据10所述的多价Dectin-2刺激剂，其中TLR激动剂是TLR7/8激动剂。
12.根据11所述的多价Dectin-2刺激剂，其中TLR7/8激动剂是T785。
13.根据10所述的多价Dectin-2刺激剂，其中TLR激动剂是TLR2激动剂。
14.根据13所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述TLR2激动剂是Pam3Cys。
15.根据1所述多价Dectin-2刺激剂，其中(a)包含甘露二糖糖多肽，并且(b)为TLR激动剂。
16.根据15所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述TLR激动剂是TLR7/8激动剂或TLR2激动剂。
17.根据16所述的多价Dectin-2刺激剂，其中TLR激动剂是T785。
18.根据16所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述TLR激动剂是Pam3Cys。
19.一种治疗患有癌症和/或感染性疾病的个体的方法，所述方法包括向所述个体给药有效量的Dectin-2刺激性组合物，所述组合物包含：(a)Dectin-2刺激性含糖聚合物；或(b)多价Dectin-2刺激剂，所述多价Dectin-2刺激剂包含：(i)抗Dectin2抗体或Dectin-2刺激性含糖聚合物；和(ii)抗体和/或免疫调节剂，其中(i)与(ii)缀合，其中在髓样细胞中刺激Dectin-2信号传导，从而刺激所述个体的免疫反应。
20.根据19所述的方法，其中，所述(a)或(b)的Dectin-2刺激性含糖聚合物包括甘露二糖糖多肽。
21.根据20所述的方法，其中所述甘露二糖糖多肽包括长度为20至250个氨基酸的肽。
22.根据21所述的方法，其中，所述肽是黏蛋白样肽。
23.根据20至22中任一项所述的方法，其中所述甘露二糖糖多肽的聚糖密度为至少25％。
24.根据19至23中任一项所述的方法，其中所述(b)的Dectin-2刺激性含糖聚合物与抗体缀合。
25.根据24所述的方法，其中所述(b)的Dectin-2刺激性含糖聚合物与免疫调节剂缀合。
26.根据24或25所述的方法，其中所述(b)的Dectin-2刺激性含糖聚合物与选自以下的细胞因子缀合：IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-7，IL-9，IL-10，IL-12，IL-15，IL-18，IL-21，IFN-α，IFN-β，IFNγ，G-CSF，TNFα和GM-CSF。
27.根据24或25所述的方法，其中所述(b)的Dectin-2刺激性含糖聚合物与模式识别受体(PRR)的刺激性配体缀合。
28.根据27所述的方法，其中所述刺激性配体是TLR激动剂。
29.根据28所述的方法，其中所述TLR激动剂是TLR7/8激动剂。
30.根据29所述的方法，其中所述TLR7/8激动剂是T785。
31.根据28所述的方法，其中所述TLR激动剂是TLR2激动剂。
32.根据31所述的方法，其中所述TLR2激动剂是Pam3Cys。
33.根据19至32中任一项所述的方法，其中所述给药包括局部给药。
34.根据19至33中任一项所述的方法，其中所述施用包括全身给药。
35.根据19至34中任一项所述的方法，其中所述给药包括与以下中的一种或更多种进行联合给药：CD40激动剂，GM-CSF，TNFα和IFNγ。
36.一种刺激抗原呈递细胞(APC)的方法，所述方法包括：使APC在体外或离体与包含Dectin-2刺激性含糖聚合物的Dectin-2刺激性组合物以足以增强APC中的Dectin-2信号传导的剂量和时间段进行接触，从而产生经刺激的APC。
37.根据36所述的方法，包括使所述经刺激的APC与癌抗原接触以产生接触了抗原的APC。
38.根据37所述的方法，其中所述癌抗原存在于癌细胞裂解物中或为癌细胞的一部分。
39.根据36至38中任一项所述的方法，包括将所述经刺激的APC或所述接触了抗原的APC引入个体。
40.根据37或38所述的方法，其中所述癌抗原来自患有癌症的个体，并且所述方法包括将所述接触了抗原的APC引入所述个体中。
41.根据39或40所述的方法，其中APC对所述个体是自体的。
42.根据36至41中任一项所述的方法，包括使T细胞与所述接触了抗原的APC接触。
43.根据42所述的方法，包括将所述经接触的T细胞引入个体。
44.根据43所述的方法，其中所述T细胞对所述个体是自体的。
45.根据43或44所述的方法，其中所述接触了抗原的APC对所述个体是自体的。
46.根据39至45中任一项所述的方法，其中所述个体患有癌症。
47.根据36至46中任一项所述的方法，其中所述Dectin-2刺激性含糖聚合物包括甘露二糖糖多肽。
48.根据47所述的方法，其中所述甘露二糖糖多肽包括长度为20至250个氨基酸的肽。
49.根据48所述的方法，其中所述肽是黏蛋白样肽。
50.根据47至49中任一项所述的方法，其中所述甘露二糖糖多肽的聚糖密度为至少25％。
51.根据36至50中任一项所述的方法，其中所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与抗体和/或免疫调节剂缀合。
52.根据51所述的方法，其中所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与免疫调节剂缀合。
53.根据51或52所述的方法，其中所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与选自以下的细胞因子缀合：IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-6，IL-7，IL-9，IL-10，IL-12，IL-15，IL-18，IL-21，IFN-α，IFN-β，IFNγ，G-CSF，TNFα和GM-CSF。
54.根据51或52所述的方法，其中所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与模式识别受体(PRR)的刺激性配体缀合。
55.根据54所述的方法，其中所述刺激性配体是TLR激动剂。
56.根据55所述的方法，其中所述TLR激动剂是TLR7/8激动剂。
57.根据56所述的方法，其中所述TLR7/8激动剂是T785。
58.根据55所述的方法，其中所述TLR激动剂是TLR2激动剂。
59.根据58所述的方法，其中所述TLR2激动剂是Pam3Cys。
实施例
提出以下实施例以向本领域普通技术人员提供如何制作和使用本发明的完整公开和描述，并且无意于限制发明人认为的其发明的范围，也不旨在表示以下实验是进行的全部实验或仅进行了这些实验。已经尽力确保所使用的数字(例如量，温度等)的准确性，但是应该考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则份数是重量份，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，压力是大气压或接近大气压。可以使用标准缩写，例如，室温(RT)；碱基对(bp)；千碱基(kb)；皮升(pl)；秒(s或sec)；分钟(m或min)；小时(h或hr)；天(d)；周(wk或wks)；纳升(nl)；微升(ul)；毫升(ml)；升(L)；纳克(ng)；微克(ug)；毫克(mg)；克((g)，在质量的语境中)；千克(kg)；重力的当量((g)，在离心的语境中)；纳摩尔(nM)；微摩尔(uM)，毫摩尔(mM)；摩尔(M)；氨基酸(aa)；千碱基(kb)；碱基对(bp)；核苷酸(nt)；肌内(i.m.)；腹膜内(i.p.)；皮下(s.c.)；等。
以下实验证明了通过Dectin-2的结合来激活髓样细胞(例如，肿瘤相关的髓样(TAM)细胞，诸如巨噬细胞和树突状细胞)的多种策略的进展。以下实验表明，Dectin-2刺激可以将免疫抑制性TAM细胞重编程为促炎细胞，从而诱导抗肿瘤免疫反应并支持(例如，协同)化学疗法(例如常规化学疗法)和其他免疫疗法(例如检查点抑制剂，CD40激动剂)，从而导致肿瘤消退(图2E至图2G，图3D至图3F)。这些发现对免疫肿瘤学具有重大意义(例如，治疗像PDAC这样的癌症，这些癌症对于迄今为止测试的大多数治疗性干预措施而言仍然是难以治愈的)。
实施例1：Dectin-2表达。
肿瘤相关的髓样(TAM)细胞(肿瘤相关的巨噬细胞和树突状细胞(DC))表达高水平的Dectin-2(图1A，图1B)，一种在各种感染性疾病中诱导有效适应性免疫应答所需的模式识别受体(PRR)。这种C型凝集素受体是一类碳水化合物结合蛋白，已被证明可以识别多种来自真菌和其他病原体的含有多个末端甘露糖残基的成分。与此相一致，Dectin-2选择性地结合碳水化合物阵列中的高甘露糖聚糖(例如，参见McGreal et al.,Glycobiology.2006May；16(5):422-30)。
实施例2：天然Dectin-2激动剂的治疗。
各种病原体，包括若干真菌物种，如机会性病原体糠秕马拉色菌(Malasseziafurfur)，带有Dectin-2激活因子。在此处呈现的实验中(图2A至图2G)，糠秕马拉色菌的市售细胞壁提取物(furfurman；Invivogen)以Dectin-2依赖性的方式激活肿瘤相关的髓样(TAM)细胞，导致TAM细胞的促炎细胞因子的产生和共刺激分子表达(图2A至图2C)。重复i.v.注射来自糠秕马拉色菌(M.furfur)和酿酒酵母(S.cerevisiae)的Dectin-2激动剂在小鼠中耐受性良好。
与这些数据一致，在鼠PDAC模型中的研究表明，瘤内注射天然Dectin-2激动剂诱导T细胞浸润(图2D)并抑制肿瘤生长(图2E)。此外，当与常规化学疗法(即吉西他滨)或更知名的癌症免疫疗法(即检查点抑制剂，CD40激动剂)组合使用时，Dectin-2刺激导致肿瘤消退甚至在一些情况下清除肿瘤(图2E至图2G)。Dectin-2激动剂可以与其他佐剂组合以进一步增强TAM激活作用。例如，我们发现用Dectin-2激动剂和细胞因子IFNγ刺激过的细胞表达非常高水平的促炎细胞因子、细胞毒性介质和共刺激分子，包括CD40。相应地，将这些佐剂与CD40激动性抗体治疗进行组合持续导致了体内肿瘤消退(图2G)。
图3A至图3F证明天然Dectin-2配体诸如酿酒酵母甘露聚糖(例如，可从SigmaAldrich获得的提取物)激活肿瘤相关的髓样细胞(例如人细胞)并诱导治疗性抗肿瘤免疫反应。甘露聚糖在全身输送时有效并治疗多种肿瘤类型(例如胰腺癌、肺癌和结肠癌)。(图3A)PDAC TAM用所示的抗体预处理然后用板结合的酿酒酵母(S.cerevisiae)甘露聚糖刺激过夜产生的TNFα。(图3B，图3C)人单核细胞用GM-CSF预处理然后用furfurman(图3B)或甘露聚糖(图3C)刺激产生的TNFα。显示了n＝3个供体的平均±SEM。(图3D至图3F)荷有s.c.PDAC(图3D)、肺腺癌(图3E)或CT26结肠癌的小鼠从肿瘤植入后6至9天开始用甘露聚糖(i.v.)和/或αCTLA-4与αPD-1抗体的组合(i.p.)治疗。显示了平均肿瘤体积±SEM(每组n＝3至5)。*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001，通过未配对学生t检验(B)或双因素方差分析和事后Tukey检验(图3D至图3F)。
图4A至图4D证明在鼠和人系统中，可以用GM-CSF诱导Dectin-2表达以使细胞/肿瘤对Dectin-2刺激更具响应性。换句话说，GM-CSF诱导Dectin-2表达并使肿瘤对Dectin-2刺激敏感。(图4A至图4C)将鼠(图4A，图4B)和人(图4C)的单核细胞在补充或未补充GM-CSF(50ng/mL)的培养基中培养24小时，然后以流式细胞术分析Dectin-2表达(图4A，图4C)或用furfurman刺激并分析TNFα产生。(图4C)显示了n＝3个供体的平均MFI±SEM。(图4D)荷有s.c.CT26肿瘤的小鼠从肿瘤植入后第6天开始，用甘露聚糖(i.v.)和/或GM-CSF(i.t.)处理。显示了平均肿瘤体积±SEM(每组n＝3至4)。*，p<0.05；**，p<0.01，通过学生t检验(图4C)或双因素方差分析和事后Tukey检验(图4D)。
实施例3：I类α-甘露糖苷酶抑制剂治疗
Dectin-2识别包含多个末端甘露糖残基的多种病原体成分，并与高甘露糖型聚糖强烈反应。高甘露糖聚糖是真核细胞中在蛋白质的N-连接糖基化过程中产生的常见中间聚糖种类。在哺乳动物细胞中，这些高甘露糖聚糖被进一步加工成复杂或杂合型N-聚糖，该过程需要各种甘露糖苷酶的作用，这些甘露糖苷酶从最初的高甘露糖前体Man9GlcNAc2(Man-9)切除末端甘露糖残基。
用几夫碱(小分子1类α-甘露糖苷酶(α-甘露糖苷酶I)抑制剂的实例)处理肿瘤细胞导致细胞表面的高甘露糖聚糖急剧增加(图5A)。肿瘤细胞随后以Dectin-2依赖性方式激活肿瘤相关的髓样细胞(TAM细胞)(例如，肿瘤相关的树突状细胞和巨噬细胞)，从而诱导促炎细胞因子的产生和肿瘤细胞的摄取(图5B，图5C)。在体内，几夫碱处理类似地增加了肿瘤细胞的高甘露糖聚糖显示，并导致T细胞浸润到肿瘤中(图5D)。这些数据支持使用甘露糖苷酶抑制剂来增强肿瘤的免疫原性。
实施例4：Dectin-2-激活性抗体与糖缀合物的治疗
此处提供的数据表明，肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)被来自糠秕马拉色菌(M.furfur)的微粒状细胞壁提取物以及被固定化(即与板结合)的抗Dectin-2抗体强烈激活(图6A，图6B)。这些结果与Dectin-2依赖性(requiring)受体聚集以进行信号转导相一致，并表明TAM可以被能诱导足够的Dectin-2聚集的抗体与糖缀合物所激活(这可以通过多种方式实现，包括使用直接Dectin-2刺激剂诸如多价Dectin-2刺激剂(如上所述，例如，诸如高甘露糖修饰的抗体糖缀合物)和/或使用天然存在的或合成的含糖聚合物诸如糖多肽，例如低聚甘露糖糖多肽(例如，富含甘露二糖的糖蛋白，例如，富含O-连接和/或N-连接的甘露二糖的糖蛋白)。
图8A至图8C证明，甘露二糖含糖聚合物和抗体-含糖聚合物缀合物通过Dectin-2激活细胞，并且甘露二糖含糖聚合物具有治疗活性。合成的甘露二糖含糖聚合物和糖缀合物激活髓样细胞以达到治疗效果。(图8A，图8B)PDAC TAM用所示的抗体预处理，然后用板结合的(图8A)不同聚糖密度(35％或65％)的甘露糖(Man1)或甘露二糖(Man2)含糖聚合物或(图8B)与65％乳糖(Lac)或Man2 100-mer含糖聚合物偶联的αEpCAM抗体刺激来产生TNFα。(图8C)荷有s.c.PDAC肿瘤的小鼠从肿瘤植入后10天开始，用或不用65％Man2 100-mer含糖聚合物(20mg/kg i.v.，q2d)处理。显示了平均肿瘤体积±SEM(每组n＝3至5)。***，p<0.001；****，p<0.0001，采用双因素方差分析和事后Tukey检验。
实施例5
图9A至图9C。数据证明本公开的合成甘露二糖糖肽通过Dectin-2刺激肿瘤相关巨噬细胞(TAM)并抑制肿瘤生长。(图9A)示意性图示了一种可能的合成方法，该方法用于合成本公开的糖肽-在这种情况下为NCA聚合。在含叠氮化物的镍引发剂的存在下，环化的氨基酸单体进行开环聚合，以得到长度和组成可调的可官能化肽。糖肽可通过NHS和点击化学详细制定以用于多种应用，包括蛋白质缀合、荧光显微镜和膜插入。(图9B)LMP TAM用或不用Dectin-2阻断性抗体预处理并用不同聚糖密度(35％或65％)的板固定化的甘露糖(Man1)或甘露二糖(Man2)糖肽(250-mers)刺激18小时产生的TNFα。(图9C)经Man2糖肽(65％100-mers)(20mg/kg i.v.q2d x 2wk)处理的荷s.c.PDAC的小鼠的肿瘤生长曲线。采用双因素方差分析和事后Sidak检验，***，p<0.001；****，p<0.0001。
图10。源自鼠单核细胞的树突状细胞经对照或Dectin-2-阻断性抗体预处理然后用具有不同聚糖密度(30％或65％)(100-mer合成糖肽)的板结合的乳糖(Lac)或甘露二糖(Man2)糖肽刺激20小时后产生的细胞因子。
图11。数据显示，短和长的甘露二糖含糖聚合物均可刺激Dectin-2。PDAC TAM用对照或Dectin-2-阻断性抗体预处理，然后用具有不同聚糖密度(35/65/100％)(20-/250-mer合成糖肽)的可溶性或板结合的糖肽刺激20小时所产生的细胞因子。短和/或重度糖基化的聚合物不能很好地结合到板上(这解释了20-mer和100％250-mer明显缺乏活性)。因此，使用细胞松弛素D抑制吞噬作用，从而诱导对可溶性形式的聚合物的反应，如先前关于可溶性Dectin-1配体所示(Rosas et al.,J Immunol,2008Sep1；181(5):3549-57)。
实施例6：当与抗体(不管抗原特异性如何)缀合时，本公开的含糖聚合物(例如， Man2聚合物)刺激Dectin-2并以可溶形式获得活性
图12A至图12C。甘露二糖糖肽-抗体缀合物激活TAM，并通过Dectin-2刺激肿瘤细胞摄取。(图12A)赖氨酸缀合示意图：抗体可以用BCN-NHS试剂修饰，然后被缀合到带有反应性叠氮或四嗪部分的糖肽上。(图12B)位点特异性缀合示意图：带有醛标签的抗体可以通过引入甲酰甘氨酸生成酶(FGE)共有序列CTPSR产生，然后与FGE一起温育。然后醛标记的抗体可以用氨氧基-叠氮化物接头修饰，并被缀合到带有环辛炔的糖肽。(图12C)TAM与CFSE标记的PDAC细胞的共培养物用10μg/mL未修饰的αEpCAM抗体或通过赖氨酸缀合制备的αEpCAM-Man2糖肽(65％100-mer)缀合物(αEp-Man2)+/-Dectin-2-阻断性抗体刺激18小时，然后分析CFSE摄取、TNFα产生和共刺激分子表达。
图13。抗Epcam抗体用BCN-NHS试剂(10x或25x BCN:抗体)标记，并被缀合到甘露二糖糖肽(65％100-mers)以制备抗体-糖肽缀合物(αEpM)。PDAC TAM用或不用Dectin-2-阻断性抗体(αD2)预处理，然后用板结合的(左上图)或可溶性的(右上图和下图)抗体缀合物进行刺激(单独或与CFSE标记的PDAC细胞共培养(下图；“Mo-肿瘤共培养物”))。20小时后评估细胞因子的产生。
图14。抗Epcam抗体用BCN-NHS试剂(10x或25x BCN:抗体)标记，并被缀合到甘露二糖糖肽(65％100-mers)以制备抗体-糖肽缀合物(αEpM)。PDAC TAM用或不用Dectin-2阻断性抗体(αDectin-2)进行预处理，然后在与CFSE标记的PDAC细胞共培养时用可溶性抗体缀合物进行刺激。20小时后，通过流式细胞术评估TAM对CFSE的摄取。
图15A至图15B。经GM-CSF预处理的单核细胞用通过赖氨酸缀合偶联到65％Man2100-mer的αEpCAM抗体(DAR～1-2；2.5ug/mL抗体浓度)+/-αDectin-2(20ug/mL)或等量的未缀合的αEpCAM和Man2聚合物的混合物刺激18小时产生的细胞因子。图15B显示了抗体-Man2缀合物和单独组分的混合物的剂量-反应曲线。
图16。数据显示使用本公开的糖蛋白(例如，各种长度，例如低至25个残基的Man2聚合物)制备的抗体缀合物可以通过Dectin-2刺激细胞。使用各种长度的65％Man2聚合物通过赖氨酸缀合制备抗体缀合物，然后通过被动吸附(20ug/mL)被包被在板上。GM-CSF预处理的单核细胞+/-αDectin-2被添加到孔中，并在18小时后测量TNFα的产生。
实施例7：本公开的含糖聚合物(例如Man2聚合物)与免疫刺激剂组合但未缀合
Dectin-2配体和其他免疫刺激剂的组合在体外和体内均具有活性，例如Dectin-2激动剂与其他免疫刺激剂协同作用。
图17显示了经furfurman+/-所示试剂处理24小时的鼠PDAC TAM的共刺激分子表达。图18显示了经furfurman+/-所示试剂处理24小时的鼠PDAC TAM产生的细胞因子。图19显示了从肿瘤植入后第8天或第9天开始，用单独的甘露聚糖(q2d i.v.)或者与IFNg(q2di.v.)或所示抗体(q3d i.p.)组合进行处理的荷有s.c.PDAC小鼠的肿瘤生长曲线。
实施例8：缀合至免疫刺激剂的本公开的含糖聚合物(例如Man2聚合物)以可溶形 式获得活性并表现出协同作用
患有胰腺癌的小鼠(PDAC小鼠)通过瘤内注射(在第8天和第11天为10mg/kg)用以下主题的多价试剂：Dectin-2激动剂(在这种情况下为65％Man2 100-mer)缀合到免疫刺激剂(在这种情况下为TLR7/8激动剂T785)(所述多价试剂称为“Man2-T785”)进行处理，或仅用Man2(“Man2”)处理。如图所示(图20)，与PBS对照或Man2处理相比，用Man2-T785的处理强烈且协同地抑制肿瘤生长。
还在体外观察到了缀合物的协同免疫刺激作用。如图所示(图21)，Man2-T785缀合物在低浓度下强烈刺激TAM，而同等浓度的Man2、T785或两者的混合物却没有。这些效果被抗Dectin-2抗体阻断，表明它们依赖于Dectin-2结合。这一结果是令人惊讶的，因为人们原本会预期化学缀合物与未缀合组分的混合物一样有效(或疗效可能小于未缀合组分的混合物)。同样令人惊讶的是，TLR7/8激动剂的连接改变了Man2糖肽的体外行为。尽管Man2糖肽通常需要固定化(例如在板或细胞上)以强烈激活TAM，但所示的结果是利用溶液中的刺激获得的。基于这些数据，可预期缀合物的体内作用将显著大于当组分作为混合物(不缀合)给药时的效果。本公开中其他地方描述的Man2-抗体缀合物也是如此。图22A给出了用于产生图20和图21中使用的Man2-T785缀合物的合成示意图。类似于图22A所示的合成方案也可以用于利用R848(图22C)和其他TLR7/8配体来制备缀合物。
实施例9：含糖聚合物(Man2聚合物)与TLR2配体的缀合
将Dectin-2激动剂(在这种情况下为Man2聚合物)缀合到免疫刺激剂(在这种情况下为Pam3Cys，TLR2的激动剂)(图23B)。这些多价试剂也以可溶形式具有活性：经GM-CSF预处理的单核细胞用偶联至Pam3Cys(TLR1/2配体)的5μM 65％Man2100-mer或等摩尔量的未缀合的Man2和Pam3Cys刺激18小时。测量了单核细胞产生的细胞因子(图23A)。这些数据表明，其他免疫刺激(例如，不仅是TLR7/8激动剂)可以用作“第二试剂”，作为主题的多价试剂的一部分。
实施例10：αDectin-2抗体与TLR7/8激动剂的缀合
类似于与TLR7/8激动剂(诸如T785)缀合的Man2聚合物所获得的结果，其中Dectin-2激动剂(“第一”试剂)是抗Dectin-2抗体的多价试剂也表现出协同免疫刺激作用，并且以可溶性形式具有活性。(图24)使用经SMCC修饰的TLR7/8激动剂(T785)和SATA交联剂通过赖氨酸缀合制备αDectin-2和同种型(大鼠IgG2a)抗体缀合物。显示了GM-CSF预处理的单核细胞用该缀合物或等量的未缀合的成分刺激18小时所产生的细胞因子。这些数据证明了缀合的化合物之间的协同作用，并表明其他Dectin-2激动剂(诸如αDectin-2抗体)(不仅是含糖聚合物诸如Man2)可用作“第一试剂”，作为主题的多价试剂的一部分。
实施例11
图25显示了人单核细胞用GM-CSF(50ng/mL)预处理然后用可溶性furfurman(20ug/mL)或板结合的甘露聚糖(10ug/孔)刺激24小时的细胞因子产生和共刺激分子表达。
实施例12
图26A至图26D。Dectin-2刺激通过T细胞介导的抗肿瘤免疫来抑制PDAC进程。如所示处理的荷s.c.LMP小鼠的肿瘤生长曲线。(图26A，图26B)使肿瘤生长7至10天，然后再用甘露聚糖(12.5mg/kg i.v.q2d x 2wk；25mg/kg i.t.q3d x 2)+/-Dectin-2阻断性抗体或对照抗体(10mg/kg i.p.q2d)进行处理。(图26C，图26D)在甘露聚糖处理(10mg/kg i.v.q2d x3wk)期间用CD4-或CD8-消耗性抗体(图26C)或检查点阻断性抗体(图26D)(10mg/kg ipq3d)处理的小鼠。通过双因素方差分析和事后Sidak(A，B)或Tukey(C，D)检验，**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001。
实施例13
图27A至图27G。GM-CSF驱动Dectin-2表达并使TAM对Dectin-2刺激敏感。(图27A，图27B)小鼠(图27A)或人(图27B)单核细胞在补充或未补充GM-CSF的培养基中培养18小时的Dectin-2表达。(C-E)经3T3成纤维细胞条件培养基+/-GM-CSF(图27C)或LMP肿瘤条件培养基+/-GM-CSF中和抗体(图27D)预处理的小鼠单核细胞或经如所示(图27E)预处理的人单核细胞产生的TNFα。(图27F)经甘露聚糖(12.5mg/kg i.v.q2d×2wk)和所示的抗体(10mg/kg i.p.q2d)处理的荷LMP小鼠。(图27G)热图描绘了人癌组织中Dectin-2的表达与所示基因之间的相关性。从TCGA获得基因表达数据，并进行分析以获得Spearman的相关系数。通过学生t检验(B)或双因素方差分析和事后Tukey(F)检验，**，p<0.01；****，p<0.0001。
实施例14
图28A至图28D。KRAS驱动的肿瘤产生GM-CSF，并对Dectin-2免疫疗法产生反应。(图28A)获自癌细胞系百科全书的具有野生型KRAS(WT)或在密码子12、13或61处具有突变(Mut)的人肿瘤细胞系的GM-CSF表达值。箱形图描绘了中位数和四分位距。通过Mann-Whitney U检验，****，p<0.0001。(图28B)培养24小时后肿瘤上清液中的GM-CSF水平。(图28C，图28D)用甘露聚糖(10mg/kg i.v.q2d)处理的患有s.c.238N1或MOC2肿瘤的小鼠的肿瘤生长曲线。3/5的经处理的小鼠238N1肿瘤被治愈。通过双因素方差分析和事后Sidak检验，*，p<0.05；**，p<0.01；****，p<0.0001。
实施例15
如下制备包含(1)Dectin-2的激动剂(在这种情况下为65％Man2 100-mer)和(2)784或786的多价试剂的合成。佐剂与含有不同数目PEG单元的聚乙二醇(PEG)接头偶联，以延长佐剂和含糖聚合物之间的距离。使用先前描述的用于接头连接和TFP激活的方案进行PEG接头延伸的连接。简要地，将佐剂溶解在DMF中，并加入DIPEA，然后加入HATU(1.2当量)。1小时后，加入适当的氨基PEG接头，并在室温下再搅拌2小时。将反应混合物在真空下浓缩至干，并将残余物通过制备型HPLC纯化，在C-18柱上在30分钟内用在水中的10％至90％乙腈洗脱。合并纯的级分并冻干。
然后在室温下使TFP酯在硼酸盐缓冲盐水(BBS-pH 8.4)中与含糖聚合物缀合，持续16小时。使用3kDa MWCO离心旋转过滤器，通过基于尺寸排阻的过滤来纯化反应混合物。样品反复用去离子水进行缓冲液交换，直到通过LC-MS检测不到残留的未缀合佐剂。然后将样品冻干，得到为白色固体的纯化的缀合物。
图29A至图29B。数据显示，经GM-CSF预处理的单核细胞与包含与免疫刺激剂(在这种情况下为TLR7激动剂784)缀合的Dectin-2激动剂(在这种情况下为65％Man2100-mer)的主题多价剂–称为“Man2-784缀合物”接触，或与784和Man2的未缀合的混合物(“Man2+784混合物”)接触，或与对照(“Man2-784缀合物”加阻断Dectin-2的抗体的混合物，从而抵消由缀合物提供的Dectin-2刺激)接触所产生的TNFα。(图29A)数据显示了经GM-CSF预处理的单核细胞与包含与免疫刺激剂(在这种情况下为TLR7/8激动剂786)缀合的Dectin-2激动剂(在这种情况下为65％Man2 100-mer)的主题多价试剂–称为“Man2-786缀合物”接触所产生的TNFα。(图29B)如图29A至图29B所示，Man2-784缀合物和Man2-786缀合物使得经GM-CSF预处理的单核细胞的TNFα的产生增加。该结果表明，该缀合物成功地刺激Dectin-2信号传导并且会刺激个体中的抗癌免疫反应。
图30是示出图29A至图29B中的多价试剂的结构的示意图。
前面仅说明了本发明的原理。应当理解，本领域技术人员将能够想出各种布置，尽管这里没有明确描述或示出这些布置，但是这些布置体现了本发明的原理并且被包括在其精神和范围内。此外，本文列举的所有实施例和条件性语言主要旨在帮助读者理解本发明的原理和发明人为进一步发展本领域所做出的构思，并且应解释为不限于此类具体列举的实施例和条件。此外，本文中引用本发明的原理、方面和实施方案及其特定实施例的所有陈述旨在涵盖其结构和功能上的等同物。另外，意图是这样的等同物包括当前已知的等同物和将来开发的等同物，即，被开发的执行相同功能的任何元件，而与结构无关。因此，本发明的范围不旨在限于在本文示出和描述的示例性实施方案。相反，本发明的范围和精神由所附权利要求体现。

Claims (59)

1.一种多价Dectin-2刺激剂，其包含：
(a)与Dectin-2结合并刺激Dectin-2信号传导的试剂；和
(b)抗体和/或免疫调节剂，
其中(a)和(b)彼此缀合。
2.根据权利要求1所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(a)是抗Dectin-2抗体或其抗原结合区。
3.根据权利要求1所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(a)是与Dectin-2结合的甘露二糖糖多肽。
4.根据权利要求3所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述甘露二糖糖多肽包括长度为20至250个氨基酸的肽。
5.根据权利要求4所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述肽是黏蛋白样肽。
6.根据权利要求3至5中任一项所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述甘露二糖糖多肽的聚糖密度为至少25％。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(b)是免疫调节剂。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(b)是选自以下的细胞因子：IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、IFN-α、IFN-β、IFNγ、G-CSF、TNFα和GM-CSF；或选自以下的免疫调节剂：抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、CD40激动剂、抗CD47/SIRPA试剂和4-1BB激动剂。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(b)是模式识别受体(PRR)的刺激配体。
10.根据权利要求9所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(b)是TLR激动剂。
11.根据权利要求10所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述TLR激动剂是TLR7激动剂、TLR8激动剂或TLR7/8激动剂。
12.根据权利要求11所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述TLR7/8激动剂是T785。
13.根据权利要求10所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述TLR激动剂是TLR2激动剂。
14.根据权利要求13所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述TLR2激动剂是Pam3Cys。
15.根据权利要求1所述的多价Dectin-2刺激剂，其中(a)包括甘露二糖糖多肽，以及(b)是TLR激动剂。
16.根据权利要求15所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述TLR激动剂是TLR7/8激动剂或TLR2激动剂。
17.根据权利要求16所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述TLR激动剂是T785。
18.根据权利要求16所述的多价Dectin-2刺激剂，其中所述TLR激动剂是Pam3Cys。
19.一种治疗患有癌症和/或感染性疾病的个体的方法，所述方法包括向所述个体给药有效量的Dectin-2刺激性组合物，所述Dectin-2刺激性组合物包括：
(a)Dectin-2刺激性含糖聚合物；或
(b)多价Dectin-2刺激剂，包括：
(i)抗Dectin2抗体或Dectin-2刺激性含糖聚合物；和
(ii)抗体和/或免疫调节剂，
其中(i)与(ii)缀合，其中在髓样细胞中刺激了Dectin-2信号传导，从而刺激所述个体中的免疫反应。
20.根据权利要求19所述的方法，其中，(a)或(b)的所述Dectin-2刺激性含糖聚合物包括甘露二糖糖多肽。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述甘露二糖糖多肽包括长度为20至250个氨基酸的肽。
22.根据权利要求21所述的方法，其中，所述肽是黏蛋白样肽。
23.根据权利要求20至22中任一项所述的方法，其中所述甘露二糖糖多肽的聚糖密度为至少25％。
24.根据权利要求19至23中任一项所述的方法，其中将(b)的所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与抗体缀合。
25.根据权利要求24所述的方法，其中(b)的所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与免疫调节剂缀合。
26.根据权利要求24或25所述的方法，其中(b)的所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与选自以下的细胞因子缀合：IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、IFN-α、IFN-β、IFNγ、G-CSF、TNFα和GM-CSF。
27.根据权利要求24或25所述的方法，其中(b)的所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与模式识别受体(PRR)的刺激配体缀合。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述刺激配体是TLR激动剂。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述TLR激动剂是TLR7激动剂、TLR8激动剂或TLR7/8激动剂。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述TLR7/8激动剂是T785。
31.根据权利要求28所述的方法，其中所述TLR激动剂是TLR2激动剂。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述TLR2激动剂是Pam3Cys。
33.根据权利要求19至32中任一项所述的方法，其中所述给药包括局部给药。
34.根据权利要求19至33中任一项所述的方法，其中所述给药包括全身给药。
35.根据权利要求19至34中任一项所述的方法，其中所述给药包括与以下一种或更多种进行联合给药：CD40激动剂、GM-CSF、TNFα和IFNγ。
36.一种刺激抗原呈递细胞(APC)的方法，所述方法包括：使APC在体外或离体与包含Dectin-2刺激性含糖聚合物的Dectin-2刺激性组合物以足以增强所述APC中的Dectin-2信号传导的剂量和时段进行接触，从而产生经刺激的APC。
37.根据权利要求36所述的方法，包括使所述经刺激的APC与癌抗原接触以产生接触了抗原的APC。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述癌抗原存在于癌细胞裂解物中或为癌细胞的一部分。
39.根据权利要求36至38中任一项所述的方法，包括将所述经刺激的APC或所述接触了抗原的APC引入到个体中。
40.根据权利要求37或38所述的方法，其中所述癌抗原来自患有癌症的个体，并且所述方法包括将所述接触了抗原的APC引入到所述个体中。
41.根据权利要求39或40所述的方法，其中APC对所述个体是自体的。
42.根据权利要求36至41中任一项所述的方法，包括使T细胞与所述接触了抗原的APC接触。
43.根据权利要求42所述的方法，包括将经接触的T细胞引入到个体中。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述T细胞对所述个体是自体的。
45.根据权利要求43或44所述的方法，其中所述接触了抗原的APC对所述个体是自体的。
46.根据权利要求39至45中任一项所述的方法，其中所述个体患有癌症。
47.根据权利要求36至46中任一项所述的方法，其中所述Dectin-2刺激性含糖聚合物包括甘露二糖糖多肽。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述甘露二糖糖多肽包括长度为20至250个氨基酸的肽。
49.根据权利要求48所述的方法，其中，所述肽是黏蛋白样肽。
50.根据权利要求47至49中任一项所述的方法，其中所述甘露二糖糖多肽的聚糖密度为至少25％。
51.根据权利要求36至50中任一项所述的方法，其中所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与抗体和/或免疫调节剂缀合。
52.根据权利要求51所述的方法，其中所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与免疫调节剂缀合。
53.根据权利要求51或52所述的方法，其中所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与选自以下的细胞因子缀合：IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、IFN-α、IFN-β、IFNγ、G-CSF、TNFα和GM-CSF。
54.根据权利要求51或52所述的方法，其中所述Dectin-2刺激性含糖聚合物与模式识别受体(PRR)的刺激配体缀合。
55.根据权利要求54所述的方法，其中所述刺激配体是TLR激动剂。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述TLR激动剂是TLR7激动剂、TLR8激动剂或TLR7/8激动剂。
57.根据权利要求56所述的方法，其中所述TLR7/8激动剂是T785。
58.根据权利要求55所述的方法，其中所述TLR激动剂是TLR2激动剂。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述TLR2激动剂是Pam3Cys。
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