KR20210053891A

KR20210053891A - 암 치료용 면역 조절 입자

Info

Publication number: KR20210053891A
Application number: KR1020217006018A
Authority: KR
Inventors: 존 푸이시스
Original assignee: 온코어 파마, 인크.
Priority date: 2018-07-31
Filing date: 2019-07-31
Publication date: 2021-05-12
Also published as: CN112823001A; AU2019312589A1; IL280468A; SG11202100700VA; BR112021001858A2; JP2021532136A; WO2020028544A1; EP3829548A4; CA3107134A1; MX2021001252A; EP3829548A1

Abstract

본 명세서는 골수-유래된 억제자 세포 (MDSCs), 종양-연합된 대식세포 (TAMs), 호중구, 단핵구, 및/또는 종양 성장 및 전이를 촉진시키는 종양-연합된 기질의 활성을 조정하기 위해, 암 치료제, 이를 테면 체크포인트 억제제들 또는 생물학적 제제와 병용하여 면역-조절 입자를 이용하여 암과 증식성 질환의 치료 방법을 제공한다.

Description

암 치료용 면역 조절 입자

발명의 분야

본 명세서는 암 치료제, 이를 테면 체크포인트(checkpoint) 조절제, 소분자 또는 생물학적 제제와 함께 면역-조절 입자를 이용하여 종양 미세환경에서 골수-유래된 억제자 세포 (MDSCs), 종양-연합된 대식세포 (TAMs), 호중구, 그리고 단핵구를 변경시킴으로써, 암과 증식성 질환을 치료하는 방법에 일반적으로 관계한다.

배경

뚜렷한 골수-유래된 세포 집단은 종양 미세환경의 일부로 현재 널리 인식되고 있다. 이들 세포에는 단핵구, 종양 연합된 대식세포 (TAMs), 골수-유래된 억제자 세포 (MDSCs) 및 수지상 세포들이 내포된다 (Kumar et al., Trends Immunol., 37(3):208-220 (2016); Richards et al., Cancer Microenviron., 6(2):179-91 (2013)). 상당한 연구 결과에 따르면, 이들 세포는 면역억제성 미세환경을 촉진시키기 위해, 국소 환경으로부터의 신호(cues)에 의해 변경될 수 있는 종양 부위 및 전이 부위로 활발하게 모인다 (Kumar et al., Trends Immunol., 37(3):208-220 (2016); Kitamura et al., Front Immunol., 8:2004 (2018); Kitamura et al., J Exp Med., 212(7):1043-59 (2015)). 이들 세포의 면역억제성 활성은 종양 성장, 증식, 혈관신생, 전이, 그리고 종양 면역 회피를 촉진시키는 것으로 나타났다. 더욱이, 종양 미세환경 (TME)에서 MDSCs 및 TAMs의 존재는 질환의 예후가 나쁜 것과 관련된다 (Gabrilovich et al., Nat Rev Immunol., 12(4):253-68 (2012); Ouzounova et al., Nat Comm., 8:14979 (2017); Marvel et al J Clin Invest., 125(9):3356-64 (2015)).

면역 세포에 추가하여, 종양 기질(stroma)은 이러한 종양 미세환경을 형성하고, 종양 성장 및 진행에 영향을 끼치는데 역할을 한다. 섬유아세포, 간엽 기질 세포, 지방세포, 내피, 그리고 세포외 매트릭스 (ECM)를 비롯한 종양-연합된 기질의 세포 및 분자 구성요소들은 종양생성에 기여하는 것으로 나타났다 (Valkenburg et al., Nat Rev Clin Oncol., 15(6):366-381 (2018)). 조직-상주 및 골수 간엽 줄기 세포 (MSC)-유래된 암 연합된 섬유아세포 (CAFs)들은 항-종양 면역 반응들을 변경시키고, 종양 성장 및 전이를 촉진시키는 성장 인자들과 단백질들을 분비하는 것으로 나타났다 (Valkenburg et al., Nat Rev Clin Oncol., 15(6):366-381 (2018); Shiga et al., Cancers, 7,2443-2548 (2015)). 유사하게, ECM 단백질들, 간엽 기질 세포, 내피 세포, 그리고 지방세포는 항-종양 면역성을 약화시키고, 종양 진행을 촉진시킨다고 보고된 바 있다 (Lu et al., J Cell Biol., 196(4):395-406 (2012); Kumar et al., Cancer Cell 32(5):654-668.e5 (2017); Quante et al., Cancer Cell., 19, 257-272 (2011); Park et al., Endocr Rev., 32(4):550-70 (2011); Young et al., Caner Immunol Immunother, 61(10):1609-16 (2012); Hida et al., Int J Mol Sci., 19(5):1272 (2018)).

새로운 항-암 치료제 개발에 상당한 진전이 있었지만, 이들 치료요법의 효과는 이들이 종양을 표적으로 하지만, 그러나 종양 미세환경 (TME)에서 항-종양 면역 기능을 억제시키고, 종양 진행을 촉진시키는 면역 억제자 인자들이 아니기 때문에 전망이 제한적이었다.

면역 체크포인트 수용체 (예를 들면, 예정된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1) 및 CTLA-4) 그리고 이들의 리간드들 (예를 들면, PD-L1)을 통한 신호전달은 세포독성 T-세포의 활성을 조절하고, 염증성 면역 반응을 조절하는데 중요한 역할을 하난 것으로 나타났다. 중요한 것은, 다수의 종양 유형들은 T-세포-매개된 항-종양 면역 반응들을 회피하기 위해, PD-1/PD-L1 및 CTLA-4 면역 체크포인트 신호전달 경로를 장악하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 단일클론 항체와 같은 특이적 억제제들을 이용한 면역 체크포인트 신호전달 경로의 표적화는 다수의 암에서 매력적인 최일선 치료 옵션으로 부상되었다 (Alsaab et al., Front Pharmacol 8:561 (2017)). 그러나, 종양 미세환경에서 종양-연합된 기질과 함께 골수-유래된 억제자 세포 (MDSCs) 및 종양-연합된 대식세포 (TAMs)의 존재로 항-PD1 단일클론 항체와 같은 면역 체크포인트 억제제들의 항-종양 효과를 약화시킨 것으로 나타났다 (Weber et al., Front Immunol., 9:1310, (2018); Highfill et al., Sci Transl Med., 6(237) :237ra67 (2014); Zhao et al., Cancer Immunol Res., 6(12):1459-1471 (2016); Wang et al., Nat Commun., 9(1):3503 (2018)).

면역 조절 입자 (IMPs)는 면역조절 성질을 갖은 음으로 하전된 나노입자다 (US 특허 공개 번호 US20150010631; US 20130323319 참고).

요약

본 명세서는 암 및 증식성 질환을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 대상체에서 단핵구 및 다른 식작용 세포를 억제시킬 수 있는 항원 또는 다른 생활성 제제가 없는 면역 조절 입자를 암 치료요법과 병용하여 투여하는 것을 포함한다. 이론에 얽매이지 않고, IMPs는 해당 대상체에게 투여될 때, 종양 미세환경에서 면역억제성 단핵구-유래된 세포를 변경시키고, 이는 다시 상기 다른 암 치료요법의 효과를 높일 것이라고 가설을 세웠다. IMPs와 암 치료제를 이용하는 병용 치료요법은 종양 세포를 표적으로 할 뿐만 아니라, MDSCs, TAMs, 호중구, 다른 단핵구-유래된 세포, 그리고 종양-연합된 기질을 표적으로 함으로써 면역억제성 종양 미세환경을 극복할 수 있고, 그리고 암 치료제, 이를 테면 면역 체크포인트 억제제들을 이용하는 단일치료요법과 비교하여 강화된 치료요법적 이점을 제공할 수 있다고 본원에서 제시된다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 암을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 종양 부위에서 골수-유래된 억제자 세포 (MDSCs), 종양-연합된 대식세포 (TAMs), 호중구, 단핵구, 수지상 세포, 및/또는 기질 집단을 변경시킨다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 암을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 종양-연합된 기질을 변경시킨다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 암을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 기질 결합 조직, 섬유아세포, 내피, 지방 조직, 세포외 매트릭스, 주변세포들(pericytes), 암 줄기 세포, 간엽 줄기 세포, 및/또는 간엽 기질 세포를 변경시킨다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 암을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 종양 크기 및/또는 종양 성장을 감소시킨다. 다양한 구체예들에서, 이러한 투여로 종양 세포에 의해 이 입자가 직접 취입됨으로써 종양 세포 사멸, 아팝토시스(apoptosis), 및/또는 괴사가 유도된다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 암을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 항-종양 면역 반응을 조절한다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 암을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 종양-특이적 면역 반응을 변경 또는 조절한다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 증식성 질환을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 종양 부위에서 골수-유래된 억제자 세포 (MDSCs), 종양-연합된 대식세포 (TAMs), 수지상 세포, 호중구 및/또는 단핵구를 변경시킨다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 증식성 질환을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 종양-연합된 기질을 변경시킨다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 증식성 질환을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 기질 결합 조직, 섬유아세포, 내피, 지방 조직, 세포외 매트릭스, 주변세포들, 암 줄기 세포, 간엽 줄기 세포, 및/또는 간엽 기질 세포를 변경시킨다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 증식성 질환을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 종양 크기 및/또는 종양 성장을 감소시킨다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 증식성 질환을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 항-종양 면역 반응을 조절한다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 증식성 질환을 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 종양-특이적 면역 반응을 조절한다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 암 또는 증식성 장애를 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 암 치료제와 병용하여 투여하는 것을 포함하고, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없고, 이때 이러한 투여는 암 줄기 세포를 조절한다.

다양한 구체예들에서, 상기 음으로 하전된 입자들은 폴리글리콜산 (PGA) 입자, 폴리락트산 (PLA) 입자, 폴리스티렌 입자, 폴리(락트-코-글리콜산) (PLGA) 입자, 다이아몬드 입자, 또는 철, 아연, 카드뮴, 금, 또는 은 입자, 또는 이들의 조합이다.

일부 구체예들에서, 상기 음으로 하전된 입자들은 폴리 (락트-코-글리콜산) (PLGA) 입자다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 약 50:50, 약 80:20 내지 약 100:0 폴리락트산:폴리글리콜산 또는, 약 50:50, 약 80:20 내지 약 100:0 폴리글리콜산:폴리락트산을 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 50:50의 폴리락트산:폴리글리콜산을 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 폴리락트산:폴리글리콜산 약 99:1 내지 약 1:99을 포함하며, 이들 값 사이에 있는 모든 값과 범위가 내포된다.

다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 표면 기능화된다. 다양한 구체예들에서, 표면 기능화는 카르복실화에 의해 달성된다. 추가 구체예들에서, 표면 기능화는 표적화 제제의 첨가에 의해 달성된다. 일부 구체예들에서, 상기 표적화 제제는 폴리펩티드, 항체, 핵산, 지질, 소분자, 탄수화물 및 계면활성제를 포함한다. 다양한 구체예들에서, 표면 기능화된 나노입자들은 단핵구, 호중구, 대식세포, 수지상 세포, T-세포, B-세포, NK 세포, NK T-세포, 섬유아세포, 암 연합된 섬유아세포, 내피 세포, 지방세포, 주변세포들, 내피, 맥관구조, 림프관, 종양-연합된 맥관구조, 간엽 기질 세포, 간엽 줄기 세포, 및/또는 세포외 매트릭스에 선호적으로 표적화된다.

다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 -100mV 내지 -1mV의 제타 전위를 갖는다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 -80mV 내지 -30mV의 제타 전위를 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 입자들의 제타 전위는 약 -100mV 내지 약 -40mV, 약 -75mV 내지 약 -40mV, 약 -70mV 내지 약 -30mV, 약 -60mV 내지 약 -35mV, 또는 약 -50mV 내지 약 -40mV이다. 다양한 구체예들에서, 상기 제타 전위는 약 -30mV, -35mV, -40mV, -45mV, -50mV, -55mV, -60mV, -65mV, -70mV, -75mV, -80mV, -85mV, -90mV, -95mV 또는 -100mV이며, 이들 값 사이에 있는 모든 값과 하위 범위가 내포된다.

다양한 구체예들에서, 상기 음으로 하전 된 입자의 직경은 0.1μm 내지 10μm이다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들의 평균 직경은 약 0.2μm 내지 약 2μm; 약 0.3μm 내지 약 5μm; 약 0.5μm 내지 약 3μm; 또는 약 0.5μm 내지 약 1μm이다. 일부 구체예들에서, 상기 입자들의 평균 직경은 약 100 내지 1500nm, 약 200 내지 2000nm, 약 100 내지 10000nm, 약 300 내지 1000nm, 약 400 내지 800nm, 또는 약 200 내지 700nm을 갖는다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들의 평균 직경은 약 100nm, 200nm, 300nm, 400nm, 500nm, 600nm, 700nm, 800nm, 900nm, 1000nm, 1100nm, 1200nm, 1300nm, 1400nm, 1500nm, 또는 2000nm을 갖고, 이러한 값 사이에 있는 모든 값과 그 하위 범위가 내포된다. 일부 구체예들에서, 상기 음으로 하전 된 입자의 직경은 400nm 내지 800nm이다.

다양한 구체예들에서, 해당 대상체는 뇌암, 피부암, 안암, 유방암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 식도암, 두경부암, 자궁경부암, 간암, 결장암, 결장직장암, 직장암, 골암, 자궁암, 난소암, 방광암, 위암, 구강암, 갑상선암, 신장암, 고환암, 백혈병, 림프종 및 중피종으로 구성된 군에서 선택된 암을 가지고 있다. 상기 방법들에 의해 고려되는 추가 암은 상세한 설명에 개시되어 있다.

다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 성장 억제제들, DNA-복제 억제제들, 키나제 억제제들, 신호전달 캐스캐이드 억제제들, 혈관신생 억제제들, 대사 억제제들, 아미노산 합성 억제제들, 발암성 단백질들의 선택적 억제제들, 전이 억제제들, 항-아팝토시스 인자들의 억제제들, 아팝토시스 유도제들, 뉴클레오시드 신호전달 억제제들, 효소 억제제들 및 DNA-손상 제제로 구성된 군에서 선택된 화학요법제다.

다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 사이토킨, 혈관신생 억제제들, 효소, 면역 체크포인트 조절제 및 단일클론 항체로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 생물학적 제제를 포함한다.

다양한 구체예들에서, 사이토킨은 형질전환 성장 인자들, 종양 괴사 인자, 인터페론 및 인터루킨로 구성된 군에서 선택된다. 예시적인 사이토킨에는 IFN-알파, IFN-베타, IFN-감마, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, TGF-β1, TGF-β2 및 TGF-β3을 비롯한 형질전환 성장 인자 베타 수퍼패밀리의 구성요소들, 종양 괴사 인자 알파, 과립구 콜로니-자극 인자 (G-CSF), 그리고 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자 (GM-CSF)들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.

다양한 구체예들에서, 상기 단일클론 항체는 단일-특이적, 이중-특이적, 삼중-특이적 또는 이중특이적 T-세포 참여 (BiTE) 항체다.

다양한 구체예들에서, 상기 단일클론 항체는 항-종양 면역 반응을 유도하는 면역 세포 공동-자극 분자 작용제다. 예시적인 공동-자극 분자에는 ICOS 유도성 T 세포 공동-자극인자) (CD278), OX40 (CD134), 41BB, GITR (글루코코르티코이드-유도된 종양 괴사 인자 수용체), CD40 및 CD27이 내포되지만, 이에 국한되지 않는다.

다양한 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 조절제는 예정된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 예정된 세포 사멸 단백질 리간드-1 (PD-L1), 세포독성 T-림프구-연합된 단백질 4 (CTLA-4), T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 함유-3 (TIM-3), 림프구-활성화 유전자 3 (LAG-3) 및/또는 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역 수용체)를 표적으로 한다. 다양한 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 조절자는 이필리무맙(ipilimumab), 트레멜리무맙(tremelimumab), 펨브롤리주맙(pembrolizumab), 니볼루맙(nivolumab), 아테졸리주맙(atezolizumab), 아벨루맙(avelumab), 쎄미플리맙(cemiplimab) 및 두르발루맙(durvalumab)으로 구성된 군에서 선택된 항체다.

다양한 구체예들에서, 본 발명에 유용한 단일클론 항체는 알렘투주맙(Alemtuzumab), 베바치주맙(Bevacizumab), 브렌투시맙(Brentuximab), 쎄투시맙(Cetuximab), 데노수맙(Denosumab), 이브리투모맙(Ibritumomab), 트라스투주맙(Trastuzumab), 파니투무맙(Panitumumab), 페르투주맙(Pertuzumab), 그리고 리투시맙(Rituximab)을 포함하는 군에서 선택된다. 다양한 구체예들에서, 본 발명에 유용한 단일클론 항체는 수용체 티로신 키나제, EGFR, VEGF, VEGFR, PDGF, PDGFR, TGF-β, TGF-β-LAP, SIRP-α, CD47, CD39, CD73, 그리고 섬유아세포 활성화 단백질 (FAP)을 표적으로 한다.

다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 효소를 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 T-세포, B-세포, APCs, 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, MDSCs, TAMs, 호중구, 다른 단핵구-유래된 세포, 종양-연합된 기질, 암 줄기 세포, 간엽 줄기 세포, 세포외 매트릭스, 그리고 아미노산을 표적으로 하는 효소를 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 아스파라기나제, 카누리니나제, L-아르기닌 데이미나제, L-메티오닌-γ-리아제, 하나 또는 그 이상의 아미노산 분해 효소, 그리고 하나 또는 그 이상의 뉴클레오시드 분해 효소를 포함하는 군에서 선택된 효소를 포함한다.

다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 입양 세포 전달, 종양-침윤성 백혈구 치료요법, 키메라 항원 수용체 T-세포 치료요법 (CAR-T), NK-세포 치료요법 및 줄기 세포 치료요법으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 세포-기반 치료요법을 포함한다.

다양한 구체예들에서, 상기 세포-기반 치료요법은 환자-유래된 자가(autologous) 세포의 입양 전달(adoptive transfer)이다. 다양한 구체예들에서, 상기 세포-기반 치료요법은 동종이계 공여자-유래된 세포의 입양 전달이다.

다양한 구체예들에서, 상기 세포-기반 치료요법은 환자 특이적이지 않고. 장기간 저장이 가능한 범용 공여자-유래된 또는 유도된 다능성 줄기 세포-유래된 세포의 전달이다. 이러한 치료요법은 또한 "기성품 치료제(off-the-shelf therapies)"라고도 지칭된다.

다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 호르몬 치료요법이다. 다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 하나 또는 그 이상의 항체-약물 콘쥬게이트를 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 하나 또는 그 이상의 암 백신을 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 암 백신은 단백질, 폴리펩티드, 핵산 백신 및/또는 수지상 세포 백신이다.

다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 종양용해성 바이러스, 박테리아, 종양용해성 박테리아 또는 다른 박테리아 조성물, Bacillus Calmette-Guerin (BCG), 미생물군집 조절자, 및/또는 톨-유사 수용체 (TLR) 작용제를 포함하는 군에서 선택된 면역치료요법이다. 다양한 구체예들에서, 상기 TLR 작용제는 TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12, 및/또는 TLR13 작용제다. 다양한 구체예들에서, 상기 TLR 작용제는 바이러스, 박테리아로부터 유래되거나 및/또는 합성에 의해 만들어진다. 다양한 구체예들에서, 상기 면역치료요법은 STING 경로 조절자다.

다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 바이러스성 또는 박테리아 벡터를 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 바이러스성 벡터는 아데노바이러스, 아데노-연합된 바이러스 (AAV), 단순 헤르페스 바이러스, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 알파바이러스, 플라비바이러스, 랍도바이러스, 홍역 바이러스, Newcastle 질환 바이러스, 폭스바이러스, 백시니아 바이러스, 변형된 Ankara 바이러스, 수포성 구내염 바이러스, 피코마바이러스, 담배 모자이크 바이러스, 감자 바이러스 x, 코모바이러스 또는 오이 모자이크 바이러스를 포함하는 군에서 선택된다. 다양한 구체예들에서, 상기 바이러스는 종양용해성 바이러스다. 다양한 구체예들에서, 상기 바이러스는 키메라 바이러스, 합성 바이러스, 모자이크 바이러스 또는 모의유형의 바이러스다.

상기 방법들에 사용하기 위해 고려되는 추가 암 치료제는 상세한 설명에 제시되어 있다.

다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 및/또는 상기 암 치료제는 주 2회, 주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 2개월에 1회, 3개월에 1회, 6개월에 1회 또는 1년에 1회 투여된다.

다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 및/또는 상기 암 치료제는 정맥내, 경구, 비강, 근육내, 안구내, 경피, 또는 피하로 투여된다.

다양한 구체예들에서, 해당 대상체는 포유류다. 다양한 구체예들에서, 해당 대상체는 인간이다.

다양한 구체예들에서, 상기 투여로 상기 암 또는 증식성 장애의 하나 또는 그 이상의 증상이 개선된다. 다양한 구체예들에서, 상기 하나 또는 그 이상의 증상은 해당 대상체에서 종양 크기 또는 종양 부하, 종양 전이, 그리고 이 종양 또는 종양 미세환경에서 염증성 세포의 수준으로 구성된 군에서 선택된다. 다양한 구체예들에서, 상기 투여로 종양 크기 또는 종양 부하가 10%, 20%, 30% 또는 그 이상으로 감소된다. 다양한 구체예들에서, 상기 투여로 종양에서 단핵구, 대식세포, 과립구, 수지상 세포 및/또는 호중구가 변경된다.

다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 조성물로 제형화된다. 다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 조성물로 제형화된다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들과 암 치료제는 동일한 조성물 또는 별개의 조성물로 제형화될 수 있다.

본 명세서의 전술한 입자 또는 암 치료제 조성물중 임의의 것을 포함하는 조성물, 또는 염증과 암 및/또는 증식성 질환과 연합된 본원에 기재된 임의의 장애 치료를 위한 의약품 제조에 있어서 이의 용도 또한 고려된다.

본 명세서에 기재된 각각의 특징 또는 구체예들 또는 이의 조합은 본 발명의 임의의 측면의 비-제한적인 예시적인 예이며, 따라서 여기에서 설명된 임의의 다른 특징 또는 구체예 또는 이의 조합과 결합될 수 있음을 의미하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 여기에서 특징들이 이를 테면 "한 구체예", "일부 구체예들", "추가 구체예", "특이적 예시적인 구체예들", 및/또는 "또다른 구체예"과 같은 언어로 기술될 경우, 이러한 유형의 구체예 각각은 모든 가능한 조합을 나열할 필요없이, 본원에서 설명된 임의의 다른 특징 또는 특징들의 조합과 결합되도록 의도된 비-제한적인 특징들의 예들이다. 이러한 특징 또는 특징들의 조합은 본 발명의 임의의 측면에 적용된다. 범위 내에 속하는 값의 예시들이 공개되는 경우, 이러한 예시들 중 임의의 예시는 범위의 가능한 끝점으로 고려되고, 이러한 끝점 사이의 임의의 값과 모든 숫자 값이 고려되며, 상한 및 하한 끝점의 모든 조합도 가능하다.

도 1은 IMP 및 체크포인트 억제제 항-PD-1 항체 투여를 위한 예시적인 치료 일정을 제시한다.
도 2는 IMP + 항-PD-1 병용 치료요법은 LLC 세포에서 단일 치료요법 치료와 비교하였을 때, 종양 성장이 상당히 감소된 개선을 보여준다.
도 3A-3B는 IMPs를 단독으로, 또는 항-PD1 체크포인트 억제제 항체와 병용 투여하였을 때, 이의 항-종양 효과를 보여준다. 마우스에게 MC38 종양 세포를 이식하고, 만져지는 종양이 형성된 후, 염수 대조군, IMPs, 항-PD1, 또는 IMPs + 항-PD1으로 처리하였다. (도 3A) 대조군 처리와 비교하여, IMPs으로 처리하면 종양 성장이 억제되었다. IMP 효능은 항-PD1 치료와 필적하였다. IMPs+항-PD1을 이용한 처리에서 종양 성장의 억제 강화와 함께 상승작용이 나타났다. (도 3B) 대조군 처리와 비교하였을 때, IMPs으로 생존이 연장되었다. IMP 생존 효능은 항-PD1보다 우수하였다. IMPs+항-PD1을 이용한 처리에서 대조군과 비교하고, 각 단일치료요법과 비교하였을 때, 생존이 연장된, 상승작용이 나타났다.

상세한 설명

IMPs는 순환계에서 면역억제성 단핵구를 특이적으로 표적으로 삼아, 이들 단핵구가 종양 부위(여기에서 이들의 면역억제성 활성은 종양 성장, 증식 및 전이를 촉진시킨다)로 밀매되는 것을 방지하는 매력적인 기회를 제공한다. 항-PD1 단일클론 항체와 같은 다른 항-암 치료제와 함께 IMP 치료요법으로 면역 억제 종양 미세환경의 파괴/변형을 복합시키면 오로지 종양만을 표적으로 하는 단일치료요법 보다 상당한 잇점을 제공할 것으로 기대된다.

정의:

본원에 인용된 각각의 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고 문헌은 본 개시 내용과 일치하지 않는 범위까지 이들의 전문이 참고자료에 편입된다.

본 명세서에서 단수("a", "an" 및 "the")형은 다른 명시적인 언급이 없는 한 복수 개념을 포함한다.

본원에 사용된 "입자"는 임의의 비-조직 유래된 물질 조성물을 지칭하며, 이는 구체(sphere) 또는 구체-형 실체, 비드 또는 리포솜일 수 있다. 용어 "입자", "면역 변형 입자" 및 "비드"는 문맥에 따라 상호 호환적으로 사용될 수 있다. 추가로, 용어 "입자"는 비드 및 구체를 포괄하는데 사용될 수 있다.

본원에서 사용되는 "표면-기능화된다"라는 것은 입자의 표면에 화학적 기능기가 도입되는 것을 지칭한다. 표면 기능화된 입자는 소수성 단량체와 카르복실산, 포스페이트, 히드록실, 술포네이트, 포스포네이트, 그리고 아민 또는 암모늄기, 뿐만 아니라 다른 기능기와의 자유-라디칼 공-중합에 의해 제조될 수 있다. 표면 기능화된 나노입자들의 일반적인 제법은 예를 들어, Froimowicz et al., Curr Org. Chem 17:900-912, 2013에서 기술되고 있다.

"본원에서 이용된 생분해가능한이란 예를 들면, 기능기가 용액 안에 물과 반응함으로써, 분해될 수 있는 중합체를 포함하는 입자를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "분해"란 분자량 감소 또는 소수성기를 친수성기로 전환시킴으로써 가용성이 되는 것을 의미한다. 생분해가능한 입자는 체내에서 장시간 지속되지 않으며, 완전하게 분해되는 시간을 조절할 수 있다. 본 발명에 유용한 생체적합성, 생분해가능한 중합체에는 카프로락톤, 탄산염, 아미드, 아미노산, 오르소에스테르, 아세탈, 시아노아크릴레이트 및 분해가능한 우레탄의 중합체 또는 공중합체, 뿐만 아니라 직쇄 또는 분기된, 치환된 또는 치환안된, 알카닐, 할로알킬, 티오알킬, 아미노알킬, 알케닐, 또는 방향족 히드록시-또는 디-카르복실산을 갖는 공중합체가 내포된다. 또한, 반응성 측쇄를 갖는 생물학적으로 중요 아미노산, 이를 테면 리신, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 트레오닌, 티로신 및 시스테인, 또는 이들의 거울상체는 전술한 물질중 임의의 것과 함께 공중합체에 내포되어, 항원 펩티드 및 단백질들 또는 콘쥬게이팅 모이어티에 콘쥬게이팅하기 위한 반응기를 제공할 수 있다. 본 발명에 적합한 생분해가능한 물질들에는 다이아몬드, PLA, PGA, 폴리프로필렌 술파이드, 그리고 PLGA 중합체, 뿐만 아니라 금속 이를 테면, 철 (Fe), 아연 (Zn), 카드늄 (Cd), 금 또는 은이 내포된다. 생체적합성이지만 생분해-불가능 물질을 또한 본원에서 기술된 입자에 이용할 수 있다. 예를 들어, 아크릴레이트, 에틸렌-비닐아세테이트, 아실 치환된 셀룰로오스 아세테이트, 비-분해성 우레탄, 스티렌, 비닐 클로라이드, 비닐 플루오라이드, 비닐 이미다졸, 클로로설폰화된 올레핀, 에틸렌 옥사이드, 비닐 알코올, TEFLON® (DuPont, Wilmington, Del.) 및 나일론의 생분해-불가능한 중합체들이 사용될 수 있다.

본원에 사용된 "음으로 하전된 입자"이란 0 미만의 순 표면 전하를 갖도록 변형된 입자를 지칭한다.

제타 전위는 고체 표면과 이의 액체 매질 사이의 경계 면에서 발생하는 전하다. "음의 제타 전위"란 제타 전위를 계산하기 위해 현장에 알려진 기기, 가령, NanoBrook ZetaPlus 제타 전위 분석기 또는 Malvern Zetasizer로 측정될 때, 밀리 볼트 (mV)로 표시되는 입자 표면의 제타 전위를 가지는 입자를 지칭한다.

"카르복실화된 입자" 또는 "카르복실화된 비드" 또는 "카르복실화된 구체"에는 해당 입자 표면 상에 하나 또는 그 이상의 카르복실기를 추가하기 위해 변형된 또는 표면 기능화된 임의의 입자가 내포된다 일부 구체예들에서, 카르복실기의 첨가는 예를 들어, MARCO와 같은 포식자(scavenger) 수용체와의 상호작용을 통해 순환계로부터 해당 입자의 식세포/단핵구 취입을 향상시킨다. 상기 입자들의 카르복실화는 폴리 (에틸렌-말레산 무수물) (PEMA)를 비롯한, 그러나 이에 국한되지 않은 임의의 화합물을 이용하여 달성될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "조절하다" 또는 "변경하다"란 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 면역 반응의 변형, 조절 또는 변경을 지칭한다. 면역 반응의 변형 또는 변경의 예에는 부위 또는 종양 미세환경에서 면역억제성 세포 수 또는 활성 종양의 감소, 부위 또는 종양 미세환경에서 면역억제성 면역 세포 침윤의 감소, 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 전-염증성 면역-세포 수의 증가, 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 전-염증성 면역-세포 침윤의 증가, 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 전-염증성 면역-세포 활성 또는 기능의 증가, 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 항-종양 면역-세포 수의 증가, 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 항-종양 면역-세포 침윤의 증가, 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 면역 세포의 항-종양 활성 또는 기능의 증가, 및/또는 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 면역 억제와 연합된 세포의 사멸 증가가 내포되지만, 이에 국한되지 않는다.

본원에서 사용된 "종양 미세환경" (TME)이란 종양 세포를 둘러싸고 있으며, 이에 영양을 공급하는 세포, 분자, 그리고 혈관을 지칭한다(National Cancer Institute Dictionary of Cancer Terms). 상기 종양 미세환경에는 면역 세포, 이를 테면 골수유래된 염증성 세포, 골수-단핵 세포, 골수 유래된 억제자 세포, 종양 연합된-대식세포, 수지상 세포, 그리고 림프구, 기질, 섬유아세포, 신호전달 분자 및 상기 세포외 매트릭스 (ECM)가 내포된다 (Joyce et al., Science 348:74-80, 2015).

본원에 사용된 "대상체"란 본원에 기재된 바와 같은 입자가 투여되는 인간 또는 비-인간 동물 (포유류 또는 영장류 포함)을 지칭한다. 대상체에는 개, 고양이, 쥐, 생쥐, 토끼, 말, 돼지, 양, 소, 인간 및 기타 영장류와 같은 동물이 내포될 수 있다.

용어 "치료요법적으로 유효량"이란 치료되는 질환 또는 장애의 하나 또는 그 이상의 증상 또는 징후를 개선 또는 경감시키는 데 효과적인 본 명세서의 표적-특이적 조성물의 양을 나타내기 위해 본원에서 사용된다.

본원의 방법과 관련하여 사용된 용어 "치료하다", "치료하는", "치료하는" 및 "치료"는 사건, 질병 또는 병태의 하나 또는 그 이상의 임상적 증상, 현시 또는 진행을 일시적으로 또는 영구적으로, 부분적으로 또는 완전하게 제거, 감소, 억제 또는 개선시키는 것을 말한다. 그러한 치료가 절대적으로 유용할 필요는 없다.

체크포인트 조절제

분화 클러스트 279 (CD279)로도 알려져 있는 예정된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1)은 활성화된 T 세포, B 세포 및 대식세포 상에서 발현되는 세포 표면 공동-억제제 수용체이며, 그리고 면역 체크포인트 봉쇄 성분이다 (Shinohara et al., Genomics., 23(3):704, (1994); Francisco et al., Immunol Rev., 236: 219, (2010)). PD-1은 이의 두 개 리간드 PD-L1(B7-H1로도 알려짐; CD274) 및 PD-L2 (B7-DC; CD273)과 상호작용할 때, T 세포 활성을 제한시킨다(Postow et al., J Clin Oncol., 33: 9, (2015)). PD-1과 PD-L1 및 PD-L2의 상호작용으로 T-세포 증식, 사이토킨 생산, 그리고 세포독성 활성이 감소된다 (Freeman GJ et al., J Exp Med., 192:1027-34, (2000); Brown JA et al., J Immunol., 170:1257-66, (2003)).

두 가지 단일클론 항체는 PD-1 면역치료요법의 억제용으로 U.S. Food and Drug Administration (FDA)으로부터 승인을 받았다. 펨브롤리주맙 (KEYTRUDA®, Merck Sharp & Dohme Corp.)은 전이성 흑색종에 사용을 승인받았고, 니볼루맙 (Opdivo®, Bristol-Myers Squibb)은 전이성 흑색종 및 전이성 편평 비-소 세포 폐암 (NSCLC)에 사용을 승인받았다. 이들 항체는 모두 PD-1 수용체에 결합하고, 이의 리간드들, PD-L1 및 PD-L2과의 상호작용을 차단시킨다. 다양한 구체예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 이의 리간드들, PD-L1 및 PD-L2중 하나 또는 모두에 PD-1 수용체의 결합을 억제 또는 차단한다.

PD-1에 대한 추가 항체는 US 특허 번호 8,735,553; 8,617,546; 8,008,449; 8,741,295; 8,552,154; 8,354,509; 8,779,105; 7,563,869; 8,287,856; 8,927,697; 8,088,905; 7,595,048; 8,168,179; 6,808,710; 7,943,743; 8,246,955; 및 8,217,149에서 기술되어 있다.

PD-L1의 억제제는 방광암, 두경부암 및 위암에서 고형 종양 억제에 또한 효과적인 것으로 나타났다 (Herbst RS et al., J Clin Oncol., 31 : 3000 (2013); Heery CR et al., J Clin Oncol., 32: 5s, 3064 (2014); Powles T et al., J Clin Oncol, 32: 5s, 501 1 (2014); Segal NH et al., J Clin Oncol., 32: 5s, 3002 (2014)).

CTLA-4 (세포독성 T -림프구-연합된 단백질 4) (CD152)는 조절 T 세포에서 구성적으로 발현되지만, 활성화 후 기존 T 세포에서만 상향 조절되는 단백질 수용체다. CTLA-4는 T 세포 신호전달 및 APC 활성화의 CTLA-4/CD28: B7-1/B7-2 공동-자극 경로의 구성원이며 (Grosso et al., Cancer Immun. 13:5, 2013), B7-1 또는 B7-2에 결합함으로써 T 세포 반응들을 감쇠시키는 T 세포 활성화의 네가티브 조절자로 기능한다. CTLA-4는 면역 체크포인트로 기능한다고 가정된다. CTLA-4에 특이적 항체에는 흑색종 치료용으로 승인된 트레멜리무맙, 그리고 이필리무맙 (YERVOY^®)이 내포된다.

LAG-3 (림프구-활성화 유전자 3)(CD223)은 활성화된 T-세포를 비롯한 다수의 면역 세포 상에서 발현되는 세포-표면 수용체다. LAG-3은 CD8⁺ T-세포의 네가티브 조절자이며, 이의 결핍은 CD8⁺ T-세포 증식 강화와 연합된다 (Workman et al. J Immunol 174:688-695 (2005)). 중요한 것은, LAG-3은 종양 침윤성 림프구 상에서 PD-1과 공동-발현되며, 전-임상 종양 모델 및 암 환자 샘플 모두에서 T-세포를 고갈시켰으며, 종양 면역 회피를 촉진시키는 것으로 나타났다 ((Andrews et al., Immunol Rev., 276(1):80-96 (2017); Le Mercier et al. Front Immunol., 6:418 (2015); Woo et al. Cancer Res., 15;72(4):917-27 (201 1); Zhou et al. Oncoimmunology 7(7):e1448332 (2018)). LAG-3 억제는 전임상 모델에서 치료 전략으로서의 가능성을 보여주었다(Grosso et al. J Clin Invest., 117(11):3383-92 (2007); Woo et al. Cancer Res., 15;72(4):917-27 (2011)). 다양한 암에 대해 현재 임상에서 단일클론 항체 단독으로, 또는 다른 체크포인트 억제제 항체, 이를 테면 니볼루맙®과 펨브롤리주맙®과의 병용하여 LAG-3의 억제를 현재 테스트하고 있다.

TIM-3 (T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 함유-3)은 말단 분화된, 그리고 활성화된 T-세포에서 발현되는 것으로 밝혀진 막-횡단 단백질이며, T-세포 반응 및 염증성 사이토킨 이를 테면 IFN-γ의 발현 억제를 담당한다. TIM-3은 종양 침윤 림프구에서 PD-1과 함께 공동-발현되며, 이의 발현은 T-세포 고갈 및 T-세포 반응 억제와 상관 관계가 있다(Linhares et al., Front Immunol., 9:1909 (2018); Das et al. Immunol Rev. 276(1):97-111 (2017)). CD8⁺T 세포에서 TIM-3의 높은 수준 발현은 종양 면역 회피와 연합되며, 암 환자의 예후 불량과 관련있다 (Anderson et al. Immunity 17;44(5):989-1004 (2016); Das et al. Immunol Rev. 276(1):97-111 (2017)). 더욱이, 종양 침윤 림프구를 발현시키는 PD-1에서 TIM-3의 상향 조절은 항-PD-1 치료제에 대한 내성을 매개하는 것으로 나타났다 (Koyama et al., Nat Commun., 7:10501 (2016)). 이러한 관찰과 일치하여, 항-PD-1와 함께 TIM-3의 단일클론 항체 매개된 공동-봉쇄는 몇 가지 전-임상적 종양 모델에서 유망한 항-종양 효과를 보여주었고(Ngiow et al., Cancer Res., 3540-3551 (2011); Anderson et al. Immunity 17;44(5):989-1004 (2016)), 그리고 항-TIM-3 단일클론 항체 단독으로, 또는 체크포인트 억제제 항체와 병용하였을 때 이의 효능을 평가하는 임상 시험이 현재 진행 중이다.

면역-조절 입자

일부 구체예들에서, 본 명세서는 네가티브 제타 전위를 가지며, 그리고 연합된 항원, 펩티드 또는 다른 생활성 물질이 없는 입자들을 본 치료 방법에서 용도를 제공한다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 표면 기능화된 입자다.

입자들은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 입자들은 바람직하게는 생물학적 용도에 적합한 재료로 구성된다. 예를 들어, 입자는 유리, 실리카, 히드록시 카르복실 산의 폴리에스테르, 디카르복실산의 폴리무수물, 또는 히드록시 카르복실산과 디카르복실산의 공-중합체 및 생체적합성 금속으로 구성될 수 있다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 직쇄 또는 분기된, 치환된 또는 치환안된, 포화된 또는 불포화된, 선형 또는 가교된, 알카닐, 할로알킬, 티오알킬, 아미노알킬, 아릴, 아랄킬, 알케닐, 아르알케닐, 헤테로아릴, 또는 알콕시 히드록시산의 폴리에스테르, 또는 직쇄 또는 분기된, 치환된 또는 치환안된, 포화된 또는 불포화된, 선형 또는 가교된, 알카닐, 할로알킬, 티오알킬, 아미노알킬, 아릴, 아랄킬, 알케닐, 아르알케닐, 헤테로아릴, 또는 알콕시 디카르복실산의 다가무수물로 구성될 수 있다. 또한 입자는 양자 점(quantum dots)이거나, 또는 양자점 폴리스티렌 입자와 같은 양자 점으로 구성될 수 있다(Joumaa et al. (2006) Langmuir 22:1810-6). 에스테르 및 무수물 결합의 혼합물을 포함하는 입자 (예를 들어, 글리콜산 및 세바스산의 공-중합체)가 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 입자는 폴리글리콜산 중합체 (PGA), 폴리락트산 중합체 (PLA), 폴리세박산 중합체(PSA), 폴리(락트-코-글리콜) 산 공-중합체 (PLGA 또는 PLG; 용어는 호환 가능), [rho] 올리(라틱-코-세바스) 산 공-중합체 (PLSA), 폴리 (글리콜산-코-세바스)산 공-중합체 (PGSA), 폴리프로필렌 설파이드 중합체, 폴리 (카프로락톤), 키토산 등등이 내포된 물질을 포함할 수 있다. 본 발명에 유용한 다른 생체적합성, 생분해가능한 중합체에는 카프로락톤, 탄산염, 아미드, 아미노산, 오르소에스테르, 아세탈, 시아노아크릴레이트 및 분해가능한 우레탄의 중합체 또는 공-중합체, 뿐만 아니라 직쇄 또는 분기된, 치환된 또는 치환안된, 알카닐, 할로알킬, 티오알킬, 아미노알킬, 알케닐, 또는 방향족 히드록시-또는 디-카르복실산을 갖는 것들의 공-중합체가 내포된다. 또한, 반응성 측쇄를 갖는 생물학적으로 중요 아미노산, 이를 테면 리신, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 트레오닌, 티로신 및 시스테인, 또는 이들의 거울상체는 전술한 물질중 임의의 것과 함께 공중합체에 내포되어, 항원 펩티드 및 단백질들 또는 콘쥬게이팅 모이어티에 콘쥬게이팅하기 위한 반응기를 제공할 수 있다. 본 발명에 적합한 생분해가능한 물질에는 다이아몬드, PLA, PGA, 폴리프로필렌 술파이드, 그리고 PLGA 중합체, 뿐만 아니라 금속 이를 테면 철 (Fe), 아연 (Zn), 카드늄 (Cd), 금 (Au) 또는 은 (Ag)이 내포된다. 생체적합성이지만 생분해-불가능 물질을 또한 본원에서 기술된 입자에 이용할 수 있다. 예를 들어, 아크릴레이트, 에틸렌-비닐아세테이트, 아실 치환된 셀룰로오스 아세테이트, 비-분해성 우레탄, 스티렌, 비닐 클로라이드, 비닐 플루오라이드, 비닐 이미다졸, 클로로설폰화된 올레핀, 에틸렌 옥사이드, 비닐 알코올, TEFLON® (DuPont, Wilmington, Del.) 및 나일론의 생분해-불가능한 중합체들이 사용될 수 있다.

본 명세서의 입자들은 당업계에 공지된 임의의 수단에 의해 제조될 수 있다. 입자를 제조하는 예시적인 방법은 마이크로에멀젼 중합, 계면 중합, 침전 중합, 에멀젼 증발, 에멀젼 확산, 용매 치환 및 염석(salting out)이 내포되나, 이에 국한되지는 않는다 (Astete and Sabliov, J. Biomater. Sci. Polymer Edn., 17:247-289(2006)). 본 명세서에서 고려되는 입자 제조 방법은 US 특허 9,616,113 및 국제 특허 공개 WO/2017/143346에 개시되어 있다. PLGA 입자에 대한 제조 공정의 조작으로 입자 특성 (예를 들면, 크기, 크기 분포, 제타 전위, 형태, 소수성/친수성, 폴리펩티드 포획 등)을 제어할 수 있다. 입자의 크기는 예를 들면, PLGA와 같은 중합체의 농도, 입자 제조에 사용되는 용매, 유기상의 속성, 제조에 사용되는 계면 활성제), 연속 및 불연속 상(phase)의 점도, 사용된 용매의 속성, 사용된 물의 온도, 초음파처리, 증발 속도, 첨가제, 전단 응력, 멸균 그리고 임의의 캡슐화된 항원 또는 폴리펩티드의 속성이 내포되나, 이에 국한되지 않는 여러 요인의 영향을 받는다.

다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 중합체, 공-중합체, 덴드리머(dendrimers), 다이아몬드 나노입자, 폴리스티렌 나노입자 또는 금속을 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 폴리글리콜산 중합체 (PGA), 폴리락트산 (PLA), 폴리스티렌, PGA와 PLA의 공중합체 (폴리(락티드-코-글리콜리드) (PLGA)), 다이아몬드 (PLGA), 리포좀, PEG, 사이클로덱스트란, 또는 금속, 이를 테면 철 (Fe), 아연 (Zn), 카드늄 (Cd), 금 (Au) 또는 은 (Ag)을 포함하는 것이 고려된다.

다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 약 50:50, 약 80:20 내지 약 100:0의 폴리락트산:폴리글리콜산 몰 비율, 또는 약 50:50, 약 80:20 내지 약 100:0의 폴리글리콜산:폴리락트산 몰 비율을 갖는 공-중합체다. 일부 구체예들에서, 상기 입자들은 폴리(락트-코-글리콜산) 입자다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 50:50의 폴리락트산:폴리글리콜산을 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 폴리락트산:폴리글리콜산 약 99:1 내지 약 1:99을 포함하며, 이들 값 사이에 있는 모든 값과 범위가 내포된다.

일부 구체예들에서, 상기 입자들의 제타 전위는 약 -100mV 내지 약 -1mV 범위다. 일부 구체예들에서, 상기 입자들의 제타 전위는 약 -100mV 내지 약 -40mV, 약 -80mV 내지 약 -30mV, 약 -75mV 내지 약 -40mV, 약 -70mV 내지 약 -30mV, 약 -60mV 내지 약 -35mV, 또는 약 -50mV 내지 약 -40mV 범위다. 다양한 구체예들에서, 상기 제타 전위는 약 -30mV, -35mV, -40mV, -45mV, -50mV, -55mV, -60mV, -65mV, -70mV, -75mV -80mV, 85mV, -90mV, -95mV 또는 -100mV 범위이며, 이러한 값 사이에 있는 모든 값 및 범위가 내포된다.

일부 구체예들에서, 상기 입자들의 평균 직경은 약 0.1μm 내지 약 10μm이다. 일부 구체예들에서, 상기 입자들의 평균 직경은 0.2μm 내지 약 2μm이다. 일부 구체예들에서, 상기 입자들의 직경은 약 0.3μm 내지 약 5μm 범위다. 일부 구체예들에서, 상기 입자들의 직경은 약 0.5μm 내지 약 3μm 범위다. 일부 구체예들에서, 상기 입자들의 직경은 약 0.5μm 내지 약 1μm 범위다. 일부 구체예들에서, 상기 입자들의 직경은 약 100 내지 1500nm, 약 200 내지 2000nm, 약 100 내지 10000nm, 약 300 내지 1000nm, 약 400 내지 800nm 또는 약 200 내지 700nm 범위이며, 이러한 값 사이에 있는 모든 값 및 범위가 내포된다.

본원에 기술된 입자를 인간 또는 다른 포유 동물에게 투여하기 위해, 해당 입자는 하나 또는 그 이상의 약제학적으로 허용되는 멸균 담체를 포함하는 멸균 조성물로 제형화될 수 있다. "약제학적 또는 약리학적으로 허용되는"이라는 어구는 아래에 기술된 바와 같이 당업계에 잘 알려진 경로를 사용하여 투여될 때, 알레르기 또는 다른 부작용을 일으키지 않는 분자 실체 및 조성물을 지칭한다. 용어 "약학적으로 허용되는 담체"는 임의의 그리고 모든 화학적으로 유용한 용매, 분산 배지, 항균 및 항곰팡이 물질, 등장 및 흡수 지연 물질 및 이와 유사한 것을 포함한다.

본원에서 입자를 함유하는 본 명세서의 약제학적 조성물은 투여 경로에 따라 약제학적으로 허용되는 멸균 담체 또는 첨가제를 함유할 수 있다. 이러한 담체는 첨가제의 예로는 물, 약학적으로 허용가능한 유기 용매, 콜라겐, 폴리비닐알콜, 폴리비닐피롤리돈, 카르복시비닐 중합체, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨, 폴리 아크릴산 나트륨, 알긴산 나트륨, 수용성 덱스트란, 카르복시메틸 전분 나트륨, 펙틴, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 산탄 검, 아라비아 고무, 카제인, 젤라틴, 한천, 디글리세린, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 바셀린, 파라핀, 스테아릴 알코올, 스테아르산, 인간 혈청 알부민 (HSA), 만니톨, 소르비톨, 락토즈, 약학적으로 허용되는 계면 활성제 등을 포함한다. 사용된 첨가제는 본 발명의 투약형태에 따라 적절하게는 상기 또는 이들의 조합중에서 선택되나, 이에 한정되는 것은 아니다. 용액 또는 에멀젼의 경우, 적합한 담체는 예를 들어,염수 및 완충 된 매질을 포함하는 수성 또는 알코올성/수성 용액, 에멀젼 또는 현탁액을 포함한다. 비경구 비히클에는 염화나트륨 용액, Ringer 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 젖산화된 Ringer 또는 고정된(fixed) 오일이 내포될 수 있다. 정맥 주사제에는 다양한 첨가제, 방부제 또는 유체, 영양제 또는 전해질 보충제가 내포될 수 있다. 다양한 수성 담체, 예를 들어, 멸균 인산염 완충 식염수 용액, 정균수, 물, 완충 수, 0.4% 식염수, 0.3% 글리신 등이 적합하며, 약간의 화학적 변형 등을 거친 알부민, 지단백질, 글로불린 등과 같은 안정성 향상을 위해 다른 단백질이 내포될 수 있다.

상기 입자들은 계면활성제를 더 포함하는 것이 고려될 수 있다. 상기 계면활성제는 음-이온성, 양-이온성 또는 비-이온성일 수 있다. 폴옥사머 및 폴옥사민 계열 계면 활성제가 일반적으로 입자 합성에 사용된다. 사용될 수 있는 계면 활성제에는 PEG, Tween-80, 젤라틴, 덱스 트란, 플루로닉 L-63, PVA, 메틸 셀룰로스, 레시틴, DMAB 및 PEMA가 내포되나 이에 국한되지는 않는다. 추가로, 비타민 E TPGS (D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙시네이트)가 내포되지만, 이에 국한되지 않는 생분해가능한, 그리고 생체적합성 계면활성제. 특정 구체예들에서, 두 가지 계면활성제가 사용된다. 예를 들어, 입자가 이중 에멀젼 방법에 의해 생성되는 경우, 두 가지 계면 활성제로는 제 1 에멀젼을 위한 소수성 계면활성제, 그리고 제 2 에멀젼을 위한 소수성 계면활성제가 내포될 수 있다.

입자의 치료요법적 제형은 원하는 순도를 갖는 입자를 동결 건조된 제형 또는 수용액 형태로 임의의 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (Remington 's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 혼합함으로써 저장용으로 준비된다. 수용가능한 운반체, 부형제, 또는 안정화제는 이용되는 투약형 및 농도에서 수령자에게 비독성이며, 그리고 생리학적으로 수용가능한 담체의 예로는 완충액, 이를 테면, 인산염, 시트르산염, 숙신산염 및 다른 유기산; 아스코르브산, 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제 (이를 테면, 옥타데실디메틸벤질 암모니움 클로라이드; 헥사메토니움 클로라이드; 벤잘코니움 클로로이드, 벤제토니움 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤 이를 테면, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르씨놀; 사이클로헥사놀; 3-펜타놀; 그리고 m-크레솔); (약 10개 미만 잔기의) 저분자량 폴리펩티드; 단백질, 이를 테면, 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로블린; 친수성 폴리머 이를 테면, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 이를 테면, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 그리고 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린이 포함된 기타 탄수화물; 킬레이트 물질들, 이를 테면 EDTA; 슈가, 이를 테면, 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 또는 솔비톨; 염-형성 카운터-이온, 이를 테면, 나트륨; 또는 금속 착물 (가령, Zn-단백질 착물)이 내포된다.

입자의 조제물은 동결건조에 의해 안정화될 수 있다. 트레할로스와 같은 동결방지제의 첨가는 동결 건조시 입자의 응집을 감소시킬 수 있다. 임의의 적합한 동결건조 및 재구성 기술이 사용될 수 있다. 당업자는 동결건조 및 재구성이 다양한 정도의 항체 활성 손실을 가져오고, 따라서 사용 수준은 보상하도록 조정되어야 할 수 있다는 것을 인지할 것이다.

사용 방법

대상체의 암 또는 증식성 장애의 치료 방법이 본원에서 제공되는데, 이 방법은 암 치료제와 병용하여 음으로 하전된 입자를 투여하는 것을 포함하며, 이때 전술한 입자는 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티가 없고, 이때 이러한 투여로 종양 부위에서 골수-유래된 억제자 세포 (MDSCs), 종양-연합된 대식세포 (TAMs), 호중구, 수지상 세포, 및/또는 단핵구 집단이 변경된다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체의 암 또는 증식성 장애를 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 암 치료제와 병용하여 본원에서 기재된 음으로 하전된 입자를 투여하고, 이때 이러한 투여로 종양-연합된 기질이 변경되고, 및/또는 이때 이러한 투여로 기질 결합 조직, 섬유아세포, 내피, 지방 조직, 세포외 매트릭스, 주변세포들, 간엽 줄기 세포, 및/또는 간엽 기질 세포가 변경되고, 및/또는 이때 이러한 투여로 종양 크기 및/또는 종양 성장이 감소되고, 및/또는 이때 이러한 투여로 항-종양 면역 반응이 조절되고, 및/또는 이때 이러한 투여로 종양-특이적 면역 반응이 조절된다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서 대상체의 암 또는 증식성 장애를 치료하는 방법을 제공하는데, 해당 대상체에게 암 치료제와 병용하여 본원에서 기재된 음으로 하전된 입자를 투여하는 것을 포함하고, 이때 이러한 투여로 암 줄기 세포가 조절된다.

면역세포에 대한 치료제의 효과 결정에 유용한 방법에는 현미경 분석, 조직학적 분석, 세포학적 분석, 유세포 분석, 중합효소 쇄 반응 (PCR), 정량적 중합효소 쇄 반응 (qPCR), RNA 서열화 (RNA-seq), 단일-세포 RNA 서열화 (scRNA-seq), 차-세대 서열화, 전체-엑솜 서열화, 후성유전적 서열화, ATAC-seq, 마이크로어레이 분석 및 질량 세포분석 또는 CyTOF이 내포되나, 이에 국한되지는 않는다. 면역 세포 평가를 위해 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있는 바이오마커에는 세포 표면 마커 및 분비된 단백질이 내포된다. 예시적인 바이오마커에는 CD45, CD3, CD4, CD8, CD25, CD44, CD134, CD252, CD137, CD79, CD39, FOXP3, PD-1, LAG-3, TIM-1, IFN-γ, 그랜자임(Granzyme), 퍼포린(Perforin), CD11b, CD11c, Ly6C, Ly6G, CD14, CD16, CD80, MARCO, CD68, CD115, CD204, CD205, CD206, CD163, CD103, CD103C, F4/80, PD-L1, PD-L2, 아르기나제, iNOS, ROS, TNF-α, TGF-β, MHC-I, MHC-II, NK1.1, NKG2D, CD244, Ki67, CD19, CD20, CCR2, CXCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR10, CCL2, CCL5, Cx3CR1, CCL10, ICOS, CD40, CD40L, IL1α, IL1β, IL2, IL4, IL5, IL6, IL8, IL12, IL15, IL17, IL21, IL22, TCRγ/δ, TCRα/β, STAT3, ROR1c, 그리고 RORγt가 내포되나, 이에 국한되지는 않는다.

암 줄기 세포 (CSCs)는 종양을 유발하고, 자가-재생, 분화가 가능한 고형 종양 및 혈액 종양 내에서 발견되는 세포의 하위집단으로 설명되었다. 여러 보고서에서 다양한 종양의 발병 기전, 치료 후 종양 재발 및 치료 저항성 발달에서 CSCs의 중요성이 설명되었다. 많은 세포 표면 마커를 사용하여 고형 종양과 혈액 종양 내에서 CSCs를 구별해낼 수 있다. CSC 마커에는 CD19, CD20, CD24, CD34, CD38, CD44, CD90, CD133, 알데히드 탈수소효소 1, CEACAM-6/CD66c, BMI-1, 코넥신 43/GJA1, DLL4, EpCAM/TROP1, GLI-1, GLI-2, 인테그린, PON1, PTEN, ALCAM/CD166, DPPIV/CD26, Lgr5, 무사시(Musashi)-1, A20, ABCG2, CD15, 프랙탈킨(Fractalkine), HIF-2α, L1CAM, c-MAF, Nestin, 포도플라닌(Podoplanin), SOX2, CD96, CD117, FLT3, AFP, CD13, CD90, NF2/메르린(Merlin), ABCB5, NGFR, 신데칸(Syndecan)-1, 앤도글린(Endoglin), STRO-1, 그리고 PON1이 내포되나, 이에 국한되지는 않는다.

세포 및 분자 수준에서 종양을 특성화하도록 설계된 다중 진단 도구는 FDA 승인을 받았으며, 시판되고 있다. 승인된 진단제의 예시에는 FOUNDATIONONE® CDX, FOUNDATIONONE® LIQUID, FOUNDATIONONE ® HEME, BRACAnalysis CDx, 테라스크린 EGFR RGQ PCR 키트, 코베이스 EGFR Mutation Test v2, PD-L1 IHC 22C3 pharmDx, Abbott Real Time IDH1, MRDx BCR-ABL test, VENTANA ALK (D5F3) CDx Assay, Abbott RealTime IDH2, Praxis Extended RAS Panel, Oncomine Dx Target Test, LeukoStrat CDx FLT3 Mutation Assay, FoundationFocus CDxBRCA Assay, Vysis CLL FISH Probe Kit, KIT D816V Mutation Detection, PDGFRB FISH, 코바스(cobas) KRAS Mutation Test, 테라스크린 KRAS RGQ PCR Kit, FerriScan, Dako c-KIT pharmDx, INFORM Her-2/neu, PathVysion HER-2 DNA Probe Kit, SPOT-LIGHT HER2 CISH Kit, Bond Oracle HER2 IHC System, HER2 CISH pharmDx Kit, INFORM HER2 DUAL ISH DNA Probe Cocktail, HercepTest, HER2 FISH pharmDx Kit, THXID BRAF Kit, Vysis ALK Break Apart FISH Probe Kit, 코바스 4800 BRAF V600 Mutation Test, VENTANA PD-L1 (SP142) Assay, 테라스크린 FGFR RGQ RT-PCR Kit, 그리고 테라스크린 PIK3CA RGQ PCR Kit가 내포되나, 이에 국한되지 않는다.

본원에서 기재된 음으로 하전된 입자, 임의선택적으로 암 치료제와 병용하여 치료한 후, 하나 또는 그 이상의 바이오마커의 수준은 약 1.1 배 내지 약 10 배, 예를 들면, 약 1.1, 약 1.5, 약 2, 약 2.5, 약 3, 약 3.5, 약 4, 약 4.5, 약 5, 약 5.5, 약 6, 약 6.5, 약 7, 약 7.5, 약 8, 약 8.5, 약 9, 약 9.5, 또는 약 10 배 증가된 것이 본원에서 고려된다. 본원에서 기재된 표면 기능화된 입자로 치료한 후, 하나 또는 그 이상의 바이오마커 수준은 약 1.1 배 내지 약 10 배, 예를 들면, 약 1.1, 약 1.5, 약 2, 약 2.5, 약 3, 약 3.5, 약 4, 약 4.5, 약 5, 약 5.5, 약 6, 약 6.5, 약 7, 약 7.5, 약 8, 약 8.5, 약 9, 약 9.5, 또는 약 10 배 감소된다.

본원 방법을 이용하여 치료할 수 있는 예시적인 질환, 병태 또는 장애에는 암, 이를 테면 식도암, 췌장암, 전이성 췌장암, 췌장의 전이성 선암, 방광암, 위암, 섬유성 암, 신경교종, 악성 신경교종, 미만성 내재성 뇌교 신경교종, 재발성 소아 뇌 신생물 신장 세포 암종, 투명-세포 전이성 신장세포 암종, 신장 암, 전립선암, 전이성 거세 저항성 전립선 암, IV 기 전립선암, 전이성 흑색종, 흑색종, 악성 흑색종, 재발성 피부 흑색종, 흑색종 뇌 전이, IIIA 기 피부 흑색종; IIIB 기 피부 흑색종, IIIC 기 피부 흑색종; IV 기 피부 흑색종, 두경부 악성 흑색종, 폐암, 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 편평 세포 비-소 세포 폐암, 유방암, 재발성 전이성 유방암, 간세포 암종, 호지킨 림프종, 여포성 림프종, 비-호지킨 림프종, 진행성 B-세포 NHL, 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)이 내포된 HL, 다발성 골수종, 만성 골수성 백혈병, 완화된 성인 급성 골수성 백혈병; Inv(16)(p13.1q22)를 동반한 성인 급성 골수성 백혈병; CBFB-MYH11; t(16;16)(p13.1;q22)를 동반한 성인 급성 골수성 백혈병; CBFB-MYH11; t(8;21)(q22;q22)를 동반한 성인 급성 골수성 백혈병; RUNX1-RUNX1T1; t(9;11) (p22;q23)를 동반한 성인 급성 골수성 백혈병; MLLT3-MLL; t(15;17)(q22;q12)를 동반한 성인 급성 전골수구 백혈병; PML-RARA; 알킬화 제제-관련된 급성 골수성 백혈병; 만성 림프구성 백혈병; 리히테리스(richteris) 증후군; 발덴스트롬(Waldenstrom) 거대글로불린혈증, 성인 교모세포종; 성인 교육종, 재발성 교모세포종, 재발성 소아 횡문근육종, 재발성 유잉(Ewing) 육종/말초 원시 신경 외배엽 종양, 재발성 신경모세포종; 재발성 골육종, 결장 직장암, MSI 양성 결장직장암; MSI 음성 결장직장암, 비인두 비-각질화 암종; 재발성 비인두 미-분화된 암종, 자궁경부 선암; 자궁 경부선 편평 암종; 자궁경부 편평 세포 암종; 재발성 자궁경부암; IVA 기 자궁경부암; IVB 기 자궁경부암, 항문관 편평 세포 암종; 전이성 항문관 암종; 재발성 항문관 암종, 재발성 두경부암; 암종, 두경부 편평세포, 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC), 난소 암종, 결장암, 결장직장암, 직장암, 위암, 진행성 GI 암, 위 선암; 위식도 접합 선암종, 골 신 생물, 연조직 육종; 골 육종, 흉선 암종, 요로상피 암종, 재발성 메르켈(merkel) 세포 암종; III 기 메르켈 세포 암종; 단계 IV 메르켈 세포 암종, 골수이형성 증후군 및 재발성 균상 식육종(mycosis fungoides) 및 세자리(Sezary) 증후군이 내포된다. 다양한 구체예들에서, 상기 암은 뇌암, 피부암, 안암, 유방암, 전립선암, 폐암, 식도암, 두경부암, 자궁경부암, 간암, 골암, 자궁암, 난소암, 방광암, 위암, 구강암, 갑상선암, 신장암, 고환암, 백혈병, 림프종 및 중피종으로 부터 선택된다.

본원의 방법은 해당 대상체에서 종양 크기 또는 종양 부하를 감소시키고, 및/또는 해당 대상체에서 전이를 감소시키는 것으로 고려된다. 다양한 구체예들에서, 상기 방법들에 의해 종양 크기가 10%, 20%, 30% 또는 그 이상으로 감소된다. 다양한 구체예들에서, 상기 방법들에 의해 종양 크기가 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 감소된다(이 값 사이에 있는 모든 값 및 범위가 내포됨).

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 비장 및/또는 간으로부터 면역억제성 세포를 격리시키고, 대상체에서 아팝토시스를 유도함으로써 종양 부위로부터 다수의 면역억제성 세포를 감소시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 암 치료제와 병용하여 해당 대상체에게 음으로 하전된 입자를 투여하는 것을 포함한다.

다양한 구체예들에서, 상기 대상체에게 상기 입자의 투여는 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 병의 원인이 되는 단핵구, 대식세포, 과립구 및/또는 호중구의 축적을 방지한다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 종양에서 단핵구, 대식세포, 과립구 및/또는 호중구 수를 감소시키는 방법을 제공한다. 다양한 구체예들에서, 종양에서 단핵구, 대식세포, 과립구 및/또는 호중구의 수는 약 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 또는 10-배 또는 그 이상으로 감소된다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체에서 항-종양 면역 반응을 변경시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 대상체에게 암 치료제와 병용하여 음으로 하전된 입자를 투여하는 것을 포함한다. 다양한 구체예들에서, 이러한 변경으로 항-종양 APCs, 대식세포, 수지상 세포, T-세포, B-세포, NK T-세포, 및/또는 NK 세포의 활성 또는 수준이 증가된다.

다양한 구체예들에서, 상기 대상체에게 상기 입자의 투여로 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 면역 세포의 활성 및/또는 기능이 변경된다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자의 투여로 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 염증성 면역 세포의 수가 증가된다. 다양한 구체예들에서, 상기 대상체에게 상기 입자의 투여로 종양 부위 또는 종양 미세환경에서 면역 세포의 항-종양 염증성 기능 또는 활성이 증가된다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 종양-연합된 기질을 변경시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 대상체에게 암 치료제와 병용하여 음으로 하전된 입자를 투여하는 것을 포함한다.

다양한 구체예들에서, 상기 대상체에게 상기 입자의 투여로 종양 부위 또는 종양-연합된 기질에서 섬유아세포, 암-연합된 섬유아세포, 지방세포, 내피 세포, 주변세포들, 간엽 기질 세포, 및/또는 ECM이 변경된다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 대상체에서 종양 크기 및/또는 종양 성장을 감소시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 대상체에게 암 치료제와 병용하여 음으로 하전된 입자를 투여하는 것을 포함한다.

다양한 구체예들에서, 본 명세서는 암 줄기 세포 및/또는 간엽 줄기 세포를 변경시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 대상체에게 암 치료제와 병용하여 음으로 하전된 입자를 투여하는 것을 포함한다.

다양한 구체예들에서, 상기 대상체에게 상기 입자의 투여로 이 입자의 직접적인 취입을 통하여 종양-세포 사멸, 종양-세포 아팝토시스, 및/또는 종양 세포-괴사가 유도된다.

투여 및 투여용량(Dosing)

암 또는 증식성 장애를 앓고 있는 대상체를 치료하기 위해, 암 치료제와 병용하여 본원에서 기재된 음으로 하전된 입자를 투여하는 것을 포함하는 방법들이 본원에서 고려된다.

본 명세서의 방법들은 주사, 경구 복용, 비강-내, 국소, 경피, 비-경구, 흡입 스프레이, 질내 또는 직장 투여가 내포되나 이에 국한되지 않는 치료제를 포유류 대상체에게 직접 또는 간접적으로 도입하기 위한 임의의 의학적-허용되는 수단을 사용하여 수행된다. 본원에서 사용되는 용어 비-경구(parenteral)에 피하, 정맥-내, 근육-내, 관절-내, 복강-내, 척수강-내 및 낭강-내 주사, 뿐만 아니라 카테터 또는 주입 기술이 내포된다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자는 정맥-내로 투여되지만, 다른 투여 경로 이를 테면, 피내, 피하, 표피(epictuaneous), 경구, 관절-내 및 척수강-내와 같은 경로로 투여될 수 있으나, 이에 국한되지 않는다. 다양한 구체예들에서, 상기 조성물은 종양 부위로 투여된다.

다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 약 0.1 내지 약 10mg/kg의 투여용량으로 투여된다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 약 0.1mg/kg, 0.5mg/kg, 1.0mg/kg, 2.0mg/kg, 4.0mg/kg, 8.0mg/kg 또는 10mg/kg의 투여용량으로 투여된다. 다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 약 8.0mg, 80mg, 320mg, 640mg 또는 800mg의 투여용량으로 투여된다. 또한 언급된 투여용량 종점 안의 값, 그리고 그 사이의 값이 고려된다. 이들 농도는 단일 투약형(dosage) 또는 다중 투여로 투여될 수 있다.

암 치료제 (알려진 암 치료제인 경우)는 제조자 및 치료 의사의 지시에 따라 투여가 고려된다. 입자 및 암 치료제가 동일한 제형으로 투여되는 경우, 이들은 본원에 기재된 바와 같이 제형화 될 수 있다.

주어진 투여용량에서 면역 조절제 또는 생물학적 제제 암 치료제의 양은 이 요법이 투여되는 개체의 체격 및 치료되는 장애의 특성에 따라 달라질 수 있다. 예시적인 처리에서, 약 1mg/일, 5mg/일, 10mg/일, 20mg/일, 50mg/일, 75mg/일, 100mg/일, 150mg/일, 200mg/일, 250mg/일, 500mg/일 또는 1000mg/일을 투여하는 것이 필수적일 수 있다. 우선, 동물 모델에서, 그 다음 임상 테스트에서 표준 투여용량-반응 연구에서 특정 질병 상태와 환자 집단에 대한 최적의 용량이 드러난다. 다양한 구체예들에서, 체크포인트 조절자, 이를 테면 PD-1 항체, CTLA-4 항체, 또는 PD-L1 항체는 0.1 내지 15mg/kg의 투여용량 범위로 투여된다. 이들 농도는 단일 투약형(dosage) 또는 다중 투여로 투여될 수 있다.

본 명세서의 방법에 의해 치료 가능한 병태는 바람직하게는 포유 동물에서 발생한다. 포유류에는 예를 들어, 인간 및 기타 영장류 뿐만 아니라 개와 고양이와 같은 애완 동물 또는 반려 동물, 렛(rats), 마우스 및 토끼와 같은 실험실 동물, 그리고 말, 돼지, 양 및 소와 같은 농장 동물이 내포된다. 다양한 구체예들에서, 해당 대상체는 인간이다.

다양한 구체예들에서, 상기 입자들은 주 2회, 주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 2개월에 1회, 3개월에 1회, 6개월에 1회 또는 1년에 1회 투여된다.

본 명세서는 본원에 기재된 바와 같은 입자, 암 치료제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 멸균 제약 조성물을 추가로 고려한다.

본 명세서는 본원에 기재된 바와 같은 입자 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 멸균 제약 조성물을 추가로 고려한다.

본 명세서는 암 치료제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 멸균 제약 조성물을 추가로 고려한다.

주사기, 예를 들어, 일회용 또는 사전-충전된 주사기, 멸균 밀봉된 용기, 예를 들어 바이알, 병, 용기 및/또는 임의의 전술한 항체 또는 조성물을 포함하는 키트 또는 패키지, 임의 선택적으로 사용에 대한 적절한 지침이 또한 고려된다.

병용 치료요법

본 발명에서 기재된 입자들은 암 또는 증식성 장애를 치료하기 위해 암 치료제와 병용하여 투여되는 것이 고려된다. 다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 화학요법제, 생물학적 제제, 세포-기반 치료요법, 호르몬 치료요법, 항체-약물 콘쥬게이트, 종양용해성 바이러스, 또는 암 백신이다. 호르몬 치료요법에는 유방암 치료제 탐옥시펜(Tamoxifen), 유방암 및 전립선암 치료제인 졸라덱스(Zoladex), 아로마타제억제제들 (예를 들면, 아나스트라졸, 레트로졸, 엑세메스탄)이 내포된다. 항체 약물 콘쥬게이트에는 림프종 치료제인 브렌투시맙 베도틴(Brentuximab vedotin) (항-CD30 mAB + 단일메틸 아루리스타틴 E), 유방암 치료제인 아도트라스투주맙 엔탄신(Ado-trastuzumab entansine) (항-Her2/Neu + 메이탄시노이드) 및 ALL 치료제인 이노투주맙 오자구미신(Inotuzumab Ozagamicin) (항-CD22 + 칼리케아미신)이 내포된다. 종양용해성 바이러스제에는 임리긱(Imlygic) (Amgen®)이 내포된다. 암 백신에는 전립선암 치료제인 시풀레셀(Sipuleucel)-T가 내포된다. 몇 가지 백신이 개발 중이며, 단백질들, 폴리펩티드, 핵산, 그리고 수지상 세포 백신이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.

다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 성장 억제제들, 세포독성 제제, DNA-복제 억제제들, 키나제 억제제들, 신호전달 캐스캐이드 억제제들, 혈관신생 억제제들, 대사 억제제들, 아미노산 합성 억제제들, 발암성 단백질들의 선택적 억제제들, 전이 억제제들, 항-아팝토시스 인자들의 억제제들, 아팝토시스 유도제들, 뉴클레오시드 신호전달 억제제들, 효소 억제제들 및 DNA-손상 제제로 구성된 군에서 선택된 화학요법제다.

세포 독성제는 세포의 기능을 억제 또는 방지하고, 및/또는 세포의 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 용어는 방사능활성 동위원소 (가령, I131, I125, Y90 및 Re186), 화학치료요법적 물질, 그리고 독소, 이를 테면 세균, 곰팡이, 식물 또는 동물 기원 독소 또는 합성 독소, 또는 이의 단편들이 내포된다. 비-세포 독성 제제는 세포의 기능을 억제하지 않거나 예방하지 않거나, 및/또는 세포를 파괴하지 않는 물질을 지칭한다. 비-세포독성 제제에는 세포독성으로 활성화될 수 있는 제제가 내포될 수 있다.

본 명세서의 방법에 사용이 고려되는 화학요법제는 표 I에 열거된 것들이 내포되지만, 이에 국한되지는 않는다:

표 I

상기 암 치료제는 하나 또는 그 이상의 생물학적 제제, 이를 테면 사이토킨, 혈관신생 억제제들, 면역 체크포인트 조절제 및 단일클론 항체를 포함하는 것이 또한 고려된다. 사이토킨에는 인터페론 (IFN) 및 인터루킨 (ILs), 이를 테면 IFN-알파, IFN-베타, IFN-감마, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, TGF-β1, TGF-β2 및 TGF-β3을 비롯한 형질전환 성장 인자 베타 수퍼패밀리의 구성원들, 종양 괴사 인자 알파, 과립구 콜로니-자극 인자 (G-CSF), 그리고 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자 (GM-CSF)가 내포된다.

생물학적 제제 이를 테면 면역 체크포인트 조절제는 PD1, PD-L1, CTLA-4, TIMP-3, LAG-3 및/또는 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인이 있는 T 세포 면역 수용체)를 표적으로 한다. 다양한 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 조절제는 PD-1, PD-L1, 또는 CTLA-4에 특이적인 항체다. 체크포인트 단백질들에 특이적인 항체에는 CTLA-4에 결합하는 이필리무맙 (YERVOY®, Bristol-Myers Squibb Company), 그리고 트레멜리무맙; PD-1에 대한 항체 이를 테면 펨브롤리주맙 (KEYTRUDA®, Merck Sharp & Dohme Corp) 및 니볼루맙 (OPDIVO®, Bristol-Myers Squibb); 그리고 PD-L1을 표적으로 하는 항체, 이를 테면 아테졸리주맙 (TECENTRIQ®), 아벨루맙 (BAVENCIO®), 그리고 두르발루맙 (IMFINZI®) (요로 상피 세포 암종 및 비-소 세포 폐암 종 치료용으로 승인됨), 쎄미플리맙 (LIBTAYO®) (피부 편평 세포 암종 치료용으로 승인됨)이 내포된다.

다양한 구체예들에서, 본 발명에 유용한 단일클론 항체는 알렘투주맙(Alemtuzumab), 베바치주맙(Bevacizumab), 브렌투시맙(Brentuximab), 쎄투시맙(Cetuximab), 데노수맙(Denosumab), 이브리투모맙(Ibritumomab), 트라스투주맙(Trastuzumab), 파니투무맙(Panitumumab), 페르투주맙(Pertuzumab), 그리고 리투시맙(Rituximab)을 포함하는 군에서 선택된다. 다양한 구체예들에서, 상기 방법에 유용한 단일클론 항체눈 수용체 티로신 키나제, EGFR, VEGF, VEGFR, PDGF, PDGFR, TGF-β, TGF-β-LAP, SIRP-α, CD47, CD39, CD73, 그리고 섬유아세포 활성화 단백질 (FAP)을 표적으로 한다.

생물학적 제제에는 단일-특이적, 이중-특이적, 삼중-특이적 또는 이중-특이적 T-세포 참여자 (BiTE)인 단일클론 항체가 내포된다. 상기 암 치료에 유용한 단일클론 항체에는 VEGF-A에 대한 항체인 베바치주맙 (AVASTIN®, Genentech); EGFR에 작용하는 티로신 키나제 억제제인 에르로티닙(TARCEVA®, Genentech 및 OSI Pharmaceuticals), 경구 Bcr-Abl 티로손 키나제 억제제인 다사티닙 (SPRYCEL®, Bristol-Myers Squibb Company); IL-21; 페길화된 IFN-α2b; 티로신 키나제 억제제인 악시티닙 (INLYTA®, Pfizer, Inc.); 및 MEK 억제제트라메티닙(MEKINIST®, GlaxoSmithKline)가 내포된다 (Philips 및 Atkins, Int Immunol., 27(1):39-46 (2015), 이들은 본원의 참고자료에 편입됨). 암 치료에 유용한 이중-특이적 항체는 블리나투모맙(Blinatumomab) 및 카투막소맙(catumaxomab)을 비롯하여, Krishnamurthy et al., (Pharmacol Ther. 2018 May;185:122-134), 그리고 Yu et al., (J. Hematol Oncol 2017, 10:155)에서 기술된다.

상기 방법은 상기 암 치료는 입양 세포 전달, 종양-침윤성 백혈구 치료요법, 키메라 항원 수용체 T-세포 치료요법, NK-세포 치료요법 및 줄기 세포 치료요법이 내포된 하나 또는 그 이상의 세포-기반 치료요법을 포함하는 것을 또한 제공한다.

상기 암 치료제는 종양용해성 바이러스, 종양용해성 박테리아 또는 다른 박테리아 조성물, 미생물군집 조절제, Bacillus Calmette-Guerin, TLR 작용제, 미생물군집 조절자, STING 경로 조절제, 그리고 암 백신이 내포된 하나 또는 그 이상의 면역치료요법을 포함하는 것이 고려된다. 상기 방법에서 상기 암 치료제는 바이러스성 또는 박테리아 벡터를 포함하는 것이 제공된다. 다양한 구체예들에서, 상기 TLR 작용제는 TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12, 및/또는 TLR13 작용제다. 다양한 구체예들에서, 상기 TLR 작용제는 바이러스, 박테리아로부터 유래되거나 및/또는 합성에 의해 만들어진다.

다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 효소를 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 T-세포, B-세포, APCs, 단핵구, MDSCs, TAMs, 호중구, 다른 단핵구-유래된 세포, 종양-연합된 기질, 암 줄기 세포, 간엽 줄기 세포, 세포외 매트릭스, 그리고 아미노산을 표적으로 하는 효소를 포함한다. 다양한 구체예들에서, 상기 암 치료제는 아스파라기나제, 카누리니나제, L-아르기닌 데이미나제, L-메티오닌-γ-리아제, 하나 또는 그 이상의 아미노산 분해 효소, 그리고 하나 또는 그 이상의 뉴클레오시드 분해 효소를 포함하는 군에서 선택된 효소를 포함한다.

상기 입자들과 상기 암 치료제는 동시에(concurrently), 일제히(simultaneously), 또는 순차적으로(sequentially) 제공될 수 있는 것이 고려된다. 두 치료요법적 제제의 동시 투여는 해당 제제들이 이들의 치료요법적 효과를 발휘하는 기간이 중복되는 한, 이들 제제를 동시에 또는 동일한 경로로 투여할 필요는 없다. 다른 날 또는 다른 주에 투여하는 것과 같이, 일제히 또는 순차적 투여가 고려된다.

상기 입자들과 상기 암 치료제는 동일한 제형에서 일제히 제공되는 것이 고려된다. 상기 제제는 별도의 제형으로 투여되고, 동시에 투여되는 것으로 추가로 고려되며, 이때 동시란 서로 30 분 이내에 제제들이 제공되는 것을 지칭한다.

또다른 측면에서, 상기 암 치료제는 상기 입자 조성물의 투여전 투여된다. 사전 투여란 입자를 사용한 치료 1 주일 전 부터 해당 입자 투여 전 30 분까지의 범위 안에서 암 치료제를 투여하는 것을 의미한다. 상기 암 치료제는 상기 입자 조성물의 투여 후 투여되는 것이 더 고려된다. 후속 투여란 입자 치료 후 30 분부터 이러한 투여 후 최대 1 주까지 투여를 설명하는 것을 의미한다.

키트

추가적인 측면으로써, 본 명세서에는 본 명세서의 방법들을 실행하기 위해 사용을 용이하게 하는 방식으로 포장된 하나 또는 그 이상의 화합물 또는 조성물을 포함하는 키트가 내포된다. 한 구체예에서, 이러한 키트는 밀봉된 병 또는 그릇과 같은 용기에 담겨 있고, 이 용기에는 부착된 라벨 또는 포장 안에 포함된 라벨이 포함되며, 이 라벨에는 상기 방법을 실시하는데 있어서 화합물 또는 조성물(예를 들어, 입자 단독으로 또는 암 치료제와 병용하여 포함된 조성물)의 사용법을 설명한다. 바람직하게는, 상기 화합물 또는 조성물은 단위 투약형으로 포장된다. 상기에는 키트에는 특이적 투여 경로에 따라 상기 입자들, 암 치료제, 또는 조성물의 투여에 적합한 장기 또는 스크리닝 검정 실행에 적합한 장치가 더 내포될 수 있다. 바람직하게는, 상기 키트는 상기 억제제 조성물의 용도를 설명하는 라벨을 함유한다.

본 발명의 추가적인 측면 및 세부 사항은하기 실시 예로부터 명백 할 것이며, 이는 제한하기 보다는 예시적인 것으로 의도된다.

실시예

실시예 1

IMP 치료요법을 이용하여 면역 체크포인트 억제제 항-PD-1 단일클론 항체와 병용하여 종양의 치료제 표적화

PD-1 단일클론 항체 (mAb)와 병용하여 IMP 치료요법의 항-종양 효능을 결정하기 위해, Kumar et al. (Cancer Cell 32, 654-668, (2017]))에서 기술된 바와 같이, 6-8-주령의 C57BL/6 마우스를 이용하여 정위(orthotopic) 또는 동계유전적(syngeneic) 종양 모델을 확립시킬 수 있다. 예를 들어, 마우스에게 LLC (Lewis Lung Carcinoma), MC38 또는 EL4 (9,10-디메틸-1,2-벤즈안트라센-유도된 뮤린 흉선종) 세포를 s.c 주사로 이식시킬 것이며, 이들은 하기에 기재된 바와 같이 각 4가지 처리집단으로 무작위로 분할한다:

그룹 1: 대조군 처리 (n=7)

그룹 2: 오로지 IMPs 만 (n=10)

그룹 3: 오로지 항-PD1 mAb 만 (n=10)

그룹 4: IMPs + 항-PD1 mAb (n=7)

종양 세포를 s.c. 주사 후 24시간 시점에, 마우스에게 IMPs (1mg i.v.) 및/또는 항-PD1 mAb (100 μg i.p.)를 처리한다. 다음의 일정을 따르며, 도 1에서 설명되어 있다:

0일차: LLC 세포 또는 EL4 세포의 s.c. 주사.

대조군 처리를 받은 마우스에게 i.v. 및/또는 i.p로 IMPs 및 항-PD1 mAb를 대신하여 염수가 제공된다. 각 처리 그룹에서 종양 성장은 0일차, 14일차, 19일차, 22일차, 25일차 및 29일차에 표준 캘리퍼를 이용하여 종양 면적을 측정함으로써 평가된다.

식염수 처리를 받은 마우스는 치료 기간이 끝날 때 면적이 500-600 mm²에 이르는 큰 종양이 발생하여 안락사된다. 반대로, IMP 및 항-PD1 단클론 항체를 모두 사용한 병용 요법에서 종양 성장의 감소가 일어날 것으로 예상된다. 병용 치료 군의 종양은 40일이 지나도 면적이 겨우 5 ~ 10mm²만 성장할 수 있을 것이다.

IMPs 또는 항-PD1 mAb 단독으로 처리된 마우스는 식염수 처리된 마우스와 비교하여 종양 성장에 상당한 지연이 있는 중간 효과를 보일 것으로 예상된다. 이들 그룹에서 치료가 끝날 무렵 100-150 mm² 범위의 종양이 나타날 것으로 예상된다고 가정한다. 이들 치료 그룹의 종양은 면적이 200-250 mm²로 성장할 수 있지만, 식염수-처리된 마우스에서 보이는 종양 크기에 도달할 것으로 예상되지 않는다.

초기 실험에서, 마우스에게 0 일차에 s.c. 주사를 통해 LLC 종양 세포가 접종되었다. LLC 종양 세포 (ATCC®)는 10% FBS (Atlanta Biologicals), 5nM 글루타민, 25 mM HEPES 및 1% 항생제 (Invitrogen)가 보충된 DMEM (Corning CellGro®, 10-013-CV)에서 유지되었다. 0.5 x 10⁶ LLC 세포의 현탁액이 준비되었고, 이를 7-10-주령의 C57BL/6 마우스의 우측 아래 옆구리에 주사했다. 1일차, 마우스들을 처리 그룹에 무작위 할당하고, 일정에 따라 처리했다. 각 처리 그룹에서 0일차, 14일차, 19일차, 22일차, 25일차 및 29일차에 표준 캘리퍼를 이용하여 종양 면적을 측정함으로써 종양 성장이 평가되었다. IMPs는 PLGA 입자다.

도 2에 결과를 나타낸다. 예상대로, 염수 처리된 (대조군) 마우스에서 29일차에 큰 종양이 발생되었다. 항-PD1 또는 IMPs 단독으로 사용된 단일 치료요법에서 염수 처리된 것과 비교하여 중간 정도의 종양 성장을 나타낸, 필적되는 항-종양 효과가 나타났다. IMPs 및 항-PD1 mAb를 이용한 병용 치료요법은 염수 처리 또는 IMPs 또는 항-PD-1 mAb을 이용한 단일치료요법과 비교하였을 때, 종양 성장 억제의 상승적 효과 및 억제가 향상되었다.

실시예 2

IMPs 단독으로, 또는 항-PD1와 병용하여 투여될 때 치료요법적 효과

동계유전적 종양 모델에서 IMP 병용 치료의 효과를 결정하기 위해, 6-8 주령의 C57BL/6 마우스에 옆구리에 피하 주사를 통해 MC38 (결장선암종) 종양 세포를 이식했다. MC38 마우스 종양 세포는 5% CO₂와 함께 조직-배양 인큐베이터에서 37 ℃에서 10% 열-불활성화된 소 태아 혈청 (FBS) 및 2mM L-글루타민이 보충된 DMEM의 단일 층 배양에서 유지되었다. 뚜렷한 종양 형성 (~100mm³ 크기) 후, 동물을 다음과 같이 4 개의 처리 그룹 중 하나로 무작위로 할당했다:

그룹 1: 대조군 처리 (n=10)

그룹 2: IMPS (n=10)

그룹 3:항-PD1 (n=10)

그룹 4: IMPs + 항-PD1 (n=10)

0.1 mL 무-혈청 DMEM에 재현탁된 1 x10⁶ 95% 생존 세포의 단일 세포 현탁액을 준비하고, 동물의 오른쪽 아래 옆구리에 주입했다. 종양 크기가 대략적으로 100mm³에 도달한 후, 치료가 시작되었다. IMPs (PLGA 입자) (1mg)는 정맥-내 (i.v) 주사를 통해 투여되었고, 항-PD-1 (100μg)은 다음 치료 일정에 따라 복강-내 (i.p) 주사를 통해 투여되었다:

캘리퍼를 사용하여 종양 크기를 2-차원으로 측정하여 종양 성장을 평가했다. 종양 부피는 공식 V = 0.5 × a × b²를 사용하여 계산되었으며, 여기서 a와 b는 각각 종양의 긴 지름과 짧은 지름이다. 종양 크기는 mm³로 표시되었다.

도 3A에 나타낸 바와 같이, IMPs 처리는 대조군 처리에 비해 종양 성장의 강력한 억제를 가져왔다. IMP 효능은 항-PD1 치료와 필적하였다. IMPs와 항-PD1을 병용 치료는 상승적 효과를 보였고, 각각의 단일요법에 비해 종양 성장 억제를 증가시켰다. 종양 성장에 미치는 영향을 반영하여, IMPs로 처리하면 MC38 종양-보유 마우스의 생존 기간이 연장되었다. IMP 생존 효능은 항-PD1보다 우수했으며, IMP 및 항-PD1과의 병용 요법은 각각의 단일 요법과 비교할 때, 생존의 향상을 초래하는 상승 효과를 보여주었다 (도 3B).

상기 예시적인 실시예에서 설명된 바와 같이 본 개시 내용의 다수의 수정 및 변경이 당업자에게 발생할 것으로 예상된다. 결과적으로, 첨부된 청구 범위에 나타난 것과 같은 이러한 제한만이 명세서에 배치되어야 한다.

Claims

대상체의 암 또는 증식성 질환을 치료하는 방법에 있어서, 이 방법은 해당 대상체에게 암 치료제와 병용하여 음으로 하전된 입자를 투여하는 것을 포함하고, 이때 상기 입자들은 부착된 펩티드 또는 항원성 모이어티 또는 다른 생활성 제제가 없는, 방법.
청구항 1에 있어서, 이때 이러한 투여로 종양 부위에서 골수-유래된 억제자 세포 (MDSCs), 종양-연합된 대식세포 (TAMs), 호중구 및/또는 단핵구가 변경되는, 방법.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 이때 이러한 투여로 해당 대상체의 종양 크기 및/또는 종양 성장이 감소되는, 방법.
청구항 1 내지 3중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이러한 투여는 상기 항-종양 면역 반응을 조절하는, 방법.
청구항 1 내지 4중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이러한 투여로 암 줄기 세포 및/또는 간엽 줄기 세포가 변경되는, 방법.
청구항 1 내지 5중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이러한 투여로 종양-연합된 기질이 변경되는, 방법.
청구항 1 내지 6중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이러한 투여로 종양-연합된 기질에서 섬유아세포, 지방세포, 내피 세포, 간엽 기질 세포, 및/또는 ECM이 변경되는, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 음으로 하전된 입자들은 폴리글리콜산 중합체 (PGA), 폴리락트산 (PLA), 폴리스티렌 입자, 또는 폴리(락트-코-글리콜산) (PLGA) 입자, 다이아몬드 입자, 또는 철, 아연, 카드뮴, 금, 또는 은 입자인, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 음으로 하전된 입자들은 폴리(락트-코-글리콜산) (PLGA) 입자인, 방법.
청구항 8 또는 9에 있어서, 이때 상기 입자들은 약 50:50, 약 80:20 내지 약 100:0의 폴리락트산:폴리글리콜산 또는 약 50:50, 약 80:20 내지 약 100:0의 폴리글리콜산:폴리락트산을 포함하는, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 입자들은 50:50의 폴리락트산:폴리글리콜산을 포함하는, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 입자들은 카르복실화된, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 입자들은 -100mV 내지 -1mV의 제타 전위를 갖는, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 입자들은 -80mV 내지 -30mV의 제타 전위를 갖는, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 음으로 하전된 입자의 직경은 0.1μm 내지 10μm인, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 음으로 하전된 입자의 직경은 400nm 내지 800nm인, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 해당 대상체는 뇌암, 피부암, 안암, 유방암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 식도암, 두경부암, 자궁경부암, 간암, 결장암, 결장직장암, 직장암, 골암, 자궁암, 난소암, 방광암, 위암, 구강암, 갑상선암, 신장암, 고환암, 백혈병, 림프종 및 중피종으로 구성된 군에서 선택된 암을 가지고 있는, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암 치료제는 성장 억제제들, DNA-복제 억제제들, 키나제 억제제들, 신호전달 캐스캐이드 억제제들, 혈관신생 억제제들, 대사 억제제들, 아미노산 합성 억제제들, 발암성 단백질들의 선택적 억제제들, 전이 억제제들, 항-아팝토시스 인자들의 억제제들, 아팝토시스 유도제들, 효소 억제제들, 뉴클레오시드 신호전달 억제제들 및 DNA-손상 제제로 구성된 군에서 선택된 화학치요제인, 방법.
청구항 1-17중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암 치료제는 사이토킨, 혈관신생 억제제들, 효소, 면역 체크포인트 조절제 및 단일클론 항체로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 생물학적 제제를 포함하는, 방법.
청구항 19에 있어서, 이때 사이토킨은 형질전환 성장 인자들, 종양 괴사 인자, 인터페론 및 인터루킨로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
청구항 19에 있어서, 이때 상기 면역 체크포인트 조절제는 예정된 세포 사멸 단백질 1 (PD1), 예정된 세포 사멸 단백질 리간드-1 (PD-L1), 세포독성 T-림프구-연합된 단백질 4 (CTLA-4), T 세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 함유-3 (TIM-3), 림프구-활성화 유전자-3 (LAG-3) 및/또는 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체)을 표적으로 하는, 방법.
청구항 21에 있어서, 이때 상기 면역 체크포인트 조절자는 이필리무맙, 트레멜리무맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙.쎄미플리맙 및 두르발루맙으로 구성된 군에서 선택된 항체인, 방법.
청구항 19에 있어서, 이때 상기 단일클론 항체는 단일-특이적, 이중-특이적, 삼중-특이적 또는 이중-특이적 T-세포 참여자 (BiTE)인 방법.
청구항 19에 있어서, 이때 상기 단일클론 항체는 알렘투주맙, 베바치주맙, 브렌투시맙, 쎄투시맙, 데노수맙, 이브리투모맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 페르투주맙, 그리고 리투시맙을 포함하는, 방법.
청구항 19에 있어서, 이때 상기 단일클론 항체는 수용체 티로신 키나제, EGFR, VEGF, VEGFR, PDGF, PDGFR, TGF-β, TGF-β-LAP, SIRP-α, CD47, CD39, CD73 및/또는 섬유아세포 활성화 단백질 (FAP)을 표적으로 하는, 방법.
청구항 1-17중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암 치료제는 입양 세포 전달, 종양-침윤성 백혈구 치료요법, 키메라 항원 수용체 T-세포 치료요법 (CAR-T), NK-세포 치료요법 및 줄기 세포 치료요법으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 세포-기반 치료요법을 포함하는, 방법.
청구항 1-17중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암 치료제는 호르몬 치료요법인, 방법.
청구항 1-17중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암 치료제는 하나 또는 그 이상의 항체-약물 콘쥬게이트를 포함하는, 방법.
청구항 1-17중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암 치료제는 하나 또는 그 이상의 암 백신을 포함하는, 방법.
청구항 1-17중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암 치료제는 종양용해성 바이러스, 종양용해성 박테리아 또는 다른 박테리아 조성물, Bacillus Calmette-Guerin (BCG), 미생물군집 조절자, STING 경로 조절자 및/또는 톨-유사 수용체 (TLR) 작용제를 포함하는 면역치료요법인, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서 이때 상기 입자들은 및 또는 상기 암 치료제는 주 2회, 주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 2개월에 1회, 3개월에 1회, 6개월에 1회 또는 1년에 1회 투여되는, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 입자들은 정맥내, 경구, 비강, 근육내, 안구내, 경피, 또는 피하로 투여되는, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 해당 대상체는 인간인, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서 이때 상기 투여로 상기 암 또는 증식성 장애의 하나 또는 그 이상의 증상이 개선된, 방법.
청구항 34에 있어서, 이때 상기 하나 또는 그 이상의 증상은 해당 대상체에서 종양 크기 또는 종양 부하, 종양 전이, 그리고 종양에서 염증성 세포의 수준으로 구성된 군에서 선택된, 방법.
청구항 35에 있어서, 이때 상기 투여로 종양 크기 또는 종양 부하가 10%, 20%, 30% 또는 그 이상으로 감소되는, 방법.
청구항 34에 있어서, 이때 상기 투여로 종양에서 단핵구, 대식세포, 과립구 및/또는 호중구의 수가 감소되는, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 입자들은 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 조성물에 제형화되는, 방법.
전술한 청구항중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암 치료제는 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 조성물에 제형화되는, 방법.