KR20200021095A - 덱틴-2 자극 및 암 면역요법을 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

덱틴-2 자극 및 암 면역요법을 위한 방법 및 조성물 Download PDF

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매튜 주
쉘리 에린 애커먼
에드가 조지 잉글리먼
마이클 나다니엘 알론소
캐롤린 알. 베르토찌
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더 보드 어브 트러스티스 어브 더 리랜드 스탠포드 주니어 유니버시티
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Abstract

암 또는 감염성 질병을 가진 개체를 치료하기 위한 방법 및 조성물이 제공된다. 다가 덱틴-2 자극제가 제공되며, 상기 다가 덱틴-2 자극제는 (a) 덱틴-2에 결합하여 덱틴-2 신호전달을 자극하는 작용제; 및 (b) 항체 및/또는 면역조절제를 포함하며, (a)와 (b)는 서로 접합되어 있다. 일부 경우에, (a)는 덱틴-2에 결합하는 만노비오스 글리코폴리펩티드이다. 일부 경우에, (b)는 TLR에 대한 자극성 리간드(예를 들어, TLR7, TLR8, TLR7/8, TLR2 등)이다. 암 및/또는 감염성 질병을 가진 개체를 치료하는 방법은 덱틴-2 자극 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 조성물은 덱틴-2 자극 당중합체(glycopolymer)를 포함한다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 조성물은 다가 덱틴-2 자극제를 포함한다.

Description

덱틴-2 자극 및 암 면역요법을 위한 방법 및 조성물
상호 참조
본 출원은 2017년 6월 28일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/526,266호의 이익을 주장하며, 본 출원은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
정부 지원
본 발명은 미국 국립보건원(National Institutes of Health)에 의해 수여된 계약 CA196657 하에서 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에 대해 소정 권리를 가진다.
서론
종양 세포와 정상 조직 사이의 미세한 차이를 검출하는 면역 시스템의 능력에도 불구하고, 암은 성장하고 확산되는 경향이 있으며, 이는 종종 그들의 숙주의 죽음을 초래한다. 종양-관련 항원(TAA)에 대한 적응 면역 반응이 이러한 환경에서 일어날 수 있으며, 이는 종양 제어 또는 퇴행을 가져올 수 있다. 그러나, 공격적인 종양은 면역편집, 및 항종양 면역 세포 및 매개체를 억제하는 다른 기전을 통해 면역 제어로부터 결국 빠져나가게 된다.
면역 세포는 대부분의 암에서 간질 구획(stromal compartment)의 주요 성분이며, 종양 발생 및 진행을 형성하는 데 중요한 역할을 한다. 암 면역요법(예를 들어, 관문 억제제, 암 백신, CAR T 세포 등)은 몇몇 암에서 효과적인 것으로 입증되어 왔지만; 많은 암 환자 및 많은 유형의 암은 이러한 종류의 중재에 반응하지 않으며, 이는 대안적인 면역요법적 전략이 탐구되어야 함을 시사한다.
과립구, 단핵구(Mo), 대식세포(Mφ), 및 수지상 세포(DC)를 포함한 골수성 세포가 특히 대부분 종양에서 풍부하며, 이들은 다양한 방식으로 그리고 광범위한 악성질병에 걸쳐 질병의 진행을 촉진시키는 것으로 밝혀져 있다. 이러함에도 불구하고, 임상 개발에서의 비교적 적은 요법은 이러한 주요 간질 세포 집단을 겨냥하고 있으며, 이들 중 대부분은 이들 세포의 활성을 조절하기보다는 그들의 축적을 억제하는 것을 목표로 한다.
암을 갖거나 감염성 질병을 가진 개체를 치료하기 위한 방법 및 조성물이 제공된다. 다가 덱틴-2 자극제가 제공되며, 상기 다가 덱틴-2 자극제는 (a) 덱틴-2에 결합하여 덱틴-2 신호전달을 자극하는 작용제; 및 (b) 항체 및/또는 면역조절제를 포함하며, (a)와 (b)는 서로 접합되어 있다. 일부 경우에, (a)는 항-덱틴-2 항체 또는 이의 항원-결합 영역이다. 일부 경우에, (a)는 덱틴-2에 결합하는 만노비오스 글리코폴리펩티드(예를 들어, 20 내지 250개의 아미노산 길이의 펩티드, 예를 들어 뮤신-유사 펩티드를 포함하는 만노비오스 글리코폴리펩티드)이다. 일부 경우에, 만노비오스 글리코폴리펩티드는 적어도 25%의 글리칸 밀도를 갖는다. 일부 경우에, (b)는 TLR에 대한 자극성 리간드(예를 들어, TLR7/8 효능제(agonist), 예컨대 T785 또는 786, TLR7 효능제, 예컨대 784, TLR8 효능제, TLR2 효능제, 예컨대 Pam3Cys 등)이다. 일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, (b)는 TLR 효능제이다.
상기에 기재된 바와 같이, 또한, 암 및/또는 감염성 질병을 가진 개체를 치료하는 방법이 제공된다. 그러한 방법은 유효량의 덱틴-2 자극 조성물을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 조성물은 (예를 들어, 전술된 바와 같은) 덱틴-2 자극 당중합체(glycopolymer)를 포함한다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 조성물은, 예를 들어 전술된 바와 같은 다가 덱틴-2 자극제를 포함한다. 또한, 항원 제시 세포(APC)를 자극하는 방법이 제공되며, 그러한 방법은 시험관내(in vitro) 또는 생체외(ex vivo)에서 APC를, 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물과, APC에서 덱틴-2 신호전달을 향상시키기에 충분한 용량으로 그리고 기간 동안 접촉시킴으로써, 자극된 APC를 생성하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 조성물은, 예를 들어 전술된 바와 같은 다가 덱틴-2 자극제를 포함한다.
본 발명은 첨부 도면과 관련하여 읽을 때 하기의 상세한 설명으로부터 가장 잘 이해된다. 일반적인 실무에 따라, 도면의 다양한 특징부는 축척대로 그려져 있지 않음이 강조된다. 대조적으로, 다양한 특징부의 치수는 명료함을 위해 임의대로 확대 또는 축소되어 있다. 도면에는 하기 도면이 포함되어 있다.
도 1a 및 도 1b. 종양-관련 골수성 세포는 고수준의 덱틴-2를 발현한다. (도 1a 및 도 1b) 뮤린 및 인간(Hu) 췌관 선암종(PDAC)으로부터의 조직을 지시된 항체로 염색하고, 형광 현미경법(도 1a) 또는 광학 현미경법(도 1b)으로 이미징하였다. (도 1a) LMP 또는 Panc02 뮤린 종양 세포주가 주사된 면역적격성 마우스로부터의 1차 췌장 종양 조직 및 전이성 간 샘플. LMP 세포(Pdx1-Cre; Kras LSL-G12D/+ ; Trp53 LSL-R172H/+ 마우스로부터 원래 획득되고 이들 연구 전체에 걸쳐 사용됨)는 돌연변이 p53의 축적을 특징으로 한다. (도 1b) 인간 PDAC 및 PDAC의 유전자 조작된 마우스 모델(GEMM)(Pdx1-Cre; Kras LSLG12D/+ ; Cdkn2a -/- )로부터의 원발성 종양 및 전이성 조직. 스케일 바, 100 ㎛.
도 2a 내지 도 2g. 천연 덱틴-2 효능제는 종양-관련 골수성 세포를 활성화시키고, 항종양 면역 반응을 유도한다. (도 2a 내지 도 2c) 뮤린 골수 단핵구를 PDAC-컨디셔닝된 배지로 배양하여 TAM-유사 세포를 생성하였다. M. 푸르푸르(M. furfur)(푸르푸르만(furfurman))로부터의 세포벽 추출물로 하룻밤 자극한 후 사이토카인 생성 및 공동자극성 분자 발현을 분석하였다. 일부 실험(도 2b)에서는, 세포를 덱틴-2-차단 항체로 전처리하였다. ND, 검출되지 않음. (도 2d) 피하 PDAC 종양에 연속 2일째에 푸르푸르만 또는 비히클을 주사하고, 이어서 3일째에 유세포측정에 의해 분석하였다. 종양-침윤 면역 세포들 중 총 CD3+ T 세포가 게이팅된다. (도 2e 내지 도 2g) 피하 PDAC 종양을 보유한 마우스에 종양 이식 후 일수 7 및 일수 10에서 푸르푸르만 (+/- IFNγ) 또는 비히클을 종양내 주사하고, 관문 억제제(도 2e), 젬시타빈(Gem)(도 2f), 또는 CD40 효능성 항체(일수 7에서 시작하여 i.p., q3d)로 전신적으로 처리하였다. 평균 종양 부피 ± SEM이 나타나 있다(n=3 내지 5 마리의 마우스/군). *, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001; ****, p<0.0001; 이들은 사후 터키 검정(post hoc Tukey's test)을 동반하는 일원분산분석(one-way ANOVA)에 의하며, 결과는 마지막 시점에서의 종양 부피에 대해 나타나 있음.
도 3a 내지 도 3h. 천연 덱틴-2 리간드는 마우스 및 인간 세포를 활성화시키고, 다수의 종양 유형에서 항암 효과를 갖는다. (도 3a) 지시된 항체로 전처리되고, 이어서 플레이트-결합된 S. 세레비시아이(S. cerevisiae) 만난으로 하룻밤 자극된 PDAC TAM에 의한 TNFα 생성. (도 3b, 도 3c) GM-CSF로 전처리되고, 이어서 푸르푸르만(도 3b) 또는 만난(도 3c)으로 자극된 인간 단핵구에 의한 TNFα 생성. n=3의 공여자에 대한 평균 ± SEM이 나타나 있다. (도 3d 내지 도 3f) s.c. PDAC(도 3d), 폐 선암종(도 3e), 또는 CT26 결장 암종을 보유하는 마우스를 종양 이식 후 6 내지 9일째에 시작하여 만난(i.v.) 및/또는 αCTLA-4 및 αPD-1 항체의 병용물(i.p.)로 처리하였다. 평균 종양 부피 ± SEM이 나타나 있다(군당 n=3 내지 5). *, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001; ****, p<0.0001; 이들은 비대응 스튜던트 t-검정(Student's t-test)(도 3b), 또는 사후 터키 검정(post hoc Tukey's test)을 동반하는 이원분산분석(two-way ANOVA)(도 3d 내지 도 3f)에 의함. (도 3g) 마우스 내로의 만난 주사(10 mg/㎏ i.v.) 후 6시간째에 PDAC TAM에 의한 CD86 및 MHC-II 발현. (도 3h) 덱틴-2 효능제는 화학요법 및 다른 면역요법과 상승작용한다 - 지시된 작용제로 처리된 종양-보유 마우스에 대한 종양 성장 곡선. 종양을 7 내지 9일 동안 성장되게 한 후, 덱틴-2 자극제를 단독으로 또는 i.p. 젬시타빈(100 mg/㎏ q3d x 3 wk) 또는 효능성 αCD40 항체(10 mg/㎏ q3d x 3)와 병용하여 i.t.(푸르푸르만, 10 mg/㎏ q3d x 2) 또는 i.v.(만난, 10 mg/㎏ q2d x 3 wk) 투여하였다. *, p<0.05; ***, p<0.001; ****, p<0.0001; 이들은 사후 터키 검정을 동반하는 이원분산분석에 의함.
도 4a 내지 도 4d. GM-CSF는 덱틴-2 발현을 유도하고, 종양을 덱틴-2 자극제로 감작시킨다. (도 4a 내지 도 4c) 뮤린(도 4a, 도 4b) 및 인간(도 4c) 단핵구를 GM-CSF(50 ng/㎖)가 보충되거나 보충되지 않은 배지 중에서 24시간 동안 배양한 후, 덱틴-2 발현의 유세포측정 분석(도 4a, 도 4c) 또는 푸르푸르만에 의한 자극 및 TNFα 생성의 분석(도 4b)을 행하였다. (도 4c) n=3의 공여자에 대한 평균 MFI ± SEM이 나타나 있다. (도 4d) s.c. CT26 종양을 보유하는 마우스를 종양 이식 후 일수 6에서 시작하여 만난(i.v.) 및/또는 GM-CSF(i.t.)로 처리하였다. 평균 종양 부피 ± SEM이 나타나 있다(군당 n=3 또는 4). *, p<0.05; **, p<0.01; 이들은 스튜던트 t-검정(도 4c), 또는 사후 터키 검정을 동반하는 이원분산분석(도 4d)에 의함.
도 5a 내지 도 5d. 키푸넨신에 의한 만노시다제 억제는 고-만노스 글리칸 디스플레이를 유도하고 종양 세포 면역원성을 증가시킨다. (도 5a 내지 도 5c) PDAC 세포를 3일 동안 키푸넨신(도 5a) 또는 TAM과의 공배양물(도 5b, 도 5c)로 처리한 후 유세포측정 분석을 행하였다. (도 5a) 만노스-결합 렉틴, 콘카나발린 A로 염색된 PDAC 세포. (도 5b, 도 5c) 전처리된 PDAC 세포를 CSFE로 표지하고 TAM과 하룻밤 공배양하여, 덱틴-2-발현 TAM에 의한 사이토카인 생성(도 5b) 및 종양 세포 흡수(도 5c)를 평가하였다. 일부 실험에서는, TAM을 덱틴-2-차단 항체로 처리한 후 PDAC 세포와 공배양하였다(도 5c). *, p<0.05; 이는 스튜던트 t-검정에 의함. (도 5d) 키푸넨신-처리된 마우스(7일 동안 i.p., q2d)로부터의 피하 PDAC 종양을 유세포측정에 의해 분석하였다. 총 종양-침윤 면역 세포들 중에서 CD8 T 세포(CD8+CD90+)가 게이팅된다.
도 6a 및 도 6b. 덱틴-2 항체(예를 들어, 가용성 또는 고정화된 덱틴-2 항체)는 종양-관련 골수성 세포를 활성화시킨다. (도 6a, 도 6b) 뮤린 골수 단핵구를 PDAC-컨디셔닝된 배지로 배양하여 TAM-유사 세포를 생성하고, 이어서 다양한 세포 표면 분자에 대해 유도된 항체로 코팅된 웰 내에 시딩(seeding)하였다. 사이토카인 생성(도 6a) 및 공동자극성 분자 발현(도 6b)을 18시간 후에 평가하였다.
도 7a 내지 도 7c. 덱틴-2를 활성화시킬 수 있는 합성 당중합체의 설계. (도 7a) 다작용성 당중합체가 종양 환경 내에서 덱틴-2를 활성화시키도록 설계될 수 있다. 당중합체는 수용체 클러스터링 및 활성화를 위한 최적의 간격으로 중합체 골격 상에 덱틴-2-결합 글리칸을 디스플레이한다. 다른 작용기들이 중합체 골격을 따라 또는 추가의 세포 경로를 표적화, 이미징, 자극하기 위한 또는 약리학적 최적화를 위한 말단 기로서 통합될 수 있다. (도 7b) 만노비오실 기가 폴리펩티드 골격 내의 세린 잔기에 부착되어 덱틴-2 리간드로서의 역할을 하는 일 실시 형태의 예. 이들 글리코폴리펩티드는 아미노산 N-카르복시무수물(NCA)의 중합에 의해 합성될 수 있다. (도 7c) 합성 글리코펩티드를 항체에 부착시켜 글리코펩티드-항체 접합체를 생성하기 위한 하나의 가능한 접합 전략(이것은 성공적으로 사용되었음)의 도식적 예이다. 항체 상의 라이신 잔기를 NHS-사이클로옥틴 화합물로 처리한 후, 아지드 말단 글리코펩티드와의 생물직교 공유 반응을 행하였다.
도 8a 내지 도 8c. 합성 만노비오스 당중합체 및 당접합체는 치료적 효과를 위하여 골수성 세포를 활성화시킨다. (도 8a, 도 8b) 지시된 항체로 전처리되고, 이어서 플레이트-고정화된 (도 8a) 상이한 글리칸 밀도(35% 또는 65%)의 만노스(Man1) 또는 만노비오스(Man2) 글리코폴리펩티드(250량체) 또는 (도 8b) 락토스(Lac) 또는 Man2 글리코폴리펩티드(65% 글리코실화된 100량체)에 결합된 αEpCAM 항체로 자극된 PDAC TAM에 의한 TNFα 생성. (도 8c) s.c. PDAC 종양을 보유하는 마우스를 종양 이식 후 10일째에 시작하여 Man2 글리코폴리펩티드(65% 글리코실화된 100량체)로 i.v. 처리하였다. 평균 종양 부피 ± SEM이 나타나 있다(군당 n=3 내지 5). ***, p<0.001; ****, p<0.0001; 이들은 사후 터키 검정을 동반하는 이원분산분석에 의함.
도 9a 내지 도 9c. 본 발명의 합성 만노비오스 글리코펩티드가 덱틴-2를 통해 종양-관련 대식세포(TAM)를 자극하고 종양 성장을 억제한다는 것을 보여주는 데이터.
도 10. 대조 항체 또는 덱틴-2-차단 항체로 전처리되고, 이어서 상이한 글리칸 밀도(30% 또는 65%)를 갖는 플레이트-결합된 락토스(Lac) 또는 만노비오스(Man2) 글리코펩티드(100량체 합성 글리코펩티드)로 20시간 동안 자극된 뮤린 단핵구-유래 수지상 세포에 의한 사이토카인 생성.
도 11. 대조 항체 또는 덱틴-2-차단 항체로 전처리되고, 이어서 상이한 글리칸 밀도(35/65/100%)를 갖는 가용성 또는 플레이트-결합된 글리코펩티드(20량체/250량체 합성 글리코펩티드)로 20시간 동안 자극된 PDAC TAM에 의한 사이토카인 생성.
도 12a 내지 도 12c. 글리코펩티드-항체 접합체의 생성을 예시하는 도식, 및 만노비오스 글리코펩티드-항체 접합체가 TAM을 활성화시키고, 덱틴-2를 통해 종양 세포 흡수를 자극함을 보여주는 데이터.
도 13. 항-Epcam 항체를 BCN-NHS 시약으로 표지하고(10x 또는 25x BCN:항체), 만노비오스 글리코펩티드(65% 100량체)에 접합시켜 항체-글리코펩티드 접합체(αEpM)를 제조하였다. PDAC TAM을 덱틴-2-차단 항체(αD2)로 전처리하거나 전처리하지 않고, 이어서 플레이트-결합된(상부 좌측 패널) 또는 가용성(상부 우측 패널 및 하부 패널) 항체 접합체로 자극하였는데, 이는 단독으로 또는 카르복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE)-표지 PDAC 세포와의 공배양물(하부 패널; "Mo-종양 공배양물")에서 행해졌다. 20시간 후에 사이토카인 생성을 평가하였다.
도 14. 항-Epcam 항체를 BCN-NHS 시약으로 표지하고(10x 또는 25x BCN:항체), 만노비오스 글리코펩티드(65% 100량체)에 접합시켜 항체-글리코펩티드 접합체(αEpM)를 제조하였다. PDAC TAM을 덱틴-2-차단 항체(α덱틴-2)로 전처리하거나 전처리하지 않고, 이어서 CFSE-표지 PDAC 세포와의 공배양물에서 가용성 항체 접합체로 자극하였다. TAM에 의한 CFSE 흡수를 20시간 후에 유세포측정에 의해 평가하였다.
도 15a 및 도 15b. 항체에 대한 Man2 글리코폴리펩티드의 접합이 가용성 형태에서 고도로 활성인 덱틴-2 자극 항체 접합체를 생성함을 보여주는 데이터. (도 15a) 라이신 접합에 의해 65% Man2 100량체에 결합된 αEpCAM 항체(DAR 약 1 내지 2; 2.5 ug/㎖ 항체 농도) +/- α덱틴-2(20 ug/㎖) 또는 등가량의 비접합된 αEpCAM 및 Man2 중합체의 혼합물로 18시간 동안 자극된 GM-CSF-전처리된 단핵구에 의한 사이토카인 생성. (도 15b) 동일한 αEpCAM-Man2 접합체 또는 성분 혼합물로 자극된 GM-CSF-전처리된 단핵구에 대한 용량-반응 곡선.
도 16. 다양한 항체 및 다양한 길이의(적게는 25개의 잔기)의 Man2 중합체를 사용하여 제조된 항체 접합체가 덱틴-2를 통해 세포를 자극할 수 있음을 보여주는 데이터.
도 17. 덱틴-2 효능제는 다른 면역 자극제와 상승작용한다. 이 도면은 푸르푸르만 +/- 지시된 작용제로 24시간 동안 처리된 뮤린 PDAC TAM에 의한 공동자극성 분자 발현을 보여준다.
도 18. 덱틴-2 효능제는 다른 면역 자극제와 상승작용한다. 이 도면은 푸르푸르만 +/- 지시된 작용제로 24시간 동안 처리된 뮤린 PDAC TAM에 의한 사이토카인 및 산화질소 생성을 보여준다.
도 19. 덱틴-2 효능제는 다른 면역 자극제와 상승작용한다. 이 도면은 종양 이식 후 일수 8 또는 일수 9에서 시작하여 만난을 단독으로(q2d i.v.) 또는 IFNγ(q2d i.v.) 또는 지시된 항체(q3d i.p.)와 병용하여 처리된 s.c. PDAC-보유 마우스에 대한 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 20. 췌장암을 가진 마우스(PDAC 마우스)를 종양내 주사에 의해, 본 발명의 다가 작용제, 즉 면역자극제(이 경우에는, TLR7/8 효능제 T785)에 접합된 덱틴-2에 대한 효능제(이 경우에는, 65% Man2 100량체) - "Man2-T785"로 불림 - 로 처리하거나, Man2 단독("Man2")으로 처리하여 획득된 데이터.
도 21. 덱틴-2 효능제(이 경우에는, 65% Man2 100량체)가 면역자극제(이 경우에는, TLR7/8 효능제 T785)에 접합될 때 상승작용하여, 가용성 형태에서 세포를 강하게 자극하는 글리코펩티드 접합체(Man2-T785)를 생성하는 것을 보여주는 데이터.
도 22a 내지 도 22c. (도 22a) Man2 글리코펩티드-T785 접합체의 합성: 도 20 및 도 21에 사용된 Man2-T785 접합체를 생성하는 데 사용된 합성의 도식. T785 구조는 1차 아민을 갖는 이미다졸퀴놀린 유도체를 함유한다. 접합시키기 위하여, T785가, NHS-에스테르(아민 반응성) 및 말레이미드(티올 반응성, 이는 이어서 SATA에 반응됨)를 함유하는 이종이작용성 가교결합제인 SMCC와 반응될 수 있다. (도 22b) T785 및 SMCC 변형된 T785를 도시한다. (도 22c) 도 22a의 합성은 또한 R848(이는 도시되어 있음)에 대한 접합체에 사용될 수 있다.
도 23a 내지 도 23c. (도 23a) 면역자극제(이 경우에는, TLR2 효능제)에 접합된 덱틴-2 효능제(이 경우에는, 65% Man2 100량체)를 갖는 다가 작용제를 사용하여 가용성 형태에서 활성인 글리코펩티드 접합체를 생성하는 것과 관련된 데이터. (도 23b) 도 23a에 사용된 접합체를 생성하는 데 사용된 반응 도식. (도 23c) N-α-팔미토일-S-[2,3-비스(팔미토일옥시)-(2RS)-프로필]-L-시스테인, 팔미토일-Cys((RS)-2,3-다이(팔미토일옥시)-프로필)-OH(Pam3Cys-OH)의 도식.
도 24. 다가 작용제가, 덱틴-2 효능제(이 경우에는, α덱틴-2 항체)가 면역자극제(이 경우에는, TLR7/8 효능제, T785)에 접합될 때 활성이어서, 상승적 효과를 나타내고 가용성 형태에서 세포를 강하게 활성화시키는 α덱틴-2 항체 접합체를 생성하는 것을 보여주는 데이터.
도 25. 이 도면은 가용성 푸르푸르만(20 ug/㎖) 또는 플레이트-결합된 만난(10 ug/웰)으로 24시간 동안 자극하기 전에 GM-CSF(50 ng/㎖)로 전처리된 인간 단핵구에 의한 사이토카인 생성 및 공동자극성 분자 발현을 보여준다.
도 26a 내지 도 26d. 덱틴-2 자극제는 T 세포-매개 항-종양 면역을 통해 PDAC 진행을 억제한다. 지시된 바와 같이 처리된 s.c. LMP-보유 마우스에 대한 종양 성장 곡선. (도 26a, 도 26b) 종양을 7 내지 10일 동안 성장되게 한 후, 만난(12.5 mg/㎏ i.v. q2d x 2 wk; 25 mg/㎏ i.t. q3d x 2) +/- 덱틴-2-차단 항체 또는 대조 항체(10 mg/㎏ i.p. q2d)로 처리하였다. (도 26c, 도 26d) 만난 처리(10 mg/㎏ i.v. q2d x 3 wk) 동안 CD4- 또는 CD8-고갈 항체(도 26c) 또는 관문-차단 항체(도 26d)(10 mg/㎏ i.p. q3d)로 마우스를 처리하였다. **, p<0.01; ***, p<0.001; ****, p<0.0001; 이들은 사후 시닥 검정(도 26a, 도 26b) 또는 사후 터키 검정(도 26c, 도 26d)을 동반하는 이원분산분석에 의함.
도 27a 내지 도 27g. GM-CSF는 덱틴-2 발현을 유도하고, TAM을 덱틴-2 자극제로 감작시킨다. (도 27a, 도 27b) GM-CSF가 보충되거나 보충되지 않은 배지를 사용하여 18시간 동안 배양된 마우스(도 27a) 또는 인간(도 27b) 단핵구에 의한 덱틴-2 발현. (도 27c 내지 도 27e) 3T3 섬유아세포-컨디셔닝된 배지 +/- GM-CSF(도 27c) 또는 LMP 종양-컨디셔닝된 배지 +/- GM-CSF-중화 항체(도 27d)로 전처리된 마우스 단핵구 또는 지시된 바와 같이 전처리된 인간 단핵구(도 27e)에 의한 TNFα 생성. (도 27f) 만난(12.5 mg/㎏ i.v. q2d x 2 wk) 및 지시된 항체(10 mg/㎏ i.p. q2d)로 처리된 LMP-보유 마우스. (도 27g) 덱틴-2의 발현과 인간 암 조직 내의 지시된 유전자 사이의 상관관계를 나타낸 히트맵(heatmap). 유전자 발현 데이터를 TCGA로부터 획득하고 분석하여 스피어만의 상관 계수를 얻었다. **, p<0.01; ****, p<0.0001; 이들은 스튜던트 t-검정(도 27b), 또는 사후 터키 검정(도 27f)을 동반하는 이원분산분석에 의함.
도 28a 내지 도 28d. KRAS-유도 종양은 GM-CSF를 생성하고, 덱틴-2 면역요법에 반응한다. (도 28a) CCLE(Cancer Cell Line Encyclopedia, 암세포주 백과사전]로부터 획득된 야생형 KRAS(WT), 또는 코돈 12, 13, 또는 61에서 돌연변이(Mut)를 갖는 인간 종양 세포주에 대한 GM-CSF 발현 값. 상자 도표는 중위값 및 사분위수 범위를 나타낸다. ****, p<0.0001; 이는 만-휘트니 U-검정(Mann-Whitney U-test)에 의함. (도 28b) 24시간 배양 후 종양 상층액 중의 GM-CSF 수준. (도 28c, 도 28d) 만난(10 mg/㎏ i.v. q2d)으로 처리된 s.c. 238N1 또는 MOC2 종양을 가진 마우스에 대한 종양 성장 곡선. 처리된 5 마리의 마우스 중 3 마리(3/5)가 238N1 종양이 치유되었다. *, p<0.05; **, p<0.01; ****, p<0.0001; 이들은 사후 시닥 검정을 동반하는 이원분산분석에 의함.
도 29a 및 도 29b. 면역자극제(이 경우에는, TLR7 효능제 784)에 접합된 덱틴-2에 대한 효능제(이 경우에는, 65% Man2 100량체)를 포함하는 본 발명의 다가 작용제 - "Man2-784 접합체"로 불림 - 와 접촉되거나, 784와 Man2의 비접합된 혼합물("Man2 + 784 혼합물")과 접촉되거나, 또는 대조군("Man2-784 접합체" + 덱틴-2를 차단하여 접합체에 의해 제공된 덱틴-2 자극에 대항하는 항체의 혼합물)과 접촉된 GM-CSF-전처리된 단핵구에 의한 TNFα 생성을 보여주는 데이터. (도 29a) 면역자극제(이 경우에는, TLR7/8 효능제 786)에 접합된 덱틴-2에 대한 효능제(이 경우에는, 65% Man2 100량체)를 포함하는 본 발명의 다가 작용제 - "Man2-786 접합체"로 불림 - 와 접촉된 GM-CSF-전처리된 단핵구에 의한 TNFα 생성을 보여주는 데이터. (도 29b)
도 30. 도 29a 및 도 29b에서의 다가 작용제의 구조를 나타낸 도식.
실시 형태의 상세한 설명
I. 도입
암 및/또는 감염성 질병의 치료를 위한 방법, 조성물, 및 키트가 본 명세서에 기재된다. 이들 방법, 조성물, 및 키트 중 일부는 덱틴-2 자극이 암을 치료하는 데 놀라울 정도로 효과적이라는 본 발명자들에 의한 발견에 기초한다. 덱틴-2 자극은 또한 감염성 질병을 치료하기 위해 백신 및/또는 애쥬번트(adjuvant, Adj)에 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명자들은 골수성 세포(종양-관련 골수성 세포, 예컨대 수지상 세포 및 대식세포)에서의 덱틴-2 신호전달의 자극이 암에 대한 면역 반응을 향상/자극할 수 있음을 알아내었다.
상기에 요약된 바와 같이, 다가 덱틴-2 자극제가 제공되며, 상기 다가 덱틴-2 자극제는 (a) 덱틴-2에 결합하여 덱틴-2 신호전달을 자극하는 작용제; 및 (b) 항체 및/또는 면역조절제를 포함하며, (a)와 (b)는 서로 접합되어 있다. 일부 경우에, (a)는 항-덱틴-2 항체 또는 이의 항원-결합 영역이다. 일부 경우에, (a)는 덱틴-2에 결합하는 만노비오스 글리코폴리펩티드(예를 들어, 일부 경우에 20 내지 250개의 아미노산 길이의 펩티드, 예를 들어 뮤신-유사 펩티드를 포함하는 만노비오스 글리코폴리펩티드)이다. 일부 경우에, 만노비오스 글리코폴리펩티드는 적어도 25%의 글리칸 밀도를 갖는다. 일부 경우에, (b)는 TLR에 대한 자극성 리간드(예를 들어, TLR7/8 효능제, 예컨대 T785 또는 786, TLR7 효능제, 예컨대 784, TLR8 효능제, TLR2 효능제, 예컨대 Pam3Cys 등)이다. 일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, (b)는 TLR 효능제이다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제가 제공되며, 상기 다가 덱틴-2 자극제는 (a) 덱틴-2에 결합하여 덱틴-2 신호전달을 자극하는 작용제; 및 (b) 항체 및 면역조절제를 포함하며, (a)와 (b)는 서로 접합되어 있다(예를 들어, 다가 덱틴-2 자극제는 항체 및/또는 면역조절제에, 예를 들어 하나 이상의 링커를 통해 접합될 수 있다). 일부 경우에, (a)는 덱틴-2에 결합하는 만노비오스 글리코폴리펩티드(예를 들어, 일부 경우에 20 내지 250개의 아미노산 길이의 펩티드, 예를 들어 뮤신-유사 펩티드를 포함하는 만노비오스 글리코폴리펩티드)이다. 일부 경우에, 만노비오스 글리코폴리펩티드는 적어도 25%의 글리칸 밀도를 갖는다. 일부 경우에, 면역조절제는 TLR에 대한 자극성 리간드(예를 들어, TLR7/8 효능제, 예컨대 T785 또는 786, TLR7 효능제, 예컨대 784, TLR8 효능제, TLR2 효능제, 예컨대 Pam3Cys 등)이다. 일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, 면역조절제 (b)는 TLR 효능제이다. 일부 경우에, 항체는 암 항원에 결합한다. 일부 경우에, 항체는 CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD30, CD33, CD38, CD44, CD47, CD52, CD56, CD70, CD96, CD97, CD99, CD123, CD279(PD-1), CD274(PD-L1), EpCam, EGFR, 17-1A, HER2, CD117, C-Met, PTHR2, HAVCR2(TIM3), 및 SIRPA로 이루어진 군으로부터 선택되는 암 항원에 결합한다. 일부 경우에, 항체는 HER2 암 항원에 결합한다.
일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, 면역조절제는 TLR 효능제이고, 항체는 암 항원에 결합한다. 일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, 면역조절제는 TLR 효능제이고, 항체는 암 항원에 결합한다. 일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, 면역조절제는 TLR7 효능제, TLR8 효능제, 또는 TLR7/8 효능제이고, 항체는 암 항원에 결합한다. 일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, 면역조절제는 T785, 784, 또는 786이고, 항체는 암 항원에 결합한다.
일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, 면역조절제는 TLR 효능제이고, 항체는 암 항원에 결합한다. 일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, 면역조절제는 TLR 효능제이고, 항체는 HER2 암 항원에 결합한다. 일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, 면역조절제는 TLR7 효능제, TLR8 효능제, 또는 TLR7/8 효능제이고, 항체는 HER2 암 항원에 결합한다. 일부 경우에, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, 면역조절제는 T785, 784, 또는 786이고, 항체는 HER2 암 항원에 결합한다.
또한, 암 및/또는 감염성 질병을 가진 개체를 치료하는 방법이 제공된다. 그러한 방법은 유효량의 덱틴-2 자극 조성물을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 조성물은 (예를 들어, 전술된 바와 같은) 덱틴-2 자극 당중합체를 포함한다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 조성물은, 예를 들어 전술된 바와 같은 다가 덱틴-2 자극제를 포함한다. 또한, 항원 제시 세포(APC)를 자극하는 방법이 제공되며, 그러한 방법은 시험관내 또는 생체외에서 APC를, 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물과, APC에서 덱틴-2 신호전달을 향상시키기에 충분한 용량으로 그리고 기간 동안 접촉시킴으로써, 자극된 APC를 생성하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 조성물은, 예를 들어 전술된 바와 같은 다가 덱틴-2 자극제를 포함한다.
본 방법 및 조성물이 기술되기에 앞서, 본 발명은 기술된 특정 방법 또는 조성물로 제한되지 않으며, 그 자체로서 물론 달라질 수 있음이 이해되어야 한다. 또한, 본 명세서에 사용되는 용어는 단지 특정 실시 형태를 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범주는 단지 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것이기 때문에, 제한적인 것으로 의도되지 않음이 이해되어야 한다.
값의 범위가 제공되는 경우, 그러한 범위의 상한치와 하한치 사이의, 문맥이 명확하게 달리 나타내지 않는 한 하한치 단위의 10분의 1까지 각각의 개재 값이 또한 구체적으로 개시되는 것으로 이해된다. 언급된 범위 내의 임의의 언급된 값 또는 개재 값과 그러한 언급된 범위 내의 임의의 다른 언급된 또는 개재된 값 사이의 각각의 더 작은 범위가 본 발명 내에 포함된다. 이들 더 작은 범위의 상한치 및 하한치는 독립적으로 그 범위 내에 포함되거나 배제될 수 있으며, 어느 하나, 어느 것도 아닌, 또는 둘 모두의 한계치가 더 작은 범위 내에 포함되는 각각의 범위가 또한, 언급된 범위 내에서 임의의 구체적으로 배제된 한계치를 제외하고 본 발명 내에 포함된다. 언급된 범위가 한계치들 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 그러한 포함된 한계치들 중 어느 하나 또는 둘 모두를 배제하는 범위가 또한 본 발명 내에 포함된다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용되는 모든 기술 과학 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 일부 잠재적인 그리고 바람직한 방법 및 재료가 이제 기재된다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물은 그러한 간행물에 인용되어 있는 방법 및/또는 재료를 개시하고 기술하기 위해 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 명세서는 모순이 있는 한에 있어서 포함된 간행물의 어떠한 개시내용도 대체함이 이해된다.
본 명세서를 읽을 때 당업자에게 명백할 바와 같이, 본 명세서에 기술되고 예시된 각각의 개별 실시 형태는 본 발명의 범주 또는 사상으로부터 벗어남이 없이 다른 몇몇 실시 형태들 중 임의의 것의 특징부로부터 용이하게 분리되거나 그와 조합될 수 있는 별개의 구성요소 및 특징부를 갖는다. 임의의 언급된 방법은 언급된 사건들의 순서로 또는 논리적으로 가능한 임의의 다른 순서로 수행될 수 있다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태(부정 관사 및 정관사)는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다. 따라서, 예를 들어, "세포(a cell)"에 대한 언급은 복수의 그러한 세포를 포함하며, "펩티드(the peptide)"에 대한 언급은 당업자에게 알려진 하나 이상의 펩티드 및 그의 등가물, 예를 들어 폴리펩티드에 대한 언급을 포함하며, 등등이다.
본 명세서에 논의된 간행물은 본 출원의 출원일 이전의 그들의 개시내용에 대해서만 제공된다. 여기서의 어느 것도 본 발명이 종래 발명에 의해 그러한 간행물보다 선행되지 않음을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 또한, 제공된 간행물의 날짜는 실제 공개 날짜와 상이할 수 있으며, 실제 공개 날짜는 독립적으로 확인될 필요가 있을 수 있다.
II. 정의
용어 "특이적 결합", "특이적으로 결합한다" 등은 용액 또는 반응 혼합물 내의 다른 분자 또는 모이어티(moiety)와 대비하여 소정의 분자에 대한 비공유적 또는 공유적인 우선적 결합을 지칭한다(예를 들어, 항체는 다른 이용가능한 폴리펩티드와 대비하여 특정 폴리펩티드 또는 에피토프에 특이적으로 결합한다). 예를 들어, 항-덱틴-2 항체는 다른 이용가능한 항원과 대비하여 덱틴-2에 우선적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, 하나의 분자가 특이적으로 결합하는 다른 분자에 대한 그러한 하나의 분자의 친화도는 KD(해리 상수)가 10-5 M 이하(예를 들어, 10-6 M 이하, 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M 이하, 10-10 M 이하, 10-11 M 이하, 10-12 M 이하, 10-13 M 이하, 10-14 M 이하, 10-15 M 이하, 또는 10-16 M 이하)인 것으로 특징지어진다. "친화도"는 결합 강도를 지칭한다. 예를 들어, 증가된 결합 친화도는 더 낮은 KD로 나타낼 수 있다. 일부 경우에, 증가된 결합 친화도는 더 낮은 KD와 상관된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "특이적 결합 구성원"은 특이적 결합 쌍의 구성원을 지칭한다(즉, 2개의 분자, 통상 2개의 상이한 분자로서, 여기서는 이들 분자 중 하나, 예를 들어 제1 특이적 결합 구성원이 비공유적 수단을 통해 다른 하나의 분자, 예를 들어 제2 특이적 결합 구성원에 특이적으로 결합한다).
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "특이적 결합제"는 생체분자(예를 들어, 마커, 예컨대 핵산 마커 분자, 단백질 마커 분자 등)에 특이적으로 결합하는 임의의 작용제를 지칭한다. 일부 경우에, 마커 분자(예를 들어, 수지상 세포 마커 분자)에 대한 "특이적 결합제"가 사용된다. 특이적 결합제는 임의의 유형의 분자일 수 있다. 일부 경우에, 특이적 결합제는 항체 또는 이의 단편이다. 일부 경우에, 특이적 결합제는 핵산 프로브(예를 들어, RNA 프로브; DNA 프로브; RNA/DNA 프로브; 변형된 핵산 프로브(예를 들어, 고정된 핵산(LNA) 프로브, 모르폴리노 프로브 등) 등)를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "마커 분자"는 명확해야 할 필요는 없다(즉, 마커는 세포를 특정 유형의 것으로 명확히 마킹할 필요는 없다). 예를 들어, 세포에 의한 마커 분자의 발현은 그 세포가 특정 세포 유형의 것임을 나타낼(즉, 시사할) 수 있다. 예를 들어, 3개의 세포 유형(유형 A, 유형 B, 및 유형 C)이 특정 마커 분자(예를 들어, 특정 mRNA, 특정 단백질 등)를 발현하는 경우, 세포에 의한 그러한 마커 분자의 발현은 그 자체만으로는 그 세포가 유형 A 세포임을 명확히 결정하는 데 반드시 사용될 수 있는 것은 아니다. 그러나, 그러한 마커의 발현은 세포가 유형 A 세포임을 시사할 수 있다. 일부 경우에, 다른 증거와 조합된, 그러한 마커의 발현은 그 세포가 유형 A 세포임을 명확히 나타낼 수 있다. 다른 예시적인 예로서, 특정 세포 유형이 2개 이상의 특정 마커 분자(예를 들어, mRNA, 단백질, 이들의 조합 등)를 발현하는 것으로 알려져 있는 경우, 세포에 의한 이러한 2개 이상의 특정 마커 분자 중 하나의 발현은 그 세포가 대상이 되는 특정 유형의 것임을 시사할 수는 있지만 확정지을 수는 없다. 그러한 경우에, 그 마커는 여전히 마커 분자로 간주된다.
"항체"는 항원에 특이적으로 결합하여 이를 인식하는 면역글로불린 유전자 또는 이의 단편으로부터의 항원 결합 영역(상보성 결정 영역(CDR)을 포함함)을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 인식된 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파, 감마, 델타, 엡실론, 및 뮤 불변 영역 유전자뿐만 아니라 무수히 많은 면역글로불린 가변 영역 유전자를 포함한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로 분류되며, 이는 다시 면역글로불린 부류 IgG, IgM, IgA, IgD, 및 IgE를 각각 규정한다. IgG 항체는 4개의 펩티드 사슬로 구성된 약 150 kDa의 큰 분자이다. IgG 항체는 약 50 kDa의 2개의 동일한 클래스 γ 중쇄 및 약 25 kDa의 2개의 동일한 경쇄를 함유하며, 이에 따라 사량체 4차 구조를 함유한다. 2개의 중쇄는 서로 연결되고 이황화물 결합에 의해 각각의 경쇄에 연결된다. 생성되는 사량체는 2개의 동일한 반부를 가지며, 이들은 함께 Y자형 형상을 형성한다. 포크의 각각의 말단은 동일한 항원 결합 부위를 함유한다. 인간에는 4개의 IgG 하위부류(IgG1, 2, 3, 및 4)가 존재하며, 이들은 혈청 중 이들의 풍부도의 순서대로 명명된다(IgG1이 가장 풍부함). 전형적으로, 항체의 항원 결합 영역은 결합의 특이성 및 친화성에 있어서 가장 중요할 것이다.
예시적인 면역글로불린(항체) 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩티드 사슬로 이루어지며, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄"(약 25 kD) 및 하나의 "중쇄"(약 50 내지 70 kD)를 갖는다. 각각의 사슬의 N-말단은, 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 규정한다. 용어 가변 경쇄(VL) 및 가변 중쇄(VH)는 각각 이들 경쇄 및 중쇄를 지칭한다.
항체는, 예를 들어 온전한 면역글로불린으로서 또는 다양한 펩티다제를 이용한 분해에 의해 생성되는 다수의 잘 특성화된 단편으로서 존재한다. 따라서, 예를 들어, 펩신은 힌지 영역에서 이황화물 결합 아래에서 항체를 분해하여, 그 자체가 이황화물 결합에 의해 VH-CH1에 결합된 경쇄인 Fab의 이량체인 F(ab)'2를 생성한다. F(ab)'2는 온화한 조건 하에서 환원되어 힌지 영역에서 이황화물 결합을 분해하고, 그럼으로써 F(ab)'2 이량체를 Fab' 단량체로 전환시킬 수 있다. Fab' 단량체는 본질적으로 힌지 영역의 일부를 갖는 Fab이다(문헌[Fundamental Immunology (Paul ed., 3d ed. 1993)] 참조). 다양한 항체 단편이 온전한 항체의 분해의 관점에서 정의되지만, 당업자는 그러한 단편이 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법을 사용하여 드 노보(de novo)로 합성될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 항체는 또한 전 항체의 변형에 의해 생성되는 항체 단편, 또는 재조합 DNA 방법을 사용하여 드 노보로 합성된 것들(예를 들어, 단일 사슬 Fv) 또는 파지 디스플레이 라이브러리를 사용하여 확인된 것들을 포함한다(예를 들어, 문헌[McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)] 참조).
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 원하는 생물학적 활성을 나타내는(예를 들어, 표적 항원에 특이적으로 결합하는) 한, 단일클론 항체(전장 단일클론 항체를 포함함), 다중클론 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체), 및 항체 단편을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "항체 단편" 및 이의 모든 문법적 변형 형태는 온전한 항체의 항원 결합 부위 또는 가변 영역을 포함하는 온전한 항체의 일부분으로서 정의되며, 상기 일부분에는 온전한 항체의 Fc 영역의 불변 중쇄 도메인(즉, 항체 동종형에 따라 CH2, CH3, 및 CH4)이 없다. 항체 단편의 예에는 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 및 Fv 단편; 다이아바디(diabody); 연속 아미노산 잔기들의 하나의 연속 서열로 이루어진 1차 구조를 갖는 폴리펩티드인 임의의 항체 단편(본 명세서에서 "단일쇄 항체 단편" 또는 "단일쇄 폴리펩티드"로 지칭됨)이 포함되며, 이에는, 제한 없이, (1) 단일쇄 Fv(scFv) 분자; (2) 단지 하나의 경쇄 가변 도메인을 함유하는 단일쇄 폴리펩티드, 또는 회합된 중쇄 모이어티 없이, 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR을 함유하는 이의 단편; (3) 단지 하나의 중쇄 가변 영역을 함유하는 단일쇄 폴리펩티드, 또는 회합된 경쇄 모이어티 없이, 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR을 함유하는 이의 단편; (4) 비인간종 또는 다른 특정 단일-도메인 결합 분자로부터의 단일 Ig 도메인을 포함하는 나노바디; 및 (5) 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 또는 다가 구조가 포함된다. 하나 이상의 중쇄를 포함하는 항체 단편에서, 중쇄(들)는 온전한 항체의 비-Fc 영역에서 발견되는 임의의 불변 도메인 서열(예를 들어, IgG 동종형 내의 CH1)을 함유할 수 있고/있거나, 온전한 항체에서 발견되는 임의의 힌지 영역 서열을 함유할 수 있고/있거나, 힌지 영역 서열 또는 중쇄(들)의 불변 도메인 서열에 융합되거나 또는 그것에 위치된 류신 지퍼 서열을 함유할 수 있다. 일부 경우에, 항체(예를 들어, 항-덱틴-2 항체)는 인간화 항체이다(예를 들어, IgG4 동종형 인간화 항체, 예를 들어 힌지 영역 내에 돌연변이를 갖는 IgG4 동종형 항체일 수 있으며, 이때 상기 돌연변이는, 예를 들어 키메라 마우스/인간 IgG4 항체에서 때때로 발견되는 이종성을 감소시키는 S241P 돌연변이이다)(예를 들어, 문헌[Angal et al., Mol Immunol. 1993 Jan;30(1):105-8] 참조).
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "에피토프"는 항체의 파라토프가 결합하는 항원 상의 임의의 항원 결정기를 의미한다. 에피토프 결정기는 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자들의 화학적 활성 표면 그룹화(grouping)로 통상 이루어지며, 특정 3차원 구조 특성뿐만 아니라 특정 전하 특성을 통상 갖는다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드", 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용된다. 이들 용어는 또한 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 천연 발생 아미노산의 인공 화학적 모방체인 아미노산 중합체뿐만 아니라, 천연 발생 아미노산 중합체 및 천연 비발생 아미노산 중합체에도 적용된다.
용어 "중합체"는 단량체 빌딩 블록(building block)들로 제조된 올리고머를 지칭하며, 선형, 분지형 또는 덴드리머 구조를 구성할 수 있다. 예를 들어, "당중합체"는 당 빌딩 블록들을 포함하는 중합체 구조이고, "글리코폴리펩티드"는 당 및 아미노산 빌딩 블록들을 포함하는 중합체 구조이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "APC" 또는 "항원 제시 세포"는, 세포막 표면 상에 주요 조직적합성 복합체 클래스 II(MHC 클래스 II) 단백질을 발현하고 MHC 클래스 II와 복합체를 형성한 항원을 T-세포에 제시하여, 제시된 항원에 대해 T-세포를 활성화시킬 수 있는 세포를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, APC는 수지상 세포이다. 일부 실시 형태에서, APC는 대식세포이다. 일부 실시 형태에서, APC는 B-세포이다. 일부 실시 형태에서, APC는 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포이다. 일부 실시 형태에서, APC는 수지상 세포 또는 대식세포이다. 일부 실시 형태에서, APC는 수지상 세포 또는 B-세포이다. 일부 경우에, APC는 대식세포가 아니다. 일부 경우에, APC는 B-세포가 아니다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "골수성 세포"는 과립구, 단핵구(Mo), 대식세포(Mφ), 및 수지상 세포(DC)를 포함한다. 이들 세포는 종종 종양에서 풍부하다. 따라서, 골수성 세포는 때때로 본 명세서에서 종양-관련 골수성(TAM) 세포로 지칭된다.
세포 배양과 관련하여 용어 "계대하는(passaging)" 또는 "계대(passage)"(즉, 분할하는(splitting) 또는 분할(split))는 당업계에 알려져 있으며, 새로운 베셀(vessel) 내로 적은 수의 세포를 옮기는 것을 지칭한다. 세포는 규칙적으로 분할된다면 배양될 수 있는데, 그 이유는, 그것은 높은 세포 밀도와 관련된 노화를 피하기 때문이다. 부착성 세포의 경우, 계대 프로토콜의 일부로서 성장 표면으로부터 세포를 탈착시킨다. 탈착은 효소 트립신 및/또는 다른 구매가능한 시약(예를 들어, TrypLE, EDTA(에틸렌다이아민테트라아세트산), 세포를 표면으로부터 물리적으로 긁어내기 위한 폴리스맨(예를 들어, 고무 폴리스맨) 등)에 의해 통상 수행된다. 이어서, 적은 수의 탈착된 세포(예를 들어, 1개의 세포만큼 적은 세포)를, 예를 들어 추가의 배지로 희석시킨 후에 사용하여 새로운 세포 집단을 시딩할 수 있다. 따라서, 세포 집단을 계대한다는 것은 세포 집단의 세포들 중 적어도 일부분을 해리시키고, 해리된 세포를 희석시키고, 희석된 해리된 세포를 플레이팅하는 것(즉, 새로운 세포 집단을 시딩하는 것)을 의미한다.
용어 "배지들" 및 "배지"는 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용된다. 세포 배양 배지는 시험관내 배양 동안 세포를 수용하는 액체 혼합물이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "집단", 예를 들어 "세포 집단" 또는 "세포들의 집단"은 다른 세포들 및/또는 세포 그룹들로부터 분리된(즉, 단리된) 2개 이상의 세포의 그룹(즉, 집단)을 의미한다. 예를 들어, 6웰 배양 접시는 6개의 세포 집단을 수용할 수 있으며, 각각의 집단은 개별 웰에 존재한다. 세포 집단의 세포들은 서로의 클론 유도체일 수 있지만, 그럴 필요는 없다. 세포 집단은 하나의 개별 세포로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 개별 세포들이 각각 6웰 배양 접시의 단일 웰 내에 넣어지고 각각의 세포가 1회 분열되는 경우, 접시는 6개의 세포 집단을 수용할 것이다. 세포 집단은 임의의 원하는 크기일 수 있고, 1개의 세포를 초과하는 임의의 수의 세포를 함유할 수 있다. 예를 들어, 세포 집단은 2개 이상, 10개 이상, 100개 이상, 1,000개 이상, 5,000개 이상, 104개 이상, 105개 이상, 106개 이상, 107개 이상, 108개 이상, 109개 이상, 1010개 이상, 1011개 이상, 1012개 이상, 1013개 이상, 1014개 이상, 1015개 이상, 1016개 이상, 1017개 이상, 1018개 이상, 1019개 이상, 또는 1020개 이상의 세포일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "복수"는 1개 초과를 의미한다. 예를 들어, 복수는 2개 이상, 5개 이상, 10개 이상, 25개 이상, 50개 이상, 100개 이상, 500개 이상, 1,000개 이상, 2,000개 이상, 5,000개 이상, 104개 이상, 105개 이상, 106개 이상, 107개 이상 등일 수 있다.
"덱틴-2"는 세포외 C-유형 렉틴-유사 도메인 접힘을 갖는 II형 막 수용체이다. 덱틴-1과 달리, 덱틴-2는 이의 세포질 도메인 내에 면역수용체 티로신계 활성화 모티프(ITAM)가 결여되어 있다. 인간 덱틴-2(NCBI 참조 서열 NP_001007034.1)는 CLEC6A, "C-유형 렉틴 도메인 패밀리 6 구성원 A", CLEC4N, 및 CLECSF10으로도 알려져 있다. 인간 덱틴-2의 단백질 서열은 다음과 같다:
MMQEQQPQSTEKRGWLSLRLWSVAGISIALLSACFIVSCVVTYHFTYGETGKRLSELHSYHSSLTCFSEGTKVPAWGCCPASWKSFGSSCYFISSEEKVWSKSEQNCVEMGAHLVVFNTEAEQNFIVQQLNESFSYFLGLSDPQGNNNWQWIDKTPYEKNVRFWHLGEPNHSAEQCASIVFWKPTGWGWNDVICETRRNSICEMNKIYL (서열 번호 1)
III. 방법 및 조성물
본 발명의 태양은 암을 가진 개체를 치료하기 위한 방법 및 조성물을 포함한다(예를 들어, 이는 골수성 세포에서, 예를 들어 세포 표면 상에 덱틴-2 클러스터링을 유도함으로써, 덱틴-2 신호전달을 자극하는 조성물을 개체에게 투여하여, 개체에서 항암 면역 반응을 자극함으로써 행해진다). 일부 경우에, 골수성 세포는 종양-관련 골수성(TAM) 세포이다. 덱틴-2 자극은 덱틴-2 클러스터링에 의해 달성될 수 있는데, 이러한 덱틴-2 클러스터링은 올리고만노스 글리칸을 디스플레이하는 미생물과의 접촉 시에 식세포의 표면 상에서 일어나는 것과 유사하다. 그러한 자극은 또한, M. 푸르푸르, S. 세레비시아이, 및 다른 미생물 종(예를 들어, 몇몇 병원성 종)과 같은, 고밀도의 덱틴-2 리간드를 갖는 미생물과 유사한 덱틴-2 자극 항체 또는 리간드(예를 들어, 만노비오스-풍부 글리코펩티드, 만난 다당류, 및/또는 다른 올리고만노스 글리칸, 예컨대 Man-9)를 사용하여 달성될 수 있다.
골수성 세포에서 (예를 들어, (예를 들어 세포 표면 상에 덱틴-2 클러스터링을 유도함으로써) 세포 표면 상의 덱틴-2 밀도를 증가시킴으로써) 덱틴-2 신호전달을 자극하는 작용제는 본 명세서에서 "덱틴-2 자극제"로 지칭된다. 덱틴-2 자극제는 "직접" 작용제일 수 있거나(예를 들어, 이들은 골수성 세포 상의 덱틴-2에 직접 결합하며, 예를 들어 특이적으로 결합함), 또는 "간접" 작용제일 수 있다(예를 들어, 이들은 세포, 예컨대 암 세포의 표면 상의 덱틴-2 리간드의 양을 증가시킨다). 직접 덱틴-2 자극제의 예에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: (a) 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드(예를 들어, 만난 다당류, 만난 추출물, 올리고만노스/고-만노스 글리칸, 진균 추출물, 예컨대 M. 푸르푸르, S. 세레비시아이, C. 알비칸스 등으로부터의 세포벽 추출물); (b) 합성 덱틴-2 자극 당중합체 또는 이의 모방체(예를 들어, 글리코폴리펩티드)(예를 들어, 골수성 세포 상의 덱틴-2에 직접 결합하는 것, 또는 임의의 것(예를 들어, 암 항원에 특이적으로 결합하는 항체)에 접합된 것); 및 (c) 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체(예를 들어, 항-덱틴-2 항체 - 일부 경우에는 가용성이고, 일부 경우에는 고체 지지체 상에 고정화됨 -, 다가 항-덱틴-2 항체, 예를 들어 암 항원에 또한 특이적으로 결합하는 것 등).
일부 경우에, 직접 덱틴-2 자극제는 (예를 들어, 시험관내, 생체외, 또는 생체내에서; 이때 생체내에서는, 예를 들어 작용제를 개체에게 투여함으로써 행해짐) 골수성 세포와 접촉시킴으로써, 골수성 세포에서 덱틴-2 신호전달을 촉발(자극)하는 데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 직접 덱틴-2 자극제는 암 세포 결합제(예를 들어, 종양 항원에 대한 항체)에 접합됨으로써, 표적 세포(예를 들어, 암 세포)의 표면 상의 직접 덱틴-2 자극제의 수준을 증가시킬 수 있다.
간접 덱틴-2 자극제의 예에는 알파-만노시다제 클래스 1 억제제(예를 들어, 키푸넨신); 및 만노시다제 발현 및/또는 활성을 감소시킬 수 있는 유전자 편집제 및/또는 RNAi 작용제가 포함되지만 이로 한정되지 않으며, 이들 모두는 표적 세포(예를 들어, 암 세포)의 표면 상의 말단 만노스/만노비오스 잔기의 디스플레이 및/또는 밀도를 증가시킴으로써, 치료되는 암에 대한 면역 반응의 감도/강도를 증가시킬 수 있다.
이와 같이, 일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법은 암을 가진 개체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 골수성 세포에서, 예를 들어 세포 표면 상에 덱틴-2 클러스터링을 유도함으로써, 덱틴-2 신호전달을 자극하여, 개체에서 항암 면역 반응을 자극함으로써 행해지며, 상기 방법은 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물; 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제, 만노시다제 발현 및/또는 활성을 감소시키는 유전자 편집제, 만노시다제 발현 및/또는 활성을 감소시킬 수 있는 RNAi 작용제 등)를 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 암을 가진 개체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 골수성 세포에서 (예를 들어, 예컨대 세포 표면 상에 덱틴-2 클러스터링을 유도함으로써, 세포 표면 상의 덱틴-2 밀도를 증가시킴으로써) 덱틴-2 신호전달을 자극하여, 개체에서 항암 면역 반응을 자극함으로써 행해지며, 상기 방법은 하기로부터 선택되는 하나 이상의 덱틴-2 자극제를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다: (a) 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드(예를 들어, 만난 다당류, 만난 추출물, 예컨대 S. 세레비시아이로부터의 추출물, 진균 세포벽 추출물, 예컨대 M. 푸르푸르 및/또는 C. 알비칸스로부터의 세포벽 추출물); (b) 합성 덱틴-2 자극 당중합체 또는 이의 모방체(예를 들어, 글리코폴리펩티드, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 예컨대 만노비오스-풍부 당단백질, 예를 들어 O-연결된 및/또는 N-연결된 만노비오스-풍부 당단백질); (c) 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체(예를 들어, 항-덱틴-2 항체 - 일부 경우에는 가용성이고, 일부 경우에는 고체 지지체 상에 고정화됨 -, 암 항원에 또한 특이적으로 결합하는 다가 항-덱틴-2 항체); 및 (d) 알파-만노시다제 클래스 1 억제제(예를 들어, 여기서는 암 세포가 억제제와 접촉됨으로써, 그의 표면 상의 덱틴-2 리간드의 수준을 증가시킴).
(a) 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드
일부 실시 형태에서, 암을 가진 개체를 치료하는 방법은 "덱틴-2에 대한 천연 존재 리간드"를 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 그러한 용어는 하기에 논의되는 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드를 포함하지만, 또한 식물 유래 덱틴-2 자극성 리간드, 예컨대 천연 공급원으로부터 얻어지는 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 올리고만노스/고-만노스 글리칸, 만노비오스-풍부 당단백질, O-연결된 및/또는 N-연결된 만노비오스-풍부 당단백질, 및 만난 다당류(예를 들어, 대두 아글루티닌)를 포함할 것이다.
일부 실시 형태에서, 암을 가진 개체를 치료하는 방법은 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드(즉, 식물 비유래 천연 존재 덱틴-2 자극제)를 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드를 포함하는 본 발명의 조성물은 골수성 세포에서 (예를 들어, 예컨대 세포 표면 상에 덱틴-2 클러스터링을 유도함으로써, 세포 표면 상의 덱틴-2 밀도를 증가시킴으로써) 덱틴-2 신호전달을 자극하는 하나 이상의 당단백질을 포함하는 진균 세포벽 추출물을 포함한다. 일부 경우에, 그러한 진균 세포벽 추출물은 덱틴-2 자극 당중합체 또는 이의 모방체(예를 들어, 글리코폴리펩티드)(예를 들어, 덱틴-2 자극 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 예컨대 만노비오스-풍부 당단백질, 예를 들어 O-연결된 및/또는 N-연결된 만노비오스-풍부 당단백질)를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Ishikawa et al., Cell Host Microbe, 2013 Apr 17;13(4):477-88]을 참조한다.
일부 경우에, 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드를 포함하는 본 발명의 조성물은 만난 다당류(예를 들어, S. 세레비시아이 만난, 예컨대 알칼리성 만난 추출물(예를 들어, Sigma-Aldrich의 제품 m7504 참조), 또는 C. 알비칸스 만난)를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Uryu et al., Blood, 2015 May 7;125(19):3014-23]; 및 문헌[Saijo et al., Immunity, 2010 May 28;32(5):681-91]을 참조한다. 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드를 포함하는 조성물은 천연 공급원으로부터 얻어지는 올리고만노스/고-만노스 글리칸(만노스-올리고당)(예를 들어, 돼지 티로글로불린 등으로부터의 Man-9 등)을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 그것은 천연 공급원으로부터 얻어지지 않고, 대신에 실험실에서 생성된 생성물이지만(예컨대, 합성되지만), 식물 유래 천연 생성물과 구조적으로 상이하다. 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드를 포함하는 조성물은 S. 세레비시아이로부터의 만난 추출물에서 발견될 수 있는 것과 같은 올리고만노스 글리칸을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 만난(예를 들어, 만난 다당류, 올리고만노스/고-만노스 글리칸을 포함하는 조성물)은 개체(예를 들어, 인간)에게 전신적으로 전달되고, 다수의 종양 유형(예를 들어, 암, 예컨대 췌장암, 폐암, 및 결장암)을 치료할 수 있다. 예를 들어, 하기 실시예 섹션을 참조한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "덱틴-2 결합 올리고만노스 글리코폴리펩티드를 포함하는 조성물"은 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드를 포함하는 조성물(예를 들어, 덱틴-2 자극 세포벽 추출물, 예컨대 말라세지아 푸르푸르(Malassezia furfur, M. 푸르푸르) 덱틴-2 자극 세포벽 추출물, 예를 들어 덱틴-2 자극 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 예컨대 만노비오스-풍부 당단백질, 예를 들어 O-연결된 및/또는 N-연결된 만노비오스-풍부 당단백질을 포함하는 추출물)을 포함하는 것으로 의미된다. 마찬가지로, 어구 "덱틴-2에 결합하는 글리코폴리펩티드"는 M. 푸르푸르로부터의 세포벽 추출물에서 발견될 수 있는 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(들)(예를 들어, 올리고만노스 당단백질, 예를 들어 만노비오스-풍부 당단백질, 예를 들어 O-연결된 및/또는 N-연결된 만노비오스-풍부 당단백질)를 포함하는 것으로 의미된다.
일부 경우에, 식물 비유래 천연 존재 리간드를 포함하는 본 발명의 조성물은 하나 이상의 당단백질(예를 들어, 올리고만노스 당단백질, 예컨대 만노비오스-풍부 당단백질, 예를 들어 O-연결된 및/또는 N-연결된 만노비오스-풍부 당단백질)(일부 경우에는, 진균 세포벽 추출물로부터 단리된 것임)을 포함하며, 이들은 독립적으로 또는 조합하여 덱틴-2 신호전달을 자극한다. 일부 경우에, 세포벽 추출물은 M. 푸르푸르 세포벽 추출물이다. 일부 경우에, 세포벽 추출물은 M. 푸르푸르 및/또는 C. 알비칸스로부터 유래된다. 일부 경우에, 식물 비유래 천연 존재 리간드를 포함하는 본 발명의 조성물은 M. 푸르푸르, C. 알비칸스, 스키스토소마 만소니(Schistosoma mansoni), 미코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 데르마토파고이데스 파리나(Dermatophagoides farina), 칸디다 글라브라타(Candida glabrata), 블라스토미세스 데르마티티디스(Blastomyces dermatitidis), 크립토콕쿠스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 폰세카이아 페드로소이(Fonsecaea pedrosoi), 및 A. 푸미가투스(A. fumigatus) 중 하나 이상으로부터의 추출물을 포함하며, 상기 추출물은 덱틴-2 신호전달을 자극하는 하나 이상의 당단백질을 포함한다.
세포벽 추출물은 임의의 편리한 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Ishikawa et al., Cell Host Microbe. 2013 Apr 17;13(4):477-88]; 및 문헌[McGreal et al., Glycobiology. 2006 May;16(5):422-30]을 참조하며, 이들 참고문헌은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 일부 경우에, 적합한 세포벽 추출물이 구매가능하다. 예를 들어, 일부 경우에, 적합한 세포벽 추출물은 M. 푸르푸르의 구매가능한 세포벽 추출물(예를 들어, 푸르푸르만; Invivogen)이다.
일부 경우에, 암을 가진 개체를 치료하는 방법은 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드(예를 들어, M. 푸르푸르로부터의 진균 세포벽 추출물; 만난, 예를 들어 만난 다당류, 올리고만노스/고-만노스 글리칸을 포함하는 조성물; S. 세레비시아이로부터의 만난 등)를 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 암을 가진 개체를 치료하는 방법은 식물 비유래 천연 존재 덱틴-2 자극 당단백질(예를 들어, 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 예컨대 만노비오스-풍부 당단백질, 예를 들어 O-연결된 및/또는 N-연결된 만노비오스-풍부 당단백질, 예컨대 M. 푸르푸르로부터의 진균 세포벽 추출물에서 발견될 수 있는 것)을 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 암을 가진 개체를 치료하는 방법은 식물 비유래 고-만노스 당접합체(glycoconjugate)(당중합체), 예컨대 당지질 또는 N-글리코펩티드 또는 단백질 단편을 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
(b) 합성 당중합체(예를 들어, 글리코폴리펩티드, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드)
고밀도로 O-글리코실화된 세린-풍부 단백질은 (예를 들어, 일부 경우에는, 덱틴-2에 의해 인식되는 별개의 패턴을 구성하는) 특정 기하학적 배열로 디스플레이된 글리칸을 갖는 연장된 강성 구조를 채택한다. 이러한 구조는, 강력한 덱틴-2 활성화를 위해 조정되고 종양 표적화 및 면역 세포 활성화와 같은 추가의 특성을 위해 작용화된 화학적으로 규정된 당중합체를 사용하여 모방할 수 있다(도 7a). 합성 당중합체는 변동가능한 골격 구조, 글리칸 구조, 길이, 강성, 기하학적 형상 및 말단-작용기를 갖도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 덱틴-2 활성화 당중합체는 아미노산 N-카르복시무수물(NCA)의 중합에 의해 생성된 폴리펩티드 골격을 포함할 수 있다(예를 들어, 도 7b 참조). 글리코폴리펩티드는 다양한 글리칸 밀도 및 패턴을 달성하기 위해 글리코실화 아미노산 빌딩 블록(예컨대, 만노비오실-세린)을 단독으로 또는 다른 아미노산과 블렌딩된 상태로 포함한다. 합성 방법의 예에 대해서는, 예를 들어 문헌[Kramer et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Oct 13;112(41):12574-9] 및 문헌[Zhou, et al., Angew. Chem. Int. Ed., 57: 3137-3142 (2018)]을 참조하며, 이들은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드는 만노비오스-변형된 세린을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드는, 예를 들어 M. 푸르푸르 추출물로부터의 천연 글리코폴리펩티드와 같은, Manα1,2Man(만노비오스, Man2)에 의한 고밀도의 세린 O-글리코실화를 갖는 뮤신-유사 당단백질이며, 강력한 덱틴-2 효능제로서 작용한다. 일부 경우에, 본 발명의 합성 글리코폴리펩티드는 단지 고정화될 때에만 덱틴-2를 활성화시킨다. 일부 경우에, 본 발명의 합성 글리코폴리펩티드는 단지 가용성 형태일 때에만 덱틴-2를 활성화시킨다. 일부 경우에, 본 발명의 합성 글리코폴리펩티드는 고정화될 때 또는 가용성 형태일 때 덱틴-2를 활성화시킨다. 본 발명의 합성 글리코폴리펩티드는, 예를 들어 전술된 바와 같이 천연 리간드처럼 사용될 수 있거나, 또는 다가 덱틴-2 자극제(예를 들어, 하기에 더 상세히 기재되어 있는 종양-표적화 당접합체(당중합체)) 내로 도입될 수 있다. 합성 글리코펩티드를 항체에 접합시키는 데 사용될 수 있는 (성공적으로 사용되었던) 한 가지 가능한 접합 전략의 예에 대해서는, 도 7c를 참조한다(예를 들어, 항체 상의 라이신 잔기가 NHS-사이클로옥틴 화합물로 처리된 후, 아지드 말단 글리코펩티드와의 생물직교 공유 반응이 행해질 수 있다).
게다가, 블렌딩된 아미노산 빌딩 블록은 조직 표적화, 이미징, 대안적인 면역 활성화 리간드, 및 다른 원하는 기능성을 위하여 모이어티에 의해 작용화될 수 있다. 이러한 합성 접근법은 글리칸 구조, 밀도 및 개재 작용기(intervening functionality)의 변동을 가능하게 하여, 덱틴-2 활성화를 위한 최적의 작제물이 확인될 수 있도록 한다. 따라서, 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드는 상이한 길이 및 글리칸 구조/밀도를 가질 수 있다. 예를 들어, 다양한 밀도의 세린-결합된 만노스(Man1) 또는 만노비오스(Man2) 잔기를 함유하는 일련의 글리코펩티드가 생성될 수 있다(예를 들어, 도 9a 참조). 변동가능한 길이, 글리칸 구조, 및 글리칸 밀도의 글리코펩티드가, 다양한 글리칸 밀도 및 패턴을 달성하기 위해 아미노산 빌딩 블록(예를 들어, 만노실-세린, 락토실-세린 등)을 단독으로 또는 다른 아미노산과 블렌딩된 상태로 사용하여 (예를 들어, NCA 중합에 의해) 생성될 수 있다(예를 들어, 도 7a 및 도 7b 및 도 9a 참조). 단량체는 또한, 예를 들어 낮은 글리코실화 밀도에서 글리코펩티드 용해도를 유지하기 위하여, 알라닌과 같은 공통 아미노산뿐만 아니라, 글루탐산과 같은 친수성 잔기를 포함할 수 있다. 아지드-보유 니켈 촉매를 사용하는 중합은 반응성 아민 및 아지드 사슬 말단을 보유하는 이중-작용화된 글리코펩티드를 제공하는데, 이는, N-하이드록시석신이미딜(NHS) 에스테르 또는 클릭 반응(click reaction)을 통해 구매가능한 형광색소 및 다른 모이어티(예를 들어, 세포막-도입 지질)에 의한 용이한 변형을 가능하게 한다. 글리코펩티드 길이(20 내지 300개의 아미노산), 글리코실화 밀도, 및 펩티드 조성은 촉매 대 단량체 비 및 반응에서의 상이한 단량체들의 비를 변동시킴으로써 정밀하게 조정될 수 있다. 다양한 길이(예를 들어, 25, 50, 100개의 잔기, 예를 들어 하기 참조) 및 글리칸 밀도(예를 들어, 35%, 65%, 100%, 예를 들어 하기 참조)의 덱틴-2 자극 Man2 글리코펩티드가 (예를 들어, 단독으로, 또는 예를 들어 라이신 결합을 통해, 제2 작용제, 예컨대 종양-결합 또는 면역조절성 항체에, 또는 다른 면역조절제에 접합된 상태로) 사용될 수 있다.
치료 개발과 관련된 다른 특성이 또한 조절될 수 있다. 당중합체 작용기는 이미징 프로브, 항체에 대한 부착 또는 리포좀 내로의 도입을 위한 기, 또는 다른 바람직한 요소를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드는 길이가 8 내지 400개의 아미노산(예를 들어, 8 내지 350개, 8 내지 300개, 8 내지 250개, 8 내지 200개, 8 내지 150개, 8 내지 125개, 8 내지 100개, 8 내지 75개, 8 내지 50개, 8 내지 35개, 8 내지 25개, 8 내지 20개, 8 내지 15개, 10 내지 400개, 10 내지 350개, 10 내지 300개, 10 내지 250개, 10 내지 200개, 10 내지 150개, 10 내지 125개, 10 내지 100개, 10 내지 75개, 10 내지 50개, 10 내지 35개, 10 내지 25개, 20 내지 400개, 20 내지 350개, 20 내지 300개, 20 내지 250개, 20 내지 200개, 20 내지 150개, 20 내지 125개, 20 내지 100개, 20 내지 75개, 20 내지 50개, 20 내지 35개, 20 내지 25개, 35 내지 400개, 35 내지 350개, 35 내지 300개, 35 내지 250개, 35 내지 200개, 35 내지 150개, 35 내지 125개, 35 내지 100개, 35 내지 75개, 35 내지 50개, 50 내지 400개, 50 내지 350개, 50 내지 300개, 50 내지 250개, 50 내지 200개, 50 내지 150개, 50 내지 125개, 50 내지 100개, 50 내지 75개, 75 내지 400개, 75 내지 350개, 75 내지 300개, 75 내지 250개, 75 내지 200개, 75 내지 150개, 75 내지 125개, 75 내지 100개, 100 내지 400개, 100 내지 350개, 100 내지 300개, 100 내지 250개, 100 내지 200개, 100 내지 150개, 또는 125 내지 400개, 125 내지 350개, 125 내지 300개, 125 내지 250개, 125 내지 200개, 또는 125 내지 150개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)(예를 들어, 일부 경우에는 고체 지지체 상에 고정화된 펩티드, 일부 경우에는 가용성 펩티드, 일부 경우에는 종양-표적화된 모이어티, 예컨대 항체에 접합된 펩티드 등)를 포함한다.
일부 경우에, 본 발명의 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 길이가 20 내지 300개의 아미노산(20량체 내지 300량체)(예를 들어, 20 내지 250개, 20 내지 225개, 20 내지 200개, 20 내지 175개, 20 내지 150개, 20 내지 100개, 35 내지 300개, 35 내지 250개, 35 내지 225개, 35 내지 200개, 35 내지 175개, 35 내지 150개, 35 내지 100개, 50 내지 300개, 50 내지 250개, 50 내지 225개, 50 내지 200개, 50 내지 175개, 50 내지 150개, 또는 50 내지 100개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)를 포함한다. 일부 경우에, 본 발명의 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 길이가 30 내지 200개의 아미노산(30량체 내지 200량체)(예를 들어, 30 내지 175개, 30 내지 150개, 30 내지 100개, 40 내지 200개, 40 내지 175개, 40 내지 150개, 40 내지 100개, 50 내지 200개, 50 내지 175개, 50 내지 150개, 또는 50 내지 100개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)를 포함한다.
일부 경우에, 본 발명의 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 길이가 50 내지 150개의 아미노산(50량체 내지 150량체)(예를 들어, 50 내지 125개, 50 내지 100개, 50 내지 75개, 75 내지 150개, 75 내지 125개, 75 내지 100개, 100 내지 150개, 또는 125 내지 150개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)를 포함한다. 일부 경우에, 본 발명의 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드는 길이가 20 내지 100개의 아미노산(20량체 내지 100량체)(예를 들어, 20 내지 80개, 20 내지 70개, 20 내지 60개, 20 내지 50개, 30 내지 100개, 30 내지 80개, 30 내지 70개, 30 내지 60개, 30 내지 50개, 40 내지 100개, 40 내지 80개, 40 내지 70개, 40 내지 60개, 또는 40 내지 50개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)를 포함한다.
본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 임의의 원하는 글리칸 밀도를 가질 수 있으며, 그러한 밀도는 임의의 편리한 방법을 사용하여 제어/생성될 수 있으며, 적합한 방법은 당업자에게 알려져 있을 것이다. 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 적어도 10%(예를 들어, 적어도 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 또는 75%)이다. 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 적어도 25%(예를 들어, 적어도 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 또는 75%)이다. 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 적어도 30%(예를 들어, 적어도 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 또는 75%)이다. 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 적어도 50%(예를 들어, 적어도 55%, 60%, 65%, 70%, 또는 75%)이다. 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 적어도 60%(예를 들어, 적어도 65%, 70%, 또는 75%)이다. 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 60%이다.
일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 10% 내지 100%(예를 들어, 10% 내지 90%, 10% 내지 80%, 10% 내지 70%, 10% 내지 65%, 10% 내지 60%, 20% 내지 100%, 20% 내지 90%, 20% 내지 80%, 20% 내지 75%, 20% 내지 70%, 20% 내지 65%, 25% 내지 100%, 25% 내지 90%, 25% 내지 85%, 25% 내지 80%, 25% 내지 75%, 25% 내지 70%, 25% 내지 65%, 30% 내지 100%, 30% 내지 90%, 30% 내지 85%, 30% 내지 80%, 30% 내지 75%, 30% 내지 70%, 또는 30% 내지 65%)의 범위이다. 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 20% 내지 85%(예를 들어, 20% 내지 80%, 20% 내지 75%, 20% 내지 70%, 20% 내지 65%, 25% 내지 85%, 25% 내지 80%, 25% 내지 75%, 25% 내지 70%, 25% 내지 65%, 30% 내지 85%, 30% 내지 80%, 30% 내지 75%, 30% 내지 70%, 또는 30% 내지 65%)의 범위이다. 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 25% 내지 70%(예를 들어, 25% 내지 65%, 30% 내지 70%, 또는 30% 내지 65%)의 범위이다.
덱틴-2에 대한 당모방체(glycomimetic) 리간드가 중합체 작제물 내의 천연 당 대신에 사용될 수 있다. 당모방체는, (예를 들어, 글리칸 리간드와 유사하게) 덱틴-2에 결합하고 이를 활성화시키는 비-가수분해성 당 유사체 또는 비-당 합성 리간드를 포함할 수 있다.
(c) 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체(예를 들어, 고체 지지체 상에 고정화된 것 또는 가용성인 것)
일부 실시 형태에서, 암을 가진 개체를 치료하는 방법은 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체(예를 들어, 인간화 항체, 항-덱틴-2 항체의 항원 결합 영역 등)를 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극제는 항-덱틴-2 단일특이성 다가 항체이다. 일부 경우에, 항-덱틴-2 항체(예를 들어, 단일클론 항-덱틴-2 항체)는 가용성(고체 지지체 상에 고정화되지 않음)이다. 일부 경우에, 항-덱틴-2 항체는 고체 지지체(예를 들어, 나노입자) 상에 고정화된다. 임의의 편리한 고체 지지체가 사용될 수 있다. 적합한 고체 지지체는 플레이트, 튜브, 비드(유리 또는 폴리스티렌 비드), 나일론, 니트로셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 유리 섬유, 임의의 편리한 다공성 중합체, 콜로이드성 입자, 금속 나노재료, 예컨대 나노입자, 나노플레이트, 또는 나노셸, 라텍스 비드 등이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 고체 지지체는 약제학적으로 허용되는 고체 지지체(예를 들어, 치료적 용도를 위해 승인된 나노입자)이다.
일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극 항체는 나노담체인 고체 지지체 상에 고정화된다. 본 발명의 덱틴-2 자극제의 전달을 위한 나노담체의 예에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: (a) 약물이 중합체에 접합되거나 중합체 내에 캡슐화된 중합체 나노입자; (b) 중합체 미셀: 수용액 중에서 나노크기 코어/셸(core/shell) 구조로 형성되는 양친매성 블록 공중합체(소수성 코어 영역은 소수성 약물에 대한 저장소로서의 역할을 하는 반면, 친수성 셸 영역은 소수성 코어를 안정화시키고 중합체가 수용성이 되게 함); (c) 덴드리머(dendrimer): 중심 코어로부터 방사상으로 나오는 다수의 고분지형 단량체로 구성된, 나노미터 치수의 합성 중합체 거대분자; (d) 리포좀: 수성 부피가 막 지질 이중층에 의해 완전히 에워싸인, 지질 이중층으로 구성된 자기-조립 구조; (e) 바이러스-기반 나노입자: 일반적으로 구조는 다가의 자기-조립 구조인 단백질 케이지임; 및 (f) 탄소 나노튜브: 벤젠 고리로 구성된 탄소 실린더.
미세입자(예를 들어, 비드)는 다른 물질, 예컨대 본 발명의 항-덱틴-2 항체가 결합/접합될 수 있는 고체 지지체 또는 기질로서의 역할을 할 수 있다. 사용 성질에 따라 다양한 비드 크기가 사용될 수 있다(예를 들어, 시험관내에서의 세포, 예컨대 골수성 세포 또는 암 세포와의 접촉 vs. 개체 내로의 투여). 예를 들어, 고체 지지 비드는 크기가 0.01 내지 1,000 ㎛(예를 들어, 0.1 내지 100 ㎛, 1 내지 100 ㎛, 1 내지 10 ㎛ 등) 직경의 범위일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 비드는 크기가 2.5 내지 3 ㎛(예를 들어, 2.7 내지 2.9 ㎛, 2.5 ㎛, 2.6 ㎛, 2.7 ㎛, 2.8 ㎛, 2.9 ㎛, 또는 3.0 ㎛) 직경의 범위일 수 있다. 일부 경우에, 더 큰 비드를 사용하는 것이 유리할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 비드는 크기가 4.3 내지 5.5 ㎛ 직경(예를 들어, 4.4 내지 4.6 ㎛, 4.3 ㎛, 4.4 ㎛, 4.5 ㎛, 4.6 ㎛, 4.7 ㎛, 4.9 내지 5.1 ㎛, 4.9 ㎛, 5.0 ㎛, 5.1 ㎛, 5.2 ㎛, 5.3 ㎛, 5.4 ㎛, 또는 5.5 ㎛ 직경)의 범위일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 고체 지지 비드는 크기가 2 내지 15 ㎛ 직경(예를 들어, 2 내지 12 ㎛, 2 내지 10 ㎛, 2 내지 8 ㎛, 2 내지 6 ㎛, 2 내지 5 ㎛, 2 내지 4 ㎛, 3 내지 15 ㎛, 3 내지 12 ㎛, 3 내지 10 ㎛, 3 내지 8 ㎛, 3 내지 6 ㎛, 3 내지 5 ㎛, 3 내지 4 ㎛, 4 내지 15 ㎛, 4 내지 12 ㎛, 4 내지 10 ㎛, 4 내지 8 ㎛, 4 내지 6 ㎛, 4 내지 5 ㎛, 5 내지 15 ㎛, 5 내지 12 ㎛, 5 내지 10 ㎛, 5 내지 8 ㎛, 5 내지 6 ㎛ 직경)의 범위일 수 있다.
본 발명의 비드는 임의의 편리한 재료(또는 이들의 조합)로 제조될 수 있으며, 이에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: 무기물, 예컨대 금속, 실리카(예를 들어, SiO2), 유리, 알루미나, 티타니아, 세라믹 등; 유기물, 예컨대 폴리스티렌, 폴리메틸메타크릴레이트(PMMA), 멜라민, 폴리락톤 등; 및 자성 재료, 예컨대 실리카, 폴리스티렌, 덱스트란 등. 구매가능한 자성 비드는 ProMag, COMPEL, BioMag, BioMagPlus, 및 Dynabeads를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 다양한 크기 및 중합체 조성의 미세입자가 고체 지지체 상에 고정화된 본 발명의 항-덱틴-2 항체를 제조하는 데 사용하기에 적합하다. 미세입자는 또한, 예를 들어 형광 염료로 착색될 수 있다. 적합한 비드의 조성물 및 제조 방법은 특허 및 비특허 과학 문헌 둘 모두에서 찾아볼 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제8,283,037호; 제5,597,531호; 제5,635,574호; 및 제8,163,183호, 이들은 본 명세서에 참고로 포함됨).
다가 단일특이성 항-덱틴-2 항체가 또한 고려된다. 다가 단일특이성 항체를 생성하기 위한 다양한 방법이 기재되어 있으며, 이것은 덱틴-2-특이적 항체 복합체를 생성하는 데 사용될 수 있다.
다가 덱틴-2 자극제
일부 실시 형태에서, 덱틴-2 자극제는 다가(예를 들어, 다작용성)이다. 예를 들어, 일부 경우에, 직접 덱틴-2 자극제('제1 작용제')가 '제2 작용제'에 접합된다. 제1 작용제는 임의의 직접 덱틴-2 자극제(즉, 덱틴-2에 결합하여 골수성 세포에서 덱틴-2 신호전달을 자극하는 작용제, 예를 들어 항-덱틴-2 항체의 항원 결합 영역, 당중합체, 예컨대 덱틴-2에 결합하는 글리코폴리펩티드, 천연 덱틴-2 리간드, 예컨대 만노비오스-풍부 당단백질 또는 만난 등)일 수 있다. 따라서, 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제는 항-덱틴-2 항체 또는 항-덱틴-2 항체의 항원 결합 영역이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제는 당중합체, 예컨대 덱틴-2에 결합하는 글리코폴리펩티드(예를 들어, Man2 당중합체)이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제는 천연 덱틴-2 리간드(예를 들어, 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드, 예를 들어 진균 세포벽 추출물, 예컨대 말라세지아 푸르푸르(M. 푸르푸르) 및/또는 칸디다 알비칸스로부터의 것; 만난, 예를 들어 만난 추출물, 예컨대 알칼리성 추출물, 예를 들어 S. 세레비시아이로부터의 만난 추출물 등)이다. 다가 덱틴-2 자극제는 본 명세서에 기재된 다른 덱틴-2 자극제와 마찬가지로 암을 치료하는 데 사용될 수 있다.
상기에 언급된 바와 같이, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제는 당중합체(예를 들어, Man2)일 수 있다. 제1 작용제는 조직 표적화, 이미징, 대안적인 면역 활성화 리간드, 및 다른 원하는 기능성을 위하여 모이어티에 의해 작용화될 수 있는 아미노산 빌딩 블록들의 블렌드일 수 있다. 이러한 합성 접근법은 글리칸 구조, 밀도 및 개재 작용기의 변동을 가능하게 한다. 따라서, 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드는 상이한 길이 및 글리칸 구조/밀도를 가질 수 있다. 예를 들어, 다양한 밀도의 세린-결합된 만노스(Man1) 또는 만노비오스(Man2) 잔기를 함유하는 일련의 글리코펩티드가 생성될 수 있다(예를 들어, 도 9a 참조). 변동가능한 길이, 글리칸 구조, 및 글리칸 밀도의 글리코펩티드가, 다양한 글리칸 밀도 및 패턴을 달성하기 위해 아미노산 빌딩 블록(예를 들어, 만노실-세린, 락토실-세린 등)을 단독으로 또는 다른 아미노산과 블렌딩된 상태로 사용하여 (예를 들어, NCA 중합에 의해) 생성될 수 있다(예를 들어, 도 7a 및 도 7b 및 도 9a 참조). 단량체는 또한, 예를 들어 낮은 글리코실화 밀도에서 글리코펩티드 용해도를 유지하기 위하여, 알라닌과 같은 공통 아미노산뿐만 아니라, 글루탐산과 같은 친수성 잔기를 포함할 수 있다. 아지드-보유 니켈 촉매를 사용하는 중합은 반응성 아민 및 아지드 사슬 말단을 보유하는 이중-작용화된 글리코펩티드를 제공하는데, 이는, N-하이드록시석신이미딜(NHS) 에스테르 또는 클릭 반응을 통해 구매가능한 형광색소 및 다른 모이어티(예를 들어, 세포막-도입 지질)에 의한 용이한 변형을 가능하게 한다. 글리코펩티드 길이(20 내지 300개의 아미노산), 글리코실화 밀도, 및 펩티드 조성은 촉매 대 단량체 비 및 반응에서의 상이한 단량체들의 비를 변동시킴으로써 정밀하게 조정될 수 있다. 다양한 길이(예를 들어, 25, 50, 100개의 잔기, 예를 들어 하기 참조) 및 글리칸 밀도(예를 들어, 35%, 65%, 100%, 예를 들어 하기 참조)의 덱틴-2 자극 Man2 글리코펩티드가 (예를 들어, 단독으로, 또는 예를 들어 라이신 결합을 통해, 제2 작용제, 예컨대 종양-결합 항체에 접합된 상태로) 사용될 수 있다.
치료 개발과 관련된 다른 특성이 또한 조절될 수 있다. 당중합체 작용기는 이미징 프로브, 항체에 대한 부착 또는 리포좀 내로의 도입을 위한 기, 또는 다른 바람직한 요소를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 제1 작용제는, 길이가 8 내지 400개의 아미노산(8량체 내지 400량체)(예를 들어, 8 내지 350개, 8 내지 300개, 8 내지 250개, 8 내지 200개, 8 내지 150개, 8 내지 125개, 8 내지 100개, 8 내지 75개, 8 내지 50개, 8 내지 35개, 8 내지 25개, 8 내지 20개, 8 내지 15개, 10 내지 400개, 10 내지 350개, 10 내지 300개, 10 내지 250개, 10 내지 200개, 10 내지 150개, 10 내지 125개, 10 내지 100개, 10 내지 75개, 10 내지 50개, 10 내지 35개, 10 내지 25개, 20 내지 400개, 20 내지 350개, 20 내지 300개, 20 내지 250개, 20 내지 200개, 20 내지 150개, 20 내지 125개, 20 내지 100개, 20 내지 75개, 20 내지 50개, 20 내지 35개, 20 내지 25개, 35 내지 400개, 35 내지 350개, 35 내지 300개, 35 내지 250개, 35 내지 200개, 35 내지 150개, 35 내지 125개, 35 내지 100개, 35 내지 75개, 35 내지 50개, 50 내지 400개, 50 내지 350개, 50 내지 300개, 50 내지 250개, 50 내지 200개, 50 내지 150개, 50 내지 125개, 50 내지 100개, 50 내지 75개, 75 내지 400개, 75 내지 350개, 75 내지 300개, 75 내지 250개, 75 내지 200개, 75 내지 150개, 75 내지 125개, 75 내지 100개, 100 내지 400개, 100 내지 350개, 100 내지 300개, 100 내지 250개, 100 내지 200개, 100 내지 150개, 또는 125 내지 400개, 125 내지 350개, 125 내지 300개, 125 내지 250개, 125 내지 200개, 또는 125 내지 150개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)(예를 들어, 일부 경우에는 고체 지지체 상에 고정화된 펩티드, 일부 경우에는 가용성 펩티드, 일부 경우에는 종양-표적화된 모이어티, 예컨대 항체에 접합된 펩티드 등)를 포함하는 본 발명의 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드이다.
일부 경우에, 본 발명의 제1 작용제는, 길이가 20 내지 300개의 아미노산(20량체 내지 300량체)(예를 들어, 20 내지 250개, 20 내지 225개, 20 내지 200개, 20 내지 175개, 20 내지 150개, 20 내지 100개, 35 내지 300개, 35 내지 250개, 35 내지 225개, 35 내지 200개, 35 내지 175개, 35 내지 150개, 35 내지 100개, 50 내지 300개, 50 내지 250개, 50 내지 225개, 50 내지 200개, 50 내지 175개, 50 내지 150개, 또는 50 내지 100개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)를 포함하는 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)이다. 일부 경우에, 본 발명의 제1 작용제는, 길이가 30 내지 200개의 아미노산(30량체 내지 200량체)(예를 들어, 30 내지 175개, 30 내지 150개, 30 내지 100개, 40 내지 200개, 40 내지 175개, 40 내지 150개, 40 내지 100개, 50 내지 200개, 50 내지 175개, 50 내지 150개, 또는 50 내지 100개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)를 포함하는 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)이다.
일부 경우에, 본 발명의 제1 작용제는, 길이가 50 내지 150개의 아미노산(50량체 내지 150량체)(예를 들어, 50 내지 125개, 50 내지 100개, 50 내지 75개, 75 내지 150개, 75 내지 125개, 75 내지 100개, 100 내지 150개, 또는 125 내지 150개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)를 포함하는 합성 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)이다. 일부 경우에, 본 발명의 제1 작용제는, 길이가 20 내지 100개의 아미노산(20량체 내지 100량체)(예를 들어, 20 내지 80개, 20 내지 70개, 20 내지 60개, 20 내지 50개, 30 내지 100개, 30 내지 80개, 30 내지 70개, 30 내지 60개, 30 내지 50개, 40 내지 100개, 40 내지 80개, 40 내지 70개, 40 내지 60개, 또는 40 내지 50개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)를 포함하는 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)이다. 일부 경우에, 본 발명의 제1 작용제는, 길이가 20 내지 250개의 아미노산(20량체 내지 250량체)(예를 들어, 20 내지 200개, 20 내지 150개, 20 내지 100개, 20 내지 80개, 20 내지 70개, 20 내지 60개, 20 내지 50개, 30 내지 250개, 30 내지 200개, 30 내지 150개, 30 내지 100개, 30 내지 80개, 30 내지 70개, 30 내지 60개, 30 내지 50개, 40 내지 250개, 40 내지 200개, 40 내지 150개, 40 내지 100개, 40 내지 80개, 40 내지 70개, 40 내지 60개, 또는 40 내지 50개의 아미노산)의 범위인 펩티드(예를 들어, 뮤신-유사 펩티드)를 포함하는 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)이다.
상기에 언급된 바와 같이, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 임의의 원하는 글리칸 밀도를 가질 수 있으며, 그러한 밀도는 임의의 편리한 방법을 사용하여 제어/생성될 수 있으며, 적합한 방법은 당업자에게 알려져 있을 것이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)인 경우, 제1 작용제는 글리칸 밀도가 적어도 10%(예를 들어, 적어도 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 또는 75%)이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)인 경우, 제1 작용제는 글리칸 밀도가 적어도 25%(예를 들어, 적어도 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 또는 75%)이다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 적어도 30%(예를 들어, 적어도 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 또는 75%)이다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 적어도 50%(예를 들어, 적어도 55%, 60%, 65%, 70%, 또는 75%)이다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 적어도 60%(예를 들어, 적어도 65%, 70%, 또는 75%)이다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 60%이다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)인 경우, 제1 작용제는 글리칸 밀도가 10% 내지 100%(예를 들어, 10% 내지 90%, 10% 내지 80%, 10% 내지 70%, 10% 내지 65%, 10% 내지 60%, 20% 내지 100%, 20% 내지 90%, 20% 내지 80%, 20% 내지 75%, 20% 내지 70%, 20% 내지 65%, 25% 내지 100%, 25% 내지 90%, 25% 내지 85%, 25% 내지 80%, 25% 내지 75%, 25% 내지 70%, 25% 내지 65%, 30% 내지 100%, 30% 내지 90%, 30% 내지 85%, 30% 내지 80%, 30% 내지 75%, 30% 내지 70%, 또는 30% 내지 65%)의 범위이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)인 경우, 제1 작용제는 글리칸 밀도가 20% 내지 85%(예를 들어, 20% 내지 80%, 20% 내지 75%, 20% 내지 70%, 20% 내지 65%, 25% 내지 85%, 25% 내지 80%, 25% 내지 75%, 25% 내지 70%, 25% 내지 65%, 30% 내지 85%, 30% 내지 80%, 30% 내지 75%, 30% 내지 70%, 또는 30% 내지 65%)의 범위이다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)는 글리칸 밀도가 25% 내지 70%(예를 들어, 25% 내지 65%, 30% 내지 70%, 또는 30% 내지 65%)의 범위이다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 면역자극제, 예컨대 패턴 인식 수용체(PRR)에 대한 자극성 리간드(효능제)이다. PRR의 예에는 톨-유사 수용체(TLR)(예를 들어, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR7/8, TLR9, TLR10, TLR11), 뉴클레오티드-결합 올리고머화 도메인-유사 수용체(NLR), C-유형 렉틴 수용체(CLR), 및 RIG-I-유사 수용체(RLR)가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 따라서, 일부 경우에, 제2 작용제는 톨-유사 수용체(TLR), 뉴클레오티드-결합 올리고머화 도메인-유사 수용체(NLR), C-유형 렉틴 수용체(CLR), 및 RIG-I-유사 수용체(RLR)로부터 선택된다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 톨-유사 수용체(예를 들어, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR7/8, TLR9, TLR10, TLR11)에 대한 자극성 리간드(효능제)이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 TLR7/8 효능제(예를 들어, T785: 예를 들어, 도 22a 및 도 22b(이들은 T785를 나타냄) 참조)이다. T785는 또한 1-(4-아미노부틸)-2-부틸-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민[Smiles: C1C(CCCC1)C(=O)NCCCC[N]2C3=C(N=C2CCCC)C(=NC4=CC=CC=C34)N]으로 지칭될 수 있다. TLR7/8 효능제의 예에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: 가르디퀴모드(1-(4-아미노-2-에틸아미노메틸이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일)-2-메틸프로판-2-올), 이미퀴모드(R837 - TLR7에 대한 효능제), 록소리빈(TLR7에 대한 효능제), IRM2(2-메틸-1-[2-(3-피리딘-3-일프로폭시)에틸]-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민)(TLR8에 대한 효능제), IRM3(N-(2-{2-[4-아미노-2-(2-메톡시에틸)-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일]에톡시}에틸)-N-메틸사이클로헥산카르복스아미드)(TLR8에 대한 효능제), CL307, 786, 및 CL097. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 TLR7 효능제(예를 들어, 784)이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 TLR8 효능제이다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 T785이다(다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제는 T785에 접합된다). 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 784이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 786이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 T785, 784, 또는 786이다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)일 때, 제2 작용제는 면역자극제, 예컨대 패턴 인식 수용체(PRR)에 대한 자극성 리간드(효능제)이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)일 때, 제2 작용제는 톨-유사 수용체(예를 들어, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR7/8, TLR9, TLR10, TLR11)에 대한 자극성 리간드(효능제)이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)일 때, 제2 작용제는 TLR7/8 효능제이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)일 때, 제2 작용제는 하기와 같다: T785, 가르디퀴모드(1-(4-아미노-2-에틸아미노메틸이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일)-2-메틸프로판-2-올), 이미퀴모드(R837 - TLR7의 효능제), 록소리빈(TLR7의 효능제), IRM2(2-메틸-1-[2-(3-피리딘-3-일프로폭시)에틸]-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민)(TLR8에 대한 효능제), IRM3(N-(2-{2-[4-아미노-2-(2-메톡시에틸)-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일]에톡시}에틸)-N-메틸사이클로헥산카르복스아미드)(TLR8에 대한 효능제), CL307, 784(TLR7의 효능제), 786(TLR7/8의 효능제), 또는 CL097.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)일 때, 제2 작용제는 784이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)일 때, 제2 작용제는 786이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제가 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스 글리코폴리펩티드)일 때, 제2 작용제는 T785이다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00001
,
Figure pct00002
, 또는
Figure pct00003
;
상기 식에서,
J1은 CH 또는 N이고,
Q1은 하기 식을 가지며:
Figure pct00004
,
T1, T2, 및 각각의 RH는 독립적으로 하기 식을 가지며:
Figure pct00005
,
각각의 V는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
각각의 W는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 X는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
각각의 Y는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -CO- 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 Z는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
U는 선택적으로 존재하고,
Figure pct00006
이고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
물결선("
Figure pct00007
")은 Q1, T1, T2, 및 RH의 부착점을 나타내고,
점("●")은 U의 부착점을 나타내고,
파선("
Figure pct00008
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00009
또는
Figure pct00010
;
상기 식에서,
Q1은 하기 식을 가지며:
Figure pct00011
,
RH는 하기 식을 가지며:
Figure pct00012
,
각각의 V는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
각각의 W는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 X는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
각각의 Y는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -CO- 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 Z는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
U는 선택적으로 존재하고,
Figure pct00013
이고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
물결선("
Figure pct00014
")은 Q1 및 RH의 부착점을 나타내고,
점("●")은 U의 부착점을 나타내고,
파선("
Figure pct00015
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00016
또는
Figure pct00017
;
상기 식에서,
RH는 하기 식을 가지며:
Figure pct00018
,
V는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
W는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 X는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
각각의 Y는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -CO- 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 Z는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
물결선("
Figure pct00019
")은 RH의 부착점을 나타내고,
파선("
Figure pct00020
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00021
또는
Figure pct00022
;
상기 식에서,
각각의 X는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
Y는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -CO- 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 Z는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
파선("
Figure pct00023
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00024
,
Figure pct00025
,
Figure pct00026
, 또는
Figure pct00027
;
상기 식에서,
Z는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
파선("
Figure pct00028
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00029
,
Figure pct00030
,
Figure pct00031
, 또는
Figure pct00032
;
상기 식에서,
J1은 CH 또는 N이고,
J2는 CH, CH2, N, NH, O, 또는 S이고,
Q1은 하기 식을 가지며:
Figure pct00033
,
T1, T2, T3, 및 RH는 독립적으로 하기 식을 가지며:
Figure pct00034
,
각각의 V는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
각각의 W는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 X는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
각각의 Y는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -CO- 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 Z는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
U는 선택적으로 존재하고,
Figure pct00035
이고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
"
Figure pct00036
"는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고,
물결선("
Figure pct00037
")은 Q1, T1, T2, T3, 및 RH의 부착점을 나타내고,
점("●")은 U의 부착점을 나타내고,
파선("
Figure pct00038
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00039
,
Figure pct00040
, 또는
Figure pct00041
;
상기 식에서,
J1은 CH 또는 N이고,
J2는 CH2, NH, O, 또는 S이고,
Q1은 하기 식을 가지며:
Figure pct00042
,
T1, T2, 및 RH는 독립적으로 하기 식을 가지며:
Figure pct00043
,
각각의 V는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
각각의 W는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 X는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
각각의 Y는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -CO- 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 Z는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
U는 선택적으로 존재하고,
Figure pct00044
이고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
물결선("
Figure pct00045
")은 Q1, T1, T2, 및 RH의 부착점을 나타내고,
점("●")은 U의 부착점을 나타내고,
파선("
Figure pct00046
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00047
,
Figure pct00048
,
Figure pct00049
Figure pct00050
,
Figure pct00051
, 또는
Figure pct00052
;
상기 식에서,
J2는 CH2, NH, O, 또는 S이고,
Q1은 하기 식을 가지며:
Figure pct00053
,
RH는 하기 식을 가지며:
Figure pct00054
,
각각의 V는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
각각의 W는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 X는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
각각의 Y는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -CO- 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 Z는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
U는 선택적으로 존재하고,
Figure pct00055
이고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
물결선("
Figure pct00056
")은 Q1 및 RH의 부착점을 나타내고,
점("●")은 U의 부착점을 나타내고,
파선("
Figure pct00057
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00058
,
Figure pct00059
Figure pct00060
, 또는
Figure pct00061
;
상기 식에서,
J2는 CH2, NH, O, 또는 S이고,
Q1은 하기 식을 가지며:
Figure pct00062
,
RH는 하기 식을 가지며:
Figure pct00063
,
V는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
각각의 W는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
X는 선택적으로 존재하고, 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
Y는 선택적으로 존재하고, -CO- 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 Z는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
U는 선택적으로 존재하고,
Figure pct00064
이고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
물결선("
Figure pct00065
")은 Q1 및 RH의 부착점을 나타내고,
점("●")은 U의 부착점을 나타내고,
파선("
Figure pct00066
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00067
,
Figure pct00068
Figure pct00069
, 또는
Figure pct00070
;
상기 식에서,
J2는 CH2, NH, O, 또는 S이고,
V는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
X는 선택적으로 존재하고, 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
Z는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
단, 적어도 X 또는 Z가 존재하고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
각각의 n은 독립적으로 0 내지 4의 정수이고,
파선("
Figure pct00071
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00072
또는
Figure pct00073
;
상기 식에서,
V는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
X는 선택적으로 존재하고, 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
Z는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
단, 적어도 X 또는 Z가 존재하고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
각각의 n은 독립적으로 0 내지 4의 정수이고,
파선("
Figure pct00074
")은 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00075
또는
Figure pct00076
;
상기 식에서,
V는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
R은 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
각각의 n은 독립적으로 0 내지 4의 정수이고,
파선("
Figure pct00077
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00078
,
Figure pct00079
Figure pct00080
, 또는
Figure pct00081
;
상기 식에서,
Q1은 하기 식을 가지며:
Figure pct00082
,
RH는 하기 식을 가지며:
Figure pct00083
,
V는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
각각의 W는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
X는 선택적으로 존재하고, 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
Y는 선택적으로 존재하고, -CO- 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 2가 C1-C8 알킬이고,
각각의 Z는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
U는 선택적으로 존재하고,
Figure pct00084
이고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
물결선("
Figure pct00085
")은 Q1 및 RH의 부착점을 나타내고,
점("●")은 U의 부착점을 나타내고,
파선("
Figure pct00086
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00087
,
Figure pct00088
Figure pct00089
, 또는
Figure pct00090
;
상기 식에서,
V는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
X는 선택적으로 존재하고, 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
Z는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
단, 적어도 X 또는 Z가 존재하고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
각각의 n은 독립적으로 0 내지 4의 정수이고,
파선("
Figure pct00091
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00092
또는
Figure pct00093
;
상기 식에서,
V는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
X는 선택적으로 존재하고, 1, 2, 3, 또는 4개의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기이고, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기가 존재하는 경우, 하나 초과의 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 연결되거나 융합되며, 여기서 연결된 2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결되고,
Z는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR-이고,
단, 적어도 X 또는 Z가 존재하고,
각각의 R은 독립적으로 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
각각의 n은 독립적으로 0 내지 4의 정수이고,
파선("
Figure pct00094
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00095
또는
Figure pct00096
;
상기 식에서,
V는 선택적으로 존재하고, -O-, -S-, -NH-, -NR-, 또는 -CO-이고,
R은 수소, 할로겐(예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드), 니트릴, -COOH, 또는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C1-C4 알킬이고,
각각의 n은 독립적으로 0 내지 4의 정수이고,
파선("
Figure pct00097
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, X는 벤젠, 나프탈렌, 피롤, 인돌, 아이소인돌, 인돌리진, 푸란, 벤조푸란, 벤조티오펜, 티오펜, 피리딘, 아크리딘, 나프티리딘, 퀴놀론, 아이소퀴놀린, 아이소옥사졸, 옥사졸, 벤즈옥사졸, 아이소티아졸, 티아졸, 벤즈티아졸, 이미다졸, 티아다이아졸, 테트라졸, 트라이아졸, 옥사다이아졸, 벤즈이미다졸, 푸린, 피라졸, 피라진, 프테리딘, 퀴녹살린, 프탈라진, 퀴나졸린, 트라이아진, 페나진, 신놀린, 피리미딘, 피리다진, 사이클로헥산, 데카하이드로나프탈렌, 피롤리딘, 옥타하이드로인돌, 옥타하이드로아이소인돌, 테트라하이드로푸란, 옥타하이드로벤조푸란, 옥타하이드로벤조티오펜, 테트라하이드로티오펜, 피페리딘, 테트라데카하이드로아크리딘, 나프티리딘, 데카하이드로퀴놀린, 데카하이드로아이소퀴놀린, 아이소옥사졸리딘, 옥사졸리딘, 옥타하이드로벤조옥사졸, 아이소티아졸리딘, 티아졸리딘, 옥타하이드로벤조티아졸, 이미다졸리딘, 1,2,3-티아다이아졸리딘, 테트라졸리딘, 1,2,3-트라이아졸리딘, 1,2,3-옥사다이아졸리딘, 옥타하이드로벤조이미다졸, 옥타하이드로푸린, 피라졸리딘, 피페라진, 데카하이드로프테리딘, 데카하이드로퀴녹살린, 데카하이드로프탈라진, 데카하이드로퀴나졸린, 1,3,5-트라이아지난, 테트라데카하이드로페나진, 데카하이드로신놀린, 헥사하이드로피리미딘, 또는 헥사하이드로피리다진으로부터 선택되는 하나 이상의 2가 기이다. 일부 경우에, X의 하나 이상의 2가 기는 융합된다. 일부 경우에, X의 하나 이상의 2가 기는 결합 또는 -CO-를 통해 연결된다.
일부 경우에, X는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00098
,
Figure pct00099
,
Figure pct00100
,
Figure pct00101
,
Figure pct00102
,
Figure pct00103
,
Figure pct00104
,
Figure pct00105
,
Figure pct00106
,
Figure pct00107
,
Figure pct00108
,
Figure pct00109
,
Figure pct00110
,
Figure pct00111
,
Figure pct00112
,
Figure pct00113
,
Figure pct00114
,
Figure pct00115
,
Figure pct00116
, 또는
Figure pct00117
, 여기서 상기 언급된 임의의 구조는 양방향으로 사용될 수 있다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00118
상기 식에서,
V는 선택적으로 존재하고, -O- 또는 -NH-이고,
각각의 n은 독립적으로 0 내지 4의 정수이고,
파선("
Figure pct00119
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00120
상기 식에서,
V는 존재하지 않고,
각각의 n은 독립적으로 0 내지 4의 정수이고,
파선("
Figure pct00121
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00122
상기 식에서, 파선("
Figure pct00123
")은 모이어티의 부착점을 나타낸다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00124
,
Figure pct00125
,
Figure pct00126
,
Figure pct00127
,
Figure pct00128
,
Figure pct00129
,
Figure pct00130
,
Figure pct00131
,
Figure pct00132
,
Figure pct00133
,
Figure pct00134
,
Figure pct00135
,
Figure pct00136
,
Figure pct00137
, 또는
Figure pct00138
.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 TLR2 효능제, 예를 들어 N-α-팔미토일-S-[2,3-비스(팔미토일옥시)-(2RS)-프로필]-L-시스테인, 팔미토일-Cys((RS)-2,3-다이(팔미토일옥시)-프로필)("Pam3Cys")(예를 들어, 도 23b 및 도 23c 참조), 예를 들어 Pam3Cys, Pam3Cys-Ser-(Lys)4["Pam3Cys-SKKKK" 및 "Pam3CSK4"로도 알려짐]를 포함하는 작용제이다. 다른 TLR2 효능제는 OM-174, 리포테이코산(LTA), Pam2CSK4, 펩티도글리칸 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
일부 경우에, 제1 작용제는 (전술된 바와 같이 펩티드 길이 및 글리칸 밀도를 포함한 다양한 가능한 파라미터를 갖는) 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, Man2 당중합체, Man2 글리코폴리펩티드)이고, 제2 작용제는 TLR 효능제(예를 들어, TLR7/8 효능제, 예컨대 R848, T785, 또는 786, TLR7 효능제, 예컨대 784, TLR2 효능제, 예컨대 Pam3Cys)이다. 예를 들어, 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, 합성 덱틴-2 자극 당중합체)(예를 들어, Man2 글리코폴리펩티드)를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 TLR7/8 효능제에 접합되어 있다. 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, 합성 덱틴-2 자극 당중합체)(예를 들어, Man2 글리코폴리펩티드)를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 (예를 들어, T785, R848, 784, 786)에 접합되어 있다. 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, 합성 덱틴-2 자극 당중합체)(예를 들어, Man2 글리코폴리펩티드)를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 TLR2 효능제(예를 들어, Pam3Cys)에 접합되어 있다. 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, 합성 덱틴-2 자극 당중합체)(예를 들어, Man2 글리코폴리펩티드)를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 Pam3Cys(예컨대, Pam3Cys)를 포함하는 작용제에 접합되어 있다. 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, 합성 덱틴-2 자극 당중합체)(예를 들어, Man2 글리코폴리펩티드)를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 Pam3Cys에 접합되어 있다.
일부 경우에, 제1 작용제는 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체이고, 제2 작용제는 TLR 효능제(예를 들어, TLR7/8 효능제, 예컨대 T785, R848, 또는 786, TLR7 효능제, 예컨대 784, TLR8 효능제, 또는 TLR2 효능제, 예컨대 Pam3Cys)이다. 레시퀴모드로도 알려진 R848은 4-아미노-2-(에톡시메틸)-알파, R-848, R848, S28463, 알파-다이메틸-1H-이미다조(4,5-c)퀴놀린-1-에탄올(예를 들어, 도 23c 참조)이다. 예를 들어, 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 TLR7/8 효능제에 접합되어 있다. 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 T785에 접합되어 있다(도 24 참조). 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 784에 접합되어 있다. 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 786에 접합되어 있다. 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 TLR2 효능제(예를 들어, Pam3Cys)에 접합되어 있다. 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 Pam3Cys인 작용제에 접합되어 있다. 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 Pam3Cys에 접합되어 있다.
일부 경우에, 제1 작용제는 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, Man2 글리코폴리펩티드)이고, 제2 작용제는 항체(예를 들어, 임의의 특이성의 항체)이다. 예를 들어, 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 제1 작용제인 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, 합성 덱틴-2 자극 당중합체)(예를 들어, Man2 글리코폴리펩티드)를 포함하며, 제1 작용제는 제2 작용제인 항체(예를 들어, 이것은 암 항원에 특이적인 항체일 수 있지만, 임의의 특이성의 항체(즉, 그러한 항체는 임의의 항원에 특이적으로 결합할 수 있음)일 수 있음)에 접합되어 있다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 면역조절제(예를 들어, 사이토카인, 성장 인자, 패턴 인식 수용체(PRR)에 대한 자극성 리간드 등)이다. 예를 들어, 일부 경우에, 제2 작용제는 사이토카인이다. 사이토카인의 예에는 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFNγ, G-CSF, TNFα, 및 GM-CSF가 포함되며 이로 한정되지 않는다. 따라서, 일부 경우에, 제2 작용제는 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFNγ, G-CSF, TNFα, 및 GM-CSF로부터 선택된다. 일부 경우에, 제2 작용제는 GM-CSF이다. 일부 경우에, 제2 작용제는 사이토카인, 예컨대 인터페론 감마(IFNγ), IL-15, IFN-α, 또는 IFN-β이다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 성장 인자이다. 성장 인자의 예에는 콜로니 자극 인자(CSF), 액티빈(Activin), 결합 조직 성장 인자(CTGF), 표피 성장 인자(EGF), 에리트로포이에틴, 섬유아세포 성장 인자(FGF), 갈렉틴(Galectin), 성장 호르몬, 간암종-유래 성장 인자(HDGF), 간세포 성장 인자(HGF), 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질(IGFBP-1, -3, -4, -5, -6, -7 등), 인슐린, 인슐린-유사 성장 인자(예를 들어, IGF-1, -2, -3), 각질세포 성장 인자(KGF), 렙틴, 대식세포 이동 억제 인자(MIF), 흑색종 억제 활성(MIA), 미오스타틴(Myostatin), 노긴(Noggin), 오멘틴(Omentin), 온코스타틴(Oncostatin)-M, 오스테오폰틴(Osteopontin), 오스테오프로테게린(Osteoprotegerin), 혈소판-유래 성장 인자(PDGF), 페리오스틴(Periostin), 태반 성장 인자(PLGF), 태반 락토켄(Placental Lactogen), 프로락틴(Prolactin), 랭크 리간드(RANKL), 레티놀 결합 단백질(RBP), 줄기 세포 인자(SCF), 형질전환 성장 인자(TGFβ), 및 혈관 내피 성장 인자(VEGF)가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 일부 경우에, 제2 작용제는 덱틴-2 발현을 유도하는 인자이다. 일부 경우에, 제2 작용제는 GM-CSF이다.
일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 NLR(NOD1/2) 리간드(NOD1/2 효능제)이다. 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 인터페론 유전자(STING) 리간드/효능제(예를 들어, MK-1454)의 자극제이다.
(다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제로서 사용될 수 있는) 면역조절제의 예에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: 항-CTLA4 항체(또는 이의 항원-결합 영역); 항-PD-1/PD-L1 작용제(예를 들어, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 영역, PD-1-결합 시약, 예컨대 PD-L1 또는 PD-L2 엑토도메인, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 영역, PD-L1-결합 시약, 예컨대 PD-1 엑토도메인 등); CD40 효능제(예를 들어, CD40L 또는 항-CD40 항체); 4-1BB 조절제(예를 들어, 4-1BB-효능제); 항-CD47/SIRPA 작용제(예를 들어, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 영역, CD47-결합 시약, 예컨대 SIRPA 엑토도메인, 항-SIRPA 항체 또는 이의 항원 결합 영역, SIRPA-결합 시약, 예컨대 CD47 엑토도메인 등); TIM3 및/또는 CEACAM1의 억제제; TIM3 및/또는 CEACAM1의 억제제; BTLA 및/또는 CD160의 억제제 등. 따라서, 면역조절제는 관문 차단제일 수 있다.
하나의 예시적인 예로서, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제는 덱틴-2-결합 당중합체(또는 항-덱틴-2 항체, 또는 천연 덱틴-2 리간드, 예컨대 만난)이고, 제2 작용제는 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF)이다(즉, 다가 덱틴-2 자극제는 GM-CSF에 접합된 제1 작용제이다).
일부 경우에, 직접 덱틴-2 자극제(즉, 덱틴-2에 결합하여 골수성 세포에서 덱틴-2 신호전달을 자극하는 작용제, 예를 들어 항-덱틴-2 항체의 항원 결합 영역, 당중합체, 예컨대, 덱틴-2에 결합하는 글리코폴리펩티드, 천연 덱틴-2 리간드 등)가 표적화제에 접합되는데, 이러한 표적화제는 덱틴-2 자극제를 표적 세포(예를 들어, 암 세포)로 표적화하여, 덱틴-2 자극제가 표적 세포의 표면 상에 디스플레이되도록 한다. 따라서, 일부 경우에, 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제는 덱틴-2 자극제를 표적 세포(예를 들어, 암 세포)로 표적화하는 표적화제(예를 들어, 종양-항원 항체의 항원 결합 부분)를 포함한다. 그러한 작용제는 2개의 상이한 표적 분자(예를 들어, 암 세포의 표면 상의 암 항원과 같은 표적 분자와 골수성 세포의 표면 상의 덱틴-2)에 결합할 수 있기 때문에, 표적화제에 접합된 덱틴-2 자극제는 본 명세서에서 때때로 다가 덱틴-2 자극제로 지칭된다.
일부 경우에, (예를 들어, 덱틴-2 자극을 통해 암을 치료하기 위한) 본 발명의 덱틴-2 자극제는 다가 작용제(예를 들어, 다가 항체, 항체-당접합체 등)이며, 상기 다가 작용제는 (i) 골수성 세포의 표면 상의 덱틴-2에 결합하여, 예를 들어 특이적으로 결합하여 덱틴-2 신호전달을 자극하는 덱틴-2 자극제(즉, 직접 덱틴-2 자극제)인 제1 작용제; 및 (ii) 암 표적화제인 제2 작용제(예를 들어, (a) 암 세포 표적화제, 즉 암 항원에 특이적으로 결합하는 표적화제(예를 들어, 항-종양 항체, 종양-결합 펩티드, 종양-결합 압타머 등); 및/또는 (b) 암 면역요법 표적에 특이적으로 결합하는 작용제인 면역조절제)를 포함한다.
암 항원에 특이적으로 결합하는 (그리고 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제로서 사용될 수 있는) 표적화제의 예는 암 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 결합 영역이다. 적합한 암 항원은 암과 관련된 항원이다. (예를 들어, 표적화제가 특이적으로 결합할 수 있는) 암 항원의 예에는 CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD30, CD33, CD38, CD44, CD47, CD52, CD56, CD70, CD96, CD97, CD99, CD123, CD279(PD-1), CD274(PD-L1), EpCam, EGFR, 17-1A, HER2, CD117, C-Met, PTHR2, HAVCR2(TIM3), 및 SIRPA가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 암 항원에 특이적으로 결합하는 (그리고 다가 덱틴-2 자극제의 제2 작용제로서 사용될 수 있는) 표적화제의 추가의 예에는 종양-결합 펩티드 및 종양-결합 압타머가 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
일부 경우에, (예를 들어, 덱틴-2 자극을 통해 암을 치료하기 위한) 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 (i) 당중합체, 예컨대 글리코폴리펩티드(예를 들어, 천연 발생 또는 합성 글리코폴리펩티드, 예컨대 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 예를 들어 전술된 바와 같은 것) - 이것은 골수성 세포에서 덱틴-2 신호전달을 자극하는 역할을 함 -; 및 (ii) 표적화제, 예컨대 암 세포 표적화제(예를 들어, 암 항원에 대한 항체의 항원 결합 영역, 종양-결합 펩티드, 종양-결합 압타머)를 포함한다. 일부 경우에, (예를 들어, 덱틴-2 자극을 통해 암을 치료하기 위한) 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 (i) 당중합체, 예컨대 글리코폴리펩티드(예를 들어, 천연 발생 또는 합성 글리코폴리펩티드, 예컨대 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 예를 들어 전술된 바와 같은 것) - 이것은 골수성 세포에서 덱틴-2 신호전달을 자극하는 역할을 함 -; 및 (ii) 면역조절제(예를 들어, 관문 억제제에 대한 항체의 항암 결합 영역, CD40 효능제, 예컨대 CD40L 또는 항-CD40 항체, T-세포 조절된 공동자극성 분자, 관문 차단제, 암 표적에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드, 예를 들어 암 항원에 결합하는 엑토도메인, 암 면역요법 표적에 특이적으로 결합하는 엑토도메인, 예컨대 PD-1, PD-1L, CD47, SIRPA, CTLA4 등).
항암 표적화 요소(예를 들어, 종양-표적화 요소)를 갖는 당접합체(예를 들어, 올리고만노스 글리코폴리펩티드)는 정상 조직을 손상시키지 않고, 종양 세포 상에의 덱틴-2 리간드(예를 들어, 항-덱틴-2 항체로부터의 덱틴-2 결합 영역, 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸 등)의 선택적 디스플레이로 이어질 수 있다. 이들 조작된 생성물의 융통성은 또한 기능적 최적화를 위한 기회 및 생성물을 특정 암에 맞출 기회를 제시한다. 예를 들어, 일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 합성 또는 천연 덱틴-2 리간드에 접합된, 항-종양 항체로부터의 항원 인식 영역을 포함한다. 일부 경우에, 항-덱틴-2 항체가 (예를 들어, 항-덱틴-2 항체를 고체 지지체 상에 고정화함으로써) M. 푸르푸르와 같은, 고밀도의 덱틴-2 리간드를 갖는 미생물과 유사한 덱틴-2 항체 또는 리간드(예를 들어, 만노비오스-풍부 글리코펩티드 및/또는 다른 올리고만노스 글리칸, 예컨대 Man-9)의 다가 복합체로서 사용된다. 합성 글리코펩티드를 항체에 접합시키는 데 사용될 수 있는 (성공적으로 사용되었던) 한 가지 가능한 접합 전략의 예에 대해서는, 도 7c를 참조한다(예를 들어, 항체 상의 라이신 잔기가 NHS-사이클로옥틴 화합물로 처리된 후, 아지드 말단 글리코펩티드와의 생물직교 공유 반응이 행해질 수 있다).
이중특이성 다가 항체는 덱틴-2 및 종양-관련 세포 표면 분자(예를 들어, CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD30, CD33, CD38, CD44, CD47, CD52, CD56, CD70, CD96, CD97, CD99, CD123, CD279(PD-1), CD274(PD-L1), EpCam, EGFR, 17-1A, HER2, CD117, C-Met, PTHR2, HAVCR2(TIM3) 등) 둘 모두에 대한 항원 인식 도메인(Fab, scFv, scDb 등)을 포함할 수 있다. 이들 조작된 항체는 임상 개발 중인 2가 이중특이성 T 세포 결합체(bispecific T cell engager, BiTE) 또는 4가 이중특이성 항체(TandAb)와 같은, 면역 세포 및 종양 세포 둘 모두를 표적화하는 이중특이성 항체의 다른 반복부와 유사할 수 있다. 당접합체는 덱틴-2에 의해 인식되는 글리칸(예를 들어, 올리고만노스 글리코펩티드, 만난 다당류, 및/또는 다른 올리고만노스 글리칸, 예컨대 Man-9)(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극 글리코폴리펩티드)과 결합된 종양-표적화 성분(예를 들어, 암 항원에 대한 항체, 예컨대 EpCAM 항체, 종양-결합 펩티드, 종양-결합 압타머 등)을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 종양-표적화 성분은 덱틴-2 리간드의 다수의 카피를 디스플레이하도록 직접 변형될 수 있거나, 또는 글리칸 결합가(glycan valency)를 증가시키고 탄수화물 변형으로부터 기인되는 종양 항원-결합의 어떠한 파괴도 피하기 위해 글리칸-변형된 단백질(예를 들어, 스트렙타비딘)에 대한 링커(예를 들어, 비오틴)가 사용될 수 있다. 탄수화물을 사용하여 단백질을 변형시키기 위한 임의의 편리한 방법이 사용될 수 있으며, 이에는, 예를 들어 복합 탄수화물, 예컨대 올리고만노스 글리칸의 접합에 대한 프로토콜이 있다(예를 들어, 문헌[Gildersleeve et al, Bioconjug Chem. 2008 Jul;19(7):1485-90] 참조). 따라서, 그러한 분자로 덮인 종양 세포는 덱틴-2 리간드-발현 미생물과 유사하고, 키푸넨신-처리 종양 세포와 유사하게, TAM 세포와 종양 세포 사이의 접촉 지점에서 덱틴-2 신호전달을 활성화시킬 것이다.
덱틴-2-활성화 도메인 및 종양-표적화 도메인 둘 모두는 특이성, 안정성, 친화도, 및 결합가에 대해 변형될 수 있거나, 또는 다른 분자(예를 들어, 다른 PRR 리간드, 사이토카인, 독소 등)와 결합될 수 있다. 예를 들어, 항체-기반 당접합체는 덱틴-2 신호전달을 더 효율적으로 촉발시키기 위해 매우 높은 밀도의 올리고만노스 글리칸(예를 들어, Man-9)을 디스플레이하도록 변형될 수 있다. 한편, 항체 성분의 가변 영역은 특정 종양 항원을 인식하도록 변화될 수 있고, 불변 영역은 TAM 세포 상의 활성화 Fc 수용체와 더 효과적으로 결합하도록 (예를 들어, 항체 클래스 전환 또는 어푸코실화(afucosylation)에 의해) 변형될 수 있다. 이러한 방식으로 덱틴-2 신호전달 및 Fc 수용체 신호전달 둘 모두를 동시에 활성화시킴으로써, 더 효율적인 종양 세포 사멸, 흡수, 및 항원 제시, 그리고 후속으로 더 강력한 적응 면역 반응으로 이어질 수 있다.
다가 항체를 생성하기 위한 다양한 방법이 기재되어 있으며, 이것은 덱틴-2-특이적 항체 복합체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 이와 유사하게, 탄수화물-기반 화합물의 생성이 기재되어 있으며(예를 들어, 당중합체, 글리코덴드리머, 글리코클러스터, 글리코나노입자), 이에는 덱틴-2에 의해 인식되는 글리칸을 도입시킨 몇몇이 포함된다. 이들 항체-기반 복합체 및 탄수화물-기반 복합체 둘 모두는 M. 푸르푸르로부터의 세포벽 추출물과 유사하게, 덱틴-2-의존적 방식으로(즉, 덱틴-2 자극제로서) TAM을 직접 자극하는 데 사용될 수 있다.
링커
일부 경우에, 본 발명의 다가 덱틴-2 자극제는 적어도 하나의 링커를 포함한다. 항체 및/또는 면역조절제가 단백질 변형을 위한 다양한 화학을 사용하여 다가 덱틴-2 자극제(예를 들어, 덱틴-2에 결합하여 덱틴-2 신호전달을 자극하는 작용제)에 연결될 수 있으며, 본 명세서에 기재된 링커는 다가 덱틴-2 자극제와 반응성 링커 기를 갖는 시약의 반응으로부터 생성된다. 매우 다양한 그러한 시약이 당업계에 공지되어 있다. 그러한 시약의 예에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: N-하이드록시석신이미딜(NHS) 에스테르 및 N-하이드록시설포석신이미딜(설포-NHS) 에스테르(아민 반응성); 카르보다이이미드(아민 및 카르복실 반응성); 하이드록시메틸 포스핀(아민 반응성); 말레이미드(티올 반응성); 할로겐화 아세트아미드, 예컨대 N-요오도아세트아미드(티올 반응성); 아릴 아지드(1차 아민 반응성); 플루오르화 아릴 아지드(탄소-수소(C-H) 삽입을 통해 반응성임); 펜타플루오로페닐(PFP) 에스테르(아민 반응성); 테트라플루오로페닐(TFP) 에스테르(아민 반응성); 이미도에스테르(아민 반응성); 아이소시아네이트(하이드록실 반응성); 비닐 설폰(티올, 아민, 및 하이드록실 반응성); 피리딜 다이설파이드(티올 반응성); 및 벤조페논 유도체(C-H 결합 삽입을 통해 반응성임). 추가의 시약은 문헌[Hermanson, Bioconjugate Techniques, 2nd Edition, Academic Press, 2008]에 기재된 것들을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
전형적으로, 본 명세서에 기재된 링커는 항체 및/또는 면역조절제를 다가 덱틴-2 자극제에 연결하는 데 사용되는 임의의 화학적 모이어티의 잔류부를 통해 다가 덱틴-2 자극제에 결합된다. 예를 들어, 일부 경우에, 항체 및/또는 면역조절제는 시스테인 잔기에서 링커를 통해 다가 덱틴-2 자극제에 부착된다. 따라서, 항체 및/또는 면역조절제는 링커를 통해 다가 덱틴-2 자극제에 연결되며, 링커는 말레이미드 또는 석신이미드 하위단위를 통해 다가 덱틴-2 자극제에 부착된다. 다른 예에서, 일부 경우에, 항체 및/또는 면역조절제는 라이신 잔기의 아민에서 링커를 통해 다가 덱틴-2 자극제에 부착된다. 따라서, 항체 및/또는 면역조절제는 링커를 통해 다가 덱틴-2 자극제에 연결되며, 링커는 카르보닐 하위단위를 통해 다가 덱틴-2 자극제에 부착된다. 다른 예에서, 항체 및/또는 면역조절제는 변형된 아미노산 잔기의 아민에서 링커를 통해 다가 덱틴-2 자극제에 부착된다. 따라서, 항체 및/또는 면역조절제는 링커를 통해 다가 덱틴-2 자극제에 연결되며, 링커는 변형된 아미노산 하위단위 및 카르보닐 하위단위를 통해 다가 덱틴-2 자극제에 부착된다.
링커는, 링커가 다가 덱틴-2 자극제 및 항체 및/또는 면역조절제에 공유적으로 결합될 때, 다가 덱틴-2 자극제 및 항체 및/또는 면역조절제의 기능이 유지되도록 하는 임의의 적합한 길이를 가질 수 있다. 링커는 약 3 Å 이상, 예를 들어 약 4 Å 이상, 약 5 Å 이상, 약 6 Å 이상, 약 7 Å 이상, 약 8 Å 이상, 약 9 Å 이상, 약 10 Å 이상, 또는 약 20 Å 이상의 길이를 가질 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 링커는 약 100 Å 이하, 예를 들어 약 90 Å 이하, 약 80 Å 이하, 약 70 Å 이하, 약 60 Å 이하, 약 50 Å 이하, 약 45 Å 이하, 약 40 Å 이하, 약 35 Å 이하, 약 30 Å 이하, 약 25 Å 이하, 약 20 Å 이하, 또는 약 15 Å 이하의 길이를 가질 수 있다. 따라서, 링커는 앞서 언급된 종점들 중 임의의 2개에 의해 한정된 길이를 가질 수 있다. 링커는 약 3 Å 내지 약 100 Å, 예를 들어 약 3 Å 내지 약 90 Å, 약 3 Å 내지 약 80 Å, 약 3 Å 내지 약 70 Å, 약 3 Å 내지 약 60 Å, 약 3 Å 내지 약 50 Å, 약 3 Å 내지 약 45 Å, 약 3 Å 내지 약 40 Å, 약 3 Å 내지 약 35 Å, 약 3 Å 내지 약 30 Å, 약 3 Å 내지 약 25 Å, 약 3 Å 내지 약 20 Å, 약 3 Å 내지 약 15 Å, 약 5 Å 내지 약 50 Å, 약 5 Å 내지 약 25 Å, 약 5 Å 내지 약 20 Å, 약 10 Å 내지 약 50 Å, 약 10 Å 내지 약 20 Å, 약 5 Å 내지 약 30 Å, 약 5 Å 내지 약 15 Å, 약 20 Å 내지 약 100 Å, 약 20 Å 내지 약 90 Å, 약 20 Å 내지 약 80 Å, 약 20 Å 내지 약 70 Å, 약 20 Å 내지 약 60 Å, 또는 약 20 Å 내지 약 50 Å의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, 링커는 약 20 Å 내지 약 100 Å의 길이를 갖는다.
일부 경우에, 링커는 생리학적 조건 하에서 절단되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 어구 "생리학적 조건"은 20 내지 40℃의 온도 범위, 대기압(즉, 1 기압), pH 약 6 내지 약 8, 및 하나 이상의 생리학적 효소, 프로테아제, 산, 및 염기의 존재를 지칭한다.
일부 경우에, 링커들 중 적어도 하나는 생리학적 조건 하에서 절단된다. 예를 들어, 링커는 효소적 과정 또는 대사 과정에 의해 절단될 수 있다.
링커는, 링커의 원하는 길이가 달성될 수 있도록 하는 임의의 적합한 유기 2가 연결 모이어티일 수 있다.
예를 들어, 링커는 화학식 S1을 갖거나 포함할 수 있다:
Figure pct00139
,
상기 식에서, R2는 선택적으로 존재하고, 1 내지 12개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이고; G1은 CH2, C=O, 또는 결합이고, G2는 CH2, C=O, 또는 결합이고, a는 1 내지 40의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 20의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 10의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 5의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 3의 정수이다. 일부 경우에, R2는 존재하고, 1 내지 8개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이다.
링커는 화학식 S2를 갖거나 포함할 수 있다:
Figure pct00140
,
상기 식에서, a는 1 내지 40의 정수이고, G1은 CH2, C=O, 또는 결합이고, G2는 CH2, C=O, 또는 결합이다. 일부 경우에, a는 1 내지 20의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 10의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 5의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 3의 정수이다.
링커는 화학식 S3을 갖거나 포함할 수 있다:
Figure pct00141
,
상기 식에서, R2는 선택적으로 존재하고, 1 내지 12개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이고; G1은 CH2, C=O, 또는 결합이고, G2는 CH2, C=O, 또는 결합이고, 각각의 A는 독립적으로 임의의 아미노산으로부터 선택되고, c는 1 내지 20의 정수이다. 일부 경우에, c는 1 내지 10의 정수이다. 일부 경우에, c는 1 내지 5의 정수이다. 일부 경우에, c는 1 또는 2의 정수이다. 일부 경우에, R2는 존재하고, 1 내지 8개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이다.
링커는 화학식 S4를 갖거나 포함할 수 있다:
Figure pct00142
,
상기 식에서, R2는 선택적으로 존재하고, 1 내지 12개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이고; G1은 CH2, C=O, 또는 결합이고, G2는 CH2, C=O, 또는 결합이고, c는 1 내지 20의 정수이다. 일부 경우에, c는 1 내지 10의 정수이다. 일부 경우에, c는 1 내지 5의 정수이다. 일부 경우에, R2는 존재하고, 1 내지 8개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이다.
링커는 화학식 S5를 갖거나 포함할 수 있다:
Figure pct00143
,
상기 식에서, 각각의 R2는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 1 내지 12개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이고; G1은 CH2, C=O, 또는 결합이고, G2는 CH2, C=O, 또는 결합이고, M은 선택적으로 존재하고, CH2, NH, O, 또는 S이고, 각각의 A는 독립적으로 임의의 아미노산으로부터 선택되고, c는 1 내지 20의 정수이다. 일부 경우에, c는 1 내지 10의 정수이다. 일부 경우에, c는 1 내지 5의 정수이다. 일부 경우에, c는 1 또는 2의 정수이다. 일부 경우에, 각각의 R2는 존재하고, 독립적으로 1 내지 8개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이다.
링커는 화학식 S6을 갖거나 포함할 수 있다:
Figure pct00144
,
상기 식에서, R2는 선택적으로 존재하고, 1 내지 12개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이고; G1은 CH2, C=O, 또는 결합이고, G2는 CH2, C=O, 또는 결합이다. 일부 경우에, R2는 존재하고, 1 내지 8개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이다.
링커는 화학식 S7을 갖거나 포함할 수 있다:
Figure pct00145
,
상기 식에서, 각각의 R2는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 1 내지 12개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이고; G1은 CH2, C=O, 또는 결합이고, G2는 CH2, C=O, 또는 결합이다. 일부 경우에, 각각의 R2는 선택적으로 존재하고, 독립적으로 1 내지 8개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이다.
링커는 화학식 S8을 갖거나 포함할 수 있다:
Figure pct00146
,
상기 식에서, R2는 선택적으로 존재하고, 1 내지 12개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이고; G1은 CH2, C=O, 또는 결합이고, G2는 CH2, C=O, 또는 결합이고, M은 선택적으로 존재하고, CH2, NH, O, 또는 S이고, a는 1 내지 40의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 20의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 10의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 5의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 3의 정수이다. 일부 경우에, R2는 존재하고, 1 내지 8개(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개)의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이다.
링커는 화학식 S9를 갖거나 포함할 수 있다:
Figure pct00147
,
상기 식에서, 각각의 a는 독립적으로 1 내지 40의 정수이고, J는 -NH-, -NR1-, -CO-, -S(O2)-, -S(O2)NH-, -S(O2)NR1-, -C(O)NR1-, 또는 -C(O)NH-이고, R1은 C1-C6 알킬 또는 헤테로알킬 기 또는 C1-C10 아릴 또는 헤테로아릴 기이고, G1은 CH2, C=O, 또는 결합이고, G2는 CH2, C=O, 또는 결합이다. 일부 경우에, a는 1 내지 20의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 10의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 5의 정수이다. 일부 경우에, a는 1 내지 3의 정수이다.
링커 S1 내지 S9는 양방향으로 사용될 수 있는데, 이는 링커가 물결선("
Figure pct00148
")으로 표시된 어느 말단에서도 항체 및/또는 면역조절제 또는 다가 덱틴-2 자극제에 결합될 수 있음을 의미한다.
일부 경우에, 링커는 펩티드 하위단위 및/또는 폴리에틸렌 글리콜 하위단위를 포함한다.
링커가 폴리에틸렌 글리콜 하위단위를 포함하는 경우, 폴리에틸렌 글리콜 하위단위는 전형적으로 약 2 내지 약 25개의 폴리에틸렌 글리콜 단위를 포함한다. 일부 경우에, 링커는 적어도 2개의 폴리에틸렌 글리콜 단위(예를 들어, 적어도 3개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 4개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 5개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 6개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 7개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 8개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 9개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 10개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 11개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 12개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 13개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 14개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 15개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 16개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 17개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 18개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 19개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 20개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 21개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 22개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 23개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 적어도 24개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 또는 적어도 25개의 폴리에틸렌 글리콜 단위를 포함한다. 따라서, 링커는 다이(에틸렌 글리콜) 기, 트라이(에틸렌 글리콜) 기, 또는 테트라(에틸렌 글리콜) 기, 5개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 6개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 8개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 10개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 12개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 24개의 폴리에틸렌 글리콜 단위, 또는 25개의 폴리에틸렌 글리콜 단위를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 링커는 약 2 내지 약 16개의 폴리에틸렌 글리콜 단위 또는 약 2 내지 약 10개의 폴리에틸렌 글리콜 단위를 포함한다.
링커가 펩티드 하위단위를 포함하는 경우, 펩티드 하위단위는 전형적으로 약 2 내지 약 50개의 아미노산을 포함한다. 일부 경우에, 링커는 적어도 2개의 아미노산 잔기, 예를 들어 적어도 3개의 아미노산 잔기, 적어도 4개의 아미노산 잔기, 적어도 5개의 아미노산 잔기, 적어도 6개의 아미노산 잔기, 적어도 7개의 아미노산 잔기, 적어도 8개의 아미노산 잔기, 적어도 9개의 아미노산 잔기, 적어도 10개의 아미노산 잔기, 적어도 11개의 아미노산 잔기, 적어도 12개의 아미노산 잔기, 적어도 13개의 아미노산 잔기, 적어도 14개의 아미노산 잔기, 적어도 15개의 아미노산 잔기, 적어도 16개의 아미노산 잔기, 적어도 17개의 아미노산 잔기, 적어도 18개의 아미노산 잔기, 적어도 19개의 아미노산 잔기, 적어도 20개의 아미노산 잔기, 적어도 21개의 아미노산 잔기, 적어도 22개의 아미노산 잔기, 적어도 23개의 아미노산 잔기, 적어도 24개의 아미노산 잔기, 또는 적어도 25개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 경우에, 링커는 2개의 아미노산 잔기, 3개의 아미노산 잔기, 4개의 아미노산 잔기, 5개의 아미노산 잔기, 6개의 아미노산 잔기, 8개의 아미노산 잔기, 10개의 아미노산 잔기, 12개의 아미노산 잔기, 24개의 아미노산 잔기, 또는 25개의 아미노산 잔기를 포함한다.
펩티드 하위단위는 변형 또는 비변형된, 천연 또는 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 전형적으로, 아미노산은 천연 또는 비천연, 비변형된 아미노산이다. 예를 들어, 아미노산은 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트립토판, 프롤린, 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르테이트, 글루타메이트, 라이신, 아르기닌, 또는 히스티딘일 수 있다. 일부 경우에, 펩티드 하위단위의 적어도 하나의 아미노산은 링커 및/또는 애쥬번트로 변형될 수 있어야 한다. 예를 들어, 아미노산은 라이신, 세린, 시스테인, 트레오닌, 티로신, 아스파라긴 또는 글루타민일 수 있다. 일부 경우에, 적어도 하나의 아미노산은 라이신이다. 라이신이 특히 유리한데, 그 이유는, 링커 및/또는 작용제가 아미노산 골격 상의 질소 및/또는 아미노산 측쇄 상의 질소에 결합될 수 있기 때문이다.
일부 경우에, 링커는 폴리에틸렌 글리콜 하위단위 및 펩티드 하위단위를 포함한다.
링커는 2가 사이클로헥실렌 기를 추가로 포함할 수 있다.
일부 경우에, 링커는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00149
Figure pct00150
및
Figure pct00151
상기 식에서, R2는 선택적으로 존재하고, 1 내지 8개의 탄소 단위를 포함하는 선형 또는 분지형, 환형 또는 직선형, 포화 또는 불포화 알킬, 헤테로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 사슬이고; a는 1 내지 40의 정수이고; 각각의 A는 독립적으로 임의의 아미노산으로부터 선택되고; 하첨자 c는 1 내지 25의 정수이고; G1은 CH2, C=O, 또는 결합이고, G2는 CH2, C=O, 또는 결합이고, 물결선("
Figure pct00152
")은 부착점을 나타낸다. 일부 경우에, a는 2 내지 25의 정수이다. 일부 경우에, c는 2 내지 8의 정수이다.
일부 경우에, 링커는 하기 화학식의 구조를 갖거나 포함할 수 있다:
Figure pct00153
,
Figure pct00154
,
Figure pct00155
,
Figure pct00156
,
Figure pct00157
,
Figure pct00158
,
Figure pct00159
,
Figure pct00160
,
Figure pct00161
, 또는
Figure pct00162
,
상기 식에서, a는 1 내지 40의 정수이다. 일부 경우에, a는 2 내지 25의 정수이다. 일부 경우에, a는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 24, 또는 25이다.
예시적인 링커가 본 명세서의 개시내용으로부터 명백할 것이다.
공동투여 및 혼합물
상기 제1 작용제 및 제2 작용제에 관하여, 이들 작용제는 또한 혼합물/병용물로서 투여될 수 있는데, 여기서는 제1 작용제와 제2 작용제가 서로 접합되어 있지 않다. 따라서, 전술된 제1 작용제와 제2 작용제는 반드시 다가 작용제로서 접합될 필요는 없다. 이와 같이, 다가 덱틴-2 자극제의 제1 작용제 및 제2 작용제와 관련하여 상기 모든 작용제는 또한 (예를 들어, 비접합된 별개의 작용제로) 공동투여될 수 있으며, 이들은 동시에 투여될 수 있고, 혼합물로서 투여될 수 있고, 순차적으로(하나가 다른 하나보다 먼저) 투여될 수 있고, 등등일 수 있다.
(d) 알파-만노시다제 클래스 1(α-만노시다제 I) 억제제
일부 실시 형태에서, 암을 가진 개체를 치료하는 방법은 알파-만노시다제 클래스 1 억제제(예를 들어, 키푸넨신; 1-데옥시만노지리마이신; MAN1B1, MAN1A1, MAN1A2, 및 MAN1C1로부터 선택되는 하나 이상의 만노시다제의 발현을 특이적으로 감소시키는 RNAi 작용제; MAN1B1, MAN1A1, MAN1A2, 및 MAN1C1로부터 선택되는 하나 이상의 만노시다제의 발현을 특이적으로 감소시키는 유전자 편집제)를 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 덱틴-2는 다수의 말단 만노스 잔기를 함유하는 다양한 병원체 성분을 인식하고, 고-만노스 유형 글리칸과 강하게 반응한다. 고-만노스 글리칸은 진핵 세포에서 단백질의 N-연결된 글리코실화 동안 생성되는 일반적인 중간 글리칸 종이다. 포유류 세포에서, 이들 고-만노스 글리칸은 복합체 또는 혼성체 유형 N-글리칸으로 추가로 프로세싱된다 - 이 과정은 초기 고-만노스 전구체, Man9GlcNAc2(Man-9)로부터 말단 만노스 잔기를 절단하는 다양한 만노시다제의 작용을 필요로 한다. 결과적으로, 만노시다제 억제제(예를 들어, 알파-만노시다제 클래스 I 억제제인 키푸넨신 및/또는 1-데옥시만노지리마이신)에 의한 세포의 처리는 N-연결된 글리코실화 패턴의 이동으로 이어지고, 그 결과 고-만노스 종(예를 들어, Man-9)으로 주로 변형된 당단백질의 생성을 가져오고, 이에 따라 세포는 그들의 표면 상에 증가된 수준의 덱틴-2 리간드를 디스플레이한다.
소분자 알파-만노시다제 클래스 I 억제제(알파-만노시다제 I 억제제로도 지칭됨)(즉, 키푸넨신, 1-데옥시만노지리마이신 등)는 포유류 세포의 소포체(ER) 및 골지체에서 다수의 만노시다제에 작용한다. 일부 경우에, 본 발명의 알파-만노시다제 클래스 I 억제제는 N-글리코실화 경로에서 가장 고차의 고-만노스 종인 Man-9에 작용하는 최초의 만노시다제인 ER α-만노시다제 I(MAN1B1)의 선택적 억제제이다. 그러나, 덱틴-2는 또한 더 낮은 차수의 고-만노스 글리칸(예를 들어, Man-7/-8)에도 결합한다. 따라서, 일부 경우에, 본 발명의 알파-만노시다제 클래스 I 억제제는 하나 이상의 하류 골지 만노시다제(MAN1A1, MAN1A2, MAN1C1)의 선택적 억제제이다.
일부 경우에, 억제제는 소분자(예를 들어, α-만노시다제 클래스 I 억제제, 예컨대 키푸넨신 및/또는 1-데옥시만노지리마이신)이다. 일부 경우에, 억제제(본 명세서에서 알파-만노시다제 클래스 1 감소제로도 지칭됨)는 만노시다제를 표적화하는(예를 들어, MAN1B1, MAN1A1, MAN1A2, MAN1C1로부터 선택되는 하나 이상의 만노시다제의 발현을 감소시키는) RNAi 작용제 또는 유전자 편집제이다. 알파-만노시다제 클래스 1 감소제, 예컨대 RNAi 작용제 또는 유전자 편집제에 의해 표적화될 수 있는 유전자는 MAN1B1, MAN1A1, MAN1A2, 및 MAN1C1을 포함한다.
RNAi 작용제는 MAN1B1, MAN1A1, MAN1A2, MAN1C1로부터 선택되는 하나 이상의 단백질을 인코딩하는 RNA를 특이적으로 표적화하는 shRNA, siRNA, 및 마이크로RNA 작용제를 포함한다. 일부 경우에, RNAi 작용제는 MAN1B1을 인코딩하는 RNA를 특이적으로 표적화한다.
유전자 편집제는 유전자의 발현을 변형시키도록 세포의 게놈을 표적화할 수 있는 작용제를 포함한다. 일부 경우에, 유전자 편집제는 CRISPR/Cas 작용제(예를 들어, Cas 단백질(들) + 하나 이상의 적절한 가이드 RNA, 예를 들어 Cas9 + 가이드 RNA, cpf1 + 가이드 RNA)이다. 일부 경우에, 유전자 편집제는 징크 핑거 뉴클레아제 작용제이다. 일부 경우에, 유전자 편집제는 TALE 또는 TALEN 작용제이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "유전자 편집제"는, 표적화된 DNA를 절단하여 (예를 들어, 상동성 유도 수복(homologous directed repair) 또는 비상동성 말단-결합(non-homologous end-joining)을 통해) 돌연변이를 유도하는 유전자 편집제를 포함하고, 또한 표적 절단의 부재 하에서 발현을 감소시킬 수 있는 유전자 편집제(예를 들어, 발현을 둔화/감소시킬 수 있는 전사 억제인자 또는 후성유전학적 변경인자와 같은 발현 조절인자에 융합되거나 접합되는 유전자 편집제)를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "알파-만노시다제 클래스 1 억제제"는 또한 만노시다제 억제제의 전구약물 형태, 예컨대, 선택적 종양 표적화에 사용될 수 있는, 종양-특이적 효소-활성화 케이징 기(tumor-specific enzyme-activated caging group)를 갖는 것들을 포함한다. 게다가, 알파-만노시다제 클래스 1 억제제는 종양 전달을 위하여 항체-약물 접합체 내로 도입될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 암을 가진 개체를 치료하는 방법은 개체로부터의 암 세포를 시험관내 또는 생체외에서 알파-만노시다제 클래스 1 억제제와 접촉시키는 단계, 및 접촉된 암 세포를 개체 내로 도입하는 단계를 포함한다. 이론에 의해 구애됨이 없이, 이는, 알파-만노시다제 클래스 1 억제제가 표적 세포(예를 들어, 암 세포)의 표면 상에 (예를 들어, 세포 표면 상의 말단 만노스/만노비오스 잔기의 디스플레이 및/또는 밀도를 증가시킴으로써) 덱틴-2 자극성 화합물의 수준을 증가시켜, 표적 세포가 면역 반응을 자극할 가능성을 더 높게 할 수 있고/있거나, 표적 세포가 달리 자극될 것보다 더 강한 면역 반응을 자극하게 할 수 있기 때문에 수행된다. 일부 경우에, 접촉된 암 세포는 개체에게 전신적으로 투여된다. 일부 경우에, 접촉된 암 세포는 국부적으로(예를 들어, 개체의 종양 내로, s.c., i.d., i.m. 등) 투여된다.
일부 실시 형태에서, 암을 가진 개체를 치료하는 방법은 개체로부터의 암 세포를 (예를 들어, 알파-만노시다제 클래스 1 억제제를 개체에게 투여함으로써) 생체내에서 알파-만노시다제 클래스 1 억제제와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 알파-만노시다제 클래스 1 억제제는 전신적으로 전달된다. 일부 경우에, 알파-만노시다제 클래스 1 억제제는 국부적으로(예를 들어, 개체의 종양 내로, 종양이 최근에 절제된 영역 내로 등) 전달된다.
골수성 세포, APC, 및/또는 T 세포의 자극
일부 실시 형태에서(예를 들어, 본 방법이 본 발명의 덱틴-2 자극제를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 경우), 내인성 골수성 세포(개체에 존재하는 골수성 세포)(예를 들어, 종양-관련 골수성(TAM) 세포, 수지상 세포(DC), 종양-관련 DC, 항원 제시 세포(APC), 종양-관련 APC 등)가 투여된 조성물과 생체내에서 접촉된다. 따라서, 본 방법은 암을 가진 개체를 치료하는 생체내 방법으로 간주될 수 있다. 예를 들어, 덱틴-2 자극 조성물이 (예를 들어, 전신적으로 또는 국부적으로, 예를 들어 종양 내로 또는 그 부근에, 종양 절제 부위 내로 또는 그 부근에 주사되는 등) 개체에게 투여될 수 있고, 그럼으로써 내인성 골수성 세포가 덱틴-2 자극 조성물과 접촉된다. 이어서, 자극된 골수성 세포는 암 세포에 대한 향상된 면역 반응을 장착할 수 있으며, 예를 들어 자극된 APC가 로딩될 수 있고(예를 들어, APC에 의한 표적 항원의 흡수; 이는, 예를 들어 T 세포에 대한 제시를 위함), 이어서 생체내에서 내인성 T 세포와 접촉할 수 있다.
본 발명의 태양은 항원 제시 세포(APC)(예를 들어, 수지상 세포(DC), 대식세포, B 세포)를 자극하기 위한 조성물 및 방법을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 그러한 방법은 (a) 암 세포를 알파-만노시다제 클래스 1 억제제와 시험관내 또는 생체외에서 접촉시켜 억제제-접촉된 암 세포(예를 들어, 세포 표면 상의 말단 만노스/만노비오스 잔기의 디스플레이 및/또는 밀도를 증가시키고, 이에 따라 덱틴-2 리간드의 표면 수준을 증가시킨 것)를 생성하는 단계; 및 (b) APC를 억제제-접촉된 암 세포와 접촉시키는 단계(예를 들어, 이는 APC 세포를 자극하여 암 항원을 '로딩'할 수 있으며, 예를 들어 이는 APC를 자극하여 암 세포를 완전히 에워쌀 수 있음)를 포함한다. 일부 경우에, 본 방법은 접촉된 APC를 개체 내로 도입하는 단계를 추가로 포함한다(예를 들어, 이어서 개체는 암 세포와 접촉하고 T 세포와 접촉하여 암 세포에 대한 면역 반응을 자극/향상시킬 수 있다). 일부 경우에, 본 방법은 APC를 억제제-접촉된 암 세포와 (예를 들어, APC를 '로딩하기' 위해) 접촉시킨 후에, T 세포를 접촉된(예를 들어, '로딩된') APC와 접촉시켜, T 세포를 자극하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 경우에, 본 방법은 자극된 T 세포를 개체 내로 도입하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 또는 모든 세포(예를 들어, 암 세포, APC, T 세포)는 치료되는 개체에 대해 자가(autologous)일 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, T 세포(예를 들어, 단지 T 세포만)는 치료되는 개체에 대해 자가이다. 일부 경우에, APC(예를 들어, 단지 APC만)는 치료되는 개체에 대해 자가이다. 일부 경우에, 암 세포(예를 들어, 단지 암 세포만)는 치료되는 개체에 대해 자가이다. 일부 경우에, 암 세포 및 APC는 치료되는 개체에 대해 자가이다. 일부 경우에, 암 세포 및 T 세포는 치료되는 개체에 대해 자가이다. 일부 경우에, APC 및 T 세포는 치료되는 개체에 대해 자가이다. 일부 경우에, 암 세포, APC, 및 T 세포는 치료되는 개체에 대해 자가이다. 일부 경우에, (예를 들어, 개체의) T 세포를 접촉시키는 단계는 생체내에서 행해진다. 일부 경우에, (예를 들어, 개체의) T 세포를 접촉시키는 단계는 시험관내에서 행해진다.
일부 실시 형태에서, T 세포는 로딩된 APC, 예를 들어 DC와 접촉된다. 접촉 동안, 로딩된 APC, 예를 들어 DC는 T 세포에 항원을 제시하여, 접촉된 T 세포를 생성하고, 접촉된 T 세포는 제시된 항원에 특이적인 면역 반응을 생성한다. T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 조합일 수 있다.
T 세포를 로딩된 APC, 예를 들어 DC와 접촉시키는 단계는 시험관내 또는 생체내에서 행해질 수 있다. 따라서, 어구 "T 세포와 접촉시키는"은 시험관내 접촉 및 생체내 접촉 둘 모두를 포함한다. 접촉이 생체내에서 행해지는 경우에는, 로딩된 APC, 예를 들어 DC를 개체에게 투여하고, 이어서 APC, 예를 들어 DC가 개체의 내인성 T 세포와 접촉하여 면역 반응을 유도할 수 있다. 따라서, 생체내에서 수행될 때, "개체의 T 세포를 로딩된 APC"와 접촉시키는 단계", 예를 들어 "개체의 T 세포를 로딩된 DC와 접촉시키는 단계"는 일부 경우에 "로딩된 DC를 개체 내로 도입하는 단계"로 기재될 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 본 발명의 방법은 (a) 개체로부터의 APC, 예를 들어 DC를 (i) 표적 항원; 및 (ii) 본 발명의 덱틴-2 자극제와, APC, 예를 들어 DC에 의한 표적 항원의 흡수에 효과적인 용량으로 그리고 시간 동안 시험관내에서 접촉시켜, 로딩된 APC, 예를 들어 DC를 생성하는 단계; 및 (b) 로딩된 APC, 예를 들어 DC를 개체 내로 도입하는 단계를 포함한다. APC(예를 들어, DC) 및 T 세포는 "세포 투여"에 대해 하기에 기재된 바와 같이 개체에게 투여될 수 있다.
일부 경우에, 본 발명의 방법은 생체내에서 수행될 수 있다. 일부 그러한 경우에, 접촉은 생체내에서 행해지고, 내인성 APC, 예를 들어 DC가 생체내에서 로딩되고, 이어서 로딩된 APC, 예를 들어 DC는 생체내에서 T 세포와 접촉한다. 따라서, 본 방법은 생체내 투여(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제의 투여)에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 내인성 APC, 예를 들어 DC(예를 들어, TADC)가 본 발명의 덱틴-2 자극제를 포함하는 조성물을 개체에게 투여함으로써 생체내에서 로딩될 수 있다.
접촉이 시험관내에서 행해지는 경우에는, 개체로부터의 자가 T 세포(예를 들어, 자가 T 세포의 집단)를 로딩된 APC, 예를 들어 DC와 접촉시켜, 접촉된 T 세포(예를 들어, 접촉된 T 세포 집단)를 생성할 수 있다. T 세포를 활성화시키기에 충분한 기간 동안, T 세포를 로딩된 APC, 예를 들어 DC와 접촉시켜, T 세포가 개체에게 투여될 때 면역 반응을 유도하도록 할 수 있다. (로딩된 APC, 예를 들어 DC와 접촉하기 전 또는 후의) T 세포는 개체에게 투여되기 전에 시험관내에서 증폭되고/되거나 변형될(예를 들어, 유전자 변형될) 수 있다.
일부 경우에, T 세포는 5분 내지 24시간(예를 들어, 5분 내지 18시간, 5분 내지 12시간, 5분 내지 8시간, 5분 내지 6시간, 5분 내지 4시간, 5분 내지 2시간, 5분 내지 60분, 5분 내지 45분, 5분 내지 30분, 15분 내지 18시간, 15분 내지 12시간, 15분 내지 8시간, 15분 내지 6시간, 15분 내지 4시간, 15분 내지 2시간, 15분 내지 60분, 15분 내지 45분, 15분 내지 30분, 20분 내지 18시간, 20분 내지 12시간, 20분 내지 8시간, 20분 내지 6시간, 20분 내지 4시간, 20분 내지 2시간, 20분 내지 60분, 20분 내지 45분, 30분 내지 18시간, 30분 내지 12시간, 30분 내지 8시간, 30분 내지 6시간, 30분 내지 4시간, 30분 내지 2시간, 30분 내지 60분, 30분 내지 45분, 45분 내지 18시간, 45분 내지 12시간, 45분 내지 8시간, 45분 내지 6시간, 45분 내지 4시간, 45분 내지 2시간, 45분 내지 60분, 1시간 내지 18시간, 1시간 내지 12시간, 1시간 내지 8시간, 1시간 내지 6시간, 1시간 내지 4시간, 1시간 내지 2시간, 또는 1시간 내지 90분) 범위의 기간 동안 로딩된 APC, 예를 들어 DC와 시험관내에서 접촉된다.
일부 경우에, T 세포 집단(예를 들어, 1x102개 이상의 세포(예를 들어, 1x103개 이상의 세포, 1x104개 이상의 세포, 1x105개 이상의 세포, 또는 1x106개 이상의 세포))이 로딩된 APC, 예를 들어 DC(예를 들어, 로딩된 APC, 예를 들어 DC 집단; 로딩된 APC, 예를 들어 DC를 갖는 집단 등)와 시험관내에서 접촉된다. 일부 경우에, T 세포 집단(예를 들어, 1x102 내지 1x1010개의 세포(1x102 내지 1x108개의 세포, 1x103 내지 1x107개의 세포, 1x104 내지 1x106개의 세포, 5x104 내지 5x105개의 세포, 또는 1x105개의 세포)의 범위)이 로딩된 APC, 예를 들어 DC(예를 들어, 로딩된 APC, 예를 들어 DC의 집단; 로딩된 APC, 예를 들어 DC를 갖는 집단 등)와 시험관내에서 접촉된다. 일부 경우에, T 세포(예를 들어, T 세포 집단)가 로딩된 APC, 예를 들어 DC를 갖는 세포 집단(예를 들어, 1x102개 이상의 세포(예를 들어, 1x103개 이상의 세포, 1x104개 이상의 세포, 1x105개 이상의 세포, 또는 1x106개 이상의 세포))(예를 들어, 로딩된 APC, 예를 들어 DC의 세포 집단)과 접촉된다. 일부 경우에, T 세포(예를 들어, T 세포 집단)가 로딩된 APC, 예를 들어 DC를 갖는 세포 집단(예를 들어, 1x102 내지 1x1010개의 세포(1x102 내지 1x108개의 세포, 1x103 내지 1x107개의 세포, 1x104 내지 1x106개의 세포, 5x104 내지 5x105개의 세포, 또는 1x105개의 세포)의 범위)(예를 들어, 로딩된 APC, 예를 들어 DC의 세포 집단)과 접촉된다.
접촉된 T 세포(예를 들어, 접촉된 T 세포 집단의 세포)는 "세포 투여"에 대해 하기에 기재된 바와 같이 개체에게 투여될 수 있다.
수지상 세포. 수지상 세포(DC)는 포유류 면역 시스템의 항원 제시 세포 유형이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "수지상 세포"는 림프계 또는 비-림프계 조직에서 발견되는 것과 형태학적으로 유사한 세포 유형의 다양한 집단의 임의의 구성원을 지칭한다. 이들 세포는 그들의 독특한 형태 및 고수준의 표면 MHC-클래스 II 발현으로 특징지어진다(문헌[Steinman, et al., Ann. Rev. Immunol. 9:271 (1991)]; 이 문헌의 그러한 세포의 설명에 대하여 본 명세서에 참고로 포함됨).
수지상 세포는 거의 모든 조직, 예컨대 피부, 및 코, 폐, 간, 위, 및 장의 내벽에 존재할 뿐만 아니라 골수, 혈액, 비장, 및 림프절에도 존재한다. 일단 활성화되면, DC는 림프절로 이동하며, 여기서 이들은 T 세포 및 B 세포와 상호작용하여 적응 면역 반응을 개시하고 형성한다. 소정의 발달 단계에서, DC는 분지형 돌기(덴드라이트)를 성장시키는데, 이것에 의해 이들 세포에 대해 그들의 명칭이 주어지게 된다. 수지상 세포의 예에는 골수-유래 수지상 세포(BMDC), 형질세포양 수지상 세포, 랑게르한스 세포, 지상돌기 세포(interdigitating cell), 베일 세포(veiled cell), 및 진피 수지상 세포가 포함된다. 일부 경우에, DC는 CD11(예를 들어, CD11a 및/또는 CD11c), MHC 클래스 II(예를 들어, 인간의 경우에, HLA-DR, HLA-DP 및 HLA-DQ), CD40, CD80 및 CD86으로부터 선택되는 적어도 하나의 마커를 발현한다. 일부 경우에, DC는 HLA-DR 및 CD83에 대해서는 양성이고, CD14에 대해서는 음성이다. 일반적으로, DC는 마커 CD11c+; CD14-/low; CD80+; CD86++; MHC 클래스 I++, MHC 클래스 II+++; CD40++; CD83+/-; CCR7+/- 중 임의의 것 또는 전부에 기초하여 확인될 수 있다(예를 들어, DC의 존재는 검증될 수 있다). 일부 경우에, DC는 CD11b+ / Gr1neg / CD11c+ / MHCII+ / CD64dull이다. 일부 경우에, DC는 CD11bneg / CD11chi / MHCII+이다.
일부 경우에, 수지상 세포는 특이적 Ig Fc 수용체를 발현한다. 예를 들어, 수지상 세포는 IgG 항체, 또는 IgG의 Fc 영역을 함유하는 항체를 인식하는 Fc-γ 수용체를 발현할 수 있다. 다른 예로서, 수지상 세포는 IgA 항체, 또는 IgA의 Fc 영역을 함유하는 항체를 인식하는 Fc-α 수용체를 발현할 수 있다. 또 다른 예로서, 수지상 세포는 IgE 항체, 또는 IgE의 Fc 영역을 함유하는 항체를 인식하는 Fc-ε 수용체를 발현할 수 있다. 일부 경우에, 특정 Fc 수용체를 발현하는 수지상 세포가 획득되고, 이것에 적절한 가교 분자(예를 들어, 수지상 세포 Fc 수용체에 의해 인식되는 부류의 동종이계 Ig)가 로딩된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법은 DC를 획득하거나 단리하는 단계(예를 들어, 풍부화된 DC 집단을 단리하는 단계)를 포함한다. DC의 단리, 생성, 및 배양을 위한 기법은 당업자에게 알려져 있을 것이며, 임의의 편리한 기법이 사용될 수 있다. 일부 경우에, DC는 치료 중인 개체에 대해 자가이다(즉, 개체로부터 단리된 세포이거나 또는 개체의 세포로부터 유래된 세포이다).
일부 경우에, CD34(+) 선조체(예를 들어, 골수(BM) 선조 세포)가 DC를 생성하기 위한 공급원으로서 사용되며(예를 들어, CD34+ 세포가, 예를 들어 항체-결합된 자성 비드를 사용하여 풍부화될 수 있음), 이때 이것은 골수(BM) 유래 수지상 세포(BMDC)로 지칭된다. 예를 들어, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨 4(IL-4), 예를 들어, 20 ng/㎖) 및 백혈구 성장 인자(예를 들어, 과립구-대식세포-콜로니 자극 인자(GM-CSF), 예를 들어 50 ng/㎖)로서 기능하는 사이토카인의 존재 하에서 비부착성 세포(CD34+ 세포)를 배양함으로써 BMDC가 생성될 수 있다. 일부 경우에, CD34+ 세포는 4일 내지 18일(예를 들어, 5일 내지 17일, 7일 내지 16일, 8일 내지 13일, 9일 내지 12일, 6일 내지 15일, 8일 내지 15일, 10일 내지 15일, 12일 내지 15일, 13일 내지 15일, 5일 내지 14일, 5일 내지 12일, 5일 내지 10일, 5일 내지 9일, 6일 내지 8일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 12일, 또는 14일)의 범위의 기간 동안 GM-CSF 및/또는 IL-4의 존재 하에서 배양된다. CD34+ 세포가 GM-CSF 및/또는 IL-4의 존재 하에서 배양되는 경우, GM-CSF는 35 ng/㎖ 내지 65 ng/㎖(35 ng/㎖ 내지 65 ng/㎖, 40 ng/㎖ 내지 60 ng/㎖, 45 ng/㎖ 내지 50 ng/㎖, 또는 50 ng/㎖)의 범위의 농도일 수 있고, IL-4는 5 ng/㎖ 내지 35 ng/㎖(10 ng/㎖ 내지 30 ng/㎖, 15 ng/㎖ 내지 25 ng/㎖, 17.5 ng/㎖ 내지 22.5 ng/㎖, 또는 20 ng/㎖)의 범위의 농도일 수 있다. 예시적인 예로서, 뼈가 식염수 용액(예를 들어, 인산염 완충 식염수(PBS))으로 플러싱될 수 있고, 단핵 세포가 피콜(Ficoll) 구배 상에서 골수로부터 분리될 수 있다. 이어서, CD34+ 세포가 (예를 들어, 항체-접합된 자성 비드를 사용하여) 분리/풍부화되고, 이어서 GM-CSF 및 IL-4의 존재 하에서 배양할 수 있다(전술된 바와 같음). 일부 경우에(예를 들어, 세포가 마우스 세포인 경우), DC는 GM-CSF 중에서 세포를 배양함으로써 유도될 수 있다. 일부 경우에(예를 들어, 세포가 인간 세포인 경우), DC는 GM-CSF 및 IL-4 중에서 세포를 배양함으로써 유도될 수 있다.
일부 경우에, 단핵구가 DC(때때로 혈액 유래 DC, 혈액 Mo-DC, 단핵구 DC 등으로 지칭됨)를 생성하기 위한 공급원으로서 사용된다. 예를 들어, (예를 들어, BMDC에 대해 전술된 바와 같은 범위의 농도의) GM-CSF 및/또는 (예를 들어, BMDC에 대해 전술된 바와 같은 범위의 농도의) IL-4의 존재 하에서 부착성 세포(단핵구, 예를 들어 골수 단핵구, 혈액 단핵구 등)(예를 들어, CD14+ 혈액 단핵구)를 3일 내지 9일(예를 들어, 4일 내지 8일, 5일 내지 7일, 3일 내지 6일, 4일 내지 5일, 6일 내지 8일, 또는 7일)의 범위의 기간 동안 배양함으로써 DC가 생성될 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 단핵 세포가 혈액으로부터 단리되고, (예를 들어, 자성 비드를 사용하여) CD11b+ 세포에 대해 풍부화된다. 세포는 "염증성 단핵구"(FSClo/SSClo/Gr1hi/CD115hi) 및/또는 "순찰 단핵구"(FSClo/SSClo/Gr1neg/CD115hi)에 대해 분류될 수 있다. 이어서, (예를 들어, 3일 내지 6일(예를 들어, 4일 내지 5일)의 범위의 기간 동안) GM-CSF의 존재 하에서 단핵구를 배양함으로써 다양한 유형의 단핵구로부터 DC가 생성될 수 있다. 일부 경우에(예를 들어, 세포가 마우스 세포인 경우), DC는 GM-CSF 중에서 세포를 배양함으로써 유도된다. 일부 경우에(예를 들어, 세포가 인간 세포인 경우), DC는 GM-CSF 및 IL-4 중에서 세포를 배양함으로써 유도된다. 비장으로부터 DC(비장 DC)를 획득하기 위하여, 비장세포가 (예를 들어, 항체-결합된 자성 비드를 사용하여) CD11c+ 세포에 대해 풍부화될 수 있으며, CD11chi/MHCIIhi 세포가 유세포측정(예를 들어, FACS)을 사용하여 분류/풍부화될 수 있다.
일부 경우에, DC는 종양-관련 DC(TADC)이다. TADC는 임의의 편리한 방법에 의해 획득될 수 있다. 예를 들어, 종양으로부터 DC(종양-관련 DC, TADC)를 획득하기 위하여, 종양이 (예를 들어, 콜라게나제 및 뉴클레아제를 사용하여) 분해될 수 있고, CD11c+ 세포가 (예를 들어, 항체-접합된 자성 비드를 사용하여) 풍부화될 수 있고, Gr1neg/CD11chi/MHCIIhi 세포가 유세포측정(예를 들어, FACS)을 사용하여 분류/풍부화될 수 있다.
(예를 들어, 전술된 바와 같이) 단리된 및/또는 유도된 DC는 TNFα(예를 들어, 50 ng/㎖) 및 CD40 리간드(예를 들어, CD40L)(예를 들어, 500 ng/㎖)를 포함하지만 이로 한정되지 않는 다양한 인자를 사용하여 활성화될 수 있다(하기에 더욱 상세히 기재됨).
수지상 세포 및 DC의 단리, 생성, 및/또는 배양 방법에 관한 더 많은 정보에 대해서는 문헌[Vassalli, J Transplant. 2013; 2013: 761429: "Dendritic Cell-Based Approaches for Therapeutic Immune Regulation in Solid-Organ Transplantation"]; 문헌[Syme et al., Stem Cells. 2005;23(1):74-81: "Comparison of CD34 and monocyte-derived dendritic cells from mobilized peripheral blood from cancer patients"]; 문헌[Banchereau et al., Annu Rev Immunol. 2000;18:767-811:" Immunobiology of dendritic cells"]; 및 미국 특허 출원 제20130330822호; 제20130273654호; 제20130130380호; 제20120251561호; 및 제20120244620호를 참조하며; 이들 모두는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
대식세포. 대식세포는 포유류 면역 시스템의 항원 제시 세포(APC) 유형이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "대식세포"는 림프계 또는 비-림프계 조직에서 발견되는 것과 형태학적으로 유사한 세포 유형의 다양한 집단의 임의의 구성원을 지칭한다. 이들 세포는 그들의 독특한 형태 및 고수준의 표면 MHC-클래스 II 발현으로 특징지어진다. 대식세포는 단핵구-유래 식세포로서, 이는 수지상 세포, 또는 국부 증식에 의한 조직 대식세포로부터 유래된 세포가 아니다. 체내에서, 이들 세포는 조직 특이적이며, 예를 들어, 간에서는 쿠퍼(Kupffer) 세포, 폐에서는 폐포 대식세포, 뇌 내에서는 미세교세포, 골에서는 파골세포 등으로 지칭된다. 당업자는 대식세포 세포를 확인하는 방법, 인간 또는 동물의 신체로부터 대식세포 세포를 단리하는 방법, 및 대식세포 세포를 그들의 하위클래스 및 하위집단에 관하여 특성화하는 방법을 인식하고 있다(문헌[Kruisbeek, 2001]; 문헌[Davies and Gordon 2005 a and b]; 문헌[Zhang et al., 2008]; 문헌[Mosser and Zhang, 2008]; 문헌[Weischenfeldt and Porse, 2008]; 문헌[Ray and Dittel, 2010]; 문헌[Martinez et al., 2008]; 문헌[Jenkins et al., 2011]).
대식세포는 상이한 기전에 의해 M1, M2, M2a, M2b, 및 M2c 하위클래스를 포함하지만 이로 한정되지 않는 상이한 하위클래스들로 활성화될 수 있다. 용어 M1은 손상 또는 세균 감염 및 IFN-γ 활성화로 인해 발생되는 활성화된 대식세포를 고전적으로 기술하는 데 사용되는 반면, M2는 M1과 상이하게 활성화되는 수많은 형태의 대식세포에 대한 일반적인 용어이다. M2 분류는 하위집단으로 추가로 나누어져 있다(문헌[Mantovani et al., 2004]). 가장 대표적인 형태는 M2a 대식세포로서, 이는 연충 감염에서 벌레(worm)-유도 Th2 사이토카인 IL-4 및 IL-13에 대한 노출에 의해 일반적으로 발생한다. M2a 대식세포는, 특히, 재감염으로부터 숙주를 보호하는 데(문헌[Anthony et al., 2006]) 또는 상처 치유 및 조직 재성형에 기여하는 데(문헌[Gordon, 2003]) 본질적으로 관여하는 것으로 밝혀졌다. 다른 하위집단은 M2b 대식세포인데, 이것은 고수준의 IL-10 및 저수준의 IL-12를 생성하지만, 그 자체가 항염증성인 것은 아니다(문헌[Anderson and Mosser, 2002]; 문헌[Edwards et al., 2006]). M2b 대식세포는 TLR 리간드와 조합하여 Fc-γ 수용체에 결합하는 면역 복합체에 의해 유도된다. 마지막으로, M2c 대식세포는 IL-10, TGF-β 또는 글루코코르티코이드에 의해 유도되는 아형을 나타낸다(문헌[Martinez et al., 2008]).
따라서, "M2a 대식세포"는, Th2 조건 하에 있는 환경에 노출되었으며(예를 들어, Th2 사이토카인 IL-4 및 IL-13에 대한 노출), 유전자 Ym1 및/또는 유전자 CD206 및/또는 유전자 RELM-α 및/또는 유전자 아르기나제-1의 더 높은 발현에 의해 특정 표현형을 나타내는 대식세포 세포를 지칭한다. 유사하게, "M2b 대식세포"는 TLR 또는 TNF-알파 자극과 조합하여 면역 복합체의 환경에 노출된 대식세포 세포를 지칭한다. 상기 세포는 유전자 SPHK-1 및/또는 유전자 LIGHT 및/또는 유전자 IL-10의 더 높은 발현을 통해 특징지어진다.
일부 경우에, 본 발명은 "환자의 신체로부터 유래된" 대식세포 세포를 지칭한다. 이는, 대식세포가 상기 환자의 신체로부터 획득되거나, 또는 대식세포 전구 세포가 상기 환자의 신체로부터 획득되고, 후속으로 시험관내에서 대식세포 세포로 분화되는 것을 지정하는 것으로 의미되는데, 이는 문헌[Wahl et al. 2006]; 문헌[Davis and Gordon 2005]; 문헌[Smythies et al., 2006]; 문헌[Zhang et al., 2008]; 문헌[Mosser and Zhang, 2008]에 기재된 바와 같다.
B-세포. B-세포는 포유류 면역 시스템의 항원 제시 세포(APC) 유형이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "B-세포"는 임의의 발달 단계(예를 들어, B-줄기 세포, 선조 B-세포, 분화된 B-세포, 혈장 세포)로부터의, 그리고 말초 혈액, 종양 지점, 종양 내, 또는 종양 부근의 영역, 림프절, 골수, 제대혈, 또는 비장 세포를 포함하지만 이로 한정되지 않는 임의의 공급원으로부터의 B-세포를 지칭한다.
B-세포 전구체는 미성숙 B-세포가 생성되는 골수 내에 존재한다. B-세포 발달은 몇몇 단계를 통해 발생하며, 각각의 단계는 항체 유전자좌에서의 게놈 함량의 변화를 나타낸다. 게놈 중쇄 가변 영역에는, 3개의 세그먼트 V, D, 및 J가 존재하는데, 이들은 VDJ 재배열로 불리는 과정에서 랜덤하게 재조합되어, 각각의 B-세포의 면역글로불린 내에 특유의 가변 영역을 생성한다. 경쇄 가변 영역에 대해서도 유사한 재배열이 일어나는데, 단, 단지 2개의 세그먼트 V 및 J가 관여한다는 것이 제외된다. 완전한 재배열 후에, B-세포는 골수에서 IgM+ 미성숙 단계에 도달한다. 이들 미성숙 B-세포는 그들의 표면 상에 막 결합된 IgM, 즉 BCR을 제시하고 비장으로 이동하며, 여기서 이들은 이행 B 세포로 불린다. 이들 세포 중 일부는 성숙 B 림프구로 분화된다. 표면 상에 BCR을 발현하는 성숙 B-세포는 혈액 및 림프계를 순환하여 면역 감시 역할을 수행한다. 이들은 완전히 활성화될 때까지 가용성 항체를 생성하지 않는다. 각각의 B-세포는 하나의 특정 항원에 결합할 특유의 수용체 단백질을 갖는다. 일단 B-세포가 그의 항원과 접하게 되고 T 헬퍼 세포로부터 추가 신호를 수신하면, 이것은 가용성 항체 또는 기억 B-세포를 발현하고 분비하는 혈장 B-세포로 추가로 분화될 수 있다.
본 발명과 관련하여, 용어 "B-세포"는 표면 상에 완전히 재배열된 BCR, 즉 성숙 BCR을 제시하는 임의의 B 림프구를 지칭한다. 예를 들어, 본 발명과 관련하여 B-세포는 미성숙 또는 성숙 B-세포일 수 있다. 일부 경우에, B-세포는 미감작(
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) B-세포, 즉 상기 B-세포의 표면 상의 BCR에 의해 특이적으로 인식되는 항원에 노출되지 않은 B-세포이다. 일부 실시 형태에서, B-세포는 CD19+ B-세포이며, 즉 그의 표면 상에 CD19를 발현한다. 일부 경우에, 본 발명과 관련하여 B-세포는 CD19+ B-세포이며, 그의 표면 상에 완전히 재배열된 BCR을 발현한다. B-세포는 또한 CD20+ 또는 CD21+ B-세포일 수 있다. 일부 경우에, CD20+ 또는 CD21+ B-세포는 그의 표면 상에 BCR을 가진다. 일부 실시 형태에서, B-세포는 기억 B-세포, 예컨대 IgG+ 기억 B 세포이다.
치료
본 명세서에서 용어 "치료", "치료하는", "치료하다" 등은 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 일반적으로 지칭하는 데 사용된다. 이러한 효과는 질병 또는 이의 증상(들)을 완전히 또는 부분적으로 예방한다는 관점에서 예방적일 수 있고/있거나, 질병 및/또는 그러한 질병에 기인하는 유해 효과에 대한 부분적 또는 완전한 안정화 또는 치유의 관점에서 치료적일 수 있다. 용어 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서의 질병의 임의의 치료를 포함하며, (a) 질병 또는 증상(들)에 취약할 수 있지만 그것을 갖는 것으로 아직 진단되지 않은 대상체에서 상기 질병 및/또는 증상(들)이 발생하는 것을 방지하는 것; (b) 질병 및/또는 증상(들)을 억제하는 것, 즉 질병 및/또는 관련 증상의 발생을 정지시키는 것; 또는 (c) 질병 및 관련 증상(들)을 완화시키는 것, 즉 질병 및/또는 증상(들)의 퇴행을 야기하는 것을 포함한다. 치료를 필요로 하는 자들은 이미 이환된 자들(예를 들어, 암을 가진 자들, 예를 들어 종양을 가진 자들)뿐만 아니라, 예방이 요구되는 자들(예를 들어, 암에 대한 증가된 감수성을 가진 자들; 전암성 종양, 병변을 가진 자들; 암을 가진 것으로 의심되는 자들; 등)을 포함할 수 있다.
용어 "수용자", "개체", "대상체", "숙주", 및 "환자"는 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용되며, 진단, 치료, 또는 요법이 요구되는 임의의 포유류 대상체(예를 들어, 인간)를 지칭한다. 치료 목적을 위한 "포유동물"은 포유동물로서 분류되는 임의의 동물을 지칭하며, 이러한 포유동물에는 인간, 가축 및 농장 동물, 및 동물원 동물, 스포츠 동물, 또는 애완동물, 예컨대 개, 말, 고양이, 소, 양, 염소, 돼지, 낙타 등이 포함된다. 일부 실시 형태에서, 포유동물은 인간이다.
치료적 치료는 투여 전에 대상체가 이환된 경우의 치료이고, 예방적 치료는 투여 전에 대상체가 이환되지 않은 경우의 치료이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 이환되게 될 가능성이 증가되었거나 이환되게 될 가능성이 증가된 것으로 의심되며(예를 들어, 이는 표준과 대비하여, 예를 들어 평균 개체와 대비하여 그러하며, 예를 들어 대상체는 암에 대한 유전자적 소인을 가질 수 있고/있거나 암의 증가된 위험을 나타내는 가족력을 가질 수 있음), 이 경우에 치료는 예방적 치료일 수 있다. 일부 경우에, 용어 "백신화"는 예방적 치료를 기술하는 데 사용된다. 예를 들어, 치료되는 대상체가 암을 가진 것으로 진단되지 않은 일부 경우에(예를 들어, 대상체가 이환되게 될 가능성이 증가된 경우에, 대상체가 이환되게 될 가능성이 증가된 것으로 의심되는 경우에)(예를 들어, 대상체가 암에 대한 유전자적 소인을 가질 수 있고/있거나 암의 증가된 위험을 나타내는 가족력을 가질 수 있는 경우에), 대상체는 본 발명의 방법들 중 하나 이상을 수행함으로써 백신화될(그러한 치료가 예방적 치료가 되도록 치료될) 수 있다.
치료되는 대상체가 암을 가진 것으로 진단되지 않은 일부 경우에(예를 들어, 대상체가 이환되게 될 가능성이 증가된 경우에, 대상체가 이환되게 될 가능성이 증가된 것으로 의심되는 경우에)(예를 들어, 대상체가 암에 대한 유전자적 소인을 가질 수 있고/있거나 암의 증가된 위험을 나타내는 가족력을 가질 수 있는 경우에), 대상체는 본 발명의 방법들 중 하나 이상을 수행함으로써 백신화될(그러한 치료가 예방적 치료가 되도록 치료될) 수 있다.
치료하고자 하는 개체 및 '암 세포'
일부 실시 형태에서, 치료하고자 하는 개체는 암 또는 감염성 질병을 갖는 개체이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "암"은 임의의 형태의 암(예를 들어, 백혈병; 급성 골수성 백혈병(AML); 급성 림프아구성 백혈병(ALL); 림프종; 중피종(MSTO); 최소 잔존 질병; 고형 종양 암(예를 들어, 폐암, 전립선암, 유방암, 방광암, 결장암, 난소암, 췌장암, 신장암, 교아세포종, 수아세포종, 평활근육종, 및 두경부 편평 세포 암종, 흑색종 등)(원발성 종양 및 전이성 종양 둘 모두를 포함함) 등을 포함한다. 일부 경우에, 개체는 최근에 암에 대한 치료(예를 들어, 방사선 요법, 화학요법, 외과적 절제 등)를 겪었으며, 이에 따라 재발 위험이 있다. 임의의 및 모든 암은 본 발명의 방법, 조성물, 및 키트에 의해 치료되기에 적합한 암이다.
용어 "암", "신생물", 및 "종양"은, 자율적이고 조절되지 않은 성장을 나타내어, 세포 증식에 대한 상당한 제어 손실로 특징지어지는 비정상적인 성장 표현형을 나타내게 되는 세포를 지칭하는 것으로 본 명세서에서 사용된다. 본 명세서에서 검출, 분석, 및/또는 치료를 위한 대상 세포는 암 세포(예를 들어, 암을 가진 개체로부터의 암 세포), 악성 암 세포, 전-전이성(pre-metastatic) 암 세포, 전이성 암 세포, 및 비전이성 암 세포를 포함한다. 사실상 모든 조직의 암이 알려져 있다. 어구 "암 부하"는 대상체에서의 암 세포의 양 또는 암 부피를 지칭한다. 따라서, 암 부하를 감소시키는 것은 대상체에서 암 세포의 수 또는 암 부피를 감소시키는 것을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "암 세포"는 (예를 들어, 개체가 치료될 수 있는 임의의 암으로부터의, 예를 들어 암을 가진 개체로부터 단리된) 암 세포인, 또는 암 세포, 예를 들어 암 세포의 클론으로부터 유래된, 임의의 세포를 지칭한다. 예를 들어, 암 세포는 확립된 암 세포주로부터 유래될 수 있고, 암을 가진 개체로부터 단리된 1차 세포일 수 있고, 암을 가진 개체로부터 단리된 1차 세포로부터의 자손 세포일 수 있고, 등등일 수 있다. 일부 경우에, 이 용어는 또한 암 세포의 일부분, 예컨대 하위세포(sub-cellular) 부분, 세포막 부분, 또는 암 세포의 세포 용해물을 지칭할 수 있다. 많은 유형의 암이 당업자에게 알려져 있으며, 이에는 고형 종양, 예컨대 암종, 육종, 교아세포종, 흑색종, 림프종, 골수종 등, 및 순환 암, 예컨대 백혈병이 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "암"은 임의의 형태의 암을 포함하며, 이에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: 고형 종양 암(예를 들어, 폐암, 전립선암, 유방암, 방광암, 결장암, 난소암, 췌장암, 신장암, 간암, 교아세포종, 수아세포종, 평활근육종, 두경부 편평 세포 암종, 흑색종, 신경내분비암 등) 및 액체 암(예를 들어, 혈액암); 암종; 연조직 종양; 육종; 기형종; 흑색종; 백혈병; 림프종; 및 뇌암(최소 잔류 질병을 포함하고, 원발성 종양 및 전이성 종양 둘 모두를 포함함). 임의의 암은 본 발명의 방법 및 조성물에 의해 치료되기에 적합한 암이다.
암종은 상피 조직에서 기원되는 악성 질병이다. 상피 세포는 신체의 외부 표면을 덮고, 내강(internal cavity)을 피복하고, 샘 조직의 피복을 형성한다. 암종의 예에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: 선암종(샘(분비) 세포에서 시작되는 암)(예를 들어, 유방, 췌장, 폐, 전립선, 및 결장의 암이 선암종일 수 있음); 부신피질 암종; 간세포 암종; 신장 세포 암종; 난소 암종; 상피내 암종(carcinoma in situ); 유관 암종; 유방의 암종; 기저 세포 암종; 편평 세포 암종; 이행 세포 암종; 결장 암종; 비인두 암종; 다방성 낭성 신세포 암종; 귀리 세포 암종; 대세포 폐 암종; 소세포 폐 암종; 비소세포 폐 암종 등. 암종은 전립선, 췌장, 결장, 뇌(통상 2차 전이로서), 폐, 유방, 피부 등에서 발견될 수 있다.
연조직 종양은 결합 조직으로부터 유래되는 희귀 종양들의 매우 다양한 군이다. 연조직 종양의 예에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: 포상 연부 육종; 유혈관종 섬유성 조직구종; 연골점액모양 섬유종; 골격 연골육종; 골외성 점액모양 연골육종; 투명 세포 육종; 결합조직형성 소원형 세포 종양; 융기성 피부섬유육종; 자궁내막 간질 종양; 유잉 육종; 섬유종증(데스모이드); 유아성 섬유육종; 위장 간질 종양; 골 거대 세포 종양; 건초 거대 세포 종양; 염증성 근섬유아세포 종양; 자궁 평활근종; 평활근육종; 지방아세포종; 전형적인 지방종; 방추 세포 또는 다형성 지방종; 비정형 지방종; 연골모양 지방종; 잘 분화된 지질육종; 점액모양/원형 세포 지질육종; 다형성 지질육종; 점액모양 악성 섬유성 조직구종; 고분화도 악성 섬유성 조직구종; 점액섬유육종; 악성 말초 신경초 종양; 중피종; 신경아세포종; 골연골종; 골육종; 원시 신경외배엽 종양; 폐포 횡문근육종; 배아 횡문근육종; 양성 또는 악성 슈반세포종; 활막 육종; 에반스 종양; 결절성 근막염; 데스모이드형 섬유종증; 단발성 섬유성 종양; 융기성 피부섬유육종(DFSP); 혈관육종; 상피모양 혈관내피종; 건초 거대 세포 종양(TGCT); 색소성 융모결절성 활막염(PVNS); 섬유성 이형성증; 점액섬유육종; 섬유육종; 활막 육종; 악성 말초 신경초 종양; 신경섬유종; 및 연조직의 다형성 선종; 및 섬유아세포, 근섬유아세포, 조직구, 혈관 세포/내피 세포 및 신경초 세포로부터 유래된 신생종.
육종은 중간엽 기원의 세포, 예를 들어 골 또는 신체의 연조직(연골, 지방, 근육, 혈관, 섬유질 조직, 또는 다른 결합 또는 지지 조직을 포함함)에서 발생하는 희귀 유형의 암이다. 육종의 상이한 유형은 암이 형성되는 곳에 기초한다. 예를 들어, 골육종은 골에서 형성되고, 지질육종은 지방에서 형성되고, 횡문근육종은 근육에서 형성된다. 육종의 예에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: 아스킨 종양; 포도상 육종; 연골육종; 유잉 육종; 악성 혈관내피종; 악성 슈반세포종; 골육종; 및 연조직 육종(예를 들어, 포상 연부 육종; 혈관육종; 엽상 낭육종;융기성 피부섬유육종(DFSP); 데스모이드 종양; 결합조직형성 소원형 세포 종양; 상피모양 육종; 골외성 연골육종; 골외성 골육종; 섬유육종; 위장 간질 종양(GIST); 혈관주위세포종; 헴혈관육종(더 일반적으로는 "혈관육종"으로 지칭됨); 카포시 육종; 평활근육종; 지질육종; 림프관육종; 악성 말초 신경초 종양(MPNST); 신경섬유육종; 활막 육종; 미분화된 다형성 육종 등).
기형종은, 예를 들어 모발, 근육, 및 골을 포함한 (예를 들어, 내배엽, 중배엽 및 외배엽의 3가지 배아 층 중 임의의 것 및/또는 모두로부터 유래된 조직을 포함할 수 있는) 몇몇 상이한 유형의 조직을 함유할 수 있는 배엽 세포 종양 유형이다. 기형종은 여성에서는 난소, 남성에서는 고환, 그리고 어린이에서는 꼬리뼈에서 가장 자주 발생한다.
흑색종은 멜라닌세포(색소 멜라닌을 만드는 세포)에서 시작되는 암 형태이다. 그것은 모반에서 시작될 수 있지만(피부 흑색종), 또한 다른 색소 조직, 예컨대 눈 또는 장에서 시작될 수 있다.
백혈병은 혈액-형성 조직, 예컨대 골수에서 시작되는 암이며, 다수의 비정상 혈액 세포가 생성되게 하고 혈류로 들어가게 한다. 예를 들어, 백혈병은 혈류에서 정상적으로 성숙하는 골수-유래 세포에서 기원할 수 있다. 백혈병은 질병이 얼마나 빠르게 발달하고 진행되는지에 대해(예를 들어, 급성 대 만성), 그리고 영향을 받은 백혈구의 유형에 대해(예를 들어, 골수계 대 림프계) 명명된다. 골수계 백혈병은 골수성 또는 골수아구성 백혈병으로도 불린다. 림프계 백혈병은 림프아구성 또는 림프구성 백혈병으로도 불린다. 림프계 백혈병 세포는 림프절 내에 수집될 수 있으며, 림프절은 팽윤되게 될 수 있다. 백혈병의 예에는 급성 골수계 백혈병(AML), 급성 림프아구성 백혈병(ALL), 만성 골수계 백혈병(CML), 및 만성 림프구성 백혈병(CLL)이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
림프종은 면역 시스템의 세포에서 시작되는 암이다. 예를 들어, 림프종은 림프계에서 정상적으로 성숙하는 골수-유래 세포에서 기원할 수 있다. 림프종에는 2가지 기본적인 카테고리가 있다. 한 가지 종류는 호지킨 림프종(HL)으로서, 이는 리드-스테른베르크(Reed-Sternberg) 세포로 불리는 세포 유형의 존재를 특징으로 한다. 현재 6가지의 인식된 유형의 HL이 존재한다. 호지킨 림프종의 예에는 결절성 경화증 고전적 호지킨 림프종(CHL), 혼합 세포형 CHL, 림프구-고갈 CHL, 림프구-풍부 CHL, 및 결절성 림프구 우세형 HL이 포함된다.
림프종의 다른 하나의 카테고리는 비호지킨 림프종(NHL)으로서, 이는 면역 시스템 세포의 암들의 큰, 다양한 군을 포함한다. 비호지킨 림프종은 완만한(느린 성장) 과정을 갖는 암과 공격적인(빠르게 성장하는) 과정을 갖는 암으로 추가로 나누어질 수 있다. 현재 61가지의 인식된 유형의 NHL이 존재한다. 비호지킨 림프종의 예에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: AIDS-관련 림프종, 역형성 대세포 림프종, 혈관면역아구성 림프종, 아구성 NK-세포 림프종, 버킷 림프종, 버킷-유사 림프종(소비분할 세포 림프종), 만성 림프구성 백혈병/소림프구성 림프종, 피부 T-세포 림프종, 미만성 대 B-세포 림프종, 장병증형 T-세포 림프종, 여포성 림프종, 간비장 감마-델타 T-세포 림프종, T-세포 백혈병, 림프아구성 림프종, 외투 세포 림프종, 번연부 림프종, 비강 T-세포 림프종, 소아 림프종, 말초 T-세포 림프종, 1차 중추 신경계 림프종, 형질전환된 림프종, 치료-관련 T-세포 림프종, 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증.
뇌암은 뇌 조직의 임의의 암을 포함한다. 뇌암의 예에는 신경교종(예를 들어, 교아세포종, 성상세포종, 핍지교종, 뇌실막종 등), 수막종, 뇌하수체 선종, 전정 슈반세포종, 원시 신경외배엽 종양(수아세포종) 등이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
암의 "병리"는 환자의 웰빙을 손상시키는 모든 현상을 포함한다. 이것은, 제한 없이, 비정상 또는 제어 불가능한 세포 성장, 전이, 이웃하는 세포들의 정상적인 기능의 방해, 사이토카인 또는 다른 분비 생성물의 비정상 수준으로의 방출, 염증 또는 면역학적 반응의 억제 또는 악화, 신생종, 전악성질병, 악성질병, 주변 또는 원거리 조직 또는 기관, 예컨대 림프절의 침습 등을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "암 재발" 및 "종양 재발", 및 이들의 문법적 변형 형태는 암의 진단 후 신생물성 또는 암성 세포의 추가의 성장을 지칭한다. 특히, 재발은 암성 조직에서 추가의 암성 세포 성장이 일어날 때 발생될 수 있다. 유사하게, "종양 확산"은 종양의 세포가 근거리 또는 원거리 조직 및 기관으로 파종될 때 발생하며; 이에 따라 종양 확산은 종양 전이를 포함한다. "종양 침습"은 종양 성장이 국부적으로 확산되어 정상 기관 기능의 압박, 파괴, 또는 방해에 의해 이환된 조직의 기능을 손상시킬 때 발생한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "전이"는 본래의 암성 종양의 기관에 직접 연결되지 않은 기관 또는 신체 부분에서의 암성 종양의 성장을 지칭한다. 전이는 미소전이를 포함하는 것으로 이해될 것이며, 이때 미소전이는 본래의 암성 종양의 기관에 직접 연결되지 않은 기관 또는 신체 부분에서 검출 불가능한 양의 암성 세포의 존재이다. 전이는 또한 한 과정의 몇몇 단계로서 정의될 수 있으며, 이에는, 예를 들어, 원래의 종양 부위로부터의 암 세포의 이탈, 및 신체의 다른 부분으로의 암 세포의 이동 및/또는 침습이 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, (예를 들어, '감염성 질병'과 관련하여) 용어 "감염"은 유기체(예컨대, 대상체)의 적어도 하나의 세포가 감염성 인자에 의해 감염된 임의의 상태를 지칭한다(예를 들어, 대상체는 세포내 병원체 감염, 예를 들어 만성 세포내 병원균 감염을 갖는다). 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "감염성 인자"는 감염을 야기하는 외래 생물학적 실체(즉, 병원체)를 지칭한다. 예를 들어, 감염성 인자는 세균, 바이러스, 원생동물, 및 진균을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 세포내 병원체가 특히 관심 대상이다. 감염성 질병은 감염성 인자에 의해 야기되는 장애이다. 일부 감염성 인자는 소정의 조건 하에서는 인식가능한 증상 또는 질병을 야기하지 않지만, 변화된 조건 하에서는 증상 또는 질병을 야기할 잠재력을 갖는다. 본 발명의 방법은 만성 병원체 감염의 치료에 사용될 수 있으며, 이에는, 예를 들어 바이러스성 감염, 예를 들어 레트로바이러스, 렌티바이러스, 간염 바이러스, 헤르페스 바이러스, 폭스 바이러스, 인간 유두종 바이러스 등; 세포내 세균 감염, 예를 들어 미코박테리움(Mycobacterium), 클라미도필라(Chlamydophila), 에를리키아(Ehrlichia), 리케치아(Rickettsia), 브루셀라(Brucella), 레지오넬라(Legionella), 프란시셀라(Francisella), 리스테리아(Listeria), 콕시엘라(Coxiella), 네이세리아(Neisseria), 살모넬라(Salmonella), 예르시니아 종(Yersinia sp.), 헬리코박터 필로리(Helicobacter pylori) 등; 및 세포내 원생동물 병원체, 예를 들어 플라스모디움 종(Plasmodium sp.), 트리파노소마 종(Trypanosoma sp.), 기아르디아 종(Giardia sp.), 톡소플라스마 종(Toxoplasma sp.), 레이시마니아 종(Leishmania sp.) 등이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
공동투여
일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예컨대 글리코폴리펩티드, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)(예를 들어, 약제학적 조성물로서 제형화됨)는 다른 작용제, 예컨대 암 치료 약물(예를 들어, 종양-유도 항체)과 공동투여된다. 그러한 투여는 본 발명의 작용제 또는 작용제들의 투여에 대하여 약물/항체의 병행 투여(즉, 동시에 투여함), 사전 투여, 또는 후속 투여를 수반할 수 있다. 당업자는 본 발명의 특정 약물 및 조성물에 대한 투여의 적절한 시기, 순서 및 투여량을 결정하는 데 어려움이 없을 것이다. 일부 경우에, 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예컨대 글리코폴리펩티드, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)는 활성을 증강시키거나 치료적 효과를 달리 증가시키는 하나 이상의 작용제(예컨대, 면역조절제, 종양-유도 항체 등)와 제형화된다.
용어 "공동투여" 및 "~와 병용하여"는 특정 시간 제한 없이 동시에, 병행적으로 또는 순차적으로 둘 이상의 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 일 실시 형태에서, 작용제들은 세포 내에 또는 대상체의 체내에 동시에 존재하거나, 또는 그들의 생물학적 또는 치료적 효과를 동시에 발휘한다. 일 실시 형태에서, 치료제들은 동일한 조성물 또는 단위 투여 형태로 존재한다. 다른 실시 형태에서, 치료제들은 별개의 조성물 또는 단위 투여 형태로 존재한다. 소정 실시 형태에서, 제2 치료제를 투여하기 전에(예를 들어, 수 분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 전에), 그와 동시에, 또는 그 후에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후에) 제1 작용제가 투여될 수 있다.
본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예컨대 글리코폴리펩티드, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)에 의한 치료는 화학요법, 방사선 요법, 및/또는 효과를 향상시키기 위한 다른 면역요법과 병용될 수 있다.
일부 경우에, 둘 이상의 본 발명의 덱틴-2 자극제가 서로 공동투여된다. 예를 들어, 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드가 하기 중 하나 이상과 공동투여될 수 있다: (i) 합성 덱틴-2 자극 당중합체 또는 이의 모방체(예를 들어, 글리코폴리펩티드); (ii) 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체, 및 (iii) 알파-만노시다제 클래스 1 억제제. 일부 경우에, 합성 덱틴-2 자극 당중합체 또는 이의 모방체(예를 들어, 글리코폴리펩티드)는 하기 중 하나 이상과 공동투여될 수 있다: (i) 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드; (ii) 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체, 및 (iii) 알파-만노시다제 클래스 1 억제제. 일부 경우에, 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체는 하기 중 하나 이상과 공동투여될 수 있다: (i) 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드; (ii) 합성 덱틴-2 자극 당중합체 또는 이의 모방체(예를 들어, 글리코폴리펩티드), 및 (iii) 알파-만노시다제 클래스 1 억제제. 일부 경우에, 알파-만노시다제 클래스 1 억제제는 하기 중 하나 이상과 공동투여될 수 있다: (i) 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드; (ii) 합성 덱틴-2 자극 당중합체 또는 이의 모방체(예를 들어, 글리코폴리펩티드), 및 (iii) 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체.
덱틴-2 자극제와 병용하여(그와 공동투여되어) 사용될 수 있는 세포독성제의 한 부류는 화학치료제이다. 예시적인 화학치료제에는 알데스류킨, 알트레타민, 아미포스틴, 아스파라기나제, 블레오마이신, 카페시타빈, 카르보플라틴, 카르무스틴, 클라드리빈, 시사프리드, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, 시타라빈, 다카르바진(DTIC), 닥티노마이신, 도세탁셀, 독소루비신, 드로나비놀, 듀오카르마이신, 에토포시드, 필그라스팀, 플루다라빈, 플루오로우라실, 젬시타빈, 그라니세트론, 하이드록시우레아, 이다루비신, 이포스파미드, 인터페론 알파, 이리노테칸, 란소프라졸, 레바미솔, 류코보린, 메게스트롤, 메스나, 메토트렉세이트, 메토클로프라미드, 미토마이신, 미토탄, 미톡산트론, 오메프라졸, 온단세트론, 파클리탁셀(TAXOLTM), 필로카르핀, 프로클로로페라진, 리툭시맙, 사프로인, 타목시펜, 탁솔, 토포테칸 하이드로클로라이드, 트라스투주맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴 및 비노렐빈 타르트레이트가 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)는 암 표적화제(예를 들어, 암 항원에 특이적으로 결합하는 작용제, 예를 들어 종양 세포 마커에 대해 선택적인 세포-특이적 항체)와의 병용 요법으로 사용된다(즉, 공동투여된다). 임의의 편리한 암 세포 표적화제가 사용될 수 있다. 일부 경우에, 암 세포 표적화제는 암 세포의 암 항원(예를 들어, CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD30, CD33, CD38, CD44, CD47, CD52, CD56, CD70, CD96, CD97, CD99, CD123, CD279(PD-1), CD274(PD-L1), EpCam, EGFR, 17-1A, HER2, CD117, C-Met, PTHR2, HAVCR2(TIM3), 및 SIRPA)에 특이적으로 결합하는 특이적 결합제(예를 들어, 폴리펩티드, 예컨대 암 항원에 특이적인 항원 결합 영역을 포함하는 항체)이다. 이와 같이, 일부 경우에, 본 발명의 방법은 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)와 CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD30, CD33, CD38, CD44, CD47, CD52, CD56, CD70, CD96, CD97, CD99, CD123, CD279(PD-1), CD274(PD-L1), EpCam, EGFR, 17-1A, HER2, CD117, C-Met, PTHR2, HAVCR2(TIM3), 및 SIRPA로부터 선택되는 항원(예를 들어, 암 항원)에 특이적으로 결합하는 특이적 결합제(예를 들어, 폴리펩티드, 예컨대 암 항원에 특이적인 항원 결합 영역을 포함하는 항체)인 암 세포 표적화제를 공동투여하는 단계를 포함한다.
일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)는 세툭시맙(EGFR에 결합함), 파니투무맙(EGFR에 결합함), 리툭시맙(CD20에 결합함), 트라스투주맙(HER2에 결합함), 퍼투주맙(HER2에 결합함), 알렘투주맙(CD52에 결합함), 브렌툭시맙(CD30에 결합함), 토시투모맙 이브리투모맙, 겜투주맙, 이브리투모맙, 및 에드레콜로맙(17-1A에 결합함) 중 하나 이상과의 병용 요법으로 사용된다(공동투여된다).
일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)는 면역조절제와의 병용 요법으로 사용된다(공동투여된다). 임의의 편리한 면역조절제가 사용될 수 있다. 일부 경우에, 면역조절제는 하기로부터 선택된다: 항-CTLA4 항체; 항-PD-1/PD-L1 작용제(예를 들어, 항-PD-1 항체, PD-1-결합 시약, 예컨대 PD-L1 또는 PD-L2 엑토도메인, 항-PD-L1 항체, PD-L1-결합 시약, 예컨대 PD-1 엑토도메인 등); CD40 효능제(예를 들어, CD40L); 4-1BB 조절제(예를 들어, 4-1BB-효능제); 항-CD47/SIRPA 작용제(예를 들어, 항-CD47 항체, CD47-결합 시약, 예컨대 SIRPA 엑토도메인, 항-SIRPA 항체, SIRPA-결합 시약, 예컨대 CD47 엑토도메인 등); TIM3 및/또는 CEACAM1의 억제제; TIM3 및/또는 CEACAM1의 억제제; BTLA 및/또는 CD160의 억제제 등.
본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)와 공동투여될 수 있는 적합한 작용제는 (i) CD40 효능제(예를 들어, CD40L 및/또는 효능성 항-CD40 항체), (ii) 전염증성 사이토카인(예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마(IFNγ) 등), (iii) 톨-유사 수용체(TLR) 효능제(예를 들어, CpG ODN, 폴리이노신산:폴리사이티딜산("폴리 I:C", TLR-3 효능제) 등), (iv) 인돌아민 2,3-다이옥시게나제(IDO) 억제제, (v) 관문 분자를 중화시키는 작용제(즉, 관문 차단제)(예를 들어, 항-CTLA-4 항체, 예를 들어 이필리무맙; 항-PD-1 항체; 항-PD-L1 항체 등), (vi) T 세포-관련 공동자극성 분자(예를 들어, CD27, CD28, 4-BBL 등), (vii) NFkB 활성화제, 및 (viii) 골수성 세포에 의해 덱틴-2 발현을 유도하는 작용제(예를 들어, TNFα, IFNγ, 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF) 등)를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
따라서, 일부 경우에, 공동투여되는 치료제들 중 하나는 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)를 포함하는 조성물이며, 이것은 (i) CD40 효능제(예를 들어, CD40L 및/또는 효능성 항-CD40 항체), (ii) 전염증성 사이토카인(예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마(IFNγ) 등), (iii) 톨-유사 수용체(TLR) 효능제(예를 들어, CpG ODN, 폴리이노신산:폴리사이티딜산("폴리 I:C", TLR-3 효능제) 등), (iv) 인돌아민 2,3-다이옥시게나제(IDO) 억제제, (v) 관문 분자를 중화시키는 작용제(예를 들어, 항-CTLA-4 항체, 예를 들어 이필리무맙; 항-PD-1 항체; 항-PD-L1 항체), (vi) T 세포-관련 공동자극성 분자(예를 들어, CD27, CD28, 4-BBL 등), (vii) NFkB 활성화제, 및 (viii) 골수성 세포에 의해 덱틴-2 발현을 유도하는 작용제(예를 들어, TNFα, IFNγ, 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF) 등)로부터 선택되는 하나 이상의 작용제와 공동투여된다. 일부 경우에, 전염증성 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, G-CSF, 또는 GM-CSF이다. 일부 경우에, 공동투여되는 치료제들 중 하나는 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)를 포함하는 조성물이며, 이것은 GM-CSF, TNFα, 또는 IFNγ와 공동투여된다. 일부 경우에, 공동투여되는 치료제들 중 하나는 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)를 포함하는 조성물이며, 이것은 GM-CSF와 공동투여된다. 일부 경우에, 공동투여되는 치료제들 중 하나는 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제)를 포함하는 조성물이며, 이것은 IFNγ와 공동투여된다.
일부 경우에, 본 발명의 치료제(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제, 예를 들어 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제를 포함하는 조성물)는 CD40 효능제(예를 들어, CD40L 및/또는 효능성 항-CD40 항체)와 공동투여된다. 일부 경우에, 본 발명의 치료제(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제, 예를 들어 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제를 포함하는 조성물)는 전염증성 사이토카인(예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마(IFNγ) 등)과 공동투여된다.
일부 경우에, 본 발명의 치료제(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제, 예를 들어 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제를 포함하는 조성물)는 톨-유사 수용체(TCR) 효능제(예를 들어, CpG ODN, 폴리이노신산:폴리사이티딜산("폴리 I:C", TLR-3 효능제) 등)와 공동투여된다. 일부 경우에, 본 발명의 치료제(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제, 예를 들어 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제를 포함하는 조성물)는 인돌아민 2,3-다이옥시게나제(IDO) 억제제와 공동투여된다. 일부 경우에, 본 발명의 치료제(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제, 예를 들어 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제를 포함하는 조성물)는 관문 분자를 중화시키는 작용제(예를 들어, 항-CTLA-4 항체, 예를 들어 이필리무맙; 항-PD-1 항체; 항-PD-L1 항체)와 공동투여된다.
일부 경우에, 본 발명의 치료제(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제, 예를 들어 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제를 포함하는 조성물)는 T 세포-관련 공동자극성 분자(예를 들어, CD27, CD28, 4-BBL 등)와 공동투여된다. 일부 경우에, 본 발명의 치료제(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제, 예를 들어 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제를 포함하는 조성물)는 NFkB 활성화제와 공동투여된다. 일부 경우에, 본 발명의 치료제(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제, 예를 들어 직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 덱틴-2 결합 당중합체, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드, 덱틴-2 결합 글리칸, 예를 들어 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸, 및/또는 덱틴-2 항체를 포함하는 조성물, 또는 간접 덱틴-2 자극제, 예컨대 알파-만노시다제 클래스 I 억제제를 포함하는 조성물)는 골수성 세포에 의해 덱틴-2 발현을 유도하는 작용제(예를 들어, TNFα, IFNγ, 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF) 등)와 공동투여된다.
덱틴-2 자극제에 의한 치료는 다른 활성제, 예컨대 항생제, 사이토카인, 항바이러스제 등과 병용(공동투여)될 수 있다. 항생제의 부류는 하기를 포함한다: 페니실린, 예를 들어 페니실린 G, 페니실린 V, 메티실린, 옥사실린, 카르베니실린, 나프실린, 암피실린 등; β-락타마제 억제제, 세팔로스포린, 예를 들어 세파클로르, 세파졸린, 세푸록심, 목살락탐 등과 병용된 페니실린; 카르바페넴; 모노박탐; 아미노글리코시드; 테트라사이클린; 마크로라이드; 리코마이신; 폴리믹신; 설폰아미드; 퀴놀론; 클로람페니칼; 메트로니다졸; 스펙티노마이신; 트리메토프림; 반코마이신; 등. 사이토카인이 또한 포함될 수 있으며, 이에는, 예를 들어 인터페론 γ, 종양 괴사 인자α, 인터류킨 12 등이 있다. 항바이러스제, 예를 들어 아시클로비르, 간시클로비르 등이 또한 치료에 사용될 수 있다.
세포 및/또는 조성물 투여. 일부 경우에, 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포)가 개체 내로 이식된다(즉, 개체에게 투여된다). 일부 경우에, 세포는 사전에 일정 기간 동안 배양된다. 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포)가 단독으로, 또는, 예를 들어 이들이 이식되고 있는 조직(예를 들어, 표적 기관, 종양 조직, 혈류 등)에서의 그들의 성장 및/또는 조직화를 지지하기에 적합한 기질 또는 매트릭스와 함께 개체에게 제공될(즉, 개체 내로 투여될) 수 있다. 일부 실시 형태에서, 매트릭스는 스캐폴드(예를 들어, 기관 스캐폴드)이다. 일부 실시 형태에서, 1x103개 이상의 세포가 투여될 것이며, 예를 들어 5x103개 이상의 세포, 1x104개 이상의 세포, 5x104개 이상의 세포, 1x105개 이상의 세포, 5x105개 이상의 세포, 1 x 106개 이상의 세포, 5x106개 이상의 세포, 1x107개 이상의 세포, 5x107개 이상의 세포, 1x108개 이상의 세포, 5x108개 이상의 세포, 1 x 109개 이상의 세포, 5x109개 이상의 세포, 또는 1x1010개 이상의 세포이다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 세포는 마이크로캐리어 상에서(예를 들어, 생분해성 마이크로캐리어 상에서 성장된 세포) 개체에게 투여된다.
본 발명의 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포) 및/또는 조성물(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물)은 임의의 생리학적으로 허용되는 부형제(예를 들어, 윌리엄 E 배지) 중에 투여될 수 있으며, 예를 들어 여기서 이식된 세포는 생존 및 기능(예를 들어, 기관 재구성)에 적절한 부위를 발견할 수 있다. 세포 및/또는 조성물(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물)은 임의의 편리한 방법(예를 들어, 주사, 카테터 등)에 의해 도입될 수 있다. 세포 및/또는 조성물은 리포좀 또는 다른 생분해성 작제물 내로 캡슐화될 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극제는 리포좀, 미세입자, 또는 나노입자 내에 투여되거나 이것에 접합된다.
본 발명의 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포) 및/또는 조성물(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물)은 하기 경로들 중 임의의 경로를 통해 개체에게 도입될(즉, 개체에게 투여될) 수 있다: 비경구, 피하(s.c.), 정맥내(i.v.), 두개내(i.c.), 척수내, 안구내, 진피내(i.d.), 근육내(i.m.), 림프내(i.l.), 또는 척수액내. 세포 및/또는 조성물은 전신적으로(예를 들어, 비경구, s.c., i.v., 경구 등) 또는 국부적으로(예를 들어, 직접 국부 주사, 종양 및/또는 종양 절제 부위 내로의 또는 그 부근의 국부 주사 등) 개체에게 도입될 수 있다. 세포 및/또는 조성물은 주사(예를 들어, 전신 주사, 직접 국부 주사, 종양 및/또는 종양 절제 부위 내로의 또는 그 부근의 국부 주사 등), 카테터 등에 의해 도입될 수 있다. 국부 전달(예를 들어, 종양, 암 부위, 및/또는 종양 절제 부위로의 전달)을 위한 방법의 예에는, 예를 들어 하기에 의한 방법이 포함된다: 예를 들어 관절, 종양, 또는 기관 내로, 또는 관절, 종양, 또는 기관 부근에, 예를 들어 주사기에 의한, 볼루스 주사에 의한 방법; 예를 들어 대류를 이용한, 예를 들어 캐뉼화 삽입에 의한, 연속 주입에 의한 방법(예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함된 미국 특허 출원 공개 제20070254842호 참조); 또는 세포가 상부에 가역적으로 부착된 장치를 이식함에 의한 방법(예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함된 미국 특허 출원 공개 제20080081064호 및 제20090196903호 참조).
본 발명의 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포) 및/또는 조성물(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물)은 국소, 경구, 비경구, 폐내, 및 비강내 등을 포함한 임의의 적합한 수단에 의해 개체에게 도입될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내(볼루스 또는 느린 점적), 동맥내, 복막내, 수강내 또는 피하 투여를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 세포 및 조성물은 의학적으로 허용되는 임의의 방식으로 투여될 수 있다. 이것은 비경구 경로에 의한 주사, 예컨대 정맥내, 혈관내, 동맥내, 피하, 근육내, 종양내, 복막내, 뇌실내, 경막외내 주사, 또는 기타뿐만 아니라 경구, 비강, 안구, 직장, 또는 국소 주사를 포함할 수 있다. 지속 방출 투여가 또한 본 명세서에 구체적으로 포함되는데, 이는 데포 주사(depot injection) 또는 침식성 이식물(erodible implant)과 같은 수단에 의해 행해진다. 국부화된 전달이 또한 고려되는데, 이에는, 예를 들어 카테터를 통해 하나 이상의 동맥, 예컨대 신장 동맥 또는 국부화된 종양을 제공하는 혈관으로의 전달이 있다.
일부 경우에, 본 발명의 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포) 및/또는 조성물(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물)은 종양 및/또는 종양 절제 부위 내로 또는 그 부근에 국부 주사에 의해 투여된다. 일부 경우에, 본 발명의 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포) 및/또는 조성물(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물)은 (예를 들어, 일부 경우에는, 리포좀, 미세입자, 또는 나노입자로) 종양 및/또는 종양 절제 부위 내로 또는 그 부근에 국부 주사에 의해 투여된다.
대상체에 대한 치료 투여 횟수는 다양할 수 있다. 세포 및/또는 조성물을 개체 내로 도입하는 것(세포 및/또는 조성물을 투여하는 것)은 1회 사건일 수 있지만; 소정 상황에서, 그러한 치료는 제한된 기간 동안 개선을 유도할 수 있고, 지속적인 일련의 반복된 치료를 필요로 할 수 있다. 다른 상황에서는, 효과가 관찰되기 전에 세포 및/또는 조성물의 다회 투여가 필요할 수 있다. 당업자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 정확한 프로토콜은 질병 또는 질환, 질병의 병기 및 치료되는 개체의 파라미터에 좌우된다.
"치료적 유효 용량" 또는 "치료적 용량"은 원하는 임상 결과를 달성하기에(즉, 치료적 효능을 달성하기에) 충분한 양이다. 치료적 유효 용량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적상, 본 발명의 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포) 및/또는 조성물(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물)의 치료적 유효 용량은 개체에게 투여될(예를 들어, 개체 내로 이식될) 때, 예를 들어 항원 세포(암 세포)에 대한 면역 반응을 유도함으로써, 질병 상태를 고식, 개선, 안정화, 역전, 예방하거나, 그의 진행을 둔화 또는 지연시키기에(예를 들어, 암 세포의 수, 종양 크기, 종양 성장, 종양 존재, 암 존재 등을 감소시키기에) 충분한 양이다.
덱틴-2 자극 조성물의 치료적 유효 용량은 사용되는 특정 작용제에 좌우될 수 있지만, 각각의 작용제에 대해 통상 8 mg/㎏ 체중 이상(예를 들어, 8 mg/㎏ 이상, 10 mg/㎏ 이상, 15 mg/㎏ 이상, 20 mg/㎏ 이상, 25 mg/㎏ 이상, 30 mg/㎏ 이상, 35 mg/㎏ 이상, 또는 40 mg/㎏ 이상), 또는 각각의 작용제에 대해 10 mg/㎏ 내지 40 mg/㎏(예를 들어, 10 mg/㎏ 내지 35 mg/㎏, 또는 10 mg/㎏ 내지 30 mg/㎏)이다. 특정 혈청 수준을 달성 및/또는 유지하는 데 필요한 용량은 용량간의 시간에 비례하고, 투여된 용량 횟수에 반비례한다. 따라서, 투여 빈도가 증가함에 따라, 필요한 용량은 감소한다. 투여 전략의 최적화가 당업자에 의해 용이하게 이해되고 실시될 것이다. 상기 열거된 모든 치료적 유효 용량에 대해, 하나 초과의 작용제(예를 들어, 둘 이상의 덱틴-2 자극제, 다른 항암제, 예컨대 종양 표적화 항체 또는 면역조절제와 공동투여되는 덱틴-2 자극제)가 사용될 때, 각각의 작용제에 대한 용량은 다른 작용제와 독립적일 수 있다. (용량의 독립성을 예시하기 위한) 예시적인 예로서, 하나의 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극제의 치료적 용량은 75 ug/㎖ 내지 250 ug/㎖일 수 있으며, 한편 면역조절제의 치료적 용량은 40 ug/㎖ 내지 100 ug/㎖ 일 수 있다.
투여량 및 빈도는 환자에서 덱틴-2 자극제의 반감기에 따라 변동될 수 있다. 그러한 가이드라인은, 예를 들어 항체 단편의 사용에 있어서, 덱틴-2 자극제의 사용에 있어서, 활성제의 분자량에 대해 조정될 것임이 당업자에 의해 이해될 것이다. 투여량은 또한 국부화된 투여, 예를 들어 비강내, 흡입 등에 대해, 또는 전신 투여, 예를 들어 i.m., i.p., i.v. 등에 대해 변동될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포)의 치료적 유효 용량은 1x103개 이상의 세포(예를 들어, 5x103개 이상, 1x104개 이상, 5x104개 이상, 1x105개 이상, 5x105개 이상, 1x106개 이상, 2x106개 이상, 5x106개 이상, 1x107개 이상, 5x107개 이상, 1x108개 이상, 5x108개 이상, 1x109개 이상, 5x109개 이상, 또는 1x1010개 이상의 세포)이다.
일부 실시 형태에서, 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포)의 치료적 유효 용량은 1x103개의 세포 내지 1x1010개의 세포(예를 들어, 5x103개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 1x104개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 5x104개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 1x105개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 5x105개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 1x106개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 5x106개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 1x107개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 5x107개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 1x108개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 5x108개의 세포 내지 1x1010개의 세포, 5x103개의 세포 내지 5x109개의 세포, 1x104개의 세포 내지 5x109개의 세포, 5x104개의 세포 내지 5x109개의 세포, 1x105개의 세포 내지 5x109개의 세포, 5x105개의 세포 내지 5x109개의 세포, 1x106개의 세포 내지 5x109개의 세포, 5x106개의 세포 내지 5x109개의 세포, 1x107개의 세포 내지 5x109개의 세포, 5x107개의 세포 내지 5x109개의 세포, 1x108개의 세포 내지 5x109개의 세포, 5x108개의 세포 내지 5x109개의 세포, 5x103개의 세포 내지 1x109개의 세포, 1x104개의 세포 내지 1x109개의 세포, 5x104개의 세포 내지 1x109개의 세포, 1x105개의 세포 내지 1x109개의 세포, 5x105개의 세포 내지 1x109개의 세포, 1x106개의 세포 내지 1x109개의 세포, 5x106개의 세포 내지 1x109개의 세포, 1x107개의 세포 내지 1x109개의 세포, 5x107개의 세포 내지 1x109개의 세포, 1x108개의 세포 내지 1x109개의 세포, 5x108개의 세포 내지 1x109개의 세포, 5x103개의 세포 내지 5x108개의 세포, 1x104개의 세포 내지 5x108개의 세포, 5x104개의 세포 내지 5x108개의 세포, 1x105개의 세포 내지 5x108개의 세포, 5x105개의 세포 내지 5x108개의 세포, 1x106개의 세포 내지 5x108개의 세포, 5x106개의 세포 내지 5x108개의 세포, 1x107개의 세포 내지 5x108개의 세포, 5x107개의 세포 내지 5x108개의 세포, 또는 1x108개의 세포 내지 5x108개의 세포)의 범위이다.
일부 실시 형태에서, 투여되는 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포)의 농도는 1 x 105개의 세포/㎖ 내지 1 x 109개의 세포/㎖(예를 들어, 1 x 105개의 세포/㎖ 내지 1 x 108개의 세포/㎖, 5 x 105개의 세포/㎖ 내지 1 x 108개의 세포/㎖, 5 x 105개의 세포/㎖ 내지 5 x 107개의 세포/㎖, 1 x 106개의 세포/㎖ 내지 1 x 108개의 세포/㎖, 1 x 106개의 세포/㎖ 내지 5 x 107개의 세포/㎖, 1 x 106개의 세포/㎖ 내지 1 x 107개의 세포/㎖, 1 x 106개의 세포/㎖ 내지 6 x 106개의 세포/㎖, 또는 2 x 106개의 세포/㎖ 내지 8 x 106개의 세포/㎖)의 범위이다.
일부 실시 형태에서, 투여되는 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포)의 농도는 1 x 105개의 세포/㎖ 이상(예를 들어, 1 x 105개의 세포/㎖ 이상, 2 x 105개의 세포/㎖ 이상, 3 x 105개의 세포/㎖ 이상, 4 x 105개의 세포/㎖ 이상, 5 x 105개의 세포/㎖ 이상, 6 x 105개의 세포/㎖ 이상, 7 x 105개의 세포/㎖ 이상, 8 x 105개의 세포/㎖ 이상, 9 x 105개의 세포/㎖ 이상, 1 x 106개의 세포/㎖ 이상, 2 x 106개의 세포/㎖ 이상, 3 x 106개의 세포/㎖ 이상, 4 x 106개의 세포/㎖ 이상, 5 x 106개의 세포/㎖ 이상, 6 x 106개의 세포/㎖ 이상, 7 x 106개의 세포/㎖ 이상, 또는 8 x 106개의 세포/㎖ 이상)이다.
본 발명의 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포) 및/또는 조성물(예를 들어, 본 발명의 덱틴-2 자극제를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물)(즉, 본 발명의 세포 및/또는 본 발명의 조성물)은 인간 투여를 위하여 충분히 멸균된 조건 하에서 준비된 등장성 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 형태로 공급될 수 있다. 의약 제형에서의 일반적인 원리에 대해서, 독자는 문헌[Cell Therapy: Stem Cell Transplantation, Gene Therapy, and Cellular Immunotherapy, by G. Morstyn & W. Sheridan eds, Cambridge University Press, 1996]; 및 문헌[Hematopoietic Stem Cell Therapy, E. D. Ball, J. Lister & P. Law, Churchill Livingstone, 2000]을 참조한다. 본 조성물의 세포 부형제 및 임의의 동반되는 요소의 선택은 투여에 사용되는 경로 및 장치에 따라 조정될 것이다. 본 조성물은 또한 세포의 생착 또는 기능적 동원을 촉진하는 하나 이상의 다른 성분을 포함하거나 또는 이것이 동반될 수 있다. 적합한 성분은 세포, 또는 상보적 세포 유형의 접착을 지지하거나 촉진하는 매트릭스 단백질을 포함한다.
상기 언급된 바와 같이, 덱틴-2 자극제는 약제학적으로 허용되는 담체(본 발명의 작용제와 배합되어 그의 적용을 촉진시키는 하나 이상의 천연 또는 합성, 유기 또는 무기 성분)로 제형화될 수 있다. 적합한 담체는 멸균 식염수를 포함하지만, 약제학적으로 허용되는 것으로 알려진 다른 수성 및 비수성 등장성 멸균 용액 및 멸균 현탁액이 당업자에게 알려져 있다. "유효량"은 질병에 걸린, 퇴행성 또는 손상된 상태의 진행을 개선 또는 지연시킬 수 있는 양을 지칭한다. 유효량은 개체에 기초하여 결정될 수 있으며, 부분적으로는, 치료하고자 하는 증상 및 추구하는 결과의 고려에 기초할 것이다. 유효량은, 그러한 인자를 사용하고 일상 실험을 넘지 않는 실험을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.
덱틴-2 자극제는 활성 치료제 및 다른 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물로서 투여될 수 있다. 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료적 응용에 좌우된다. 조성물은 또한, 원하는 제형에 따라, 약제학적으로 허용되는 비독성 담체 또는 희석제를 포함할 수 있는데, 이들은 동물 또는 인간 투여를 위한 약제학적 조성물을 제형화하는 데 통상 사용되는 비히클로서 규정된 것들이다. 희석제는 배합물의 생물학적 활성에 영향을 주지 않도록 선택된다. 그러한 희석제의 예는 증류수, 생리학적 인산염 완충 식염수, 링거 용액, 덱스트로스 용액, 및 행크 용액이다. 게다가, 약제학적 조성물 또는 제형은 또한 다른 담체, 애쥬번트, 또는 비독성, 비치료적, 비면역원성 안정제 등을 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 또한 느리게 대사되는 큰 거대분자, 예컨대 단백질, 다당류, 예컨대 키토산, 폴리락트산, 폴리글리콜산 및 공중합체(예컨대, 라텍스 작용화된 Sepharose™, 아가로스, 셀룰로스 등), 중합체 아미노산, 아미노산 공중합체, 및 지질 응집체(예컨대, 오일 소적 또는 리포좀)를 포함할 수 있다.
담체는, 직접 또는 링커 기를 통한 공유 결합, 및 비공유 회합을 포함한 다양한 방식으로 작용제를 보유할 수 있다. 적합한 공유-결합 담체는 단백질, 예컨대 알부민, 펩티드, 및 다당류, 예컨대 아미노덱스트란을 포함하며, 이들 각각은 모이어티의 부착을 위한 다수의 부위를 갖는다. 담체는 또한 비공유 회합, 예컨대 비공유 결합에 의해 또는 캡슐화에 의해 덱틴-2 자극제를 보유할 수 있다. 담체의 성질은 본 발명의 목적상 가용성 또는 불용성일 수 있다. 당업자는 덱틴-2 자극제에 결합하기에 적합한 다른 담체에 대해 알고 있거나, 또는 일상 실험을 사용하여 이를 확인할 수 있을 것이다.
허용되는 담체, 부형제, 또는 안정제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이며, 완충제, 예컨대 인산염, 시트르산염, 및 다른 유기 산; 항산화제(아스코르브산 및 메티오닌을 포함함); 방부제(예컨대, 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함한 다른 탄수화물; 킬레이팅제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대 이온, 예컨대 나트륨; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 TWEEN™, PLURONIC™ 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다. 생체내 투여에 사용되는 제형은 멸균성이어야 한다. 이는 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.
활성 성분은 또한, 예를 들어 코아세르베이션 기법에 의해 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각, 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에, 콜로이드상 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에, 또는 매크로에멀젼 내에 봉입될 수 있다. 그러한 기법은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.
조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서의 주사제로서 제조될 수 있으며; 주사 전에 액체 비히클 중 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 형태가 또한 제조될 수 있다. 상기 제제는 또한 상기에 논의된 바와 같이 향상된 애쥬번트 효과를 위해 리포좀 또는 미세입자, 예컨대 폴리락티드, 폴리글리콜라이드, 또는 공중합체 중에 유화 또는 캡슐화될 수 있다(문헌[Langer, Science 249: 1527, 1990] 및 문헌[Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28: 97-119, 1997]). 본 발명의 작용제는 활성 성분의 지속 방출 또는 펄스식(pulsatile) 방출을 가능하도록 하는 방식으로 제형화될 수 있는 데포 주사 또는 이식물 제제의 형태로 투여될 수 있다. 약제학적 조성물은 일반적으로, 멸균성이고, 실질적으로 등장성이고, 미국 식품 의약국(U.S. Food and Drug Administration)의 모든 GMP(Good Manufacturing Practice) 규정을 완전히 준수하는 것으로 제형화된다.
본 발명의 덱틴-2 자극제는 편리한 전달 방법을 사용하여 전달(투여)될 수 있다. 예를 들어, 암 약물의 생체분포를 개선하기 위하여, 혈류에서의 그들의 순환 시간을 증가시키기 위한 최적의 크기 및 표면 특성을 위해 나노입자가 설계되어 왔다. 이들은 또한 종양의 독특한 병태생리, 예컨대 그들의 향상된 투과성 및 체류 효과 및 종양 미세환경을 선택적으로 사용함으로써 그들의 로딩된 활성 약물을 암 세포에 운반할 수 있다. 이러한 수동 표적화 기전에 더하여, 선택된 종양 표적에 대해 유도된 리간드 또는 항체를 사용하는 능동 표적화 전략이 이들 치료적 나노입자의 특이성을 증폭시킨다(예를 들어, 문헌[Cho et al., Clin Cancer Res. 2015 Oct 15;21(20):4499-501] 참조). 일부 경우에, 본 발명의 덱틴-2 자극제는 무담체를 사용하여 개체에게 투여된다. 본 발명의 덱틴-2 자극제의 전달을 위한 나노담체의 예에는 하기가 포함되지만 이로 한정되지 않는다: (a) 약물이 중합체에 접합되거나 중합체 내에 캡슐화된 중합체 나노입자; (b) 중합체 미셀: 수용액 중에서 나노크기 코어/셸 구조로 형성되는 양친매성 블록 공중합체(소수성 코어 영역은 소수성 약물에 대한 저장소로서의 역할을 하는 반면, 친수성 셸 영역은 소수성 코어를 안정화시키고 중합체가 수용성이 되게 함); (c) 덴드리머: 중심 코어로부터 방사상으로 나오는 다수의 고분지형 단량체로 구성된, 나노미터 치수의 합성 중합체 거대분자; (d) 리포좀: 수성 부피가 막 지질 이중층에 의해 완전히 에워싸인, 지질 이중층으로 구성된 자기-조립 구조; (e) 바이러스-기반 나노입자: 일반적으로 구조는 다가의 자기-조립 구조인 단백질 케이지임; 및 (f) 탄소 나노튜브: 벤젠 고리로 구성된 탄소 실린더.
덱틴-2 자극제의 독성은 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 절차에 의해, 예를 들어 LD50(집단의 50%에 대한 치사 용량) 또는 LD100(집단의 100%에 대한 치사 용량)을 결정함으로써 결정될 수 있다. 독성 효과와 치료적 효과 사이의 용량비가 치료적 지수이다. 이들 세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 획득된 데이터는 (예를 들어, 인간에서 사용하기 위한) 치료적 투여량 범위 및/또는 아-치료적(sub-therapeutic) 투여량 범위를 추가로 최적화 및/또는 규정하는 데 사용될 수 있다. 정확한 제형, 투여 경로 및 투여량은 환자의 상태를 고려하여 개개인의 의사에 의해 선택될 수 있다.
본 발명의 방법 및 조성물의 세포(예를 들어, 덱틴-2가 자극된 골수성 세포; 덱틴-2가 자극된 APC; 로딩된 APC, 예를 들어 로딩된 DC; 로딩된 대식세포; 로딩된 B-세포; 및/또는 접촉된/자극된 T 세포)는 생존을 향상시키고, 증식을 제어하고, 등등을 행하도록 유전자 변형될 수 있다. 적합한 벡터, 상동성 재조합, 또는 다른 적절한 기법에 의한 형질감염 또는 형질도입에 의해 세포를 유전자 변경시켜, 이들이 관심 유전자를 발현시킬 수 있도록 한다. 일부 실시 형태에서, 선택가능한 마커가 도입되어, 원하는 세포의 더 큰 순도를 제공한다.
본 발명의 실시에 유용한 일반적인 기법의 추가의 상세한 설명을 위하여, 진료의는 세포 생물학, 조직 배양, 및 발생학에서의 표준 교재 및 보고서를 참조할 수 있다. 조직 배양 및 줄기 세포에 관하여, 독자는 문헌[Teratocarcinomas and embryonic stem cells: A practical approach (E. J. Robertson, ed., IRL Press Ltd. 1987)]; 문헌[Guide to Techniques in Mouse Development (P. M. Wasserman et al. eds., Academic Press 1993)]; 문헌[Embryonic Stem Cell Differentiation in Vitro (M. V. Wiles, Meth. Enzymol. 225:900, 1993)]; 문헌[Properties and uses of Embryonic Stem Cells: Prospects for Application to Human Biology and Gene Therapy (P. D. Rathjen et al., Reprod. Fertil. Dev. 10:31, 1998)]을 참조하면 좋을 수 있다.
키트
또한, 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 키트가 제공된다. 본 발명의 키트는 본 발명의 방법을 수행하기 위한 성분 및 조성물의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 키트는 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 본 발명의 덱틴-2 자극제(예를 들어, 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드, 예컨대 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸; 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드, 예컨대 진균 세포벽 추출물; 합성 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, 글리코폴리펩티드); 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체, 예컨대 가용성 항체(예를 들어, 단일클론 항체) 또는 고체 지지체 상에 고정화된 항체; 알파-만노시다제 클래스 1 억제제, 예컨대 키푸넨신; 또는 1-데옥시만노지리마이신, 또는 MAN1B1, MAN1A1, MAN1A2, 및 MAN1C1로부터 선택되는 하나 이상의 단백질의 발현을 특이적으로 감소시키는 RNAi 작용제 또는 유전자 편집제 등); APC, 예를 들어 DC, 및/또는 T 세포의 단리, 배양, 생존, 또는 투여를 위한 성분; APC, 예를 들어 DC와 접촉하기 위한 시약(예를 들어, 완충제); T 세포와 접촉하기 위한 시약(예를 들어, 완충제); 표적 항원을 본 발명의 항체 조성물과 접촉시켜 면역 복합체를 생성하기 위한 시약(예를 들어, 완충제); 및 이들의 임의의 조합.
일부 실시 형태에서, 키트는 직접 덱틴-2 자극제(예를 들어, 덱틴-2에 대한 천연 존재 리간드; 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드, 예컨대 만난 다당류 또는 다른 올리고만노스 글리칸; 덱틴-2에 대한 식물 비유래 천연 존재 리간드, 예컨대 진균 세포벽 추출물; 합성 덱틴-2 자극 당중합체(예를 들어, 글리코폴리펩티드); 덱틴-2 자극 항-덱틴-2 항체, 예컨대 가용성 항체(예를 들어, 단일클론 항체) 또는 고체 지지체 상에 고정화된 항체) 및 약제학적 부형제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 키트는 간접 덱틴-2 자극제(예를 들어, 알파-만노시다제 클래스 1 억제제, 예컨대 키푸넨신; 또는 1-데옥시만노지리마이신, 또는 MAN1B1, MAN1A1, MAN1A2, 및 MAN1C1로부터 선택되는 하나 이상의 단백질의 발현을 특이적으로 감소시키는 RNAi 작용제 또는 유전자 편집제) 및 약제학적 부형제를 포함한다.
상기 성분들에 더하여, 본 발명의 키트는 (소정 실시 형태에서) 본 발명의 방법을 실시하기 위한 설명서를 추가로 포함할 수 있다. 이들 설명서는 다양한 형태로 본 발명의 키트 내에 존재할 수 있으며, 이들 형태 중 하나 이상이 키트 내에 존재할 수 있다. 이들 설명서가 존재할 수 있는 한 가지 형태는 적합한 매체 또는 기재(예를 들어, 정보가 인쇄되는 한 장 또는 여러 장의 종이) 상에, 키트의 패키징 내에, 첨부 문서(package insert) 내에 등에 인쇄된 정보로서의 형태이다. 이들 설명서의 또 다른 형태는 정보가 기록된 컴퓨터 판독가능 매체, 예컨대 디스켓, 콤팩트 디스크(CD), 플래시 드라이브 등이다. 존재할 수 있는 이들 설명서의 또 다른 형태는 이동된 사이트에 있는 정보에 접속하기 위해 인터넷을 통해 사용될 수 있는 웹사이트 주소이다.
본 발명의 예시적인 비제한적인 태양
전술된 본 발명 요지의 태양(실시 형태를 포함함)은 단독으로 또는 하나 이상의 다른 태양 또는 실시 형태와 조합하여 유익할 수 있다. 전술한 설명을 제한함이 없이, 1부터 59까지 번호매겨진 본 발명의 소정의 비제한적인 태양이 하기에 제공된다. 본 명세서를 읽을 때 당업자에게 명백할 바와 같이, 개별적으로 번호가 매겨진 각각의 태양은 선행하거나 뒤따르는 개별적으로 번호가 매겨진 임의의 태양과 함께 사용되거나 그와 조합될 수 있다. 이는, 태양들의 모든 그러한 조합에 대한 뒷받침을 제공하고자 함이며, 하기에 명백하게 제공되는 태양들의 조합으로 제한되지 않는다:
1. 다가 덱틴-2 자극제로서, (a) 덱틴-2에 결합하여 덱틴-2 신호전달을 자극하는 작용제; 및 (b) 항체 및/또는 면역조절제를 포함하며, (a)와 (b)는 서로 접합되어 있는, 다가 덱틴-2 자극제.
2. 1에 있어서, (a)는 항-덱틴-2 항체 또는 이의 항원-결합 영역인, 다가 덱틴-2 자극제.
3. 1에 있어서, (a)는 덱틴-2에 결합하는 만노비오스 글리코폴리펩티드인, 다가 덱틴-2 자극제.
4. 3에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 20 내지 250개의 아미노산 길이의 펩티드를 포함하는, 다가 덱틴-2 자극제.
5. 4에 있어서, 상기 펩티드는 뮤신-유사 펩티드인, 다가 덱틴-2 자극제.
6. 3 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 글리칸 밀도가 적어도 25%인, 다가 덱틴-2 자극제.
7. 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, (b)는 면역조절제인, 다가 덱틴-2 자극제.
8. 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, (b)는 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFNγ, G-CSF, TNFα, 및 GM-CSF로부터 선택되는 사이토카인이거나; 또는 항-CTLA4 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, CD40 효능제, 항-CD47/SIRPA 작용제, 및 4-1BB-효능제로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역조절제인, 다가 덱틴-2 자극제.
9. 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, (b)는 패턴 인식 수용체(PRR)에 대한 자극성 리간드인, 다가 덱틴-2 자극제.
10. 9에 있어서, (b)는 TLR 효능제인, 다가 덱틴-2 자극제.
11. 10에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR7/8 효능제인, 다가 덱틴-2 자극제.
12. 11에 있어서, 상기 TLR7/8 효능제는 T785인, 다가 덱틴-2 자극제.
13. 10에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR2 효능제인, 다가 덱틴-2 자극제.
14. 13에 있어서, 상기 TLR2 효능제는 Pam3Cys인, 다가 덱틴-2 자극제.
15. 1에 있어서, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, (b)는 TLR 효능제인, 다가 덱틴-2 자극제.
16. 15에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR7/8 효능제 또는 TLR2 효능제인, 다가 덱틴-2 자극제.
17. 16에 있어서, 상기 TLR 효능제는 T785인, 다가 덱틴-2 자극제.
18. 16에 있어서, 상기 TLR 효능제는 Pam3Cys인, 다가 덱틴-2 자극제.
19. 암 및/또는 감염성 질병을 가진 개체를 치료하는 방법으로서, 덱틴-2 자극 조성물의 유효량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 덱틴-2 자극 조성물은 (a) 덱틴-2 자극 당중합체; 또는 (b) 다가 덱틴-2 자극제를 포함하며, 상기 다가 덱틴-2 자극제는 (i) 항-덱틴2 항체 또는 덱틴-2 자극 당중합체; 및 (ii) 항체 및/또는 면역조절제를 포함하며, (i)은 (ii)에 접합되어 있고, 덱틴-2 신호전달이 골수성 세포에서 자극됨으로써 상기 개체에서 면역 반응을 자극하는, 방법.
20. 19에 있어서, (a) 또는 (b)의 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하는, 방법.
21. 20에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 20 내지 250개의 아미노산 길이의 펩티드를 포함하는, 방법.
22. 21에 있어서, 상기 펩티드는 뮤신-유사 펩티드인, 방법.
23. 20 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 글리칸 밀도가 적어도 25%인, 방법.
24. 19 내지 23 중 어느 하나에 있어서, (b)의 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 항체에 접합되어 있는, 방법.
25. 24에 있어서, (b)의 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 면역조절제에 접합되어 있는, 방법.
26. 24 또는 25에 있어서, (b)의 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFNγ, G-CSF, TNFα, 및 GM-CSF로부터 선택되는 사이토카인에 접합되어 있는, 방법.
27. 24 또는 25에 있어서, (b)의 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 패턴 인식 수용체(PRR)에 대한 자극성 리간드에 접합되어 있는, 방법.
28. 27에 있어서, 상기 자극성 리간드는 TLR 효능제인, 방법.
29. 28에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR7/8 효능제인, 방법.
30. 29에 있어서, 상기 TLR7/8 효능제는 T785인, 방법.
31. 28에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR2 효능제인, 방법.
32. 31에 있어서, 상기 TLR2 효능제는 Pam3Cys인, 방법.
33. 19 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 국부 투여를 포함하는, 방법.
34. 19 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 전신 투여를 포함하는, 방법.
35. 19 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 CD40 효능제, GM-CSF, TNFα, 및 IFNγ 중 하나 이상과의 공동투여를 포함하는, 방법.
36. 항원 제시 세포(APC)를 자극하는 방법으로서,
시험관내 또는 생체외에서 APC를, 덱틴-2 자극 당중합체를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물과, 상기 APC에서 덱틴-2 신호전달을 향상시키기에 충분한 용량으로 그리고 기간 동안 접촉시킴으로써, 자극된 APC를 생성하는 단계를 포함하는, 방법.
37. 36에 있어서, 상기 자극된 APC를 암 항원과 접촉시켜 항원-접촉된 APC를 생성하는 단계를 포함하는, 방법.
38. 37에 있어서, 상기 암 항원은 암 세포 용해물에 존재하거나 암 세포의 일부인, 방법.
39. 36 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 상기 자극된 APC 또는 상기 항원-접촉된 APC를 개체 내로 도입하는 단계를 포함하는, 방법.
40. 37 또는 38에 있어서, 상기 암 항원은 암을 가진 개체로부터 유래되고, 상기 방법은 상기 항원-접촉된 APC를 상기 개체 내로 도입하는 단계를 포함하는, 방법.
41. 39 또는 40에 있어서, APC는 상기 개체에 대해 자가인, 방법.
42. 36 내지 41 중 어느 하나에 있어서, T 세포를 상기 항원-접촉된 APC와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
43. 42에 있어서, 상기 접촉된 T 세포를 개체 내로 도입하는 단계를 포함하는, 방법.
44. 43에 있어서, 상기 T 세포는 상기 개체에 대해 자가인, 방법.
45. 43 또는 44에 있어서, 상기 항원-접촉된 APC는 상기 개체에 대해 자가인, 방법.
46. 39 내지 45 중 어느 하나에 있어서, 상기 개체는 암을 갖는, 방법.
47. 36 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하는, 방법.
48. 47에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 20 내지 250개의 아미노산 길이의 펩티드를 포함하는, 방법.
49. 48에 있어서, 상기 펩티드는 뮤신-유사 펩티드인, 방법.
50. 47 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 글리칸 밀도가 적어도 25%인, 방법.
51. 36 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 항체 및/또는 면역조절제에 접합되어 있는, 방법.
52. 51에 있어서, 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 면역조절제에 접합되어 있는, 방법.
53. 51 또는 52에 있어서, 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFNγ, G-CSF, TNFα, 및 GM-CSF로부터 선택되는 사이토카인에 접합되어 있는, 방법.
54. 51 또는 52에 있어서, 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 패턴 인식 수용체(PRR)에 대한 자극성 리간드에 접합되어 있는, 방법.
55. 54에 있어서, 상기 자극성 리간드는 TLR 효능제인, 방법.
56. 55에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR7/8 효능제인, 방법.
57. 56에 있어서, 상기 TLR7/8 효능제는 T785인, 방법.
58. 55에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR2 효능제인, 방법.
59. 58에 있어서, 상기 TLR2 효능제는 Pam3Cys인, 방법.
실시예
하기 실시예는 본 발명을 어떻게 형성하고 사용하는지에 관한 완전한 개시 및 설명을 당업자에게 제공하도록 제시되며, 본 발명자들이 그들의 발명으로서 간주하는 것의 범주를 제한하는 것으로 의도되지도, 또는 이들은 하기 실험이 수행된 모든 실험 또는 유일한 실험임을 나타내는 것으로 의도되지도 않는다. 사용된 수치(예를 들어, 양, 온도 등)에 관한 정확도를 보장하기 위하여 노력하였지만, 약간의 실험적 오류 및 편차는 감안해야 한다. 달리 나타내지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이고, 온도는 ℃ 단위이고, 압력은 대기압 또는 대기압 부근이다. 표준 약어가 사용될 수 있으며, 예를 들어 다음과 같다: 실온(RT); 염기쌍(bp); 킬로염기(kb); 피코리터(pl); 초(s 또는 sec); 분(m 또는 min); 시간(h 또는 hr); 일(d); 주(wk 또는 wks); 나노리터(nl); 마이크로리터(ul); 밀리리터(ml); 리터(L); 나노그램(ng); 마이크로그램(ug); 밀리그램(mg); 그램((g), 질량과 관련하여); 킬로그램(㎏); 중력의 상당량((g), 원심분리와 관련하여); 나노몰 농도(nM); 마이크로몰 농도(uM), 밀리몰 농도(mM); 몰농도(M); 아미노산(aa); 킬로염기(kb); 염기쌍(bp); 뉴클레오티드(nt); 근육내(i.m.); 복막내(i.p.); 피하(s.c.) 등.
하기 실험은 덱틴-2 결합을 통해 골수성 세포(예를 들어, 종양-관련 골수성(TAM) 세포, 예컨대 대식세포 및 수지상 세포)를 활성화시키는 다수의 전략의 개발을 보여준다. 하기 실험은 덱틴-2 자극제가 면역억제 TAM 세포를 전염증성 세포 내로 재프로그래밍하는 것을 보여주는데, 이러한 재프로그래밍은 항종양 면역 반응을 유도하고 화학요법(예를 들어, 통상의 화학요법) 및 다른 면역요법(예를 들어, 관문 억제제, CD40 효능제)을 지지하여(예를 들어, 이들과 상승작용하여), 종양 퇴행을 가져온다(도 2e 내지 도 2g, 도 3d 내지 도 3f). 이들 조사결과는 (예를 들어, 현재까지 시험된 대부분의 치료적 중재에 대해 불응성인 것으로 남아 있는 PDAC와 같은 암을 치료하는 데 있어서) 면역-종양학에 주요한 영향을 갖는다.
실시예 1: 덱틴-2 발현.
종양-관련 골수성(TAM) 세포(종양-관련 대식세포 및 수지상 세포(DC))는 다양한 감염성 질병에서 효과적인 적응 면역 반응의 유도에 필요한 패턴 인식 수용체(PRR)인 덱틴-2를 고수준으로 발현하였다(도 1a, 도 1b). 탄수화물 결합 단백질의 부류인 이러한 C-유형 렉틴 수용체는 진균 및 다른 병원체로부터의 다수의 말단 만노스 잔기를 함유하는 다양한 범위의 성분들을 인식하는 것으로 밝혀져 있다. 이와 일치하여, 덱틴-2는 탄수화물 어레이(array) 내의 고-만노스 글리칸에 선택적으로 결합한다(예를 들어, 문헌[McGreal et al., Glycobiology. 2006 May;16(5):422-30] 참조).
실시예 2: 천연 덱틴 -2 효능제에 의한 처리.
기회감염성 병원체(opportunistic pathogen) 말라세지아 푸르푸르와 같은 몇몇 진균종을 포함한 다양한 병원체는 덱틴-2-활성화 인자를 포함한다. 본 명세서에 제시된 실험에서(도 2a 내지 도 2g), M. 푸르푸르의 구매가능한 세포벽 추출물(푸르푸르만; Invivogen)은 덱틴-2 의존적 방식으로 종양-관련 골수성(TAM) 세포를 활성화시켰으며, 이는 TAM 세포에 의한 전염증성 사이토카인 생성 및 공동자극성 분자 발현으로 이어졌다(도 2a 내지 도 2c). M. 푸르푸르 및 S. 세레비시아이로부터의 덱틴-2 효능제의 반복된 i.v. 주사는 마우스에서 우수한 내성을 나타내었다.
이들 데이터와 일치하여, 뮤린 PDAC 모델에서의 연구는 천연 덱틴-2 효능제의 종양내 주사가 T 세포 침윤을 유도하고(도 2d), 종양 성장을 억제함(도 2e)을 나타내었다. 더욱이, 통상적인 화학요법(즉, 젬시타빈) 또는 더 확립된 암 면역요법(즉, 관문 억제제, CD40 효능제)과 병용될 때, 덱틴-2 자극은 종양 퇴행 및 심지어 일부 경우에는 종양 제거로 이어졌다(도 2e 내지 도 2g). 덱틴-2 효능제는 다른 애쥬번트와 병용되어 TAM 활성화를 추가로 향상시킬 수 있다. 예를 들어, 본 발명자들은 덱틴-2 효능제 및 사이토카인 IFNγ 둘 모두로 자극된 세포가 매우 높은 수준의 전염증성 사이토카인, 세포독성 매개체, 및 공동자극성 분자(CD40을 포함함)를 발현한다는 것을 알아내었다. 이와 상응하여, 이들 애쥬번트를 CD40 효능성 항체 처리와 병용한 결과, 일관되게 생체내에서 종양 퇴행으로 이어졌다(도 2g).
도 3a 내지 도 3f는 천연 덱틴-2 리간드, 예컨대 S. 세레비시아이 만난(예를 들어, Sigma Aldrich로부터 입수가능한 추출물)이 종양-관련 골수성 세포(예를 들어, 인간 세포)를 활성화시키고, 치료적 항종양 면역 반응을 유도함을 보여준다. 만난은 전신적으로 전달되었을 때 활성을 나타내었으며, 다수의 종양 유형(예를 들어, 췌장암, 폐암, 및 결장암)을 치료하였다. (도 3a) 지시된 항체로 전처리되고, 이어서 플레이트-결합된 S. 세레비시아이 만난으로 하룻밤 자극된 PDAC TAM에 의한 TNFα 생성. (도 3b, 도 3c) GM-CSF로 전처리되고, 이어서 푸르푸르만(도 3b) 또는 만난(도 3c)으로 자극된 인간 단핵구에 의한 TNFα 생성. n=3의 공여자에 대한 평균 ± SEM이 나타나 있다. (도 3d 내지 도 3f) s.c. PDAC(도 3d), 폐 선암종(도 3e), 또는 CT26 결장 암종을 보유하는 마우스를 종양 이식 후 6 내지 9일째에 시작하여 만난(i.v.) 및/또는 αCTLA-4 및 αPD-1 항체의 병용물(i.p.)로 처리하였다. 평균 종양 부피 ± SEM이 나타나 있다(군당 n=3 내지 5). *, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001; ****, p<0.0001; 이들은 비대응 스튜던트 t-검정(도 3b), 또는 사후 터키 검정을 동반하는 이원분산분석(도 3d 내지 도 3f)에 의함.
도 4a 내지 도 4d는 덱틴-2 발현이 GM-CSF에 의해 유도되어, 마우스 및 인간 시스템 둘 모두에서 세포/종양이 덱틴-2 자극제에 대해 더 반응성이 되게 할 수 있음을 보여준다. 다시 말하면, GM-CSF는 덱틴-2 발현을 유도하고 종양을 덱틴-2 자극제로 감작시켰다. (도 4a 내지 도 4c) 뮤린(도 4a, 도 4b) 및 인간(도 4c) 단핵구를 GM-CSF(50 ng/㎖)가 보충되거나 보충되지 않은 배지 중에서 24시간 동안 배양한 후, 덱틴-2 발현의 유세포측정 분석(도 4a, 도 4c) 또는 푸르푸르만에 의한 자극 및 TNFα 생성의 분석을 행하였다. (도 4c) n=3의 공여자에 대한 평균 MFI ± SEM이 나타나 있다. (도 4d) s.c. CT26 종양을 보유하는 마우스를 종양 이식 후 일수 6에서 시작하여 만난(i.v.) 및/또는 GM-CSF(i.t.)로 처리하였다. 평균 종양 부피 ± SEM이 나타나 있다(군당 n=3 또는 4). *, p<0.05; **, p<0.01; 이들은 스튜던트 t-검정(도 4c), 또는 사후 터키 검정을 동반하는 이원분산분석(도 4d)에 의함.
실시예 3: 클래스 I 알파-만노시다제 억제제에 의한 처리
덱틴-2는 다수의 말단 만노스 잔기를 함유하는 다양한 병원체 성분을 인식하고, 고-만노스 유형 글리칸과 강하게 반응한다. 고-만노스 글리칸은 진핵 세포에서 단백질의 N-연결된 글리코실화 동안 생성되는 일반적인 중간 글리칸 종이다. 포유류 세포에서, 이들 고-만노스 글리칸은 복합체 또는 혼성체 유형 N-글리칸으로 추가로 프로세싱된다 - 이 과정은 초기 고-만노스 전구체, Man9GlcNAc2(Man-9)로부터 말단 만노스 잔기를 절단하는 다양한 만노시다제의 작용을 필요로 한다.
키푸넨신(소분자 알파-만노시다제 클래스 1(α-만노시다제 I) 억제제의 예)에 의한 종양 세포의 처리는 세포 표면 상의 고-만노스 글리칸의 급격한 증가를 야기하였다(도 5a). 후속으로, 종양 세포는 덱틴-2 의존적 방식으로 종양-관련 골수성 세포(TAM 세포)(예를 들어, 종양-관련 수지상 세포 및 대식세포)를 활성화시켜, 전염증성 사이토카인 생성 및 종양 세포 흡수를 유도하였다(도 5b, 도 5c). 생체내에서도 유사하게, 키푸넨신 처리는 종양 세포에 의한 고-만노스 글리칸 디스플레이를 증가시켰으며, 이는 종양 내로의 T 세포 침윤으로 이어졌다(도 5d). 이들 데이터는 만노시다제 억제제의 사용이 종양 면역원성을 증강시킨다는 것을 뒷받침한다.
실시예 4: 덱틴-2-활성화 항체 및 당접합체에 의한 처리
여기서 제시된 데이터는 종양-관련 대식세포(TAM)가 M. 푸르푸르로부터의 미립자 세포벽 추출물뿐만 아니라 고정화된(즉, 플레이트-결합된) 항-덱틴-2 항체에 의해서도 강하게 활성화되었음을 보여준다(도 6a, 도 6b). 이들 결과는 덱틴-2가 신호 전달을 위하여 수용체 클러스터링을 필요로 한다는 것과 일치하며, TAM은 (직접 덱틴-2 자극제, 예컨대 다가 덱틴-2 자극제(본 명세서에 기재되어 있으며, 예를 들어 고-만노스-변형된 항체 당접합체)의 사용 및/또는 천연 존재 또는 합성 당중합체, 예컨대 글리코폴리펩티드, 예를 들어 올리고만노스 글리코폴리펩티드(예를 들어, 만노비오스-풍부 당단백질, 예를 들어 O-연결된 및/또는 N-연결된 만노비오스-풍부 당단백질)의 사용을 포함한 다수의 방법으로 달성될 수 있는) 충분한 덱틴-2 클러스터링을 유도하는 항체 및 당접합체에 의해 활성화될 수 있음을 나타낸다.
도 8a 내지 도 8c는 만노비오스 당중합체 및 항체-당중합체 접합체가 덱틴-2를 통해 세포를 활성화시켰으며, 만노비오스 당중합체는 치료적으로 활성임을 보여준다. 합성 만노비오스 당중합체 및 당접합체는 치료적 효과를 위하여 골수성 세포를 활성화시켰다. (도 8a, 도 8b) 지시된 항체로 전처리되고, 이어서 플레이트-결합된 (도 8a) 상이한 글리칸 밀도(35% 또는 65%)의 만노스(Man1) 또는 만노비오스(Man2) 당중합체 또는 (도 8b) 65% 락토스(Lac) 또는 Man2 100량체 당중합체에 결합된 αEpCAM 항체로 자극된 PDAC TAM에 의한 TNFα 생성. (도 8c) s.c. PDAC 종양을 보유하는 마우스를 종양 이식 후 10일째에 시작하여 65% Man2 100량체 당중합체(20 mg/㎏ i.v., q2d)로 처리하거나 처리하지 않았다. 평균 종양 부피 ± SEM이 나타나 있다(군당 n=3 내지 5). ***, p<0.001; ****, p<0.0001; 이들은 사후 터키 검정을 동반하는 이원분산분석에 의함.
실시예 5
도 9a 내지 도 9c. 본 발명의 합성 만노비오스 글리코펩티드가 덱틴-2를 통해 종양-관련 대식세포(TAM)를 자극하고 종양 성장을 억제한다는 것을 보여주는 데이터. (도 9a) 본 발명의 글리코펩티드를 합성하기 위해 사용된 한 가지 가능한 합성 방법을 나타낸 도식 - 이 경우에는 NCA 중합. 환화 아미노산 단량체는 아지드-함유 니켈 개시제의 존재 하에서 개환 중합을 거쳐서, 조정가능한 길이 및 조성의 작용화가능한 펩티드를 생성한다. 글리코펩티드는 단백질 접합, 형광 현미경법, 및 막 삽입(membrane insertion)을 포함한 다양한 응용을 위하여 NHS 및 클릭 화학에 의해 추가로 정교해질 수 있다. (도 9b) 덱틴-2-차단 항체로 전처리되거나 이로 처리되지 않고, 상이한 글리칸 밀도(35% 또는 65%)의 플레이트-고정화된 만노스(Man1) 또는 만노비오스(Man2) 글리코펩티드(250량체)로 18시간 동안 자극된 LMP TAM에 의한 TNFα 생성. (도 9c) Man2 글리코펩티드(65% 100량체)(20 mg/㎏ i.v. q2d x 2 wk)로 처리된 s.c. PDAC-보유 마우스에 대한 종양 성장 곡선. ***, p<0.001; ****, p<0.0001; 이들은 사후 시닥 검정(post hoc Sidak's test)을 동반하는 이원분산분석에 의함.
도 10. 대조 항체 또는 덱틴-2-차단 항체로 전처리되고, 이어서 상이한 글리칸 밀도(30% 또는 65%)를 갖는 플레이트-결합된 락토스(Lac) 또는 만노비오스(Man2) 글리코펩티드(100량체 합성 글리코펩티드)로 20시간 동안 자극된 뮤린 단핵구-유래 수지상 세포에 의한 사이토카인 생성.
도 11. 짧은 만노비오스 당중합체 및 긴 만노비오스 당중합체 둘 모두가 덱틴-2를 자극할 수 있음을 보여주는 데이터. 대조 항체 또는 덱틴-2-차단 항체로 전처리되고, 이어서 상이한 글리칸 밀도(35/65/100%)를 갖는 가용성 또는 플레이트-결합된 글리코펩티드(20량체/250량체 합성 글리코펩티드)로 20시간 동안 자극된 PDAC TAM에 의한 사이토카인 생성. 짧은 글리코실화 중합체 및/또는 심하게 글리코실화된 중합체는 플레이트에 잘 결합하지 않는다(이는 20량체 및 100% 250량체에 대한 명백한 활성의 결여를 설명함). 따라서, 사이토칼라신 D를 사용하여 식세포작용을 억제하고, 그럼으로써 가용성 형태의 중합체에 대한 반응을 유도하였는데, 이는 가용성 덱틴-1 리간드에 대해 이전에 밝혀진 바와 같다(문헌[Rosas et al., J Immunol, 2008 Sep 1;181(5):3549-57]).
실시예 6: 본 발명의 당중합체(예를 들어, Man2 중합체)는 (항원-특이성에 관계 없이) 항체에 접합될 때 덱틴-2를 자극하고 가용성 형태에서 활성을 얻는다
도 12a 내지 도 12c. 만노비오스 글리코펩티드-항체 접합체는 TAM를 활성화시키고, 덱틴-2를 통한 종양 세포 흡수를 자극한다. (도 12a) 라이신 접합에 대한 도식: 항체를 BCN-NHS 시약으로 변형시키고, 반응성 아지드 또는 테트라진 모이어티를 갖는 글리코펩티드에 접합시킬 수 있다. (도 12b) 부위-특이적 접합에 대한 도식: 포르밀글리신-생성 효소(FGE) 컨센서스 서열 CTPSR을 도입함으로써 알데하이드 태그를 갖는 항체를 생성하고, 이어서 FGE와 함께 인큐베이션할 수 있다. 이어서, 알데하이드-태그된 항체를 아미노옥시-아지드 링커로 변형시키고, 사이클로옥틴-함유 글리코펩티드에 접합시킬 수 있다. (도 12c) TAM 및 CFSE-표지 PDAC 세포의 공배양물을 10 ㎍/㎖의 비변형된 αEpCAM 항체, 또는 라이신 접합에 의해 제조된 αEpCAM-Man2 글리코펩티드(65% 100량체) 접합체(αEp-Man2) +/- 덱틴-2-차단 항체로 18시간 동안 자극한 후, CFSE 흡수, TNFα 생성, 및 공동자극성 분자 발현의 분석을 행하였다.
도 13. 항-Epcam 항체를 BCN-NHS 시약으로 표지하고(10x 또는 25x BCN:항체), 만노비오스 글리코펩티드(65% 100량체)에 접합시켜 항체-글리코펩티드 접합체(αEpM)를 제조하였다. PDAC TAM을 덱틴-2-차단 항체(αD2)로 전처리하거나 전처리하지 않고, 이어서 플레이트-결합된(상부 좌측 패널) 또는 가용성(상부 우측 패널 및 하부 패널) 항체 접합체로 자극하였는데, 이는 단독으로 또는 CFSE-표지 PDAC 세포와의 공배양물(하부 패널; "Mo-종양 공배양물")에서 행해졌다. 20시간 후에 사이토카인 생성을 평가하였다.
도 14. 항-Epcam 항체를 BCN-NHS 시약으로 표지하고(10x 또는 25x BCN:항체), 만노비오스 글리코펩티드(65% 100량체)에 접합시켜 항체-글리코펩티드 접합체(αEpM)를 제조하였다. PDAC TAM을 덱틴-2-차단 항체(α덱틴-2)로 전처리하거나 전처리하지 않고, 이어서 CFSE-표지 PDAC 세포와의 공배양물에서 가용성 항체 접합체로 자극하였다. TAM에 의한 CFSE 흡수를 20시간 후에 유세포측정에 의해 평가하였다.
도 15a 및 도 15b. 라이신 접합에 의해 65% Man2 100량체에 결합된 αEpCAM 항체(DAR 약 1 내지 2; 2.5 ug/㎖ 항체 농도) +/- α덱틴-2(20 ug/㎖) 또는 등가량의 비접합된 αEpCAM 및 Man2 중합체의 혼합물로 18시간 동안 자극된 GM-CSF-전처리된 단핵구에 의한 사이토카인 생성. 도 15b는 항체-Man2 접합체 및 별개의 성분들의 혼합물에 대한 용량-반응 곡선을 나타낸다.
도 16. 본 발명의 당단백질을 사용하여 제조된 항체 접합체(예를 들어, 다양한 길이의, 예를 들어 적게는 25개의 잔기의 Man2 중합체)가 덱틴-2를 통해 세포를 자극할 수 있음을 보여주는 데이터. 다양한 길이의 65% Man2 중합체를 사용하여 라이신 접합에 의해 항체 접합체를 제조하고, 이어서 수동적 흡착(20 ug/㎖)에 의해 플레이트 상에 코팅하였다. GM-CSF-전처리된 단핵구 +/- α덱틴-2를 웰에 첨가하고, 18시간 후에 TNFα 생성을 측정하였다.
실시예 7: 면역자극제와 병용되지만 이에 접합되지 않은 본 발명의 당중합체(예를 들어, Man2 중합체)
덱틴-2 리간드와 다른 면역 자극제의 병용물은 시험관내 및 생체내 둘 모두에서 활성이며, 예를 들어 덱틴-2 효능제는 다른 면역 자극제와 상승작용한다.
도 17은 푸르푸르만 +/- 지시된 작용제로 24시간 동안 처리된 뮤린 PDAC TAM에 의한 공동자극성 분자 발현을 보여준다. 도 18은 푸르푸르만 +/- 지시된 작용제로 24시간 동안 처리된 뮤린 PDAC TAM에 의한 사이토카인 생성을 보여준다. 도 19는 종양 이식 후 일수 8 또는 일수 9에서 시작하여 만난을 단독으로(q2d i.v.) 또는 IFNg(q2d i.v.) 또는 지시된 항체(q3d i.p.)와 병용하여 처리된 s.c. PDAC-보유 마우스에 대한 종양 성장 곡선을 나타낸다.
실시예 8: 면역자극제에 접합된 본 발명의 당중합체(예를 들어, Man2 중합체)는 가용성 형태에서 활성을 얻고 상승적 효과를 나타낸다.
췌장암을 가진 마우스(PDAC 마우스)를 종양내 주사(d8 및 d11에 10 mg/㎏)에 의해, 본 발명의 다가 작용제, 즉 면역자극제(이 경우에는, TLR7/8 효능제 T785)에 접합된 덱틴-2에 대한 효능제(이 경우에는, 65% Man2 100량체) - "Man2-T785"로 불림 - 로 처리하거나, Man2 단독("Man2")으로 처리하였다. 나타난 바와 같이(도 20), Man2-T785에 의한 처리는 PBS 대조군 또는 Man2 처리에 비하여 종양 성장을 강하게 그리고 상승적으로 억제하였다.
상승적 면역자극 효과가 또한 시험관내에서 접합체에 대해 관찰되었다. 나타난 바와 같이(도 21), Man2-T785 접합체는 낮은 농도에서 TAM을 강하게 자극한 반면, 등가 농도의 Man2, T785, 또는 둘 모두의 혼합물은 그렇지 않았다. 이들 효과는 항-덱틴-2 항체로 차단되었으며, 이는 이들이 덱틴-2 결합에 의존적임을 나타낸다. 이 결과는, 화학적 접합체가 비접합된 성분들의 혼합물만큼(또는 아마도 그보다 더 적게) 강력할 것으로 예상되었을 것이라는 점에서 놀라운 것이다. 또한 놀랍게도, TLR7/8 효능제의 부착은 시험관내에서 Man2 글리코펩티드의 거동을 변화시켰다. Man2 글리코펩티드는 전형적으로, TAM을 강하게 활성화시키기 위해 (예를 들어, 플레이트 또는 세포 상에서의) 고정화를 필요로 하는 반면, 나타난 결과는 용액 상태의 자극제에 의해 얻어졌다. 이들 데이터에 기초하여, 접합체의 생체내 효과는 성분들이 (접합 없이) 혼합물로서 투여되는 경우보다 실질적으로 더 클 것으로 예상된다. 이는 본 명세서의 어딘가 다른 곳에서 기재된 Man2-항체 접합체에 대해서도 마찬가지이다. 도 22a는 도 20 및 도 21에 사용된 Man2-T785 접합체를 생성하는 데 사용된 합성의 도식을 나타낸다. 도 22a에 나타낸 것과 유사한 합성 도식이 또한 R848(도 22c) 및 다른 TLR7/8 리간드를 사용하여 접합체를 제조하는 데 사용될 수 있다.
실시예 9: TLR2 리간드에 대한 당중합체(Man2 중합체)의 접합
덱틴-2 효능제(이 경우에는, Man2 중합체)를 면역자극제(이 경우에는, TLR2의 효능제인 Pam3Cys)에 접합시켰다(도 23b). 이들 다가 작용제는 또한 가용성 형태에서 활성을 나타내었다: GM-CSF-전처리된 단핵구를 Pam3Cys(TLR1/2 리간드)에 결합된 5 ㎛ 65% Man2 100량체 또는 등몰량의 비접합된 Man2 및 Pam3Cys로 18시간 동안 자극하였다. 단핵구에 의한 사이토카인 생성을 측정하였다(도 23a). 이들 데이터는 다른 면역 자극제(예를 들어, TLR7/8 효능제만이 아님)가 본 발명의 다가 작용제의 일부로서의 "제2 작용제"로서 사용될 수 있음을 나타낸다.
실시예 10: TLR7/8 효능제에 대한 α덱틴-2 항체의 접합
TLR7/8 효능제(예컨대, T785)에 접합된 Man2 중합체에 대해 얻어진 결과와 유사하게, 덱틴-2 효능제("제1" 작용제)가 항-덱틴-2 항체인 다가 작용제가 또한 상승적 면역자극 효과를 나타내었고 가용성 형태에서 활성이었다. (도 24) α덱틴-2 항체 접합체 및 동종형(래트 IgG2a) 항체 접합체를 SMCC-변형된 TLR7/8 효능제(T785) 및 SATA 가교결합제를 사용하여 라이신 접합에 의해 제조하였다. 접합체 또는 등가량의 비접합된 성분들로 18시간 동안 자극된 GM-CSF-전처리된 단핵구에 대한 사이토카인 생성이 나타나 있다. 이들 데이터는 접합된 화합물간의 상승작용을 보여주며, 다른 덱틴-2 효능제, 예컨대 α덱틴-2 항체(단지 당중합체(예컨대, Man2)만이 아님)가 본 발명의 다가 작용제의 일부로서 "제1 작용제"로서 사용될 수 있음을 보여준다.
실시예 11
도 25는 가용성 푸르푸르만(20 ug/㎖) 또는 플레이트-결합된 만난(10 ug/웰)으로 24시간 동안 자극하기 전에 GM-CSF(50 ng/㎖)로 전처리된 인간 단핵구에 의한 사이토카인 생성 및 공동자극성 분자 발현을 보여준다.
실시예 12
도 26a 내지 도 26d. 덱틴-2 자극제는 T 세포-매개 항-종양 면역을 통해 PDAC 진행을 억제한다. 지시된 바와 같이 처리된 s.c. LMP-보유 마우스에 대한 종양 성장 곡선. (도 26a, 도 26b) 종양을 7 내지 10일 동안 성장되게 한 후, 만난(12.5 mg/㎏ i.v. q2d x 2 wk; 25 mg/㎏ i.t. q3d x 2) +/- 덱틴-2-차단 항체 또는 대조 항체(10 mg/㎏ i.p. q2d)로 처리하였다. (도 26c, 도 26d) 만난 처리(10 mg/㎏ i.v. q2d x 3 wk) 동안 CD4- 또는 CD8-고갈 항체(도 26c) 또는 관문-차단 항체(도 26d)(10 mg/㎏ i.p. q3d)로 마우스를 처리하였다. **, p<0.01; ***, p<0.001; ****, p<0.0001; 이들은 사후 시닥 검정(도 26a, 도 26b) 또는 사후 터키 검정(도 26c, 도 26d)을 동반하는 이원분산분석에 의함.
실시예 13
도 27a 내지 도 27g. GM-CSF는 덱틴-2 발현을 유도하고, TAM을 덱틴-2 자극제로 감작시킨다. (도 27a, 도 27b) GM-CSF가 보충되거나 보충되지 않은 배지를 사용하여 18시간 동안 배양된 마우스(도 27a) 또는 인간(도 27b) 단핵구에 의한 덱틴-2 발현. (도 27c 내지 도 27e) 3T3 섬유아세포-컨디셔닝된 배지 +/- GM-CSF(도 27c) 또는 LMP 종양-컨디셔닝된 배지 +/- GM-CSF-중화 항체(도 27d)로 전처리된 마우스 단핵구 또는 지시된 바와 같이 전처리된 인간 단핵구(도 27e)에 의한 TNFα 생성. (도 27f) 만난(12.5 mg/㎏ i.v. q2d x 2 wk) 및 지시된 항체(10 mg/㎏ i.p. q2d)로 처리된 LMP-보유 마우스. (도 27g) 덱틴-2의 발현과 인간 암 조직 내의 지시된 유전자 사이의 상관관계를 나타낸 히트맵. 유전자 발현 데이터를 TCGA로부터 획득하고 분석하여 스피어만의 상관 계수를 얻었다. **, p<0.01; ****, p<0.0001; 이들은 스튜던트 t-검정(도 27b), 또는 사후 터키 검정(도 27f)을 동반하는 이원분산분석에 의함.
실시예 14
도 28a 내지 도 28d. KRAS-유도 종양은 GM-CSF를 생성하고, 덱틴-2 면역요법에 반응한다. (도 28a) CCLE로부터 획득된 야생형 KRAS(WT), 또는 코돈 12, 13, 또는 61에서 돌연변이(Mut)를 갖는 인간 종양 세포주에 대한 GM-CSF 발현 값. 상자 도표는 중위값 및 사분위수 범위를 나타낸다. ****, p<0.0001; 이는 만-휘트니 U-검정에 의함. (도 28b) 24시간 배양 후 종양 상층액 중의 GM-CSF 수준. (도 28c, 도 28d) 만난(10 mg/㎏ i.v. q2d)으로 처리된 s.c. 238N1 또는 MOC2 종양을 가진 마우스에 대한 종양 성장 곡선. 처리된 5 마리의 마우스 중 3 마리(3/5)가 238N1 종양이 치유되었다. *, p<0.05; **, p<0.01; ****, p<0.0001; 이들은 사후 시닥 검정을 동반하는 이원분산분석에 의함.
실시예 15
(1) 덱틴-2에 대한 효능제(이 경우에는, 65% Man2 100량체) 및 (2) 784 또는 786을 포함하는 다가 작용제의 합성을 다음과 같이 제조하였다. 애쥬번트와 당중합체 사이의 거리를 연장하기 위하여 변동하는 수의 PEG 단위를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 링커에 애쥬번트를 결합시켰다. 링커 부착 및 TFP 활성화에 대해 앞서 기재된 프로토콜을 사용하여 PEG 링커 연장부의 부착을 수행하였다. 간략하게 말하면, 애쥬번트를 DMF 중에 용해시키고, DIPEA를 첨가한 후, HATU(1.2 당량)를 첨가하였다. 1시간 후에, 적절한 아미노 PEG 링커를 첨가하고, 실온에서 추가 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축 건조시키고, 잔류물을 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용리되는 C-18 컬럼 상에서 분취용 HPLC를 통해 30 분에 걸쳐 정제하였다. 순수한 분획을 합하고 동결건조시켰다.
이어서, TFP 에스테르를 실온에서 16시간 동안 붕산염 완충 식염수(BBS - pH 8.4) 중에서 당중합체에 접합시켰다. 3 kDa MWCO 원심 스핀 필터를 사용하여, 크기 배제 기반 여과를 이용하여 반응 혼합물을 정제하였다. 남아 있는 비접합된 애쥬번트가 LC-MS에 의해 검출가능하지 않을 때까지 샘플을 탈이온수로 반복적으로 완충액 교환하였다. 이어서, 샘플을 동결건조시켜, 백색 고체로서 정제된 접합체를 생성하였다.
도 29a 및 도 29b. 면역자극제(이 경우에는, TLR7 효능제 784)에 접합된 덱틴-2에 대한 효능제(이 경우에는, 65% Man2 100량체)를 포함하는 본 발명의 다가 작용제 - "Man2-784 접합체"로 불림 - 와 접촉되거나, 784와 Man2의 비접합된 혼합물("Man2 + 784 혼합물")과 접촉되거나, 또는 대조군("Man2-784 접합체" + 덱틴-2를 차단하여 접합체에 의해 제공된 덱틴-2 자극에 대항하는 항체의 혼합물)과 접촉된 GM-CSF-전처리된 단핵구에 의한 TNFα 생성을 보여주는 데이터. (도 29a) 면역자극제(이 경우에는, TLR7/8 효능제 786)에 접합된 덱틴-2에 대한 효능제(이 경우에는, 65% Man2 100량체)를 포함하는 본 발명의 다가 작용제 - "Man2-786 접합체"로 불림 - 와 접촉된 GM-CSF-전처리된 단핵구에 의한 TNFα 생성을 보여주는 데이터. (도 29b) 도 29a 및 도 29b에서 알 수 있는 바와 같이, Man2-784 접합체 및 Man2-786 접합체는 GM-CSF-전처리된 단핵구에 의한 TNFα 생성을 증가시킨다. 이 결과는 이들 접합체가 덱틴-2 신호전달을 성공적으로 자극하고, 개체에서 항암 면역 반응을 자극할 것임을 나타낸다.
도 30. 도 29a 및 도 29b에서의 다가 작용제의 구조를 나타낸 도식.
전술한 것은 단지 본 발명의 원리만을 예시한다. 당업자는, 본 명세서에 명시적으로 기술되거나 나타내지는 않았지만, 본 발명의 원리를 구현하며 그의 사상 및 범주 내에 포함된 다양한 설계를 고안할 수 있음이 이해될 것이다. 더욱이, 본 명세서에 인용된 모든 예 및 조건부 언어는 주로 독자가 본 발명의 원리 및 본 발명자에 의해 기여된 개념을 이해하여 본 발명을 진행시키는 데 도움이 되도록 의도되며, 그러한 구체적으로 인용된 예 및 조건에 대한 제한이 없는 것으로 해석되어야 한다. 더욱이, 본 명세서에서 본 발명의 원리, 태양, 및 실시 형태뿐만 아니라 그의 구체적인 예를 언급하는 모든 진술은 그의 구조적 및 기능적 등가물 둘 모두를 포함하도록 의도된다. 추가적으로, 그러한 등가물은 현재 알려진 등가물, 및 향후에 개발될 등가물, 즉 구조와 무관하게 동일한 기능을 수행하는 개발된 임의의 요소 둘 모두를 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, 본 발명의 범주는, 본 명세서에 나타내고 기재된 예시적인 실시 형태로 제한되도록 의도되지 않는다. 오히려, 본 발명의 범주 및 사상은 첨부된 청구범위에 의해 구현된다.
SEQUENCE LISTING <110> Kenkel, Justin Zhou, Matthew Ackerman, Shelley E ENGLEMAN, EDGAR G Alonso, Michael N Bertozzi, Carolyn R <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR DECTIN-2 STIMULATION AND CANCER IMMUNOTHERAPY <130> STAN-1420WO <140> PCT/US2018/039868 <141> 2018-06-27 <150> US 62/526,266 <151> 2017-06-28 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 209 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Met Gln Glu Gln Gln Pro Gln Ser Thr Glu Lys Arg Gly Trp Leu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Trp Ser Val Ala Gly Ile Ser Ile Ala Leu Leu Ser 20 25 30 Ala Cys Phe Ile Val Ser Cys Val Val Thr Tyr His Phe Thr Tyr Gly 35 40 45 Glu Thr Gly Lys Arg Leu Ser Glu Leu His Ser Tyr His Ser Ser Leu 50 55 60 Thr Cys Phe Ser Glu Gly Thr Lys Val Pro Ala Trp Gly Cys Cys Pro 65 70 75 80 Ala Ser Trp Lys Ser Phe Gly Ser Ser Cys Tyr Phe Ile Ser Ser Glu 85 90 95 Glu Lys Val Trp Ser Lys Ser Glu Gln Asn Cys Val Glu Met Gly Ala 100 105 110 His Leu Val Val Phe Asn Thr Glu Ala Glu Gln Asn Phe Ile Val Gln 115 120 125 Gln Leu Asn Glu Ser Phe Ser Tyr Phe Leu Gly Leu Ser Asp Pro Gln 130 135 140 Gly Asn Asn Asn Trp Gln Trp Ile Asp Lys Thr Pro Tyr Glu Lys Asn 145 150 155 160 Val Arg Phe Trp His Leu Gly Glu Pro Asn His Ser Ala Glu Gln Cys 165 170 175 Ala Ser Ile Val Phe Trp Lys Pro Thr Gly Trp Gly Trp Asn Asp Val 180 185 190 Ile Cys Glu Thr Arg Arg Asn Ser Ile Cys Glu Met Asn Lys Ile Tyr 195 200 205 Leu

Claims (59)

  1. 다가 덱틴(Dectin)-2 자극제로서,
    (a) 덱틴-2에 결합하여 덱틴-2 신호전달을 자극하는 작용제; 및
    (b) 항체 및/또는 면역조절제를 포함하며,
    (a)와 (b)는 서로 접합되어 있는, 다가 덱틴-2 자극제.
  2. 제1항에 있어서, (a)는 항-덱틴-2 항체 또는 이의 항원-결합 영역인, 다가 덱틴-2 자극제.
  3. 제1항에 있어서, (a)는 덱틴-2에 결합하는 만노비오스 글리코폴리펩티드인, 다가 덱틴-2 자극제.
  4. 제3항에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 20 내지 250개의 아미노산 길이의 펩티드를 포함하는, 다가 덱틴-2 자극제.
  5. 제4항에 있어서, 상기 펩티드는 뮤신-유사 펩티드인, 다가 덱틴-2 자극제.
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 글리칸 밀도가 적어도 25%인, 다가 덱틴-2 자극제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, (b)는 면역조절제인, 다가 덱틴-2 자극제.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, (b)는 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFNγ, G-CSF, TNFα, 및 GM-CSF로부터 선택되는 사이토카인이거나; 또는 항-CTLA4 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, CD40 효능제(agonist), 항-CD47/SIRPA 작용제, 및 4-1BB-효능제로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역조절제인, 다가 덱틴-2 자극제.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, (b)는 패턴 인식 수용체(PRR)에 대한 자극성 리간드인, 다가 덱틴-2 자극제.
  10. 제9항에 있어서, (b)는 TLR 효능제인, 다가 덱틴-2 자극제.
  11. 제10항에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR7 효능제, TLR8 효능제, 또는 TLR7/8 효능제인, 다가 덱틴-2 자극제.
  12. 제11항에 있어서, 상기 TLR7/8 효능제는 T785인, 다가 덱틴-2 자극제.
  13. 제10항에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR2 효능제인, 다가 덱틴-2 자극제.
  14. 제13항에 있어서, 상기 TLR2 효능제는 Pam3Cys인, 다가 덱틴-2 자극제.
  15. 제1항에 있어서, (a)는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하고, (b)는 TLR 효능제인, 다가 덱틴-2 자극제.
  16. 제15항에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR7/8 효능제 또는 TLR2 효능제인, 다가 덱틴-2 자극제.
  17. 제16항에 있어서, 상기 TLR 효능제는 T785인, 다가 덱틴-2 자극제.
  18. 제16항에 있어서, 상기 TLR 효능제는 Pam3Cys인, 다가 덱틴-2 자극제.
  19. 암 및/또는 감염성 질병을 가진 개체를 치료하는 방법으로서,
    덱틴-2 자극 조성물의 유효량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 덱틴-2 자극 조성물은
    (a) 덱틴-2 자극 당중합체(glycopolymer); 또는
    (b) 다가 덱틴-2 자극제를 포함하며, 상기 다가 덱틴-2 자극제는
    (i) 항-덱틴2 항체 또는 덱틴-2 자극 당중합체; 및
    (ii) 항체 및/또는 면역조절제를 포함하며,
    (i)은 (ii)에 접합되어 있고,
    덱틴-2 신호전달이 골수성 세포에서 자극됨으로써 상기 개체에서 면역 반응을 자극하는, 방법.
  20. 제19항에 있어서, (a) 또는 (b)의 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하는, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 20 내지 250개의 아미노산 길이의 펩티드를 포함하는, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 펩티드는 뮤신-유사 펩티드인, 방법.
  23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 글리칸 밀도가 적어도 25%인, 방법.
  24. 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, (b)의 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 항체에 접합되어 있는, 방법.
  25. 제24항에 있어서, (b)의 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 면역조절제에 접합되어 있는, 방법.
  26. 제24항 또는 제25항에 있어서, (b)의 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFNγ, G-CSF, TNFα, 및 GM-CSF로부터 선택되는 사이토카인에 접합되어 있는, 방법.
  27. 제24항 또는 제25항에 있어서, (b)의 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 패턴 인식 수용체(PRR)에 대한 자극성 리간드에 접합되어 있는, 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 자극성 리간드는 TLR 효능제인, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR7 효능제, TLR8 효능제, 또는 TLR7/8 효능제인, 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 TLR7/8 효능제는 T785인, 방법.
  31. 제28항에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR2 효능제인, 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 TLR2 효능제는 Pam3Cys인, 방법.
  33. 제19항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 국부 투여를 포함하는, 방법.
  34. 제19항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 전신 투여를 포함하는, 방법.
  35. 제19항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 CD40 효능제, GM-CSF, TNFα, 및 IFNγ 중 하나 이상과의 공동투여를 포함하는, 방법.
  36. 항원 제시 세포(APC)를 자극하는 방법으로서,
    시험관내(in vitro) 또는 생체외(ex vivo)에서 APC를, 덱틴-2 자극 당중합체를 포함하는 덱틴-2 자극 조성물과, 상기 APC에서 덱틴-2 신호전달을 향상시키기에 충분한 용량으로 그리고 기간 동안 접촉시킴으로써, 자극된 APC를 생성하는 단계를 포함하는, 방법.
  37. 제36항에 있어서, 상기 자극된 APC를 암 항원과 접촉시켜 항원-접촉된 APC를 생성하는 단계를 포함하는, 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 암 항원은 암 세포 용해물에 존재하거나 암 세포의 일부인, 방법.
  39. 제36항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자극된 APC 또는 상기 항원-접촉된 APC를 개체 내로 도입하는 단계를 포함하는, 방법.
  40. 제37항 또는 제38항에 있어서, 상기 암 항원은 암을 가진 개체로부터 유래되고, 상기 방법은 상기 항원-접촉된 APC를 상기 개체 내로 도입하는 단계를 포함하는, 방법.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, APC는 상기 개체에 대해 자가(autologous)인, 방법.
  42. 제36항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포를 상기 항원-접촉된 APC와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  43. 제42항에 있어서, 상기 접촉된 T 세포를 개체 내로 도입하는 단계를 포함하는, 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 T 세포는 상기 개체에 대해 자가인, 방법.
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 항원-접촉된 APC는 상기 개체에 대해 자가인, 방법.
  46. 제39항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 암을 갖는, 방법.
  47. 제36항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 만노비오스 글리코폴리펩티드를 포함하는, 방법.
  48. 제47항에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 20 내지 250개의 아미노산 길이의 펩티드를 포함하는, 방법.
  49. 제48항에 있어서, 상기 펩티드는 뮤신-유사 펩티드인, 방법.
  50. 제47항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 만노비오스 글리코폴리펩티드는 글리칸 밀도가 적어도 25%인, 방법.
  51. 제36항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 항체 및/또는 면역조절제에 접합되어 있는, 방법.
  52. 제51항에 있어서, 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 면역조절제에 접합되어 있는, 방법.
  53. 제51항 또는 제52항에 있어서, 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFNγ, G-CSF, TNFα, 및 GM-CSF로부터 선택되는 사이토카인에 접합되어 있는, 방법.
  54. 제51항 또는 제52항에 있어서, 상기 덱틴-2 자극 당중합체는 패턴 인식 수용체(PRR)에 대한 자극성 리간드에 접합되어 있는, 방법.
  55. 제54항에 있어서, 상기 자극성 리간드는 TLR 효능제인, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR7 효능제, TLR8 효능제, 또는 TLR7/8 효능제인, 방법.
  57. 제56항에 있어서, 상기 TLR7/8 효능제는 T785인, 방법.
  58. 제55항에 있어서, 상기 TLR 효능제는 TLR2 효능제인, 방법.
  59. 제58항에 있어서, 상기 TLR2 효능제는 Pam3Cys인, 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR20230149857A (ko) 2016-07-07 2023-10-27 더 보드 어브 트러스티스 어브 더 리랜드 스탠포드 주니어 유니버시티 항체-애쥬번트 접합체
WO2019173638A1 (en) * 2018-03-08 2019-09-12 California Institute Of Technology Sample multiplexing for single-cell rna sequencing
KR20220004634A (ko) 2019-03-15 2022-01-11 볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드 Her2를 표적으로 하는 면역접합체
EP3976061A4 (en) * 2019-06-03 2023-07-12 The University of Chicago METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF CANCER WITH CANCER-TARGETING ADJUVANTS
CR20220582A (es) * 2020-05-01 2023-01-09 Bolt Biotherapeutics Inc Anticuerpos anti-dectina-2
WO2023114315A1 (en) * 2021-12-17 2023-06-22 Quality Technology International, Inc. Method and composition for treating parasites in an animal

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1617871A4 (en) * 2003-04-10 2010-10-06 3M Innovative Properties Co DISTRIBUTION OF IMMUNE-RESPONSE-MODIFYING COMPOUNDS USING PARTICULATE CARRIER MATERIALS CONTAINING METAL
KR20090118981A (ko) * 2007-02-23 2009-11-18 베일러 리서치 인스티튜트 Ｃｌｅｃ-6을 통한 사람 항원제시세포의 활성화
US20100129383A1 (en) * 2008-10-03 2010-05-27 The Governors Of The University Of Alberta Bifunctional fusion molecules for the delivery of antigens to professional antigen-presenting cells
BR112013002940A2 (pt) * 2010-08-13 2019-09-24 Baylor Res Institute adjuvantes de nova vacina baseados no direcionamento dos adjuvantes para os anticorpos diretamente às células que apresentam antígenos
IN2014CN04251A (ko) * 2011-11-09 2015-07-17 Ascend Biopharmaceuticals Ltd
AU2015270845B2 (en) * 2014-06-02 2019-09-12 Baylor Research Institute Methods and compositions for treating allergy and inflammatory diseases
WO2016032009A1 (en) * 2014-08-27 2016-03-03 Kyushu University, National University Corporation Adjuvant
WO2016199904A1 (ja) * 2015-06-10 2016-12-15 国立大学法人東京大学 ワクチン用アジュバント、ワクチン、及び免疫誘導方法
CN108289909A (zh) * 2015-10-19 2018-07-17 巴尔的摩马里兰大学 用于产生工程改造的人原代血液树突细胞系的方法
US20190010236A1 (en) * 2015-12-29 2019-01-10 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for dectin-2 stimulation and cancer immunotherapy

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