CN110923200A - 一种精子培养液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种精子培养液及其配置方法，所述精子培养液由包括基础培养液和如下组分的原料制备而成：辅酶Q10 0.5‑2ug/ml；己酮可可碱0.5‑5mg/ml；杀菌剂20‑100ug/ml；所述基础液由包括以下组分的原料制备而成：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸的摩尔比为(94.25‑160.4):(0.1‑6):(1‑22):(0.01‑1.1):(0.01‑0.6)。上述精子培养液可以为精子提供稳定的培养环境，减少活性氧对精子的伤害，还能提高精子活力，提高精液质量，有助于提高受精率。
Description
技术领域
本发明涉及辅助生殖技术领域，具体涉及一种精子培养液及其制备方法。
背景技术
目前，由于环境、食品及生活压力等各方面的影响，不孕不育的夫妻数量正在增多。据报道，中国的不孕不育者已经超过了4000万，中国育龄夫妇的不孕不育率从20年前的3％攀升到近年的15％左右。男性不育主要集中在无精子症、少精子症、弱精子症、精子无力症和精子数正常性不孕。目前辅助生殖治疗可用于帮助不孕不育患者，在辅助生殖治疗中需采集良好的精子和卵细胞进行体外受精，精子的活力决定着能否正常授精。精子培养液的目的主要是提供精子存活的营养和改善精子活力。
精子在体外培养过程中会产生过量的活性氧，精子特异性的细胞结构使得精子对活性氧更敏感，更容易受到活性氧的损害。活性氧的危害主要在于破坏精子细胞形态，影响受精过程中的顶体反应。
辅酶Q是生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物，不同来源的辅酶Q其侧链异戊烯单位的数目不同，人类和哺乳动物是10个异戊烯单位，故称辅酶Q10，其是一种重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂。辅酶Q10作为电子载体，是线粒体呼吸链中重要的参与者，对ATP合成至关重要。在人体细胞器中，线粒体中辅酶Q10的含量最多，约为40％～50％，说明辅酶Q10对线粒体功能具有重要影响。作为质子载体分子，辅酶Q10可以激活解偶联蛋白，消除线粒体内膜两侧的跨膜质子浓度差，调节膜电位，减慢氧化磷酸化过程，抑制活性氧产生。
己酮可可碱(pentoxifylline，PF)为黄嘌吟衍生物，是一种非选择性磷酸二酚酶抑制剂，能阻断cAMP(环腺苷酸)转变为AMP(腺苷酸)，使胞内cAMP升高，cAMP在顶体反应调控方面有一定的作用，并且己酮可可碱与甲基黄嘌吟族内其他药物相比，其作用时间长、有较高的水溶性，可明显改善少精子症和弱精子症的精子活力，甚至于在冲洗和离心去除己酮可可碱后的较长时间内仍能持续其药理作用。
发明内容
基于此，本发明提供一种精子培养液及其制备方法，所述精子培养液可以为精子提供稳定的培养环境，减少活性氧对精子的伤害，还能提高精子活力，有助于提高受精率。
具体技术方案为：
一种精子培养液，所述精子培养液由包括基础培养液和如下组分的原料制备而成：
辅酶Q10 0.5-2ug/ml；
己酮可可碱 0.5-5mg/ml；
杀菌剂 20-100ug/ml；
所述基础培养液由包括以下组分的原料制备而成：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸的摩尔比为(94.25-160.4):(0.1-6):(1-22):(0.01-1.1):(0.01-0.6)。
在其中一些实施例中，所述精子培养液由包括基础培养液和如下组分的原料制备而成：
辅酶Q10 0.8-1.5ug/ml；
己酮可可碱 0.8-2.5mg/ml；
杀菌剂 40-60ug/ml
所述基础培养液由包括以下组分的原料制备而成：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸的摩尔比为(112.5-134.6):(0.4-0.7):(9-11):(0.3-0.4):(0.08-0.12)。
在其中一些实施例中，所述精子培养液由包括基础培养液和如下组分的原料制备而成：
辅酶Q10 1ug/ml；
己酮可可碱 1mg/ml；
杀菌剂 50ug/ml；
所述基础培养液由包括以下组分的原料制备而成：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸的摩尔比为123.63:0.5:10.5:0.32:0.1。
在其中一些实施例中，所述无机盐缓冲液由包括以下组分的原料制备而成：氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙，且所述氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为(80-110):(3.5-8):(0.05-1.2):(0.2-3.2):(10-35):(0.5-3)。
在其中一些实施例中，所述无机盐缓冲液由包括以下组分的原料制备而成：氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙，且所述氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为(85-95):(5-6):(0.2-0.4):(0.8-1.2):(20-30):(1.5-2)。
在其中一些实施例中，所述无机盐缓冲液由包括以下组分的原料制备而成：氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙，且所述氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为90.08:5.5:0.25:1:25:1.8。
本申请发明人经过大量的研究分析发现，当所述精子培养液中辅酶Q10浓度为1ug/ml，己酮可可碱浓度为1mg/ml，基础培养液的制备原料无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸的摩尔比为120.5:0.5:10.5:0.32:0.1，且无机盐缓冲液的制备原料氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为90.08:5.5:0.25:1:25:1.8时，所述精子培养液可取得更好的精子培养效果，能更有效地减少活性氧对精子的伤害，提高精子活力。
在其中一些实施例中，所述杀菌剂选自青霉素、链霉素、庆大霉素中一种或多种。
在其中一些实施例中，所述杀菌剂为庆大霉素。
本发明还提供了上述精子培养液的制备方法。
具体技术方案为：
一种精子培养液的制备方法，包括以下步骤：
1)在百级无尘车间条件下配制，以医用级纯水为介质，称取无机盐缓冲液的制备原料加到水介质中，混匀后得溶液I；
2)将葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、牛磺酸、杀菌剂按照相应的比例加入步骤1)所述溶液I中，得到溶液II；
3)辅酶Q10和己酮可可碱按照相应的比例加入步骤2)所述溶液II中，即得所述精子培养液。
在其中一些实施例中，所述制备方法的制备过程在温度为18-26℃，湿度为40-60％的条件下进行。
在其中一些实施例中，所述纯水介质为无热源的超纯水。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种由基础培养液、辅酶Q10和己酮可可碱为原料制备而成的精子培养液，辅酶Q10、己酮可可碱和基础培养液成分之间相互配合，相辅相成。在本发明基础培养液中加入辅酶Q10，可有效去除精子在运动过程中产生的活性氧自由基，减少活性氧对精子的伤害，还能提高精子活力，修复细胞损伤；在本发明基础培养液中加入己酮可可碱，更有利于增加精子活力，提高精液质量，增加精卵结合的几率。所述精子培养液配方中原料的变更或缺失，都会影响其对精子的培养效果，降低精子活力和精子质量。
附图说明
图1为精子在实施例1所述精子培养液培养2小时后的精子图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照实施例对本发明进行更全面的描述，以下给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。应理解，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用试剂，均为市售产品。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
实施例1
本实施例一种精子培养液，由包括表1中的原料制备而成：
表1实施例1精子培养液配方
上述精子培养液制备方法包括以下步骤：
1)在百级无尘车间，且温度为25℃，湿度为50％的条件下配制，以医用级无热源的超纯水为介质，称取无机盐缓冲液的制备原料加到水介质中，混匀后得溶液I；
2)将葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、牛磺酸、杀菌剂按照相应的比例加入步骤1)所述溶液I中，得到溶液II；
3)辅酶Q10和己酮可可碱按照相应的比例加入步骤2)所述溶液II中，即得所述精子培养液。
实施例2
本实施例一种精子培养液，由包括表2中的原料制备而成：
表2实施例2精子培养液配方
上述精子培养液制备方法包括以下步骤：
1)在百级无尘车间，且温度为20℃，湿度为45％的条件下配制，以医用级无热源的超纯水为介质，称取无机盐缓冲液的制备原料加到水介质中，混匀后得溶液I；
2)将葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、牛磺酸、杀菌剂按照相应的比例加入步骤1)所述溶液I中，得到溶液II；
3)辅酶Q10和己酮可可碱按照相应的比例加入步骤2)所述溶液II中，即得所述精子培养液。
实施例3
本实施例一种精子培养液，由包括表3中的原料制备而成：
表3实施例3精子培养液配方
| 物料 | 浓度 |
| NaCl | 98mmol/L |
| KC1 | 5.3mmol/L |
| NaH<sub>2</sub>P0<sub>4</sub> | 0.25mmol/L |
| MgSO<sub>4</sub> | 1mmol/L |
| NaHCO<sub>3</sub> | 25mmol/L |
| CaCl<sub>2</sub> | 1.9mmol/L |
| 葡萄糖 | 0.45mmol/L |
| 乳酸钠 | 10.5mmol/L |
| 丙酮酸钠 | 0.35mmol/L |
| 牛磺酸 | 0.11mmol/L |
| 庆大霉素 | 45mg/L |
| 辅酶Q10 | 1mg/L |
| 己酮可可碱 | 1.1g/L |
上述精子培养液制备方法包括以下步骤：
1)在百级无尘车间，且温度为18℃，湿度为40％的条件下配制，以医用级无热源的超纯水为介质，称取无机盐缓冲液的制备原料加到水介质中，混匀后得溶液I；
2)将葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、牛磺酸、杀菌剂按照相应的比例加入步骤1)所述溶液I中，得到溶液II；
3)辅酶Q10和己酮可可碱按照相应的比例加入步骤2)所述溶液II中，即得所述精子培养液。
对比例1
本对比例中一种精子培养液的配方除了不含有辅酶Q10外，其他均与实施例1相同，具体如下表4所示：
表4本对比例精子培养液配方
| 物料 | 浓度 |
| NaCl | 90.08mmol/L |
| KC1 | 5.5mmol/L |
| NaH<sub>2</sub>P0<sub>4</sub> | 0.25mmol/L |
| MgSO<sub>4</sub> | 1mmol/L |
| NaHCO<sub>3</sub> | 25mmol/L |
| CaCl<sub>2</sub> | 1.8mmol/L |
| 葡萄糖 | 0.5mmol/L |
| 乳酸钠 | 10.5mmol/L |
| 丙酮酸钠 | 0.32mmol/L |
| 牛磺酸 | 0.1mmol/L |
| 庆大霉素 | 50mg/L |
| 己酮可可碱 | 1g/L |
上述精子培养液制备方法包括以下步骤：
1)在百级无尘车间，且温度为25℃，湿度为50％的条件下配制，以医用级无热源的超纯水为介质，称取无机盐缓冲液的制备原料加到水介质中，混匀后得溶液I；
2)将葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、牛磺酸、杀菌剂按照相应的比例加入步骤1)所述溶液I中，得到溶液II；
3)己酮可可碱按照相应的比例加入步骤2)所述溶液II中，即得所述精子培养液。
对比例2
本对比例中一种精子培养液的配方除了不含有己酮可可碱外，其他均与实施例1相同，具体如下表5所示：
表5本对比例精子培养液配方
| 物料 | 浓度 |
| NaCl | 90.08mmol/L |
| KC1 | 5.5mmol/L |
| NaH<sub>2</sub>P0<sub>4</sub> | 0.25mmol/L |
| MgSO<sub>4</sub> | 1mmol/L |
| NaHCO<sub>3</sub> | 25mmol/L |
| CaCl<sub>2</sub> | 1.8mmol/L |
| 葡萄糖 | 0.5mmol/L |
| 乳酸钠 | 10.5mmol/L |
| 丙酮酸钠 | 0.32mmol/L |
| 牛磺酸 | 0.1mmol/L |
| 庆大霉素 | 50mg/L |
| 辅酶Q10 | 1mg/L |
上述精子培养液制备方法包括以下步骤：
1)在百级无尘车间，且温度为25℃，湿度为50％的条件下配制，以医用级无热源的超纯水为介质，称取无机盐缓冲液的制备原料加到水介质中，混匀后得溶液I；
2)将葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、牛磺酸、杀菌剂按照相应的比例加入步骤1)所述溶液I中，得到溶液II；
3)辅酶Q10按照相应的比例加入步骤2)所述溶液II中，即得所述精子培养液。
对比例3
本对比例中一种精子培养液的配方除了不含有辅酶Q10和己酮可可碱外，其他均与实施例1相同，具体如下表6所示：
表6本对比例精子培养液配方
| 物料 | 浓度 |
| NaCl | 90.08mmol/L |
| KC1 | 5.5mmol/L |
| NaH<sub>2</sub>P0<sub>4</sub> | 0.25mmol/L |
| MgSO<sub>4</sub> | 1mmol/L |
| NaHCO<sub>3</sub> | 25mmol/L |
| CaCl<sub>2</sub> | 1.8mmol/L |
| 葡萄糖 | 0.5mmol/L |
| 乳酸钠 | 10.5mmol/L |
| 丙酮酸钠 | 0.32mmol/L |
| 牛磺酸 | 0.1mmol/L |
| 庆大霉素 | 50mg/L |
上述精子培养液制备方法包括以下步骤：
1)在百级无尘车间，且温度为25℃，湿度为50％的条件下配制，以医用级无热源的超纯水为介质，称取无机盐缓冲液的制备原料加到水介质中，混匀后得溶液I；
2)将葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、牛磺酸、杀菌剂按照相应的比例加入步骤1)所述溶液I中，得到溶液II，即得所述精子培养液。
对比例4
本对比例中一种精子培养液由市售的精子培养液和辅酶Q10、己酮可可碱为原料制备而成，具体如下表7所示：
表7本对比例精子培养液配方
| 物料 | 浓度 |
| 市售的精子培养液 | -- |
| 辅酶Q10 | 1mg/L |
| 己酮可可碱 | 1g/L |
上述精子培养液制备方法包括以下步骤：
在百级超净台内，温度为25℃，湿度为50％的条件下配制，采用美国COOK公司的市售成品精子培养液(sperm medium,型号K-SISM-20)，将辅酶Q10和己酮可可碱按照相应的比例加入市售精子培养液中，即得所述精子培养液。
对上述实施例和对比例中培养液对精子的培养效果进行检测：
1、检测方法
分别选择健康男性捐赠者、中轻度弱精子症患者、重度弱精子症患者的精子样本。其中，中轻度弱精子症的精子运动参数为50％>(A+B)级>25％，且A级精子<25％；重度弱精子症的精子运动参数为(A+B)级<25％，且A级精子<5％。
(1)精液采集：利用手淫法进行取精，用无菌取精容器收集禁欲一天的精子样品，然后将样品放置35℃培养箱中液化30min，根据WHO1999年的评价标准，使用精液分析仪CASA(IVOS；Hamilton-thorn research,Inc,Beverly,MA,USA)对以下精子参数进行评估：精子计数、活力和运动特性的百分比。
(2)密度梯度离心：采用密度梯度离心法从精液中分选精子，在15ml离心管内放置密度梯度为45％-90％(v/v)的Percoll分离液(45％-90％各2ml，90％在下，45％在上)，在梯度液上缓慢地加入2ml精液，450g离心20分钟，弃上清液。用sperm rinse重悬精子，300g离心10分钟，弃上清液，用sperm rinse重悬精子沉淀得到精子悬液。
(3)精子培养：从步骤(2)获得的精子悬液中选取5*106左右数量的精子，加到上述精子培养液及商品化的HTF-S培养液中，然后置于37℃、6％CO2的培养箱中培养2小时。
(4)活力检测：在培养前和培养2小时后，用精子分析仪CASA分别对各样本的精子活力进行评估。评估时每个样本选取6-10个视野，且计数的精子数目不小于500个。
2、实验结果
结果如8所示：
表8培养液对精子培养2h后检测结果
由表8可知，三种类型的精子在实施例1-3精子培养液中培养2小时后精子活力较培养前均有显著提高。从实施例1-3的培养结果可知，实施例1精子培养液提高精子活力的效果较实施例2和实施例3更好，经实施例1精子培养液培养2h后，正常精子样本活力从培养前的56.38±1.31(均值±标准差)上升到培养后的64.58±2.03；中轻度弱精子症样本活力从培养前的35.28±1.48上升到培养后的47.51±2.23；重度弱精子症样本活力从培养前的11.65±2.38上升到培养后的28.56±3.42。图1为精子在实施例1所述精子培养液培养2小时后的形态图。
从实施例1与对比例1对精子的培养效果比较可知，对比例1中的精子培养液由于缺少辅酶Q10成分，其提高精子活力的效果会下降。从实施例1与对比例2对精子的培养效果比较可知，对比例1中的精子培养液由于缺少己酮可可碱成分，其提高精子活力的效果也会下降。从实施例1与对比例3对精子的培养效果比较可知，对比例3中的精子培养液由于同时缺少辅酶Q10和己酮可可碱成分，其对精子的培养效果明显差于实施例1，同时低于对比例2和对比例3。
与实施例1相比，对比例4中采用现有的常用精子基础培养液代替本发明配方中的基础培养液，虽然对比例4的配方中也加入了与实施例1相同量的辅酶Q10和己酮可可碱，但是其对精子的培养效果明显低于实施例1。
上述结果表明，本发明精子培养液成分之间相互配合，相辅相成。所述精子培养液配方中任何一种原料的变更或缺失，都会影响其对精子的培养效果，降低精子活力和精子质量。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种精子培养液，其特征在于，所述精子培养液由包括基础培养液和如下组分的原料制备而成：
辅酶Q10 0.5-2ug/ml；
己酮可可碱 0.5-5mg/ml；
杀菌剂 20-100ug/ml；
所述基础培养液由包括以下组分的原料制备而成：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸的摩尔比为(94.25-160.4):(0.1-6):(1-22):(0.01-1.1):(0.01-0.6)。
2.根据权利要求1所述的精子培养液，其特征在于，所述精子培养液由包括基础培养液和如下组分的原料制备而成：
辅酶Q10 0.8-1.5ug/ml；
己酮可可碱 0.8-2.5mg/ml；
杀菌剂 40-60ug/ml；
所述基础培养液由包括以下组分的原料制备而成：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸的摩尔比为(112.5-134.6):(0.4-0.7):(9-11):(0.3-0.4):(0.08-0.12)。
3.根据权利要求1-2任一项所述的精子培养液，其特征在于，所述精子培养液由包括基础培养液和如下组分的原料制备而成：
辅酶Q10 1ug/ml；
己酮可可碱 1mg/ml；
杀菌剂 50ug/ml；
所述基础培养液由包括以下组分的原料制备而成：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠和牛磺酸的摩尔比为123.63:0.5:10.5:0.32:0.1。
4.根据权利要求1-3任一项所述的精子培养液，其特征在于，所述无机盐缓冲液由包括以下组分的原料制备而成：氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙，且所述氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为(80-110):(3.5-8):(0.05-1.2):(0.2-3.2):(10-35):(0.5-3)。
5.根据权利要求4所述的精子培养液，其特征在于，所述氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为(85-95):(5-6):(0.2-0.4):(0.8-1.2):(20-30):(1.5-2)。
6.根据权利要求5所述的精子培养液，其特征在于，所述氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为90.08:5.5:0.25:1:25:1.8。
7.根据权利要求1-3任一项所述的精子培养液，其特征在于，所述杀菌剂选自青霉素、链霉素、庆大霉素中一种或多种。
8.根据权利要求1-7任一项所述的精子培养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)在百级无尘车间条件下配制，以医用级纯水为介质，称取无机盐缓冲液的制备原料加到水介质中，混匀后得溶液I；
2)将葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、牛磺酸、杀菌剂按照相应的比例加入步骤1)所述溶液I中，得到溶液II；
3)辅酶Q10和己酮可可碱按照相应的比例加入步骤2)所述溶液II中，即得所述精子培养液。
9.根据权利要求8所述的精子培养液的制备方法，其特征在于，所述制备方法的制备过程在温度为18-26℃，湿度为40-60％的条件下进行。
10.根据权利要求8所述的精子培养液的制备方法，其特征在于，所述纯水介质为无热源的超纯水。
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Cited By (4)
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| CN112592888A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-04-02 | 深圳英莱生命科学有限公司 | 一种精子培养液及其制备方法 |
| CN112608886A (zh) * | 2021-01-05 | 2021-04-06 | 深圳英莱生命科学有限公司 | 卵子与胚胎处理液及其制备方法 |
| CN113508807A (zh) * | 2021-08-05 | 2021-10-19 | 信阳农林学院 | 一种卵巢常温保存液及其保存方法 |
| CN114686423A (zh) * | 2022-04-29 | 2022-07-01 | 南京优而生物科技发展有限公司 | 一种提高小鼠精子活力的htf培养液制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104046590A (zh) * | 2014-06-18 | 2014-09-17 | 郜鸿生物科技（上海）有限公司 | 一种稀少精子体外培养基 |
| CN109628380A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-04-16 | 深圳韦拓生物科技有限公司 | 一种人体外受精液及其制备方法 |
-
2019
- 2019-12-25 CN CN201911360430.3A patent/CN110923200B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104046590A (zh) * | 2014-06-18 | 2014-09-17 | 郜鸿生物科技（上海）有限公司 | 一种稀少精子体外培养基 |
| CN109628380A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-04-16 | 深圳韦拓生物科技有限公司 | 一种人体外受精液及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AHMED T ALAHMAR ET AL.: "The effects of oral antioxidants on the semen of men", 《CLIN EXP REPROD MED》 * |
| 刘容菊: "辅助生殖技术中预防活性氧对精子的损伤", 《生 殖 与 避 孕》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112592888A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-04-02 | 深圳英莱生命科学有限公司 | 一种精子培养液及其制备方法 |
| CN112608886A (zh) * | 2021-01-05 | 2021-04-06 | 深圳英莱生命科学有限公司 | 卵子与胚胎处理液及其制备方法 |
| CN113508807A (zh) * | 2021-08-05 | 2021-10-19 | 信阳农林学院 | 一种卵巢常温保存液及其保存方法 |
| CN114686423A (zh) * | 2022-04-29 | 2022-07-01 | 南京优而生物科技发展有限公司 | 一种提高小鼠精子活力的htf培养液制备方法 |
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| Publication number | Publication date |
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