CN110794149A - 一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，所述检测试剂包括包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球、辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原和化学发光底物。本发明所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂通过双抗原夹心法，首先利用磁性微球作为固相载体来固定丙型肝炎病毒抗原，再结合辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原，实现了双抗原夹心丙型肝炎病毒抗体，再经化学发光底物显色，三者相互配合，共同实现了丙型肝炎病毒抗体的检测。本发明所述检测试剂特异性强、灵敏度高，可以实现快速检验丙型肝炎病毒抗体的目的。

Description

一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂
技术领域
本发明属于检测试剂技术领域，涉及一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂。
背景技术
丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的病毒性肝炎，主要经输血、针刺、吸毒等途径传播，是一种隐匿性、传染性、持续性、进展性疾病。丙型肝炎慢性化率可高达50-80％，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌(HCC)。HCV属于黄病毒科(flaviviridae)，其基因组为单股正链RNA，易变异，目前可分为6个基因型及不同亚型，按照国际通行的方法，以阿拉伯数字表示HCV基因型，以小写的英文字母表示基因亚型(如1a、2b、3c等)。中国的主要流行型是基因1b型和2a型。
HCV感染常用的实验室检测包括血清生化学检测、抗-HCV检测、HCV RNA检测及基因型芯片检测等。国内少有基于实时荧光定量PCR技术定量检测HCV基因型的试剂盒应用于临床检测中，这些试剂盒所提供的HCV-RNA提取方法主要是酚-氯仿法和柱提取法。该类试剂盒存在很多不足之处：1)检测灵敏度低，约在10000IU/mL左右；检测范围窄，一般在1.00E+04～1.00E+07IU/mL之间，对于临床高值(大于5.00E+07IU/mL)和低值(小于1.00E+04IU/mL)的样本无法检测；2)对于HCV基因型覆盖不全，只能检测其中某种基因型下的亚型；3)酚-氯仿法是最经典的RNA提取方法，但是操作繁琐，对于设备和人员操作要求高，低病毒载量的标本检出率低，且所用试剂具有一定的毒性；柱提取方法无需高速离心，但是需频繁更换离心管，用时长，特异性较差；4)无法有效去除样本中的PCR抑制物(如：血脂、强溶血等)；5)国外试剂成本和耗材成本太高，很难在临床广泛开展。CN103725797A公开了一种丙型肝炎病毒基因型检测试剂盒，其包括6种基因型的丙型肝炎病毒PCR反应液，所述6种基因型的丙型肝炎病毒PCR反应液中均含有用于靶多核苷酸检测的探针和用于靶多核苷酸扩增的上下游引物，该试剂盒用磁珠法提取样本核酸，采用实时荧光定量PCR技术，以HCV基因组的高度保守区域为扩增靶目标，但是其检测灵敏度仍然较低，并且检测时间较长。
现在常有的HCV检测技术有两种方式：(1)间接检测，主要检测抗HCV抗体和抗原；(2)直接检测，通过定性或定量检测HCV病毒粒子的组成成分确定病毒的存在，例如HCVRNA。这两种检测方式在确诊HCV感染，选择HCV感染者的治疗方案以及评价抗HCV治疗的疗效方面起到了关键作用。目前，双抗原夹心法成功用于检测抗HIV和Tp抗体，此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。而丙型肝炎病毒抗体的检测仍采用间接ELISA技术，主要由于过氧化物酶直接标记丙型肝炎病毒抗原，其灵敏度达不到要求，尤其是标记丙型肝炎病毒核心抗原后使抗原活性降低，因此灵敏度较差。
因此，目前需要开发一种检验灵敏度高，且可实现快速检验的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，所述检测试剂包括包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球、辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原和化学发光底物。本发明所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂利用双抗原夹心法，特异性地选择了包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球与辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原，同时再结合化学发光底物显色，使所述检测试剂具备了特异性强、灵敏度高、快速检验丙型肝炎病毒抗体的功能。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，所述检测试剂包括包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球、辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原和化学发光底物。
本发明所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂通过双抗原夹心法，首先利用磁性微球作为固相载体来固定丙型肝炎病毒抗原，再结合辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原，实现了双抗原夹心丙型肝炎病毒抗体，再经化学发光底物显色，三者相互配合，共同实现了丙型肝炎病毒抗体的检测。本发明所述检测试剂特异性强、灵敏度高，可以实现快速检验丙型肝炎病毒抗体的目的。
其中，本发明利用磁性微球来作为固相载体，是由于磁微粒具有较大的比表面积，能够增大免疫反应发生面积，提高了反应的灵敏度；另外，磁微粒球形和均一的表面，可减少化学性粘附和非特异性结合，提高了试剂盒的特异性。
需要说明的是，本发明所述包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球的制备方法如下：
1、取含有某种官能团(-COOH、-NH2、-HS等)的顺磁纳米颗粒溶液，用缓冲液A(MES缓冲液，pH6.0)进行洗涤，将纳米磁微粒的缓冲液成分置换成缓冲液A；
2、称取交联剂EDC，以缓冲液A配制成浓度为10mg/ml的EDC溶液；
3、将步骤1洗涤后的纳米磁微粒溶液与步骤2制备的EDC溶液充分混合，室温振荡反应180分钟；
4、将步骤3中的纳米磁微粒溶液加入HCV重组抗原，室温振荡180分钟，使抗原与磁珠通过共价偶联的方式结合在一起，用含有蛋白以及表面活性剂的缓冲液对制备好的纳米磁微粒混悬液进行洗涤，定容，保存至2-8℃环境中；
5、将步骤3中的纳米磁微粒溶液加入HCV核心抗原单克隆抗体，室温振荡180分钟，使抗体与磁珠通过共价偶联的方式结合在一起，用含有蛋白以及表面活性剂的缓冲液对制备好的纳米磁微粒混悬液进行洗涤，定容，保存至2-8℃环境中；
6、将步骤4和步骤5制备的磁微粒混悬液按照1:1的比例混合，保存至2-8℃环境中。
优选地，所述检测试剂还包括柠檬酸和季铵盐表面活性剂。
本发明所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂优选包括柠檬酸和季铵盐表面活性剂，是由于发明人发现利用柠檬酸和季铵盐表面活性剂复配加入检测试剂中，两者可以相互配合，协同增效，大幅提高检测试剂的灵敏度。
优选地，所述季铵盐表面活性剂包括十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十八烷基三甲基溴化铵、溴化二甲基苄基十二烷基铵或苄基三乙基氯化铵中的任意一种或至少两种的组合，进一步优选十六烷基三甲基溴化铵和/或十八烷基三甲基溴化铵。
优选地，在所述检测试剂中，所述季铵盐表面活性剂的浓度为1-5mg/mL，例如可以是1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL、4mg/mL、4.5mg/mL或5mg/mL等。
优选地，所述柠檬酸调节所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂的pH值为4-6，例如可以是4、4.5、5、5.5或6等。
优选地，所述磁性微球的粒径为1-5μm，例如可以是1μm、2μm、3μm、4μm或5μm等，进一步优选1-3μm。
优选地，在所述包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球中，所述丙型肝炎病毒抗原为重组HCV病毒抗原。
优选地，所述磁性微球偶联有链霉亲和素。
优选地，所述丙型肝炎病毒抗原通过链霉亲和素包被于所述磁性微球上。
优选地，所述化学发光底物为显色剂A和显色剂B。
优选地，所述显色剂A为鲁米诺、异鲁米诺、氨丁基乙基异鲁米诺、氨己基乙基异鲁米诺、氨己基乙基氨萘二酰肼或吖啶酯中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述显色剂B为对碘苯酚和/或对苯基酚。
优选地，在所述检测试剂中，所述包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球的浓度为0.1-0.5mg/mL，例如可以是0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL或0.5mg/mL等。
优选地，在所述检测试剂中，所述辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原的浓度为0.5-0.8mg/mL，例如可以是0.5mg/mL、0.55mg/mL、0.6mg/mL、0.65mg/mL、0.7mg/mL、0.75mg/mL或0.8mg/mL等。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂利用双抗原夹心法，特异性地选择了包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球与辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原，同时再结合化学发光底物显色，使所述检测试剂具备了特异性强、灵敏度高、快速检验丙型肝炎病毒抗体的功能。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供了一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂。
所述检测试剂包括：包被重组丙型肝炎病毒抗原的磁性微球0.3mg/mL、辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原0.7mg/mL、鲁米诺0.1mg/mL、对碘苯酚0.05mg/mL、十六烷基三甲基溴化铵3mg/mL，利用柠檬酸调节所述检测试剂的pH为5.5。其中，所述磁性微球的粒径为3μm、所述重组丙型肝炎病毒抗原通过链霉亲和素包被于所述磁性微球上。
实施例2
本实施例提供了一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂。
所述检测试剂包括：包被重组丙型肝炎病毒抗原的磁性微球0.5mg/mL、辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原0.6mg/mL、鲁米诺0.15mg/mL、对苯基酚0.08mg/mL、十八烷基三甲基溴化铵5mg/mL，利用柠檬酸调节所述检测试剂的pH为5.0。其中，所述磁性微球的粒径为2μm、所述重组丙型肝炎病毒抗原通过链霉亲和素包被于所述磁性微球上。
实施例3
本实施例提供了一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂。
所述检测试剂包括：包被重组丙型肝炎病毒抗原的磁性微球0.1mg/mL、辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原0.8mg/mL、鲁米诺0.18mg/mL、对苯基酚0.07mg/mL、十六烷基三甲基溴化铵2mg/mL、十八烷基三甲基溴化铵3mg/mL，利用柠檬酸调节所述检测试剂的pH为4.5。其中，所述磁性微球的粒径为1μm、所述重组丙型肝炎病毒抗原通过链霉亲和素包被于所述磁性微球上。
实施例4
本实施例提供了一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂。
所述检测试剂包括：包被重组丙型肝炎病毒抗原的磁性微球0.3mg/mL、辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原0.7mg/mL、鲁米诺0.2mg/mL、对苯基酚0.08mg/mL、十六烷基三甲基溴化铵3mg/mL、十八烷基三甲基溴化铵2mg/mL，利用柠檬酸调节所述检测试剂的pH为4.8。其中，所述磁性微球的粒径为2.5μm、所述重组丙型肝炎病毒抗原通过链霉亲和素包被于所述磁性微球上。
实施例5
与实施例1的区别仅在于，未添加柠檬酸调节所述检测试剂的pH值。
实施例6
与实施例1的区别仅在于，未添加十六烷基三甲基溴化铵。
实施例7
与实施例1的区别仅在于，十六烷基三甲基溴化铵的浓度为8mg/mL。
实施例8
与实施例1的区别仅在于，十六烷基三甲基溴化铵的浓度为0.5mg/mL。
实施例9
与实施例1的区别仅在于，利用十四烷基三甲基溴化铵替代十六烷基三甲基溴化铵。
实施例10
与实施例1的区别仅在于，利用溴化二甲基苄基十二烷基铵替代十六烷基三甲基溴化铵。
实施例11
与实施例1的区别仅在于，利用柠檬酸调节所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂的pH值为7.0。
实施例12
与实施例1的区别仅在于，利用柠檬酸调节所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂的pH值为3.0。
实施例13
与实施例1的区别仅在于，磁性微球的粒径为8μm。
实施例14
与实施例1的区别仅在于，磁性微球的粒径为0.5μm。
对比例1
本对比例提供了一种市售丙型肝炎病毒抗体快速检测试剂(购于上海博顿生物化工有限公司)。
性能测试
1、利用本发明实施例和对比例得到的检测试剂分别检测200例血清样本，包括HCV阳性血清样本45例，HCV阴性血清样本155例。
具体检测结果见表1：
表1
Figure BDA0002293172970000081
Figure BDA0002293172970000091
由表1中的数据可知，200例血清样本中，本发明制备得到的丙型肝炎病毒抗体对HCV阳性血清样本和HCV阴性血清样本的检出率均达到了90％以上，均明显高于市售的丙型肝炎病毒抗体快速检测试剂的检测灵敏度，尤其实施例1-4的丙型肝炎病毒抗体检测试剂对HCV阳性血清样本和阴性血清样本的检出率均达到100％，这说明本发明所述的丙型肝炎病毒抗体检测试剂的灵敏度高，对丙型肝炎病毒抗体能进行有效识别。
与实施例1相比，实施例5中未添加柠檬酸，实施例6中未添加十六烷基三甲基溴化铵，其制备得到的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂对HCV阳性血清样本和HCV阴性血清样本的检出率均出现明显降低，这说明在本发明所述检测试剂中须同时添加柠檬酸和十六烷基三甲基溴化铵表面活性剂，两者之间能相互配合，协同作用，共同提高检测试剂的灵敏度。
与实施例1相比，实施例7中十六烷基三甲基溴化铵的浓度为高于实施例1，而实施例8中十六烷基三甲基溴化铵的浓度低于实施例1，其制备得到的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂的检出率也均低于实施例1，这说明十六烷基三甲基溴化铵的浓度过高或过低均会影响检测试剂的灵敏度，即表面活性剂的添加量会影响检测试剂的灵敏度。这是由于当表面活性剂的含量过高，可能会减弱对抗体蛋白质出现沉淀或白浊等不可逆的变性的缓解作用，使检测灵敏度大幅降低，而当表面活性剂含量过低，其与柠檬酸的协同作用减弱，无法有效提高检测试剂的灵敏度。
与实施例1相比，实施例11中利用柠檬酸调节所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂的pH值为7.0，而实施例12中利用柠檬酸调节所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂的pH值为3.0，其制备得到的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂的检出率均低于实施例1，这说明本发明所述检测试剂的pH过高或过低均会影响检测试剂的灵敏度，即柠檬酸的添加量过多或过少会影响检测试剂的灵敏度。这是由于当所述检测试剂的pH过低，酸化作用强，可能会造成抗体蛋白质出现沉淀或白浊等不可逆的变性，使检测灵敏度大幅降低，而当所述检测试剂的pH过低，其与表面活性剂的协同作用减弱，也无法有效提高检测试剂的灵敏度。
与实施例1相比，对比例13中磁性微球的粒径过大，比表面积减少，免疫反应的接触面积较少，检测灵敏度出现明显下降。
2、利用本发明实施例和对比例制得的检测试剂分别检测50例乙型肝炎确诊患者的血清样品进行抗体测试，以验证其是否受乙型肝炎病毒的干扰。
其测试结果见表2：
表2
Figure BDA0002293172970000111
从表2中的数据可以看出，本发明实施例1-4所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂对50例乙型肝炎病毒抗体均检测为阴性，即没有受到乙型肝炎病毒抗体的干扰，其对丙型肝炎病毒抗体的检测特异性强，明显高于对比例1中市售丙型肝炎病毒抗体检测试剂对丙型肝炎病毒抗体的检测特定性。
与实施例1相比，对比例14中磁性微球的粒径过小，比表面积增大，容易造成化学性粘附和非特异性结合增多，其对丙型肝炎病毒抗体的检测特异性变差。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球、辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原和化学发光底物。
2.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括柠檬酸和季铵盐表面活性剂。
3.根据权利要求2所述的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，其特征在于，所述季铵盐表面活性剂包括十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十八烷基三甲基溴化铵、溴化二甲基苄基十二烷基铵或苄基三乙基氯化铵中的任意一种或至少两种的组合，进一步优选十六烷基三甲基溴化铵和/或十八烷基三甲基溴化铵；
优选地，在所述检测试剂中，所述季铵盐表面活性剂的浓度为1-5mg/mL。
4.根据权利要求2或3所述的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，其特征在于，所述柠檬酸调节所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂的pH值为4-6。
5.根据权利要求1-4中的任一项所述的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，其特征在于，所述磁性微球的粒径为1-5μm，进一步优选1-3μm。
6.根据权利要求1-5中的任一项所述的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，其特征在于，在所述包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球中，所述丙型肝炎病毒抗原为重组HCV病毒抗原。
7.根据权利要求1-6中的任一项所述的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，其特征在于，所述磁性微球偶联有链霉亲和素；
优选地，所述丙型肝炎病毒抗原通过链霉亲和素包被于所述磁性微球上。
8.根据权利要求1-7中的任一项所述的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，其特征在于，所述化学发光底物为显色剂A和显色剂B；
优选地，所述显色剂A为鲁米诺、异鲁米诺、氨丁基乙基异鲁米诺、氨己基乙基异鲁米诺、氨己基乙基氨萘二酰肼或吖啶酯中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述显色剂B为对碘苯酚和/或对苯基酚。
9.根据权利要求1-8中的任一项所述的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，其特征在于，在所述检测试剂中，所述包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球的浓度为0.1-0.5mg/mL。
10.根据权利要求1-9中的任一项所述的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，其特征在于，在所述检测试剂中，所述辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原的浓度为0.5-0.8mg/mL。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN104697988A (zh) * 2015-02-10 2015-06-10 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 检测丙型肝炎病毒抗体的试剂盒及其检测方法和应用

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1871518A (zh) * 2003-10-28 2006-11-29 株式会社先端生命科学研究所 丙型肝炎病毒的检测方法
CN104697988A (zh) * 2015-02-10 2015-06-10 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 检测丙型肝炎病毒抗体的试剂盒及其检测方法和应用

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