CN110840860A - 一种纳米药物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种纳米药物及其制备方法和应用，所述纳米药物包括磷酸钙基质、封装于所述磷酸钙基质中的化疗药物、修饰于所述磷酸钙基质表面的光热剂以及装载于所述光热剂孔隙中的自噬抑制剂。本发明的纳米药物将化疗和热疗相结合，以磷酸钙为刚性基质，化疗药物和光热试剂封装在磷酸钙刚性基质中，同时负载有细胞自噬抑制剂，可以实现通过抑制自噬从而增敏化疗和热疗的效果，提高对肿瘤的治疗疗效。

Description

一种纳米药物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于纳米药物载体材料技术领域，涉及一种纳米药物及其制备方法和应用，尤其涉及一种通过抑制自噬作用进行化疗和热疗增敏的纳米药物及其制备方法和应用。
背景技术
癌症治疗的局限性在于治疗方法单一且缺乏有效的化疗药物靶向策略，难以取得显著疗效。化疗是乳腺癌最常用的临床治疗方法之一，但是目前采用的化疗药物缺乏有效的载体，特异性差，常伴有严重的副作用。光热疗法(PTT)是一种具有广泛应用前景的癌症治疗方法，在光热剂的辅助作用下，能量通过光热转换效应诱导癌细胞死亡。PTT虽然能够有效抑制肿瘤，但是光热效应转化的热量会破坏细胞质成分，激活细胞自噬。癌细胞自噬被激活后，能够持续性产生能量，并提供可循环利用的材料，以对抗各种疗法。因此，为提高PTT在癌症治疗中的应用可能性，需要抑制细胞自噬。在一个系统中结合两种或两种以上具有不同机制的疗法，是减少副作用和改善长期预后的一种有效策略。因此，集成有不同治疗方法的多功能平台有助于实现癌症的有效治疗。
磷酸钙作为骨骼和牙齿的主要成分之一，由于其固有的生物相容性和生物可降解性，细胞毒性小，是一种良好的药物载体。此外，磷酸钙还可以通过内吞途径进入细胞，并在酸性内吞体的作用下溶解内化，有助于药物释放到细胞质中。目前，磷酸钙已作为药物载体用于化疗药物的制备。
CN106620856A公开了一种基于纳米载体的化疗-热疗型骨修复材料及制备和应用，以磷酸钙骨水泥为基质，同时复合介孔二氧化硅包覆金纳米棒治疗试剂，该介孔二氧化硅利用自身孔道能高效负载肿瘤治疗药物，而包覆的金纳米棒具有独特的光学特性，可用于光热治疗。但是，所述材料包覆的金纳米棒生物相容性差，具有细胞毒性，可能引起炎症反应发生，同时不能解决光热效应引起的细胞自噬。
CN107309437A公开了一种金纳米星/磷酸钙纳米粒子，所述金纳米星/磷酸钙纳米粒子光热转换效率高，在药物输送的同时实现肿瘤部位热成像，所述金纳米星/磷酸钙纳米粒子主要用于肿瘤部位热成像，不能负载药物和光热剂用于肿瘤的治疗。
因此，提供一种基于磷酸钙的纳米治疗药物，将化疗和热疗相结合，在肿瘤治疗领域具有重要意义。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了一种纳米药物及其制备方法和应用，所述纳米药物将化疗和热疗相结合，以磷酸钙为刚性基质，化疗药物和光热试剂封装在磷酸钙刚性基质中，同时负载有细胞自噬抑制剂，可以实现通过抑制自噬从而增敏化疗和热疗的效果，进一步提高对肿瘤的治疗疗效。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种纳米药物，所述纳米药物包括磷酸钙基质、封装于所述磷酸钙基质中的化疗药物、修饰于所述磷酸钙基质表面的光热剂以及装载于所述光热剂孔隙中的自噬抑制剂。
本发明中，磷酸钙纳米颗粒丰富的空腔结构有利于将疏水性化疗药物封装于磷酸钙刚性基质中，利用多巴胺良好的粘附性将多巴胺附着在磷酸钙纳米颗粒表面，实现了化疗与热疗的结合，同时利用多巴胺表面的孔隙结构装载亲水性自噬抑制剂，实现了对光热效应可能引起的细胞自噬的抑制作用，所述纳米药物将化疗药物、光热剂和自噬抑制剂递送到肿瘤部位，通过抑制自噬作用实现了对化疗和热疗的增敏效果，抗肿瘤疗效显著。
优选地，所述化疗药物为疏水性化疗药物，溶解度小于0.5/1000。
优选地，所述疏水性化疗药物包括多西他赛、紫杉醇或喜树碱中的任意一种或至少两种的组合，优选为多西他赛。
优选地，所述光热剂包括多巴胺。
本发明中，多巴胺(PDA)作为光热剂已被广泛应用于肿瘤治疗领域，与广泛使用的金属和碳基光热材料不同，PDA具有良好的生物相容性，可忽略的细胞毒性，可以显著降低炎症反应的发生；同时，PDA表面具有丰富的孔隙结构，能够将自噬抑制剂如氯喹(CQ)封装在其表面。
优选地，所述自噬抑制剂包括3-甲基腺嘌呤、巴弗洛霉素或氯喹中的任意一种或至少两种的组合，优选为氯喹。
优选地，所述纳米药物的粒径为160～180nm，例如可以是160nm、161nm、162nm、163nm、164nm、164.5nm、165nm、165.3nm、166nm、167nm、168nm、168.6nm、169nm、170nm、171nm、172nm、173nm、174nm、175nm、176nm、176.4nm、177nm、178nm、179nm、180nm或181.7nm，优选为164.5～168.6nm。
优选地，所述纳米药物的分散度为0.132～0.152，例如可以是0.132、0.133、0.134、0.135、0.136、0.137、0.138、0.139、0.140、0.141、0.142、0.143、0.144、0.145、0.146、0.147、0.148、0.149、0.150、0.151或0.152，优选为0.132～0.145。
本发明中，分散度指纳米颗粒在水中的分散程度，通常与1作比较，越接近1表示分散性越不好，越接近0表示分散性越好，本发明的纳米药物的分散度为0.132～0.152，具有良好的分散性。
第二方面，本发明提供了一种如第一方面所述的纳米药物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)制备封装有化疗药物的磷酸钙基质；
(2)加入光热剂，调节pH，磁力搅拌后得到表面修饰有光热剂的磷酸钙基质；
(3)加入自噬抑制剂，磁力搅拌后得到所述纳米药物；
其中，所述磷酸钙基质、化疗药物、光热剂和自噬抑制剂的质量比为(50～300):(50～100):(0.2～1):(2～10)。
优选地，步骤(1)所述制备封装有化疗药物的磷酸钙基质具体包括：
(1’)将疏水性化疗药物溶于有机溶剂中，加入多聚磷酸钠溶液，得到第一混合液；
(2’)将氯化钙溶液加入第一混合液中，得到第二混合液，磁力搅拌后离心，将沉淀超声复溶得到第一分散液，所述第一分散液中含有封装了化疗药物的磷酸钙基质。
本发明中，采用多聚磷酸钠和氯化钙共沉淀法制备得到磷酸钙纳米颗粒，疏水性化疗药物通过与多聚磷酸钠和氯化钙共沉淀，封装在磷酸钙刚性基质中。
优选地，步骤(1’)所述疏水性化疗药物包括多西他赛、紫杉醇或喜树碱中的任意一种或至少两种的组合，优选为多西他赛。
优选地，步骤(1’)所述疏水性化疗药物的浓度为0.5～1.5μg/mL，例如可以是0.5μg/mL、0.6μg/mL、0.7μg/mL、0.8μg/mL、0.9μg/mL、1.0μg/mL、1.1μg/mL、1.2μg/mL、1.3μg/mL、1.4μg/mL或1.5μg/mL，优选为0.8～1μg/mL。
优选地，步骤(1’)所述有机溶剂包括甲醇、乙腈或二甲基亚砜的任意一种或至少两种的组合。
优选地，步骤(1’)所述多聚磷酸钠溶液的浓度为10～30mg/mL，例如可以是10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL、20mg/mL、21mg/mL、22mg/mL、23mg/mL、24mg/mL、25mg/mL、26mg/mL、27mg/mL、28mg/mL、29mg/mL或30mg/mL，优选为20～25mg/mL。
优选地，步骤(2’)所述氯化钙溶液的浓度为5～20mg/mL，例如可以是5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL，优选为8～10mg/mL。
优选地，步骤(2’)所述磁力搅拌的条件为室温下磁力搅拌10～60min，例如可以是10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min或60min。
优选地，步骤(2)所述光热剂包括多巴胺，所述多巴胺的浓度为0.5～2mg/mL，例如可以是0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL、1.0mg/mL、1.1mg/mL、1.2mg/mL、1.3mg/mL、1.4mg/mL、1.5mg/mL、1.6mg/mL、1.7mg/mL、1.8mg/mL、1.9mg/mL或2.0mg/mL，优选为0.8～1mg/mL。
本发明中，多巴胺(PDA)作为良好的光热剂，简单进行表面改性后修饰在磷酸钙基质表面。
优选地，步骤(2)所述pH为7～9，例如可以是7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或9，优选为8～8.5。
优选地，步骤(2)所述磁力搅拌的条件为室温下磁力搅拌10～20h，例如可以是10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h或20h。
优选地，在步骤(2)所述磁力搅拌后还包括离心、将沉淀超声复溶的步骤，得到第二分散液，所述第二分散液中含有表面修饰有光热剂的磷酸钙基质。
优选地，步骤(3)所述自噬抑制剂包括3-甲基腺嘌呤、巴弗洛霉素或氯喹中的任意一种或至少两种的组合，优选为氯喹。
优选地，步骤(3)所述自噬抑制剂的浓度为30～100μg/mL，例如可以是30μg/mL、35μg/mL、40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、55μg/mL、60μg/mL、65μg/mL、70μg/mL、75μg/mL、80μg/mL、85μg/mL、90μg/mL、95μg/mL或100μg/mL，优选为50～80μg/mL。
优选地，步骤(3)所述磁力搅拌的条件为室温下磁力搅拌1～5h，例如可以是1h、2h、3h、4h或5h。
优选地，在步骤(3)所述磁力搅拌后还包括离心、将沉淀超声复溶的步骤，得到所述纳米药物。
作为优选技术方案，本发明提供了一种如第一方面所述的纳米药物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将浓度为0.5～1.5μg/mL的疏水性化疗药物溶于有机溶剂中，加入浓度为10～30mg/mL的多聚磷酸钠溶液，得到第一混合液；将浓度为5～20mg/mL的氯化钙溶液加入第一混合液中，得到第二混合液，室温下磁力搅拌10～60min后离心，将沉淀超声复溶得到第一分散液，所述第一分散液中含有封装了化疗药物的磷酸钙基质；
(2)加入浓度为0.5～2mg/mL的多巴胺，调节pH为7～9，室温下磁力搅拌10～20h后进行离心，将沉淀复溶离心，洗涤2～4次后将沉淀超声复溶得到第二分散液，所述第二分散液中含有表面修饰有多巴胺的磷酸钙基质；
(3)加入浓度为30～100μg/mL的自噬抑制剂，室温下磁力搅拌1～5h后进行离心，将沉淀超声复溶，得到所述纳米药物；
其中，所述磷酸钙基质、化疗药物、光热剂和自噬抑制剂的质量比为(50～300):(50～100):(0.2～1):(2～10)。
第三方面，本发明提供了一种如第一方面所述的纳米药物在制备肿瘤治疗药物中的应用。
优选地，所述肿瘤包括肝癌、肺癌、乳腺癌、肾母细胞瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、鼻咽癌、间皮质瘤、胰岛细胞瘤、视网膜母细胞瘤、胰腺癌、子宫肌瘤、宫颈癌或甲状腺癌中的任意一种或至少两种的组合。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明通过共沉淀的方式将疏水性化疗药物封装于磷酸钙刚性基质中，在表面黏附一层具有良好光热性能的PDA，并将小分子自噬抑制剂装载于PDA的孔隙中，将化疗和热疗相结合，并抑制了光热效应可能引起的细胞自噬，通过自噬抑制实现了对化疗和热疗的增敏；
(2)本发明的纳米药物可以抑制自噬相关蛋白LC3的表达，降低自噬小体的数量，抑制肿瘤体积，提高了化疗和热疗对肿瘤的治疗效果；
(3)本发明的纳米药物的制备方法简单易行，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1为纳米药物的透射电镜图；
图2为纳米药物的粒径分布图；
图3为连续一周测量的纳米药物的粒径柱状图；
图4为纳米药物的自噬抑制效果；
图5为透射电镜下纳米药物对自噬小体的抑制作用；
图6为纳米药物的抗肿瘤效果。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
实施例1纳米药物的制备
(1)取0.1mL浓度为1μg/mL的多西他赛溶于甲醇中，加入1mL浓度为20mg/mL的多聚磷酸钠溶液，得到第一混合液；将1mL浓度为10mg/mL的氯化钙溶液加入第一混合液中，得到第二混合液，室温下磁力搅拌30min后离心，将沉淀超声复溶得到第一分散液，所述第一分散液中含有封装了多西他赛的磷酸钙基质；
(2)加入10mL浓度为1mg/mL的多巴胺，调节pH为8.5，室温下磁力搅拌15h后进行离心，将沉淀复溶离心，洗涤3次后将沉淀超声复溶得到第二分散液，所述第二分散液中含有表面修饰有多巴胺的磷酸钙基质；
(3)加入1mL浓度为50μg/mL的自噬抑制剂氯喹，室温下磁力搅拌2h后进行离心，将沉淀超声复溶，得到所述纳米药物。
如图1所示，在透射电镜下，纳米药物颗粒呈典型的圆球形，粒径约170nm；如图2所示，利用Zeta电位仪对纳米药物进行粒径测量，纳米药物的粒径为168nm；如图3所示，利用Zeta电位仪连续一周对纳米药物进行粒径测量，纳米药物的稳定性好，粒径基本保持不变。
实施例2纳米药物的制备
(1)取0.1mL浓度为1.5μg/mL的紫杉醇溶于乙腈中，加入1mL浓度为30mg/mL的多聚磷酸钠溶液，得到第一混合液；将1mL浓度为20mg/mL的氯化钙溶液加入第一混合液中，得到第二混合液，室温下磁力搅拌60min后离心，将沉淀超声复溶得到第一分散液，所述第一分散液中含有封装了紫杉醇(DTX)的磷酸钙基质；
(2)加入10mL浓度为2mg/mL的多巴胺，调节pH为9，室温下磁力搅拌20h后进行离心，将沉淀复溶离心，洗涤4次后将沉淀超声复溶得到第二分散液，所述第二分散液中含有表面修饰有多巴胺的磷酸钙基质；
(3)加入1mL浓度为100μg/mL的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤，室温下磁力搅拌5h后进行离心，将沉淀超声复溶，得到所述纳米药物。
本实施例制备的纳米药物具有与实施例1的纳米药物相似的形状和粒径。
实施例3纳米药物的制备
(1)取0.1mL浓度为0.5μg/mL的喜树碱溶于二甲基亚砜中，加入1mL浓度为10mg/mL的多聚磷酸钠溶液，得到第一混合液；将1mL浓度为5mg/mL的氯化钙溶液加入第一混合液中，得到第二混合液，室温下磁力搅拌10min后离心，将沉淀超声复溶得到第一分散液，所述第一分散液中含有封装了喜树碱的磷酸钙基质；
(2)加入10mL浓度为0.5mg/mL的多巴胺，调节pH为7，室温下磁力搅拌10h后进行离心，将沉淀复溶离心，洗涤2次后将沉淀超声复溶得到第二分散液，所述第二分散液中含有表面修饰有多巴胺的磷酸钙基质；
(3)加入1mL浓度为30μg/mL的自噬抑制剂巴弗洛霉素，室温下磁力搅拌1h后进行离心，将沉淀超声复溶，得到所述纳米药物。
本实施例制备的纳米药物具有与实施例1的纳米药物相似的形状和粒径。
实施例4纳米药物在蛋白质印迹水平上的自噬抑制效果
将MDA-MB-231细胞接种于6孔板中，培养24h后加入到不同的实验组中，设置载双药(DTX与CQ)的纳米颗粒(PCNPs/DC)、载双药(DTX与CQ)的纳米颗粒加光照(PCNPs/DC+Nir)、载单药(DTX)的纳米颗粒(PCNPs/D)、载单药(CQ)的纳米颗粒(PCNPs/C)、空载纳米颗粒加光照(PCNPs+Nir)、裸药DTX、空载纳米颗粒(PCNPs)和阴性对照(Ctr)，孵育12h后进行近红外激光治疗；
治疗12h后，收集细胞并用RIPA buffer进行裂解，提取蛋白；
对不同实验组取相同浓度的蛋白在聚丙烯酰胺胶上进行分离，转移至PVDF膜上，采用5％(w/v)奶粉封闭1h后，分别与自噬相关蛋白LC3的一抗和二抗进行孵育，在凝胶成像系统ChemiDoc XR+UV illuminator下观察结果。
如图4所示，在含有CQ的实验组(PCNPs/C、PCNPs/DC和PCNPs/DC+Nir)中，LC3II蛋白切割带显著增加。LC3I转换为LC3II是自噬小体成熟的一个标志，在含有CQ的实验组中，由于CQ干扰溶酶体抑制自噬小体的溶解，导致蛋白LC3II的积累。与对照组相比，PCNPs+Nir、DTX和PCNPs/D显示更多LCII表达，表明有更多的自噬小体产生，进而表明高温和化疗可能会引起细胞自噬来对治疗方式应激。
实施例5纳米药物对自噬小体的抑制作用
将MDA-MB-231细胞接种于6孔板中，培养24h后加入到不同的实验组中，设置载双药(DTX与CQ)的纳米颗粒(PCNPs/DC)、载双药(DTX与CQ)的纳米颗粒加光照(PCNPs/DC+Nir)、载单药(DTX)的纳米颗粒(PCNPs/D)、载单药(CQ)的纳米颗粒(PCNPs/C)、空载纳米颗粒加光照(PCNPs+Nir)、裸药DTX、空载纳米颗粒(PCNPs)和阴性对照(Ctr)，孵育12h后进行近红外激光治疗；
治疗12h后，收集细胞，使用3％戊二醛固定24h，随后使用不同浓度的乙醇进行脱水处理，清除氧化丙烯，嵌入环氧树脂树脂；
用金刚石刀在切片机上将树脂切成薄膜，用醋酸双氧铀和柠檬酸铅进行染色，通过透射电镜进行观察。
结果如图5所示，黑色箭头代表自噬体，PCNPs+Nir组细胞较对照组显示多个自噬体和自噬小泡，表明高温诱导自噬；然而，由于CQ的存在，PCNPs/C、PCNPs/DC和PCNPs/DC+Nir组细胞明显表现出更多的自噬小泡，这与上述western blot分析一致；PCNPs/DC+Nir组首先通过化疗和光热治疗肿瘤，随后通过CQ抑制这两种治疗方法可能诱导的自噬，进一步实现化疗和光热治疗的敏化，获得良好的抗肿瘤效果。
实施例6纳米药物的抗肿瘤效果
在雌性BALB/c无胸腺裸鼠腋下接种1×107个MDA-MB-231细胞，构建三阴性乳腺癌模型，当肿瘤长到约100mm3时，将小鼠模型进行随机分组，每组5只；
各组尾静脉注射不同的纳米药物，4小时后给予小鼠808nm激光照射20s(功率为2W/cm2)，用游标卡尺记录小鼠肿瘤的大小，通过公式计算肿瘤体积：V＝L×W2，其中，L为肿瘤长度，W为肿瘤宽度。
如图6所示，生理盐水组和PCNPs组肿瘤生长曲线较快，说明PCNPs具有良好的生物相容性；单一治疗组(DTX、PCNPs/D、PCNPs+Nir、PCNPs/C)显示部分抗肿瘤疗效，抑制率约30％-50％；PCNPs+Nir组不能通过瞬间高温的方式清除肿瘤，激光照射后小鼠肿瘤结痂，7d后肿瘤体积突然增大；PCNPs/D固有的EPR效应使其能更好地在肿瘤部位聚集，从而表现出比DTX更好的抗肿瘤疗效；而PCNPs/DC不仅可以通过化疗抑制肿瘤生长，还可以通过抑制自噬进一步敏化化疗，因此，PCNPs/DC如预期能够显著抑制肿瘤生长；相比之下，随着激光照射的增加，PCNPs/DC+Nir对肿瘤生长的抑制作用更加明显，PCNPs/DC+Nir组基本完全抑制了肿瘤的生长，整个实验期间无肿瘤复发，PCNPs/DC+Nir具有较强的抗肿瘤能力，这是化疗、光热、自噬抑制协同作用的结果。
综上所述，本发明通过共沉淀的方式将疏水性化疗药物封装于磷酸钙刚性基质中，在表面黏附一层具有良好光热性能的PDA，并将小分子自噬抑制剂装载于PDA的孔隙中，将化疗和热疗相结合，并通过自噬抑制实现了对化疗和热疗的增敏；所述纳米药物可以抑制自噬相关蛋白LC3的表达，降低自噬小体的数量，抑制肿瘤体积，提高了化疗和热疗对肿瘤的治疗效果；制备方法简单易行，具有广泛的应用前景。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种纳米药物，其特征在于，所述纳米药物包括磷酸钙基质、封装于所述磷酸钙基质中的化疗药物、修饰于所述磷酸钙基质表面的光热剂以及装载于所述光热剂孔隙中的自噬抑制剂。
2.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述化疗药物为疏水性化疗药物，溶解度小于0.5/1000；
优选地，所述疏水性化疗药物包括多西他赛、紫杉醇或喜树碱中的任意一种或至少两种的组合，优选为多西他赛；
优选地，所述光热剂包括多巴胺；
优选地，所述自噬抑制剂包括3-甲基腺嘌呤、巴弗洛霉素或氯喹中的任意一种或至少两种的组合，优选为氯喹。
3.根据权利要求1或2所述的纳米药物，其特征在于，所述纳米药物的粒径为160～180nm；
优选地，所述纳米药物的分散度为0.132～0.152。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的纳米药物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)制备封装有化疗药物的磷酸钙基质；
(2)加入光热剂，调节pH，磁力搅拌后得到表面修饰有光热剂的磷酸钙基质；
(3)加入自噬抑制剂，磁力搅拌后得到所述纳米药物；
其中，所述磷酸钙基质、化疗药物、光热剂和自噬抑制剂的质量比为(50～300):(50～100):(0.2～1):(2～10)。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述制备封装有化疗药物的磷酸钙基质具体包括：
(1’)将疏水性化疗药物溶于有机溶剂中，加入多聚磷酸钠溶液，得到第一混合液；
(2’)将氯化钙溶液加入第一混合液中，得到第二混合液，磁力搅拌后离心，将沉淀超声复溶得到第一分散液，所述第一分散液中含有封装了化疗药物的磷酸钙基质；
优选地，步骤(1’)所述疏水性化疗药物包括多西他赛、紫杉醇或喜树碱中的任意一种或至少两种的组合，优选为多西他赛；
优选地，步骤(1’)所述疏水性化疗药物的浓度为0.5～1.5μg/mL，优选为0.8～1μg/mL；
优选地，步骤(1’)所述有机溶剂包括甲醇、乙腈或二甲基亚砜的任意一种或至少两种的组合；
优选地，步骤(1’)所述多聚磷酸钠溶液的浓度为10～30mg/mL，优选为20～25mg/mL；
优选地，步骤(2’)所述氯化钙溶液的浓度为5～20mg/mL，优选为8～10mg/mL；
优选地，步骤(2’)所述磁力搅拌的条件为室温下磁力搅拌10～60min。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述光热剂包括多巴胺，所述多巴胺的浓度为0.5～2mg/mL，优选为0.8～1mg/mL；
优选地，步骤(2)所述pH为7～9，优选为8～8.5；
优选地，步骤(2)所述磁力搅拌的条件为室温下磁力搅拌10～20h；
优选地，在步骤(2)所述磁力搅拌后还包括离心、将沉淀超声复溶的步骤，得到第二分散液，所述第二分散液中含有表面修饰有光热剂的磷酸钙基质。
7.根据权利要求4-6任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述自噬抑制剂包括3-甲基腺嘌呤、巴弗洛霉素或氯喹中的任意一种或至少两种的组合，优选为氯喹；
优选地，步骤(3)所述自噬抑制剂的浓度为30～100μg/mL，优选为50～80μg/mL；
优选地，步骤(3)所述磁力搅拌的条件为室温下磁力搅拌1～5h；
优选地，在步骤(3)所述磁力搅拌后还包括离心、将沉淀超声复溶的步骤，得到所述纳米药物。
8.根据权利要求4-7任一项所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将浓度为0.5～1.5μg/mL的疏水性化疗药物溶于有机溶剂中，加入浓度为10～30mg/mL的多聚磷酸钠溶液，得到第一混合液；将浓度为5～20mg/mL的氯化钙溶液加入第一混合液中，得到第二混合液，室温下磁力搅拌10～60min后离心，将沉淀超声复溶得到第一分散液，所述第一分散液中含有封装了化疗药物的磷酸钙基质；
(2)加入浓度为0.5～2mg/mL的多巴胺，调节pH为7～9，室温下磁力搅拌10～20h后进行离心，将沉淀复溶离心，洗涤2～4次后将沉淀超声复溶得到第二分散液，所述第二分散液中含有表面修饰有多巴胺的磷酸钙基质；
(3)加入浓度为30～100μg/mL的自噬抑制剂，室温下磁力搅拌1～5h后进行离心，将沉淀超声复溶，得到所述纳米药物；
其中，所述磷酸钙基质、化疗药物、光热剂和自噬抑制剂的质量比为(50～300):(50～100):(0.2～1):(2～10)。
9.一种如权利要求1-3任一项所述的纳米药物在制备肿瘤治疗药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肝癌、肺癌、乳腺癌、肾母细胞瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、鼻咽癌、间皮质瘤、胰岛细胞瘤、视网膜母细胞瘤、胰腺癌、子宫肌瘤、宫颈癌或甲状腺癌中的任意一种或至少两种的组合。
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