CN110893171B - 一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法，包括以下步骤：(1)按所述配比量分别称取L‑硒‑甲基硒代半胱氨酸与透明质酸，并按所述配比量量取超纯水，且将所称得的L‑硒‑甲基硒代半胱氨酸溶于超纯水中，经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L‑硒‑甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，然后加入所称得的透明质酸，并在室温下溶胀1‑2天后得到组合物原液；(2)在无菌条件下，将组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2‑8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。本发明制得的用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物能有效减少伤口瘢痕性愈合，且能降低伤口塑形阶段伤口部位的色素沉积。
Description
技术领域
本发明属于伤口瘢痕修复技术领域，具体涉及一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法。
背景技术
瘢痕是指由创伤引起的正常皮肤组织的外观形态和组织病理学的改变，其形成是由于人体皮肤软组织严重损伤而不能完全自行正常修复，转由纤维组织替代，留下既影响功能又影响外观的异常且不健全的组织。瘢痕困扰着大多数人正常的学习和生活，尤其是当瘢痕裸露在外时，会严重影响人们的自尊心和自信心。目前的治疗手段基本上是通过手术修复和药物软化两种方式进行的。手术修复一般是将高于正常皮肤的瘢痕削平，对于呈凹陷状的瘢痕则采取铺皮片的方法将之垫高。虽然手术修复能解决顽固瘢痕，不过手术本身又面临二次瘢痕风险，且无法解决瘢痕颜色与正常皮肤颜色不同的问题。另外，手术治疗花费的时间和成本都较高，病人的心理接受度低。药物注射也是目前临床治疗瘢痕的常用方法，其基本作用原理是使瘢痕处真皮变薄，抑制胶原细胞增殖，一开始祛疤效果显著，但长时间使用容易引起内分泌紊乱，另外，该方法只适用于小面积增生性瘢痕者。
瘢痕的形成与组织损伤的修复过程密不可分，皮肤创伤伤口愈合一般经历3个阶段：(1)止血和炎症阶段：皮肤损伤后，人体的血液凝固系统被激活，纤维蛋白网状物形成并凝聚血小板，阻止出血，创口部有血浆、淋巴液、白细胞、吞噬细胞等渗出，通过吞噬、移除、吸收等作用及受损细胞释放的酶所引起自溶，清除坏死组织和沾染的细菌、异物等，并由纤维素形成的网状结构将创口的表层和深层初步粘合在一起，该阶段一般历时4-6天，临床表现为水肿、红斑、炎热和疼痛；(2)增生阶段：随炎性渗出之后，成纤维细胞和毛细血管内皮细胞逐渐增殖、形成胶原纤维、填充和覆盖伤口，该阶段通常持续4-24天，临床表现为瘢痕色淡红，稍隆起，常有痒痛，触之质硬韧；(3)塑形阶段：胶原纤维在创口组织内胶原酶的作用下逐渐分解，成纤维细胞转变为纤维细胞，胶原纤维逐渐排列成整齐有序的束状，毛细血管数量减少，瘢痕渐渐退化，该阶段一般持续21天-1年，瘢痕呈淡褐色或淡白色，较平坦，痒痛症状缓解，触之质柔韧。
目前临床上十分缺乏能够有效去除瘢痕且对皮肤无害的祛瘢产品。
发明内容
本发明提供一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法，所制得的用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物能有效减少伤口瘢痕性愈合，且能降低伤口塑形阶段伤口部位的色素沉积，并且性质稳定、刺激性小。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法，
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物由L-硒-甲基硒代半胱氨酸、透明质酸和超纯水组成，且用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的浓度为1-100μg/mL，透明质酸的浓度为0.3-1wt％，剩余为超纯水；
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)按所述配比量分别称取L-硒-甲基硒代半胱氨酸与透明质酸，并按所述配比量量取超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
进一步地，用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的浓度为2.5-50μg/mL，透明质酸的浓度为0.4-0.8wt％，剩余为超纯水。
进一步地，用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的浓度为5-20μg/mL，透明质酸的浓度为0.5-0.7wt％，剩余为超纯水。
进一步地，透明质酸的分子量为2-3000kDa。
进一步地，透明质酸的分子量为200-3000kDa。
进一步地，透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：
经过大量研究表明，表皮细胞增殖可抑制成纤维细胞胶原合成，而外伤、手术切口等伤口愈合时成纤维细胞过度增殖，进而成纤维细胞与表皮细胞的正常比例增加，而成纤维细胞与表皮细胞的正常比例增加会促进瘢痕性愈合；本发明中，经过研究发现L-硒-甲基硒代半胱氨酸可有效促进人表皮细胞HaCat增殖并抑制人皮肤成纤维细胞HSF增生，从而可调整瘢痕形成时的组织结构，抑制病理性瘢痕纤维增生，达到平复瘢痕、再生皮肤的效果，另外，L-硒-甲基硒代半胱氨酸可显著抑制人黑色素瘤细胞A2058增殖，有利于降低伤口塑形阶段伤口部位的色素沉积，而且经研究表明组织在失水条件下愈合速度减慢，愈合后表皮组织增厚，且表皮细胞中的IL-8升高，易形成瘢痕性愈合，因此，本发明中在L-硒-甲基硒代半胱氨酸的水溶液中加入透明质酸，以提高伤口附近的含水量，进而有效减少伤口瘢痕性愈合；
综上，本发明制得的用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物可促进皮肤表面细小伤口愈合，能抑制瘢痕性愈合的产生，以有效减少伤口瘢痕性愈合，修复创伤瘢痕，且能降低伤口塑形阶段伤口部位的色素沉积，并且性质稳定、无毒副作用、对皮肤刺激性小，所制得的用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物可进一步制备成面膜、凝胶、软膏、乳液剂、霜剂或喷剂中的一种；
本发明中，使用时在伤口附近涂抹或喷洒浸润该用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
附图说明
图1为本发明中L-硒-甲基硒代半胱氨酸促进人表皮细胞HaCat增殖的情况示意图；
图2为本发明中L-硒-甲基硒代半胱氨酸抑制人皮肤成纤维细胞HSF增殖的情况示意图；
图3为本发明中L-硒-甲基硒代半胱氨酸抑制人黑色素瘤细胞A2058增殖的情况示意图；
图4为本发明中L-硒-甲基硒代半胱氨酸对人表皮细胞HaCat毒性的情况示意图；
图5为本发明中L-硒-甲基硒代半胱氨酸对人皮肤成纤维细胞HSF毒性的情况示意图。
具体实施方式
一、L-硒-甲基硒代半胱氨酸以及由L-硒-甲基硒代半胱氨酸、透明质酸和超纯水制成的组合物的试验情况
1、L-硒-甲基硒代半胱氨酸促进人表皮细胞HaCat增殖的试验
将人表皮细胞HaCat以4000个/孔的浓度种于96孔板内，24小时后分别加入不同浓度的L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，其中L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液设11个浓度，分别为200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.12μM、1.56μM、0.78μM、0.39μM、0μM，且每个浓度设8个复孔，分别于加药后第24小时和48小时通过MTT法检测人表皮细胞HaCat活力。
试验结果如图1所示，当人表皮细胞HaCat与浓度为25-200μM的L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液共同孵育24到48小时时，人表皮细胞HaCat数量约为对照组细胞数量的120％，其中对照组中对人表皮细胞HaCat无任何处理，当L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液的浓度低于25μM时，人表皮细胞HaCat数量与对照组细胞数量无显著差异，由此可见L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液在浓度高于25μM时可显著促进人表皮细胞HaCat的增殖。
2、L-硒-甲基硒代半胱氨酸抑制人皮肤成纤维细胞HSF增殖的试验
将人皮肤成纤维细胞HSF以4000个/孔的浓度种于96孔板内，24小时后分别加入不同浓度的L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，其中L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液设11个浓度，分别为200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.12μM、1.56μM、0.78μM、0.39μM、0μM，且每个浓度设8个复孔，分别于加药后第24小时和48小时通过MTT法检测人皮肤成纤维细胞HSF活力。
试验结果如图2所示，当人皮肤成纤维细胞HSF与浓度为0.39-200μM的L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液共同孵育24到48小时时，人皮肤成纤维细胞HSF数量约为对照组细胞数量的65-85％，其中对照组中对人皮肤成纤维细胞HSF无任何处理，显著低于对照组的细胞数量，由此可见L-硒-甲基硒代半胱氨酸可显著抑制人皮肤成纤维细胞HSF的增殖。
3、L-硒-甲基硒代半胱氨酸抑制人黑色素瘤细胞A2058增殖的试验
将人黑色素瘤细胞A2058以4000个/孔的浓度种于96孔板内，24小时后分别加入不同浓度的L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，其中L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液设11个浓度，分别为200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.12μM、1.56μM、0.78μM、0.39μM、0μM，且每个浓度设8个复孔，分别于加药后第24小时和48小时通过MTT法检测人黑色素瘤细胞A2058活力。
试验结果如图3所示，当人黑色素瘤细胞A2058与浓度为0.39-200μM的L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液共同孵育24到48小时时，人黑色素瘤细胞A2058数量约为对照组细胞数量的50-80％，其中对照组中对人黑色素瘤细胞A2058无任何处理，显著低于对照组的细胞数量，由此可见L-硒-甲基硒代半胱氨酸可显著抑制人黑色素瘤细胞A2058的增殖。
4、L-硒-甲基硒代半胱氨酸对人表皮细胞HaCat毒性的试验
将人表皮细胞HaCat以30000个/孔的浓度种于96孔板内，24小时后分别加入不同浓度的L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，其中L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液设11个浓度，分别为200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.12μM、1.56μM、0.78μM、0.39μM、0μM，且每个浓度设8个复孔，于加药后第24小时通过MTT法检测人表皮细胞HaCat活力。
试验结果如图4所示，当人表皮细胞HaCat与浓度为0.39-200μM的L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液共同孵育24小时时，人表皮细胞HaCat数量约为对照组细胞数量的95-105％，其中对照组中对人表皮细胞HaCat无任何处理，与对照组细胞数量无显著差别，由此可见L-硒-甲基硒代半胱氨酸对人表皮细胞HaCat无毒性。
5、L-硒-甲基硒代半胱氨酸对人皮肤成纤维细胞HSF毒性的试验
将人皮肤成纤维细胞HSF以30000个/孔的浓度种于96孔板内，24小时后分别加入不同浓度的L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，其中L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液设11个浓度，分别为200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.12μM、1.56μM、0.78μM、0.39μM、0μM，且每个浓度设8个复孔，于加药后第24小时通过MTT法检测人皮肤成纤维细胞HSF活力。
试验结果如图5所示，当人皮肤成纤维细胞HSF与浓度为0.39-200μM的L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液共同孵育24小时时，人皮肤成纤维细胞HSF数量约为对照组细胞数量的95-105％，其中对照组中对人皮肤成纤维细胞HSF无任何处理，与对照组细胞数量无显著差别，由此可见L-硒-甲基硒代半胱氨酸对人皮肤成维纤细胞HSF无毒性。
6、由L-硒-甲基硒代半胱氨酸、透明质酸和超纯水制成的组合物抑制伤口瘢痕性愈合的试验
选取体重为2-3kg的新西兰大白兔，适应性饲养24小时后，将其固定于固定箱内，采用氯胺酮肌注麻醉，在其双耳腹前侧分别做4-5个边长为1cm的正方形切口，切口间距1cm，完整切除全层皮肤至软骨膜表面并刮除软骨膜，保留耳软骨，创面压模止血后予以暴露，无需包扎，4周后选取增生明显、瘢痕厚度大于1mm、硬度与兔耳软骨相似的增生瘢痕块，根据表1的实验方案，采用相应实验组的给药方案对相应的增生瘢痕块进行每次敷贴20分钟、每天3次、敷贴4周的敷贴实验，连续检测各实验组所对应兔子增生瘢痕块的瘢痕外观、形态、增生厚度、痂皮脱落时间、上皮化时间，敷贴4周后通过耳源静脉空气栓塞法处死该大白兔，无菌条件下切取含有周围正常组织的各实验组对应的瘢痕组织标本，并用10％甲醛溶液固定，石蜡包埋、切片后进行H&E染色，在光学显微镜下观察各实验组对应的H&E染色组织切片，统计各实验组所对应的兔子瘢痕增生指数和成纤维细胞密度。
表1由L-硒-甲基硒代半胱氨酸、透明质酸和超纯水组成的组合物抑制伤口瘢痕性愈合的实验方案
其中，瘢痕增生指数＝瘢痕凸起最高点至耳软骨表面的垂直高度/正常皮肤皮缘至耳软骨表面的垂直高度
成纤维细胞密度的计算方法为：每张H&E染色组织切片分别随机选5个不重叠矩形视野，利用网格计数法计数该视野下成纤维细胞数，进而计算成纤维细胞密度。
实验数据采用SPSS统计软件进行分析处理，实验结果以均数±标准差表示，治疗组间用t检验进行统计学分析，以P<0.05作为有显著性统计学意义。
(1)瘢痕外观形态观察
对照组创面愈合区组织明显高于正常皮肤，瘢痕中央呈乳头状突起，呈淡红色，各实验组的瘢痕组织略高于正常皮肤，色泽较淡。
(2)瘢痕增生厚度
实验结果如表2所示，各组在治疗前瘢痕厚度无显著差异(P>0.05)，治疗后实验组的瘢痕厚度显著低于对照组的瘢痕厚度(P<0.05)，其中实验1组采用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL+0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的瘢痕厚度显著低于(P<0.05)实验2组单用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL的给药方案处理后的瘢痕厚度，且实验1组采用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL+0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的瘢痕厚度显著低于(P<0.05)实验3组单用0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的瘢痕厚度。
表2治疗前后各组瘢痕增生厚度
(3)创面愈合时间
实验结果如表3所示，实验组的痂皮脱落时间和上皮化时间显著低于对照组(P<0.05)，其中实验1组采用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL+0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的痂皮脱落时间和上皮化时间显著低于(P<0.05)实验2组单用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL的给药方案处理后的痂皮脱落时间和上皮化时间，并且实验1组采用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL+0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的痂皮脱落时间和上皮化时间显著低于(P<0.05)实验3组单用0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的痂皮脱落时间和上皮化时间。
表3治疗后各组痂皮脱落时间和上皮化时间
(4)组织学观察
通过对瘢痕组织H&E染色切片的观察后发现对照组瘢痕的最厚处为正常组织的2-3倍，表皮层增厚不平整，真皮增生明显，可观察到大量的成纤维细胞、胶原纤维、扩张的毛细血管及炎症细胞浸润。给药组即实验组的表皮相对平整，真皮厚度显著下降，成纤维细胞、胶原纤维数量显著减少。
如表4所示，各实验组边缘皮肤厚度不存在显著差异(P>0.05)，与对照组相比，实验组的瘢痕增生指数显著降低(P<0.05)，其中实验1组采用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL+0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的瘢痕增生指数显著低于(P<0.05)实验2组单用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL的给药方案处理后的瘢痕增生指数，且实验1组采用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL+0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的瘢痕增生指数显著低于(P<0.05)实验3组单用0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的瘢痕增生指数，说明L-硒-甲基硒代半胱氨酸与透明质酸两者联用可增强疗效。
表4治疗后各组的瘢痕增生指数
各实验组瘢痕组织中的成纤维细胞密度如表5所示，实验组的成纤维细胞密度显著低于对照组的成纤维细胞密度(P<0.05)，其中实验1组采用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL+0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的成纤维细胞密度显著低于(P<0.05)实验2组单用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL的给药方案处理后的成纤维细胞密度，且实验1组采用L-硒-甲基硒代半胱氨酸20μg/mL+0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的成纤维细胞密度显著低于(P<0.05)实验3组单用0.6wt％透明质酸的给药方案处理后的成纤维细胞密度，说明L-硒-甲基硒代半胱氨酸与透明质酸两者联用具有协同抑制成纤维细胞增生的疗效。
表5治疗后各组的瘢痕成纤维细胞密度比较
实施例1
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)称取10mg L-硒-甲基硒代半胱氨酸和3g透明质酸，并量取500mL超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
其中，透明质酸的分子量为2-3000kDa；优选地，透明质酸的分子量为200-3000kDa；更优选地，透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
实施例2
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)称取5mg L-硒-甲基硒代半胱氨酸和3g透明质酸，并量取500mL超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
其中，透明质酸的分子量为2-3000kDa；优选地，透明质酸的分子量为200-3000kDa；更优选地，透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
实施例3
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)称取3mg L-硒-甲基硒代半胱氨酸和3g透明质酸，并量取500mL超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
其中，透明质酸的分子量为2-3000kDa；优选地，透明质酸的分子量为200-3000kDa；更优选地，透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
实施例4
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)称取10mg L-硒-甲基硒代半胱氨酸和3.5g透明质酸，并量取500mL超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
其中，透明质酸的分子量为2-3000kDa；优选地，透明质酸的分子量为200-3000kDa；更优选地，透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
实施例5
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)称取10mg L-硒-甲基硒代半胱氨酸和2.5g透明质酸，并量取500mL超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
其中，透明质酸的分子量为2-3000kDa；优选地，透明质酸的分子量为200-3000kDa；更优选地，透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
实施例6
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)称取3mg L-硒-甲基硒代半胱氨酸和3.5g透明质酸，并量取500mL超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
其中，透明质酸的分子量为2-3000kDa；优选地，透明质酸的分子量为200-3000kDa；更优选地，透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
实施例7
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)称取5mg L-硒-甲基硒代半胱氨酸和2.5g透明质酸，并量取500mL超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
其中，透明质酸的分子量为2-3000kDa；优选地，透明质酸的分子量为200-3000kDa；更优选地，透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
实施例8
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)称取50mg L-硒-甲基硒代半胱氨酸和3g透明质酸，并量取500mL超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
其中，透明质酸的分子量为2-3000kDa；优选地，透明质酸的分子量为200-3000kDa；更优选地，透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
实施例9
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)称取30mg L-硒-甲基硒代半胱氨酸和2.5g透明质酸，并量取500mL超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
其中，透明质酸的分子量为2-3000kDa；优选地，透明质酸的分子量为200-3000kDa；更优选地，透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
本发明中，L-硒-甲基硒代半胱氨酸与透明质酸均为在市场上直接购买的产品。
Claims (6)
1.一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法，其特征在于：
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物由L-硒-甲基硒代半胱氨酸、透明质酸和超纯水组成，且用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的浓度为1-100μg/mL，透明质酸的浓度为0.3-1wt％，剩余为超纯水；
用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)按所述配比量分别称取L-硒-甲基硒代半胱氨酸与透明质酸，并按所述配比量量取超纯水，且将所称得的L-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于所量取的超纯水中，得到待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，将待搅拌L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液经超声波搅拌机搅拌、剪切、振摇或涡旋至L-硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶于超纯水中，得到L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液，然后将所称得的透明质酸加入L-硒-甲基硒代半胱氨酸水溶液中，并在室温下溶胀1-2天后得到组合物原液；
(2)在无菌条件下，将步骤(1)中制得的组合物原液通过0.22μm的微孔滤膜除菌，除菌后在无菌条件下分装，并放置于2-8℃下保存，进而制得用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物。
2.根据权利要求1所述的一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法，其特征在于：用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的浓度为2.5-50μg/mL，透明质酸的浓度为0.4-0.8wt％，剩余为超纯水。
3.根据权利要求1所述的一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法，其特征在于：用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的浓度为5-20μg/mL，透明质酸的浓度为0.5-0.7wt％，剩余为超纯水。
4.根据权利要求1所述的一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法，其特征在于：透明质酸的分子量为2-3000kDa。
5.根据权利要求1所述的一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法，其特征在于：透明质酸的分子量为200-3000kDa。
6.根据权利要求1所述的一种用于抑制伤口瘢痕性愈合的组合物的制备方法，其特征在于：透明质酸的分子量为1000-3000kDa。
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