CN110974837A

CN110974837A - 环黄芪醇在制备治疗或预防阿尔茨海默病药物中的应用

Info

Publication number: CN110974837A
Application number: CN201911318481.XA
Authority: CN
Inventors: 潘晓东; 张秋阳; 林宝平; 冯林娟
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-12-19
Filing date: 2019-12-19
Publication date: 2020-04-10

Abstract

本发明的请求保护提供环黄芪醇在制备治疗或预防阿尔茨海默病药物中的应用。环黄芪醇能促进清除阿尔茨海默病脑内关键病理性淀粉样蛋白(Aβ)沉积，抑制小胶质细胞的炎症反应，明显减轻脑内老化相关物质的沉积、抗衰老，提高脑组织中葡萄糖代谢能力，对Aβ沉积造成的学习记忆和行为运动能力损伤有很好的保护和治疗作用，这些特征使环黄芪醇适合用于阿尔茨海默病的预防和治疗，并为长期困扰的阿尔茨海默病治疗提供了一种解决方案。

Description

环黄芪醇在制备治疗或预防阿尔茨海默病药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种环黄芪醇(Cycloastragenol)的医药新用途，具体涉及环黄芪醇在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。环黄芪醇能促进清除阿尔茨海默病脑内关键病理性淀粉样蛋白(Aβ)沉积，抑制小胶质细胞的炎症反应，明显减轻脑内老化相关物质的沉积、抗衰老，提高脑组织中葡萄糖代谢能力，对Aβ沉积造成的学习记忆和行为运动能力损伤有很好的保护和治疗作用，因此，其可用于制备预防或治疗阿尔茨海默病的药物。

背景技术

目前阿尔茨海默病(AD)的核心假说Aβ得以发展，免疫炎症异常学说成为主流机制假说，通过减轻Aβ的神经毒性和调节免疫异常作用的预防以改善AD的方式成为十分重要的策略，这种策略可以从几方面着手：减少Aβ的产生、促进Aβ的降解和清除、阻止Aβ的聚集和沉积、抗氧化应激损伤等。但目前临床上对AD的药物治疗主要包括胆碱酯能药物、兴奋性氨基酸受体拮抗剂、促脑代谢药以及对症治疗的抗精神病药等等，尚没有一种根治AD发生和进展的药物，因此，有必要在基础研究上找出具有新药理机制的药物。

黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，是著名的益气类中药，具有补气固表、利尿、脱毒、排脓、生肌等功效。环黄芪醇为天然存在于是黄芪的主要有效成分之一，其具体信息如下：环黄芪醇别名三萜环黄氏醇，英文名为Cycloastragenol，CAS号为78574-94-4，结构式为

研究表明黄芪及其皂苷类成分具有显著的免疫调节、抗炎、抗氧化、抗脑缺血性损伤等作用。但目前还未有环黄芪醇应用于阿尔茨海默病的预防或治疗。

发明内容

本发明的请求保护提供环黄芪醇在制备治疗或预防阿尔茨海默病药物中的应用。环黄芪醇能促进清除阿尔茨海默病脑内关键病理性淀粉样蛋白(Aβ)沉积，抑制小胶质细胞的炎症反应，明显减轻脑内老化相关物质的沉积、抗衰老，提高脑组织中葡萄糖代谢能力，对Aβ沉积造成的学习记忆和行为运动能力损伤有很好的保护和治疗作用，这些特征使环黄芪醇适合用于阿尔茨海默病的治疗，并为长期困扰的阿尔茨海默病治疗提供了一种新的解决方案。

本发明中，采用环黄芪醇从调节中枢神经系统免疫吞噬细胞和炎症异常为靶点——对小胶质细胞吞噬清除Aβ功能影响的研究。本发明药理应用策略有望最终早期减少Aβ的脑内沉积，以及由此纠正Aβ引发的免疫异常紊乱，从而改善痴呆患者的临床症状。

本发明进一步请求保护环黄芪醇在制备用于治疗或预防脑内病理性淀粉样蛋白(Aβ)异常沉积引发的免疫异常紊乱疾病药物中的应用。环黄芪醇可用于改善阿尔茨海默病中脑内Aβ异常沉积和纠正痴呆免疫异常紊乱，最终改善痴呆的认知和行为异常。

在本发明中提出黄芪醇用于改善转染五种人类家族遗传性痴呆突变基因小鼠(5xFAD转基因小鼠)的痴呆和行为症状。进一步中考察学习与视空间记忆行为表现，给予环黄芪醇干预后5xFAD组小鼠环潜伏期明显缩短，停留原平台象限时间和穿越原平台次数明显增多，强烈提示环黄芪醇改善痴呆转基因鼠记忆和视空间能力。

本发明进一步请求保护环黄芪醇在制备用于增强脑神经小胶质细胞吞噬清除的功能达到减少Aβ在脑中沉积药物中的应用。本发明实验中1显示环黄芪醇在药物安全范围内有效激活脑小胶质细胞(BV-2细胞)对Aβ的吞噬清除作用。此外，在实验3中显示环黄芪醇明显提高了5xFAD小鼠脑内小胶质细胞的免疫功能，有效增强了小胶质细胞对痴呆鼠脑内Aβ的吞噬清除作用，降低了海马脑区的Aβ沉积。

本发明进一步请求保护涉及环黄芪醇能促进清除阿尔茨海默病脑内老化相关物质SA-β-gal，明显减轻阿尔茨海默病脑内老化相关物质的沉积，具有明显的抗衰老作用。本发明实验2显示环黄芪醇灌胃给予明显活化5xFAD小鼠脑内小胶质细胞和有效降低老化相关物质SA-β-gal。

本发明进一步请求保护环黄芪醇在制备用于改善脑内Aβ沉积引起小胶质细胞活化所产生的炎症反应药物中的应用。涉及环黄芪醇改善脑内Aβ沉积引起小胶质细胞活化所产生的炎症反应，在实施案例4中，灌胃给药能明显减少5xFAD小鼠脑内炎症因子的产量。

本发明进一步请求保护环黄芪醇在制备用于改善Aβ相关炎症反应所引起的脑葡萄糖代谢损伤药物中的应用。环黄芪醇具有改善Aβ相关炎症反应所引起的脑葡萄糖代谢损伤的作用。在实施案例5中，使用动物PET-CT分子影像技术发现，环黄芪醇能直接提高正常小鼠脑内的葡萄糖代谢，改善5xFAD小鼠因Aβ相关炎症反应所引起的脑组织葡萄糖代谢损伤。

本发明进一步请求保护环黄芪醇在制备用于改善阿尔茨海默病患者学习记忆等认知功能的作用。在实施案例6中，通过水迷宫测试发现，环黄芪醇能直接提高5xFAD小鼠学习记忆和视空间记忆的能力。

本发明进一步请求保护包括环黄芪醇与一种或多种药用载体和/或稀释剂的药物组合物，为临床上或药学上可接受的任一剂型，优选为口服制剂或注射剂。其中含有生理有效量的环黄芪醇0.01g～10g，可以为0.01g、0.015g、0.02g、0.025g、0.03g、0.04g、0.05g、0.1g、0.125g、0.2g、0.25g、0.3g、0.4g、0.5g、0.6g、0.75g、1g、1.25g、1.5g、1.75g、2g、2.5g、3g、4g、5g、6g、7g、8g、9g、10g等。

本发明的环黄芪醇或其衍生物，可以口服或肠胃外给药等方式施用于需要这种治疗的患者用于肠胃外给药时，可制成注射剂。注射剂系指药物制成的供注入体内的溶液、乳液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂，注射剂可分为注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。注射液系指药物制成的供注射入体内用的无菌溶液型注射液、乳液型注射液或混悬型注射液，可用于肌内注射、静脉注射、静脉滴注等；其规格有1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供静脉滴注用的大体积(一般不小于100ml)注射液也称静脉输液。注射用无菌粉末系指药物制成的供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物，可用适宜的注射用溶剂配制后注射，也可用静脉输液配制后静脉滴注；无菌粉末用溶媒结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等制得。注射用浓溶液系指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液。

制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，可选用水性溶剂或非水性溶剂。最常用的水性溶剂为注射用水，也可用0.9％氯化钠溶液或其他适宜的水溶液；常用的非水性溶剂为植物油，主要为供注射用大豆油，其他还有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配制注射剂时，可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂，如渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、填充剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等。常用的渗透压调节剂包括氯化钠、葡萄糖、氯化钾、氯化镁、氯化钙、山梨醇等，优选氯化钠或葡萄糖；常用的pH值调节剂包括醋酸-醋酸钠、乳酸、枸橼酸-枸橼酸钠、碳酸氢钠-碳酸钠等；常用的增溶剂包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充剂包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧剂有亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等；常用抑菌剂为苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射剂常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。用于口服时，可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂，以口服普通片为主，另有含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。胶囊剂系指药物或加有辅料充填于空心胶囊或密封于软质囊材中的固体制剂，依据其溶解与释放特性，可分为硬胶囊(通称为胶囊)、软胶囊(胶丸)、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊等。丸剂系指药物与适宜的料均匀混合，以适当方法制成的球状或类球状固体制剂，包括滴丸、糖丸、小丸等。颗粒剂系指药物与适宜的辅料制成具有一定粒度的干燥颗粒状制剂，可分为可溶颗粒(通称为颗粒)、混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒和控释颗粒等。口服溶液剂系指药物溶解于适宜溶剂中制成供口服的澄清液体制剂。口服混悬剂系指难溶性固体药物，分散在液体介质中，制成供口服的混悬液体制剂，也包括干混悬剂或浓混悬液。糖浆剂系指含有药物的浓蔗糖水溶液。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。常用填充剂包括淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；常用粘合剂包括羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、胶化淀粉等；常用崩解剂包括干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；常用润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶等。

本发明的有益效果：

环黄芪醇能促进清除阿尔茨海默病脑内关键病理性淀粉样蛋白(Aβ)沉积，抑制小胶质细胞的炎症反应，明显减轻脑内老化相关物质的沉积、抗衰老，提高脑组织中葡萄糖代谢能力，对Aβ造成的学习记忆和行为运动能力损伤有很好的治疗作用，这些特征使环黄芪醇适合用于阿尔茨海默病的治疗，并为长期困扰的阿尔茨海默病治疗提供了一种解决方案。

药理实验结果表明：

(1)通过CCK8实验，环黄芪醇在1-10nmol/L范围内对小胶质细胞活性的影响随药物剂量的增加而增强(P<0.05),当剂量超过100nmol/L时，细胞活性逐渐下降(24和48分别为P<0.05或P<0.01)(图1)。BV-2细胞经环黄芪醇干预后与对照组相比，对尼罗红微球的吞噬(图2)和Hilyte555-Aβ1-42的吞噬率和吞噬效率(图3)均随药物浓度增加而明显增加。

(2)环黄芪醇明显活化5xFAD小鼠脑内小胶质细胞和有效降低老化相关物质SA-β-gal。用药组与对照组相比，环黄芪醇明显减少5xFAD小鼠脑内SA-β-gal斑块面积(P<0.001)增大斑块内活化的小胶质细胞面积(P<0.001)以及明显减少小胶质细胞总数(P<0.001)(图4)。

(3)环黄芪醇明显活化5xFAD小鼠脑内小胶质细胞并有效增加了小胶质细胞对Aβ的吞噬清除作用，从而减少痴呆鼠脑组织的Aβ沉积(图5)。

(4)通过Q PCR结果显示，环黄芪醇下调5xFAD和WT小鼠海马老化相关的细胞周期分子p16、p21、炎症因子Clqa、IL-1β的mRNA水平(P<0.01或P<0.05)，提高了神经营养因子BDNF水平(P<0.01),强烈提示环黄芪醇(CAG)改善痴呆的机制之一是通过抗衰老发挥作用(图6)。

(5)5XFAD鼠相比野生型小鼠(WT)脑内代谢率明显下降，在给环黄芪醇药物后，5XFAD鼠代谢率明显提高，可得知环黄芪醇明显提高5XFAD小鼠脑组织内葡萄糖代谢水平(图7)。

(6)5xFAD组小鼠给予环黄芪醇干预后，水迷宫寻找平台的潜伏期明显缩短，再认保留试验在停留原平台象限时间和穿越原平台次数明显增多，明显提高了痴呆鼠学习记忆和视空间行为能力(图8)。

附图及其说明内容

图1为环黄芪醇在1-10nmol/L范围内对小胶质细胞作用24小时和48小时后，对小胶质细胞活性的影响。

图2为环黄芪醇在0-10nmol/L作用下，小胶质细胞对尼罗红微球吞噬作用的荧光染色。

图3为环黄芪醇0-10nmol/L作用下，小胶质细胞对荧光标记的Aβ1-42的吞噬作用。

图4为环黄芪醇作用后在5xFAD和WT小鼠海马和皮层脑区的小胶质细胞(Iba1)和老化相关物质SA-β-gal的表达情况。

图5为环黄芪醇在0、75mg/kg作用下，5xFAD小鼠和WT小鼠脑海马区Aβ表达和小胶质细胞活化情况。

图6为环黄芪醇在0、25、75mg/kg作用下,WT和5xFAD小鼠中老化相关的细胞周期分子p16和p21、炎症因子IL-1和C1q以及脑源性神经营养因子(BDNF)的mRNA表达情况。

图7A为在环黄芪醇作用下WT和5xFAD小鼠脑内葡萄糖代谢PET-CT图。B为在环黄芪醇作用下WT和5xFAD小鼠脑组织葡萄糖代谢水平的SUV值。

图8A为环黄芪醇在0、75mg/kg作用下，水迷宫轨迹图。B为小鼠寻找隐藏平台潜伏期趋势图。C为环黄芪醇在0、75mg/kg作用下，寻找原平台的视空间记忆保留情况。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作更进一步的说明，以便本领域技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。

环黄芪醇治疗阿尔茨海默病的的药理实验资料

实验1：环黄芪醇对小胶质细胞吞噬功能的评估

实验材料：BV-2细胞是具有原代小胶质细胞功能和基本特征的鼠小胶质细胞株。使用胎牛血清与高糖培养基并含有0.25％胰酶EDTA、青霉素和链霉素的培养基培育。尼罗红微球蛋白、冻干粉Aβ1-42和Hilyte555-Aβ1-42购自Anaspec公司。检测细胞活性CCK8试剂购自Hyclone公司。

实验方法：

1-1以CCK8试剂检测环黄芪醇对BV2细胞的最适浓度。分别给与不同剂量梯度(0、1、10、100、1000nmol/L)和不同时长(24h和48h)于体外干预BV-2细胞后，通过CCK8对BV2细胞活性地测定，经由酶标仪检测分析，确认环黄芪醇的安全使用范围。

1-2BV2细胞对尼罗红微球蛋白和Hilyte555-Aβ1-42的吞噬作用。将BV2细胞以5x10⁵个/孔密度接种于含盖玻片的24孔板，培养2h。待细胞贴壁后，于培养基中加入环黄芪醇(1-100nmol/L)孵育。分别加入尼罗红荧光微球或Hilyte555-Aβ1-42以37℃孵育40min,台盼蓝终止、4％多聚甲醛固定。将AlexaFluor 488标记的phalloidin(1:100)避光室温孵育40min并以DAPI染核，随后用抗荧光淬灭剂封片，于共聚焦显微镜观察、拍照、计数细胞的吞噬。并计算细胞吞噬率和吞噬效率吞噬率(％)。

实验结果：通过CCK8实验，环黄芪醇在1-10nmol/L范围内对小胶质细胞活性的影响随药物剂量的增加而增强(P<0.05),当剂量超过100nmol/L时，细胞活性逐渐下降(24和48分别为P<0.05或P<0.01)(图1)。BV-2细胞经环黄芪醇干预后与对照组相比，对尼罗红微球的吞噬(图2)和Hilyte555-Aβ1-42的吞噬率和吞噬效率(图3)均随药物浓度增加而明显增加。

实验2：以5xFAD小鼠作为阿尔茨海默病经典动物模型，通过Iba1的DAB染色和X-gal染色评估环黄芪醇对小胶质细胞的激活作用和老化物质SA-β-gal的影响

动物来源及分组：从Jax公司购买转染五种人类家族遗传突变基因的鼠模型(5xFAD转基因小鼠)。以健康雄性9月龄小鼠，体重25-30g共60只，按照基因型(5xFAD和WT小鼠)及给药剂量(0mg/kg,25mg/kg,75mg/kg)分为6组。每组每天灌胃给药一次，连续3个月灌胃给药。

实验方法：

2-1采用DAB染色联合X-β-gal染色的方法，在海马部位分别标记SA-β-gal、Iba-1阳性的小胶质细胞。将脑片漂洗后浸于新鲜配制SA-β-gal溶液中37℃孵育16-18小时。后用3％过氧化氢/TBS去除组织内源性过氧化氢酶室温封闭1h,用含有0.3％Triton X-100、0.25％BSA和5％羊血清TBS封闭液。随后孵育一抗(Iba-1,1:1000)4℃过夜。第二天室温90min孵育生物素标记的抗鼠二抗(1:600稀释)。在ABC液室温60min。将10mg/ml DAB用乙酸钠稀释/H₂0₂稀释50倍进行显色。最后贴片于多聚赖氨酸包被的载玻片，室温风干后用梯度酒精脱水和二甲苯透明,最后封片。

实验结果：环黄芪醇明显活化5xFAD小鼠脑内小胶质细胞和有效降低老化相关物质SA-β-gal。用药组与对照组相比，环黄芪醇明显减少5xFAD小鼠脑内SA-β-gal斑块面积(P<0.001)，斑块内吞噬清除功能的小胶质细胞面积增加(P<0.001)，小胶质细胞总数量明显减少(P<0.001)(见图4)。

实验3：以免疫荧光染色评估环黄芪醇对小胶质细胞活性和小鼠脑内Aβ沉积的影响。

实验方法：以冷冻切片方式获得脑片(厚度40μm),采用免疫荧光共染Iba-1和6E-10分别标记皮层及海马CA1及DG区的小胶质细胞和Aβ。漂洗脑片后，在室温下用含有0.3％TritonX-100,0.25％BSA和5％驴血清封闭液封闭1小时。随后孵育一抗，于4℃摇床孵育过夜。第二天漂洗脑片后孵育二抗。分别使用兔来源和鼠来源的Alex 488和Alex 594标记的荧光二抗(1:2000/1X TBS)，室温避光孵育60分钟。DAPI染核，随后用抗荧光淬灭剂封片，于共聚焦显微镜观察。

实验结果：环黄芪醇明显活化5xFAD小鼠脑内小胶质细胞并有效增加了小胶质细胞对Aβ的吞噬清除作用，减少脑内Aβ的沉积(见图5)。

实验4：环黄芪醇对5XFAD小鼠脑内老化相关细胞周期因子、炎症及神经营养因子的表达影响。

实验材料：引物、Nuclease freewater、抗荧光淬灭剂，Trizol和SYBR Green II实时荧光定量PCR试剂盒购自Invitrogen公司，逆转录试剂盒购自Fermenta公司。

实验方法：

在给予不同环黄芪醇剂量(0mg/kg,25mg/kg,75mg/kg)下，分别将5XFAD和WT小鼠的海马取出，以Trizol试剂提取总RNA，以逆转录试剂获得cDNA。用实时荧光定量PCR试剂，分别加入老化相关细胞周期因子(p16、p21)、炎症因子(IL-1、C1q)及神经营养因子(BDNF)引物，在50℃2min 95℃10min 95℃15S，60℃lmin共40个循环95℃,15s的条件下进行扩增。使用2△△Ct相对定量法分析其mRNA表达水平，即△Ct实验组＝(Ct目的基因-Ct内参基因)，△Ct对照组＝(Ct目的基因Ct内参基因)，△△Ct＝△Ct实验组△Ct对照组，目的基因表达水平＝2△△Ct。

实验结果：通过Q-PCR结果显示，环黄芪醇下调5xFAD和WT小鼠海马老化相关的细胞周期分子p16、p21、炎症因子Clqa,IL-1βmRNA水平(P<0.01或P<0.05)，提高了神经营养因子BDNF水平(P<0.01)(见图6),提示CAG改善痴呆症状的机制可能为具有抗炎症和神经营养作用。

实验5：环黄芪醇对提高5XFAD小鼠脑内葡萄糖代谢水平的评估

实验材料：Micro PET/CT扫描仪(Inveon:Siemens)、氟化物18标记的FDG探针(1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2propanol C3H2F60)、六氟异丙醇。

实验方法：根据小鼠体重抽取FDG药液，测量药液放射性(mCi)将药物进行尾静脉注射踪剂18F FDG，注射剂量为18.5MBq。注射示踪剂并测量放射性残留mCi后，将小鼠放置鼠笼内，任由其自由活动40min,40min后把小鼠放于麻醉诱导盒内进行气体麻醉(由5％异氟烷与100％氧气构成，约5min)。麻醉完毕，开始PET-CT扫描用小鼠F-脱氧葡萄糖(FDG)-PET-CT，测定小鼠脑内SUV值，颜色越红代谢水平越高，颜色越蓝代谢水平越低。

实验结果：相比WT小鼠，5XFAD鼠脑内葡萄糖代谢率明显下降。给环黄芪醇药物治疗后，5XFAD鼠代谢率明显提高，可得知环黄芪醇明显提高5XFAD小鼠脑组织内葡萄糖代谢水平(见图7)。

实验6：以Morris水迷宫试验评估环黄芪醇对5xFAD小鼠视空间学习记忆能力的影响。

实验方法：Morris水迷宫是一种强迫实验小鼠游泳，学习寻找隐藏在水中平台的实验,主要用于测试实验动物对空间位置感和方向感(空间定位)的学习和记忆能力。

(1)获取试验(隐藏平台训练)，用假设的两条垂直相交直线,将水迷宫划分成四个象限，标记为:North(N)、South(S)、East(E)、West(W)。按照每个入水的起始位置到平台的距离最接近于相等的原则，入水点为N、E、Southeast(SE)、Northwest(NW)。老鼠进行连续6天、每天4次游泳训练。每天每次入水点的顺序根据半随机分布数决定。小鼠找到隐藏平台的时间即为隐藏平台潜伏期(escape latency,s)。使用系统摄像记录每次训练的游泳距离、速度和运动轨迹。

(2)记忆保留试验(空间探索)，最后一天的隐藏平台训练结束后24h,将平台移出，小鼠从原平台所在的对侧象限入水，摄像跟踪系统记录老鼠60s内在每个象限游泳所消耗的时间(time in target quadrant)、穿越原平台的次数(platform crossings)、游泳速度和游泳路径。

实验结果：在morris水迷宫考察视空间学习记忆能力的实验中，5xFAD组小鼠给予环黄芪醇干预后寻找平台的潜伏期明显缩短，停留原平台象限时间和穿越原平台次数明显增多(见图8)。

本发明所应用的环黄芪醇对其他具有自聚集毒性的分子折叠蛋白在其他神经退行性疾病的脑/脊髓内异常沉积(包括tau蛋白折叠、突触核蛋白病等)及其由此导致脑内的老化物质沉积的减轻和消除的药理作用也属于本申请专利的权利保护范围。

Claims

1.环黄芪醇在制备治疗或预防阿尔茨海默病药物中的应用。

2.环黄芪醇在用于治疗或预防阿尔茨海默病的药学组合物的制备中的应用。

3.环黄芪醇或其衍生物在制备治疗或预防阿尔茨海默病药物中的应用。

4.环黄芪醇在制备用于治疗或预防脑内病理性淀粉样蛋白沉积(Aβ)异常沉积引发的免疫异常紊乱疾病的药物中的应用。

5.环黄芪醇在用于治疗或预防脑内病理性淀粉样蛋白沉积(Aβ)异常沉积引发的免疫异常紊乱疾病的药学组合物的制备中的应用。

6.环黄芪醇或其衍生物在制备用于治疗或预防脑内病理性淀粉样蛋白沉积(Aβ)异常沉积引发的免疫异常紊乱疾病的药物中的应用。

7.环黄芪醇在制备用于增强脑神经小胶质细胞吞噬清除的功能达到减少Aβ在脑中沉积药物中的应用。

8.环黄芪醇在制备用于促进清除阿尔茨海默病脑内老化相关物质SA-β-gal药物中的应用。

9.环黄芪醇在制备用于改善脑内Aβ沉积引起小胶质细胞活化所产生的炎症反应药物中的应用。

10.环黄芪醇在制备用于改善Aβ相关炎症反应所引起的脑葡萄糖代谢损伤药物中的应用。