CN110846255A - 一种大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，包括：(1)确认每次配料阶段微量元素补料中各组物料成分配比数量；(2)准备一组灭菌自封袋，在无菌工作台内，将工艺所需的物料自容器中取出，根据工艺规程完成各项物料的称量后，分别放入一个灭菌自封袋内，贴上标签后封口密封；(3)玻璃烧杯中加入纯化水，依次加入所需各项微量物料，打开磁力搅拌器搅拌均匀后加纯化水定容至1.5L，用氢氧化钠调节pH；(4)于生物安全柜内将配制好的微量元素盐溶液通过滤芯过滤至无菌补料瓶中。本发明提供补料配制工艺对在配置大肠杆菌培养基之前，对物料进行预处理，避免物料存放过久结块不利于称量，以减少对发酵过程带来的不利影响。
Description
技术领域
本发明涉及基因工程领域所用的培养基，尤其涉及一种大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺。
背景技术
随着生物制药的发展，利用重组DNA技术克隆大肠杆菌制得的工程菌，生产生物药数量越来越多，为生物技术获得生物药物产品的主要途径。
一般情况下，生物药物的产率与大肠杆菌发酵密度密切相关，大肠杆菌的收率直接关系到生物药物的产率。不断有学者进行这方面的研究，如根据化学计量模式(stoichiometric model)的方法重新对培养基配方进行设计和优化。在发酵策略方面，为了提高细菌发酵密度，发酵工艺普遍采用补料-分批发酵(fed-batch)的方式提高菌体生长密度和目标产物的表达总量。
补料培养基包括碳源、氮源、无机盐补料、微量元素补料。微量元素补料的特点是单批物料用量相对较小，种类较为繁杂。其中，部分物料(铵盐、无机盐)在较长期存放后会有结块现象发生。物料结块后，将会影响样品的取样精度与配制时间，对生产带来不便。
因此，需要提供一种大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，改善由于微量元素补料中各成分配置前结块对配置过程产生不利影响的现状。
发明内容
本发明为解决现有技术中的上述问题，提出一种大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺。
本发明采用以下技术方案：
一种大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，包括以下步骤：
(1)根据生产工艺，确认每次配料阶段微量元素补料中各组物料成分配比数量，同时确认物料在车间环境下不同物料之间无相互反应；
(2)准备一组灭菌自封袋，在无菌工作台内，将工艺所需的所述微量物料自容器中取出，根据工艺规程完成各项所述微量物料的称量后，分别放入一个所述灭菌自封袋内密封，使用药杵将所述灭菌自封袋密封的所述微量物料粉碎；
(3)玻璃烧杯中加入适量纯化水，依次加入所需各项所述微量物料，打开磁力搅拌器搅拌均匀后加纯化水定容至1.5L，用氢氧化钠调节pH至7.0-7.2的微量元素盐溶液；
(4)于生物安全柜内将配制好的所述微量元素盐溶液通过滤芯过滤至无菌补料瓶中。
优选地，步骤(1)中所述微量物料成分选自FeSO4·7H2O、MnSO4·nH2O、AlCl3·6H2O、ZnSO3·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuCl2·2H2O、H3BO4、CaCl2·2H2O、FeCl3·6H2O、MgSO4·7H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、生物素、HCl、谷氨酸钠、无水氯化钙中任意一种或多种。
优选地，步骤(2)中所述称量误差不得超过处方量的±1％。
优选地，步骤(2)中所述自封袋外表面的上部设有标签夹，一标签插入所述标签夹内，所述标签上记录所述灭菌自封袋中所述微量物料的名称和重量。
优选地，步骤(2)所述自封袋的封口形式可选自夹链自封袋、自粘式自封袋和卡槽式自封袋中任意一种。
优选地，步骤(2)所述自封袋的大小可选自57mm*130mm、70mm*260mm、90mm*165mm、90mm*260mm中任意一种。
优选地，步骤(1)中所述微量元素补料的物料成分组成为步骤(1)中所述微量元素补料的物料成分为七水硫酸亚铁、一水硫酸锰、六水氯化钴、无水氯化钙、七水硫酸镁、五水硫酸铜、硫酸锌0.29g/L；进一步地，所述微量元素补料的物料成分组成为七水硫酸亚铁2.08g/L；一水硫酸锰1.71g/L；六水氯化钴2.37g/L；无水氯化钙1.13g/L；七水硫酸镁1.44g/L；五水硫酸铜0.29g/L；硫酸锌0.29g/L。
优选地，步骤(2)中密封后的所述灭菌自封的储存于避光处，储存温度≤20℃。
本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
在发酵生产大肠杆菌之前，设计一道工序对物料进行预处理，根据生产工艺确认每次配料阶段微量元素补料中各组物料成分配比数量，将储备物料使用灭菌自封袋进行定量分装，避免物料存放过久结块不利于称量，以减少对发酵过程带来的不利影响；采用上述发明内容，在处理多种复合盐溶液的过程中，通过增加一步预处理优化程序，我们可以将预处理药品的时间减少50％即10～15分钟，有效提高实验效率。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
表1一种大肠杆菌培养基中各营养组分配比
实施例1
本实施例提供一种大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，按照表1中M01培养基中所需的微量元素混合培养基所需的微量元素物料进行配置，包括以下步骤：
(1)根据生产工艺，检查微量物料名称、规格、批号，确认每次配料阶段微量元素补料中各组所述微量物料成分配比数量，同时确认所述微量物料在车间环境下不同物料之间无相互反应；
(2)准备一组灭菌自封袋，在无菌工作台内，将工艺所需的七水硫酸亚铁2.08g/L；一水硫酸锰1.71g/L；六水氯化钴2.37g/L；无水氯化钙1.13g/L；七水硫酸镁1.44g/L；五水硫酸铜0.29g/L；硫酸锌0.29g/L自容器中取出，分别放入一个所述灭菌自封袋内密封，使用药杵将所述灭菌自封袋密封的所述微量物料粉碎；
(3)玻璃烧杯中加入适量纯化水，依次加入所需各项所述微量物料，打开磁力搅拌器搅拌均匀后加纯化水定容至1.5L，用5mol/L氢氧化钠调节pH至7.0-7.2的微量元素盐溶液；
(4)于生物安全柜内将配制好的所述微量元素盐溶液通过2μm的滤芯过滤至无菌补料瓶中。
实施例2
采用实施例1制备的所述微量元素盐溶液制备M01培养基，包括以下步骤：
(1)向配液袋内加入适量纯化水，依次向配液袋内加入酵母提取物，胰蛋白胨，氯化钠，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，葡萄糖，加入适量纯化水开启配液搅拌系统，物料混匀后加纯化水定量至400L；
(2)将无菌补料瓶中的所述微量元素盐溶液按照2mL/L的目标浓度添加入上述步骤获得的混合溶液中；
(3)向发酵罐中通入高温纯蒸汽加热至121℃，维持时间30min，降温至40℃完成发酵罐灭菌工作，卸去罐内压力后，将培养基通过蠕动泵加入发酵管后，通入高温蒸汽20min，降温至37℃完成培养基灭菌，之后即准备接种培养细胞。
实施例3
本实施例提供一种大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，包括以下步骤：
(1)根据生产工艺，确认每次配料阶段微量元素补料中各组物料成分配比数量，同时确认物料在车间环境下不同物料之间无相互反应；
(2)准备一组灭菌自封袋，在无菌工作台内，将工艺所需的物料自容器中取出，根据工艺规程完成各项物料的称量后，分别放入一个所述灭菌自封袋内，贴上标签后封口密封。
(3)玻璃烧杯中加入适量纯化水，依次加入所需各项所述微量物料，打开磁力搅拌器搅拌均匀后加纯化水定容至1.5L，用5mol/L氢氧化钠调节pH至7.0-7.2的微量元素盐溶液；
(4)于生物安全柜内将配制好的所述微量元素盐溶液通过0.2μm的滤芯过滤至无菌补料瓶中。
本实施例中，步骤(1)中所述物料成分为七水硫酸亚铁2.08g/L；一水硫酸锰1.71g/L；六水氯化钴2.37g/L；无水氯化钙1.13g/L；七水硫酸镁1.44g/L；五水硫酸铜0.29g/L；硫酸锌0.29g/L；步骤(2)中所述灭菌自封袋上所述标签分别记录七水硫酸亚铁3.120g；一水硫酸锰2.565g；六水氯化钴3.555g；无水氯化钙1.695g；七水硫酸镁2.16g；五水硫酸铜0.435g；硫酸锌0.435g。
本实施例中，所述自封袋的封口形式为自粘式，进一步地自封袋的大小选择57mm*130mm，也可以根据具体的物料的量进行选择。
本实施例中，步骤(2)中密封后的所述灭菌自封袋储存于避光处，储存温度≤20℃。
采用上述实施例3，预处理药品的时间减少，10～15分钟，有效提高实验效率。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (9)
1.一种大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，其特征在于，包括以下步骤：
(1)根据生产工艺，检查微量物料名称、规格、批号，确认每次配料阶段微量元素补料中各组所述微量物料成分配比数量，同时确认所述微量物料在车间环境下不同物料之间无相互反应；
(2)准备一组灭菌自封袋，在无菌工作台内，将工艺所需的所述微量物料自容器中取出，根据工艺规程完成各项所述微量物料的称量后，分别放入一个所述灭菌自封袋内密封，使用药杵将所述灭菌自封袋密封的所述微量物料粉碎；
(3)玻璃烧杯中加入纯化水，依次加入所需各项所述微量物料，打开磁力搅拌器搅拌均匀后加纯化水定容至1.5L，用氢氧化钠调节pH至7.0-7.2的微量元素盐溶液；
(4)于生物安全柜内将配制好的所述微量元素盐溶液通过滤芯过滤至无菌补料瓶中。
2.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，其特征在于，步骤(1)中所述微量物料成分选自FeSO4·7H2O、MnSO4·nH2O、AlCl3·6H2O、ZnSO3·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuCl2·2H2O、H3BO4、CaCl2·2H2O、FeCl3·6H2O、MgSO4·7H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、生物素、HCl、谷氨酸钠、无水氯化钙中任意一种或多种。
3.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，其特征在于，步骤(2)中所述称量误差不得超过处方量的±1％。
4.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，其特征在于，步骤(2)中所述自封袋外表面的上部设有标签夹，一标签插入所述标签夹内，所述标签上记录所述灭菌自封袋中所述微量物料的名称和重量。
5.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，其特征在于，步骤(3)中所述氢氧化钠的浓度为4-6mol/L。
6.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，其特征在于，步骤(4)中所述滤芯的滤孔直径为0.2μm。
7.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，其特征在于，步骤(1)中所述微量元素补料的物料成分为七水硫酸亚铁、一水硫酸锰、六水氯化钴、无水氯化钙、七水硫酸镁、五水硫酸铜、硫酸锌0.29g/L。
8.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，其特征在于，步骤(1)中所述微量元素补料的物料成分组成为七水硫酸亚铁2.08g/L；一水硫酸锰1.71g/L；六水氯化钴2.37g/L；无水氯化钙1.13g/L；七水硫酸镁1.44g/L；五水硫酸铜0.29g/L；硫酸锌0.29g/L。
9.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵培养基补料配制工艺，其特征在于，步骤(2)中密封后的所述灭菌自封袋储存于避光处，储存温度≤20℃。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101250507A (zh) * | 2008-04-10 | 2008-08-27 | 华东理工大学 | 利用重组大肠杆菌高效生产丙酮酸氧化酶的分批式补料发酵工艺 |
| AR098638A1 (es) * | 2013-12-06 | 2016-06-01 | Myriant Corp | Un procedimiento para preparar ácido succínico y éster succinato |
| CN110066331A (zh) * | 2018-01-23 | 2019-07-30 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101250507A (zh) * | 2008-04-10 | 2008-08-27 | 华东理工大学 | 利用重组大肠杆菌高效生产丙酮酸氧化酶的分批式补料发酵工艺 |
| AR098638A1 (es) * | 2013-12-06 | 2016-06-01 | Myriant Corp | Un procedimiento para preparar ácido succínico y éster succinato |
| CN110066331A (zh) * | 2018-01-23 | 2019-07-30 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 丁角立: "《饲料添加剂指南》", 31 December 1994, 北京农业大学出版社 * |
| 罗红霞 等: "重组大肠杆菌BL21（DE3）/rbLF-N高密度培养条件优化", 《中国乳品工业》 * |
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