CN110755431B - 地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用。本发明结合体外细胞实验，首次发现地氯雷他定对肝癌细胞有很强的抑制作用；并首次通过动物实验第一次发现了地氯雷他定明显抑制肝癌癌细胞成瘤能力，可以有效抑制肝癌的肿瘤生长。动物实验研究结果同时表明，地氯雷他定作为抗肿瘤药物的使用并没有明显的毒副作用。地氯雷他定是经FDA认证的临床用药，其安全性更加可靠，本发明进一步扩展了地氯雷他定的应用范围，提高了其应用价值，对肿瘤治疗具有重要的现实意义。

Description

地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别涉及地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用。

背景技术

肝癌是较常见、进展较快的恶性肿瘤之一，虽然血清甲胎蛋白的临床应用和各种影像学技术的进步，加之外科手术技术的成熟，以及各种局部治疗等非手术治疗方法的发展使得肝癌的预后较过去有了明显的提高。但目前还有很多的问题没有得到解决，如原发性肝癌发病原因还不是很清楚；缺乏有效的预防措施；AFP阴性小肝癌的早期诊断还没有完全解决；术后的复发率还很高；目前还没有发现对患者全身反应小而对肝癌有特效的药物。因此找到安全、高效的抗肝癌药物刻不容缓。老药新用，即探究已被普及应用的临床非抗肿瘤药物的抗癌活性，越来越得到共识。这既可以节约新药的开发成本和时间，也在药物的物化、药代和安全性得到一定的保证。

地氯雷他定(Desloratadine，商品名芙必叮)是FDA批准的用来治疗过敏的抗组胺类药物，它是氯雷他定在体内脱甲酸乙酯而得的活性代谢产物，可以不经肝脏代谢直接起效。地氯雷他定是第三代抗组胺药物，主要用于缓解慢性特发性荨麻疹及常年过敏性鼻炎的全身及局部症状，其没其他抗组胺药物所有的嗜睡、中枢镇静等不良反应。地氯雷他定的抗组胺机制为能够高选择性的与组胺H1受体特异性结合，而且能够抑制IgE介导的和非IgE介导组胺从人周边血液嗜酸性粒细胞的释放。目前，未见其在抗肝癌方面的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用。

所述的抗肝癌药物包括抑制肝癌细胞增殖和/或肿瘤生长的药物。

地氯雷他定抑制肝癌细胞增殖的有效浓度优选为至少4μg/mL；地氯雷他定抑制小鼠肿瘤生长的给药剂量优选为至少15mg/kg。

所述的抗肝癌药物含有地氯雷他定和其药用盐中的至少一种。

所述的抗肝癌药物含有一种或多种药学上可接受的辅料。

所述的辅料优选为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、抗菌剂、芳香剂、抗氧剂、pH调节剂、保护剂、稀释剂、润滑剂、溶媒、基质或载体材料中的至少一种。

所述的抗肝癌药物可以采用本领域的常规方法制备成各种剂型，如注射剂、胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、酊剂、吸入制剂、口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂等剂型。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1.目前没有相关文献或专利报道地氯雷他定对肝癌细胞增殖和肿瘤生长的抑制作用。本发明结合体外以及体内实验，首次发现地氯雷他定对肝癌细胞有很强的抑制作用，可以有效抑制肝癌的肿瘤生长。

2.地氯雷他定是经FDA认证的临床用药，其安全性更加可靠，若使用于肝癌的治疗，开发利用的前景好。本发明提供地氯雷他定的新应用，为肝癌的临床治疗提供一种新的用药选择。

附图说明

图1是实施例1的体外细胞实验中的CCK8实验结果分析图。

图2是实施例1的体外细胞实验中的单克隆形成实验结果图。

图3是实施例2的动物体内实验结果图；其中，A为裸鼠体内皮下成瘤实验结果，B为肿瘤的生长曲线，C为小鼠的体重结果分析。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1体外细胞实验

肝癌细胞Huh7和HepG2购自于ATCC。

本实施例对肝癌细胞用不同浓度的地氯雷他定进行处理，然后进行CCK8实验检测细胞活性，以及单克隆形成实验，研究不同浓度的地氯雷他定对肝癌细胞的影响。

1.CCK8实验

1、将Huh7和HepG2细胞消化处理后计数，用培养基重悬细胞(密度为每毫升20000个细胞)，每孔50μL细胞悬液铺于96孔板中。

2、地氯雷他定用DMSO溶解得到10mg/mL的母液，再用10％FBS的DMEM(GibcoC11995500BT)培养基将母液稀释得到稀释浓度分别为4μg/mL、8μg/mL、12μg/mL、16μg/mL、20μg/mL和24μg/mL的地氯雷他定溶液。

3、第二天待细胞贴别后，每孔加50μL上述不同稀释浓度的地氯雷他定到对应浓度的孔中，使每孔中最终体积为100μL，最终的工作浓度为2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL和12μg/mL，每孔3个复孔，每块板铺重复相同的6块板，DAY0的板不加药，DAY1～DAY5的板都做相同的加药处理，然后每天一块板进行CCK8(Selleck B34306)实验检测细胞活性，连续检测6天，以相应浓度的DMSO作为对照。

2.单克隆形成实验

(1)将Huh7和HepG2细胞消化处理后计数，用培养基重悬细胞(密度为每毫升500个细胞)，每孔2毫升细胞悬液铺于6孔板中。

(2)第二天，待细胞贴壁后，丢弃原培养基，加入新的含不同浓度的地氯雷他定培养基(DMSO、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL)，置于细胞培养箱中培养。

(3)数天后固定细胞，显微镜下观察待单个细胞团中的细胞数目大于50个细胞时，丢弃培养基，用每孔1毫升PBS冲洗后，每孔加1毫升甲醇固定15分钟。

(4)染色，固定后，丢弃甲醇，每孔用1毫升PBS冲洗后，每孔加1毫升0.4％的结晶紫溶液染色5分钟，用自来水缓慢冲洗干净。

(5)拍照计数。

CCK8实验结果如图1所示，肝癌细胞的增殖活性随着地氯雷他定浓度的增加而减弱，并且随着时间延长这种影响更加显著。相应的随着地氯雷他定浓度增加，肝癌细胞克隆形成数减少(图2)。

实施例2动物体内实验

1.小鼠肿瘤转移模型的构建

选取18只6周龄、雌性裸小鼠(balb/c-nu/nu)，对照组6只和实验组12只，构建肿瘤转移模型。

(1)按每只裸鼠皮下注射500万个肝癌细胞计数(Huh7)，将细胞用PBS洗涤一次后，用PBS(Gibco 10010023)重悬细胞并与基质胶(CORNING 354234)按1：1的体积比混合均匀，使每100μL混合体积中含500万Huh7细胞中；

(2)在实验之前对裸鼠进行麻醉，通过无痛及有痛刺激来评估麻醉程度，确定裸鼠处于麻醉状态；

(3)用25G针头的微注射器对18只裸鼠进行皮下注射步骤(1)的重悬细胞。

2.地氯雷他定处理

打入Huh7细胞大概一周后，用灌胃的方式对小鼠进行给药。将地氯雷他定溶于特定溶剂(30％(v/v)丙二醇、5％(v/v)吐温80和5％(v/v)葡萄糖水溶液)中，配制浓度分别为0mg/kg(对照组)，15mg/kg和45mg/kg的地氯雷他定溶液，每个浓度分别给药6只裸鼠，每只小鼠每次灌胃100μL。每天一次，连续给药，每2天测量小鼠的肿瘤大小和体重，直到对照组的肿瘤大小在1500立方毫米左右。

结果如图3所示，图3A显示裸鼠体内皮下成瘤实验结果。图3B中，肿瘤的生长曲线表明肝癌癌细胞成瘤能力受到地氯雷他定的明显抑制，尤其是实验组在接受45mg/kg地氯雷他定处理时，相对于对照组肿瘤生长抑制更加明显。本实施例表明地氯雷他定可以抑制肝癌的肿瘤生长。而图3C中显示三组之间小鼠体重并无太大差别，说明地氯雷他定作为抗肿瘤药物的使用并没有明显的毒副作用。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用，其特征在于：所述的抗肝癌药物为抑制肝癌细胞增殖和/或肿瘤生长的药物；地氯雷他定抑制肝癌细胞增殖的有效浓度为至少4 μg/mL。

2.根据权利要求1所述的地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用，其特征在于：

地氯雷他定抑制小鼠肿瘤生长的给药剂量为至少15 mg/kg。

3.根据权利要求1～2任一项所述的地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用，其特征在于：

所述的抗肝癌药物含有地氯雷他定和其药用盐中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用，其特征在于：

所述的抗肝癌药物含有一种或多种药学上可接受的辅料。

5.根据权利要求4所述的地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用，其特征在于：

所述的辅料为缓释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、抗菌剂、芳香剂、抗氧剂、pH调节剂、保护剂、稀释剂、润滑剂、溶媒中的至少一种。

6.根据权利要求1～2任一项所述的地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用，其特征在于：

所述的抗肝癌药物采用本领域的常规方法制备成药物剂型。

7.根据权利要求6所述的地氯雷他定在制备抗肝癌药物中的应用，其特征在于：

所述的药物剂型为注射剂、胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、酊剂、吸入制剂、口服溶液剂、口服混悬剂或口服乳剂。

Images