CN111000900A - 一种桃金娘叶浸膏的制备方法 - Google Patents

一种桃金娘叶浸膏的制备方法 Download PDF

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Abstract

一种桃金娘叶浸膏的制备方法本发明公开了一种桃金娘叶浸膏的制备方法，涉及桃金娘叶天然活性物质的提取制备和开发利用技术领域。所述的桃金娘叶浸膏的制备方法包括如下步骤：桃金娘叶粉末在提取剂中浸泡过夜，再将浸渍后混合液在水浴超声的同时进行机械搅拌浸提，然后固液分离，将滤液减压浓缩，即制得桃金娘叶浸膏。

Description

一种桃金娘叶浸膏的制备方法
技术领域
本发明涉及植物天然活性成分提取分析领域，尤其涉及桃金娘叶多酚的提取制备和开发利用，具体包含一种桃金娘叶浸膏的制备方法。
背景技术
桃金娘（拉丁学名：Rhodomyrtus tomentosa）又名山稔子、岗菍、豆稔等，是双子叶植物纲桃金娘目桃金娘科桃金娘属植物。银慧慧等利用DPPH-UPLC对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量进行了测定。黄世杰等公开了一种桃金娘提取物的制备方法，是从桃金娘果实中用乙醇溶液浸提获得提取产物。赵谋明等利用超临界提取方法在30-50℃，采用乙醇作为夹带剂提取桃金娘精油，采用的提取原料也是桃金娘的果实。B·法布尔提出的桃金娘提取物作为脱色剂的用途中采用极性有机溶剂提取桃金娘或香桃木的果实、叶子，其提取时主要关注料液比、温度和提取时间，对于提取剂充分浸泡原料、多次重复提取，超声和机械搅拌辅助提取等方法未曾提到。孟菲等以超临界CO2萃取桃金娘叶子，提出了一种桃金娘叶总黄酮的测定方法。已有的对桃金娘的研究主要集中在对桃金娘果实或根茎的提取，对桃金娘叶的提取方法中一般都是对提取过程中温度、时间、料液比的工艺优化，得到的各种提取物或挥发性精油也是从其多次分级分离纯化中获取各种单一化合物进行生理生化性质研究居多。而对于桃金娘叶的多次重复提取、超声波和机械搅拌辅助提取及其提取产物浸膏剂型的制备报道很少。
由于桃金娘叶子中含有丰富的萜类、黄酮类、单宁类、多酚类等多种生物活性成分，具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌杀菌等功效，因此对桃金娘叶浸膏的制备研究及其多酚含量测定具有广阔的应用前景和积极的经济效益。
目前对桃金娘果实及其根茎的提取常采用水蒸气蒸馏法和有机溶剂萃取法，前者的缺点是高温蒸汽使一部分热敏感物质分解，且高温水热耗能大、经济效益低下；后者常采用乙酸乙酯、正己烷或丙酮等有机溶剂作为提取剂而对最终的提取产物剂型没有充分关注，因此得到的提取产物通常含有大量的有机溶剂残留，这样一方面影响了提取产物的生物活性效果，不利于形成稳定的工业产品；一方面这些有机溶剂挥发会对环境造成二次污染。本发明采用常温浸泡、低温水浴、同时超声和机械搅拌的方法，以一定浓度的乙醇水溶液为提取剂提取桃金娘叶，通过多次浸提以提高提取效率，提取产物通过减压浓缩形成了稳定的桃金娘叶浸膏。提取全过程对环境友好，最大程度地保留了桃金娘叶所含有的各种天然成分，得到较高的提取产率。
对桃金娘叶中多酚含量的测定提供了一种对桃金娘叶浸膏中天然成分分析的途径或手段，有利于形成植源性天然替代抗生素的桃金娘叶多酚产品，有望作为饲料添加剂为行业创造丰富的经济价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种桃金娘叶浸膏的制备方法，该方法工艺难度低，产业化可行性高，有助于开发桃金娘叶多酚抗菌杀菌类产品。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种桃金娘浸膏的制备方法，包含以下步骤：
桃金娘叶粉末在提取剂中浸泡24小时，再将浸渍后混合液在水浴超声的同时进行机械搅拌浸提，通过多次重复浸提，固液分离后合并提取液，将提取液充分浓缩，即制的桃金娘叶浸膏。采用比色法测定得到桃金娘叶浸膏中多酚的含量。
进一步的，桃金娘叶粉末在提取剂中浸泡24小时，优选为在室温条件下。
进一步的，所述提取剂为乙醇，优选为75%-100%的乙醇。
进一步的，在浸提的同时进行水浴超声，优选地，水浴温度为40-60℃，超声波频率为40KHz。
进一步的，在浸提的同时进行电动机械搅拌，优选地，搅拌速度为：600rpmin~1800rpmin。
进一步的，所述的桃金娘叶浸膏的制备方法，包括如下步骤：
（1）将桃金娘叶粉末在提取剂中浸泡24小时，同时超声水浴和机械搅拌浸提一次，过滤得到一次滤渣和一次滤液；
（2）将一次滤渣加入提取剂中，在同样的超声水浴和机械搅拌条件下进行二次浸提，过滤得到二次滤渣和二次滤液；
（3）将二次滤渣加入提取剂中，同样在超声水浴和机械搅拌条件下进行三次浸提，过滤得到三次滤渣和三次滤液；
（4）合并三次桃金娘叶浸提滤液，减压旋转蒸发，得到桃金娘叶浸膏。
进一步的，桃金娘叶粉末粉碎为0.18mm粒径，再进行浸提。
本发明提供一种桃金娘叶浸膏，按照上述制备方法制备而成。
进一步的，桃金娘叶浸膏中多酚类含量为8.69%-14.63%。
本发明所采用的桃金娘叶浸膏的制备方法操作简便，易于实现工业化大生产，是开发利用桃金娘叶天然产物精细产品的前处理产品。
本发明在传统有机溶剂浸提植物原料的基础上，同时进行了低温水浴超声和机械搅拌，并采用多次反复浸提的方法；这样一方面有效避免了传统高温浸提造成的部分植物天然易挥发或易分解化合物的损失或变性，另一方面提高了桃金娘叶细胞内容物的浸出效率，获得的桃金娘叶浸膏含有浓郁的芬芳气息。
具体实施方式
以下通过具体实施例来进一步说明本发明，显然所描述的实施例是本实验的一部分实施例。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
本发明涉及浸膏中多酚含量的测定，方法如下：
（1）溶剂的配置
酒石酸亚铁溶液：分别准确称取2.5g酒石酸钾钠（C14H4O6KNa·4H2O）和0.5g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O），用蒸馏水溶解，定容到500ml，即得。4℃保存不超过10天；
1/15mol/L pH7.5磷酸盐缓冲溶液：准确称取无水磷酸氢二钾（K2HPO4）9.8702g和无水磷酸二氢钠（NaH2PO4）1.1998g，蒸馏水溶解，定容至1000ml，常温保存。
（2）标准曲线的绘制
准确称取20mg没食子酸对照品，转移到50 mL棕色容量瓶中，加蒸馏水溶解后，定容，摇匀，即得0. 4000 mg /mL 没食子酸对照溶液，置于冰箱中4 ℃避光保存。分别移取 0. 5、1.0、1.5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、 4. 0 mL（0. 4000 mg /mL）没食子酸对照溶液，置于25mL 容量瓶中，依次加蒸馏水至5. 0 mL，再各加 5. 0 mL酒石酸亚铁溶液，用pH 7. 5的磷酸盐缓冲溶液定容，混匀。没食子酸对照溶液质量浓度分别为0. 008、0. 016、0. 024、0.032、0. 040、0. 048、0. 056、0. 064mg /mL，静置15 min。在540 nm 处测定其吸光度。
没食子酸的标准曲线回归方程:A=16.0165C-0.0626 R2=0.9991
结果表明，没食子酸浓度在0. 008～0. 064mg /mL范围内与吸光度可以呈现良好的线性关系。
（3）样品的测定
精密称取桃金娘叶浸膏于烧杯中，加入甲醇溶液，在超声条件下溶解后，转移到棕色容量瓶中，蒸馏水定容。移取样品溶液1ml，依次加蒸馏水至 5. 0 mL，再加入5. 0 mL 酒石酸亚铁溶液，加pH 7. 5 磷酸盐缓冲溶液定容至25 mL，摇匀，静置15min。以试剂空白为参比，在 540 nm 处测其吸光度值。据回归方程计算多酚含量，且平行试验3次。浸膏中多酚含量计算公式如下：
多酚含量（%）=（C*V*N/M）*100
注：上式中C为桃金娘叶浸膏样品溶液的质量浓度（mg/ml），V指样品溶液的体积（ml），N指稀释倍数，M为桃金娘浸膏样品的质量（mg）。
实施例1
（1）将桃金娘叶粉碎成粒径为0.18mm的粉末；
（2）将100g桃金娘叶粉末加入到1000ml100%乙醇中，室温浸泡24小时；
（3）在40℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为900rpmin，浸提1小时，过滤得到一次滤渣和一次滤液；
（4）将一次滤渣加入到1000ml100%乙醇中，在40℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为900rpmin，浸提1小时。过滤得到二次滤渣和二次滤液；
（5）将二次滤渣加入到1000ml100%乙醇中，在40℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为900rpmin，浸提1小时。过滤得到三次滤渣和三次滤液；
（6）合并三次桃金娘叶浸提滤液，减压旋转蒸发，得到桃金娘叶浸膏。测得浸膏中多酚含量为9.23%。
实施例2
（1）将桃金娘叶粉碎成粒径为0.18mm的粉末；
（2）将100g桃金娘叶粉末加入到1000ml90%乙醇中，室温浸泡24小时；
（3）在45℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1200rpmin，浸提1小时，过滤得到一次滤渣和一次滤液；
（4）将一次滤渣加入到1000ml90%乙醇中，在45℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1200rpmin，浸提1小时，过滤得到二次滤渣和二次滤液；
（5）将二次滤渣加入到1000ml90%乙醇中，在45℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1200rpmin，浸提1小时，过滤得到三次滤渣和三次滤液；
（6）合并三次桃金娘叶浸提滤液，减压旋转蒸发，得到桃金娘叶浸膏。测得浸膏中多酚含量为10.88%。
实施例3
（1）将桃金娘叶粉碎成粒径为0.18mm的粉末；
（2）将100g桃金娘叶粉末加入到1000ml80%乙醇中，室温浸泡24小时；
（3）在60℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1800rpmin，浸提1小时，过滤得到一次滤渣和一次滤液；
（4）将一次滤渣加入到1000ml80%乙醇中，在60℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1800rpmin，浸提1小时，过滤得到二次滤渣和二次滤液；
（5）将二次滤渣加入到1000ml80%乙醇中，在60℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1800rpmin，浸提1小时，过滤得到三次滤渣和三次滤液；
（6）合并三次桃金娘叶浸提滤液，减压旋转蒸发，得到桃金娘叶浸膏，测得浸膏中多酚含量为12.56%。
实施例4
（1）将桃金娘叶粉碎成粒径为0.18mm的粉末；
（2）将100g桃金娘叶粉末加入到1000ml95%乙醇中，室温浸泡24小时；
（3）在40℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为600rpmin，浸提1小时；过滤得到一次滤渣和一次滤液；
（4）将一次滤渣加入到1000ml95%乙醇中，在40℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为600rpmin，浸提1小时，过滤得到二次滤渣和二次滤液；
（5）将二次滤渣加入到1000ml95%乙醇中，在40℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为600rpmin，浸提1小时，过滤得到三次滤渣和三次滤液；
（6）合并三次桃金娘叶浸提滤液，减压旋转蒸发，得到桃金娘叶浸膏。测得浸膏中多酚含量为8.69%。
实施例5
（1）将桃金娘叶粉碎成粒径为0.18mm的粉末，
（2）将100g桃金娘叶粉末加入到1000ml85%乙醇中，室温浸泡24小时，
（3）在55℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1600rpmin，浸提1小时，过滤得到一次滤渣和一次滤液；
（4）将一次滤渣加入到1000ml85%乙醇中，在55℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1600rpmin，浸提1小时，过滤得到二次滤渣和二次滤液；
（5）将二次滤渣加入到1000ml85%乙醇中，在55℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1600rpmin，浸提1小时，过滤得到三次滤渣和三次滤液；
（6）合并三次桃金娘叶浸提滤液，减压旋转蒸发，得到桃金娘叶浸膏，测得浸膏中多酚含量为11.48%。
实施例6
（1）将桃金娘叶粉碎成粒径为0.18mm的粉末；
（2）将100g桃金娘叶粉末加入到1000ml75%乙醇中，室温浸泡24小时；
（3）在50℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1500rpmin，浸提1小时，过滤得到一次滤渣和一次滤液；
（4）将一次滤渣加入到1000ml75%乙醇中，在50℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1500rpmin，浸提1小时，过滤得到二次滤渣和二次滤液；
（5）将二次滤渣加入到1000ml75%乙醇中，在50℃水浴超声条件下，电机搅拌速度为1500rpmin，浸提1小时，过滤得到三次滤渣和三次滤液；
（6）合并三次桃金娘叶浸提滤液，减压旋转蒸发，得到桃金娘叶浸膏。测得浸膏中多酚含量为14.63%。

Claims (8)

1.一种桃金娘叶浸膏的制备方法，其特征在于包括如下步骤：将桃金娘叶粉末在提取剂中浸泡24小时，再将浸渍后混合液在水浴超声的同时进行机械搅拌浸提，然后固液分离，将滤液减压浓缩，制得桃金娘叶浸膏。
2.根据权利要求1所述的桃金娘叶浸膏的制备方法，其特征在于，所述提取剂为乙醇，优选为75%-100%的乙醇。
3.根据权利要求1所述的桃金娘叶浸膏的制备方法，其特征在于，在浸提的同时进行水浴超声，优选地，水浴温度为40-60℃，超声波频率为40KHz。
4.根据权利要求1所述的桃金娘叶浸膏的制备方法，其特征在于，在浸提的同时进行电动机械搅拌，优选地，搅拌速度为：600rpmin~1800rpmin。
5.根据权利要求1所述的桃金娘叶浸膏的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将桃金娘叶粉末在提取剂中浸泡24小时，同时超声水浴和机械搅拌浸提一次，过滤得到一次滤渣和一次滤液；
（2）将一次滤渣加入提取剂中，在同样的超声水浴和机械搅拌条件下进行二次浸提，过滤得到二次滤渣和二次滤液；
（3）将二次滤渣加入提取剂中，同样在超声水浴和机械搅拌条件下进行三次浸提，过滤得到三次滤渣和三次滤液；
（4）合并三次桃金娘叶浸提滤液，减压旋转蒸发，得到桃金娘叶浸膏。
6.根据权力要求1所述比色法测定桃金娘叶浸膏中多酚含量，其特征在于，包括如下步骤：
（1）没食子酸标准溶液的制备：精密称取没食子酸对照品加蒸馏水溶解后，定容于棕色容量瓶中，配置成0. 4000 mg /mL没食子酸对照品储存溶液，临用时，适当稀释上述储存液；优选地，稀释后的不同标准溶液浓度为 0. 008、0. 016、0. 024、0. 032、0. 040、0.048、0. 056、0. 064mg /mL；
（2）浸膏中多酚含量的测定：精密称取桃金娘叶浸膏于烧杯中，加入甲醇溶液，在超声条件下溶解后，转移到棕色容量瓶中，蒸馏水定容；
（3）移取样品溶液1ml，依次加蒸馏水至5.0 mL，再加入5.0 mL 酒石酸亚铁溶液，以pH7. 5的磷酸盐缓冲溶液定容至25mL，摇匀，静置15mi后在最大吸收波长处测其吸光度值；
（4）优选为在540nm处测定吸光度值。
7.一种桃金娘叶浸膏，其特征在于，依据权利要求1-5中任一项所述的桃金娘叶浸膏的制备方法制备而成。
8.根据权力要求7所述的桃金娘叶浸膏，其特征在于，在浸膏中多酚类含量为8.69%-14.63%。
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