CN110973260A - 一种含有烟酰胺核糖苷的牛奶及其制备方法与应用 - Google Patents

一种含有烟酰胺核糖苷的牛奶及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种含有烟酰胺核糖核苷的牛奶及其制备方法与应用。本发明含有烟酰胺核糖核苷的牛奶的原料组分如下：生牛乳900‑1000(质量份)、烟酰胺核糖苷0.5‑1.5(质量份)、烟酰胺3(质量份)、乳糖酶1‑3(质量份)、硬脂酸甘油酯1‑3(质量份)、D‑甘露糖醇1‑3(质量份)、溶菌酶1‑3(质量份)、维生素E 1‑3(质量份)和姜黄素1‑3(质量份)。通过人群应用试验结果表明：中老年人饮用该含有烟酰胺核糖核苷的牛奶6周后可显著提高人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量，从而有益于延长中老年人的健康寿命。本发明的含有烟酰胺核糖核苷的牛奶具有良好的应用前景和经济价值。

Description

一种含有烟酰胺核糖苷的牛奶及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种含有烟酰胺核糖苷的牛奶及其制备方法与应用。
背景技术
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide，简称NAD或NAD+)是细胞内的辅酶，其在细胞内的含量随着年龄的增长而减少，增加其含量可以同时延长健康寿命和整体寿命。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸延长健康寿命的机理如下：第一、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激活了七个长寿基因STERT1-7；第二、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激活了基因修复基因PARP1。
烟酰胺核糖苷(Nicotinamide riboside，简称NR)是维生素B3的吡啶-核苷，它是作为在人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的前体发挥生理作用。增加烟酰胺核糖苷的摄入量，可以明显的提高人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的水平，从而达到延长人类健康寿命的作用。有文献报道食用烟酰胺核糖苷时，最大安全量可达到30mg/公斤/天，在此范围以下都是安全的。
目前，关于补充人体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的产品，在美国有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤单核苷酸的保健品，中国目前还没有同样产品。但是上述保健产品存在分子量太大，不能进入人体细胞内的问题，要进入细胞必须分解为烟酰胺核糖苷和烟酰胺才可以；另外，这种产品是保健品，不是食品，价格昂贵。
发明内容
本发明的目的是提供一种含有烟酰胺核糖苷的牛奶及其应用。
本发明首先保护一种牛奶，所述牛奶包括生牛乳、烟酰胺核糖苷、烟酰胺和乳糖酶。
上述牛奶中，所述生牛乳、所述烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺和所述乳糖酶的质量比可为(900-1000):(0.5-1.5):3:(1-3)。
进一步的，所述牛奶还包括乳化剂、增稠剂、防腐剂、抗氧化剂和稳定剂。
更进一步的，所述乳化剂可为硬脂酸甘油酯；
所述增稠剂可为D-甘露糖醇；
所述防腐剂可为溶菌酶；
所述抗氧化剂可为维生素E；
所述稳定剂可为姜黄素。
上述方法中，所述烟酰胺核糖苷可为氯化烟酰胺核糖苷(杭州洁汉化工有限公司，货号为GIHI-65)或烟酰胺核糖苷(杭州洁汉化工有限公司，货号为GIHI-15)。
上述方法中，所述生牛乳、所述氯化烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺、所述乳糖酶、所述硬脂酸甘油酯、所述D-甘露糖醇、所述溶菌酶、所述维生素E和所述姜黄素的质量比可为(900-1000):(0.5-1.5):3:(1-3):(1-3):(1-3):(1-3):(1-3):(1-3)。
在本发明的一个具体实施例中，所述生牛乳、所述氯化烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺、所述乳糖酶、所述硬脂酸甘油酯、所述D-甘露糖醇、所述溶菌酶、所述维生素E和所述姜黄素的质量比为990:0.5:3:1:1:1:1:1:1。
在本发明的另一个具体实施例中，所述生牛乳、所述氯化烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺、所述乳糖酶、所述硬脂酸甘油酯、所述D-甘露糖醇、所述溶菌酶、所述维生素E和所述姜黄素的质量比为982:1:3:2:2:2:2:2:2。
在本发明的另一个具体实施例中，所述生牛乳、所述氯化烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺、所述乳糖酶、所述硬脂酸甘油酯、所述D-甘露糖醇、所述溶菌酶、所述维生素E和所述姜黄素的质量比为973:1.5:3:3:3:3:3:3:3。
本发明的牛奶具有如下(1)-(4)任一种功能：
(1)提高人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量；
(2)制备提高人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量的产品；
(3)延长人类健康寿命或延长人类寿命；
(4)制备延长人类健康寿命或延长人类寿命的产品。
本发明还保护上述牛奶的制备方法。
上述牛奶的制备方法包括如下步骤：
1)将上述烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺、所述乳糖酶、所述乳化剂、所述增稠剂、所述防腐剂、所述抗氧化剂和所述稳定剂混匀，得到混合原料；
2)将所述混合原料先在室温下进行第一次搅拌，然后在60-70℃下进行第二次搅拌，再冷却至室温后加入上述生牛乳进行第三次搅拌，灭菌，得到所述牛奶。
上述方法中，所述1)中，所述乳化剂可为硬脂酸甘油酯；
所述增稠剂可为D-甘露糖醇；
所述防腐剂可为溶菌酶；
所述抗氧化剂可为维生素E；
所述稳定剂可为姜黄素。
进一步的，所述氯化烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺、所述乳糖酶、所述硬脂酸甘油酯、所述D-甘露糖醇、所述溶菌酶、所述维生素E和所述姜黄素的质量比可为(0.5-1.5):3:(1-3):(1-3):(1-3):(1-3):(1-3):(1-3)。
更进一步的，所述氯化烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺、所述乳糖酶、所述硬脂酸甘油酯、所述D-甘露糖醇、所述溶菌酶、所述维生素E和所述姜黄素的质量比为0.5:3:1:1:1:1:1:1或1:3:2:2:2:2:2:2或1.5:3:3:3:3:3:3:3。
上述方法中，所述2)中，所述第一次搅拌的条件可为600-700转/min搅拌10-20min；进一步的，所述第一次搅拌的条件可为600-700转/min搅拌10-15min；更进一步的，所述第一次搅拌的条件为600转/min搅拌15min。
上述方法中，所述2)中，所述在60-70℃下进行第二次搅拌可为在65-70℃下进行第二次搅拌；具体可为在65℃下进行第二次搅拌。
上述方法中，所述2)中，所述第二次搅拌的条件可为600-700转/min搅拌10-20min；进一步的，所述第二次搅拌的条件可为600-700转/min搅拌10-15min；更进一步的，所述第二次搅拌的条件为600转/min搅拌10min。
上述方法中，所述2)中，所述第三次搅拌的条件为600-700转/min搅拌10-20min；进一步的，所述第三次搅拌的条件为600-700转/min搅拌10-15min；更进一步的，所述第三次搅拌的条件为700转/min搅拌10min。
上述方法中，所述2)中，所述灭菌的条件可为65-70℃灭菌30-40min；进一步的，所述灭菌的条件可为65-70℃灭菌30-35min；更进一步的，所述灭菌的条件为70℃灭菌30min。
按照上述方法制备的牛奶也属于本发明的保护范围。
本发明最后保护上述牛奶或按照上述方法制备的牛奶的新用途。
本发明提供了上述牛奶或按照上述方法制备的牛奶在如下(1)-(4)任一种中的应用：
(1)提高人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量；
(2)制备提高人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量的产品；
(3)延长人类健康寿命或延长人类寿命；
(4)制备延长人类健康寿命或延长人类寿命的产品。
上述应用中，所述提高人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量具体可为提高中老年人人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量；所述延长人类健康寿命或延长人类寿命具体可为延长中老年人健康寿命或延长中老年人寿命。所述中老年人的年龄具体可为55-79岁。
本发明的有益效果如下：
1、本发明首次将烟酰胺核糖苷和烟酰胺加入牛奶中，制备含有烟酰胺核糖苷的牛奶，该牛奶具有延长人类寿命的作用。
2、本发明含有烟酰胺核糖苷的牛奶配方中包括稳定剂、抗氧化剂、增稠剂、防腐剂等添加剂，各原料组合科学合理，均是中华人民共和国食品添加剂使用标准内的原料，符合国家标准。
3、本发明含有烟酰胺核糖苷的牛奶的生产工艺简单，没有特殊设备要求。
4、本发明含有烟酰胺核糖苷的牛奶与现有技术中的保健品相比，价格便宜很多，可以作为日常食物每天食用，满足更多人群的需要。
本发明提供了一种含有烟酰胺核糖苷的牛奶，并对该牛奶做了人群应用试验。试验结果表明：中老年人饮用含有烟酰胺核糖苷的牛奶6周后可显著提高人体内烟酰胺二核苷酸的含量，从而有益于延长中老年人的健康寿命。本发明的含有烟酰胺核糖苷的牛奶具有良好的应用前景和经济价值。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
下述实施例中的氯化烟酰胺核糖苷(nicotinamide riboside chloride)是杭州洁汉化工有限公司的产品，货号为GIHI-65。
下述实施例中的烟酰胺是天津中瑞药业有限公司的产品，货号为98-92-0。
下述实施例中的乳糖酶lactase是上海鹤善实业有限责任公司的产品，货号为9031-11-2。
下述实施例中的乳化剂：硬脂酸甘油酯是湖北诺纳科技有限公司的产品，货号为11099-07-3。
下述实施例中的防腐剂：溶菌酶(lysozyme)是湖北诺纳科技有限公司的产品，货号为9001-63-2。
下述实施例中的抗氧化剂：维生素E(dl-α-生育酚，d-α-生育酚)是武汉鑫伟烨化工有限公司的产品，货号为14638-18-7。
下述实施例中的增稠剂：D-甘露糖醇(D-mannitol)是湖北鑫鸣泰化学有限公司的产品，货号为69-65-8。
下述实施例中的稳定剂：姜黄素(curcumin)是上海吉至生化科技有限公司的产品，货号为458-37-72。
下述实施例中的生牛乳是The a2 Milk Company(Australia)的产品，货号为a2-2019-628。
本发明的含有烟酰胺核糖苷的牛奶的原料组分及用量如下：
Figure BDA0002312933740000051
实施例1、含有烟酰胺核糖苷的牛奶A的原料组分及其制备方法
一、含有烟酰胺核糖苷的牛奶A的原料组分
本实施例中含有烟酰胺核糖苷的牛奶A的原料组分如下：
Figure BDA0002312933740000052
二、含有烟酰胺核糖苷的牛奶A的制备
1、按照步骤一中的配方准备原料。
2、完成步骤1后，将上述步骤1的原料(除生牛乳外)全部加入搅拌容器内，在室温、转速为600转/min的条件下搅拌15min。
3、完成步骤2后，在上述步骤2的搅拌容器中，在65℃、转速为600转/min的条件下搅拌10min。
4、完成步骤3后，待上述步骤3的搅拌容器温度冷却至室温后，加入生牛乳，然后在转速为700转/min的条件下搅拌10min。
5、完成步骤4后，将上述步骤4的搅拌容器在70℃灭菌处理30min，待温度降至室温后，罐装，得到含有低浓度烟酰胺核糖苷的牛奶A产品(烟酰胺核糖苷浓度约为500mg/L)。
实施例2、含有烟酰胺核糖苷的牛奶B的原料组分及其制备方法
一、含有烟酰胺核糖苷的牛奶B的原料组分
本实施例中含有烟酰胺核糖苷的牛奶B的原料组分如下：
Figure BDA0002312933740000061
二、含有烟酰胺核糖核苷的牛奶B的制备
1、按照步骤一中的配方准备原料。
2、完成步骤1后，将上述步骤1的原料(除生牛乳外)全部加入搅拌容器内，在室温、转速为600转/min的条件下搅拌15min。
3、完成步骤2后，在上述步骤2的搅拌容器中，在65℃、转速为600转/min的条件下搅拌10min。
4、完成步骤3后，待上述步骤3的搅拌容器温度冷却至室温后，加入生牛乳，然后在转速为700转/min的条件下搅拌10min。
5、完成步骤4后，将上述步骤4的搅拌容器在70℃灭菌处理30min，待温度降至室温后，罐装，得到含有中浓度烟酰胺核糖苷的牛奶B产品(烟酰胺核糖苷浓度为1000mg/L)。
实施例3、含有烟酰胺核糖苷的牛奶C的原料组分及其制备方法
一、含有烟酰胺核糖苷的牛奶C的原料组分
本实施例中含有烟酰胺核糖苷的牛奶C的原料组分如下：
Figure BDA0002312933740000062
Figure BDA0002312933740000071
二、含有烟酰胺核糖核苷的牛奶C的制备
1、按照步骤一中的配方准备原料。
2、完成步骤1后，将上述步骤1的原料(除生牛乳外)全部加入搅拌容器内，在室温、转速为600转/min的条件下搅拌15min。
3、完成步骤2后，在上述步骤2的搅拌容器中，在65℃、转速为600转/min的条件下搅拌10min。
4、完成步骤3后，待上述步骤3的搅拌容器温度冷却至室温后，加入生牛乳，然后在转速为700转/min的条件下搅拌10min。
5、完成步骤4后，将上述步骤4的搅拌容器在70℃灭菌处理30min，待温度降至室温后，罐装，得到含有高浓度烟酰胺核糖苷的牛奶C产品(烟酰胺核糖苷浓度为1500mg/L)。
实施例4、含有烟酰胺核糖核苷的牛奶的应用试验
一、试验方法
1、受试者：80个来源于澳洲悉尼市宝华山社区的年龄为55-79岁的中老年男性(40个)和绝经后女性(40个)，所有受试者经病史和医生的体检证实均无临床疾病。
2、试验分组：
对照组(n＝20)：摄入等体积的生牛乳每次250毫升，每天两次；
试验组A组(n＝20)：摄入含有烟酰胺核糖核苷的牛奶A每次250毫升，每天两次；每天摄入烟酰胺核糖苷250mg。
试验组B组(n＝20)：摄入含有烟酰胺核糖核苷的牛奶B每次250毫升，每天两次；每天摄入烟酰胺核糖苷500mg。
试验组C组(n＝20)：摄入含有烟酰胺核糖核苷的牛奶C每次250毫升，每天两次。每天摄入烟酰胺核糖苷750mg。
试验周期为6周。研究者和参与者成员都是双盲条件。牛奶在早上和晚间用餐时食用。受试者不服用任何非处方药。
3、试验方法
试验结束后，分别检测所有对照组和试验组受试者中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)含量。具体步骤如下：
(1)采血：6周后，对受试者抽静脉血测试NAD+含量。
(2)外周血单核细胞的分离：将收集的35mL受试者全血加入到EDTA涂覆的试管中。然后以400×g离心20分钟，大部分血浆层(约60％)被移除，将剩余的样品缓慢地添加到装有10mL的新的50mL锥形管中的Histopaque 1.077(Greiner Bio-One)分离出单核细胞层。通过密度依赖性，以400×g离心20分钟，收集细胞沉淀，洗涤后溶解于2mL PBS溶液中，得到浓度为5×106个/mL的外周血单核细胞悬液，冷冻在-80℃中备用。
(3)NAD+的提取：将浓度为5×106个/mL的外周血单核细胞悬液在冰上解冻。500微升冰冷的甲醇：水(70:30)中加入20微升内标物，并将样品涡旋10秒钟。将外周血单核细胞悬液在4℃下以8000×g离心5分钟，得到上清液A。将上清液A转移至新的离心管中并保存在冰上。向剩余的沉淀物中加入500微升冰冷的甲醇，并将样品涡旋10s以重悬沉淀。然后将样品在4℃下以8000×g离心5分钟，收集上清液B，保留所得沉淀，并在-70℃下冷冻使用Bradford分析进行蛋白质浓度分析。将上述上清液A和上清液B合并，并将合并的上清液以18,000×g离心15分钟，然后将所得上清液转移到新管中，并在真空离心机中于55℃干燥。干燥的样品在100微升甲醇：水(1：1)中重构，并在4℃下以18,000×g离心10分钟，然后将上清液转移至表面活性自动进样器样品瓶进行分析。
(4)液相色谱和质谱联用测定NAD+含量：参照文献“Evans,C.et al NAD+metabolite levels as a function of vitamins and calorie restriction evidencefor diffirent mechanisms of longevity.BMC.Chem.Bio.10,2(2010)”中的方法进行微小修改检测NAD+的含量。具体方法如下：液相部分使用来自Agilent(Santa Clara，CA)的1200系列HPLC，分离柱使用来自Phenomenex(Torrance，CA)的LunaNH2HILIC分离柱(规格100×2mm，5μm)。缓冲液A为100％乙腈，缓冲液B是将水和20mM的醋酸铵(由20mM的氨水调节pH9.6的20mM的醋酸铵)按照体积比为95：5的比例混匀得到的溶液。10微升纯化的样品以0.6mL/min的流速梯度分离：线性梯度在0-6分钟缓冲液B从5％升到100％，6-9.5分钟100％的B，然后在9.5到10.5分钟从100％降到5％的B，最后10.5到14分钟以5％的B平衡。柱温保持在15℃。质谱分析由Agilent6410三重四极杆质谱仪正电离模式下进行。干燥气温度为300℃，流速为12mL/min，喷雾器的压力是30磅/平方英寸，毛细管电压为4000V。通过标准品的分析获得的实验优化条件，最终在MRM模式下获得NAD+的数据。在柱上的浓度范围为0.25-250ng，核酸/核苷酸的色谱柱上的校准标准品的浓度范围为1-1000ng。使用AgilentMasshunter定量分析软件构建每种NAD+的校准曲线。使用校准曲线对PBMC的结果进行定量以获得柱上浓度，然后使用从PBMC提取保留的沉淀的蛋白质浓度对结果进行标准化。
二、试验结果
对各组试验数据进行统计学t检验分析。结果见表1。NAD+含量值表示为pmol/mg蛋白质，n表示试验者例数，试验组A，B，C和对照组经统计学T检验后，其结果用P值表示。P值＜0.05或＜0.01均表示明显差异。
表1
Figure BDA0002312933740000091
综上所述，试验组A组与对照组比较，P值＜0.05，说明有显著差异。试验组B组和C组和对照组比较，P值均为P＜0.01，说明有非常显著差异。应用试验结果证实：中老年人饮用含有烟酰胺核糖核苷的牛奶6周后均能提高人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量，从而有益于延长中老年人的健康寿命。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种牛奶，其包括生牛乳、烟酰胺核糖苷、烟酰胺和乳糖酶。
2.根据权利要求1所述的牛奶，其特征在于：所述生牛乳、所述烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺和所述乳糖酶的质量比为(900-1000):(0.5-1.5):3:(1-3)。
3.根据权利要求1或2所述的牛奶，其特征在于：所述牛奶还包括乳化剂、增稠剂、防腐剂、抗氧化剂和稳定剂。
4.根据权利要求1-3任一所述的牛奶，其特征在于：
所述乳化剂为硬脂酸甘油酯；
或，所述增稠剂为D-甘露糖醇；
或，所述防腐剂为溶菌酶；
或，所述抗氧化剂为维生素E；
或，所述稳定剂为姜黄素。
5.根据权利要求1-4任一所述的牛奶，其特征在于：所述烟酰胺核糖苷为氯化烟酰胺核糖苷。
6.根据权利要求1-5任一所述的牛奶，其特征在于：所述生牛乳、所述氯化烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺、所述乳糖酶、所述硬脂酸甘油酯、所述D-甘露糖醇、所述溶菌酶、所述维生素E和所述姜黄素的质量比为(900-1000):(0.5-1.5):3:(1-3):(1-3):(1-3):(1-3):(1-3):(1-3)。
7.权利要求1-6任一所述的牛奶的制备方法，包括如下步骤：
1)将权利要求1-6中所述烟酰胺核糖苷、所述烟酰胺、所述乳糖酶、所述乳化剂、所述增稠剂、所述防腐剂、所述抗氧化剂和所述稳定剂混匀，得到混合原料；
2)将所述混合原料先在室温下进行第一次搅拌，然后在60-70℃下进行第二次搅拌，再冷却至室温后加入权利要求1-6中所述生牛乳进行第三次搅拌，灭菌，得到所述牛奶。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述第一次搅拌的条件为600-700转/min搅拌10-20min；
或，所述第二次搅拌的条件为600-700转/min搅拌10-20min；
或，所述第三次搅拌的条件为600-700转/min搅拌10-20min；
或，所述灭菌的条件为65-70℃灭菌30-40min。
9.按照权利要求7或8所述方法制备得到的牛奶。
10.权利要求1-6任一所述的牛奶或按照权利要求7或8所述方法制备的牛奶在如下(1)-(4)任一种中的应用：
(1)提高人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量；
(2)制备提高人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量的产品；
(3)延长人类健康寿命或延长人类寿命；
(4)制备延长人类健康寿命或延长人类寿命的产品。
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