CN111000117A - 一种亚硝酸盐的清除方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种亚硝酸盐的清除方法，采用茶树“螃蟹脚”多酚提取液与食品材料比例混合后于40～80℃温度下水浴加热10～50min。通过上述方法，能够较好的清除亚硝酸盐。从而减少人们的食物中亚硝酸盐残剩量可行性方法，以及推进茶树“螃蟹脚”的深度利用。
Description
技术领域
本发明涉及食品领域，特别涉及一种亚硝酸盐的清除方法。
背景技术
亚硝酸盐(NIT)是氮循环的中间产物，其性质不稳定，通常称为“硝盐”。主要是亚硝酸钠(NaNO2)和亚硝酸钾(KNO2)，特别以NaNO2为主。NaNO2呈白色至淡黄色的颗粒或粉末，味微咸，易溶于水，其外观和味道都与生活常用食盐很相似，其广泛用于食品加工业、工业和建筑业等行业中。而NIT的毒害分为急性毒害和慢性毒害。NIT不仅能够造成急性中毒，NIT还能够引起慢性的危害。其主要表现为致畸和致癌两方面，据研究表明，NIT能够穿透胎儿的胎盘从而进入胎儿的体内，使胎儿容易变得畸形，特别6个月以下的胎儿对NIT很容易吸收，因此易造成胎儿畸形，增加家庭和社会负担。除此之外，研究还表明NaNO2还会损坏睾丸的支持细胞DNA，且当染毒的剂量为150μg/ml的时候，就能观察到较明显的损伤效应。且亚硝酸盐也是一种潜在的致癌物，可诱发人体患食道癌、肠癌和胃癌的风险，同时，摄入亚硝酸盐过多会导致中毒。
研究发现，“螃蟹脚”多酚具有一定的抗氧化、抑菌、免疫调节等活性。而多酚是一类广泛存在于植物体内的重要次级代谢产物，根据研究发现,多酚具有抗癌、抗菌、抗衰老、清除亚硝酸盐等作用,因其含酚羟基而极易发生氧化、聚合、缩合等反应,所以具有较强的清除自由基的能力和抗氧化的能力。目前，国内学者对清除食品中亚硝酸盐的研究主要集中在香辛料和果蔬上等，但是有关茶树“螃蟹脚”清除亚硝酸盐研究尚未有报道和研究。
发明内容
为解决上述现有技术存在的问题，本发明公开了一种亚硝酸盐的清除方法。
本发明采用茶树“螃蟹脚”多酚清除腌制火腿中残留的亚硝酸盐步骤如下：
(1)将准备的腌制火腿清洗干净后切块放入加工器皿内，加入一定量的“螃蟹脚”多酚提取液，多酚提取液添加量为0.05％，搅拌均匀；
(2)向加工器皿中加入纯净水刚好淹没火腿，并充分搅拌均匀；
(3)将盛有火腿的器皿放于40～80℃温度下水浴加热10～50min,可使火腿中的亚硝酸盐含量显著降低。
优选的，亚硝酸盐是以亚硝酸钠为主。
优选的，器皿于64℃水浴加热。
优选的，器皿水浴加热28min。
优选的，茶树“螃蟹脚”多酚提取步骤：
(1).将茶树“螃蟹脚”用磨粉机磨粉；
(2).以料液比1:20g/mL加入80％的无水乙醇；
(3).超声波水浴20min后，再以4000r/min的速度于离心机中离心10min；
(4).取出管中的上清液，在40℃条件下减压浓缩，最后再把浓缩液进行冷冻干燥后，得到茶树“螃蟹脚”的多酚提取物。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：本方法所采用的茶树“螃蟹脚”多酚为纯天然提取，无任何毒副作用；当反应时间为28min，反应温度为64℃，多酚用量为1.1mL，在这最佳条件下所得茶树“螃蟹脚”多酚对亚硝酸盐的清除率为61.01％。
附图说明
图1为茶树“螃蟹脚”多酚多酚用量对亚硝酸盐消除程度的影响。
图2为茶树“螃蟹脚”多酚反应温度对亚硝酸盐消除程度的影响。
图3为茶树“螃蟹脚”多酚反应时间对亚硝酸盐清除程度的影响。
注：图中不同的字母表示差异显著(p<0.05)。
图4为茶树“螃蟹脚”多酚清除亚硝酸盐的响应面三维图。其中图(a)表示反应温度和反应时间相互作用，对亚硝酸盐的清除率的影响；图(b)表示反应温度和多酚用量相互作用，对亚硝酸盐的清除率的影响；图(c)表示反应时间和多酚用量相互作用，对亚硝酸盐的清除率的影响。
具体实施方式
以下将参照说明书附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
本发明采用茶树“螃蟹脚”多酚清除腌制火腿中残留的亚硝酸盐步骤如下：
(1)将准备的腌制火腿清洗干净后切块放入加工器皿内，加入一定量的“螃蟹脚”多酚提取液，多酚提取液添加量为0.05％，搅拌均匀；
(2)向加工器皿中加入纯净水刚好淹没火腿，并充分搅拌均匀；
(3)将盛有火腿的器皿放于40～80℃温度下水浴加热10～50min,可使火腿中的亚硝酸盐含量显著降低。
优选的，亚硝酸盐是以亚硝酸钠为主。
优选的，器皿于64℃水浴加热。
优选的，器皿水浴加热28min。
优选的，茶树“螃蟹脚”多酚提取步骤：
(1).将茶树“螃蟹脚”用磨粉机磨粉；
(2).以料液比1:20g/mL加入80％的无水乙醇；
(3).超声波水浴20min后，再以4000r/min的速度于离心机中离心10min；
(4).取出管中的上清液，在40℃条件下减压浓缩，最后再把浓缩液进行冷冻干燥后，得到茶树“螃蟹脚”的多酚提取物。
1、茶树“螃蟹脚”多酚提取步骤：
(1).将茶树“螃蟹脚”用磨粉机磨粉；
(2).以料液比1:20g/mL加入80％的无水乙醇；
(3).超声波水浴20min后，再以4000r/min的速度于离心机中离心10min；
(4).取出管中的上清液，在40℃条件下减压浓缩，最后再把浓缩液进行冷冻干燥后，得到茶树“螃蟹脚”的多酚提取物。
2、多酚含量的测定
(1).于天平准确称取0.05g的茶树“螃蟹脚”多酚提取物，放在规格为50mL的离心管中；
(2).倒入蒸馏水定容到10ml后以需备用，再吸取1ml茶树“螃蟹脚”的多酚样液加入规格为50mL的离心管中；
(3).加入0.5ml Folin-Ciocalteau，然后倒入1ml饱和的Na2CO3溶液，继续定容一直加到10m；
(4).将离心管放置于避光处静置反应30min后，再放入离心机离心10分钟，最后于紫外分光光度计725nm处测定其吸光度，然后就能将阿魏酸溶液作为标准品从而建立相关的回归方程，式子如下：
y＝0.0066x-0.003(R2＝0.998)
式子里面:y代表多酚的含量(μmol)，x代表阿魏酸的浓度(μmol/L)，最终表达意义是每1g茶树“螃蟹脚”试品中所含有的总多酚含量相当于阿魏酸溶液的微摩尔数。
3、对亚硝酸盐清除的清除率的测定
(1).准确移取0.5ml 200μg/mL的NaNO2溶液放在规格为50ml的离心管内；
(2).倒入适量的茶树“螃蟹脚”多酚提取溶液，加入蒸馏水直至定容到10ml；
(3).称量2ml的反应溶液在规格为50ml的容量瓶内，加入2mL0.4％浓度的对氨基苯磺酸溶液，进行几次均匀摇晃后静置5min；
(4).加入1mL浓度为0.2％的盐酸萘乙二胺溶液，进行几次均匀摇晃后静置15min，最后在紫外分光光度计为538nm处测量其吸光度值；
按照下面的式子计算其清除率：
亚硝酸盐的清除率(％)＝(A1—A2)/A1×100
式子中：A1代表没有加入茶树“螃蟹脚”多酚提取液测出的吸光度值，A2则代表倒入茶树“螃蟹脚”的多酚提取溶液测出来的吸光度值。
4、茶树“螃蟹脚”多酚清除率影响因素研究
4.1.茶树“螃蟹脚”多酚的用量对亚硝酸盐的消除程度的影响
(1).准确吸取0.5mL、0.75mL、1mL、1.25mL、1.5mL的27mmol/mL浓度的茶树“螃蟹脚”多酚提取液于规格是50mL的塑料离心管内；
(2).分别加入0.5mL的浓度为200μg/mLNaNO2，加入蒸馏水后定容到10mL；
(3).于60℃温度下水浴加热反应30min，将超纯水替代试验样品作为空白对照。取2ml的反应溶液，依照2.4方法算出此时条件下的亚硝酸盐的清除率。
4.2反应温度对亚硝酸盐的清除程度的影响
(1).准确吸取1ml浓度为27mmol/ml的茶树“螃蟹脚”多酚放置于规格为50mL的塑料离心管内；
(2).加入0.5ml的浓度为200μg/mL的NaNO2溶液，加入蒸馏水定容到10ml；
(3).控制温度，分别在40℃、50℃、60℃、70℃、80℃下于恒温水浴锅中30min反应，将超纯水替代试验样品作为空白对照。取2mL的反应液，参照2.4方法算出此时条件下的亚硝酸盐的清除率。
4.3反应时间对亚硝酸盐清除程度的影响
(1).加入浓度为27mmol/ml的茶树“螃蟹脚”多酚溶液1ml于规格为50ml的塑料离心管内；
(2).加入0.5ml的浓度为200μg/ml的NaNO2，加入蒸馏水后定容到10mL；
(3).在60℃温度条件下各反应10min、20min、30min、40min、50min，将超纯水替代试验样品作为空白对照。取2mL的反应溶液，参照2.4方法算出此时条件下的亚硝酸盐的清除率。
4.4响应面试验设计法的运用
是在单因素试验结果的基础上，按照中心组合设计(Central Composite Design)的原理[23]，选择了反应温度(X1)、反应时间(X2)和茶树“螃蟹脚”多酚的浓度(X3)为三个研究因素，从而设计出为三因素五水平的试验，最后再使用Design-Expert 8.0.6软件进行响应面的试验设计和结果的方差分析。
4.5茶树“螃蟹脚”多酚对亚硝酸盐清除程度的研究
精确的吸取浓度为27mmol/mL的茶树“螃蟹脚”多酚1.1mL于50mL规格的离心管内，加入0.5ml的200μg/ml浓度的NaNO2溶液，加入适量的蒸馏水后定容到10ml，使得该反应处在最好的工艺环境和条件下进行，然后样品用蒸馏水代替作为空白对照。然后取2ml反应液，参照2.4算出此时条件下的亚硝酸盐的清除率。
4.6数据分析
采用统计分析软件SPSS 22.0对实验数据进行单因素方差分析和相关性分析，应用Design Expert 8.0.6统计软件进行响应面优化分析。
实验重复3次，测定数据均以
表示。
5、结果与分析
5.1茶树“螃蟹脚”多酚用量对亚硝酸盐清除程度的影响
根据图1可知，伴随着茶树“螃蟹脚”多酚用量的逐渐增大，茶树“螃蟹脚”多酚将亚硝酸盐的消除程度也是逐渐变大。而当茶树“螃蟹脚”多酚的用量超过1mL时，消除作用无明显增加，原因有可能因为茶树“螃蟹脚”多酚对亚硝酸盐的消除量已经饱和，再继续提高多酚用量，清除率并没有明显提高。而且如果继续增大用量，可能会增大试验的成本开销，因此茶树“螃蟹脚”多酚用量选择1mL为适宜的数值。
5.2反应温度对亚硝酸盐清除程度的影响
根据图2可知，伴随反应温度的升高，茶树“螃蟹脚”多酚对于亚硝酸盐的清除率先上升，后下降。并于反应温度为60℃时亚硝酸盐的清除率为最大值60.7％，而当反应温度大于60℃后，随着反应温度的提升高，茶树“螃蟹脚”多酚对亚硝酸盐的清除作用反而呈现下降的趋势，其可能原因是茶树“螃蟹脚”的多酚化合物受热时状态不稳定，而且随着温度的过高还会使多酚被氧化，从而破坏其功能，因此反应的温度选取适宜取60℃为最佳。
5.3反应时间对亚硝酸盐清除作用的影响
据图3可以看出，随着时间不断的延长，茶树“螃蟹脚”多酚对亚硝酸盐的消除程度持续增大。在反应时间过了30min后，随着时间的延长，茶树“螃蟹脚”多酚能起的清除亚硝酸盐作用呈基本持平状态，增加不显著。这可能是因为在反应时间30min以内，随着时间的不断延长，反应物的分子之间的进行碰撞的机率变大，消除效果明显。而时间在30min以后，多酚大多都已反应完全，此时消除程度的变化不明显，所以反应时间选在30min为最佳。
5.4茶树“螃蟹脚”多酚清除亚硝酸盐的响应面优化
在单因素实验结果的基础上，选取试验的三个因素分别是反应时间、反应温度、茶树“螃蟹脚”多酚用量为自变量，分别记作X1，X2和X3(mL)。以此设计出3因素5水平的响应面优化试验。试验主要试剂及主要仪器分别见表1和表2，试验设计和试验结果分别见表3和表,4。
表1主要试剂生产地表
注：其它所用试剂均是分析纯。
表2主要仪器型号及生产地表
表3因素水平表
Table3 Independent Variables And Test Design Levels
表4响应面试验设计与结果
Table4 Design And Result Of Central Composite Design
表5回归模型方差分析表
Table5 Variance Analysis Of The Regression Equation
注：*表示p＜0.05为显著；**表示p＜0.01为极显著。
使用Design Expert软件对试验的结果进行分析后，所得的回归模型如下所示：
Y＝63.61+1.42X1-1.63X2+5.61X3-0.34X1X2-4.47X1X3+1.67X2X3-8.74X12-4.39X22-4.27X32对试验的结果进行准确的方差分析，根据表5可得出结论，该模型的F＝151.55，P<0.0001，表明该回归模型的高度显著，失拟项P＝0.6749>0.05，说明失拟项不显著，说明实际情况与回归方程的拟合良好，并且较准确的表现出亚硝酸盐的消除作用同茶树“螃蟹脚”的多酚使用量、反应温度以及反应时间之间的关系。
(1)响应曲面图分析
依据回归模型做出的响应面的三维图，如图4所示。
图4所示为根据回归模型做的响应面的三维图根据等高线的稀疏程度能看出，茶树“螃蟹脚”的多酚的用量与反应的时间相互作用，且亚硝酸盐被消除的作用影响显著。
(2)验证实验
使用Design-Expert后得出的各单因素之间相互组合的最好的工艺条件是当茶树“螃蟹脚”的多酚使用量为1.09mL，于63.5℃温度下反应时长28.3min时，此时的亚硝酸盐被清除理论值是60.13％。由于操作的实际情况问题，因此将3个数据组合为茶树“螃蟹脚”多酚用量该为1.1mL，于64℃反应温度下反应时长28min，此时进行验证实验后得出数据,得到茶树“螃蟹脚”多酚能消除亚硝酸盐清除率为61.01％，与理论值很接近，表明该方程与实际情况的拟合很好，充分证明了当前所建的模型的正确性，确保此工艺条件准确可靠。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。
Claims (6)
1.一种亚硝酸盐的清除方法：其特征在于，采用茶树“螃蟹脚”多酚清除亚硝酸盐。
2.根据权利要求书1所述方法，其特征在于，清除腌制火腿中残留的亚硝酸盐步骤如下：
(1)将准备的腌制火腿清洗干净后切块放入加工器皿内，加入一定量的“螃蟹脚”多酚提取液，多酚提取液添加量为0.09％，搅拌均匀；
(2)向加工器皿中加入纯净水刚好淹没火腿，并充分搅拌均匀；
(3)将盛有火腿的器皿放于40～80℃温度下水浴加热10～50min,可使火腿中的亚硝酸盐含量显著降低。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，亚硝酸盐是以亚硝酸钠为主。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，器皿于64℃水浴加热。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，器皿水浴加热28min。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，茶树“螃蟹脚”多酚提取步骤：
(1).将茶树“螃蟹脚”用磨粉机磨粉；
(2).以料液比1:20g/mL加入80％的无水乙醇；
(3).超声波水浴20min后，再以4000r/min的速度于离心机中离心10min；
(4).取出管中的上清液，在40℃条件下减压浓缩，最后再把浓缩液进行冷冻干燥后，得到茶树“螃蟹脚”的多酚提取物。
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| US4342789A (en) * | 1979-09-07 | 1982-08-03 | Kabushiki Kaisha Ueno Seiyaku Oyo Kenkyujo | Process for inhibiting growth of Clostridium botulinum and formation of nitrosamines in meat |
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2019
- 2019-12-30 CN CN201911398666.6A patent/CN111000117A/zh active Pending
Patent Citations (1)
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| US4342789A (en) * | 1979-09-07 | 1982-08-03 | Kabushiki Kaisha Ueno Seiyaku Oyo Kenkyujo | Process for inhibiting growth of Clostridium botulinum and formation of nitrosamines in meat |
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