CN110791541B

CN110791541B - 一种降低淀粉消化率的方法及其应用

Info

Publication number: CN110791541B
Application number: CN201911024332.2A
Authority: CN
Inventors: 吴敬; 宿玲恰; 李玲玲; 李娜
Original assignee: Jiangnan University
Current assignee: Jiangnan University
Priority date: 2019-10-25
Filing date: 2019-10-25
Publication date: 2021-05-28
Anticipated expiration: 2039-10-25
Also published as: CN110791541A

Abstract

本发明公开了一种降低淀粉消化率的方法及其应用，属于酶工程技术领域。本发明提供了一种降低淀粉消化率的方法，此方法可用于制备抗性淀粉，且生产效率十分高；利用此方法将糖原分支酶ChlGBE加入淀粉溶液中改性6h，即可使淀粉溶液中抗性淀粉的含量高达35.06％，较未经改性的淀粉溶液提高9.75％；利用此方法将糖原分支酶HosGBE加入淀粉溶液中改性8h，即可使淀粉溶液中抗性淀粉的含量高达47.36％，较未经改性的淀粉溶液提高22.05％；利用此方法将糖原分支酶VvGBE加入淀粉溶液中改性10h，即可使淀粉溶液中抗性淀粉的含量高达51.4％，较未经改性的淀粉溶液提高26.09％。

Description

一种降低淀粉消化率的方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种降低淀粉消化率的方法及其应用，属于酶工程技术领域。

背景技术

淀粉是自然界中主要的储碳和储能多糖，它能够为人体提供70～80％的能量，是人体最重要的膳食能量来源。依据消化率不同，可将淀粉分为三类，分别为快消化淀粉(RDS)、慢消化淀粉(SDS)以及抗性淀粉(RS)。其中，快消化淀粉(RDS)是指在小肠内完全消化吸收的淀粉，慢消化淀粉是指20～120min在小肠内完全消化吸收的淀粉，抗性淀粉是指120min后仍不能被小肠消化吸收的淀粉。

研究表明，由于具备消化率低以及可被肠道益生菌特异性吸收等特点，抗性淀粉在调节血糖、降低血脂、促进矿物质吸收、保护肠道等方面均具有重要作用(具体可参考文献“Glycemi c and insulinemic response ofsubjects with type 2diabetes afterconsumption ofthree energy bars[J].Journal oftheAmerican DieteticAssociation,2002,102(8):1139-1142”、“Han K H,Sekikawa M,Shimada K I,et al.Resistant starchfraction prepared from kintoki bean affects gene expression ofgenesassociated with cholesterol metabolism in rats[J].Experimental Biology andMedicine,2004,229(8):787-792.”以及“SchulzAG M,Amelsvoort J M M V,BeynenAC.Dietary native resistant starch not retrograded resistant starchraises magnesium and calcium absorption in rats[J].Journal ofNutrition,1993,123(10):1724-1731.”)。因此，降低淀粉的消化率以制备得到更多的抗性淀粉十分重要。

目前，制备抗性淀粉的方法主要有三种，分别为物理改性、化学改性和酶法改性。其中，物理改性与化学改性均存在副产物多、生产效率低以及安全性差等问题(具体可参考文献“Goesaert H,BijttebierA,Delcour JA.Hydrolysis ofamylopectinby amylolyticenzymes:level ofinner chain attack as an important analytical differentiationcriterion[J].Carbohydrate Research,2010,345(3):397-401.”)，因此，酶法改性在制备抗性淀粉的领域越发受到关注。

酶法改性主要是通过使用麦芽糖淀粉酶、β-淀粉酶、淀粉蔗糖酶和/或葡萄糖基转移酶等酶对淀粉进行处理，将分子量大的淀粉切割成较小的分子或增加淀粉分子内如α-1,6键、α-1,3键等的抗消化的化学键以降低淀粉的消化率。但是，由于现有的麦芽糖淀粉酶、β-淀粉酶、淀粉蔗糖酶和/或葡萄糖基转移酶等酶切割淀粉以及在淀粉内生成抗消化化学键的效率过低，使用酶法改性制备抗性淀粉时具备生产效率低的问题。因此，仍需找到一种可高效降低淀粉消化率的方法，以提高抗性淀粉的生产效率。

发明内容

[技术问题]

本发明要解决的技术问题是提供一种可高效降低淀粉消化率的方法。

[技术方案]

为解决上述技术问题，本发明提供了一种降低淀粉消化率的方法，所述方法为利用氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的糖原分支酶(glycogenbranching enzyme)中的一种或多种对淀粉进行改性。所述消化率是指淀粉被人体消化释放葡萄糖的速率。

在本发明的一种实施方式中，所述方法为先将淀粉加入缓冲液中，得到淀粉溶液，然后将淀粉溶液进行糊化，得到糊化淀粉溶液，接着将糊化淀粉溶液进行温育，得到温育淀粉溶液，最后将氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的糖原分支酶中的一种或多种加入糊化淀粉溶液中进行改性。

在本发明的一种实施方式中，所述糖原分支酶的添加量为100～1000U/g淀粉。

在本发明的一种实施方式中，所述糖原分支酶的添加量为500U/g淀粉。

在本发明的一种实施方式中，所述改性的温度为25～45℃、pH为5.5～8.5、时间为4～12h。

在本发明的一种实施方式中，所述方法为先将淀粉加入缓冲液中，得到淀粉溶液，然后将淀粉溶液进行糊化，得到糊化淀粉溶液，接着将糊化淀粉溶液进行温育，得到温育淀粉溶液，最后将氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的糖原分支酶加入糊化淀粉溶液中，于温度为30℃、pH为7.0的条件下改性6h；

或者，所述方法为先将淀粉加入缓冲液中，得到淀粉溶液，然后将淀粉溶液进行糊化，得到糊化淀粉溶液，接着将糊化淀粉溶液进行温育，得到温育淀粉溶液，最后将氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的糖原分支酶加入糊化淀粉溶液中，于温度为30℃、pH为7.0的条件下改性8h；

或者，所述方法为先将淀粉加入缓冲液中，得到淀粉溶液，然后将淀粉溶液进行糊化，得到糊化淀粉溶液，接着将糊化淀粉溶液进行温育，得到温育淀粉溶液，最后将氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的糖原分支酶加入糊化淀粉溶液中，于温度为35℃、pH为7.5的条件下改性10h。

在本发明的一种实施方式中，所述糊化淀粉溶液以及温育淀粉溶液中淀粉的浓度为10～100g/L。

在本发明的一种实施方式中，所述糊化淀粉溶液以及温育淀粉溶液中淀粉的浓度为25g/L。

在本发明的一种实施方式中，所述氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的糖原分支酶来源于小球藻(Chlorella kessleri)。

在本发明的一种实施方式中，所述氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的糖原分支酶来源于智人(Homo sapiens)。

在本发明的一种实施方式中，所述氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的糖原分支酶来源于创伤弧菌(Vibrio vulnificus)。

在本发明的一种实施方式中，所述缓冲液为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液或柠檬酸缓冲液。

在本发明的一种实施方式中，所述缓冲液为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液。

在本发明的一种实施方式中，所述缓冲液的浓度为20～100mmol/L。

在本发明的一种实施方式中，所述缓冲液的浓度为50mmol/L

在本发明的一种实施方式中，所述糊化为将淀粉溶液在沸水浴中以100～200r/min的速度搅拌20～40min。

在本发明的一种实施方式中，所述糊化为将淀粉溶液在沸水浴中以150r/min的速度搅拌30min。

在本发明的一种实施方式中，所述温育为将糊化淀粉溶液在25～45℃的条件下以100～200r/min的速度搅拌10～20min。

在本发明的一种实施方式中，所述温育为将糊化淀粉溶液在30℃的条件下以150r/min的速度搅拌10min。

在本发明的一种实施方式中，所述淀粉为玉米淀粉、马铃薯淀粉、木薯淀粉、或甘薯淀粉。

本发明提供了上述降低淀粉消化率的方法在生产抗性淀粉中的应用。所述慢消化淀粉是指20～120min在小肠内完全消化吸收的淀粉。所述抗性淀粉是指120min后仍不能被小肠消化吸收的淀粉。

[有益效果]

本发明提供了一种降低淀粉消化率的方法，此方法可用于制备抗性淀粉，且生产效率十分高；利用此方法将氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的糖原分支酶(ChlGBE)加入淀粉溶液中改性6h，即可使淀粉溶液中抗性淀粉的含量高达35.06％，较未经改性的淀粉溶液提高9.75％；利用此方法将氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的糖原分支酶(HosGBE)加入淀粉溶液中改性8h，即可使淀粉溶液中抗性淀粉的含量高达47.36％，较未经改性的淀粉溶液提高22.05％；利用此方法将氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的糖原分支酶(VvGBE)加入淀粉溶液中改性10h，即可使淀粉溶液中抗性淀粉的含量高达51.4％，较未经改性的淀粉溶液提高26.09％。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。

下述实施例中涉及的大肠杆菌E.coli BL21(DE3)购自宝生物工程(大连)有限公司；下述实施例中涉及的玉米淀粉购自山东临沂实业有限公司；

下述实施例中涉及的培养基如下：

LB液体培养基：酵母粉5.0g·L^-1、胰蛋白胨10.0g·L^-1、NaCl 10.0g·L^-1、卡那霉素100mg·L^-1、氨苄青霉素100mg·L^-1。

LB固体培养基：酵母粉5.0g·L^-1、胰蛋白胨10.0g·L^-1、NaCl 10.0g·L^-1、琼脂粉15g·L^-1、卡那霉素100mg·L^-1、氨苄青霉素100mg·L^-1。

TB液体培养基：酵母粉24g·L^-1、胰蛋白胨12g·L^-1、甘油5g·L^-1、K₂HPO₄12.54g·L^-1、KH₂PO₄2.31g·L^-1、卡那霉素100mg·L^-1、氨苄青霉素100mg·L^-1。

下述实施例中涉及的检测方法如下：

抗性淀粉含量的测定方法：

将来自猪胰腺的α-淀粉酶(2g，购自Sigma化学试剂有限公司)加入蒸馏水(24mL)中并充分搅拌10min，1500g离心10min，将上清液(20mL)转移至烧杯中，然后与淀粉葡萄糖苷酶(0.4mL，购自Sigma化学试剂有限公司)和蒸馏水(3.6mL)混合，得到消化酶溶液；取反应液，将反应液的一部分于12000rpm离心15min取上清，用GOD-POD试剂盒检测游离葡萄糖的含量，将反应液的另一部分煮沸灭酶调节pH至5.2，在37℃温育10min，然后加入0.75mL消化酶溶液，分别在反应20min和120min时取样，同时加热煮沸灭酶10min，用GOD-POD试剂盒测定葡萄糖的含量，计算反应液中快消化淀粉(RDS)、慢消化淀粉(SDS)和抗性淀粉(RS)的含量。

快消化淀粉(RDS)、慢消化淀粉(SDS)和抗性淀粉(RS)含量的计算：

RDS(％)＝(G20-G0)×0.9×100；

SDS(％)＝(G120-G20)×0.9×100；

RS(％)＝100％-RDS(％)-SDS(％)；

式中，G0为游离葡萄糖含量，单位(mg)；G20为消化20min内释放的葡萄糖量，单位(mg)；G120为消化120min内释放的葡萄糖量，单位(mg)。

分支酶酶活的测定方法：

准确称取马铃薯支链淀粉(购自上海荣盛生物药业有限公司)0.5g(直至±0.001g)加入至盛有缓冲液的烧杯中，将其置于沸水浴中加热煮沸30min，直至底物溶液澄清透明，然后用100mL容量瓶定容，得到底物溶液；称取0.26g碘和2.6g碘化钾加入至盛有蒸馏水的烧杯中，搅拌均匀，然后用10mL棕色容量瓶定容，得到卢戈斯溶液(该溶液应该在使用前至少3天进行配置，以确保所有的碘溶解，并且该溶液应避光放置于阴凉处，可保持半年的有效期)；将100μL卢戈斯溶液、50μL盐酸(2M)、26mL蒸馏水混合，得到终止液(该溶液避光放置，现配现用)；设置对照组和实验组，其中，对照组：200μL底物溶液+200μL蒸馏水；实验组：200μL底物+200μL粗酶液；将对照组和未加酶液的实验组充分混匀后置于分支酶的最适温度(ChlGBE、HosGBE最适温度为30℃，VvGBE最适温度为35℃)下孵育10min；10min后，在实验组中加入稀释好的粗酶液200μL，将其置于糖原分支酶的最适温度下反应15min；15min后，分别从对照组和实验组取200μL产物加入到4mL终止液中，避光放置20min左右，直至颜色稳定；20min后，在分光光度计下测定吸光值(A₅₃₀)，计算糖原分支酶酶活。

分支酶酶活的定义：

单位时间单位体积内每减少1mg支链淀粉所需要的酶量定义为1个酶活单位(1U)。

分支酶酶活的计算：

式中，A为分支酶酶活，单位(U/mL)；m₀为对照组中支链淀粉含量，单位(mg)；m₁为实验组中支链淀粉含量，单位(mg)；D为粗酶液稀释倍数；t为粗酶液与底物反应时间，单位(min)；V为粗酶液的体积，单位(mL)。

实施例1：不同分支酶的制备

具体步骤如下：

化学合成编码来源于小球藻(Chlorella kessleri)的糖原分支酶ChlGBE(氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)、来源于智人(Homo sapiens)的糖原分支酶HosGBE(氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示)、来源于创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的糖原分支酶VvGBE(氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示)、来源于蓝藻(Cyanothece sp.ATCC 51142)的淀粉分支酶CySBE(氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示)或来源于小浜红嗜热菌(Rhodothermus obamensis)的淀粉分支酶RoSBE(氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示)的基因(核苷酸序列分别如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10所示)，并将合成得到的基因和pET-24a(+)质粒进行连接，得到重组质粒pET-24a-ChlGBE、pET-24a-HosGBE、pET-24a-VvGBE、pET-24a-CySBE、pET-24a-RoSBE(此步骤由上海捷瑞生物工程有限公司完成)；将重组质粒pET-24a-ChlGBE、pET-24a-HosGBE、pET-24a-VvGBE、pET-24a-CySBE、pET-24a-RoSBE分别转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)，转化产物涂布于LB固体培养基，于37℃培养8～10h，在LB固体培养基上挑取转化子，接入LB液体培养基培养，于37℃培养10h，获得菌液；提取菌液中的质粒，进行双酶切验证，并将此质粒进行序列测定，测序正确即获得重组大肠杆菌pET-24a-ChlGBE/E.coli BL21、pET-24a-HosGBE/E.coli BL21、pET-24a-VvGBE/E.coliBL21、pET-24a-CySBE/E.coli BL21、pET-24a-RoSBE/E.coli BL21及其菌液。

将重组大肠杆菌pET-24a-ChlGBE/E.coli BL21、pET-24a-HosGBE/E.coli BL21、pET-24a-VvGBE/E.coli BL21、pET-24a-CySBE/E.coli BL21、pET-24a-RoSBE/E.coli BL21的菌液按照2‰(v/v)的接种量接入LB液体培养基，于37℃培养8～12h，获得种子液；将种子液按照5％(v/v)的接种量接入TB液体培养基，于37℃培养2～3h后，于25℃继续诱导培养24h，得到发酵液；将发酵液于4℃、8000rpm离心15min后，收集细胞并破碎，收集细胞破碎液；将细胞破碎液于4℃、8000rpm离心15min，得到细胞破碎上清液，此细胞破碎上清液即为糖原分支酶ChlGBE、糖原分支酶HosGBE、糖原分支酶VvGBE、淀粉分支酶CySBE或淀粉分支酶RoSBE的粗酶液。

实施例2：不同分支酶降低淀粉消化率的能力

具体步骤如下：

称取2.5g玉米淀粉加入50mM、pH 7.0的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液中，得到淀粉溶液；将淀粉溶液在沸水浴中加热搅拌30min，加热完毕，用容量瓶定容至100mL，配制成2.5％的糊化淀粉溶液；将糊化淀粉溶液置于30℃、150rpm恒温水浴摇床中温育10min，得到温育淀粉溶液；在温育淀粉溶液分别加入100、200、500、1000U/g淀粉的实施例1获得的糖原分支酶ChlGBE、糖原分支酶HosGBE、糖原分支酶VvGBE、分支酶CySBE或分支酶RoSBE的粗酶液，其中，空白对照组(Control)不添加酶液，用缓冲液补足，在30℃条件下反应12h，加热煮沸灭酶终止反应，得到反应液。检测反应液中慢消化淀粉(SDS)和抗性淀粉(RS)含量，检测结果如见表1。

由表1可知，仅有糖原分支酶ChlGBE、糖原分支酶HosGBE、糖原分支酶VvGBE可高效降低淀粉的消化率，在制备抗性淀粉中极具应用前景。

表1不同分支酶在不同添加量下反应获得的反应液中慢消化淀粉(SDS)和抗性淀粉(RS)的含量

其中，“/”为未测定。

实施例3：反应时间对分支酶降低淀粉消化率能力的影响

称取2.5g玉米淀粉加入50mM、pH 7.0的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液中，得到淀粉溶液；将淀粉溶液在沸水浴中加热搅拌30min，加热完毕，用容量瓶定容至100mL，配制成2.5％的糊化淀粉溶液；将糊化淀粉溶液置于30℃、150rpm恒温水浴摇床中温育10min，得到温育淀粉溶液；在温育淀粉溶液分别加入500U/g淀粉的实施例1获得的糖原分支酶ChlGBE、糖原分支酶HosGBE或糖原分支酶VvGBE的粗酶液，在30℃条件下分别反应0、4、8、10、12h，加热煮沸灭酶终止反应，得到反应液。检测反应液中抗性淀粉(RS)含量，检测结果如见表2。

由表2可知，反应时间为6h时，ChlGBE反应获得的反应液中抗性淀粉含量最高，为35.06％；反应时间为8h时，HosGBE反应获得的反应液中抗性淀粉含量最高，为47.36％；反应时间为10h时，VvGBE反应获得的反应液中抗性淀粉含量最高，为49.28％。

表2不同糖原分支酶在不同反应时间下反应获得的反应液中抗性淀粉(RS)的含量

实施例4：反应温度对分支酶降低淀粉消化率能力的影响

在实施例3的基础上，将反应温度分别调整为25、30、35、40、45℃，并且，将ChlGBE的反应时间限定为6h，将HosGBE的反应时间限定为8h，将VvGBE的反应时间限定为10h。检测反应液中抗性淀粉(RS)含量，检测结果如见表3。

由表3可知，反应温度为30℃时，ChlGBE、HosGBE反应获得的反应液中抗性淀粉的含量最高，分别为35.06％、47.36％；反应温度为35℃时，VvGBE反应获得的反应液中抗性淀粉的含量最高，为50.4％。

表3不同糖原分支酶在不同反应温度下反应获得的反应液中抗性淀粉(RS)的含量

实施例5：反应pH对分支酶降低淀粉消化率能力的影响

配置50mM、pH为5.5～6.0的柠檬酸缓冲液，50mM、pH为6.5～8.0的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以及50mM、pH为8.5的Tris-HCl缓冲液；在实施例4的基础上，将50mM、pH7.0的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液分别调整为配置得到的50mM、pH为5.5～6.0的柠檬酸缓冲液，50mM、pH为6.5～8.0的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以及50mM、pH为8.5的Tris-HCl缓冲液，并且，将ChlGBE的反应时间限定为6h、反应温度限定为30℃，将HosGBE的反应时间限定为8h、反应温度限定为30℃，将VvGBE的反应时间限定为10h、反应温度限定为35℃。检测反应液中抗性淀粉(RS)含量，检测结果如见表4。

由表4可知，反应pH为7.0时，ChlGBE、HosGBE反应获得的反应液中抗性淀粉的含量最高，分别为35.06％、47.36％；反应pH为7.5时，VvGBE反应获得的反应液中抗性淀粉的含量最高，为51.4％。

表4不同糖原分支酶在不同反应pH下反应获得的反应液中抗性淀粉(RS)的含量

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

序列表

<110> 江南大学

<120> 一种降低淀粉消化率的方法及其应用

<160> 10

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 880

<212> PRT

<213> 小球藻（Chlorella kessleri）

<400> 1

Met Gln Ser Gln Leu Gly Met Leu Gln His Ser Thr Thr Ser Ala Pro

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Ser Gly Val Ser Gly Arg Leu Asn Arg Phe Val Ala

20 25 30

Arg Pro Thr Gln Gly Lys Arg Leu Gly Arg Arg Leu Ile Ala Asn Val

35 40 45

Arg Ser Asp Ser Pro Ser Asn Glu Thr Leu Ser Pro Leu Glu Ile Leu

50 55 60

Lys Arg Glu Asn Glu Leu Leu Arg Arg Thr Val Glu Ala Thr Glu Arg

65 70 75 80

Ser Val Gly Glu Leu Glu Ala Gly Leu Thr Asp Ala Gly Val Gly Leu

85 90 95

Pro Pro Ala Ala Gly Ala Gly Arg Ala Thr Ala Gly Gly Pro Thr Ala

100 105 110

Ala Ala Leu Glu Ser Asp Thr Pro Glu Asp Ala Trp Ser Pro Ala Val

115 120 125

His Val Pro Glu Gly Gln Ala Phe Glu Glu Val Tyr Gly Leu Ile Ser

130 135 140

Pro Ile Pro Asp His Asp Gly Thr Glu Cys Leu Lys Trp Asp Pro Thr

145 150 155 160

Leu Trp Ser His Ala Asp His Phe Lys Tyr Arg Trp His Val Phe Lys

165 170 175

Ser Ile Arg Ala Ala Ile Asp Gln Asn Glu Gly Gly Leu Glu Lys Phe

180 185 190

Thr Gln Gly Tyr Lys Tyr Tyr Gly Phe Thr Arg Gly Glu His Glu Gly

195 200 205

Lys Lys Gly Ile Trp Tyr Arg Glu Trp Ala Pro Gly Ala Lys Ala Leu

210 215 220

Ala Leu Ile Gly Glu Phe Asn Ala Trp Gln Pro Lys Asp Glu His Trp

225 230 235 240

Ala Ile Lys Asn Asp Phe Gly Val Trp Gln Leu Phe Leu Pro Asp Asn

245 250 255

Pro Asp Gly Thr Ser Ala Ile Thr His Arg Thr Lys Val Lys Leu Arg

260 265 270

Leu Glu Thr Ala Tyr Gly Glu Trp Val Glu Arg Ile Pro Ala Trp Ile

275 280 285

Lys Trp Ala Thr Gln Glu Trp Asn Glu Val Gln Phe Asn Gly Val Tyr

290 295 300

Tyr Gln Pro Pro Gln Val Gly Ala Pro Gly Glu Ile Asp Pro Asn Lys

305 310 315 320

Ser Tyr Thr Phe Lys Tyr Pro Arg Pro Ala Arg Pro Arg Ala Leu Arg

325 330 335

Ile Tyr Glu Cys His Val Gly Met Ser Ser Gln Glu Pro Lys Val Asn

340 345 350

Ser Tyr Leu Glu Phe Lys Glu Glu Val Leu Pro Arg Ile Arg Ser Leu

355 360 365

Gly Tyr Asn Ala Ile Gln Ile Met Ala Ile Gln Glu His Ala Tyr Tyr

370 375 380

Gly Ser Phe Gly Tyr His Val Thr Asn Phe Phe Ala Ala Ser Ser Arg

385 390 395 400

Cys Gly Thr Pro Asp Glu Leu Lys Ala Met Ile Asp Glu Ala His Arg

405 410 415

Leu Gly Met Val Val Leu Met Asp Ile Val His Ser His Ala Ser Lys

420 425 430

Asn Thr Met Asp Gly Ile Asn Met Phe Asp Gly Thr Asp Gly Met Tyr

435 440 445

Phe His Gly Gly Gly Arg Gly Tyr His Trp Met Trp Asp Ser Arg Cys

450 455 460

Phe Asn Tyr Gly Asn Trp Glu Thr Leu Arg Phe Leu Leu Ser Asn Ala

465 470 475 480

Arg Trp Trp Met Asp Glu Tyr Lys Phe Asp Gly Tyr Arg Phe Asp Gly

485 490 495

Val Thr Ser Met Met Tyr His His His Gly Leu Gln Thr Thr Phe Thr

500 505 510

Gly Asn Tyr Asp Glu Tyr Phe Gly Met Ala Thr Asp Val Asp Ala Val

515 520 525

Val Tyr Leu Gln Leu Val Asn His Thr Leu His Asp Leu Phe Pro Thr

530 535 540

Ala Ile Thr Ile Gly Glu Asp Val Ser Gly Met Pro Thr Phe Cys Arg

545 550 555 560

Pro Trp Thr Glu Gly Gly Val Gly Phe Asp Tyr Arg Leu Asn Met Ala

565 570 575

Ile Ala Asp Lys Trp Ile Glu Met Leu Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Ser

580 585 590

Trp Asn Met Gly Asn Ile Val His Thr Met Thr Asn Arg Arg Tyr Met

595 600 605

Glu Ala Cys Val Gly Tyr Ala Glu Ser His Asp Gln Ala Leu Val Gly

610 615 620

Asp Lys Thr Ile Ala Phe Trp Leu Met Asp Lys Asp Met Tyr Asp Cys

625 630 635 640

Met Ala Ala Pro Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Pro Val Val Asp Arg Gly

645 650 655

Ile Ala Leu His Lys Met Ile Arg Leu Leu Thr Met Ala Leu Gly Gly

660 665 670

Glu Ser Tyr Leu Asn Phe Met Gly Asn Glu Phe Gly His Pro Glu Trp

675 680 685

Ile Asp Phe Pro Arg Asp Asp Ser Tyr Asp Thr Ser Thr Gly Ala Phe

690 695 700

Val Pro Gly Asn Gly Gly Ser Leu Glu Lys Cys Arg Arg Arg Trp Asp

705 710 715 720

Leu Ala Asp Ala Pro Phe Leu Lys Tyr Lys Phe Met Asn Ala Tyr Asp

725 730 735

Arg Ala Ile Met His Leu Asp Lys Ala Phe Gly Phe Ile Ser Ala Pro

740 745 750

His Asn Trp Val Ser Arg Lys Asp Glu Gly Asp Lys Ile Ile Val Ala

755 760 765

Glu Lys Gly Asp Leu Val Met Val Phe Asn Phe His Pro Thr Asn Ser

770 775 780

Tyr Ser Asp Tyr Arg Val Gly Cys Tyr Lys Pro Gly Pro Tyr Lys Val

785 790 795 800

Ala Leu Ser Ser Asp Glu Glu Val Phe Gly Gly Trp Arg Asn Val Thr

805 810 815

Lys Asp Asn Asp Val Glu Phe Tyr Thr Ala Glu Gly Asn Tyr Asp Asn

820 825 830

Arg Pro His Ser Leu Gln Val Tyr Ala Pro Ser Arg Thr Val Val Val

835 840 845

Tyr Ala Pro Thr Glu Phe Cys Asp Lys Asp Ala Asp Arg Thr Pro Val

850 855 860

Gly Ile Pro Gly Leu Ser Val Lys Gly Leu Gly Pro Tyr Tyr Gly Phe

865 870 875 880

<210> 2

<211> 702

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 2

Met Ala Ala Pro Met Thr Pro Ala Ala Arg Pro Glu Asp Tyr Glu Ala

1 5 10 15

Ala Leu Asn Ala Ala Leu Ala Asp Val Pro Glu Leu Ala Arg Leu Leu

20 25 30

Glu Ile Asp Pro Tyr Leu Lys Pro Tyr Ala Val Asp Phe Gln Arg Arg

35 40 45

Tyr Lys Gln Phe Ser Gln Ile Leu Lys Asn Ile Gly Glu Asn Glu Gly

50 55 60

Gly Ile Asp Lys Phe Ser Arg Gly Tyr Glu Ser Phe Gly Val His Arg

65 70 75 80

Cys Ala Asp Gly Gly Leu Tyr Cys Lys Glu Trp Ala Pro Gly Ala Glu

85 90 95

Gly Val Phe Leu Thr Gly Asp Phe Asn Gly Trp Asn Pro Phe Ser Tyr

100 105 110

Pro Tyr Lys Lys Leu Asp Tyr Gly Lys Trp Glu Leu Tyr Ile Pro Pro

115 120 125

Lys Gln Asn Lys Ser Val Leu Val Pro His Gly Ser Lys Leu Lys Val

130 135 140

Val Ile Thr Ser Lys Ser Gly Glu Ile Leu Tyr Arg Ile Ser Pro Trp

145 150 155 160

Ala Lys Tyr Val Val Arg Glu Gly Asp Asn Val Asn Tyr Asp Trp Ile

165 170 175

His Trp Asp Pro Glu His Ser Tyr Glu Phe Lys His Ser Arg Pro Lys

180 185 190

Lys Pro Arg Ser Leu Arg Ile Tyr Glu Ser His Val Gly Ile Ser Ser

195 200 205

His Glu Gly Lys Val Ala Ser Tyr Lys His Phe Thr Cys Asn Val Leu

210 215 220

Pro Arg Ile Lys Gly Leu Gly Tyr Asn Cys Ile Gln Leu Met Ala Ile

225 230 235 240

Met Glu His Ala Tyr Tyr Ala Ser Phe Gly Tyr Gln Ile Thr Ser Phe

245 250 255

Phe Ala Ala Ser Ser Arg Tyr Gly Thr Pro Glu Glu Leu Gln Glu Leu

260 265 270

Val Asp Thr Ala His Ser Met Gly Ile Ile Val Leu Leu Asp Val Val

275 280 285

His Ser His Ala Ser Lys Asn Ser Ala Asp Gly Leu Asn Met Phe Asp

290 295 300

Gly Thr Asp Ser Cys Tyr Phe His Ser Gly Pro Arg Gly Thr His Asp

305 310 315 320

Leu Trp Asp Ser Arg Leu Phe Ala Tyr Ser Ser Trp Glu Ile Leu Arg

325 330 335

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Gly Phe Arg Phe Asp Gly Val Thr Ser Met Leu Tyr His His His Gly

355 360 365

Val Gly Gln Gly Phe Ser Gly Asp Tyr Ser Glu Tyr Phe Gly Leu Gln

370 375 380

Val Asp Glu Asp Ala Leu Thr Tyr Leu Met Leu Ala Asn His Leu Val

385 390 395 400

His Thr Leu Cys Pro Asp Ser Ile Thr Ile Ala Glu Asp Val Ser Gly

405 410 415

Met Pro Ala Leu Cys Ser Pro Ile Ser Gln Gly Gly Gly Gly Phe Asp

420 425 430

Tyr Arg Leu Ala Met Ala Ile Pro Asp Lys Trp Ile Gln Leu Leu Lys

435 440 445

Glu Phe Lys Asp Glu Asp Trp Asn Met Gly Asp Ile Val Tyr Thr Leu

450 455 460

Thr Asn Arg Arg Tyr Leu Glu Lys Cys Ile Ala Tyr Ala Glu Ser His

465 470 475 480

Asp Gln Ala Leu Val Gly Asp Lys Ser Leu Ala Phe Trp Leu Met Asp

485 490 495

Ala Glu Met Tyr Thr Asn Met Ser Val Leu Thr Pro Phe Thr Pro Val

500 505 510

Ile Asp Arg Gly Ile Gln Leu His Lys Met Ile Arg Leu Ile Thr His

515 520 525

Gly Leu Gly Gly Glu Gly Tyr Leu Asn Phe Met Gly Asn Glu Phe Gly

530 535 540

His Pro Glu Trp Leu Asp Phe Pro Arg Lys Gly Asn Asn Glu Ser Tyr

545 550 555 560

His Tyr Ala Arg Arg Gln Phe His Leu Thr Asp Asp Asp Leu Leu Arg

565 570 575

Tyr Lys Phe Leu Asn Asn Phe Asp Arg Asp Met Asn Arg Leu Glu Glu

580 585 590

Arg Tyr Gly Trp Leu Ala Ala Pro Gln Ala Tyr Val Ser Glu Lys His

595 600 605

Glu Gly Asn Lys Ile Ile Ala Phe Glu Arg Ala Gly Leu Leu Phe Ile

610 615 620

Phe Asn Phe His Pro Ser Lys Ser Tyr Thr Asp Tyr Arg Val Gly Thr

625 630 635 640

Ala Leu Pro Gly Lys Phe Lys Ile Val Leu Asp Ser Asp Ala Ala Glu

645 650 655

Tyr Gly Gly His Gln Arg Leu Asp His Ser Thr Asp Phe Phe Ser Glu

660 665 670

Ala Phe Glu His Asn Gly Arg Pro Tyr Ser Leu Leu Val Tyr Ile Pro

675 680 685

Ser Arg Val Ala Leu Ile Leu Gln Asn Val Asp Leu Pro Asn

690 695 700

<210> 3

<211> 742

<212> PRT

<213> 创伤弧菌（Vibrio vuLnificus）

<400> 3

Met Arg Ile Val Phe Thr Thr Leu Ala Val Trp Arg Gly Lys Lys Gly

1 5 10 15

Leu Lys Lys Leu Val Lys Ser Lys Val Asn Gln Met Phe Glu Lys Leu

20 25 30

Ser Gln Ala Ala Cys Ser Glu Pro Phe Ala Phe Leu Gly Pro Phe Ile

35 40 45

Asp Pro Thr Gln Gly Ala Leu Arg Val Trp Met Pro Gly Ala Thr Gly

50 55 60

Val Ala Leu Val Leu Glu Gly Gln Pro Arg Ile Ala Leu Glu Arg Glu

65 70 75 80

Lys Glu Ser Ala Phe Ile Leu Lys Ala Asp Leu Asn Leu His Leu Thr

85 90 95

His Tyr Gln Leu Ala Ile Asp Trp Asn Gly Val Glu Gln Leu Ile Asp

100 105 110

Asp Pro Tyr Gln Tyr His Gly Ile Tyr Ala Glu Tyr Asp Asp Leu His

115 120 125

Thr Pro Lys Thr Met Tyr Gln His Met Gly Ser Gln Phe Met Thr Leu

130 135 140

Glu Arg Asp Gly Lys Ser Ile Ser Gly Ile Arg Phe Leu Val Tyr Ala

145 150 155 160

Pro His Ala Thr Ala Val Ser Leu Val Gly Cys Phe Asn Asp Trp Asp

165 170 175

Gly Arg Arg His Pro Met Gln Arg Leu Asp Tyr Gly Ile Trp Gly Leu

180 185 190

Phe Ile Pro Gly Leu Thr Glu Gly Val Ser Tyr Lys Phe Glu Met Lys

195 200 205

Gly Pro Lys Gly Glu Gly Leu Pro His Lys Ala Asp Pro Trp Gly Phe

210 215 220

Tyr Ala Glu Gln Tyr Pro Ser Phe Ala Ser Val Thr Tyr Asp His Ala

225 230 235 240

Arg Tyr Gln Trp Gln Asp Ala Gln Trp Gln Thr Arg Pro Val Thr Glu

245 250 255

Lys Arg Lys Glu Ala Leu Ser Phe Tyr Glu Leu His Ala Gly Ser Trp

260 265 270

Lys Arg Asn Glu Gln Gly Glu Phe Leu Asn Tyr Arg Glu Leu Ala Ala

275 280 285

Glu Leu Val Pro Tyr Leu Val Asp Met Gly Tyr Thr His Val Glu Leu

290 295 300

Met Pro Val Ser Glu His Pro Phe Tyr Gly Ser Trp Gly Tyr Gln Pro

305 310 315 320

Val Gly Leu Phe Ala Pro Thr Ser Arg Tyr Gly Ser Pro Asp Asp Phe

325 330 335

Lys Phe Phe Val Asp Ala Cys His Gln Ala Gly Ile Gly Val Val Leu

340 345 350

Asp Trp Val Pro Ala His Phe Pro Ser Asp Asp His Gly Leu Ala Asn

355 360 365

Phe Asp Gly Thr Pro Leu Phe His Asp Pro Asp Pro Arg Arg Gly Trp

370 375 380

His Gln Asp Trp Asn Ser Phe Ile Tyr Asp Leu Gly Arg Glu Gln Val

385 390 395 400

Arg Arg Phe Leu Val Ser Asn Ala Leu Tyr Trp Phe Glu Gln Phe His

405 410 415

Ile Asp Gly Ile Arg Val Asp Ala Val Ala Ser Met Leu Tyr Leu Asp

420 425 430

Tyr Ser Arg Ser His Gly Gln Trp Ile Pro Asn Met Asp Gly Gly Asn

435 440 445

Glu Asn Tyr Asp Ala Ile Ala Thr Leu Lys Trp Met Asn Glu Glu Val

450 455 460

Tyr Lys Tyr Phe Pro Asn Ala Met Thr Ile Ala Glu Glu Ser Thr Ala

465 470 475 480

Phe Pro Gly Val Ser Ala Pro Thr Phe Met Gly Gly Leu Gly Phe Gly

485 490 495

Phe Lys Trp Asn Met Gly Trp Met His Asp Ser Leu Ser Tyr Ile Lys

500 505 510

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515 520 525

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530 535 540

Glu Val Val Tyr Gly Lys Gly Ser Ile His Asn Lys Met Pro Gly Asp

545 550 555 560

Glu Trp Gln Gln Thr Ala Asn Leu Arg Ala Tyr Phe Gly Tyr Met Tyr

565 570 575

Gly Gln Pro Gly Lys Lys Leu Asn Phe Met Gly Ala Glu Ile Gly Gln

580 585 590

Thr Ala Glu Trp Asn His Asp Asp Gln Leu Gln Trp Phe Leu Leu Asp

595 600 605

Phe Pro Arg His Gln Gly Val Gln Ala Leu Thr Arg Asp Leu Asn His

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Leu Tyr Arg Asn Glu Ala Ala Leu His Asp Gln Asp Cys Ile Pro Ala

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Gly Phe Glu Trp Arg Leu Gln Asp Ala Ala Glu Gln Ser Ile Ile Ala

645 650 655

His Glu Arg Ile Ser Glu Ala Gly Glu Arg Ile Leu Val Val Ser Asn

660 665 670

Phe Thr Pro Val Pro Arg Asp Glu Phe Arg Leu Gly Val Pro Asn Lys

675 680 685

Gly Arg Tyr Gln Leu Leu Leu Asn Thr Asp Asp Ser Lys Tyr Ala Gly

690 695 700

Ser Gly Tyr Glu Val Val Val Asp Ala Lys Ser Glu Ala Val Val Ser

705 710 715 720

Glu Asp Leu Ala Gln Ser Ile Val Leu Arg Leu Pro Pro Leu Ser Thr

725 730 735

Leu Phe Tyr Lys Leu Val

740

<210> 4

<211> 773

<212> PRT

<213> 蓝藻（Cyanothece sp.）

<400> 4

Met Thr Thr Thr Ile Ser Ala Asp Gln Val Asn Gln Ile Ile Tyr Asn

1 5 10 15

Leu His His Asp Pro Phe Glu Ile Leu Gly Cys His Leu Leu Glu Glu

20 25 30

Gly Lys Asn Thr Lys Lys Trp Val Val Arg Ala Tyr Leu Pro Lys Ala

35 40 45

Glu Ala Ala Trp Val Ile Arg Pro Thr Glu Arg Lys Glu Asp Pro Met

50 55 60

Asn Ser Val His His Pro Asn Phe Phe Glu Cys Ile Ile Glu Thr Pro

65 70 75 80

Glu Leu Asn His Tyr Gln Leu Lys Val Lys Glu Gly Glu His Glu Lys

85 90 95

Val Ile Tyr Asp Pro Tyr Ala Phe Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Asp Glu

100 105 110

Asp Ile Tyr Leu Phe Ser Glu Gly Asn His His Arg Ile Tyr Glu Lys

115 120 125

Leu Gly Ala His Val Gly Glu Ile Asn Gly Val Lys Gly Val Tyr Phe

130 135 140

Ala Val Trp Ala Pro Asn Ala Arg Asn Val Ser Val Ile Gly Asp Phe

145 150 155 160

Asn Asn Trp Asp Gly Arg Glu His Gln Met Arg Lys Arg Asn Tyr Thr

165 170 175

Ile Trp Glu Leu Phe Val Pro Glu Ile Gly Ser Gly Thr Val Tyr Lys

180 185 190

Tyr Glu Ile Lys Asn Ser Glu Gly His Ile Tyr Glu Lys Ser Asp Pro

195 200 205

Tyr Gly Phe Tyr Arg Glu Val Arg Pro Asn Thr Ala Ser Ile Val Val

210 215 220

Asp Ile Asp Asn Ile Tyr Gln Trp His Asp Glu Glu Trp Leu Glu Lys

225 230 235 240

Arg Arg Asn Ser Asp Pro Leu Lys Gln Pro Val Ser Val Tyr Glu Val

245 250 255

His Leu Gly Ser Trp Leu His Gly Ser Ser Ala Glu Lys Met Pro Leu

260 265 270

Leu Asn Gly Glu Ala Asp Pro Val Ile Val Ser Glu Trp Asn Pro Gly

275 280 285

Ala Arg Phe Leu Ser Tyr Tyr Glu Leu Ala Glu Lys Leu Ile Pro Tyr

290 295 300

Val Lys Asp Met Gly Tyr Thr His Ile Glu Leu Leu Pro Ile Ala Glu

305 310 315 320

His Pro Phe Asp Gly Ser Trp Gly Tyr Gln Val Thr Gly Phe Tyr Ser

325 330 335

Pro Thr Ser Arg Phe Gly Arg Pro Glu Asp Phe Met Tyr Phe Val Asp

340 345 350

Lys Cys His Glu Asn Gly Ile Gly Val Ile Leu Asp Trp Val Pro Gly

355 360 365

His Phe Pro Lys Asp Ser His Gly Leu Ala Tyr Phe Asp Gly Thr His

370 375 380

Leu Tyr Glu His Ala Asp Pro Arg Ile Gly Glu His Lys Glu Trp Gly

385 390 395 400

Thr Leu Val Phe Asn Tyr Gly Arg His Glu Val Arg Asn Phe Leu Val

405 410 415

Ala Asn Val Leu Phe Trp Phe Asp Lys Tyr His Val Asp Gly Ile Arg

420 425 430

Val Asp Ala Val Ala Ser Met Leu Tyr Arg Asn Tyr Leu Arg Lys Glu

435 440 445

Gly Glu Trp Ile Ala Asn Glu Tyr Gly Gly Asp Glu His Ile Glu Ala

450 455 460

Val Ser Phe Ile Arg Glu Val Asn Thr Leu Leu Phe Glu Tyr Phe Pro

465 470 475 480

Gly Ile Leu Ser Ile Ala Glu Glu Ser Thr Glu Trp Glu Lys Val Ser

485 490 495

Arg Pro Val Tyr Asp Gly Gly Leu Gly Phe Asn Leu Lys Trp Asp Met

500 505 510

Gly Trp Met His Asp Met Leu Asp Tyr Phe Asn Ile Asp Pro Tyr Phe

515 520 525

Arg Gln Tyr His Gln Asn Asn Val Thr Phe Ser Met Leu Tyr Tyr Tyr

530 535 540

Asn Glu Asn Phe Met Leu Ala Leu Ser His Asp Glu Ile Val His Gly

545 550 555 560

Lys Ser Asn Met Leu Gly Lys Met Pro Gly Asp Glu Trp Gln Lys Tyr

565 570 575

Ala Asn Val Arg Ala Leu Phe Thr Tyr Met Tyr Thr His Pro Gly Lys

580 585 590

Lys Thr Met Phe Met Ser Met Glu Phe Gly Gln Trp Ser Glu Trp Asn

595 600 605

Val Trp Gly Asp Leu Glu Trp His Leu Leu Gln Tyr Glu Pro His Gln

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Gln Leu Lys Gln Phe Phe Thr Asp Leu Asn Ala Leu Tyr Gln Gln Glu

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Pro Ala Leu Tyr Thr His Asp Phe Glu Tyr His Gly Phe Glu Trp Ile

645 650 655

Asp Cys Asn Asp Asn Thr His Ser Val Val Ser Phe Leu Arg Arg Ser

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Asp Asp Pro Asn Asp Ser Leu Val Val Val Cys Asn Phe Thr Pro Gln

675 680 685

Pro His Ser His Tyr Arg Ile Gly Val Pro Glu Ala Gly Tyr Tyr Val

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Glu Leu Phe Asn Ser Asp Ala Lys Gln Tyr Gly Gly Ser Asn Met Gly

705 710 715 720

Asn Leu Gly Gly Lys Trp Ala Asp Glu Trp Ser Phe His Asn Lys Pro

725 730 735

Tyr Ser Leu Asp Leu Cys Leu Pro Pro Leu Ala Val Leu Ile Leu Lys

740 745 750

Leu Asp Pro Thr Lys Val Pro Glu Gly Thr Thr Ile Lys Glu Ile Ala

755 760 765

Ala Asp Glu Glu Glu

770

<210> 5

<211> 621

<212> PRT

<213> 小浜红嗜热菌（Rhodothermus obamensis）

<400> 5

Met Ser Trp Leu Thr Glu Glu Asp Ile Arg Arg Trp Glu Ser Gly Thr

1 5 10 15

Phe Tyr Asp Ser Tyr Arg Lys Leu Gly Ala His Pro Asp Asp Glu Gly

20 25 30

Thr Trp Phe Cys Val Trp Ala Pro His Ala Asp Gly Val Ser Val Leu

35 40 45

Gly Ala Phe Asn Asp Trp Asn Pro Glu Ala Asn Pro Leu Glu Arg Tyr

50 55 60

Gly Gly Gly Leu Trp Ala Gly Tyr Val Pro Gly Ala Arg Pro Gly His

65 70 75 80

Thr Tyr Lys Tyr Arg Ile Arg His Gly Phe Tyr Gln Ala Asp Lys Thr

85 90 95

Asp Pro Tyr Ala Phe Ala Met Glu Pro Pro Thr Gly Ser Pro Ile Glu

100 105 110

Gly Leu Ala Ser Ile Ile Thr Arg Leu Asp Tyr Thr Trp His Asp Asp

115 120 125

Glu Trp Met Arg Arg Arg Lys Gly Pro Ala Ser Leu Tyr Glu Pro Val

130 135 140

Ser Ile Tyr Glu Val His Leu Gly Ser Trp Arg His Lys Arg Pro Gly

145 150 155 160

Glu Ser Phe Ser Tyr Arg Glu Ile Ala Glu Pro Leu Ala Asp Tyr Val

165 170 175

Gln Glu Met Gly Phe Thr His Val Glu Leu Leu Pro Val Met Glu His

180 185 190

Pro Tyr Tyr Gly Ser Trp Gly Tyr Gln Val Val Gly Tyr Tyr Ala Pro

195 200 205

Thr Phe Arg Tyr Gly Ser Pro Gln Asp Leu Met Tyr Leu Ile Asp Tyr

210 215 220

Leu His Gln Arg Gly Ile Gly Val Ile Leu Asp Trp Val Pro Ser His

225 230 235 240

Phe Ala Ala Asp Pro Gln Gly Leu Val Phe Phe Asp Gly Thr Thr Leu

245 250 255

Phe Glu Tyr Asp Asp Pro Lys Met Arg Tyr His Pro Asp Trp Gly Thr

260 265 270

Tyr Val Phe Asp Tyr Asn Lys Pro Gly Val Arg Asn Phe Leu Ile Ser

275 280 285

Asn Ala Leu Phe Trp Leu Glu Lys Tyr His Val Asp Gly Leu Arg Val

290 295 300

Asp Ala Val Ala Ser Met Leu Tyr Arg Asp Tyr Ser Arg Lys Glu Trp

305 310 315 320

Thr Pro Asn Ile Phe Gly Gly Arg Glu Asn Leu Glu Ala Ile Asp Phe

325 330 335

Ile Lys Lys Phe Asn Glu Thr Val Tyr Leu His Phe Pro Glu Ala Met

340 345 350

Thr Ile Ala Glu Glu Ser Thr Ala Trp Pro Gly Val Ser Ala Pro Thr

355 360 365

Tyr Asn Asn Gly Leu Gly Phe Leu Tyr Lys Trp Asn Met Gly Trp Met

370 375 380

His Asp Thr Leu Asp Tyr Ile Gln Arg Asp Pro Ile Tyr Arg Lys Tyr

385 390 395 400

His His Asp Glu Leu Thr Phe Ser Leu Trp Tyr Ala Phe Ser Glu His

405 410 415

Tyr Val Leu Pro Leu Ser His Asp Glu Val Val His Gly Lys Gly Ser

420 425 430

Leu Trp Gly Lys Met Pro Gly Asp Asp Trp Gln Lys Ala Ala Asn Leu

435 440 445

Arg Leu Leu Phe Gly His Met Trp Gly His Pro Gly Lys Lys Leu Leu

450 455 460

Phe Met Gly Gly Glu Phe Gly Gln His His Glu Trp Asn His Asp Thr

465 470 475 480

Gln Leu Glu Trp His Leu Leu Asp Gln Pro Tyr His Arg Gly Ile Gln

485 490 495

Leu Trp Val Cys Asp Leu Asn His Leu Tyr Arg Thr Asn Pro Ala Leu

500 505 510

Trp His Asp Gly Pro Glu Gly Phe Glu Trp Ile Asp Phe Ser Asp Arg

515 520 525

Asp Gln Ser Val Ile Cys Tyr Leu Arg Lys Asn Ala Gly Arg Met Leu

530 535 540

Leu Phe Val Leu Asn Phe Thr Pro Val Pro Arg Glu His Tyr Arg Val

545 550 555 560

Gly Val Pro Ile Gly Gly Pro Trp His Glu Val Leu Asn Ser Asp Ala

565 570 575

Val Ala Tyr Gly Gly Ser Gly Met Gly Asn Phe Gly Arg Val Glu Ala

580 585 590

Val Pro Glu Ser Trp His Gly Arg Pro Phe His Leu Glu Leu Thr Leu

595 600 605

Pro Pro Leu Ala Ala Leu Ile Leu Glu Pro Glu His Gly

610 615 620

<210> 6

<211> 2649

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

catatgcagt cacagttagg catgttacag catagtacaa cgagtgctcc tccgggtcca 60

cgtagcggcg tgagcggtcg tctgaatcgt tttgttgcac gcccgacaca gggcaaacgc 120

ttaggtcgtc gcctgattgc caatgttcgc tcagatagtc ctagtaatga aacactgagt 180

ccattagaaa tcctgaaacg cgaaaatgaa ctgttacgcc gtaccgttga agcaacggaa 240

cgtagcgtgg gcgaactgga agccggtctg acggatgcgg gcgtgggctt acctccagcc 300

gccggcgccg gtcgtgcaac cgcaggcggc cctacagcag cagccttaga aagcgatacc 360

ccggaagatg cctggagccc agcagttcat gttccagaag gtcaggcctt tgaagaagtg 420

tatggcttaa tctctcctat cccagatcat gatggtacgg aatgtctgaa atgggaccca 480

accctgtgga gtcatgcaga tcattttaaa tatcgctggc atgtgtttaa atctattcgt 540

gcagccatcg atcagaatga aggcggttta gaaaaattta cacagggcta taaatattat 600

ggctttaccc gcggcgaaca tgaaggcaaa aaaggcatct ggtatcgcga atgggccccg 660

ggcgccaaag cgttagcact gatcggcgaa tttaatgctt ggcagccaaa agatgaacat 720

tgggccatca aaaatgattt tggtgtgtgg cagctgtttc tgccggataa tccggatggt 780

acgagcgcaa tcacacatcg caccaaagtt aaactgcgct tagaaaccgc ctatggcgaa 840

tgggttgaac gcattcctgc ttggatcaaa tgggccaccc aggaatggaa tgaagttcag 900

tttaatggtg tgtattatca gccacctcag gttggtgcac cgggcgaaat cgatcctaat 960

aaaagctata cgtttaaata tcctcgtcct gcgcgcccac gtgcgttacg catctatgaa 1020

tgtcatgtgg gcatgtcaag tcaggaacct aaagttaata gctatctgga atttaaagaa 1080

gaagttctgc cacgcatccg tagtctgggc tataatgcta ttcagattat ggccattcag 1140

gaacatgcgt attatggttc ttttggttat catgtgacca atttttttgc tgccagttca 1200

cgctgcggta caccagatga actgaaagcc atgatcgatg aagcacatcg cttaggtatg 1260

gttgttctga tggatattgt tcatagccat gcctctaaaa atacaatgga tggcatcaat 1320

atgtttgatg gtacggatgg catgtatttt catggcggtg gccgcggcta tcattggatg 1380

tgggattcac gttgctttaa ttatggtaat tgggaaaccc tgcgctttct gctgagtaat 1440

gctcgctggt ggatggatga atataaattt gatggttatc gctttgatgg tgtgacctct 1500

atgatgtatc atcatcatgg cttacagacg acctttacgg gcaattatga tgaatatttt 1560

ggcatggcaa ccgatgttga tgctgttgtg tatctgcagt tagttaatca taccctgcat 1620

gatctgtttc cgacagccat tacaatcggc gaagatgtga gcggcatgcc tacgttttgt 1680

cgtccttgga cggaaggcgg tgtgggcttt gattatcgtc tgaatatggc cattgccgat 1740

aaatggatcg aaatgctgtc taaactggat gattatagct ggaatatggg taatattgtg 1800

cataccatga ccaatcgtcg ctatatggaa gcgtgcgtgg gctatgccga atctcatgat 1860

caggccttag tgggtgataa aacgattgcg ttttggttaa tggataaaga tatgtatgat 1920

tgtatggccg ccccgggtta tggtagtagc tctccagtgg ttgatcgcgg cattgcctta 1980

cataaaatga ttcgcttact gactatggcc ttaggcggtg aaagctatct gaattttatg 2040

ggtaatgaat ttggtcatcc agaatggatc gattttccac gcgatgattc ttatgatacc 2100

tctaccggtg cctttgttcc aggtaatggc ggctcactgg aaaaatgtcg tcgccgctgg 2160

gatttagcag atgccccgtt tctgaaatat aaatttatga atgcgtatga tcgcgcaatc 2220

atgcatttag ataaagcctt tggctttatt agtgcaccac ataattgggt gagtcgcaaa 2280

gatgaaggtg ataaaatcat tgttgccgaa aaaggcgatc tggttatggt gtttaatttt 2340

catccgacca atagctatag cgattatcgc gtgggttgct ataaaccagg tccgtataaa 2400

gttgcactgt caagcgatga agaagtgttt ggcggctggc gcaatgtgac caaagataat 2460

gatgtggaat tttatacagc agaaggcaat tatgataatc gtccacattc actgcaggtg 2520

tatgcaccgt ctcgtacagt tgttgtgtat gctccgacgg aattttgcga taaagatgcc 2580

gatcgtaccc cagtgggtat cccgggtctg tcagtgaaag gcttaggtcc gtattatggc 2640

tttaagctt 2649

<210> 7

<211> 2115

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

catatggccg ccccgatgac cccggcagca cgtccggaag attatgaagc agcactgaat 60

gccgccctgg cagatgttcc ggaactggca cgcctgctgg aaattgatcc gtatctgaaa 120

ccgtatgcag tggattttca gcgtcgttat aaacagtttt ctcagattct gaaaaatatt 180

ggcgaaaatg aaggcggtat tgataaattt tctcgcggct atgaatcttt tggcgtgcat 240

cgttgtgccg atggcggtct gtattgtaaa gaatgggcac cgggtgcaga aggcgtgttt 300

ctgaccggcg attttaatgg ttggaatccg tttagctatc cgtataaaaa actggattat 360

ggcaaatggg aactgtatat tccgccgaaa cagaataaaa gcgtgctggt tccgcatggt 420

agcaaactga aagttgtgat tacctctaaa tcaggcgaaa ttctgtatcg cattagcccg 480

tgggccaaat atgttgtgcg cgaaggcgat aatgttaatt atgattggat tcattgggac 540

ccggaacata gctatgaatt taaacatagt cgtccgaaaa aaccgcgctc actgcgcatt 600

tatgaaagtc atgtgggcat tagtagccat gaaggcaaag ttgcctctta taaacatttt 660

acctgtaatg tgctgccgcg cattaaaggt ttaggctata attgtattca gttaatggcc 720

attatggaac atgcatatta tgcgtcattt ggctatcaga ttaccagctt ttttgcagcc 780

tctagtcgct atggcacccc ggaagaactc caggaactgg tggataccgc ccattcaatg 840

ggcattattg tgctgctgga tgttgttcat agtcatgcaa gcaaaaatag tgcagatggt 900

ctgaatatgt ttgatggtac cgatagttgt tattttcata gtggtccgcg cggtacccat 960

gatctgtggg atagtcgcct gtttgcctat tcaagttggg aagtgctgcg ctttctgctg 1020

tctaatattc gttggtggtt agaagaatat cgctttgatg gctttcgctt tgatggtgtg 1080

acctcaatgc tgtatcatca tcatggcgtg ggccagggct ttagcggcga ttatagcgaa 1140

tattttggct tacaggtgga tgaagatgca ctgacctatc tgatgttagc caatcatctg 1200

gttcataccc tgtgtccgga tagtattacc attgcagaag atgtgagcgg tatgccggcc 1260

ctgtgttctc cgatttcaca gggcggtggc ggctttgatt atcggttagc gatggccatt 1320

ccggataaat ggattcagct gctgaaagaa tttaaagatg aagattggaa tatgggtgat 1380

attgtgtata ccttaaccaa tcgtcgctat ctggaaaaat gtattgccta tgccgaatca 1440

catgatcagg ccttagtggg tgataaatca ctggcctttt ggttaatgga tgccgaaatg 1500

tataccaata tgtcagtgct gaccccgttt accccggtga ttgatcgcgg cattcagtta 1560

cataaaatga ttcgtttaat tacccacggc ttaggcggcg aaggctatct gaattttatg 1620

ggcaatgaat ttggccatcc ggaatggtta gattttccgc gcaaaggtaa taatgaaagc 1680

tatcattatg cacgtcgtca gtttcatctg accgatgatg atctgttacg ctataaattt 1740

ctgaataatt ttgatcgtga tatgaatcgt ctggaagaac gctatggttg gttagccgca 1800

ccgcaggcct atgtgagcga aaaacatgaa ggtaataaaa ttattgcctt tgaacgcgca 1860

ggtctgctgt ttatttttaa ttttcatccg agcaaatctt ataccgatta tcgcgtgggt 1920

accgccctgc cgggtaaatt taaaattgtg ttagatagcg atgcagcaga atatggcggt 1980

catcagcgct tagatcatag taccgatttt tttagcgaag cctttgaaca taatggtcgc 2040

ccgtatagct tactggtgta tattccgtct cgcgttgcct taattttaca gaatgtggat 2100

ctgccgaata agctt 2115

<210> 8

<211> 2238

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

catatgcgca ttgtgtttac caccttagcc gtgtggcgcg gcaaaaaagg tctgaaaaaa 60

ctggttaaat ctaaagttaa tcagatgttt gaaaaactgt cacaggcagc ctgtagcgaa 120

ccgtttgcct ttctgggtcc gtttattgat ccgacccagg gcgccctgcg tgtgtggatg 180

ccgggtgcca ccggcgttgc actggtgctg gaaggccagc cgcgcattgc cctggaacgt 240

gaaaaagaaa gcgcctttat tctgaaagcc gatctgaatc tgcatctgac ccattatcag 300

ctggccattg attggaatgg cgtggaacag ttaattgatg atccgtatca gtatcatggc 360

atttatgcag aatatgatga tttacatacc ccgaaaacca tgtatcagca catgggtagt 420

cagtttatga ccttagaacg cgatggcaaa tctattagcg gcattcgctt tctggtgtat 480

gcaccccatg caaccgccgt gtcactggtg ggttgtttta atgattggga tggtcgtcgt 540

catccgatgc agcgcttaga ttatggtatt tggggcctgt ttattccggg cttaaccgaa 600

ggtgtgagct ataaatttga aatgaaaggc ccgaaaggcg aaggcttacc gcataaagca 660

gatccgtggg gcttttatgc agaacagtat ccgagctttg cctcagtgac ctatgatcat 720

gcacgctatc agtggcagga tgcccagtgg cagacccgtc cggtgaccga aaaacgcaaa 780

gaagcactga gcttttatga attacatgca ggctcttgga aacgtaatga acagggtgaa 840

tttctgaatt atcgtgaact ggcagcagaa ctggttccgt atctggtgga tatgggctat 900

acccatgtgg aattaatgcc ggtgagcgaa catccgtttt atggctcttg gggctatcag 960

ccggtgggtc tgtttgcccc gacctctcgc tatggtagtc cggatgattt taaatttttt 1020

gttgatgcct gtcatcaggc cggcattggc gttgtgttag attgggttcc ggcccatttt 1080

ccgagcgatg atcatgggct ggctaatttt gatggtaccc cgctgtttca tgatcccgac 1140

ccgcgtcgcg gttggcatca ggattggaat agctttattt atgatttagg tcgcgaacag 1200

gttcgtcgct ttctggtgtc taatgcactg tattggtttg aacagtttca tattgatggt 1260

attcgcgtgg atgccgttgc aagcatgtta tatttagatt atagtcgctc acatggccag 1320

tggattccga atatggatgg cggtaatgaa aattatgatg ccattgccac cttaaaatgg 1380

atgaatgaag aagtgtataa atattttccg aatgcaatga ccattgcaga agaaagtacc 1440

gcctttccgg gcgtgagtgc cccgaccttt atgggcggct taggttttgg ctttaaatgg 1500

aatatgggtt ggatgcatga tagtctgagc tatattaaag aagaaccggt tcatcgcaaa 1560

tatcatcata ataccctgac ctttccgtta gtgtatgcac atagcgaaaa ttatgtgctg 1620

tcactgtcac atgatgaagt tgtgtatggt aaaggttcaa ttcataataa aatgccgggc 1680

gatgaatggc agcagaccgc caatctgcgc gcctattttg gctatatgta tggccagccg 1740

ggcaaaaaac tgaattttat gggtgcagaa attggccaga ccgcagaatg gaatcatgat 1800

gatcagttac agtggtttct gttagatttt ccgcgtcatc agggcgttca ggccttaacc 1860

cgcgatctga atcatctgta tcgtaatgaa gcagccttac atgatcagga ttgtattccc 1920

gcgggctttg aatggcgctt acaggatgca gcagaacaga gtattattgc acatgaacgc 1980

attagcgaag caggcgaacg cattctggtt gtgtctaatt ttaccccggt gccgcgcgat 2040

gaatttcgtc tgggcgttcc gaataaaggt cgctatcagc tgctgttaaa taccgatgat 2100

agtaaatatg ccggctcagg ctatgaagtt gttgtggatg ccaaaagtga agccgttgtg 2160

agcgaagatt tagcccagtc aattgtgctg cgcctgccgc cgctgagtac cctgttttat 2220

aaactggtgt aaggatcc 2238

<210> 9

<211> 2331

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

catatgacca ccaccattag cgcagatcag gttaatcaga ttatttataa tctgcatcat 60

gatccgtttg aaattctggg ttgtcatctg ctggaagaag gtaaaaatac caaaaaatgg 120

gttgtgcgcg catatctgcc gaaagcagaa gcagcatggg tgattcgccc gaccgaacgc 180

aaagaagatc cgatgaatag cgttcatcat ccgaattttt ttgaatgtat tattgaaacc 240

ccggaactga atcattatca gctgaaagtt aaagaaggcg aacatgaaaa agtgatttat 300

gatccgtatg catttagtag cccgtatctg accgatgaag atatttatct gtttagcgaa 360

ggcaatcatc atcgtattta tgaaaaactg ggtgcacatg tgggcgaaat taatggcgtt 420

aaaggcgtgt attttgcagt gtgggcaccg aatgcacgca atgttagcgt gattggtgat 480

tttaataatt gggatggtcg cgaacatcag atgcgcaaac gcaattatac catttgggaa 540

ctgtttgtgc cggaaattgg ttcagggact gtgtataaat atgaaattaa aaattcagaa 600

ggccatattt atgaaaaaag cgatccgtat ggcttttatc gcgaagttcg cccgaatacc 660

gcaagcattg ttgtggatat tgataatatt tatcagtggc atgatgaaga atggctggaa 720

aaacgtcgta atagcgatcc gctgaaacag ccggtgagcg tgtatgaagt tcatctgggc 780

tcttggctgc atggtagctc agcagaaaaa atgccgctgc tgaatggcga agcagatccg 840

gtgattgtta gcgaatggaa tccgggtgca cgctttctgt cttattatga actggcagaa 900

aaactgattc cgtatgttaa agatatgggc tatacccata ttgaactgct gccgattgca 960

gaacatccgt ttgatggtag ttggggctat caggtgaccg gcttttatag tccgacctct 1020

cgctttggtc gtccggaaga ttttatgtat tttgtggata aatgtcatga aaatggcatt 1080

ggcgtgattc tggattgggt tccgggccat tttccgaaag attcacatgg cctggcatat 1140

tttgatggta cgcatctgta tgaacatgca gatccgcgca ttggcgaaca taaagaatgg 1200

ggaactctgg tgtttaatta tggtcgtcat gaagtgcgca attttctggt tgcaaatgtt 1260

ctgttttggt ttgataaata tcatgtggat ggcattcgcg tggatgcagt tgcatcgatg 1320

ctgtatcgta attatctgcg taaagaaggc gaatggattg caaatgaata tggcggcgat 1380

gaacatattg aagcagtgag ctttattcgc gaagttaata ccctgctgtt tgaatatttt 1440

ccgggcattc tgtcaattgc agaagaatct accgaatggg aaaaagtgtc acgcccggtg 1500

tatgatggcg gcctgggctt taatctgaaa tgggatatgg gttggatgca tgatatgctg 1560

gattatttta atattgatcc gtattttcgc cagtatcatc agaataatgt gaccttttct 1620

atgctgtatt attataatga aaattttatg ctggcactga gtcatgatga aattgttcat 1680

ggtaaatcta atatgctggg taaaatgccg ggcgatgaat ggcagaaata tgcaaatgtg 1740

cgcgcactgt ttacctatat gtatacccat ccgggtaaaa aaaccatgtt tatgtctatg 1800

gaatttggcc agtggagcga atggaatgtg tggggcgatc tggaatggca tctgcttcag 1860

tatgaaccgc atcagcagct gaaacagttt tttaccgatc tgaatgcact gtatcagcag 1920

gaaccggcac tgtataccca tgattttgaa tatcatggct ttgaatggat tgattgtaat 1980

gataataccc atagcgttgt gagctttctg cgtcgctcag atgatccgaa tgatagcctg 2040

gttgttgtgt gtaattttac cccgcagccg catagtcatt atcgcattgg tgtgccggaa 2100

gcaggctatt atgtggaact gtttaatagc gatgcaaaac agtatggcgg ctctaatatg 2160

ggcaatctgg gcggtaaatg ggcagatgaa tggagctttc ataataaacc gtatagcctg 2220

gatctgtgtc tgccgccgct ggcagtgctg attctgaaac tggacccgac caaagtgccg 2280

gaaggaacga ccattaaaga aattgcagca gatgaagaag aataaaagct t 2331

<210> 10

<211> 1875

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

catatgtctt ggttaaccga agaagatatt cgtcgttggg aaagcggtac gttttatgat 60

agctatcgca aactgggtgc acatccggat gatgaaggga catggttttg tgtgtgggcc 120

ccacatgccg atggcgtgtc agtgttaggt gcctttaatg attggaatcc ggaagccaat 180

ccgttagaac gctatggcgg cggtctgtgg gcaggctatg ttccgggtgc acgtccgggt 240

catacctata aatatcgtat tcgacacggc ttttatcagg cagataaaac cgatccgtat 300

gcctttgcaa tggaaccgcc gaccggctct ccgattgaag gcttagcctc aattattacc 360

cgcttagatt atacctggca tgatgatgaa tggatgcgtc gtcgtaaagg cccggcctct 420

ctgtatgagc ctgtgtcaat ttatgaagtt catttaggct cttggcgcca taaacgtcca 480

ggtgaaagtt tttcttatcg cgaaattgca gaaccgttag cagattatgt tcaggaaatg 540

ggctttaccc atgttgaact gctgccggtg atggaacatc cgtattatgg tagctggggc 600

tatcaggttg tgggctatta tgccccgacc tttcgctatg gtagtccgca ggatctgatg 660

tatttaattg attatttaca tcagcgcggc attggcgtga ttctggattg ggtgccgtca 720

cattttgcag cagatccgca gggcttagtg ttttttgatg gcactaccct gtttgaatat 780

gatgatccga aaatgcgcta tcatccggat tggggcacct atgtgtttga ttataataaa 840

ccgggcgttc gtaattttct gattagtaat gcactgtttt ggttagaaaa atatcatgtg 900

gatggtctgc gcgtggatgc agttgcctca atgctgtatc gcgattatag tcgcaaagaa 960

tggaccccga atatttttgg cggtcgcgaa aatctggaag ccattgattt tattaaaaaa 1020

tttaatgaaa ccgtgtattt acattttccg gaagccatga ccattgcaga agaaagtacc 1080

gcctggccgg gcgtgagtgc accgacctat aataatggct taggctttct gtataaatgg 1140

aatatgggtt ggatgcatga taccttagat tatattcagc gcgatccgat ttatcgcaaa 1200

tatcatcatg atgaactgac cttttcactg tggtatgcct ttagcgaaca ttatgtgctg 1260

ccgctgagtc atgatgaagt tgttcatggc aaaggctcac tgtggggtaa aatgccgggc 1320

gatgattggc agaaagcagc caatctgcgc ttactgtttg gtcacatgtg gggccatccg 1380

ggtaaaaaac tgctgtttat gggcggcgaa tttggccagc atcatgaatg gaatcatgat 1440

acccagttag aatggcatct gctggatcag ccgtatcatc gcggcattca gctgtgggtt 1500

tgtgatctga atcatctgta tcgcaccaat ccggccctgt ggcatgatgg cccggaaggc 1560

tttgaatgga ttgatttttc agatcgcgat cagagcgtta tttgttatct gcgcaaaaat 1620

gcaggtcgta tgttactgtt tgtgctgaat tttaccccgg ttccgcgcga acattatcgc 1680

gttggtgttc cgattggcgg cccgtggcat gaagtgctga atagcgatgc agttgcctat 1740

ggcggtagcg gcatgggtaa ttttggtcgt gttgaagcag tgccggaaag ctggcatggt 1800

cgtccgtttc atctggaact gaccctgccg ccgttagcag ccttaattct ggaaccggaa 1860

catggttaaa agctt 1875

Claims

1.一种降低淀粉消化率的方法，其特征在于，所述方法为利用氨基酸序列如SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的糖原分支酶对淀粉进行改性；

所述方法为先将淀粉加入缓冲液中，得到淀粉溶液，然后将淀粉溶液进行糊化，得到糊化淀粉溶液，接着将糊化淀粉溶液进行温育，得到温育淀粉溶液，最后将氨基酸序列如SEQID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的糖原分支酶加入糊化淀粉溶液中进行改性；

所述氨基酸序列SEQ ID NO:1所示的糖原分支酶的改性的温度为25~35℃，改性的pH为6~8、时间为6或12 h；

所述氨基酸序列SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的糖原分支酶的改性的温度为25~45℃，改性的pH为5.5~8.5、时间为4~12 h；

所述糖原分支酶的添加量为100~1000 U/g淀粉。

2.如权利要求1所述的一种降低淀粉消化率的方法，其特征在于，所述方法为先将淀粉加入缓冲液中，得到淀粉溶液，然后将淀粉溶液进行糊化，得到糊化淀粉溶液，接着将糊化淀粉溶液进行温育，得到温育淀粉溶液，最后将氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的糖原分支酶加入糊化淀粉溶液中，于温度为30℃、pH为7.0的条件下改性6 h；

或者，所述方法为先将淀粉加入缓冲液中，得到淀粉溶液，然后将淀粉溶液进行糊化，得到糊化淀粉溶液，接着将糊化淀粉溶液进行温育，得到温育淀粉溶液，最后将氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的糖原分支酶加入糊化淀粉溶液中，于温度为30℃、pH为7.0的条件下改性8 h；

或者，所述方法为先将淀粉加入缓冲液中，得到淀粉溶液，然后将淀粉溶液进行糊化，得到糊化淀粉溶液，接着将糊化淀粉溶液进行温育，得到温育淀粉溶液，最后将氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的糖原分支酶加入糊化淀粉溶液中，于温度为35℃、pH为7.5的条件下改性10 h。

3.如权利要求1所述的一种降低淀粉消化率的方法，其特征在于，所述糊化淀粉溶液以及温育淀粉溶液中淀粉的浓度为10~100 g/L。

4.如权利要求1所述的一种降低淀粉消化率的方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液或柠檬酸缓冲液。

5.如权利要求1所述的一种降低淀粉消化率的方法，其特征在于，所述糊化为将淀粉溶液在沸水浴中以100~200 r/min的速度搅拌20~40 min。

6.如权利要求1所述的一种降低淀粉消化率的方法，其特征在于，所述温育为将糊化淀粉溶液在25~45 ℃的条件下以100~200 r/min的速度搅拌10~20 min。

7.权利要求1-6任一所述的降低淀粉消化率的方法在生产抗性淀粉中的应用。