CN111024472A - 一种用于石蜡组织切片的自发荧光背景的封闭方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物实验检测领域，提供了一种用于石蜡组织切片的自发荧光背景的封闭方法。该方法包括在室温条件下，将石蜡组织切片浸没在硼氢化钠溶液中，避光孵育；孵育后的石蜡组织切片用流水清洗后再用蒸馏水清洗石蜡组织切片；在室温条件下，将清洗处理后使石蜡组织切片浸没在苏丹黑溶液中，避光孵育；将孵育后的石蜡组织切片用流水清洗后再用蒸馏水清洗石蜡组织切片，可以对石蜡组织切片组织的自发荧光的荧光背景进行一个很好的削减封闭作用。经本发明中所述的自发荧光‑荧光背景封闭方法处理后的石蜡组织切片，自发荧光能至少削减80%，使得特异的荧光信号在荧光显微镜下凸显出来，从而使得荧光示踪成像成功。
Description
技术领域
本发明涉及生物实验检测领域,尤其涉及一种用于石蜡组织切片的自发荧光-荧光背景的封闭方法。
背景技术
免疫荧光是指用荧光抗体或者抗原，结合抗原抗体反应及荧光显微镜的观测，示踪相应抗原或抗体的一项技术。具体分为两种，用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技术，因为在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。以荧光抗体方法较常用。用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
传统的免疫荧光组织技术是针对冰冻组织切片进行的，冰冻切片存在组织形态不好、不易成片及样品保存不易的缺点；而石蜡组织切片刚好能克服冰冻切片的这几个显著的缺点，但是石蜡组织切片由于制片过程中经过醛类试剂的固定及高温处理等，造成样品自发荧光显著；若需要荧光示踪及成像顺利的话，需要对样品自发荧光的荧光背景进行封闭，荧光的示踪成像才能顺利进行。
发明内容
本发明的目的在于针对石蜡组织切片自发荧光背景显著，导致荧光示踪成像很难成功（即特异荧光信号很难凸显）的问题，提供一种用于石蜡组织切片的自发荧光-荧光背景的封闭方法。
为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：
一种用于石蜡组织切片的自发荧光-荧光背景的封闭方法包括如下步骤：
S1：在室温条件下，将石蜡组织切片浸没在硼氢化钠溶液中，避光孵育；
S2：将所述步骤S1孵育后的石蜡组织切片用流水清洗后再用蒸馏水清洗石蜡组织切片；
S3：在室温条件下，将所述步骤S2处理后的石蜡组织切片浸没在苏丹黑溶液中，避光孵育；
S4：将所述步骤S3孵育后的石蜡组织切片用流水清洗后再用蒸馏水清洗组织切片。
优选的，所述步骤S1中硼氢化钠溶液的浓度为0.01%-1%。
优选的，所述步骤S1避光孵育的时长为30min。
优选的，所述步骤S3避光孵育的时长为5-10min。
优选的，所述步骤S2和步骤S4流水清洗的时长为15min。
优选的，所述步骤S3中苏丹黑溶液其浓度为0.01%-1%。
和现有技术相比，本发明的有益技术效果在于:经本发明中所述的自发荧光-荧光背景的封闭方法处理后的石蜡组织切片，自发荧光能至少削减80%，使得特异的荧光信号在荧光显微镜下凸显出来，从而使得荧光示踪成像成功。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，其中描述了实现本发明采用的实施例。应明白，还可使用其他的实施例，或者对本文所举的实施例进行结构和功能上的修改，而不会脱离本发明的范围和实质。
一种用于石蜡组织切片的自发荧光背景的封闭方法包括如下步骤：
S1：在室温条件（20℃~26℃）下，将石蜡组织切片浸没在硼氢化钠溶液中，避光孵育；
具体的，硼氢化钠溶液浓度为0.01%-1%，避光孵育的时长为30min。
S2：将步骤S1孵育后的石蜡组织切片用流水清洗后再用蒸馏水清洗石蜡组织切片；
具体的，流水清洗的时长为15min，
S3：在室温条件（20℃~26℃）下，将步骤S2处理后的石蜡组织切片浸没在苏丹黑溶液中，避光孵育；
具体的，苏丹黑溶液浓度为0.01%-1%，避光孵育的时长为5-10min；
S4：将步骤S3孵育后的石蜡组织切片用流水清洗后再用蒸馏水清洗组织切片。
具体的，流水清洗的时长为15min。
本发明能够克服石蜡组织切片的自发荧光的荧光背景显著以致造成荧光示踪成像（即使特异荧光信号很难凸显）的问题；硼氢化钠可以破环化学分子键（醛基固定导致的自发荧光），苏丹黑可以遮蔽内源性的有自发荧光的细胞组份（脂褐质等），两者结合可以对石蜡切片组织的自发荧光的荧光背景进行一个很好的削减封闭作用，经本发明中所述的自发荧光背景的封闭方法处理后的石蜡组织切片，自发荧光能至少削减80%，使得特异的荧光信号在荧光显微镜下凸显出来，从而使得荧光示踪成像成功。
下面列举实施案例及对比例将对本发明进行进一步说明。
实施例1：
S1：室温条件下（20℃~26℃），使脑石蜡组织切片浸到盛有0.1%硼氢化钠溶液的染色缸中，避光孵育30min；
S2；用流水清洗15min，再用蒸馏水清洗脑组织切片；
S3：室温条件下（20℃~26℃），使脑石蜡组织切片浸到盛有0.5%苏丹黑溶液的染色缸中，孵育8min；
S4;用流水清洗15min，再用蒸馏水清洗脑组织切片，至此完成自发荧光-荧光背景封闭。
经实验测试，脑石蜡组织切片经上述步骤处理后，脑石蜡组织切片的自发荧光能削减80%。
实施例2：
S1：室温条件下（20℃~26℃），使心肌石蜡组织切片浸到盛有0.15%硼氢化钠溶液的染色缸中，避光孵育30min；
S2；用流水清洗15min，再用蒸馏水清洗心肌组织切片；
S3：室温条件下（20℃~26℃），使心肌石蜡组织切片浸到盛有0.6%苏丹黑溶液的染色缸中，孵育10min；
S4;用流水清洗15min，再用蒸馏水清洗心肌组织切片，至此完成自发荧光-荧光背景封闭。
经实验测试，心肌石蜡组织切片经上述步骤处理后，心肌石蜡组织切片的自发荧光能削减80%。
实施例3：
S1：室温条件下（20℃~26℃），使肾脏石蜡组织切片浸到盛有0.2%硼氢化钠溶液的染色缸中，避光孵育30min；
S2；用流水清洗15min，再用蒸馏水清洗肾脏组织切片；
S3：室温条件下（20℃~26℃），使肾脏石蜡组织切片浸到盛有0.4%苏丹黑溶液的染色缸中，孵育6min；
S4;用流水清洗15min，再用蒸馏水清洗肾脏组织切片，至此完成自发荧光-荧光背景封闭。
经实验测试，心肌石蜡组织切片经上述步骤处理后，心肌石蜡组织切片的自发荧光能削减80%。
实施例4：
S1：室温条件下（20℃~26℃），使空肠石蜡组织切片浸到盛有0.15%硼氢化钠溶液的染色缸中，避光孵育30min；
S2；用流水清洗15min，再用蒸馏水清洗空肠组织切片；
S3：室温条件下（20℃~26℃），使空肠石蜡组织切片浸到盛有0.4%苏丹黑溶液的染色缸中，孵育8min；
S4;用流水清洗15min，再用蒸馏水清洗空肠组织切片，至此完成自发荧光-荧光背景封闭。
经实验测试，空肠石蜡组织切片经上述步骤处理后，空肠石蜡组织切片的自发荧光能削减80%。
以上实例，在实验中去掉自发荧光-荧光背景封闭的步骤，按常规的石蜡切片免疫荧光的步骤方法的，最后石蜡切片荧光信号对比强烈，有进行封闭的切片荧光背景信号弱、特异的荧光信号很突出，而未处理过的的切片荧光背景信号强、特异的荧光信号不突出，硼氢化钠可以破环化学分子键（醛基固定导致的自发荧光），苏丹黑可以遮蔽内源性的有自发荧光的细胞组份（脂褐质等），两者结合可以对石蜡切片组织的自发荧光的荧光背景进行一个很好的削减封闭作用，经本发明中所述的自发荧光背景的封闭方法处理后的石蜡组织切片，自发荧光能至少削减80%，使得特异的荧光信号在荧光显微镜下凸显出来，从而使得荧光示踪成像成功。本发明的自发荧光背景的封闭方法处理步骤简单，效果更好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，本领域技术人员知悉，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对这些特征和实施例进行各种改变或等同替换。另外，在本发明的教导下，可以对这些特征和实施例进行修改以适应具体的情况及材料而不会脱离本发明的精神和范围。因此，本发明不受此处所公开的具体实施例的限制，所有落入本申请的权利要求范围内的实施例都属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种用于石蜡组织切片的自发荧光-荧光背景的封闭方法，其特征在于，所述步骤包括：
S1：在室温条件下，将石蜡组织切片浸没在硼氢化钠溶液中，避光孵育；
S2：将所述步骤S1孵育后的石蜡组织切片用流水清洗后再用蒸馏水进行清洗；
S3：在室温条件下，将所述步骤S2处理后的石蜡组织切片浸没在苏丹黑溶液中，避光孵育；
S4：将所述步骤S3孵育后的石蜡组织切片用流水清洗后再用蒸馏水进行清洗。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于，所述步骤S1中硼氢化钠溶液的浓度为0.01%-1%。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1避光孵育的时长为30min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3避光孵育的时长为5-10min。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2和所述步骤S4中流水清洗的时长为15min。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于，所述步骤S3中苏丹黑溶液浓度为0.01%-1%。
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