CN110885357A - 一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法 - Google Patents

一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110885357A
CN110885357A CN201911322947.3A CN201911322947A CN110885357A CN 110885357 A CN110885357 A CN 110885357A CN 201911322947 A CN201911322947 A CN 201911322947A CN 110885357 A CN110885357 A CN 110885357A
Authority
CN
China
Prior art keywords
glutamine dipeptide
nanofiltration membrane
concentrated solution
glutamine
enzyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201911322947.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110885357B (zh
Inventor
李阳
洪永德
姜书华
吴文忠
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Innobio Corp Ltd
Original Assignee
Innobio Corp Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Innobio Corp Ltd filed Critical Innobio Corp Ltd
Priority to CN201911322947.3A priority Critical patent/CN110885357B/zh
Publication of CN110885357A publication Critical patent/CN110885357A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110885357B publication Critical patent/CN110885357B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/10—Process efficiency

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)

Abstract

本发明涉及丙谷二肽的分离纯化，具体的说是一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法。将制备丙谷二肽酶反应液依次通过陶滤除酶、纳滤除杂除盐后的浓缩液蒸发结晶，即获得纯度为98％以上的丙谷二肽。本发明纯化分离方法中采用纳滤膜除杂除盐分离效果突出，使得分离获得浓缩液中丙谷二肽含量较高、收率较高，同时大大缩短了分离时间，减少了蒸发浓缩的压力，降低能耗，产生的废水也可以通过套用提高丙谷二肽的收率，并且减少废水的生成。

Description

一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法
技术领域
本发明涉及丙谷二肽的分离纯化，具体的说是一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法。
背景技术
丙谷二肽，学名N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，是L-谷氨酰胺的一种改性化合物，易溶于水。L-谷氨酰胺是机体内含量非常丰富的一种氨基酸，是人体多种组织代谢的参与体，人体缺乏L-谷氨酰胺会引发多种疾病。由于L-谷氨酰胺溶解度低且不稳定，因此L-谷氨酰胺的肠外应用受到了限制。丙谷二肽可在体内分解为L-谷氨酰胺和L-丙氨酸，这一特性使经由肠外营养输液补充L-谷氨酰胺成为可能。丙谷二肽分解释放出的氨基酸作为营养物质各自储存在身体的相应部位并随机体的需要进行代谢。由于丙谷二肽药用价值的特殊性，就像生理盐水、葡萄糖一样，将成为救护病人的必需品。
目前生产丙谷二肽主要有化学合成法和生物酶催化法。其中化学合成法以Boc-丙氨酸或氯丙酰-谷氨酰胺为原料制备而成，此法得到的丙谷二肽纯度高，但合成路线略长；生物酶催化法具有工艺简单、条件温和、质量指标易控制、成本低等优点，更适合放大进行工业化生产。丙谷二肽的精制方法一般有浓缩蒸发结晶、溶媒结晶、离子交换树脂法、电渗析法等，其中结晶法工序多，高纯度时精制困难，步骤繁琐，离子交换树脂除盐收率极低，且产生大量含盐废水，电渗析法工艺放大困难，急需一种工艺简单、产率较高的丙谷二肽纯化方法。
公布号为CN107267380A的专利公开了一种包括纳滤膜系统的丙谷二肽制备工艺系统，但其后续高纯度丙谷二肽精制仍不能达到满意效果。十二烷基磺酸盐乙醇溶液能增加体系中杂质的溶解度，提纯效果与单纯醇析结晶相比，得到的晶体纯度更高，更易分离。
发明内容
本发明目的在于提供一种纳滤膜和十二烷基磺酸盐析晶工艺分离纯化丙谷二肽的方法。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，将制备丙谷二肽酶反应液依次通过陶滤除酶、纳滤除杂除盐后的浓缩液蒸发结晶，即获得纯度为98％以上的丙谷二肽。
所述制备丙谷二肽酶反应液通过50-100nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶。
所述经陶瓷膜过滤除酶后反应液经旋转蒸发仪进行蒸发浓缩，浓缩至原质量的20％-50％，浓缩后反应液经过100-200道尔顿的纳滤膜，在压力为1.3-2.4MPa下过滤除杂质，合并每次经纳滤膜过滤除杂后的浓缩液，待用。
所述经纳滤膜过滤后浓缩液再次浓缩,所得浓缩液中固体与溶液的质量比为1:1-4，将每次再浓缩后的浓缩液合并待用。
所述每100g上述合并的浓缩液中，于30-80℃温度下滴加50-300mL的含十二烷基磺酸盐的乙醇溶液，而后以5℃-60℃/h的降温速率降温至0-20℃，过滤、洗涤滤饼，干燥后得到丙谷二肽晶体。
其中，含十二烷基磺酸盐的乙醇溶液中十二烷基磺酸盐终浓度为3wt％。
所述十二烷基磺酸盐为十二烷基磺酸钠、十二烷基磺酸氨或十二烷基磺酸钾。
本发明所具有的优点：
1.本发明分离方法将过滤膜和十二烷基磺酸盐析晶工艺相互结合，进而获得高纯度的丙谷二肽，纯化过程中采用100-200道尔顿的纳滤膜，滤膜可进一步的过滤盐类，同时将分子量小的谷氨酰胺和L-丙氨酸反应物杂质过滤掉，进而使纳滤后的浓缩液中含有纯度较高的丙谷二肽，并采用特定盐的乙醇溶液析晶，进而获得高纯度丙谷二肽。
2.本发明纯化分离方法中采用纳滤膜除杂除盐分离效果突出，使得分离获得浓缩液中丙谷二肽含量较高、收率较高，同时大大缩短了分离时间，减少了蒸发浓缩的压力，降低能耗，产生的废水也可以通过套用提高丙谷二肽的收率，并且减少废水的生成。
3.本发明采用纳滤分离纯化后浓缩液中丙谷二肽含量较纯，只需要简单的蒸发结晶，即可一步得到丙谷二肽晶体，整体工艺简单、易操作。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明，并不局限于本发明。
实施例1
将制备丙谷二肽酶反应液通过50nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶，反应液中丙谷二肽含量4.02％，谷氨酰胺含量2.13％，盐含量1.97％。将去除酶后的3L反应液经旋转蒸发仪浓缩掉原体积的30％后经过100-200道尔顿的纳滤膜浓缩除盐，膜操作压力为2.1MPa，得到一次清液和浓缩液，向纳滤装置中加入1.5L水再次进行纳滤，得到二次清液和浓缩液。一次清液和二次清液总除盐量达到98.7％，除谷氨酰胺量达到99.4％。将两次浓缩液合并，浓缩液中丙谷二肽纯度达到96％以上，收率达到90％以上。浓缩液继续经过旋转蒸发仪浓缩至浓缩液中固体质量占浓缩液质量的25％，于60℃滴加100mL含3％十二烷基磺酸氨的乙醇溶液，滴加后以20℃/h的速度梯度降温至10℃，过滤，得到丙谷二肽晶体,得到丙谷二肽晶体109.3g，纯度为98.5％。
实施例2
将制备丙谷二肽酶反应液通过50nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶，反应液中丙谷二肽含量4.02％，谷氨酰胺含量2.13％，盐含量1.97％。将去除酶后的3L反应液经旋转蒸发仪浓缩掉原体积的40％后经过100-200道尔顿的纳滤膜浓缩除盐，膜操作压力为1.9MPa，，得到一次清液和浓缩液，向纳滤装置中加入1.5L水再次进行纳滤，得到二次清液和浓缩液。一次清液和二次清液总除盐量达到98.1％，除谷氨酰胺量达到98.3％。将两次浓缩液合并，浓缩液中丙谷二肽纯度达到97％以上，收率达到90％以上。浓缩液继续经过旋转蒸发仪浓缩到浓缩液中固体质量占浓缩液质量的33％，于50℃滴加150mL含3％十二烷基磺酸钠的乙醇溶液，滴加后以20℃/h的速度梯度降温至10℃，过滤，得到丙谷二肽晶体,得到丙谷二肽晶体105.6g，纯度为97.3％。
实施例3
将制备丙谷二肽酶反应液通过50nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶，反应液中丙谷二肽含量4.02％，谷氨酰胺含量2.13％，盐含量1.97％。将去除酶后的3L反应液经旋转蒸发仪浓缩掉原体积的50％后经过100-200道尔顿的纳滤膜浓缩除盐，膜操作压力为1.7MPa，得到一次清液和浓缩液，向纳滤装置中加入1.5L水再次进行纳滤，得到二次清液和浓缩液。一次清液和二次清液总除盐量达到97.5％，除谷氨酰胺量达到97.8％。将两次浓缩液合并，浓缩液中丙谷二肽纯度达到96.5％以上，收率达到90％以上。浓缩液继续经过旋转蒸发仪浓缩到浓缩液中固体质量占浓缩液质量的50％，于70℃滴加200mL含3％十二烷基磺酸钾的乙醇溶液，滴加后以15℃/h的速度梯度降温至5℃，过滤，得到丙谷二肽晶体,得到丙谷二肽晶体104.9g，纯度为97.7％。
实施例4
将制备丙谷二肽酶反应液通过50nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶，反应液中丙谷二肽含量4.53％，谷氨酰胺含量2.09％，盐含量2.06％。将去除酶后的3L反应液经旋转蒸发仪浓缩掉原体积的60％后经过100-200道尔顿的纳滤膜浓缩除盐，膜操作压力为1.5MPa，得到一次清液和浓缩液，向纳滤装置中加入1.5L水再次进行纳滤，得到二次清液和浓缩液。一次清液和二次清液总除盐量达到97.6％，除谷氨酰胺量达到97.5％。将两次浓缩液合并，浓缩液中丙谷二肽纯度达到96.5％以上，收率达到90％以上。浓缩液继续经过旋转蒸发仪浓缩到浓缩液中固体质量占浓缩液质量的25％，于60℃滴加150mL含3％十二烷基磺酸钠的乙醇溶液，滴加后以10℃/h的速度梯度降温至15℃，过滤，得到丙谷二肽晶体,得到丙谷二肽晶体104.2g，纯度为97.1％。
实施例5
将制备丙谷二肽酶反应液通过50nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶，反应液中丙谷二肽含量4.53％，谷氨酰胺含量2.09％，盐含量2.06％。将去除酶后的3L反应液经旋转蒸发仪浓缩掉原体积的50％后经过100-200道尔顿的纳滤膜浓缩除盐，膜操作压力为1.5MPa，得到一次清液和浓缩液，向纳滤装置中加入1.5L水再次进行纳滤，得到二次清液和浓缩液。一次清液和二次清液总除盐量达到96.8％，除谷氨酰胺量达到97.5％。将两次浓缩液合并，浓缩液中丙谷二肽纯度达到96.5％以上，收率达到90％以上。浓缩液继续经过旋转蒸发仪浓缩到浓缩液中固体质量占浓缩液质量的33％，于60℃滴加250mL含3％十二烷基磺酸钠的乙醇溶液，滴加后以10℃/h的速度梯度降温至5℃，过滤，得到丙谷二肽晶体,得到丙谷二肽晶体105.9g，纯度为98.1％。

Claims (6)

1.一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：将制备丙谷二肽酶反应液依次通过陶滤除酶、纳滤除杂除盐后的浓缩液蒸发结晶，即获得纯度为98％以上的丙谷二肽。
2.按权利要求1所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述制备丙谷二肽酶反应液通过50-100nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶。
3.按权利要求1或2所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述经陶瓷膜过滤除酶后反应液经旋转蒸发仪进行蒸发浓缩，浓缩至原质量的20％-50％，浓缩后反应液经过100-200道尔顿的纳滤膜，在压力为1.3-2.4MPa下过滤除杂质，合并每次经纳滤膜过滤除杂后的浓缩液，待用。
4.按权利要求3所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述经纳滤膜过滤后浓缩液再次浓缩,所得浓缩液中固体与溶液的质量比为1:1-4，将每次再浓缩后的浓缩液合并待用。
5.按权利要求4所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述每100g上述合并的浓缩液中，于30-80℃温度下滴加50-300mL的含十二烷基磺酸盐的乙醇溶液，而后以5℃-60℃/h的降温速率降温至0-20℃，过滤、洗涤滤饼，干燥后得到丙谷二肽晶体。
6.按权利要求5所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述十二烷基磺酸盐为十二烷基磺酸钠、十二烷基磺酸氨或十二烷基磺酸钾。
CN201911322947.3A 2019-12-20 2019-12-20 一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法 Active CN110885357B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911322947.3A CN110885357B (zh) 2019-12-20 2019-12-20 一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911322947.3A CN110885357B (zh) 2019-12-20 2019-12-20 一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110885357A true CN110885357A (zh) 2020-03-17
CN110885357B CN110885357B (zh) 2022-09-06

Family

ID=69752616

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911322947.3A Active CN110885357B (zh) 2019-12-20 2019-12-20 一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110885357B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115850223A (zh) * 2022-12-22 2023-03-28 湖北保乐生物医药科技有限公司 一种玻色因纯化除盐的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104163849A (zh) * 2014-08-16 2014-11-26 厦门世达膜科技有限公司 一种丙谷二肽的分离提纯方法
CN106432411A (zh) * 2016-09-23 2017-02-22 精晶药业股份有限公司 一种从酶转化液中提取丙氨酰谷氨酰胺的方法
CN107686503A (zh) * 2016-08-05 2018-02-13 北大方正集团有限公司 一种纯化谷胱甘肽的方法
CN110407914A (zh) * 2018-06-11 2019-11-05 合肥川迪医药技术有限公司 一种丙谷二肽的分离提纯方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104163849A (zh) * 2014-08-16 2014-11-26 厦门世达膜科技有限公司 一种丙谷二肽的分离提纯方法
CN107686503A (zh) * 2016-08-05 2018-02-13 北大方正集团有限公司 一种纯化谷胱甘肽的方法
CN106432411A (zh) * 2016-09-23 2017-02-22 精晶药业股份有限公司 一种从酶转化液中提取丙氨酰谷氨酰胺的方法
CN110407914A (zh) * 2018-06-11 2019-11-05 合肥川迪医药技术有限公司 一种丙谷二肽的分离提纯方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GUAN WANG，等: "Modeling and Simulation of Thermodynamic Properties of L‑Alanyl‑L‑Glutamine in Different Solvents", 《IND. ENG. CHEM. RES. 》 *
JINCHAO XU，等: "Solid-liquid equilibrium of L-alanyl-L-glutamine form II in methanol + water and isopropanol + water systems", 《JOURNAL OF MOLECULAR LIQUIDS》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115850223A (zh) * 2022-12-22 2023-03-28 湖北保乐生物医药科技有限公司 一种玻色因纯化除盐的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110885357B (zh) 2022-09-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2388812C (en) Crystallisation of materials from aqueous solutions
AU2011214268B2 (en) Process for manufacturing succinic acid
CN101245047B (zh) 色氨酸提纯方法
CN109265498B (zh) 一种集成的聚唾液酸分离提纯制备n-乙酰神经氨酸的方法
JPS60199390A (ja) クエン酸の取得法
CN110272461B (zh) 一种从发酵液中提纯β-胸苷的方法
CN110776543B (zh) 一种腺苷一次母液回收方法
CN105017360B (zh) 一种维生素b12的制备方法
CN110885357B (zh) 一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法
DK173272B1 (da) Fremgangsmåde til udvinding af 2-keto-L-gulonsyre fra et fermenteringsmedium
KR100828706B1 (ko) 결정화 공정을 이용한 5'-이노신산 발효액의 정제방법
CN112679560A (zh) 一种春雷霉素的结晶工艺
RU2573935C2 (ru) Способ выделения и очистки 1,4-диаминобутана из ферментационного раствора
CN114630814A (zh) 使用水溶剂结晶从水性溶液中回收甲羟戊酸或其盐或内酯的方法及其组合物
CN1132741A (zh) 碱性氨基酸的一种提纯方法
US5759826A (en) Process of preparing an organic acid
CN103012115B (zh) 一种药用枸橼酸钾的生产工艺
CN110451529A (zh) 一种注射用氯化钠的提纯方法
CN110372528B (zh) 一种缬氨酸的提纯方法
CN115232002A (zh) 全水相提取莽草酸的方法
CN110330441B (zh) 一种d-亮氨酸的提纯方法
CN112239413A (zh) 一种甘氨酸的提纯及封闭生产方法
JPS6338B2 (zh)
CN213865655U (zh) 废盐分离提纯用前端设备
CN113968794B (zh) 一种分离纯化谷氨酰胺的工艺方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant