CN110786511A - 一种乳清分离蛋白糖基化反应产物制备姜黄素均匀乳液的方法和姜黄素均匀乳液 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种乳清分离蛋白糖基化反应产物制备姜黄素均匀乳液的方法和姜黄素均匀乳液。该方法包括如下步骤:1)乳清分离蛋白糖基化反应产物的制备;2)糖基化蛋白‑多酚复合物的制备;3)姜黄素均匀乳液的制备。本发明糖基化蛋白‑多酚纳米复合物良好的乳化特性与界面性质有效抑制了油滴间的聚并现象,使乳液液滴呈现出良好的均一性,而乳滴均一性与储藏稳定性直接相关。同时糖基化反应使蛋白在负载活性物质的油滴外部形成更致密和更厚的界面层,其抑制活性物质与促氧化剂(金属离子,自由基,溶解氧)之间的相互作用。
Description
技术领域
本发明属于食品科学与工程技术领域,更具体地,涉及一种乳清分离蛋白糖基化反应产物制备姜黄素均匀乳液的方法和姜黄素均匀乳液。
背景技术
本发明技术方案属于食品科学与工程技术领域,具体涉及乳清分离蛋白糖基化反应产物制备姜黄素均匀乳液的方法。
蛋白质-多糖复合物可以通过静电相互作用或共价键形成,然而,只有共价连接的复合物在剧烈环境中更稳定。通过糖基化反应制备的蛋白质-多糖复合物对pH、温度和粒子强度的变化具有高耐受性,对蛋白水解反应和氧化具有抑制作用。姜黄素是一种天然色素,具有多种促进健康的特性,如抗炎,抗癌和抗氧化活性。由于其自身的结构特点,其在碱性条件下容易发生降解,导致稳定性和生物活性丧失。由于水包油(O/W)乳液的输送系统具有生物相容性和制备工艺简单等优点,已被广泛开发并用于保护姜黄素免受异构化,氧化和降解等领域,但常规蛋白多糖乳液包埋体系易受加工工艺的影响,乳液稳定性受外界环境影响,易聚集造成乳液中活性物质的析出,乳液对活性物质的抗氧化抑制作用降低,活性物质的生物利用率进一步降低。
发明内容
本发明的目的在于解决上述问题,采用糖基化乳清分离蛋白-多酚纳米复合物稳定的均匀乳液包埋体系,可以明显提高姜黄素在均匀乳液中的降解稳定性,有效延长乳液中活性物质的降解时间,同时提高乳液包埋体系的在复杂环境中的耐受性,提供一种简易的提高活性物质的生物利用率的方法。
为了实现上述目的,本发明的第一方面提供一种乳清分离蛋白糖基化反应产物制备姜黄素均匀乳液的方法,该方法包括如下步骤:
1)乳清分离蛋白糖基化反应产物的制备
将乳清分离蛋白与D-(+)乳糖、水混合,得到乳清分离蛋白和D-(+)乳糖的混合溶液,调节混合溶液的pH至6.5~7.5,冷冻干燥,得到蛋白-乳糖混合粉末;将蛋白-乳糖混合粉末置于湿度为70%~79%、温度为65℃~70℃的环境下反应,得到糖基化乳清分离蛋白粉末;
2)糖基化蛋白-多酚复合物的制备
将糖基化乳清分离蛋白粉末与水混合得到糖基化乳清分离蛋白溶液,加入表没食子儿茶素没食子酸酯粉末,调节溶液pH至3.0~3.3,充分混合至混合溶液变为乳白色后得到所述糖基化蛋白-多酚复合物;
3)姜黄素均匀乳液的制备
将姜黄素溶于油相中,离心去除不溶物得到姜黄素溶液,再将姜黄素溶液与步骤2)的糖基化蛋白-多酚复合物混合均质,得到所述姜黄素均匀乳液。
根据本发明,水通常采用本领域技术人员常规采用的实验用水,包括但不限于去离子水。
根据本发明,可采用本领域技术人员常规采用的酸碱调节剂对体系的 pH进行调节。如步骤1)中,可采用氢氧化钠溶液将体系pH调节至6.5~7.5;如步骤2)中,可采用盐酸溶液将体系pH调节至3.0~3.3。
作为优选方案,混合可采用磁力搅拌的方式,并保证物质充分溶解。
作为优选方案,步骤1)中,乳清分离蛋白与D-(+)乳糖的质量比为1:1~2。
作为优选方案,步骤1)中,所述乳清分离蛋白和D-(+)乳糖的混合溶液中,乳清分离蛋白与D-(+)乳糖的总质量为5%~10%。
作为优选方案,步骤1)中,反应的时间为12h~24h。
作为优选方案,步骤2)中,所述糖基化乳清分离蛋白溶液中,糖基化乳清分离蛋白的浓度为4mg/mL-6mg/mL。
作为优选方案,步骤2)中,糖基化乳清分离蛋白粉末与表没食子儿茶素没食子酸酯的质量比为1~2:1~2。
作为优选方案,步骤3)中,姜黄素溶液中姜黄素的浓度为0.05%~0.1%。
作为优选方案,步骤3)中,姜黄素溶液和糖基化蛋白-多酚复合物的质量比为6~7:3~4。
作为优选方案,步骤3)中,离心的转速为10000rpm~12000rpm,时间为10min~15min。
作为优选方案,步骤3)中,均质的转速为7500rpm~15000rpm,时间为2min~3min。
作为优选方案,步骤3)中,所述油相可以为菜籽油、花生油、大豆油等,优选为中链脂肪酸甘油酯(MCT)。
本发明的第二方面提供由上述的方法制备得到的姜黄素均匀乳液。
根据本发明,所述姜黄素均匀乳液的乳相体积分数约为90%~100%。
本发明的有益效果:
本发明糖基化蛋白-多酚纳米复合物良好的乳化特性与界面性质有效抑制了油滴间的聚并现象,使乳液液滴呈现出良好的均一性,而乳滴均一性与储藏稳定性直接相关。同时糖基化反应使蛋白在负载活性物质的油滴外部形成更致密和更厚的界面层,其抑制活性物质与促氧化剂(金属离子,自由基,溶解氧)之间的相互作用。而且表没食子儿茶素没食子酸酯作为多羟基的酚类物质,其强抗氧化能力(如自由基清除性和金属离子螯合能力),可以有效地清除或螯合试图进入液滴的促氧化剂,从而提高活性物质的保留率。
本发明的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
图1示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的粒径分布图。
图2示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的激光共聚焦图。
图3示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的储藏稳定性分析图。
图4示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的盐离子稳定性分析图。
图5示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的热稳定性分析图。
图6示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的稳定性分析图。
具体实施方式
下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式,然而应该理解,可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反,提供这些实施方式是为了使本发明更加透彻和完整,并且能够将本发明的范围完整地传达给本领域的技术人员。
实施例1
本实施例提供一种乳清分离蛋白糖基化反应产物制备姜黄素均匀乳液的方法,包括如下步骤:
1)乳清分离蛋白糖基化反应产物的制备
将乳清分离蛋白与D-(+)乳糖、水混合,得到乳清分离蛋白和D-(+)乳糖的混合溶液,采用氢氧化钠溶液调节混合溶液的pH至7,冷冻干燥,得到蛋白-乳糖混合粉末;将蛋白-乳糖混合粉末置于湿度为70%~79%、温度为68℃的环境下反应18h,得到糖基化乳清分离蛋白粉末;
其中,乳清分离蛋白与D-(+)乳糖的质量比为1:1.5,乳清分离蛋白和 D-(+)乳糖的混合溶液中,乳清分离蛋白与D-(+)乳糖的总质量为7.5%
2)糖基化蛋白-多酚复合物的制备
将糖基化乳清分离蛋白粉末与去离子水混合得到5mg/mL的糖基化乳清分离蛋白溶液,加入表没食子儿茶素没食子酸酯粉末,采用盐酸溶液调节溶液pH至3.0~3.3,充分混合至混合溶液变为乳白色后得到所述糖基化蛋白-多酚复合物;
其中,糖基化乳清分离蛋白粉末与表没食子儿茶素没食子酸酯的质量比为1:1。
3)姜黄素均匀乳液的制备
将姜黄素溶于中链脂肪酸甘油酯中,离心(12000rpm、10min)去除不溶物得到浓度为0.075%姜黄素溶液,再将姜黄素溶液与步骤2)的糖基化蛋白-多酚复合物混合均质(10000rpm、2min),姜黄素溶液和糖基化蛋白- 多酚复合物的质量比为2:1,得到姜黄素均匀乳液(乳相体积分数为100%)。
上述步骤中,采用磁力搅拌的方式进行混合,并保证物质充分溶解。
图1示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的粒径分布图,图2 示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的激光共聚焦图。可以看出糖基化乳清分离蛋白-多酚纳米复合物制备的姜黄素均匀乳液的结构以及粒径分布,蛋白均匀地吸附在乳滴表明面,形成了完美的均匀乳液结构,且粒径分布均一,稳定性良好。
图3示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的储藏稳定性分析图。负载姜黄素(WLE(curcumin)后,初始粒径均没有明显变化,随着储藏时间的延长,糖基化的WPI-Lac/EGCG乳液负载的姜黄素粒径无明显变化, 30天以后仍保持50μm,具有良好的储藏稳定性。
图4示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的盐离子稳定性分析图。其中,A为不同盐离子浓度下姜黄素乳液宏观示意图,B为盐离子浓度为0mM时的姜黄素乳液微观结构图,C为盐离子浓度为50mM时的姜黄素乳液微观结构图,D盐离子浓度为100mM时的姜黄素乳液微观结构,E 为盐离子浓度为200mM时的姜黄素乳液微观结构图,由图A可知负载姜黄素的WPI-Lac/EGCG稳定的乳液液滴受盐离子浓度影响较小,乳相体积分数仍为100%,液滴分布均匀,在盐离子浓度为0mM时,平均粒径为50μm,随着盐离子浓度升高至200Mm(图E),粒径逐渐增至75μm左右,仍具有很强的盐离子稳定性。
图5示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的热稳定性分析图。其中,A为姜黄素乳液不同温度处理下的宏观示意图,B为室温(25℃)下的姜黄素乳液微观结构图,C为50℃处理15min下的姜黄素乳液微观结构图,D为85℃处理15min下的姜黄素乳液微观结构图,由图B-D可知, WPI-Lac/EGCG稳定的乳液由于自身具有的良好热稳定性,界面吸附能较强,乳液粒径变化较小,室温下(图B)乳液粒径为50μm(机器实测),随着温度升高至85℃(图D),负载姜黄素的乳液粒径逐渐稳定在70μm左右(机器实测),虽然乳滴出现了部分的聚集,造成粒径的增加,但是液滴的分布更窄,表明在稳定的作用下小液滴减少,尺寸相近的液滴数量增多,表明WPI-Lac/EGCG稳定的乳液均具有良好的热稳定性,乳滴直径受温度影响较小。
图6示出了本发明实施例1制备得到的姜黄素乳液的稳定性分析图。 WPI-Lac/EGCG乳液中姜黄素半衰期延长至155h左右,糖基化的 WPI-Lac/EGCG纳米颗粒制备的均匀乳液对姜黄素有较强的保护作用。
以上已经描述了本发明的各实施例,上述说明是示例性的,并非穷尽性的,并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下,对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。
Claims (10)
1.一种乳清分离蛋白糖基化反应产物制备姜黄素均匀乳液的方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
1)乳清分离蛋白糖基化反应产物的制备
将乳清分离蛋白与D-(+)乳糖、水混合,得到乳清分离蛋白和D-(+)乳糖的混合溶液,调节混合溶液的pH至6.5~7.5,冷冻干燥,得到蛋白-乳糖混合粉末;将蛋白-乳糖混合粉末置于湿度为70%~79%、温度为65℃~70℃的环境下反应,得到糖基化乳清分离蛋白粉末;
2)糖基化蛋白-多酚复合物的制备
将糖基化乳清分离蛋白粉末与水混合得到糖基化乳清分离蛋白溶液,加入表没食子儿茶素没食子酸酯粉末,调节溶液pH至3.0~3.3,充分混合至混合溶液变为乳白色后得到所述糖基化蛋白-多酚复合物;
3)姜黄素均匀乳液的制备
将姜黄素溶于油相中,离心去除不溶物得到姜黄素溶液,再将姜黄素溶液与步骤2)的糖基化蛋白-多酚复合物混合均质,得到所述姜黄素均匀乳液。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤1)中,乳清分离蛋白与D-(+)乳糖的质量比为1:1~2。
3.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤1)中,所述乳清分离蛋白和D-(+)乳糖的混合溶液中,乳清分离蛋白与D-(+)乳糖的总质量为5%~10%。
4.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤1)中,反应的时间为12h~24h。
5.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤2)中,所述糖基化乳清分离蛋白溶液中,糖基化乳清分离蛋白的浓度为4mg/mL-6mg/mL。
6.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤2)中,糖基化乳清分离蛋白粉末与表没食子儿茶素没食子酸酯的质量比为1~2:1~2。
7.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤3)中,姜黄素溶液中姜黄素的浓度为0.05%~0.1%。
8.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤3)中,姜黄素溶液和糖基化蛋白-多酚复合物的质量比为6~7:3~4。
9.根据权利要求1所述的方法,其中,步骤3)中,
离心的转速为10000rpm~12000rpm,时间为10min~15min;
均质的转速为7500rpm~15000rpm,时间为2min~3min。
10.由权利要求1-9中任意一项所述的方法制备得到的姜黄素均匀乳液。
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