CN111032036B - 电压活化的治疗、诊断和/或诊疗构建体 - Google Patents

Abstract

本发明提供了可用于将治疗剂和/或诊断剂递送至受试者的组织或器官的构建体。在某些实施方式中，本发明提供了双倍超声电压活化的成像剂。在其他实施方式中，本发明提供了对受试者身体的一部分选择性成像的方法。

Description

电压活化的治疗、诊断和/或诊疗构建体

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2017年7月7日提交的美国临时申请号62/529,700的优先权，其通过引用以其全部并入本文。

背景技术

靶向药物递送或智能药物递送是指将有效载荷(比如治疗剂、诊断剂和/或治疗-诊断剂，也称为“诊疗(theranostic)”剂)递送至受试者的方法，使得相对于其他部位，有效载荷优先地(或排他地)递送到受试者身体的某些部位或在其中释放。已经使用纳米颗粒尝试进行靶向药物递送，以便克服常规全身性药物递送的缺点。原则上，纳米颗粒负载有目标药物，并靶向需要治疗或诊断的某一身体部位。以这种方式，纳米颗粒的使用避免或最小化了试剂与健康组织的相互作用。理想地，靶向药物递送构建体应当延长并定位有效载荷剂与目标组织的相互作用。进一步地，靶向药物递送应导致减少的给药频率，更一致的作用，减少的任何副作用以及减少的试剂循环水平的波动。

现有的靶向药物递送系统包括脂质体、胶束、树状聚合物、可生物降解的颗粒和人工DNA纳米结构。然而，现有的智能药物递送构建体有很多不足之处，并且在识别对待治疗和/或成像的组织或器官的局部物理特性有响应的新型递送构建体方面具有浓厚的兴趣。

胸痛是范围从威胁生命的急性心肌梗死(AMI)到轻度的自限性疾病比如肌肉拉伤的无数疾病中最常见的现有病症。胸痛和与心肌缺血一致的症状是在美国急诊室(ED)评估的常见原因，占每年1.19亿例ED就诊的约8-10％。在美国，每年至少有650万患者必须接受由于胸痛的身体检查。此外，每年在门诊中对超过800万例胸痛患者进行评估，其造成了显著的健康负担。医护人员面临着将威胁生命的心源性胸痛与非心脏病病因区分开的挑战，并且这需要以及时且有效的方式完成。在美国，约60％的患有胸痛的ED患者被进一步送往医院。然而，尽管如此高的入院率，但仍有3-4％的AMI患者无意中出院，而40％进入重症监护病房(CCU)的胸痛患者最终都排除了所有缺血性心脏病。

持续时间少于12小时的胸痛诊断是一项重要的挑战，因为大多数与急性冠状动脉综合征(ACS)相关的死亡都在此期间发生。不幸的是，在胸痛的最初12小时内，各个生化指标不能有效排除心肌梗塞。识别所有患有ACS的患者是必须的，但是重要的是，控制医疗费用并最小化不必要的检查、昂贵的住院护理和由此产生的心理压力的发生。目前用于这种评估的金标准涉及12-36小时的连续医院监测，以及使用放射、昂贵的成像设备和/或基于侵入性导管的血管造影。

在本领域中仍然需要可以将治疗剂、诊断剂和/或诊疗剂递送到目标组织或器官的新型靶向药物递送构建体。这种构建体应当是安全、容易和快速使用的，并允许精确的试剂递送。在本领域中，仍然需要可用于对患者的心血管系统成像而不需要使用放射、侵入性测试和/或延长住院时间的新型构建体。本发明解决并满足了这些需求。

发明内容

本发明提供了包括脂质体的构建体，该脂质体包括嵌套壳(nesting shell)。本发明进一步提供了选择性地将治疗剂、成像剂和/或诊疗剂递送至受试者身体的一部分的方法。本发明进一步提供了选择性地对受试者身体的一部分成像的方法。

在某些实施方式中，嵌套壳封闭内部隔室，该内部隔室包括内部核心液体和至少一种液滴。在其他实施方式中，至少一种液滴不溶于内部核心液体。

在某些实施方式中，与在不存在电场的情况下相比，在存在电场的情况下，构建体更具声学活性。

在某些实施方式中，该至少一种液滴包括回声剂，当在不存在电场的情况下使该构建体经受超声时，该回声剂不具有声学活性，并且在存在电场的情况下使该构建体经受超声时，该构建体具有声学活性。

在某些实施方式中，该至少一种液滴包括回声剂，与不存在电场的情况下相比，当在存在电场的情况下使构建体经受超声时，该回声剂具有更高的声学活性。

在某些实施方式中，内部隔室进一步包括治疗剂、诊断剂和/或诊疗剂，其在存在电场的情况下以比不存在电场的情况下更高的速率穿过嵌套壳。

在某些实施方式中，该至少一种液滴包括全氟化碳。在其他实施方式中，该至少一种液滴选自全氟丙烷、全氟丁烷、全氟戊烷、全氟己烷及其任何混合物。在又其他实施方式中，该至少一种液滴涂布有涂层，该涂层防止内部核心液体与该至少一种液滴接触。在又其他实施方式中，该涂层防止至少一种液滴溶解在内部核心液体中。在又其他实施方式中，在不存在电场的情况下，涂层防止或最小化选自液滴的聚集、融合和聚结的至少一种。在又其他实施方式中，涂层包括选自聚山梨酯20、白蛋白、半乳糖和聚乙二醇中的至少一种。

在某些实施方式中，嵌套壳包括选自磷脂和聚合物中的至少一种。在其他实施方式中，聚合物是聚合的或自组装的。在又其他实施方式中，至少一种磷脂包括选自饱和磷脂、不饱和磷脂、带电荷磷脂和不带电荷或两性离子磷脂中的至少一种磷脂。在又其他实施方式中，嵌套壳仅包括不带电荷或两性离子磷脂和/或聚合物。在又其他实施方式中，嵌套壳包括至少两种脂质，其中至少两种脂质的一种是饱和的，而另一种脂质是不饱和的，并且其中至少两种脂质的一种是带电荷的，而另一种脂质是不带电荷的或两性离子。在又其他实施方式中，两种或更多种脂质选自硬脂酰基、油酰基磷脂酰甘油(SOPG)；二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)；硬脂酰基、油酰基磷脂酰胆碱(SOPC)；二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)；胆固醇；和三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括选自以下的至少一个脂质对，SOPG和SOPC；SOPG和DSPG；DSPC和SOPC；以及DSPC和DSPG。在又其他实施方式中，至少一种饱和的脂质和至少一种不饱和的脂质为：SOPG和DSPC；和/或SOPC和DSPG。在又其他实施方式中，嵌套壳进一步包括至少一种聚乙二醇化脂质。在又其他实施方式中，所述嵌套壳进一步包括聚(乙烯醇)。在又其他实施方式中，嵌套壳包括DSPC、SOPG、胆固醇和三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约10-32.5wt％的DSPC、约10-32.5wt％的SOPG、约15-50wt％的胆固醇和约10-40wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括DSPG、SOPC、胆固醇和三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约10-32.5wt％的DSPG、约10-32.5wt％的SOPC、约15-50wt％的胆固醇和约10-40wt％的三油精。

在某些实施方式中，方法包括向受试者施用本发明的构建体，其中内部隔室包括治疗剂、成像剂和/或诊疗剂。在其他实施方式中，如果受试者身体的该部分产生足够的电压梯度以使嵌套壳对内部核心液体的渗透性比不存在该电压梯度的情况下更大，则没有进一步的电压梯度施加到受试者身体的该部分。在又其他实施方式中，如果受试者身体的部分没有产生足够的电压梯度以使嵌套壳对内部核心液体可渗透，则进一步的电压梯度被施加到受试者身体的该部分，以便使得嵌套壳对内部核心液体可渗透。

在某些实施方式中，该方法包括向受试者施用本发明的构建体，其中至少一种液滴包括回声剂。在其他实施方式中，当在不存在电场的情况下使构建体经受超声时，该试剂没有声学活性，而在存在电场的情况下使构建体经受超声时，该试剂具有声学活性。在又其他实施方式中，与不存在电场的情况下相比，当在存在电场的情况下使构建体经受超声时，该试剂具有更高的声学活性。在其他实施方式中，该方法包括向受试者身体的部分施加超声辐射。在又其他实施方式中，如果受试者身体的部分产生足够的电压梯度以使得构建体更具声学活性，则没有进一步的电压梯度施加到受试者身体的该部分。在又其他实施方式中，如果与不存在电压梯度的情况下相比，受试者身体的部分没有产生足够的电压梯度以使得构建体更具声学活性，则进一步的电压梯度被施加到受试者身体的该部分，以便使得构建体更具声学活性。

在某些实施方式中，受试者身体的部分选自心脏、肺、肝、胆囊、脾、胰腺、肾脏、膀胱、子宫、卵巢、眼、甲状腺、甲状旁腺、阴囊、睾丸和腹腔。在其他实施方式中，受试者身体的部分是心脏或其部分。

在某些实施方式中，受试者是哺乳动物。在其他实施方式中，受试者是人。

附图说明

当结合附图阅读时，将更好地理解本发明的特定实施方式的以下详细描述。为了说明本发明，在附图中显示了具体实施方式。然而，应当理解，本发明不限于附图中示出的实施方式的精确布置和手段。

图1是详细描述本领域中用于诊断患有胸痛的患者的标准程序的算法图。在某些实施方式中，本发明的组合物和方法可用于评估落在突出显示的区段内的患者。

图2A-2B为以非限制性方式示出本发明的电压活化的诊疗构建体的卡通图。图2A示出了在不存在电压梯度的情况下本发明的非限制性构建体。图2B示出了在存在电压梯度的情况下本发明的非限制性构建体，例如在心脏去极化时会出现的情况。在该特定实例中，电压梯度与嵌套壳相互作用，导致嵌套壳变得对含水内部更可渗透，并允许运输材料通过或穿过(或两者)嵌套壳。

图3A-3B是示出本发明的某些双重电压/超声活化的诊疗构建体的非限制性卡通图。图3A描绘了仅经受超声的双重活化构建体。在没有电压梯度的情况下，嵌套壳对含水内部具有很低的渗透性(或根本没有渗透性)。在某些实施方式中，这些条件防止其中的对比剂液滴蒸发。在其他实施方式中，超声本身不会显著活化或检测电压活化的构建体。图3B描绘了经受超声和电压梯度二者的双重活化的构建体。电压梯度(电场)使嵌套壳对含水内部更具渗透性。在某些实施方式中，含水内部的至少部分泄露允许对比剂液滴的蒸发。在其他实施方式中，由于电压梯度而导致的嵌套壳中的变化允许构建体的增大的声学活性。

图4A-4D是非限制性图像，其展示了在存在0.28MI(MI定义为峰值负压(以MPa为单位)除以超声频率(以MHz为单位)的平方根)、2.0/4.0MHz的连续恒定超声的情况下本发明的构建体在体外使用。图4A是在将构建体注入测试室之前获得的图像。图4B是在不存在施加电压的情况下将2mL的构建体注射到测试室中之后获得的图像。图4C是在存在超声和1.25V/cm的电场二者的情况下具有构建体的测试室的图像，其显示了与图4B相比，对比度亮度的轻微视觉差异。图4D是在超声和3.25V/cm的电场二者的存在下具有构建体的测试室的图像。图4D显示了比图4B-4C更大的声学活性，这表明该构建体对所施加的电场敏感。

图5A-5C是用于得到图4A-4D中的图像的体外测试设备的图像，其旨在模拟心脏的临床成像。由函数发生器(图5A)编程的电信号被发送到组织模拟物的金属板(图5B)，该金属板偶联到临床超声设备(图5C)。

图6A-6B是大鼠心脏的左心室的体内图像(长轴视图)。图6A在注射之前获得。图6B在注射电压活化的构建体后获得；具体地，该制剂包括用单层聚山梨酯20(5vol％的PFP、0.1vol％的PS20、余量的水)涂布的50vol％的PFP液滴和50vol％PBS，其嵌套有包括22.5wt％的DSPG、22.5wt％的SOPC、25％的胆固醇、30wt％的三油精的双层并悬浮在含有低分子量PVA的水中。图6A-6B的比较显示了图6B中心肌的回声增强。

图7A-7B是猪心脏的左心室的体内图像(短轴视图)。图7A在注入之前获得。图7B在注入电压活化剂后获得。图7A-7B的比较显示了图7B中心肌的回声增强。

图8是示出猪中心肌灌注成像的图像。B型超声图像显示了基线处(无本发明的构建体；左图)和输注本发明的构建体之后(右图)的猪左心室。该构建体的存在产生了增加的心肌内的亮度，同时使心室未增强。

图9是示出猪中心肌梗塞检测的图像。B型超声图像显示了基线处(无本发明的构建体；左图)和输注本发明的构建体后(右图)的猪左心室，如图8中，但是在左前降支冠状动脉中球囊膨胀后输注该构建体。由于球囊的存在，构建体的存在产生了增加的心肌内的亮度，但没有增加心肌内对应于没有灌注的区域的亮度。再次，心室保持未增强。

图10示出了本发明的非限制性构建体。在某些实施方式中，构建体包括嵌套在带负电的脂质体的含水核心内的涂布的全氟化碳(相变剂)液滴。尽管可以使用其他嵌套壳材料，但在此示出的嵌套壳描绘了磷脂。在磷脂双层嵌套壳的情况下，在某些实施方式中，制剂可包括另外的种类(例如，胆固醇或甘油三酸酯，或二者)。此外，可以使用在链长和饱和度以及头基类型、尺寸和电荷(阳离子、阴离子、两性离子或非离子)上不同的磷脂种类，并且除了在此描绘的结构之外的结构也可以由该制剂产生。图中的虚线指示负电荷；(正)抗衡离子未显示，且本文中的ζ电势不应与跨膜电势混淆。电场的存在影响嵌套壳，并且其进而产生增加的声学活性。嵌套壳对电场的响应(一个或多个)可以包括，但不限于，形状改变、结构域和/或分子的重新定位和/或重新定向、膨胀、变薄、扩张(dilation)、相变和/或相分离。在某些实施方式中，这些响应中的一个或多个导致嵌套壳的渗透性增加。在其他实施方式中，这些响应中的一个或多个引起增强的声学活性，其中增强的声学活性可来自增强的散射(来自作为整体的嵌套结构或该结构中的实体，其在壳中或在核中或在二者中；例如，液滴可以聚结，结构域可以聚结，和/或嵌套可以改变形状)或来自微泡振荡(其中微泡来自液滴或溶解在液滴中的气体的部分或完全蒸发)。

图11A-11B示出了用于在超声或电场或二者存在的情况下进行实时荧光测量的定制的3-D印刷外壳。图11A：荧光测定实验装置的图示。将超声换能器放置在3-D打印池的顶部，其中其7.5厘米的焦距定位在比色皿内在其中激发光束穿过样品的高度处。钛电极间隔1cm定位，使用鳄鱼夹以使用函数发生器产生变化的正弦电势；面向发射单色仪的电极具有孔以允许光通过检测器。图11B：A-710稳态荧光光谱仪(Photon TechnologyInternational Inc.,Birmingham,NJ)内定制的3-D打印外壳的照片。

图12A-12B示出了组织模拟体模(tissue-mimicking phantom)。图12A：显示GEVivid i的超声换能器与PVA冷冻凝胶组织体模接触的照片。将两个铝板插入隔开6cm的体模中，并跨越直径为3cm的样品区。图12B：使用GE Vivid i生成的图像的屏幕截图，其显示了对比度-组织比(CTR)方法。选择用于亮度分析的两个区域距离换能器偶联到体模的位置大约6cm。样品“对比度”(CTR的C)部分显示在3厘米的圆形样品腔内，而“组织”(CTR的T)部分则在样品腔外部。

图13示出了由超声加电场引起的协同的钙黄绿素释放。对于仅暴露于0.25V/cm的电场(空心圆)，仅暴露于0.5MPa PNP的超声(实心圆)，以及暴露于0.25V/cm的电场和0.5MPa PNP的超声(由x填充的圆)的样品，显示了暂时性钙黄绿素泄露。不含符号的细线显示了“计算的累加效应”，其是通过将各个模态的结果相加而获得的泄露曲线。组合模态产生的泄露曲线高于“计算的累加效应”这一事实表明，超声和电场之间具有协同作用。通过数据点画线以辅助眼睛。

图14示出了组织模拟体模中的电压活化的超声亮度。对于嵌套壳化学品I和II，显示了电场对超声成像(GE Vivid i，0.28MI，2.0/4.0MHz)亮度的影响，其分别导致约为-60mV(上排)和约为-70mV(下排)的ζ电位。图板A和E是在添加样品之前拍摄的图像，此时在不存在电场的情况下，样品室仅含有DI水。图板B和F是就在将2mL样品添加到体模中之后并且在施加电场之前拍摄的图像。图板C和G是在电场为1.0V/cm时拍摄的图像；当与图像F相比时，图像G展现出增强的亮度，而相对于图板B，图板C的亮度则更难辨别。图板D和H是电场为3.0V/cm时拍摄的图像；相对于图像G，图像H表现出增强的亮度，而相对于图板C，图板D中图板的亮度不明显。这些定性的亮度结果经由CTR方法定量，并在图15中显示。

图15示出了通过CTR量化的组织模拟体模中的电压活化的超声亮度。使用CTR方法对图14的结果进行了量化，并以CTR对时间呈现。插图显示了在整个实验过程中组织模拟体模中两个金属板之间的电压差如何变化。

图16示出了大鼠心脏中的电压活化的超声对比度。对于以下情况，显示了舒张期期间的大鼠心脏(关胸)的B型图像：(A)施用任何试剂前的基线处；(B)将嵌套制剂与壳化学品II一起施用后；(C)在嵌套制剂与壳化学品I一起施用之后；和(D)在施用涂布有饱和磷脂的六氟化硫的未嵌套的微泡之后。LV＝左心室，并且MC＝心肌。嵌套壳化学品II显示了相对于基线的心肌的增亮，并显示了左心室内活化的一些证据(比较图板B和A)。然而，与用未嵌套的微泡获得的相比，心室的增亮程度要小得多，而心肌的增亮程度要大得多(比较图板B和D)。虽然效果不太明显，但嵌套壳化学品I的结果与嵌套壳化学品II的结果相似(比较图板B和C)。

图17示出了猪心肌中的电压活化的超声对比度。猪心脏(关胸)的长轴视图，显示了嵌套化学品II注射前(左图)和注射后30s(右图)。LV指示左心室，RV指示表示右心室。注射本发明的电压活化的构建体后，心肌和左心室之间的对比度增强增加了36.4dB±0.2。

具体实施方式

一方面，本发明提供了治疗、诊断和/或诊疗构建体，其可用于将特定的有效载荷递送至受试者的目标组织和/或器官，和/或允许受试者的目标组织和/或器官的特定成像。

另一方面，本发明提供了包括脂质体的构建体，该脂质体包括嵌套壳，其中壳限定了包括内部核心液体和液滴的内部隔室，其中液滴不溶于内部核心液体。在某些非限制性实施方式中，在不存在电场(电压梯度)的情况下，嵌套壳对内部核心液体是不可渗透的或具有较低的渗透性。与不存在电场(电压梯度)的情况相比，在施加电场时，嵌套壳变得对内部核心液体更可渗透。在某些实施方式中，内部隔室进一步包括治疗剂、诊断剂和/或诊疗剂，其中与不存在电场的情况下相比，在电场存在的情况下，嵌套壳对试剂的渗透性更高。在其他实施方式中，液滴包括回声剂，当在不存在电场的情况下构建体经受超声时，该回声剂没有声学活性，或具有较低的声学活性，而当在存在电场的情况下构建体经受超声时，该回声剂具有声学活性，或者与不存在电场的情况下相比具有更高的声学活性。在又其他实施方式中，当在不存在电场的情况下经受超声时，构建体没有声学活性，或具有较低的声学活性，而在存在电场的情况下进行超声时，构建体具有声学活性，或者与不存在电场的情况相比，具有更高的声学活性。

本发明不应被解释为限于通过电场活化构建体。实际上，本发明考虑到，构建体可以通过任何如此刺激来活化，该刺激使得嵌套壳对内部核心液体和/或治疗、诊断和/或诊疗剂的渗透性与没有这种刺激的情况相比更高，或该刺激使得构建体更具声学活性。本发明中考虑的刺激的非限制性实例包括施加至构建体的压力的变化(例如，在体内，比如在身体隔室和/或血管内)和/或构建体与细胞靶标比如受体、酶或任何其他生物分子的结合。

在某些实施方式中，液滴包括全氟化碳。在其他实施方式中，液滴涂布有涂层。在又其他实施方式中，涂层包括聚山梨酯、表面活性剂、蛋白质和/或聚合物。在又其他实施方式中，涂层防止内部核心液体与液滴接触。在又其他实施方式中，涂层防止液滴在内部核心液体中溶解。在又其他实施方式中，涂层防止或最小化液滴的聚集、融合和/或聚结。

在某些实施方式中，嵌套壳包括至少一种磷脂和/或聚合物。该聚合物可以是聚合的，比如但不限于PLA，或者是自组装的，比如但不限于二嵌段、三嵌段和/或两亲共聚物。

在某些实施方式中，至少一种磷脂包括饱和、不饱和、带电和/或不带电或两性离子磷脂。在其他实施方式中，嵌套壳仅包括不带电或两性离子磷脂和/或聚合物。

在某些实施方式中，嵌套壳进一步包括胆固醇。在其他实施方式中，嵌套壳进一步包括甘油三酸酯，比如但不限于三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳中的至少一种脂质被聚乙二醇化。在又其他实施方式中，嵌套壳包括聚(乙烯醇)。

在某些实施方式中，内部核心液体包括水。在其他实施方式中，内部核心液体包括盐。在其他实施方式中，内部核心液体包括油。

不希望受到任何理论的限制，在嵌套壳上施加电压梯度(电场)引起嵌套壳内至少一部分分子的扰动，从而产生这些分子的重新定向和/或重新定位，和/或嵌套壳的微观结构中伴随的变化。在某些非限制性实施方式中，至少一部分分子的扰动使整个嵌套结构和/或嵌套在其中的任何结构比不存在电压梯度的情况下更具声学活性。在某些非限制性实施方式中，至少一部分分子的扰动引起壳形状的变化，从而产生增强的声学散射。在其他非限制性实施方式中，至少一部分分子的扰动引起壳的变形，从而允许嵌套液滴的至少部分蒸发。在又其他非限制性实施方式中，至少一部分分子的扰动使得嵌套壳变得“泄露”(即，对内部隔室内的组分至少部分可渗透)。一旦嵌套壳变得“泄露”，构建体即被活化，并且可以将任何现有的有效载荷递送到目标组织或器官。在某些实施方式中，将活化的构建体与超声结合以使得能够对心肌灌注成像(参见图6A-6B和7A-7B中的非限制性图示)。

在某些实施方式中，本发明的构建体可用于选择性地对受试者身体的一部分成像。在其他实施方式中，本发明提供了“双重活化”超声构建体，其仅在同时暴露于超声辐射(和/或体温)和电压梯度时才具有超声活性。在某些实施方式中，本发明的构建体不仅可以在血管和组织之间而且在血管的不同区域(包括动脉、小动脉、毛细血管、小静脉和静脉)之间提供增强的超声对比度。这种特征适合于检测心脏的灌注，并且因而可以提供用于确定受试者是否患有心脏病或易于患有心脏病的测试。不希望受到任何理论的限制，本发明的成像构建体在脂质体的含水核心内包括涂布的液滴的乳液，只有在脂质体允许液滴至少部分相转变(并且伴随膨胀)成气泡时，液滴才有能力转变成气态微泡。在存在体温和/或足够强度(magnitude)的超声场、但不存在电压梯度的情况下，脂质体不允许液滴转变为微泡。如果施加足够强度的超声，或将构建体暴露于体温，同时(并且当)脂质体经受足够强度的电压梯度，则脂质体将使液滴转变为微泡，并且试剂变成声学活性的(即，用超声可检测到)。在某些非限制性实施方式中，当电压梯度引起壳形状改变和/或引起壳变形，和/或使嵌套壳变得“泄露”时，至少部分蒸发发生。不希望受到任何理论的限制，电压梯度会导致脂质体和/或其中的任何结构发生变化，这导致声散射增强。

不希望受到任何理论的限制，将电压梯度施加到本发明的构建体上会导致嵌套壳的性质和/或结构发生变化，这导致增强的声学活性。在某些实施方式中，电压梯度的施加导致增强的声散射。在其他实施方式中，电压梯度的施加允许液滴转变成微泡。在某些实施方式中，向本发明的构建体施加电压梯度改变了嵌套壳对化合物比如水和/或盐的渗透性。在其他实施方式中，足够强度的电压梯度导致嵌套壳中的带电脂质在脂质体双层内重排，该带电脂质在不存在电压梯度的情况下熵驱动(entropically)分布在嵌套壳内。这导致嵌套壳对化合物比如水和/或盐和/或有效载荷剂的渗透性改变。

在某些实施方式中，本发明的方法包括向受试者施用本发明的构建体，一旦该构建体暴露于某一电压梯度，该构建体就被“活化”。在某些实施方式中，本发明的构建体的活化包括在受试者内从本发明的构建体释放至少一种活性剂。在其他实施方式中，本发明的构建体的活化包括物理和/或化学地检测在受试者内相比于未活化的构建体的本发明的活化的构建体的能力。电压梯度可以根据需要施加至受试者，或者可以作为受试者新陈代谢的一部分在受试者内生成(比如，通过对受试者身体的一部分进行成像)。

在某些实施方式中，本发明的构建体可以用于心脏组织的灌注成像。在其他实施方式中，心肌的毛细血管内的电压梯度具有足以活化试剂的强度，而心脏的腔室(心室、心房)内的电压梯度则不足够。因而，当施加超声时，该试剂仅在毛细血管区域和脉管系统中变得有活性，从而使人能够(使用超声)将心肌内存在的脉管结构内的血流与心脏的腔室内的血液区分开。在某些实施方式中，本发明的构建体仅在具有电生存能力的活体内在超声的存在下活化，使组织去极化；本发明的构建体不照亮可被灌注但电新生或死亡的心肌区域，如在局部缺血或疤痕化心肌中。识别这种局部缺血或疤痕区域是评估心肌灌注的基本部分。在某些实施方式中，本发明的构建体可以与血管舒张剂应激方案(包括药理或运动应激)结合，以评估并可视化活组织能够活化试剂的方式的动态变化。

在某些实施方式中，具有与去极化波移动通过心肌时局部组织电压改变所花费的时间相当的反应和活化时间的本发明的构建体允许通过超声实时地可视化通过组织的实际去极化波。通过组织的实际去极化波的可视化显示了由于折返回路、辅助通路或局灶性过早去极化而过早异常去极化的肌肉区域，并促进了非侵入性电生理测试以定位可能对疗法比如消融有利或可能受益于特定的起搏干预(包括指导起搏器重新同步疗法)的电异常区域。

在某些实施方式中，本发明的构建体在临床上可用于评估通过血管的血液流动、组织灌注以及外周脉管系统比如四肢和头部中的电生理活性。可以使用可容易地应用于肢体或颈部的带、袖带、护垫、电极或针尖形式的“电活化剂”活化构建体。该活化剂产生足以使试剂活化的电梯度。

因而，本发明的构建体可用于评估和治疗患有胸痛的患者，并有助于研究电生理模式和异常(心律不齐和去极化异常)。本发明的构建体与容易获得的临床超声装置结合，允许快速、准确且相对便宜地确定患者是否患有心脏病(心脏的某些区域的血流减少)，以及显示出可能死亡或缺血的心肌区域。进一步地，本发明的构建体可以提供当实际去极化波通过心肌时的实时可视化，显示出异常活化或心律不齐模式的区域。本发明的构建体可以在急性/紧急护理和非卧床环境中用作筛选工具。本发明的构建体可以进一步在心脏实验室(导管插入术、电生理学等)中用于围手术期(peri-procedurally)直接进行心肌灌注评估和/或电生理学标测。本发明的构建体可以进一步用作筛选工具和在围手术期用于血管和神经外科手术。

在某些实施方式中，本发明的构建体包括至少一种具有膜的脂质体，其中脂质体包封含水核心和至少一种液滴，在某些实施方式中其包括至少一种超声活性化合物，比如全氟化碳。

定义

如本文所用，以下术语的每个在本节中具有与其相关的含义。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管类似于或等同于本文描述的那些方法和材料的任何方法和材料都可以用于本发明的实践或测试中，但是描述了示例性的方法和材料。

通常，本文中使用的术语和超声成像、动物测试和脂质化学中的实验室步骤是本领域公知和常用的。

如本文所使用的，冠词“一(“a”和“an”)”是指该冠词的语法对象中一个或多个(即，至少一个)。举例来说，“一个元件”意思是一个元件或多于一个元件。

如本文所用，术语“约”是本领域普通技术人员所理解的，并且在其使用的上下文中在一定程度上变化。如本文所用，当涉及比如量、持续时间等可测量值时，术语“约”意思是包括与规定值相差±20％或±10％，更优选地±5％，甚至更优选地±1％，以仍更优选地±0.1％的变化，因为这种变化适合进行所公开的方法。

如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”或“药学上有效量”的化合物、组合物或构建体可互换使用，以指足以向施用该化合物的受试者提供有益效果的化合物、组合物或构建体的量。

如本文所用，“指导材料”包括出版物、记录、图表或任何其他表达介质，其可用于传达试剂盒中本发明的化合物和/或组合物的有用性，以便进行本文所述的方法。本发明的试剂盒的指导材料可以，例如，固定至含有本发明的化学化合物和/或组合物的容器上，或者与含有化学成分和/或组合物的容器一起运输。可选地，指导材料可以与容器分开运输，目的是，接收者可以配合地使用指导材料和化合物。

如本文所用，术语“嵌套壳”是指能够包封内部核心的壳(或膜)，使得在某些实验条件下，内部核心不能穿过嵌套壳，或者内部核心具有与其他实验条件相比，更低比率的穿过嵌套壳。本发明内考虑的实验条件包括但不限于电场、超声、压力、温度、流动应力等。

如本文所用，术语“药物组合物”或“组合物”是指在本发明中有用的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。该药物组合物促进将化合物施用至受试者。

如本文所用，术语“药学上可接受的”是指不消除本发明中有用的化合物的生物活性或性质并且相对无毒性的材料，比如载体或稀释剂，即，可以将该材料施用至受试者，而不会引起不希望的生物学作用或以有害的方式与包含其的组合物的任何组分相互作用。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”意思是参与将本发明中有用的化合物在受试者体内携带或运输或携带或运输至受试者使得其可以进行其预期功能的药学上可接受的材料、组合物或载体，比如液体或固体填料、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料。通常，将这种构建体从一个器官或身体的一部分携带或运输到另一器官或身体的部分。在与制剂的其他成分(包括本发明中有用的化合物)相容的意义上，每种载体必须是“可接受的”，并且对受试者无害的。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖，比如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，比如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，比如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；黄芪粉；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，比如可可脂和栓剂蜡；油，比如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，比如丙二醇；多元醇，比如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，比如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，比如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；和药物制剂中采用的其他无毒相容性物质。如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与本发明中有用的化合物的活性相容的并且对于受试者而言是生理上可接受的任何和所有包衣、抗细菌和抗真菌剂，以及吸收延迟剂等。补充活性化合物也可以并入到组合物中。“药学上可接受的载体”可以进一步包括在本发明中有用的化合物的药学上可接受的盐。在本发明的实践中使用的药物组合物中可以包括的其他附加成分是本领域已知的，并且在例如Remington’s Pharmaceutical Sciences(Genaro,Ed.,Mack Publishing Co.,1985,Easton,PA)中描述，其通过引用并入本文。

如本文所用，语言“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒酸和碱制备的所施用化合物的盐，该无毒酸和碱包括无机酸、无机碱、有机酸、无机碱、溶剂化物、水合物及其包合物。合适的药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸或有机酸制备。无机酸的实例包括硫酸盐、硫化氢、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸(包括磷酸氢盐和磷酸二氢盐)。适当的有机酸可以选自脂族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和磺酸类的有机酸，其实例包括甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、葡糖醛酸、马来酸、富马酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、苯乙酸、扁桃酸、亚甲基双羟萘酸(帕莫酸)、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、三氟甲磺酸、2-羟基乙磺酸、对甲苯磺酸、磺胺酸、环己基氨基磺酸、硬脂酸、藻酸、β-羟基丁酸、水杨酸、半乳糖二酸和半乳糖醛酸。本发明化合物的合适的药学上可接受的碱加成盐包括，例如，金属盐，其包括碱金属、碱土金属和过渡金属盐，比如钙、镁、钾、钠和锌盐。药学上可接受的碱加成盐还包括由碱性胺比如，例如，N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制成的有机盐。所有这些盐可以通过例如使合适的酸或碱与化合物反应而由相应的化合物制备。

如本文所用，考虑给药的术语“受试者”、“患者”或“个体”包括但不限于，人类(即，任何年龄组的男性或女性，例如，儿科受试者(例如，婴儿、儿童、青少年)或成年受试者(例如，年轻成年人、中年成年人或老年成年人)和/或其他灵长类动物(例如食蟹猴、恒河猴)；哺乳动物，包括商业相关的哺乳动物，比如牛、猪、马、绵羊、山羊、猫和/或狗；和/或鸟类，其包括商业相关的鸟类，比如鸡、鸭、鹅、鹌鹑和/或火鸡。

“治疗性”治疗是为了减轻或消除那些病症而向表现出病理病症的受试者施用的治疗。

如本文所用，“治疗”意思是减少患者或受试者经历症状的频率，或施用试剂或化合物以降低患者或受试者经历症状的严重性。本领域普通技术人员可以使用常规实验确定在任何个体情况下的适当治疗量。

如本文所用，术语“三油精”是指2,3-双[[(Z)-十八碳-9-烯酰基]氧基]丙基(Z)-十八碳-9-烯酸酯或其盐或溶剂合物。

遍及本公开，可以以范围格式来呈现本发明的各个方面。应当理解，范围格式的描述仅是为了方便和简洁，而不应被解释为对本发明范围的不灵活的限制。因此，范围的描述应该被认为已经具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的单个数值，并且在适当的情况下，公开了范围内的数值的部分整数。例如，对范围比如从1到6的描述应被视为已具体公开了比如从1到3、从1到4、从1到5、从2到4、从2到6、从3到6等的子范围，以及该范围内的单个数字，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围的广度如何，这都适用。

本文使用以下缩写：ACS，急性冠状动脉综合征；AMI，急性心肌梗塞；DSPC，二硬脂酰磷脂酰胆碱；DSPG，二硬脂酰磷脂酰甘油；PCA，相变剂；PFC，全氟化碳；PFP，全氟戊烷；PVA，聚乙烯酸；SOPC，硬脂酰基、油酰基磷脂酰胆碱；SOPG，硬脂酰基、油酰基磷脂酰甘油。

组合物

本发明提供了可用于本发明的药物递送方法和/或成像方法的脂质体构建体。在某些实施方式中，本发明的构建体包括至少一种具有膜(嵌套壳)的脂质体，其中该嵌套壳包封含水核心液体和至少一种液滴，在某些实施方式中其包括至少一种超声活性化合物，比如全氟化碳。

在某些实施方式中，嵌套壳包括胆固醇。在其他实施方式中，嵌套壳包括三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳进一步包括至少一种饱和脂质和至少一种不饱和脂质；其中一种脂质带电荷而另一种脂质不带电荷或是两性离子。

在某些实施方式中，嵌套壳包括选自SOPG和DSPG的至少一种脂质。在其他实施方式中，嵌套壳包括选自SOPC和DSPC的至少一种脂质。在又其他实施方式中，嵌套壳包括选自以下的至少一个脂质对：SOPG和SOPC；SOPG和DSPG；DSPC和SOPC；和DSPC和DSPG。

在某些实施方式中，液滴包括至少一种全氟化超声活性化合物。在其他实施方式中，液滴包括全氟丙烷(C3)。在又其他实施方式中，液滴包括全氟丁烷(C4)。在其他实施方式中，液滴包括全氟戊烷(C5)。在其他实施方式中，液滴包括全氟己烷(C6)。在其他实施方式中，液滴包括六氟化硫。在又其他实施方式中，液滴包括约5％(体积)的至少一种全氟化超声活性化合物，比如C3、C4、C5和/或C6。

在某些实施方式中，液滴包括气态化合物，其在室温和压力下是气态的，但是当配制在液滴内时是液态的(比如，例如，通过对气态化合物施加高压，通过将气态化合物限制在涂层中，和/或溶解在另一种液体化合物中)。在其他实施方式中，当嵌套壳被本文考虑的刺激活化时，液化的气态化合物变为至少部分气态的。

在某些实施方式中，液滴包括溶解的气体，比如但不限于N₂、O₂、CO₂、氦气、氖气、氩气、氪气、氙气等。

在某些实施方式中，液滴包括粒状物质，比如但不限于二氧化硅颗粒、金颗粒和/或磁铁颗粒。在其他实施方式中，粒状物质的直径范围为约1nm至约100nm。

在某些实施方式中，液滴包括涂层，该涂层包括选自聚山梨酯20、白蛋白、半乳糖和聚乙二醇中的至少一种。在其他实施方式中，液滴涂层包括聚山梨酯20。在又其他实施方式中，液滴包括约0.1％vol/vol的聚山梨酯20。

在某些实施方式中，嵌套壳包括SOPG、DSPC、胆固醇和三油精。在其他实施方式中，嵌套壳包括约22.5wt％的DSPC、约22.5wt％的SOPG、约25wt％的胆固醇和约30wt％的三油精。在其他实施方式中，嵌套壳包括约20wt％的DSPC、约20wt％的SOPG、约40wt％的胆固醇和约20wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20-22.5wt％的DSPC、约20-22.5wt％的SOPG、约25-40wt％的胆固醇和约20-30wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约17.5-25wt％的DSPC、约17.5-25wt％的SOPG、约22.5-42.5wt％的胆固醇和约17.5-32.5wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约15-27.5wt％的DSPC、约15-27.5wt％的SOPG、约20-45wt％的胆固醇和约15-35wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约12.5-30wt％的DSPC、约12.5-30wt％的SOPG、约17.5-47.5wt％的胆固醇和约12.5-37.5wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约10-32.5wt％的DSPC、约10-32.5wt％的SOPG、约15-50wt％的胆固醇和约10-40wt％的三油精。

在某些实施方式中，嵌套壳包括DSPG、SOPC、胆固醇和三油精。在其他实施方式中，嵌套壳包括约22.5wt％的DSPG、约22.5wt％的SOPC、约25wt％的胆固醇和约30wt％的三油精。在其他实施方式中，嵌套壳包括约20wt％的DSPG、约20wt％的SOPC、约40wt％的胆固醇和约20wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20-22.5wt％的DSPG、约20-22.5wt％的SOPC、约25-40wt％的胆固醇和约20-30wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约17.5-25wt％的DSPG、约17.5-25wt％的SOPC、约22.5-42.5wt％的胆固醇和约17.5-32.5wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约15-27.5wt％的DSPG、约15-27.5wt％的SOPC、约20-45wt％的胆固醇和约15-35wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约12.5-30wt％的DSPG、约12.5-30wt％的SOPC、约17.5-47.5wt％的胆固醇和约12.5-37.5wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约10-32.5wt％的DSPG、约10-32.5wt％的SOPC、约15-50wt％的胆固醇和约10-40wt％的三油精。

在某些实施方式中，嵌套壳包括约22.5wt％的DSPC。在其他实施方式中，嵌套壳包括约22.5wt％的SOPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约25wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约30wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20wt％的DSPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20wt％的SOPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约40wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20-22.5wt％的DSPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20-22.5wt％的SOPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约25-40wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20-30wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约17.5-25wt％的DSPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约17.5-25wt％的SOPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约22.5-42.5wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约17.5-32.5wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约15-27.5wt％的DSPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约15-27.5wt％的SOPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20-45wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约15-35wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约12.5-30wt％的DSPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约12.5-30wt％的SOPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约17.5-47.5wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约12.5-37.5wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约10-32.5wt％的DSPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约10-32.5wt％的SOPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约15-50wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约10-40wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约22.5wt％的DSPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约22.5wt％的SOPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约25wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约30wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20wt％的DSPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20wt％的SOPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约40wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20-22.5wt％的DSPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20-22.5wt％的SOPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约25-40wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20-30wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约17.5-25wt％的DSPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约17.5-25wt％的SOPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约22.5-42.5wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约17.5-32.5wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约15-27.5wt％的DSPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约15-27.5wt％的SOPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约20-45wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约15-35wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约12.5-30wt％的DSPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约12.5-30wt％的SOPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约17.5-47.5wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约12.5-37.5wt％的三油精。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约10-32.5wt％的DSPG。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约10-32.5wt％的SOPC。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约15-50wt％的胆固醇。在又其他实施方式中，嵌套壳包括约10-40wt％的三油精。

在某些实施方式中，构建体包括：包括约5％vol/vol的全氟戊烷和约0.1％vol/vol的聚山梨酯20的液滴；和包括约22.5wt％的DSPC、约22.5wt％的SOPG、约25wt％的胆固醇和约30wt％的三油精的嵌套壳。

在其他实施方式中，构建体包括：包括约5％vol/vol的全氟戊烷和约0.1％vol/vol的聚山梨酯20的液滴；和包括约22.5wt％的DSPG、约22.5wt％的SOPC、约25wt％的胆固醇和约30wt％的三油精的嵌套壳。

在某些实施方式中，将构建体悬浮在包括低分子量聚(乙烯醇)的水溶液中。

在某些实施方式中，将本发明的构建体与常规赋形剂——即，适合于肠胃外、静脉内、动脉内、皮下、肠内或本领域已知的任何其他合适的给药模式的药学上可接受的有机或无机载体物质——混合配制。可以对药物制剂进行灭菌，并且如果需要，可以与辅助剂，例如，润滑剂、防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、用于影响渗透压缓冲剂的盐和/或着色物质等混合。它们也可以在需要时与其他活性剂组合。

在某些实施方式中，构建体进一步包括包封嵌套壳的另外的外膜。在某些实施方式中，外膜包括脂质双层。在其他实施方式中，外膜保护嵌套壳免于在生物条件下降解。

试剂盒

本发明进一步提供了试剂盒，其包括至少一种本发明的组合物或构建体，以及说明使用本发明的至少一种组合物或构建体的诊断和/或治疗方法的说明手册。在某些实施方式中，试剂盒进一步包括超声成像装置和/或有效载荷剂。在其他实施方式中，试剂盒进一步包括用于施加电压梯度的装置。

方法

本发明提供了将有效载荷剂(其可以是治疗剂、成像剂和/或诊疗剂)递送到受试者身体的一部分的方法。在某些实施方式中，该方法包括向受试者施用本发明的构建体，其中在存在电压梯度的情况下有效载荷剂以比不存在电压梯度的情况下更高的速率从构建体释放。在其他实施方式中，在存在电压梯度的情况下，构建体比在不存在电压梯度的情况下对有效载荷剂更具渗透性。如果身体的该部分产生足够的电压梯度以活化构建体，则没有进一步的电压梯度施加至受试者身体的该部分。如果身体的该部分没有产生足够的电压梯度以活化构建体，则进一步的电压梯度被施加至受试者身体的该部分以活化该构架体。

本发明还提供了使用本发明的“双重活化的”构建体对受试者身体的一部分进行选择性成像的方法。在某些实施方式中，该方法包括向受试者施用本发明的构建体，其中在不存在电压梯度和超声辐射的情况下，构建体是超声失活的。在其他实施方式中，方法包括向受试者身体的一部分施加超声辐射。如果身体的该部分产生足够的电压梯度以活化该构建体，则没有进一步的电压梯度施加至受试者身体的该部分。如果身体的该部分没有产生足够的电压梯度以活化构建体，则进一步的电压梯度被施加至受试者身体的该部分以便活化构建体。在又其他实施方式中，方法包括对受试者身体的该部分成像。

在某些实施方式中，使用超声成像对受试者身体的该部分成像。

在某些实施方式中，超声对比剂构建体包括具有嵌套壳的脂质体，其中嵌套壳包封含水核心液体和包封至少一种超声活性化合物的至少一种液体颗粒。在其他实施方式中，当经受电压梯度时，脂质体的嵌套壳变得对含水核心液体至少部分地可渗透。

在某些实施方式中，至少一种超声活性化合物是本领域已知的任何超声活性化合物。在其他实施方式中，至少一种超声活性化合物包括全氟丙烷(C3)。在其他实施方式中，至少一种超声活性化合物包括全氟丁烷(C4)。在其他实施方式中，至少一种超声活性化合物包括全氟戊烷(C5)。在其他实施方式中，至少一种超声活性化合物包括全氟己烷(C6)。在其他实施方式中，至少一种超声活性化合物包括六氟化硫。在其又他实施方式中，至少一种超声活性化合物选自全氟丙烷、全氟丁烷、全氟戊烷和全氟己烷。在又其他实施方式中，超声活性化合物是全氟戊烷。

不希望受到任何理论的限制，在本发明的构建体中的至少一种超声活性化合物的活性可受到化合物的沸点、化合物的液滴尺寸、在内部核心液体中存在(或不存在)溶解的气体(例如但不限于O₂、N₂、CO₂等)和/或在内部核心液体中存在(或不存在)颗粒物质影响。

在某些实施方式中，液滴包括气态化合物，其在室温和压力下是气态的，但是当配制在液滴内时是液态的(例如，通过对气态化合物施加高压，通过将气态化合物限制在涂层中，和/或溶解在另一种液体化合物中)。在其他实施方式中，当嵌套壳被本文考虑的刺激活化时，液化的气态化合物变为至少部分为气态的。

在某些实施方式中，所述至少一种液体颗粒包括涂层，所述涂层包括选自聚山梨酯20、白蛋白、半乳糖和聚乙二醇中的至少一种。在其他实施方式中，涂层包括聚山梨酯20。

在某些实施方式中，至少一个液体颗粒包括封装在聚山梨酯20的单层内的全氟戊烷。

在某些实施方式中，嵌套壳包括选自SOPG和DSPG的至少一种脂质。在其他实施方式中，嵌套壳包括选自SOPC和DSPC的至少一种脂质。在又其他实施方式中，嵌套壳包括选自以下的至少一个脂质对：SOPG和SOPC；SOPG和DSPG；DSPC和SOPC；和DSPC和DSPG。

在某些实施方式中，嵌套壳进一步包括胆固醇。在其他实施方式中，嵌套壳进一步包括三油精。

在某些实施方式中，将电压梯度施加到受试者身体的一部分以便活化构建体。在其他实施方式中，施加的电压梯度不会引起显著的电穿孔。在又其他实施方式中，电压梯度等于或小于约10V/cm。在又其他实施方式中，电压梯度在约0.01V/cm至约10V/cm的范围内。在又其他实施方式中，电压梯度在约0.05V/cm至约10V/cm的范围内。在又其他实施方式中，电压梯度在约0.1V/cm至约10V/cm的范围内。在又其他实施方式中，电压梯度在约0.5V/cm至约10V/cm的范围内。

在某些实施方式中，电压范围等于或高于约0.01V/cm。在其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.02V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.03V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.04V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.05V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.06V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.07V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.08V/cm。在其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.09V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.1V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.3V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.5V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.7V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约0.9V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约1.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约1.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约1.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约1.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约1.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约2.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约2.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约2.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约2.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约2.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约3.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约3.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约3.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约3.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约3.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约4.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约4.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约4.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约4.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约4.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约5.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约5.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约5.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约5.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约5.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约6.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约6.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约6.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约6.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约6.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约6.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约7.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约7.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约7.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约7.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约7.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约8.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约8.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约8.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约8.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约8.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约9.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约9.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约9.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约9.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或高于约9.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于约10V/cm。

在某些实施方式中，电压范围等于约0.01V/cm。在其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.02V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.03V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.04V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.05V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.06V/cm。在又其他实施例中，电压范围等于或低于约0.07V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.08V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.09V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.1V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.3V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.5V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.7V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约0.9V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约1.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约1.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约1.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约1.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约1.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约2.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约2.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约2.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约2.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约2.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约3.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于大约3.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于大约3.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约3.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约3.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约4.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约4.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约4.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约4.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约4.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约5.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约5.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约5.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约5.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约5.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约6.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约6.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约6.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约6.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约6.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约6.8V/cm。在其他实施方式中，电压范围等于或低于约7.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约7.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约7.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约7.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约7.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约8.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约8.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约8.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约8.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约8.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约9.0V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约9.2V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约9.4V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约9.6V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约9.8V/cm。在又其他实施方式中，电压范围等于或低于约10V/cm。

在某些实施方式中，本发明的方法用于使选自以下的受试者身体的一部分成像：心脏、肺、肝、胆囊、脾、胰腺、肾脏、膀胱、子宫、卵巢、眼睛、甲状腺、甲状旁腺、阴囊、睾丸和腹腔。在其他实施方式中，受试者身体的一部分是心脏或其部分。在又其他实施方式中，受试者身体的一部分是受试者心脏的心室。在又其他实施方式中，不论受试者身体的一部分是否固有地产生电活性，都会将外部电场施加到受试者身体的该部分。

在某些实施方式中，身体的一部分产生足够的电压梯度以活化构建体，其中没有进一步的电压梯度施加到受试者身体的该部分。在某些实施方式中，产生足够的电压梯度以活化构建体的身体的一部分是心脏。

在某些实施方式中，受试者身体的一部分经受单一的超声辐射频率和/或强度。在其他实施方式中，受试者身体的一部分经受两个或更多个不同的超声辐射频率和/或强度。在某些实施方式中，施加到受试者身体一部分的超声等于或小于1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1或1.0。

在某些实施方式中，将“双重活化的”构建体作为药物组合物的一部分施用至受试者，该药物组合物进一步包括一种或多种赋形剂。

在某些实施方式中，使用例如注射和/或输注，通过选自肠胃外、静脉内、动脉内等的一种或多种方法将“双重活化的”构建体施用至受试者。

在某些实施方式中，本发明的方法是非侵入性的。在其他实施方式中，本发明的方法不包括使用电离辐射。在又其他实施方式中，当与本领域中常见的其他方法相比时，本发明的方法允许更强的超声图像对比度。在又其他实施方式中，当与本领域中常见的其他方法相比时，本发明的方法允许较低剂量的“双重活化的”构建体以获得相当的超声图像对比度。在又其他实施方式中，本发明的方法允许评估微血管灌注。

在某些实施方式中，受试者是哺乳动物。在其他实施方式中，受试者是人。

施用/剂量/制剂

给药方案可能会影响有效量。可以在本发明所考虑的疾病或病症发作之前或之后将治疗制剂、组合物和/或构建体施用至受试者。进一步地，可以每天或顺序施用数个分开的剂量以及交错剂量，或者可以连续输注或可以推注该剂量。进一步地，治疗制剂的剂量可以根据治疗或预防情况的紧急程度所指示地成比例地增加或减少。

可以使用已知步骤以有效治疗本发明所考虑的疾病或病症的剂量和时间段将本发明的组合物施用至患者，优选地哺乳动物，更优选地人。实现治疗效果所必需的治疗化合物的有效量可以根据比如患者的疾病或病症的状态；患者的年龄、性别和体重；以及治疗性化合物治疗本发明中考虑的疾病或病症的能力等因素而变化。可以调整剂量方案以提供最佳的治疗响应。例如，可以每天施用数个分开的剂量或可以根据治疗情况的紧急程度所指示地成比例地减少剂量。本发明的治疗化合物的有效剂量范围的非限制性实例为约1至5,000mg/kg体重/每天。可以施用可用于实践本发明的药物组合物以递送1ng/kg/天和100mg/kg/天的剂量。本领域普通技术人员将能够研究相关因素并确定治疗化合物的有效量而无需过度实验。

可以改变本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以便获得对于特定患者、组合物和施用模式实现所需治疗响应有效的活性成分的量，而不会对患者有毒。

特别地，所选择的剂量水平取决于多种因素，其包括所用特定化合物的活性，施用时间，化合物的排泄速率，治疗的持续时间，与该化合物组合使用的其他药物、化合物或材料，所治疗患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和既往病史，以及医学领域众所周知的类似因素。

具有本领域普通技术的医生，例如，医师或兽医，可以容易地确定所需药物组合物的有效量并为其开处方。例如，医师或兽医可以以低于实现所期望的治疗效果所需水平的药物组合物中使用的本发明化合物的剂量开始，并逐渐地增加剂量直到实现所期望的效果。

在某些实施方式中，以剂量单位形式配制化合物是有利的，以易于施用和均匀剂量。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为待治疗患者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位都含有计算的预定量的治疗化合物以与所需的药物载体结合以产生所期望的治疗效果。本发明的剂量单位形式由治疗化合物的独特特性和待实现的特定治疗效果，以及在复合/配制用于治疗本发明中考虑的疾病或病症的这种化合物的领域中固有的局限性规定并且直接取决于它们。

在某些实施方式中，本发明的组合物或构建体使用一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体配制。在其他实施方式中，使用一种或多种药学上可接受的赋形剂配制本发明的药物组合物或构建体，或者本发明包括治疗有效量的本发明的化合物和药学上可接受的载体。在又其他实施方式中，本发明的化合物是组合物中唯一的生物活性剂。在又其他实施方式中，本发明的化合物是组合物中治疗有效量的唯一生物活性剂。

载体可以是溶剂或分散介质，其包括，例如，水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适的混合物和植物油。可以例如通过使用比如卵磷脂的包衣，通过在分散的情况下维持所需的颗粒尺寸以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。可以通过各种抗细菌和抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现预防微生物的作用。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如，糖、氯化钠或多元醇，例如甘露醇和山梨糖醇。可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如，单硬脂酸铝或明胶来实现可注射组合物的延长吸收。

在某些实施方式中，本发明的组合物以范围在每天1-5次或更多次的剂量施用至患者。在其他实施方式中，本发明的组合物以包括但不限于每天一次、每两天一次、每三天一次至每周一次以及每两周一次的剂量范围施用至患者。对于本领域技术人员而言显而易见的是，本发明的各种组合物的施用频率因个体而异，这取决于许多因素，其包括但不限于年龄、待治疗的疾病或病症、性别、整体健康状况和其他因素。因而，本发明不应被解释为限于任何特定的剂量方案，并且通过主治医生考虑与患者有关的所有其他因素来确定待施用至任何患者的精确剂量和组成。

用于施用的本发明化合物的范围可为约1μg至约10,000mg、约20μg至约9,500mg、约40μg至约9,000mg、约75μg至约8,500mg、约150μg至约7,500mg、约200μg至约7,000mg、约3050μg至约6,000mg、约500μg至约5,000mg、约750μg至约4,000mg、约1mg至约3,000mg、约10mg至约2500mg、约20mg至约2,000mg、约25mg至约1,500mg、约30mg至约1,000mg、约40mg至约900mg、约50mg至约800mg、约60mg至约750mg、约70mg至约600mg、约80mg至约500mg，以及其间的任何和所有全部或部分增量。

在一些实施方式中，本发明化合物的剂量为约1mg至约2,500mg。在一些实施方式中，用于本文所述的组合物中的本发明化合物的剂量小于约10,000mg，或小于约8,000mg，或小于约6,000mg，或小于约5,000mg，或小于约3,000mg，或小于约2000mg，或小于约1000mg，或小于约500mg，或小于约200mg，或小于约50mg。类似地，在一些实施方式中，本文所述的第二化合物的剂量小于约1,000mg，或小于约800mg，或小于约600mg，或小于约500mg，或小于约400mg，或小于约300mg，或小于约200mg，或小于约100mg，或小于约50mg，或小于约40mg，或小于约30mg，或小于约25mg，或小于约20mg，或小于约15mg，或小于约10mg，或小于约5mg，或小于约2mg，或小于约1mg，或小于约0.5mg，以及其任何和所有全部或部分增量。

在某些实施方式中，本发明涉及包装的药物组合物，其包括容纳治疗有效量的本发明化合物单独或与第二药物试剂组合的容器；以及使用该化合物以治疗、预防或减轻本发明所考虑的疾病或病症的一种或多种症状的说明书。

制剂可以与常规赋形剂混合使用，所述常规赋形剂即适合于口服、肠胃外、经鼻、静脉内、皮下、肠内或本领域已知的任何其他合适的施用模式的药学上可接受的有机或无机载体物质。可以对药物制品进行灭菌，并且如果需要，可以与辅助剂，例如，润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压缓冲剂的盐、着色剂、调味剂和/或芳香族物质等混合。它们还可以在需要时与其他活性剂组合。

本发明的任何组合物的施用途径包括，例如，静脉内或动脉内注射和/或输注。

合适的组合物和剂型包括，例如，片剂、胶囊剂、囊片、药丸、凝胶帽、锭剂、分散剂、悬浮剂、溶液、糖浆、颗粒剂、珠子、透皮贴剂、凝胶、散剂、丸剂、乳浆剂、含片、乳膏、糊剂、膏药、洗剂、盘片、栓剂、用于鼻腔或口服施用的液体喷雾剂，用于吸入的干粉或气雾制剂，用于膀胱内给药的组合物和制剂等。应当理解，可用于本发明的制剂和组合物不限于本文所述的特定制剂和组合物。

肠胃外施用

如本文所用，药物组合物的“肠胃外施用”包括特征在于物理破坏受试者的组织并且通过组织中的破口(breach)而施用药物组合物的任何施用途径。因而，肠胃外施用包括但不限于通过注射组合物，通过手术切口施加组合物，通过穿透组织的非手术伤口施加组合物等来施用药物组合物。特别地，肠胃外施用考虑包括但不限于皮下、静脉内、腹膜内、肌内、胸骨内注射和肾脏透析输注技术。

适于肠胃外施用的药物组合物的制剂包括与药学上可接受的载体比如无菌水或无菌等渗盐水组合的活性成分。这种制剂可以以适合于推注施用或连续施用的形式制备、包装或销售。可注射制剂可以以单位剂型，比如在含有防腐剂的安瓿或多剂量容器中制备、包装或销售。用于肠胃外施用的制剂包括但不限于悬浮液、溶液、在油性或含水载体中的乳剂、糊剂和可植入的缓释或可生物降解的制剂。这种制剂可以进一步包括一种或多种另外的成分，其包括但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外施用的制剂的一个实施方式中，以干燥(即粉末或颗粒)形式提供活性成分，以在肠胃外施用重构组合物之前用合适的载体(例如，无菌无热原的水)进行重构。

药物组合物可以以无菌可注射的含水或油性悬浮液或溶液的形式制备、包装或销售。该悬浮液或溶液可以根据已知技术进行配制，并且除了活性成分之外，还可以包括另外的成分，比如本文所述的分散剂、湿润剂或悬浮剂。例如，可以使用无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂，比如水或1,3-丁二醇来制备这种无菌可注射制剂。其他可接受的稀释剂和溶剂包括但不限于，林格溶液、等渗氯化钠溶液和不挥发性油，比如合成的甘油单酯或甘油二酯。有用的其他肠胃外给药的制剂包括以微晶形式、在脂质体制品中或作为可生物降解的聚合物系统的组分的活性成分的那些。用于缓释或植入的组合物可以包括药学上可接受的聚合物或疏水材料，比如乳液、离子交换树脂、微溶聚合物或微溶盐。

控释制剂和药物输送系统

在某些实施方式中，本发明的制剂可以是但不限于短期的，快速补偿的以及控制的，例如，缓释、延迟释放和脉冲释放制剂。

术语“缓释”以其常规意义使用，是指在延长的时间段内提供药物的逐步释放的药物制剂，尽管不一定，但在延长的时间段内导致基本恒定的血液水平的药物。该时间段可以长达一个月或更长，并且应该是比以推注形式施用的相同量的试剂更长时间的释放。

为了缓释，可以将化合物与提供化合物缓释性质的合适的聚合物或疏水材料一起配制。因此，在本发明的方法中有用的化合物可以以微粒的形式，例如，通过注射施用，或者以晶片或盘片的形式通过植入施用。

在本发明的一个实施方式中，使用缓释制剂将本发明的化合物单独或与另一种药物试剂组合施用至患者。

术语“延迟释放”在本文中以其常规意义使用，是指在药物施用后的一些延迟后提供药物的初始释放的药物制剂，并且尽管不一定，但可以包括从约10分钟至高达约12小时的延迟。

术语“脉冲释放”在本文中以其常规意义使用，是指以药物施用后产生脉冲血浆分布的方式提供药物释放的药物制剂。

术语“立即释放”以其常规意义使用，是指在药物施用后立即提供药物释放的药物制剂。

如本文所用，短期是指在药物施用后高达并包括约8小时、约7小时、约6小时、约5小时、约4小时、约3小时、约2小时、约1小时、约40分钟、约20分钟、约10分钟或约1分钟及药物施用后其任何或所有全部或部分增量的任何时间段。

如本文所用，快速补偿是指在药物施用后高达并包括约8小时、约7小时、约6小时、约5小时、约4小时、约3小时、约2小时、约1小时、约40分钟、约20分钟、约10分钟或约1分钟及其任何和所有全部或部分增量的任何时间段。

给药

本发明化合物的合适剂量可以在每天约0.01mg至约5,000mg的范围内，比如每天约0.1mg至约1,000mg，例如，约1mg至约500mg，比如约5mg至约250mg。该剂量可以以单个剂量或以多个剂量施用，例如，每天1至5次或更多次。当使用多个剂量时，每个剂量的量可以相同或不同。例如，每天1mg的剂量可以以两个0.5mg的剂量施用，其中两个剂量之间具有约12小时的间隔。

应当理解，在非限制性实例中，每天给药的化合物的量可以每天、每隔一天、每2天、每3天、每4天或每5天施用。例如，对于每隔一天施用，可以在星期一开始每天5mg的剂量，接着在星期三施用第一随后的每天5mg的剂量，在星期五施用第二随后的每天5mg的剂量，等等。

在其中患者的状况确实改善的情况下，根据医生的判断，任选地，连续地进行施用本发明的抑制剂；可选地，暂时降低或暂时中止所施用的药物剂量持续一定时间长度(即，“药物休假”)。药物休假的长度任选地在2天和1年之间变化，仅作为实例其包括，2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。药物休假期间的剂量减少包括10％-100％，仅作为实例其包括，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

一旦发生患者的状况改善，如果必要，施用维持剂量。随后，根据疾病或病症，将剂量或施用频率或二者降低至保持改善的疾病的水平。在某些实施方式中，在症状和/或感染的任何复发之后，患者需要长期间歇治疗。

用于本发明方法的化合物可以以单位剂型配制。术语“单位剂型”是指适合作为进行治疗的患者的单位剂量的物理上离散的单位，其中每个单位含有计算的预定量的活性材料以产生所期望的治疗效果，其任选地与合适的药物载体结合。单位剂型可以是单个每日剂量或多个每日剂量(例如，每天约1至5次或更多次)的一个。当使用多个每日剂量时，每个剂量的单位剂型可以相同或不同。

在细胞培养物或实验动物中任选地确定这种治疗方案的毒性和治疗效果，其包括，但不限于，确定LD₅₀(致死群体50％的剂量)和ED₅₀(有效治疗群体50％的剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，其表示为LD₅₀和ED₅₀之间的比。从细胞培养测定法和动物研究中获得的数据任选地用于配制用于人的剂量范围。这种化合物的剂量优选在循环浓度的范围内，该循环浓度包括具有最小毒性的ED₅₀。剂量任选地根据所采用的剂型和所利用的施用途径而在该范围内变化。

仅使用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文所述的具体步骤、实施方式、权利要求和实施例的许多等同方案。这种等同方案被认为在本发明的范围内，并由所附的权利要求书覆盖。例如，应当理解，利用本领域公认的替代方案并且仅使用常规实验的反应条件的改变——其包括，但不限于反应时间，反应大小/体积和实验试剂，比如溶剂、催化剂，压力，大气条件(例如氮气氛围)和还原/氧化剂——在本申请的范围内。

应当理解，无论本文中在何处提供数值和范围，范围格式的描述仅是为了方便和简洁，而不应被解释为对本发明范围的不灵活的限制。因此，这些值和范围所涵盖的所有值和范围旨在被涵盖在本发明的范围内。此外，本申请还考虑了落入这些范围内的所有值以及该值范围的上限或下限。范围的描述应被认为已明确公开了所有可能的子范围以及该范围内的单个数值，以及在适当时公开了范围内的数值的部分整数。例如，对范围比如1至6的描述应被视为已明确公开了从1至3、从1至4、从1至5、从2至4、从2至6、从3至6等的子范围，以及该范围内的单个数字，例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围的广度如何，这都适用。

以下实施例进一步说明了本发明的方面。然而，它们决不是对本文所述的本发明的教导或公开的限制。

实施例

现在参考以下实施例描述本发明。提供这些实施例仅出于说明的目的，并且本发明不限于这些实施例，而是涵盖由于本文提供的教导而显而易见的所有变形。

实施例1：使用“双重活化的”对比剂的体外实验

图4A-4D示出了使用含胆固醇和三油精的构建体的概念实验的体外证据。与基本上是深色的去离子水(图4A)相比，最高的电压梯度(3.33V/cm，图4D)显得明亮。

实施例2：使用“双重活化的”对比剂的体内实验

图6A-6B是大鼠心脏的左心室的体内图像(长轴视图)。图6A在注射之前获得。图6B在注射电压活化的构建体后获得；具体而言，该制剂包括用单层聚山梨酯20(5vol％PFP、0.1vol％PS20、余量的水)包被的50vol％PFP液滴和50vol％PBS，其嵌套有包括22.5wt％的DSPG、22.5wt％的SOPC、25％的胆固醇、30wt％的三油精的双层并悬浮在含有低分子量PVA的水中。图6A-6B的比较显示了图6B中心肌的回声增强。

图7A-7B是猪心脏的左心室的体内图像(短轴视图)。图7A在注射之前获得。图7B在注射电压活化剂后获得。该制剂包括用单层聚山梨酯20(5vol％PFP、0.1vol％PS20、余量的水)包被的50vol％PFP液滴和50vol％PBS，其嵌套有包括22.5wt.％的DSPG、22.5wt％的SOPC、25％的胆固醇，30％的三油精的双层并悬浮在含有低分子量PVA的水中。图7A-7B的比较显示了图7B中心肌的回声增强。

实施例3：

3.1.材料

磷脂、固醇和甘油三酸酯购自Avanti Polar lipids(Alabaster,AL.USA)。全氟化碳购自FluoroMed,L.P.(Round Rock,TX,USA)。钙黄绿素、氯化钴(II)、聚乙烯醇(MW＝27,000和85,000-124,000)和表面活性剂(聚山梨酯20)购自Sigma Aldrich(St.Louis,MO)。所有化学种类均无需进一步纯化即可使用。

3.2.方法

3.2.1.相变剂(PCA)纳米乳液：

包括全氟戊烷、表面活性剂和水的全氟化碳纳米乳液在20kHz和50％振幅下经由探针超声(ModelUP200S Hielscher–Ultrasound Technology,Teltow,Germany)制备。典型批次产生大约350nm的平均直径，其通过动态光散射(NanoBrook Omni,BrookhavenInstruments Corp.,Holtsville,NY)测量。当用全氟丁烷经由微泡缩合制成纳米乳液时，获得大约255nm的平均直径。用于制备纳米乳液的全氟化碳和表面活性剂的量分别为5.00％v/v和0.08％v/v。

3.2.2.嵌套PCA纳米乳液：

如Wallace&Wrenn,2015,Ultrasonics 63:31-38中所述，嵌套经由双重乳液进行。在此使用不同的膜组分以给出期望的嵌套壳性质，并且，严格来说，在某些非限制性实施方式中，PCA的嵌套构成三重乳液(水包油包水包油或O/W/O/W)。

典型的批次包括用500μL的PBS(或在荧光泄露实验中，为1mM钙黄绿素)稀释500μL的第一乳液(即，PCA纳米乳液，O/W)并将该第一乳液添加到1mL的氯仿中的脂质混合物中，并使用PolytronPT3100(Kinematica Inc.,Lucerne,Switzerland)以12,000RPM均化1分钟以得到双重乳液(O/W/O)。然后将双乳状液添加到8mL的水中的2％PVA(27,000MW)以得到三重乳液(O/W/O/W)，将其(再次用Polytron PT3100以12,000RPM)均化2分钟。然后将现存的三重乳液添加到另外8mL的水中的2％PVA(27,000MW)中，并置于磁力搅拌器上24h。

本文使用两种嵌套壳制剂：制剂I包括20mol％的1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、20mol％的1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸-1'-rac-甘油(SOPG)、40mol％的胆固醇和20mol％的三油精；制剂II包括20mol％的1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸-1'-rac-甘油(DSPG)、20mol％的1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(SOPC))、40mol％的胆固醇和20mol％的三油精。

使用Beckman Coulter计数器(Multisizer 4E)测量两种嵌套壳化学品的尺寸分布；制剂I的总计数为3.00×10⁹个颗粒/mL，平均尺寸为1.66μm，中值尺寸为1.42μm，壳II的总计数为3.13×10⁹个颗粒/mL，平均尺寸为1.67μm，以及中值尺寸为1.44μm。

3.2.3.荧光泄露实验：

3.2.3.1.荧光光谱仪的自制(3-D打印)的外壳：

为了实时测量超声诱导或电场诱导的荧光泄露或二者，使用CREO Panametrics3.0 software(PTC,Boston,MA)设计了定制的外壳并在Dimension Elite 3D Printer(Stratasys,Eden Prairie,MN)上3-D打印。自制的外壳在Drexel University’s MachineShop中用1.78毫米厚的ABS灯丝(ABS P430^TMModel(Ivory))打印并且具有坚固的内部结构，随后暴露于丙酮蒸气中1小时以使系统防水。图11描绘了外壳，该外壳代替现有的比色皿架拧入稳态荧光计(A-710,Photon Technology International Inc.,Birmingham,NJ)的底座。位于钉子(pegs)上方的水池中装有去离子水，并且提供7.5cm的焦距。水池的内部涂布有3层环氧化物(以确保去离子水不会从水池中溢出)。聚氯乙烯(PVC)的薄片将去离子水与样品分离；该片是透声的并且不影响钙黄绿素的荧光强度。

3.2.3.2.高频超声：

超声使用5MHz 7.5cm聚焦的超声换能器(Olympus NDT,Waltham,MA,USA)递送，超声换能器由与+55dB ENI 3100LA功率放大器(ENI,Rochester,NY)串联的8116A函数发生器(Hewlett-Packard,Palo Alto,CA)驱动。在该研究中，该换能器用于递送期望的峰值负压(PNP)，该峰值负压使用经过校准的HGL-0200水听器(ONDACorp.,Sunnyvale,CA)进行测量。激励脉冲包括10个正弦波形，脉冲重复时间为40μs，对应于5％的占空比。超声换能器浸入图11所示的3-D打印的超声外壳，使得其焦点体积在荧光分光光度计追踪的光路内。在石英比色皿的底部放置0.8cm的硅橡胶片以避免驻波。

3.2.3.3.电场参数：

使用Agilent 33220A函数发生器(Agilent,SantaClara,CA)以正弦波形在1Hz交流电下施加所期望的电压的电势，以在图11中比色皿(1厘米宽)中99.5％的钛电极(AlfaAesar,Ward Hill,MA)上产生所期望强度的电场。要小心以使电化学反应最小化，并且选择钛作为电极材料，因为它是惰性的，并且对低电势下的常见电化学反应具有很高的抵抗力。循环伏安法表明，在目标电压窗内电化学反应最小，并且吸收光谱证实电化学反应不明显。此外，在不存在本发明构建体和嵌套壳材料的情况下，用钙黄绿素和氯化钴进行的对照研究排除了电化学反应，原因是观察到荧光强度发生了变化。在面对发射单色仪的电极上打孔以允许光从样品传输到检测器。

3.2.3.4.钙黄绿素测定：

钙黄绿素泄露通过标准协议(Wallace&Wrenn,2015,Ultrasonics 63:31-38)进行测量。将本发明的嵌套构建体的悬浮液在氯化钴溶液中稀释20倍。必须进行稀释以将光密度降低到小于0.2的值，以便防止荧光强度的衰减，否则荧光强度的衰减会经由众所周知的内部滤镜效应由光散射产生。用氯化钴进行稀释，其浓度以接近1:1的摩尔比与钙黄绿素匹配，这是出于两个非限制性的原因：第一，由于跨脂质体双层的离子强度变化，其使得渗透压最小化，这可能导致泄露并使分析复杂化；和第二，它淬灭了外部钙黄绿素。将样品移液到石英比色皿中，将石英比色皿放入本文其他地方所述的3D打印的外壳中。将样品暴露于变化的(高频超声)声压(insonation pressure)、电势以及二者的组合下，并在暴露于变化的声场和电场模式期间记录荧光强度。未暴露于高频超声或电场的样品作为对照。

使用A-710稳态荧光光谱仪(Photon TechnologyInternational Inc.,Birmingham,NJ)——缝隙宽度为2nm、积分时间为1.0s和步长为1nm，在40分钟的间隔内测量钙黄绿素泄露。使用475nm激发波长获得发射光谱(490–540nm)。钙黄绿素泄露(最大百分比)通过方程(1)计算，其中F_t是时间t时样品的荧光强度，F₀是初始荧光强度(其限定了0％释放)，F₁₀₀是在高强度和低频(20kHz)下探针超声处理后的实验结束时的荧光强度(其限定了100％释放)。

泄露％＝(F_t-F₀)x100/(F₁₀₀-F₀) (1)

不希望受到任何理论的限制，本文报道的泄露值并未捕获在测量F₀之前可能发生的任何被动(意味着没有施加电场)泄露，这意味着该测定可能潜在地低报了实际发生的泄露量。然而，基于对于对照样品的观察，被动泄露似乎并不明显。具体而言，样品制备后立即(即在几十秒内)测量的F₀值对时间不敏感；对于实验期间，对照样品的荧光强度显示很少至没有变化，这表明被动泄露(如果确实发生了)在测量F₀之前已经完成。但是，如果是这种情况，那么在暴露于高强度、低频率(20kHz)超声之后，人们将期望没有额外的泄露，但是对于实验期间展现出很少至没有荧光强度变化的相同对照样品，然后显示出超声处理时荧光强度大约四倍的变化。综上所述，不希望受到任何理论的限制，这些观察结果表明在没有应用场的情况下缺乏明显的泄露。

数据呈现为项目(run)的平均值，误差条指示标准偏差。用Lambda 40 UV–VISspectrometer(Perkin Elmer,Waltham,MA)测量吸光度以确认电化学反应不明显。

3.2.4.电泳迁移率：

电泳迁移率在BrookhavenNanoBrook Omni(Brookhaven Instruments Corp.,Holtsville,NY)上测量，该仪器采用相位分析光散射(PALS)。该系统使用35mW的红色二极管激光器，标称波长为640nm，有效散射角为15°。用DI水稀释样品，并在2Hz交替的4V固定电势下测量电泳迁移率。ζ电位以Smoluchowski极限经由方程(2)计算。

U＝[(ε_r ε₀)/η]ζf(κα) (2)

其中U是电泳迁移率，ε_r是介质的相对介电常数，ε₀是真空的介电常数，κ是反德拜长度，η是介质的粘度，和α是运动的实体的半径。

应该注意的是，U是末速度除以电场(U＝v/E)，并且可以使用方程(3)计算v：

v＝QE/(6πηR) (3)

其中Q是实体的总电荷，R是带电实体的半径，η是介质的粘度。

3.2.5.组织体模实验：

组织体模制备：

如Surry,et al.,2004,Phys.Med.Biol.49(24):5529-5546所述，由10wt％PVA(85,000-124,000MW)组成的聚(乙烯醇)(PVA)冷冻凝胶体模被用作组织模拟体模。

简而言之，将10wt％PVA的1.5L溶液加热至80℃保持12h以使得聚合物溶解。在加热过程期间，烧杯用铝箔覆盖以最小化由于蒸发引起的水损失。一旦溶液完全溶解，将其倒入如图12A所示的具有圆柱状样品室的不锈钢体模模具中，并在室温下放置24小时以使气泡逸出。然后使溶液经历三个冻融循环，使得PVA排列成紧密的晶体结构。声速和组织密度随冻融循环而增加；在三个循环之后，声学性质与人体组织紧密匹配，其中体模中的声速测量为1535m/s，并且衰减系数在0.075至0.28dB(cm MHz)^-1的范围内。将PVA冷冻凝胶在去离子水中保持在4℃下，以避免凝胶脱水。使用剃刀刀片切出长度为5cm且深度为8cm的切片，以允许将铝电极放置隔开6cm，如图12A所示。这种组织模拟体模允许进行亮度研究，其中针对超声和电场参数的不同组合，将样品区域内的强度与PVA组织模拟区域内的强度进行比较。

对比度-组织比(CTR)：

亮度(B)模式图像是由GE Vivid i(GE Medical SystemsInformationTechnologies GmbH,Freiburg,Germany)便携式临床超声机拍摄以评估不同制剂经受固定超声强度和多种电场的对比度-组织比(CTR)。当电极之间的电场从0V/cm至3V/cm变化时使用2MHz宽带相控阵换能器(GE 3S-RS)，在谐波成像模式下将GE Vivid i设置为0.28MI，频率分别为2.0和4.0MHz(分别发射和接收)。PVA冷冻凝胶内的样品室体积为40mL；在典型的实验中，将2mL的给定制剂添加到38mL的DI水中。将相控阵换能器水平放置在带有耦合凝胶的PVA冷冻凝胶的正面上，并将体模放置在磁力搅拌板上，以允许在实验期间混合样品内容物。

图12B显示了在研究期间获得的图像的类型，并表示两个区域，样品对比度区域和组织模拟区域。这些区域在整个实验中保持不变。对比度-组织比使用MATLAB程序由获得的图像计算——该MATLAB程序将记录的图像数字化，这将其转换为范围0(黑色)到255(白色)之间的灰度强度。对像素的亮度进行平均，并经由方程(4)由各个亮度值计算CTR值，其中I_C和I_T分别是由MATLAB程序计算得出的对比度和组织区域的灰度强度(Bartolomeo,et al.,2012,Bubble Sci.Eng.Technol.4(2):78-84)。

对比度-组织比＝20log₁₀(I_C/I_T) (4)

3.2.6.动物研究：

小动物：

在全身麻醉下对Sprague-Dawley大鼠进行了研究。用于体内高分辨率显微成像的具有线性阵列技术和彩色多普勒模式的高频、高分辨率数字成像平台用于(关胸)超声心动图(

2100 Imaging System,FUJIFILMVisualSonics Inc.,Toronto,Canada)。为了提供适当的分辨率和必要的穿透深度，利用高频换能器探针(VisualSonics MS400，其频率范围为18-38MHz；在21MHz和5％功率下运行)评估心血管功能和心肌增强。除了用于成像的VisualSonics换能器之外，还使用2MHz宽带相控阵换能器(GE 3S-RS；即，与GE Vivid i在组织模拟体模研究中使用的完全相同的换能器)进行激发(0.07-0.28MI)。

大动物：

在全身麻醉下对猪进行研究。使用用于组织模拟体模研究的相同的GE Vivid i和探针进行成像(关胸)和激发。

本文中讨论了选定的实验结果。

体外研究：

荧光泄露研究：

图13显示了在三种条件下从本发明的嵌套构建体的制剂的钙黄绿素泄露：单独施加的0.25V/cm的电场；单独施加的0.5MPa PNP的超声；和同时施加的0.25V/cm的电场和0.5MPa PNP的超声。每个模态单独产生可测量的泄露，并且两种模态当组合使用时展现出协同作用。如果人们将组合模态的结果与通过简单地将各个模态的结果相加所期望的结果进行比较，这是显而易见的，其后者在图13中描绘为没有符号的细灰色线。

组织模拟体模中的CTR(亮度)研究：

图14显示了对于两种嵌套壳制剂，超声成像亮度如何响应电场。第一个嵌套壳——其ζ电位为约-60mV，在施加1.0V/cm的电场时显示出一些增亮的视觉证据，但在增加电场强度至3.0V/cm之后没有显示出可清楚辨别的(对眼睛而言)另外的增亮。第二个嵌套壳——其ζ电位为约-70mV，在施加1.0V/cm的电场之后和在将电场强度增大至3.0V/cm之后都显示出充足的增亮的视觉证据。使用CTR方法对定性的视觉亮度结果进行定量并在图15中给出，该图15还显示了在整个实验中组织模拟体模中两个金属板之间的电压差如何变化。

体内研究：

大鼠研究：

图16显示了舒张期期间大鼠心脏(关胸)的B模式图像。图板A显示了在施用任何试剂之前获得的基线图像。图板B是在施用具有嵌套壳化学品II的嵌套制剂后获得的图像，其在组织体模研究中给出了优异的亮度。图板C是在施用具有嵌套壳化学品I的嵌套制剂后获得的图像，并且图板D是在施用涂布有饱和磷脂的六氟化硫的未嵌套微泡后获得的图像。然而，传统的未嵌套的微泡使心室增亮但不能使心肌增亮(将图板D与图板A进行比较)，本发明的嵌套结构相反(例如，将图板B与图板A进行比较)，并且观察到的对比度增强水平取决于所用的嵌套壳制剂(将图板C与图板B进行比较)。

猪研究：

图17显示了在基线处以及在施用具有嵌套壳化学品II的嵌套制剂之后，用GEVivid i(用于组织模拟体模研究的完全相同的单元)获得的猪心脏(关胸，长轴视图)的B模式图像，其在组织模拟体模和大鼠心脏成像研究中均取得了优异的结果。如在体外和大鼠研究中的情况一样，本发明的嵌套构建体显示出猪心肌内的选择性活化。

本结果说明了使用本发明的构建体的应用：心肌灌注成像，其涉及内源性电场。代替控制电场，本申请利用了心脏产生的电场，该电场在时间和空间上变化。大鼠和猪的研究结果证明了这种方法的可行性和临床相关性，这显示了在心肌中选择性增强的超声对比度，在心肌处的电场强于其他区域——显示出较小的增强。猪研究显示出最明显的选择性对比度增强，因为大鼠研究显示了左心室内的一些活化作用。不希望受到任何理论的限制，该结果可以部分地由动物之间的衰减差异解释，该衰减差异与穿透深度(皮肤至器官)的差异有关。

体外研究证实了动物研究的结果，并证明电压敏感性是用化学品可调节的。特别地，与嵌套壳制剂I相比，嵌套壳制剂II展现出更大的活化倾向和对电场强度变化的更大敏感性。尽管两种制剂具有不同的ζ电位，但嵌套壳化学品的差异不仅在于带电种类分数的差异。因而，除了带电种类的数量之外，带电种类的类型、大小、化合价和位置也可以影响对电场的响应。不希望受到任何理论的限制，可以通过已知影响回声性的液滴或气泡数量或气体体积的变化来操纵来自每种制剂的响应。

体内研究的证据显示在固定的MI上选择性活化电压敏感超声对比剂的可行性。体外泄露研究和组织模拟体模中的亮度研究支持了体内发现，并证明该系统是可调节的。影响嵌套的构建体结构对电场的敏感性的参数的实例为嵌套曲率和电荷，其包括电荷类型、带电实体的大小、电荷量和电荷位置。不带电种类的化学组成也起作用。对电压的敏感性使得能够以固定的超声强度活化嵌套的液体全氟化碳液滴的子集，即在电场存在下的那些液滴。嵌套壳对电场的反应促进了主要MI处的活化，否则其不足以产生可检测的声学活性。在某些非限制性实施方式中，由于电场的存在，发生了双层的至少部分重塑。无论采用何种机制，利用电场的选择性活化都使这种电压敏感相变剂非常适合于心肌灌注成像。

本文引用的每个和每一个专利、专利申请和出版物的公开内容在此通过引用以其整体并入本文。尽管已经参考具体实施方式公开了本发明，但是显然，本领域的其他技术人员可以设计出本发明的其他实施方式和变形而不脱离本发明的真实精神和范围。所附权利要求旨在被解释为包括所有这种实施方式和等同变形。

Claims (20)

1.脂质体，其包括：

嵌套壳，其包括：

(a)饱和磷脂，其中所述饱和磷脂选自DSPG和DSPC，

(b)不饱和磷脂，其中所述不饱和磷脂选自SOPG和SOPC，

(c)甘油三酸酯，和

(d)胆固醇，

其中所述磷脂(a)和(b)的一种是中性的，并且另一种是带电荷的；和

内部隔室，其包括：内部核心液体和至少一种液滴，所述至少一种液滴不溶于所述内部核心液体，其中所述至少一种液滴包括全氟化碳，

其中所述嵌套壳封闭所述内部隔室。

2.根据权利要求1所述的脂质体，其中所述脂质体在存在电场的情况下比在不存在电场的情况下更具声学活性。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的脂质体，其中所述甘油三酸酯是三油精。

4.根据权利要求1-2中任一项所述的脂质体，其中所述饱和磷脂是DSPC，所述不饱和磷脂是SOPG，和所述甘油三酸酯是三油精。

5.根据权利要求1-2中任一项所述的脂质体，其中所述饱和磷脂是DSPG，所述不饱和磷脂是SOPC，和所述甘油三酸酯是三油精。

6.根据权利要求1-2中任一项所述的脂质体，其中所述嵌套壳包括：约10wt％至约32.5wt％的DSPC、约10wt％至约32.5wt％的SOPG、约15wt％至约50wt％的胆固醇和约10wt％至约40wt％的三油精。

7.根据权利要求1-2中任一项所述的脂质体，其中所述嵌套壳包括：约10wt％至约32.5wt％的DSPG、约10wt％至约32.5wt％的SOPC、约15wt％至约50wt％的胆固醇和约10wt％至约40wt％的三油精。

8.根据权利要求1-2中任一项所述的脂质体，其中所述嵌套壳包括：约22.5wt％的DSPG、约22.5wt％的SOPC、约25wt％的胆固醇和约30wt％的三油精。

9.根据权利要求1-2中任一项所述的脂质体，其中在所述至少一种液滴中的液体选自：全氟戊烷、全氟丁烷和全氟己烷。

10.根据权利要求9所述的脂质体，其中在所述至少一种液滴中的液体是全氟戊烷。

11.根据权利要求1-2中任一项所述的脂质体，其中所述至少一种液滴涂覆有表面活性剂。

12.根据权利要求11所述的脂质体，其中所述表面活性剂是聚山梨酯20。

13.根据权利要求1-2中任一项所述的脂质体，其中所述至少一种液滴包括约5％vol/vol的全氟戊烷和约0.1％vol./vol.的聚山梨酯20。

14.根据权利要求1-2中任一项所述的脂质体，进一步包括活性成分。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的脂质体在制备用于选择性成像受试者身体的部分的试剂盒中的用途，其包括：

(a)施用根据权利要求1-14中任一项所述的脂质体至所述受试者；和

(b)施加超声辐射至所述受试者身体的所述部分。

16.根据权利要求15所述的用途，进一步包括在施加超声辐射至所述受试者身体的所述部分之前，施加电压梯度至所述受试者身体的所述部分。

17.根据权利要求16所述的用途，其中所述电压梯度等于或大于约0.5V/cm。

18.根据权利要求17所述的用途，其中所述电压梯度范围从约0.5V/cm至约10V/cm。

19.根据权利要求15所述的用途，其中所述受试者身体的所述部分选自心脏、肺、肝、胆囊、脾、胰腺、肾脏、膀胱、子宫、卵巢、眼睛、甲状腺、甲状旁腺、阴囊、睾丸和腹腔。

20.根据权利要求19所述的用途，其中所述受试者身体的所述部分是所述心脏。

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