CN110964677A - 一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，包括如下步骤：菌种培养活化：在无菌操作下，用无菌微量吸管，从已溶解的管中吸取50μL的菌液，滴入固态指定培养基边缘附近，以划线法接种于培养基；菌种接种繁殖：将活化后的芽孢杆菌溶液转接到液体培养基上进行接种繁殖，传代繁殖2~3次，获取芽孢杆菌的种子液；基体消毒灭菌：将用于固态发酵的固体培养基放入到高温灭菌箱内进行消毒灭菌，获取纯净健康的固态培养基；菌种固体发酵：将芽孢杆菌的种子液接种到灭菌后的固态培养基上，并在35~45摄氏度的无菌环境下进行发酵培养，本发明设计合理，能够快速大量地进行芽孢杆菌的发酵培育，且芽孢杆菌活性较高，大大提高了芽孢杆菌的发酵效率以及发酵质量。
Description
技术领域
本发明涉及菌种培养技术领域，尤其涉及一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法。
背景技术
芽孢杆菌属，细菌的一属，能形成芽孢。它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处。芽孢杆菌属细菌较大，革兰氏阳性、是严格需氧或兼性厌氧的有荚膜的杆菌。该属细菌的重要特性是能够产生对不利条件具有特殊抵抗力的芽孢。芽孢杆菌属可分为以下亚群：多黏芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌（包括蜡样芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌）、短芽孢杆菌和炭疽芽孢杆菌。芽孢杆菌具有耐高温、快速复活和较强分泌酶等特点，在有氧和无氧条件下都能存活。在营养缺乏、干旱等条件下形成芽孢，在条件适宜时又可以重新萌发成营养体。
但是现有的芽孢杆菌在发酵培育的过程中，芽孢杆菌的繁殖率不高，并且芽孢杆菌在发酵培育的过程中，芽孢杆菌出现了失活现象，大大降低了芽孢杆菌的发酵培育效率，存在一定的缺陷。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述问题，提供一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，能够大量快速地进行芽孢杆菌的繁殖培育，提升芽孢杆菌的发酵培育效率。
为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现：
一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，包括如下步骤：
S100、菌种培养活化：在无菌操作下，用无菌微量吸管，从已溶解的管中吸取50μL的菌液，滴入固态指定培养基边缘附近，以划线法接种于培养基；
S200、菌种接种繁殖：将活化后的芽孢杆菌溶液转接到液体培养基上进行接种繁殖，传代繁殖2~3次，获取芽孢杆菌的种子液；
S300、基体消毒灭菌：将用于固态发酵的固体培养基放入到高温灭菌箱内进行消毒灭菌，获取纯净健康的固态培养基；
S400、菌种固体发酵：将芽孢杆菌的种子液接种到灭菌后的固态培养基上，并在35~45摄氏度的无菌环境下进行发酵培养。
优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S100中，固态指定培养基为为固体琼脂板。
优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S200中，菌种接种繁殖在振动环境下进行，且菌种接种繁殖的振动频率为10~30Hz。
优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S200中，菌种接种繁殖过程中监测液体培养基的pH，并调节pH保持在6.8~7.2。
优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S200中，液体培养基成分及百分比含量为：
胰蛋白胨： 0.5~0.8%；
酵母膏： 1.5~2.0%；
磷酸氢二钾： 0.3~0.5%；
葡萄糖： 0.2~0.5%；
蒸馏水： 余量。
优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S300中，固体培养基成分及百分比含量为：
胰蛋白胨： 0.5~0.8%；
肉浸液： 1.5~2.0%；
磷酸氢二钾： 0.3~0.5%；
葡萄糖： 0.2~0.5%；
氯化钠： 0.1~0.2%；
琼脂： 1.5~3.0%；
蒸馏水： 余量。
优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S400中，菌种固体发酵在无菌环境下进行，并且与外部环境进行隔离培养。
本发明的有益效果是：
本发明设计合理，在芽孢杆菌传代培育以及固体发酵过程中，对芽孢杆菌进行渗透压以及pH进行合理调节，有效地避免了芽孢杆菌在渗透失衡而失活，同时也避免了芽孢杆菌因酸碱不均衡而造成的失活，良好的培育环境，大大提升了芽孢杆菌的发酵效率以及发酵质量。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明固体发酵凝结芽孢杆菌的方法流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1所示，本实施例为一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，包括如下步骤：
S100、菌种培养活化：在无菌操作下，用无菌微量吸管，从已溶解的管中吸取50μL的菌液，滴入固态指定培养基边缘附近，以划线法接种于培养基，其中固态指定培养基为为固体琼脂板；
S200、菌种接种繁殖：将活化后的芽孢杆菌溶液转接到液体培养基上进行接种繁殖，传代繁殖2~3次，获取芽孢杆菌的种子液，其中菌种接种繁殖在振动环境下进行，且菌种接种繁殖的振动频率为10~30Hz，另外菌种接种繁殖过程中监测液体培养基的pH，并调节pH保持在6.8~7.2，pH调节，能够有效地保证芽孢杆菌传代培育环境的酸碱平衡度，；
菌种接种繁殖中的液体培养基成分及百分比含量为：
胰蛋白胨： 0.5~0.8%；
酵母膏： 1.5~2.0%；
磷酸氢二钾： 0.3~0.5%；
葡萄糖： 0.2~0.5%；
蒸馏水： 余量。
S300、基体消毒灭菌：将用于固态发酵的固体培养基放入到高温灭菌箱内进行消毒灭菌，获取纯净健康的固态培养基，其中固体培养基成分及百分比含量为：
胰蛋白胨： 0.5~0.8%；
肉浸液： 1.5~2.0%；
磷酸氢二钾： 0.3~0.5%；
葡萄糖： 0.2~0.5%；
氯化钠： 0.1~0.2%；
琼脂： 1.5~3.0%；
蒸馏水： 余量。
其中，氯化钠添加，能够有效地对培养基的渗透压进行调节，避免了芽孢杆菌因渗透失衡而造成的脱水和失水现象，有效地保证了芽孢杆菌的活性，大大提高了芽孢杆菌的发酵质量。
S400、菌种固体发酵：将芽孢杆菌的种子液接种到灭菌后的固态培养基上，并在35~45摄氏度的无菌环境下进行发酵培养，菌种固体发酵在无菌环境下进行，并且与外部环境进行隔离培养，避免外部菌种对芽孢杆菌造成污染。
本发明设计合理，本发明设计合理，在芽孢杆菌传代培育以及固体发酵过程中，对芽孢杆菌进行渗透压以及pH进行合理调节，有效地避免了芽孢杆菌在渗透失衡而失活，同时也避免了芽孢杆菌因酸碱不均衡而造成的失活，良好的培育环境，大大提升了芽孢杆菌的发酵效率以及发酵质量。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (7)
1.一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，其特征在于：包括如下步骤：
S100、菌种培养活化：在无菌操作下，用无菌微量吸管，从已溶解的管中吸取50μL的菌液，滴入固态指定培养基边缘附近，以划线法接种于培养基；
S200、菌种接种繁殖：将活化后的芽孢杆菌溶液转接到液体培养基上进行接种繁殖，传代繁殖2~3次，获取芽孢杆菌的种子液；
S300、基体消毒灭菌：将用于固态发酵的固体培养基放入到高温灭菌箱内进行消毒灭菌，获取纯净健康的固态培养基；
S400、菌种固体发酵：将芽孢杆菌的种子液接种到灭菌后的固态培养基上，并在35~45摄氏度的无菌环境下进行发酵培养。
2.根据权利要求1所述的固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤S100中，固态指定培养基为为固体琼脂板。
3.根据权利要求1所述的固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤S200中，菌种接种繁殖在振动环境下进行，且菌种接种繁殖的振动频率为10~30Hz。
4.根据权利要求1所述的固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤S200中，菌种接种繁殖过程中监测液体培养基的pH，并调节pH保持在6.8~7.2。
5.根据权利要求1所述的固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤S200中，液体培养基成分及百分比含量为：
胰蛋白胨： 0.5~0.8%；
酵母膏： 1.5~2.0%；
磷酸氢二钾： 0.3~0.5%；
葡萄糖： 0.2~0.5%；
蒸馏水： 余量。
6.根据权利要求1所述的固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤S300中，固体培养基成分及百分比含量为：
胰蛋白胨： 0.5~0.8%；
肉浸液： 1.5~2.0%；
磷酸氢二钾： 0.3~0.5%；
葡萄糖： 0.2~0.5%；
氯化钠： 0.1~0.2%；
琼脂： 1.5~3.0%；
蒸馏水： 余量。
7.根据权利要求1所述的固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤S400中，菌种固体发酵在无菌环境下进行，并且与外部环境进行隔离培养。
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20200407 |