CN110934240A - 一种南美白对虾微生物发酵饲料及其制备和投喂方法 - Google Patents
一种南美白对虾微生物发酵饲料及其制备和投喂方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种南美白对虾微生物发酵饲料及其制备和投喂方法。本发明包括以下步骤：(1)制备复合菌生物膜；(2)制备中草药提取物；(3)与饲料混合；(4)密封发酵；(5)添加复合微量元素。本发明通过将复合菌种制备成生物膜，结合中草药提取物对基础饲料进行发酵，并结合多种微量元素，制备的微生物发酵饲料营养价值和利用转化率均较高，在促进对虾生长的同时能够显著减少细菌病害发生，同时发酵工艺简单，利于实际应用推广。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种南美白对虾微生物发酵饲料及其制备和投喂方法。
背景技术
南美白对虾也称凡纳滨对虾，原产于太平洋沿岸水域秘鲁北部至墨西哥桑诺拉一带，1988年引入我国养殖。由于其生长迅速、抗逆性强、营养价值高、耐高密度和低盐度养殖等优点，引种后迅速成为我国养殖对虾的绝对优势品种。受对虾不同生长时期以及蛋白源氨基酸种类和比例的影响，关于南美白对虾饲料中最适蛋白水平的研究结果相差甚远。大量国外研究指出，凡纳滨对虾幼虾时期蛋白需求量为25-35％。我国对虾养殖者为了保证虾苗前期的营养，养殖前期大量投喂蛋白含量超过45％的开口饵料和破碎料，高蛋白饲料不仅增加了虾苗肝胰脏负荷，残饵和粪便更会导致养殖环境的恶化，致使有害菌滋生，最终导致大规模虾病爆发。而对于养殖过程中的病害防治，常用的方法主要是大量使用抗生素、季铵盐和碘制剂等消毒剂，不仅破坏生态平衡，还会在对虾体内残留，通过食物链富集直接危害人类健康。发明专利CN201310493374.7公开了一种南美白对虾微生物发酵饲料，其直接将活菌加入市售饲料中进行发酵制备成微生物发酵饲料，但由于对虾养殖水体微生态环境复杂，发酵饲料中的微生物无法稳定生存，可能导致水体进一步酸化，同时也无法促进南美白对虾的肠道细菌平衡，进而导致病害的发生。
发明内容
针对以上技术问题，本发明的目的是提供一种南美白对虾微生物发酵饲料及其制备和投喂方法，能够高效稳定地提高饲料利用率和消化吸收率，促进对虾肠道细菌平衡，体长体重增加，抵御病原菌能力和细菌性病害防控率提高。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
首先，本发明提供一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)制备复合菌生物膜：将按质量百分比枯草芽孢杆菌25-45％、解淀粉芽孢杆菌30-40％、沼泽红假单胞菌10-25％和假丝酵母菌5-20％组成的复合菌接种至液体培养基中培养，取200ml培养液涂布于固体培养基上再次培养；刮取固体培养基表面培养物，用PBS重悬和超声波震荡处理，得到悬浊液则为所述复合菌生物膜；
(2)制备中草药提取物：将黄芪和板蓝根粉碎，加水煎煮2-4h，重复提取一次，合并两次滤液，再次过滤后将滤液旋转蒸发浓缩至原体积的5-10％，加入乙醇至浓缩滤液中乙醇含量为70-80％，静置12-18h后抽滤，将获得的沉淀依次用无水乙醇和丙酮酸洗涤，即得到所述中草药提取物；
(3)与饲料混合：将所述复合菌生物膜和中草药提取物添加到基础饲料中，所述复合菌生物膜、中草药提取物和基础饲料的质量比为0.5-1.5:0.1-0.5:10，避光阴干后加入0.5-1％褐藻酸钠溶液混合均匀，得到待发酵饲料；
(4)密封发酵：将所述待发酵饲料装入密封容器内，常温密封发酵，密封容器中心温度升至45-48℃时发酵完成，得到发酵饲料初产品；
(5)添加复合微量元素：在所述发酵饲料初产品中加入羟基蛋氨酸铜10-15mg/kg、蛋氨酸锌60-70mg/kg、蛋氨酸锰20-25mg/kg、蛋氨酸钴15-30mg/kg和蛋氨酸硒0.3-0.5mg/kg，混合均匀，风干即得所述南美白对虾微生物发酵饲料。
进一步地，所述步骤(1)中复合菌在液体培养基中于35-37℃下培养12-18h。
进一步地，所述步骤(1)中固体培养基于35-37℃下培养72-96h。
进一步地，所述步骤(2)中黄芪和板蓝根的质量比为10:1-5。
进一步地，所述步骤(2)中黄芪和板蓝根以1g:10-20ml的比例加水煎煮。
进一步地，所述步骤(3)中的中草药提取物先溶解于水中，然后均匀喷洒于基础饲料表面。
进一步地，所述步骤(3)的基础饲料中粗蛋白质量百分比含量≥43％。
进一步地，所述南美白对虾微生物发酵饲料中每克饲料中活菌含量≥108CFU。
其次，本发明提供上述制备方法制备的一种南美白对虾微生物发酵饲料。
最后，本发明还提供了上述南美白对虾微生物发酵饲料的投喂方法，所述投喂方法具体为：每日早、中、晚共投喂3次，日投喂量为对虾体重的10-15％。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明选择特定组分的复合菌种，先制备生物膜再加入基础饲料中，相比于直接加入的游离活菌能够更长效稳定且快速地将基础饲料中不易吸收的营养物质分解转化为容易消化吸收的葡萄糖、氨基酸等小分子物质，降解或消除饲料原料中存在的抗营养因子，从减少对虾粪便中氮对池塘底质水质的污染，改善池塘养殖环境。同时调节对虾肠道细菌环境，发酵过程中产生大量的活性物质，还能提高对虾免疫力，抵御多种细菌病害。结合黄芪和板蓝根提取物进行发酵，能进一步杀灭病原生物，并促进对虾生长，可以解决化学药物、抗生素等引发的抗(耐)药性和养殖动物药残超标等问题。发酵完成后加入多种微量元素，在对虾生长代谢、免疫、疾病预防、性腺发育等方面均具有重要作用。
综上所述，本发明通过将复合菌种制备成生物膜，结合中草药提取物对基础饲料进行发酵，并结合多种微量元素，制备的微生物发酵饲料营养价值和利用转化率均较高，在促进对虾生长的同时能够显著减少细菌病害发生，同时发酵工艺简单，利于实际应用推广。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例中所使用的材料均可自常规途径购买得到，所用的基础饲料购自青岛玖瑞大海跃饲料科技有限公司。
实施例1
一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备复合菌生物膜：将按质量百分比枯草芽孢杆菌25％、解淀粉芽孢杆菌30％、沼泽红假单胞菌25％和假丝酵母菌20％组成的复合菌接种至液体培养基中于35-37℃下培养12-18h，取200ml培养液涂布于固体培养基上于35-37℃下再次培养72-96h；刮取固体培养基表面培养物，用PBS重悬和超声波震荡处理，得到悬浊液则为所述复合菌生物膜；
(2)制备中草药提取物：将质量比为10:1的黄芪和板蓝根粉碎，以1g:10ml的比例加水煎煮2-4h，重复提取一次，合并两次滤液，再次过滤后将滤液旋转蒸发浓缩至原体积的10％，加入乙醇至浓缩滤液中乙醇含量为70％，静置12-18h后抽滤，将获得的沉淀依次用无水乙醇和丙酮酸洗涤，即得到所述中草药提取物；
(3)与饲料混合：将所述中草药提取物先溶解于水中，然后均匀喷洒于基础饲料表面，与复合菌生物膜一起添加到基础饲料中，所述基础饲料中粗蛋白质量百分比含量≥43％；所述复合菌生物膜、中草药提取物和基础饲料的质量比为0.5:0.1:10，避光阴干后加入0.5-1％褐藻酸钠溶液混合均匀，得到待发酵饲料；
(4)密封发酵：将所述待发酵饲料装入密封容器内，常温密封发酵，密封容器中心温度升至45-48℃时发酵完成，得到发酵饲料初产品；
(5)添加复合微量元素：在所述发酵饲料初产品中加入羟基蛋氨酸铜10mg/kg、蛋氨酸锌60mg/kg、蛋氨酸锰20mg/kg、蛋氨酸钴30mg/kg和蛋氨酸硒0.5mg/kg，混合均匀，风干即得所述南美白对虾微生物发酵饲料，每克南美白对虾微生物发酵饲料中活菌含量≥108CFU。
实施例2
一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备复合菌生物膜：将按质量百分比枯草芽孢杆菌35％、解淀粉芽孢杆菌35％、沼泽红假单胞菌15％和假丝酵母菌15％组成的复合菌接种至液体培养基中于35-37℃下培养12-18h，取200ml培养液涂布于固体培养基上于35-37℃下再次培养72-96h；刮取固体培养基表面培养物，用PBS重悬和超声波震荡处理，得到悬浊液则为所述复合菌生物膜；
(2)制备中草药提取物：将质量比为10:3的黄芪和板蓝根粉碎，以1g:15ml的比例加水煎煮2-4h，重复提取一次，合并两次滤液，再次过滤后将滤液旋转蒸发浓缩至原体积的5％，加入乙醇至浓缩滤液中乙醇含量为75％，静置12-18h后抽滤，将获得的沉淀依次用无水乙醇和丙酮酸洗涤，即得到所述中草药提取物；
(3)与饲料混合：将所述中草药提取物先溶解于水中，然后均匀喷洒于基础饲料表面，与复合菌生物膜一起添加到基础饲料中，所述基础饲料中粗蛋白质量百分比含量≥43％；所述复合菌生物膜、中草药提取物和基础饲料的质量比为1.5:0.5:10，避光阴干后加入0.5-1％褐藻酸钠溶液混合均匀，得到待发酵饲料；
(4)密封发酵：将所述待发酵饲料装入密封容器内，常温密封发酵，密封容器中心温度升至45-48℃时发酵完成，得到发酵饲料初产品；
(5)添加复合微量元素：在所述发酵饲料初产品中加入羟基蛋氨酸铜15mg/kg、蛋氨酸锌65mg/kg、蛋氨酸锰20mg/kg、蛋氨酸钴25mg/kg和蛋氨酸硒0.4mg/kg，混合均匀，风干即得所述南美白对虾微生物发酵饲料，每克南美白对虾微生物发酵饲料中活菌含量≥108CFU。
实施例3
一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备复合菌生物膜：将按质量百分比枯草芽孢杆菌45％、解淀粉芽孢杆菌40％、沼泽红假单胞菌10％和假丝酵母菌5％组成的复合菌接种至液体培养基中于35-37℃下培养12-18h，取200ml培养液涂布于固体培养基上于35-37℃下再次培养72-96h；刮取固体培养基表面培养物，用PBS重悬和超声波震荡处理，得到悬浊液则为所述复合菌生物膜；
(2)制备中草药提取物：将质量比为10:5的黄芪和板蓝根粉碎，以1g:20ml的比例加水煎煮2-4h，重复提取一次，合并两次滤液，再次过滤后将滤液旋转蒸发浓缩至原体积的10％，加入乙醇至浓缩滤液中乙醇含量为80％，静置12-18h后抽滤，将获得的沉淀依次用无水乙醇和丙酮酸洗涤，即得到所述中草药提取物；
(3)与饲料混合：将所述中草药提取物先溶解于水中，然后均匀喷洒于基础饲料表面，与复合菌生物膜一起添加到基础饲料中，所述基础饲料中粗蛋白质量百分比含量≥43％；所述复合菌生物膜、中草药提取物和基础饲料的质量比为1.0:0.3:10，避光阴干后加入0.5-1％褐藻酸钠溶液混合均匀，得到待发酵饲料；
(4)密封发酵：将所述待发酵饲料装入密封容器内，常温密封发酵，密封容器中心温度升至45-48℃时发酵完成，得到发酵饲料初产品；
(5)添加复合微量元素：在所述发酵饲料初产品中加入羟基蛋氨酸铜10mg/kg、蛋氨酸锌70mg/kg、蛋氨酸锰25mg/kg、蛋氨酸钴15mg/kg和蛋氨酸硒0.3mg/kg，混合均匀，风干即得所述南美白对虾微生物发酵饲料，每克南美白对虾微生物发酵饲料中活菌含量≥108CFU。
对比例1为基础饲料。
对比例2与实施例1的区别在于未加入复合菌生物膜。
对比例3与实施例1的区别在于将复合菌直接加入基础饲料中。
对比例4与实施例1的区别在于未加入中草药提取物。
对比例5与实施例1的区别在于未加入复合微量元素。
分别使用实施例1-3和对比例1-5的饲料投喂南美白对虾，投喂方法具体为：每日早、中、晚共投喂3次，日投喂量为对虾体重的10-15％。其他饲养方法一致，测量不同处理下投喂15天后对虾平均体长和体重，计算增长率、增重率、成活率和饵料效率，然后采用哈维氏弧菌进行攻毒实验，记录对虾累计死亡率，结果如下所示。
表1投喂不同饲料对虾生长情况比较
| 增重率(％) | 增长率(％) | 成活率(％) | 饵料效率(％) | |
| 实施例1 | 94.7 | 34.6 | 86.3 | 116 |
| 实施例2 | 95.6 | 35.7 | 88.6 | 114 |
| 实施例3 | 95.3 | 35.5 | 89.2 | 117 |
| 对比例1 | 67.3 | 18.3 | 69.5 | 101 |
| 对比例2 | 71.0 | 19.6 | 72.3 | 102 |
| 对比例3 | 80.7 | 24.8 | 74.7 | 108 |
| 对比例4 | 83.5 | 29.2 | 80.6 | 111 |
| 对比例5 | 87.3 | 30.5 | 82.7 | 112 |
由表1数据可知，与对比例1的基础饲料相比，投喂本发明制备的微生物发酵饲料的实施例1-3中对虾的增重率、增长率、成活率明显提高，饵料效率最高达到117％，说明本发明的微生物发酵饲料能够显著提高饲料利用率和南美白对虾的消化吸收率，有利于对虾生长。
与基础饲料相比，将复合菌直接加入基础饲料中的对比例3也具有一定的促进对虾生长的效果，但其投喂下的对虾生长情况和饵料效率均低于实施例1。对比例2、对比例4和对比例5也呈现类似趋势。
表2投喂不同饲料对虾攻毒实验累计死亡率比较
由表2数据可知，攻毒1-7天内，投喂基础饲料的对比例1中对虾累积死亡率显著高于实施例1-3。投喂不同底料的对虾累积死亡率在5天后趋于稳定，至7天后攻毒实验结束时，对比例1累积死亡率最高，达到67.5％，实施例1对虾累积死亡率最低，为32.8％。说明本发明制备的微生物发酵饲料投喂后能够促进对虾的生长，并显著增强免疫力，具有减少对虾病害发生的效果。
与基础饲料相比，将复合菌直接加入基础饲料中的对比例3也具有一定的增强对虾免疫力的效果，但其投喂下的对虾累计死亡率仍高于实施例1。对比例2、对比例4和对比例5也呈现类似趋势。
Claims (10)
1.一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备复合菌生物膜：将按质量百分比枯草芽孢杆菌25-45％、解淀粉芽孢杆菌30-40％、沼泽红假单胞菌10-25％和假丝酵母菌5-20％组成的复合菌接种至液体培养基中培养，取200ml培养液涂布于固体培养基上再次培养；刮取固体培养基表面培养物，用PBS重悬和超声波震荡处理，得到悬浊液则为所述复合菌生物膜；
(2)制备中草药提取物：将黄芪和板蓝根粉碎，加水煎煮2-4h，重复提取一次，合并两次滤液，再次过滤后将滤液旋转蒸发浓缩至原体积的5-10％，加入乙醇至浓缩滤液中乙醇含量为70-80％，静置12-18h后抽滤，将获得的沉淀依次用无水乙醇和丙酮酸洗涤，即得到所述中草药提取物；
(3)与饲料混合：将所述复合菌生物膜和中草药提取物添加到基础饲料中，所述复合菌生物膜、中草药提取物和基础饲料的质量比为0.5-1.5:0.1-0.5:10，避光阴干后加入0.5-1％褐藻酸钠溶液混合均匀，得到待发酵饲料；
(4)密封发酵：将所述待发酵饲料装入密封容器内，常温密封发酵，密封容器中心温度升至45-48℃时发酵完成，得到发酵饲料初产品；
(5)添加复合微量元素：在所述发酵饲料初产品中加入羟基蛋氨酸铜10-15mg/kg、蛋氨酸锌60-70mg/kg、蛋氨酸锰20-25mg/kg、蛋氨酸钴15-30mg/kg和蛋氨酸硒0.3-0.5mg/kg，混合均匀，风干即得所述南美白对虾微生物发酵饲料。
2.根据权利要求1所述的一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中复合菌在液体培养基中于35-37℃下培养12-18h。
3.根据权利要求1所述的一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中固体培养基于35-37℃下培养72-96h。
4.根据权利要求1所述的一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中黄芪和板蓝根的质量比为10:1-5。
5.根据权利要求1所述的一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中黄芪和板蓝根以1g:10-20ml的比例加水煎煮。
6.根据权利要求1所述的一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的中草药提取物先溶解于水中，然后均匀喷洒于基础饲料表面。
7.根据权利要求1所述的一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)的基础饲料中粗蛋白质量百分比含量≥43％。
8.根据权利要求1所述的一种南美白对虾微生物发酵饲料的制备方法，其特征在于，所述南美白对虾微生物发酵饲料中每克饲料中活菌含量≥108CFU。
9.一种如权利要求1-8任一项所述的制备方法制备的南美白对虾微生物发酵饲料。
10.如权利要求9所述的南美白对虾微生物发酵饲料的投喂方法，其特征在于，所述投喂方法具体为：每日早、中、晚共投喂3次，日投喂量为对虾体重的10-15％。
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|---|---|---|---|---|
| CN113519423A (zh) * | 2021-07-16 | 2021-10-22 | 广东省老科学技术工作者协会 | 一种复方中药辅助的罗氏虾/南美白对虾健康养殖方法 |
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