CN110864945A - 一种精浆生化质控品及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种精浆生化质控品，包括人工精浆基质液、质控项目添加物质、稳定剂、冻干保护剂以及防腐剂，经几种物质混合后制成冻干粉；其中，所述人工精浆基质液中包括人白蛋白、人γ‑球蛋白、维生素C、牛纤维蛋白原、凝血酶、纤溶酶、氯化钙以及PBS缓冲液；所述质控项目添加物质为设计含量的α‑葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶‑X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物气化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶；所述稳定剂为PEG400与甘露醇；所述冻干保护剂为海藻糖与甘氨酸；防腐剂：叠氮钠。

Description

一种精浆生化质控品及其制备方法

技术领域

本发明属于体外检测试剂类的技术领域，涉及一种精浆生化质控品及其制备方法。

背景技术

精液的生化指标检测一直缺乏实验质控品，使得精液生化分析的标准化工作停滞不前。精液中的许多物质在体外不稳定，难以保存，增加了制备精浆质控品的技术难度。为了解决精液质控品的问题，申请号为CN201410145716.0的专利提供了一种以精浆作为基质的精浆复合质控品，该申请中，精浆复合质控品由质控品保存液和精浆原液混合制成的冻干粉，在其中包含酶稳定剂，通过该专利的方法制得的精浆质控品能够回避精液中的物质在体外很不稳定和难以保存的缺点。但是。上述质控品中使用人精浆作为基质，具有原料来源有限、具有潜在生物安全隐患、稳定性较差等缺点，同时，这种精浆质控品的保存时间较短，不利于留样检测以及长途运输。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种精浆生化质控品，通过使用稳定性好、原料来源广泛的人工基质替代人精浆基质，保证精浆质控品的稳定性。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种精浆生化质控品，包括人工精浆基质液、质控项目添加物质、稳定剂、冻干保护剂以及防腐剂，经几种物质混合后制成冻干粉；

其中，所述人工精浆基质液中包括人白蛋白、人γ-球蛋白、维生素C、牛纤维蛋白原、凝血酶、纤溶酶、氯化钙以及PBS缓冲液；

所述质控项目添加物质为设计含量的α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物气化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶；

所述稳定剂为PEG400与甘露醇；

所述冻干保护剂为海藻糖与甘氨酸；

防腐剂：叠氮钠。

进一步，每升所述人工精浆基质液中包含人白蛋白5-15g/L、人γ-球蛋白15-50g/L、维生素C 20-50μmmol/L、牛纤维蛋白原5-40mg/L、凝血酶40-100U/L、纤溶酶10-50U/L、氯化钙5-20mmmol/L以及PBS缓冲液。

本发明还提供了一种精浆生化质控品的制备方法，技术方案如下：

配置PBS缓冲液：称取NaCl8.5g、Na2HPO42.2g、NaH2PO40.3g，溶于双蒸水中，用盐酸调节pH值至7.2，加水定容，4℃保存备用；

配置人工精浆基液：取一升人工精浆基质液，在37℃下孵育2小时，3000转/分钟离心20分钟，提取上清液，0.2μm孔径滤纸过滤；

取质控项目添加物质加入所述人工精浆基质液中，称取PEG40020-60g，甘露醇2-20g，海藻糖5-40g，甘氨酸0.2-3g，叠氮钠0.1-2克，加入到所述人工精浆基质液中混匀，0.2μm孔径滤纸过滤；

将上述溶液分装到冻干瓶中，将分装好的溶液置入冷冻干燥机内冻干，然后保存。

进一步，所述冻干步骤为：-50℃预冷冻3h，冻干机减压抽真空至20Pa以下，-50℃20pa以下冷维持24小时，升温至0℃维持4h，升温至30度维持5h，封盖，放气至常压，取出。

进一步，所述质控项目添加物质包括：

α-葡糖苷酶30-100KU、果糖5-50mmol、氧化锌2-30mmol、酸性磷酸酶200-900KU、乳酸脱氢酶-X同功酶300-1500U、顶体酶200-1500mIU、柠檬酸30-300mmol、超氧化物歧化酶300-1500KU、弹性蛋白酶300-2000μg、肉碱100-800μmol、谷氨酰转肽酶30-500KU。

进一步，所述精浆生化质控品的生化指标的定值范围由以下方法获取：

质控品溶解：取出质控品冻干粉，室温放置10-15min使所述质控品冻干粉恢复室温，以注射用纯化水2ml溶解所述质控品冻干粉，颠倒混匀10次以上，直至所述质控品冻干粉全部溶解，加盖后室温放置10min；

质控品检测：选取三个实验室，将质控品作为待检标本，采用精浆α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物歧化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶检测试剂对质控品中相应物质含量进行检测，每个实验室对每个项目重复检测40次，共计每个项目120次，记录检测结果；

质控品定值：计算每个项目120个检测结果的均值与标准差，将均值±2SD作为该项目的定值范围。

进一步，所述质控品的使用方法：

质控品溶解：取出质控品冻干粉，室温放置10-15min使所述质控品冻干粉恢复室温，以注射用纯化水2ml溶解所述质控品冻干粉，颠倒混匀10次以上，直至所述质控品冻干粉全部溶解，加盖后室温放置10min；

质控品检测：选取三个实验室，将质控品作为待检标本，采用精浆α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物歧化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶检测试剂对待测样品中相应物质含量进行检测，每个实验室对每个项目重复检测40次，共计每个项目120次，记录检测结果；

比较测定值与质控品定值范围，判断结果是否在控。

本发明一种精浆生化质控品，采用人工精浆基质液，避免使用人精浆，克服了人精浆原料来源有限、具有潜在生物安全隐患、稳定性较差等缺点；同时，本专利质控品除添加酶稳定剂外还添加冻干保护剂及防腐剂，有利于保证质控品稳定性及延长保存时间。市售质控品稳4-8℃条件下一般可稳定18-24个月，采用该技术制备的质控品4-8℃条件下可稳定36个月以上。

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的方案，下面结合本发明示例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的示例仅仅是本发明的一部分示例，而不是全部的示例。基于本发明的中示例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下，所获得的所有其他实施方式都应当属于本发明保护的范围。

在本实施方式的描述中，术语“内”、“外”、“前”、“后”、“左”、“右”等指示的方位或位置关系仅仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”仅用于区别类似的对象，而不能理解为特定的顺序或先后次序，应该理解这样的使用在适当情况想可以互换。

为清楚地说明本发明的设计思想，下面结合示例对本发明进行说明。

实施例1：

一种精浆生化质控品，包括人工精浆基质液、质控项目添加物质、稳定剂、冻干保护剂以及防腐剂，经几种物质混合后制成冻干粉；

其中，所述人工精浆基质液中包括人白蛋白、人γ-球蛋白、维生素C、牛纤维蛋白原、凝血酶、纤溶酶、氯化钙以及PBS缓冲液；

所述质控项目添加物质为设计含量的α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物气化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶；所述稳定剂为PEG400与甘露醇；所述冻干保护剂为海藻糖与甘氨酸；防腐剂：叠氮钠。

其中，每升所述人工精浆基质液中包含人白蛋白5g/L、人γ-球蛋白15g/L、维生素C 20μmmol/L、牛纤维蛋白原5mg/L、凝血酶40U/L、纤溶酶10U/L、氯化钙5mmmol/L以及PBS缓冲液。

该精浆生化质控品的制备方法：

配置PBS缓冲液：称取NaCl8.5g、Na2HPO42.2g、NaH2PO40.3g，溶于双蒸水中，用盐酸调节pH值至7.2，加水定容，4℃保存备用；

配置人工精浆基液：取一升上述人工精浆基质液，在37℃下孵育2小时，3000转/分钟离心20分钟，提取上清液，0.2μm孔径滤纸过滤；

取质控项目添加物质α-葡糖苷酶30KU、果糖5mmol、氧化锌2mmol、酸性磷酸酶200KU、乳酸脱氢酶-X同功酶300U、顶体酶200mIU、柠檬酸30mmol、超氧化物歧化酶300KU、弹性蛋白酶300μg、肉碱100μmol、谷氨酰转肽酶30KU加入人工精浆基质液1000ml，混匀，称取PEG40020g，甘露醇2g，海藻糖5g，甘氨酸0.2g，叠氮钠0.1g，加入到所述人工精浆基质液中混匀，0.2μm孔径滤纸过滤；

将上述溶液分装到5ml的冻干瓶中，每瓶2ml。将分装好的溶液置入冷冻干燥机内冻干。冻干步骤为：-50℃预冷冻3h，冻干机减压抽真空至20Pa以下，-50℃20pa以下冷维持24小时，升温至0℃维持4h，升温至30度维持5h，封盖，放气至常压，取出，即得冻干精浆生化多项质控品。2-8℃冰箱保存。

本发明一种精浆生化质控品，本专利采用人工精浆基质液，避免使用人精浆，克服了人精浆原料来源有限、具有潜在生物安全隐患、稳定性较差等缺点；同时，本专利质控品除添加酶稳定剂外还添加冻干保护剂及防腐剂，有利于保证质控品稳定性及延长保存时间。市售质控品稳4-8℃条件下一般可稳定18-24个月，采用该技术制备的质控品4-8℃条件下可稳定36个月以上。

实施例二

一种精浆生化质控品，包括人工精浆基质液、质控项目添加物质、稳定剂、冻干保护剂以及防腐剂，经几种物质混合后制成冻干粉；

其中，所述人工精浆基质液中包括人白蛋白、人γ-球蛋白、维生素C、牛纤维蛋白原、凝血酶、纤溶酶、氯化钙以及PBS缓冲液；

所述质控项目添加物质为设计含量的α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物气化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶；所述稳定剂为PEG400与甘露醇；所述冻干保护剂为海藻糖与甘氨酸；防腐剂为叠氮钠。

其中，每升所述人工精浆基质液中包含人白蛋白10g/L、人γ-球蛋白30g/L、维生素C 40μmmol/L、牛纤维蛋白原20mg/L、凝血酶50U/L、纤溶酶20U/L、氯化钙10mmmol/L以及PBS缓冲液。

一种精浆生化质控品的制备方法：

配置PBS缓冲液：称取NaCl8.5g、Na2HPO42.2g、NaH2PO40.3g，溶于双蒸水中，用盐酸调节pH值至7.2，加水定容，4℃保存备用；

配置人工精浆基液：取一升上述人工精浆基质液，在37℃下孵育2小时，3000转/分钟离心20分钟，提取上清液，0.2μm孔径滤纸过滤；

取质控项目添加物质，本实施例中各物质用量为α-葡糖苷酶60KU、果糖20mmol、氧化锌10mmol、酸性磷酸酶600KU、乳酸脱氢酶-X同功酶800U、顶体酶800mIU、柠檬酸100μmol、超氧化物歧化酶1000KU、弹性蛋白酶800μg、肉碱400μmol、谷氨酰转肽酶200KU，加入人工精浆基质液1000ml，混匀，称取PEG40040g，甘露醇10g，海藻糖20g，甘氨酸1g叠氮钠0.5g，加入到所述人工精浆基质液中混匀，0.2μm孔径滤纸过滤；

将上述溶液分装到5ml的冻干瓶中，每瓶2ml。将分装好的溶液置入冷冻干燥机内冻干。冻干步骤为：-50℃预冷冻3h，冻干机减压抽真空至20Pa以下，-50℃20pa以下冷维持24小时，升温至0℃维持4h，升温至30度维持5h，封盖，放气至常压，取出，即得冻干精浆生化多项质控品。2-8℃冰箱保存。

实施例三

一种精浆生化质控品，包括人工精浆基质液、质控项目添加物质、稳定剂、冻干保护剂以及防腐剂，经几种物质混合后制成冻干粉；

其中，所述人工精浆基质液中包括人白蛋白、人γ-球蛋白、维生素C、牛纤维蛋白原、凝血酶、纤溶酶、氯化钙以及PBS缓冲液；

所述质控项目添加物质为设计含量的α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物气化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶；所述稳定剂为PEG400与甘露醇；所述冻干保护剂为海藻糖与甘氨酸；防腐剂：叠氮钠。

其中，每升所述人工精浆基质液中包含人白蛋白15g/L、人γ-球蛋白50g/L、维生素C 50μmmol/L、牛纤维蛋白原40mg/L、凝血酶100U/L、纤溶酶50U/L、氯化钙20mmmol/L以及PBS缓冲液。

一种精浆生化质控品的制备方法：

配置PBS缓冲液：称取NaCl8.5g、Na2HPO42.2g、NaH2PO40.3g，溶于双蒸水中，用盐酸调节pH值至7.2，加水定容，4℃保存备用；

配置人工精浆基液：取一升上述人工精浆基质液，在37℃下孵育2小时，3000转/分钟离心20分钟，提取上清液，0.2μm孔径滤纸过滤；

取质控项目添加物质，本实施例中各物质用量为α-葡糖苷酶100KU、果糖50mmol、氧化锌30mmol、酸性磷酸酶900KU、乳酸脱氢酶-X同功酶1500U、顶体酶1500mIU、柠檬酸300μmol、超氧化物歧化酶1500KU、弹性蛋白酶2000μg、肉碱800μmol、谷氨酰转肽酶500KU，加入人工精浆基质液1000ml，混匀，称取PEG40060g，甘露醇20g，海藻糖40g，甘氨酸3g，叠氮钠2g，加入到所述人工精浆基质液中混匀，0.2μm孔径滤纸过滤；

将上述溶液分装到5ml的冻干瓶中，每瓶2ml。将分装好的溶液置入冷冻干燥机内冻干。冻干步骤为：-50℃预冷冻3h，冻干机减压抽真空至20Pa以下，-50℃20pa以下冷维持24小时，升温至0℃维持4h，升温至30度维持5h，封盖，放气至常压，取出，即得冻干精浆生化多项质控品。2-8℃冰箱保存。

实施例四

本发明精浆生化质控品的使用需要确定其生化指标的定值范围，本发明精浆生化质控品的生化指标的定值范围由以下方法获取：

质控品溶解：取出质控品冻干粉，室温放置10-15min使所述质控品冻干粉恢复室温，以注射用纯化水2ml溶解所述质控品冻干粉，颠倒混匀10次以上，直至所述质控品冻干粉全部溶解，加盖后室温放置10min；

质控品检测：选取三个实验室，将质控品作为待检标本，采用精浆α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物歧化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶检测试剂对质控品中相应物质含量进行检测，每个实验室对每个项目重复检测40次，共计每个项目120次，记录检测结果；

质控品定值：计算每个项目120个检测结果的均值与标准差，将均值±2SD作为该项目的定值范围。

待确定精浆生化质控品的生化指标的定值范围后，质控品的使用方法如下：

质控品溶解：取出质控品冻干粉，室温放置10-15min使所述质控品冻干粉恢复室温，以注射用纯化水2ml溶解所述质控品冻干粉，颠倒混匀10次以上，直至所述质控品冻干粉全部溶解，加盖后室温放置10min；

质控品检测：选取三个实验室，将质控品作为待检标本，采用精浆α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物歧化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶检测试剂对待测样品中相应物质含量进行检测，每个实验室对每个项目重复检测40次，共计每个项目120次，记录检测结果；

比较测定值与质控品定值范围，判断检测结果是否在控。

需要说明的是，除了上述给出的具体示例之外，其中的一些部分可有不同选择。而这些都是本领域技术人员在理解本发明思想的基础上基于其基本技能即可做出的，故在此不再一一例举。

最后，可以理解的是，以上实施方式仅仅是为了说明本发明的原理而采用的示例性实施方式，然而本发明并不局限于此。对于本领域普通技术人员而言，在不脱离本发明的原理和实质的情况下，可以做出各种变型和改进，这些变型和改进也视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种精浆生化质控品，其特征在于，包括人工精浆基质液、质控项目添加物质、稳定剂、冻干保护剂以及防腐剂，经几种物质混合后制成冻干粉；

其中，所述人工精浆基质液中包括人白蛋白、人γ-球蛋白、维生素C、牛纤维蛋白原、凝血酶、纤溶酶、氯化钙以及PBS缓冲液；

所述质控项目添加物质为设计含量的α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物气化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶；

所述稳定剂为PEG400与甘露醇；

所述冻干保护剂为海藻糖与甘氨酸；

防腐剂：叠氮钠。

2.根据权利要求1所述的精浆生化质控品，其特征在于，每升所述人工精浆基质液中包含人白蛋白5-15g/L、人γ-球蛋白15-50g/L、维生素C20-50μmmol/L、牛纤维蛋白原5-40mg/L、凝血酶40-100U/L、纤溶酶10-50U/L、氯化钙5-20mmmol/L以及PBS缓冲液。

3.一种精浆生化质控品的制备方法，其特征在于，步骤如下：

配置PBS缓冲液：称取NaCl8.5g、Na2HPO42.2g、NaH2PO40.3g，溶于双蒸水中，用盐酸调节pH值至7.2，加水定容，4℃保存备用；

配置人工精浆基液：取一升人工精浆基质液，在37℃下孵育2小时，3000转/分钟离心20分钟，提取上清液，0.2μm孔径滤纸过滤；

取质控项目添加物质加入所述人工精浆基质液中，混匀，称取PEG40020-60g，甘露醇2-20g，海藻糖5-40g，甘氨酸0.2-3g，叠氮钠0.1-2克，加入到所述人工精浆基质液中混匀，0.2μm孔径滤纸过滤；

将上述溶液分装到冻干瓶中，将分装好的溶液置入冷冻干燥机内冻干，然后保存。

4.根据权利要求3所述精浆生化质控品，其特征在于所述冻干步骤为：-50℃预冷冻3h，冻干机减压抽真空至20Pa以下，-50℃20pa以下冷维持24小时，升温至0℃维持4h，升温至30度维持5h，封盖，放气至常压，取出。

5.根据权利要求3所述的精浆生化质控品，其特征在于，所述质控项目添加物质包括：

α-葡糖苷酶30-100KU、果糖5-50mmol、氧化锌2-30mmol、酸性磷酸酶200-900KU、乳酸脱氢酶-X同功酶300-1500U、顶体酶200-1500mIU、柠檬酸30-300mmol、超氧化物歧化酶300-1500KU、弹性蛋白酶300-2000μg、肉碱100-800μmol、谷氨酰转肽酶30-500KU。

6.根据权利要求1或3所述的精浆生化质控品，其特征在于，所述精浆生化质控品的生化指标的定值范围由以下方法获取：

质控品溶解：取出质控品冻干粉，室温放置10-15min使所述质控品冻干粉恢复室温，以注射用纯化水2ml溶解所述质控品冻干粉，颠倒混匀10次以上，直至所述质控品冻干粉全部溶解，加盖后室温放置10min；

质控品检测：选取三个实验室，将质控品作为待检标本，采用精浆α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物歧化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶检测试剂对质控品中相应物质含量进行检测，每个实验室对每个项目重复检测40次，共计每个项目120次，记录检测结果；

质控品定值：计算每个项目120个检测结果的均值与标准差，将均值±2SD作为该项目的定值范围。

7.根据权利要求6所述的精浆生化质控品，其特征在于，所述质控品的使用方法：

质控品溶解：取出质控品冻干粉，室温放置10-15min使所述质控品冻干粉恢复室温，以注射用纯化水2ml溶解所述质控品冻干粉，颠倒混匀10次以上，直至所述质控品冻干粉全部溶解，加盖后室温放置10min；

质控品检测：选取三个实验室，将质控品作为待检标本，采用精浆α-葡糖苷酶、果糖、锌、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶-X同功酶、顶体酶、柠檬酸、超氧化物歧化酶、弹性蛋白酶、肉碱、谷氨酰转肽酶检测试剂对待测样品中相应物质含量进行检测，每个实验室对每个项目重复检测40次，共计每个项目120次，记录检测结果；

比较测定值与所述质控品的生化指标的定值范围，判断结果是否在控。