CN110878120B - 一种从组分ii上清液中回收白蛋白的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从组分II上清液中回收白蛋白的方法，包括以下步骤，步骤一，取组分II上清液，用10KD的膜包浓缩上清液，浓缩蛋白浓度至80g/L，用2～8℃注射用水等体积10倍透析浓缩后得蛋白液。步骤二，DEAE Sephadex A‑50(二乙基氨基乙基‑葡聚糖A‑50)准备，用0.01mol/L枸橼酸钠+0.08mol/L氯化钠缓冲液平衡A‑50凝胶2～3次，缓冲液的pH为6.00±0.50，处理后，待用。本发明通过设置有一系列的步骤使本方法在使用过程中能够对血浆处理后的废液进行处理，使其中的白蛋白能够被重新回收利用，从而达到提高血浆利用率的目的。
Description
技术领域
本发明涉及蛋白质分离纯化领域，具体为一种从组分II上清液中回收白蛋 白的方法。
背景技术
在低温乙醇法中影响蛋白质沉淀反应的因素主要有5个，即pH值、温度、 蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度。通过控制这些参数可以逐级沉淀血浆中的不同 蛋白质成份，一般先从血浆中沉淀出组份Ⅰ、Ⅱ+Ⅲ、Ⅳ与Ⅴ，最终从组份Ⅴ中 获得白蛋白制品。
在申请号为201110240072.X的中国发明专利一种用低温乙醇法从组分Ⅳ沉 淀中回收白蛋白的方法中，公开了组分Ⅰ、Ⅱ+Ⅲ、Ⅳ与Ⅴ的成分。
组分II+III再次通过低温乙醇法沉淀分离组分III，最后分离组分II沉淀， 组分II沉淀用于生产球蛋白类产品，而组分II上清液一般都直接废弃。实际上 组分II上清液中也含有一定量的白蛋白，还含有一些杂蛋白，在从组分II上清 液中提取白蛋白时，这些杂蛋白不仅影响制品纯度，还会促使白蛋白聚集或与白 蛋白反应，产生多聚体。
本发明提供了一种就是为了从组分II上清液中回收高纯度白蛋白的方法。
在《中国药典》2015版第三部中“人血白蛋白成品鉴定要求”中对白蛋白 的要求为，其中白蛋白纯度不低于蛋白质含量的96.0％、多聚体不高于5.0％、激 肽释放酶原激活剂含量不高于35IU/ml。本方法回收的白蛋白成品检测结果都能 达到以上指标，为生产上回收白蛋白、提高经济效益提供了一种借鉴思路。
发明内容
本发明的目的在于解决上述技术问题，提供一种从组分II上清液中回收白 蛋白的方法，该从组分II上清液中回收白蛋白的方法能够将用低温乙醇法处理 血浆时产生的废液进行处理，以使得废液中的人血白蛋白进行回收利用，从而提 高血浆的利用率。
本发明的技术方案如下：一种从组分II上清液中回收白蛋白的方法，包括 以下步骤，步骤一，取组分II上清液，用10KD的膜包浓缩上清液，浓缩蛋白浓 度至80g/L，用2～8℃注射用水等体积10倍透析浓缩后得蛋白液。步骤二，DEAE Sephadex A-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)准备，用0.01mol/L枸橼酸钠 +0.08mol/L氯化钠缓冲液平衡A-50凝胶2～3次，缓冲液的pH为6.00±0.50， 处理后，待用。步骤三，调整浓缩后的蛋白液的参数pH6.00±0.50、电导率 5.00±2.00ms/cm、蛋白浓度10g/L±2g/L，调整好后将制品通过A-50凝胶吸附， 流速10L/min，流穿液废弃。再用0.01mol/L枸橼酸钠+0.08mol/L氯化钠缓冲液 平衡A-50凝胶2～3次，用0.01mol/L枸橼酸钠+0.15～0.25mol/L氯化钠洗涤 液洗涤层析柱，洗涤液废弃。步骤四，用0.01mol/L枸橼酸钠+2mol/L氯化钠缓 冲液洗脱A-50凝胶，收集洗脱液，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调整制品pH至 6.90～7.00。将洗脱液通过10KD膜包5倍注射用水等体积透析，透析后浓缩蛋 白浓度至150g/L。步骤五，根据蛋白质总量，按照最终半成品蛋白含量100g/L 计算半成品配制体积，按照0.175mmol/g蛋白添加辛酸钠、105mmol/L半成品体 积添加氯化钠，并用水稀释制品蛋白浓度至100g/L。步骤六，将配制好的制品 通过终端为0.22μm的滤芯过滤除菌，在60℃条件下恒温10h，对制品进行巴氏 灭活。步骤七，分装：将巴氏灭活的制品分装至50ml模制瓶中。
优选的，浓缩步骤一中蛋白浓度至80g/L。
优选的，步骤二中所述离子交换凝胶为阴离子交换凝胶。
优选的，所述阴离子交换凝胶为DEAE Sephadex A-50(二乙基氨基乙基-葡 聚糖A-50)。
优选的，步骤二与步骤三中的pH值均为6.0；步骤四中的pH值为6.9。
优选的，步骤四中用5倍注射用水等体积透析。
优选的，步骤五中按照0.175mmol/g蛋白添加辛酸钠、105mmol/L半成品体 积添加氯化钠。
本发明的有益效果：
本方法在使用的时候，能够对在低温乙醇法处理血浆时产生的废液进行处理， 去除其中的杂质离子与多聚体，从而使得废液中的白蛋白被回收利用，从而提高 了血浆的利用率，减少了白蛋白的浪费。而且在按照本法对组分II的上清液进 行处理之后，白蛋白的各项指标均能达到《中国药典》2015版第三部中的要求。 每吨血浆产生的组分II上清废弃液中含有的人血白蛋白含量不一样，白蛋白的 含量大概在100～600g每吨左右，通过本方法，用户能够在每吨组分II上清液 中得到300g左右的白蛋白。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本 说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
下面结合实施例对本发明作进一步说明：
一种从组分II上清液中回收白蛋白的方法，包括以下步骤，
实施例1
步骤一：取组分II上清液，用10KD的膜包浓缩上清液，浓缩蛋白浓度至 80g/L，用2～8℃注射用水等体积10倍透析浓缩后得蛋白液。
步骤二：DEAE Sephadex A-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)准备，用 0.01mol/L枸橼酸钠+0.08mol/L氯化钠缓冲液平衡A-50凝胶2～3次，缓冲液的 pH为6.00±0.50，处理后，待用。
步骤三：调整浓缩后的蛋白液的参数pH6.00±0.50、电导率5.00± 2.00ms/cm、蛋白浓度10g/L±2g/L，调整好后将制品通过A-50凝胶吸附，流速 10L/min，流穿液废弃。再用0.01mol/L枸橼酸钠+0.08mol/L氯化钠缓冲液平衡 A-50凝胶2～3次，用0.01mol/L枸橼酸钠+0.15mol/L氯化钠洗涤液洗涤层析柱， 洗涤液废弃。
步骤四：用0.01mol/L枸橼酸钠+2mol/L氯化钠缓冲液洗脱A-50凝胶，收 集洗脱液，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调整制品pH至6.90～7.00。将洗脱液通 过10KD膜包5倍注射用水等体积透析，透析后浓缩蛋白浓度至150g/L。
步骤五：根据蛋白质总量，按照最终半成品蛋白含量100g/L计算半成品配 制体积，按照0.175mmol/g蛋白添加辛酸钠、105mmol/L半成品体积添加氯化钠， 并用水稀释制品蛋白浓度至100g/L。
步骤六：将配制好的制品通过终端为0.22μm的滤芯过滤除菌，在60℃条 件下恒温10h，对制品进行巴氏灭活。
步骤七：分装，将巴氏灭活后的溶液通过终端为0.22μm或0.1μm的滤芯 过滤除菌。分装后取样对制品进行检测，纯度不低于蛋白质含量的96.0％、多聚 体不高于3.0％、激肽释放酶原激活剂含量不高于35IU/ml、热原符合规定、热稳 定后不产生白点和絮状物，满足《中国药典》2015版三部的要求。
实施例2
步骤一：取组分II上清液，用10KD的膜包浓缩上清液，浓缩蛋白浓度至 80g/L，用2～8℃注射用水等体积10倍透析浓缩后得蛋白液。
步骤二：DEAE Sephadex A-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)准备，用 0.01mol/L枸橼酸钠+0.08mol/L氯化钠缓冲液平衡A-50凝胶2～3次，使得柱内 的酸碱度与步骤一中蛋白液的酸碱度相同，缓冲液的pH为6.00±0.50，处理后， 待用。
步骤三：调整浓缩后的蛋白液的参数pH6.00±0.50、电导率 5.00±2.00ms/cm、蛋白浓度10g/L±2g/L，调整好后将制品通过A-50凝胶吸附， 流速10L/min，流穿液废弃，此时蛋白质吸附在A-50凝胶柱上，小分子量离子 的杂质能够穿过A-50凝胶柱。再用0.01mol/L枸橼酸钠+0.08mol/L氯化钠缓冲 液平衡A-50凝胶2～3次，用0.01mol/L枸橼酸钠+0.25mol/L氯化钠洗涤液洗 涤层析柱，洗涤液废弃。与实施例1相比，增加了洗涤液的浓度，从而能够更好 的去除免疫球蛋白等杂质残留，提高制品中白蛋白的纯度，但是随白蛋白在洗涤 过程中脱落，白蛋白的回收率也随之降低。
步骤四：用0.01mol/L枸橼酸钠+2mol/L氯化钠缓冲液洗脱A-50凝胶，此 时蛋白质与A-50凝胶柱解除吸附关系，并随着缓冲液流出，收集洗脱液，用 0.1mol/L氢氧化钠溶液调整制品pH至6.90～7.00。将洗脱液通过10KD膜包5 倍注射用水等体积透析，透析后浓缩蛋白浓度至150g/L。
步骤五：根据蛋白质总量，按照最终半成品蛋白含量100g/L计算半成品配 制体积，按照0.175mmol/g蛋白添加辛酸钠、105mmol/L半成品体积添加氯化钠， 并用水稀释制品蛋白浓度至100g/L。
步骤六：将配制好的制品通过终端为0.22μm的滤芯过滤除菌，在60℃条 件下恒温10h，对制品进行巴氏灭活。
步骤七：分装，将经巴氏灭活后的溶液通过终端为0.22μm或0.1μm的滤 芯过滤除菌。分装后取样对制品进行检测，纯度不低于蛋白质含量的96.0％、多 聚体不高于3.0％、激肽释放酶原激活剂含量不高于35IU/ml、热原符合规定、热 稳定后不产生白点和絮状物，满足《中国药典》2015版三部的要求。
通过实施例1与实施例2的步骤，在每吨组分II中可回收300g左右的白蛋 白。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任 何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修 饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的 精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵 盖。
Claims (5)
1.一种从组分II上清液中回收白蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤一，取组分II上清液，用10KD的膜包浓缩上清液，浓缩蛋白浓度至40～120g/L，用2～8℃注射用水等体积10倍透析浓缩后得蛋白液；
步骤二，DEAE Sephadex A-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)准备，用0.01mol/L枸橼酸钠+0.08mol/L氯化钠缓冲液平衡A-50凝胶2～3次，缓冲液的pH为5.0～7.0，处理后，待用；
步骤三，调整浓缩后的蛋白液的参数pH5.0～7.0、电导率不高于10ms/cm、蛋白浓度不高于50g/L，调整好后将制品通过A-50凝胶吸附，流速10L/min，流穿液废弃，再用0.01mol/L枸橼酸钠+0.08mol/L氯化钠缓冲液平衡A-50凝胶2～3次，用0.01mol/L枸橼酸钠+0.15～0.25mol/L氯化钠洗涤液洗涤层析柱，洗涤液废弃；
步骤四，用0.01mol/L枸橼酸钠+2mol/L氯化钠缓冲液洗脱A-50凝胶，收集洗脱液，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调整制品pH至6.40～7.40，将洗脱液通过10KD膜包5～10倍注射用水等体积透析，透析后浓缩蛋白浓度至150g/L；
步骤五，根据蛋白质总量，按照最终半成品蛋白含量100g/L计算半成品配制体积，按照0.150～0.175mmol/g蛋白添加辛酸钠、90～110mmol/L半成品体积添加氯化钠，并用水稀释制品蛋白浓度至100g/L；
步骤六，将配制好的制品通过终端为0.22μm的滤芯过滤除菌，在60℃条件下恒温10h，对制品进行巴氏灭活；
步骤七，分装：将巴氏灭活的制品分装至50ml模制瓶中。
2.根据权利要求1所述的一种从组分II上清液中回收白蛋白的方法，其特征在于：浓缩步骤一中蛋白浓度至80g/L。
3.根据权利要求1所述的一种从组分II上清液中回收白蛋白的方法，其特征在于：步骤二与步骤三中的pH值均为6.0；步骤四中的pH值为6.9。
4.根据权利要求1所述的一种从组分II上清液中回收白蛋白的方法，其特征在于：步骤四中用5倍注射用水等体积透析。
5.根据权利要求1所述的一种从组分II上清液中回收白蛋白的方法，其特征在于：步骤五中按照0.175mmol/g蛋白添加辛酸钠、105mmol/L半成品体积添加氯化钠。
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| US4086222A (en) * | 1975-10-09 | 1978-04-25 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Method of isolating albumin from blood products |
| CN107216383A (zh) * | 2017-07-13 | 2017-09-29 | 同路生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白的制备方法及该人血白蛋白 |
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