CN110747175B - 一株猪δ冠状病毒及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一株猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus)及其应用。本发明从猪肠道组织中分离，并经传代纯化获得一株猪δ冠状病毒PDC‑SX19，其微生物保藏号为CGMCC No.18332。该分离株能够在传代细胞上稳定增殖，产生典型细胞病变。本发明猪δ冠状病毒分离株具有优异的免疫原性；采用该分离株制备的疫苗能够诱导仔猪产生高水平的中和抗体；同时，采用该分离株制备的ELISA试剂盒能较好的检测血清中的猪δ冠状病毒抗体。

Description

一株猪δ冠状病毒及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一株分离纯化的猪δ冠状病毒及其应用。

背景技术

猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus，PDCoV)，是2012年新发现的一种感染猪的冠状病毒，属于冠状病毒科δ冠状病毒属成员。PDCoV直径120-180nm，具有囊膜和纤突、单股的RNA病毒，基因组长为25.4kb，包含5′和3′非编码区及7个开放性阅读框，分别编码多聚酶蛋白1a/1b、纤突蛋白(S)、小膜蛋白(E)、膜蛋白(M)、非结构蛋白6(NS6)、核衣壳蛋白(N)及非结构蛋白7(NS7)。PDCoV可引起母猪和仔猪腹泻症状，以呕吐、水样腹泻、脱水和食欲下降为基本特征，各年龄段猪群均易感，发病仔猪中的死亡率为30％～40％。

PDCoV首次于2012年在香港从收集的猪粪便样本中检测到。2014年初，美国俄亥俄州的猪场爆发大面积的仔猪流行性腹泻，经检测为PDCoV阳性，其他肠道病毒例如猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)以及轮状病毒(PoRV)检测结果为阴性。PDCoV在北美国家广泛传播，给猪场造成了巨大经济损失。

目前PDCoV在我国某些地区呈流行趋势。随着各种猪肠道病毒性腹泻病的不断发生，外界环境的复杂和仔猪体抗力的下降，越来越多的猪场相继爆发PDCoV，给养殖业造成了一定的危害和经济损失，但目前尚无针对PDCoV的商品疫苗。针对PDCoV病毒蛋白如何调控宿主机能，利用宿主机制逃避免疫反应，利于病毒自身存活和增殖的研究也较少。及时研发有效的疫苗和诊断试剂盒，对于防控该病具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一株猪δ冠状病毒及其S基因组序列，以及基于分离株制备的灭活疫苗在猪δ冠状病毒病防控中的应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供一株猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus，PDCoV)及其S基因组序列。

本发明将某猪场的猪肠道组织研磨液接种ST细胞，经细胞传代、纯化及鉴定，得到一株猪δ冠状病毒，命名为PDC-SX19，其在细胞上增殖稳定，滴度高达10^6.5～8.5TCID50/mL，于2019年8月9日中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC No.18332。本发明提供猪δ冠状病毒分离株的S基因组序列，如SEQ ID N o.1所示。

第二方面，本发明提供一种含有所述猪δ冠状病毒毒株的生物制品，所述生物制品用于预防、或诊断猪δ冠状病毒病。

所述的生物制品可以是疫苗或诊断试剂。

其中，所述的疫苗为活疫苗或灭活苗。

本发明提供的包含所分离猪δ冠状病毒的灭活疫苗。所述灭活疫苗由猪δ冠状病毒PDC-SX19接种ST细胞或LLC-PK细胞进行传代，收获病毒液，测定毒价，然后按重量比1:1比例与佐剂混匀。

所述灭活疫苗抗原含量为每头份不低于10^6.5TCID₅₀，免疫途径为肌肉注射或鼻腔接种，优选地，肌肉注射途径。

本发明提供的试剂可以是一种包含所分离猪δ冠状病毒的ELISA试剂盒，能较好的检测血清中的抗体。

第三方面，本发明还提供所述猪δ冠状病毒毒株在制备用于预防猪δ冠状病毒病的疫苗中的应用；以及所述猪δ冠状病毒毒株在制备用于诊断猪δ冠状病毒病的试剂中的应用。

本发明的有益效果在于：

利用本发明所得猪δ冠状病毒在易感细胞(ST或LLC-PK等细胞系)上增殖快，增殖滴度高，可达10^8.5TCID50/mL；本发明猪δ冠状病毒株致病力低，用10^7.0TCID₅₀病毒液对断奶仔猪进行鼻腔攻毒，连续观察10天，攻毒断奶仔猪无体温升高和腹泻等临床症状，全部存活。以本发明毒株制备的灭活疫苗，免疫原性好，能够诱导仔猪产生高水平的中和抗体，为猪δ冠状病毒病的有效防控提供了重要生物材料。

目前PDCo V没有商品化的ELISA方法检测试剂盒，因此建立血清抗体检测方法对于筛选阴性猪有重要的作用。ELISA具有敏感性高、特异性好、可批量操作的特点，便于临床推广应用。本发明提供一种包含所分离猪δ冠状病毒的ELISA试剂盒，能较好的检测血清中的猪δ冠状病毒抗体，为该病的有效检测提供了重要基础。

在此基础上，含有本发明所述猪δ冠状病毒在制备用于防控、诊断猪δ冠状病毒病的其他生物制品也属于本发明的保护范围。

本研究于2018年从某猪场猪肠道组织中分离并经传代纯化，获得一株猪δ冠状病毒，命名为PDC-SX19。该分离株在传代细胞上增殖性好，对仔猪无明显致病力，且免疫原性优异，能够诱导仔猪产生高水平中和抗体，为猪δ冠状病毒的有效防控奠定坚实的基础。同时，采用该分离株制备的ELISA试剂盒，能较好的检测血清中的猪δ冠状病毒抗体，为猪δ冠状病毒的有效诊断奠定了技术基础。

附图说明

图1为猪δ冠状病毒分离株在ST贴壁细胞上培养，其中，A为猪δ冠状病毒在ST细胞上的病变(CPE)，B为正常ST细胞对照。

图2为猪δ冠状病毒分离株在ST悬浮细胞上培养，其中，A为猪δ冠状病毒在ST悬浮细胞上的病变(CPE)，B为正常ST悬浮细胞对照。

图3为猪δ冠状病毒的RT-PCR鉴定结果，从左到右依次为：1.第8代猪δ冠状病毒细胞培养物；2.猪δ冠状病毒阳性对照；3.猪δ冠状病毒阴性对照；4.第8代正常细胞培养物；5.Trans 2K Plus DNA Marker。

具体实施方式

下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用试剂均为市售产品。

实施例1猪δ冠状病毒的分离

1.肠道组织的采集与处理

采集猪肠道组织，剪碎，加入10倍体积含500单位双抗的DMEM培养基研磨，4℃，12000rpm离心5min，取研磨液上清，冻于-80℃备用。

2.肠道组织病原检测

取200μl上述研磨液上清，用北京全式金生物公司DNA/RNA提取试剂盒，按说明书步骤提取DNA和RNA；然后，用全式金反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA。以提取的DNA和反转录cDNA为模板，分别用猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型/3型(PCV2/PCV3)、猪细小病毒(PPV)、猪传染性胃肠炎(TGEV)、流行性腹泻病毒(PEDV)、猪δ冠状病毒(PDCoV)共9对检测引物及全式金2╳EasyTaqPCRSuperMix进行PCR检测，同时设置阳性和阴性对照。检测结果显示，病料研磨液为猪δ冠状病毒阳性，其他病原阴性。

3.猪δ冠状病毒的分离

用含8％胎牛血清(FBS)的DMEM培养液将ST细胞制成悬液接种于6孔细胞培养板，待细胞长至单层，吸弃培养液，按1：10比例加入上述研磨液，300μl/孔，同时设置正常细胞对照，37℃孵育1小时，吸弃上述稀释的研磨液，加入含无血清含10ug/ml胰酶的DMEM培养基，2ml/孔，置于37℃，5％CO2培养箱培养。每天观察细胞病变，第1、2、3、4代均无细胞病变，每个代次均培养5天后收取培养物反复冻融3次，离心取上清，盲传第5代。盲传至第5代后，第2-3天接种细胞出现聚集、圆缩、脱落的病变，如图1，而正常细胞无病变，此时收取细胞培养物。反复冻融3次后，离心取上清，按上述步骤继续传至第8代。对第8代产物进行RT-PCR鉴定，按北京全式金DNA/RNA提取试剂盒说明书提取核酸，按全式金EasyScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix说明书进行反转录，PCR所用检测引物为：PDCoV-F：TTTCAGGTGCTCAAAGCTCA；PDCoV–R：GCGAAAAGCATTTCCTGAAC。

产物经1％琼脂糖凝胶电泳，出现大小为694bp左右的阳性条带，如图3。由此证实，成功分离到猪δ冠状病毒。

4.猪δ冠状病毒S基因组序列测定

(1)猪δ冠状病毒S基因组RNA提取与cDNA合成

对分离到的病毒进行ST悬浮细胞扩繁培养传代，取200μl猪δ冠状病毒第七代病毒液，用全式金EasyPure Viral DNA/RNA Kit提取病毒基因组，具体操作如下：

先加入20μl蛋白酶K于1.5mL无菌离心管；在离心管中加入200μl病毒液；再加入200μl BB5(含5.6μg Carrier RNA),涡旋混合15s，56℃孵育15min；加入250μl无水乙醇，涡旋混合15s，室温放置5分钟；将溶液和沉淀一起加入离心柱中，12000rpm离心1min，弃掉流出液；加入500μl WB5，12000rpm离心1min，弃掉流出液；重复加入500μl WB5步骤洗涤一次；室温12000rpm离心1min，彻底去除残留的乙醇；将离心柱转入一个新1.5mL无RNA酶的离心管中，并向离心柱中央加40μl无RNA酶水，室温静置1min；室温12000rpm离心1min，洗脱RNA，冻于-80℃备用。

用全式金公司EasyScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix将基因组RNA反转录成cDNA，所述反应体系(20μl)如下：

轻轻吹打混匀，42℃孵育1h，85℃加热5min，置于冰上或冻于-20℃备用。

(2)猪δ冠状病毒S基因组序列

参考GeneBank上已发表的猪δ冠状病毒S基因序列，选择保守区设计覆盖基因组编码区全长的5对引物，由北京三博远志生物技术有限公司合成。以上述cDNA为模板，用5对引物扩增S基因组序列。

所述PCR反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min30s，进行35个循环。扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳，切胶回收纯化目的条带，然后送至北京铂尚生物技术有限公司测序。各片段经拼接得到猪δ冠状病毒S基因组序列，如SEQID No.1所示。

将拼接获得的猪δ冠状病毒S基因组核酸序列在线NCBI Blast比对，发现与现有猪δ冠状病毒毒株序列比对最高同源性为99.48％(在线比对网址为https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)；将拼接获得的猪δ冠状病毒S基因组推导的氨基酸序列在线NCBI Blast比对，发现与现有猪δ冠状病毒毒株序列比对最高同源性为99.14％(在线比对网址为https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)。因此，确定此毒株为一株新的猪δ冠状病毒。

对分离到的病毒进行ST悬浮细胞扩繁培养传代，第8代贴壁细胞培养的猪δ冠状病毒按2％比例接种至ST悬浮细胞扩繁培养，第2天接种细胞出现聚集、融合的病变，如图1，而正常细胞无明显病变，此时收取细胞培养物。继续将猪δ冠状病毒传至第11代，培养24小时后有明显细胞病变，经鉴定阳性后，已扩大培养得到一株猪δ冠状病毒，命名为PDC-SX19，猪δ冠状病毒PDC-SX19已于2019年8月9日中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCCNo.18332。。

将猪δ冠状病毒接种ST贴壁细胞进行培养，24-36小时出现典型的细胞病变，如图1和图2。待细胞病变达到约80％，收获培养物，反复冻融3次，依据Reed&Muench方法测定病毒毒价为10^6.5-8.5TCID₅₀/mL。

实施例2猪δ冠状病毒PDC-SX19致病性实验

筛选猪δ冠状病原及抗体阴性40日龄仔猪9头，随机分为3组，每组3头。试验组为鼻腔、肌肉攻毒，每头猪分别鼻腔接种2ml 10^7.5TCID₅₀F9传代病毒液，肌肉注射1ml10^7.5TCID₅₀F9传代病毒液；对照组每头猪分别鼻腔接种等体积无菌PBS溶液。每日观察猪只状态，测量直肠温度并记录。

连续观察10天，试验组和对照组体温均在正常范围内波动，临床症状观察发现，试验组和对照组猪只食欲正常，无腹泻出现，且无猪只死亡，全部存活。以上数据表明，猪δ冠状病毒分离株PDC-SX19为低毒力毒株，对仔猪无明显致病性。

于攻毒前(0天)及攻毒后3天、5天、7天、10天采集攻毒组和对照组每头猪血液、双肛拭子，分离血清，RT-PCR检测病毒血症和排毒情况。病毒血症检测结果，见表1。排毒情况检测结果，见表2。数据显示，攻毒猪在3天均出现病毒血症和排毒现象，10天以后均未出现病毒血症和排毒现象。

表1攻毒前后病毒血症检测结果

表2攻毒前后粪便排毒情况检测结果

攻毒试验数据表明，本发明分离株PDC-SX19感染仔猪后无明显临床症状，为低毒力毒株。

实施例3分离株PDC-SX19在制备猪δ冠状病毒灭活疫苗中的应用

1.猪δ冠状病毒灭活疫苗的制备

将PDC-SX19分离株按培养体积的百分之一接种于ST细胞或LLC-PK细胞单层或悬浮细胞进行连续传代，收获病毒液，反复冻融3次后，离心取上清，测定病毒滴度。病毒滴度10^7.5TCID50，无菌及外源病毒检验合格后，加入终浓度为0.1％的甲醛进行灭活。与病毒液按体积比为1：1加入佐剂(有A、B两种佐剂：A佐剂为中牧自制胶状水佐剂(配方：注射用水溶液90％，聚乙烯吡咯烷酮2％，聚乳酸-羟乙酸(PLGA)3％，聚乙二醇6000 1％，烷基糖苷(癸基葡糖苷)(APG0816)2％，聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯1％，鲸蜡醇1％)，B佐剂为赛比克公司的201VG。故疫苗配置分为A组灭活疫苗和B组灭活疫苗。)，混匀，每头份病毒含量不低于10^6.5TCID50。

疫苗配置方法：

A组灭活疫苗：称取9g中牧自制的胶状水佐剂，与抗原等体积混合，充分震荡混匀。

B组灭活疫苗：称取9g赛比克公司的201VG，预热至32℃，抗原也预热至32℃，将水相等体积混入201VG，充分震荡混匀。

2.疫苗安全性试验

选取30日龄左右猪δ冠状病原及抗体阴性仔猪12头，随机分为4组，每组3头。试验A组肌肉分点注射2头份(4ml)A组灭活疫苗疫苗，间隔14d二次接种疫苗；对照A组肌肉分点注射等体积无菌PBS溶液，间隔14d二次接种PBS；试验B组肌肉接种2头份(4ml)B组灭活疫苗疫苗，间隔14d二次接种疫苗；对照B组肌肉接种等体积无菌PBS，间隔14d二次接种PBS。连续观察21天。结果显示，与对照组相比，试验A组和B组仔猪精神状态、体温及日增重无明显差异，未出现不良反应。

3.疫苗有效性试验

筛选猪δ冠状病原及抗体阴性断奶仔猪12头，随机分为4组，每组3头。试验A组肌肉注射1头份(2ml)A组灭活疫苗，对照A组肌注等体积无菌PBS溶液；试验B组肌肉注射接种1头份(2ml)B组灭活疫苗，对照B组肌肉注射等体积无菌PBS溶液，连续观察28天，于7天、14天、21天、28天采集血液，分离血清，于56℃灭活30min，测定猪δ冠状病毒中和抗体。28天后再进行二次免疫接种，连续观察14天，于35天、42天采集血液，分离血清，于56℃灭活30min，测定猪δ冠状病毒中和抗体。中和抗体检测结果(如表3所示)显示，由本发明毒株PDC-SX19经传代制备的灭活疫苗免疫后42天能产生高水平中和抗体，具有良好的免疫原性，其中，A组产生的中和抗体水平更高，是优选的灭活疫苗配置佐剂。

表3灭活疫苗免疫后中和抗体检测结果

实施例4分离株PDC-SX19在制备间接ELISA检测试剂盒的应用

1.扩繁PDC-SX19病毒分离株备用。

用ST细胞扩增PDC-SX19病毒。待细胞出现明显病变时，收获病毒于-80℃冻存，反复冻融3次。然后6000r/min离心5min，去除细胞碎片。用蔗糖密度梯度离心法纯化病毒。用PBS稀释纯化的病毒，并测蛋白浓度。

2.间接ELISA具体步骤。

(1)包被全病毒抗原：以纯化的全病毒作为包被抗原，用倍比稀释抗原和血清，利用方正滴定法确定病毒最佳包被浓度和最佳血清稀释度。病毒最佳包被浓度为2.5ug/ml，病毒最佳包被浓度为1：100。

用包被液稀释已纯化的病毒，以每孔100μL包被ELISA板，4℃过夜。

(2)弃掉包被液，用PBS洗3次，每孔加入200μL 5％脱脂奶粉，37℃封闭2小时。弃掉脱脂乳，然后用PBST洗3-5次，每次3-5分钟。

(3)用PBS稀释待检血清，然后每孔加100μL，37℃孵育1小时，同时设阴、阳性血清对照。弃掉液体，用PBST洗3-5次，每次3-5分钟。

(4)确定二抗最佳条件：二抗最佳稀释度为1：10000，最佳孵育时间为1小时。

加入稀释好的辣根过氧化酶标记的抗猪IgG二抗，每孔100μL，37℃孵育1小时。弃掉二抗，用PBST洗3-5次，每次3-5分钟。

(5)每孔加入100μL TMB显色液，避光显色15分钟。

(6)每孔加入50μL终止液2M H₂SO₄，OD450读值。阴阳性临界值：OD≥0.575判定为阳性，OD<0.354判为阴性，0.354≤OD<0.575为可疑。

阴、阳性血清对照结果成立。随机检测15份猪血清。

同时用中和试验同步检测，具体方法如下：

将待检血清于56℃灭活30分钟。将被检血清从1：4稀释至1：64，每个稀释度作3个重复，每孔加50uL，设阳性对照、阴性对照。将稀释好每50uL中100TCID₅₀的病毒液按每孔50uL加到对照孔之外的各孔内。置37℃5％二氧化碳培养箱中和1h。将稀释成2×10⁵/mL～3×10⁵/mL的ST细胞悬液，按每孔100uL加入中和完毕的各试验孔内，置37℃5％二氧化碳培养箱培养48h～72h，每天观察CPE。阳性对照、阴性对照结果成立，15份猪血清抗体检测结果如表4所示。备注：被检血清在1：8出现病变，则判为阳性；1：4判为可疑；<1：4则判为阴性。

3.猪血清抗体检测结果如表4所示。

4.结论：用间接ELISA试剂盒检测猪血清抗体结果和用中和试验同步检测结果一致，说明间接ELISA试剂盒检测猪血清抗体的方法成立。

表4用间接ELISA试剂盒检测猪血清抗体结果

备注：“+”代表阳性；“-”代表阴性。

虽然，上文中用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 中牧实业股份有限公司

<120> 一株猪δ冠状病毒及其应用

<130> WHOI90103

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3480

<212> DNA

<213> 猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus)

<400> 1

atgcagagag ctctattgat tatgacctta ctttgtctcg ttcgagcaaa gtttgctgat 60

gatctactcg atttgctcac cttcccaggt gcacatcgct tcttacataa acccacgagt 120

aattccacca gtctctactc gcgggctaat aactttgatg ttggcgttct tcctggctac 180

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ctaaccgata cactcataac acttaccaat actactatat cgcaaatcac ttattgtgat 780

aagtcagtag ttgattcaat agcatgccag cgctcttctc acgaagtgga ggatgggttt 840

tactccgacc ctaaatctgc cgttagagct aggcaacgta ctattgttac actacctaag 900

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agacttgaca gcgttaccat caatggtaac acatcctatt gtgtcactaa gccttacttc 1020

aggcttgaaa ctaactttat gtgtacaggt tgcactatga atctgcgcac tgatatctgt 1080

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cagcgtttgt atgttactgc tgtagagggc cagactcaca ctggaaccac ttcagtacat 1260

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ttaccgtgtg aaaccccttc tcaactgatt gtgataaata acaccgttgt cggtgctatc 1500

acatccagta actcaactga aaataatagg tttactacta ccattgtcac acctactttc 1560

ttttattcca caaatgccac cactttcaac tgcaccaagc ctgttttgtc ctatggaccc 1620

atcagcgtgt gtagtgatgg tgcaattgcg ggaacatcca cattacagaa tactcgacca 1680

tccatagttt cactatacga tggcgaagtt gaaataccat ctgcattttc tctttctgtt 1740

cagacggagt atttgcaagt tcaagcagag caagttatag ttgattgtcc acagtatgta 1800

tgcaatggca acagccgttg tctacaatta ttggcacaat acacctcagc ttgctctaac 1860

attgaagcag ctctgcattc ctctgcacag ttgaatagca gagagattat aaatatgttt 1920

caaacatcaa cacagtcctt gcagttagct aatattacta acttcaaggg tgactacaat 1980

tttagcagca tactaaccac cagacttggt ggcagatctg ctattgaaga ccttcttttt 2040

aataaagttg ttactagtgg ccttggcact gtcgatcagg actacaaagc ctgctctaga 2100

gacatggcca tcgctgactt agtttgttcc cagtattaca atggcatcat ggttctacct 2160

ggtgttgttg atgctgagaa aatggcaatg tatactggct ctcttactgg agctatggta 2220

tttggaggac tgactgccgc agcggcaata ccatttgcca cggcagtaca agcccgcctc 2280

aattatgtcg cactgcaaac aaatgtacta caagaaaacc agaaaattct tgcagaatca 2340

tttaaccaag cagttggcaa tatatcactt gcactatctt ctgttaatga tgccatccag 2400

caaacttctg aggctcttaa caccgtagct attgctatta aaaagattca aacagttgtt 2460

aaccagcagg gtgaggcatt atcacacctg actgcacagc tgtcaaacaa tttccaagca 2520

atttccactt ctattcaaga catttacaac cgtcttgagg aagtagaggc taaccagcaa 2580

gttgaccgtc tcatcacagg acggttggct gcacttaatg catatgttac tcagttactc 2640

aatcagatgt ctcagattag acaatctcga ttgttagctc agcaaaagat taatgagtgt 2700

gtcaaatctc agtcgtccag atacgatttc tgtggaaatg gcacacacat cttctcactt 2760

acacagactg caccaaatgg catatttttc atgcatgcag tgcttgtacc caacaaattc 2820

acacgtgtca acgcttctgc cggcatttgt gtggataata cgagaggcta ctcattgcag 2880

cctcaactta tactctacca gtttaataac tcctggagag ttacacctag aaatatgtat 2940

gaacccagac tgccccggca agctgatttc atacaattaa ctgattgcag cgttactttt 3000

tataacacca ccgctgctaa tcttcccaat attattcctg acgttataga tgtcaatcaa 3060

acagtcagtg atattattga caatttacct acagcaacac ctcctcagtg ggatgttggt 3120

atctataaca acactattct caacctcacc gttgagatta atgatctaca agagcggtct 3180

aaaaacctct cacagattgc agatcgttta caaaattata ttgacaatct taacaatact 3240

ctagttgacc ttgtatggct caacagagta gaaacttacc ttaaatggcc gtggtatata 3300

tggcttgcca ttgccctggc tcttattgca tttgtgacaa tcctcataac aatctttctt 3360

tgtactggtt gttgtggtgg ttgctttggt tgttgtggcg gttgttttgg ccttttctct 3420

aagaagaaaa ggtataccga cgaccaacca acaccgtcct ttaagtttaa ggaatggtag 3480

Claims (8)

1.一株猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus）毒株，其特征在于：所述猪δ冠状病毒毒株的名称为PDC-SX19，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No. 18332。

2.含有权利要求1所述猪δ冠状病毒毒株的生物制品，所述生物制品用于预防或诊断猪δ冠状病毒病。

3.根据权利要求2所述的生物制品，其特征在于：所述的生物制品为疫苗或诊断试剂。

4.根据权利要求3所述的生物制品，其特征在于：所述的疫苗为活疫苗或灭活苗，所述疫苗中还包括药物上可接受的佐剂。

5.根据权利要求4所述的生物制品，其特征在于：所述诊断试剂为ELISA试剂盒，其中，包括权利要求1所述的猪δ冠状病毒PDC-SX19全病毒包被的酶标板和酶标二抗。

6.权利要求1所述猪δ冠状病毒毒株在制备用于预防猪δ冠状病毒病的疫苗中的应用。

7.权利要求1所述猪δ冠状病毒毒株在制备用于诊断猪δ冠状病毒病的试剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述试剂为检测血清中猪δ冠状病毒抗体的ELISA试剂盒。

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