CN110732019B - Cg10032蛋白和/或cg10032基因的应用 - Google Patents

Cg10032蛋白和/或cg10032基因的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种CG10032蛋白和/或CG10032基因的应用；即一种CG10032蛋白和/或CG10032基因在制备抗病毒药物中的应用；其中，所述CG10032蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CG10032基因的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的CG10032蛋白(或CG10032基因)是一种来自果蝇的分泌型功能蛋白，在本发明中通过试验验证，其具有显著抑制多种病毒复制的功能。因此，该CG10032蛋白和/或CG10032基因可以用于制备抗病毒药物，具有广泛的应用前景。

Description

CG10032蛋白和/或CG10032基因的应用
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种CG10032蛋白和/或CG10032基因的应用。
背景技术
CG10032蛋白是果蝇细胞表达的一种分泌型蛋白，在双翅目、鞘翅目、膜翅目以及鳞翅目等昆虫种类均有同源蛋白。通过生物信息学比对发现，CG10032蛋白氨基酸在进化过程中非常保守，说明CG10032蛋白在昆虫中可能扮演相似的功能。
CG10032蛋白包含多个免疫相关的结构域，包含两个低密度脂蛋白A(LDLa)结构域和两个补体调节蛋白结构域(CCP domain)，含有CCP结构域的蛋白在昆虫免疫系统中起重要作用，既可以介导补体因子之间的相互作用，激活补体系统，也可以作为模式识别受体(PRR)介导病原微生物侵入宿主。
抗病毒感染的途径很多，如直接抑制或杀灭病毒、干扰病毒吸附、阻止病毒穿入细胞、抑制病毒生物合成、抑制病毒释放或增强宿主抗病毒能力等。抗病毒药物的作用主要是通过影响病毒复制周期的某个环节而实现的。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种CG10032蛋白和/或CG10032基因的应用和抗病毒药物，旨在解决为现有抗病毒药物提供更多选择的技术问题。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一方面，本发明提供一种CG10032蛋白和/或CG10032基因在制备抗病毒药物中的应用；其中，所述CG10032蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CG10032基因的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
另一方面，本发明还提供一种抗病毒药物，所述抗病毒药物含有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或所述抗病毒药物含有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经缺失、插入或替换所获得的具有相同功能的氨基酸序列；和/或
所述抗病毒药物含有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，或所述抗病毒药物含有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸经缺失、插入或替换所获得的具有相同功能的核苷酸序列。
本发明提供的CG10032蛋白(或CG10032基因)是一种来自果蝇的分泌型功能蛋白，在本发明中通过试验验证，其具有显著抑制多种病毒复制的功能。因此，该CG10032蛋白和/或CG10032基因可以用于制备抗病毒药物，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例2中重组质粒pMT-CG10032-V5-HisA的蛋白质免疫印迹试验结果图；
图2为本发明实施例3中CG10032 dsRNA促进水泡性口炎病毒复制的结果图；
图3为本发明实施例4中CG10032 dsRNA促进登革热2型病毒复制的结果图；
图4为本发明实施例5中CG10032 dsRNA促进果蝇C病毒复制的结果图；
图5为本发明实施例6中CG10032蛋白抑制水泡性口炎病毒复制的结果图。
具体实施方式
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
一方面，本发明实施例提供了一种CG10032蛋白和/或CG10032基因在制备抗病毒药物中的应用；其中，所述CG10032蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CG10032基因的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明实施例提供的CG10032蛋白(或CG10032基因)是一种来自果蝇的分泌型功能蛋白，在本发明实施例中，通过试验验证了其具有显著抑制多种病毒复制的功能。因此，该CG10032蛋白和/或CG10032基因可以用于制备抗病毒药物，具有广泛的应用前景。
本发明实施例的CG10032蛋白、CG10032基因的具体序列如下：
CG10032蛋白序列(SEQ ID NO.1)：
MRTFSIARGLNCLNFSQVCDGLADCKDCSDEDGTLCTAFRCLYGACVSPNALCNHIPDCLDGSDEMAEKDVKNAWKVCRLEDPSKSLVVENYVGGTTFQSTAFVPDKTVVHLSCRNGYALIGEEKNICDQDQCRYPLSRCVPQCKHVGNLSHTRQCTLNGRPIDCDQSVMPMGTLMSVTCSSGYEKTGGDGLQFCDETGSWVVSKKLPNCGPICGIW。
CG10032基因序列(SEQ ID NO.2)：
ATGAGGACTTTTTCGATTGCAAGGGGTCTGAACTGTCTGAACTTTAGTCAGGTGTGCGATGGATTAGCGGATTGCAAGGACTGCAGCGACGAAGACGGCACACTCTGCACGGCTTTCAGATGCCTCTACGGAGCCTGTGTTAGTCCGAATGCATTGTGTAATCACATTCCCGATTGCCTAGATGGCTCCGATGAGATGGCGGAGAAGGATGTCAAAAACGCTTGGAAAGTGTGTCGACTAGAAGACCCTTCAAAATCTCTGGTGGTCGAAAACTACGTTGGTGGGACAACCTTTCAAAGTACCGCCTTTGTGCCCGATAAGACCGTCGTCCATCTAAGCTGCCGCAATGGATATGCTCTGATCGGCGAGGAGAAGAACATTTGCGACCAGGACCAGTGTCGCTATCCATTGTCCAGGTGCGTGCCCCAATGTAAGCACGTGGGTAATCTAAGCCACACGAGGCAGTGCACCCTGAATGGTCGTCCGATAGACTGCGATCAGTCGGTGATGCCGATGGGCACTCTAATGTCGGTCACCTGCTCGTCGGGGTATGAAAAAACAGGAGGTGATGGTCTGCAGTTTTGCGACGAAACCGGAAGTTGGGTGGTTTCCAAAAAGCTGCCAAACTGCGGGCCCATCTGTGGTATTTGGTAG。
进一步地，在本发明实施例中，通过试验验证了，该CG10032蛋白和/或CG10032基因可以抑制水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus，VSV)、登革热2型病毒(denguevirus type-2，DENV-2)以及果蝇C病毒(drosophila C virus，DCV)的复制。因此，该CG10032蛋白和/或CG10032基因用于制备的抗病毒药物可以包括抗水泡性口炎病毒药物、抗登革热2型病毒药物和抗果蝇C病毒药物中的至少一种。
进一步地，在本发明实施例中，该抗病毒药物可以是蛋白类药物，具体地，该抗病毒药物含有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经缺失、插入或替换所获得的具有相同功能的氨基酸序列。或者，该抗病毒药物可以是核酸类药物，具体地，所述抗病毒药物含有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，或如SEQ ID NO:2所示的核苷酸经缺失、插入或替换所获得的具有相同功能的核苷酸序列。
进一步地，在本发明实施例中，所述CG10032蛋白的制备方法包括：
S01：构建含有SEQ ID NO.2所示序列的重组质粒；
S02：将所述重组质粒转入宿主细胞中进行表达，得到所述CG10032蛋白。
其中，构建含有SEQ ID NO.2所示序列的重组质粒的步骤包括：
S011：提取果蝇总RNA，然后反转录得到cDNA；
S012：从所述cDNA中扩增得到SEQ ID NO.2所示序列；
S013：将SEQ ID NO.2所示序列与骨架质粒载体连接，得到所述重组质粒。
优选地，扩增SEQ ID NO.2所示序列的引物如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。更优选地，所述骨架质粒载体为pMT/BiP/V5-HisA质粒。在一具体实施例中，可用限制性内切酶XbaI和EcoRI分别双酶切SEQ ID NO.2所示序列、pMT/BiP/V5-HisA质粒，然后将酶切产物连接在一起。
另一方面，本发明还提供一种抗病毒药物，所述抗病毒药物含有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或所述抗病毒药物含有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经缺失、插入或替换所获得的具有相同功能的氨基酸序列；和/或
所述抗病毒药物含有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，或所述抗病毒药物含有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸经缺失、插入或替换所获得的具有相同功能的核苷酸序列。
优选地，所述抗病毒药物包括抗水泡性口炎病毒药物、抗登革热2型病毒药物和抗果蝇C病毒药物中的至少一种。具体地，在本发明实施例中，该抗病毒药物还包括与药学上可接受的载体和/或辅料，具体包括稀释剂、粘合剂、吸收剂、崩解剂、分散剂、湿润剂、助溶剂、缓冲剂、表面活化剂。优选地，该抗病毒药物还可包括现有已知的抗病毒药物，即用该CG10032蛋白和/或CG10032基因的序列与现有已知的抗病毒药物联合使用。更优选地，该抗病毒药物可以为注射剂，此情况下，剂型发挥最好药效功能。
本发明先后进行过多次试验，现举一部分试验结果作为参考对发明进行进一步详细描述，下面结合具体实施例进行详细说明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例中所使用的水泡性口炎病毒为Indiana serotype,San Juan,Mudd-Summers strains；参考文献：Pattnaik AK,Hwang L,Li T,Englund N,Mathur M,Das T,Banerjee AK.Phosphorylation within the amino-terminal acidic domain I of thephosphoprotein of vesicular stomatitis virus is required for transcriptionbut not for replication[J].J Virol.1997,71(11):8167-8175。
实施例中所用的登革热2型病毒均为登革热2型病毒New Guinea C株；参考文献：Chao Y C,Huang C S,Lee C N,et al.Higher infection of dengue virus serotype2in human monocytes of patients with G6PD deficiency[J].PloS one,2008,3(2):e1557。
实施例中所用的果蝇C病毒参考文献：Kapun M,Nolte V,Flatt T,
Figure BDA0001737860560000063
C.Host range and specificity of the Drosophila C virus[J].PLoS One.2010,5(8):e12421。
实施例中所用的质粒pMT/BiP/V5-HisA来自Invitrogen公司，产品目录号V4130-20；S2细胞(即为果蝇S2细胞)来自Invitation公司，产品目录号R690-07。Vero细胞(即非洲绿猴肾细胞)：
Figure BDA0001737860560000064
CCL-81TM。
术语MOI(multiplicity of infection)即感染复数；MOI是一个比值，没有单位。MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。
实施例1抑制CG10032基因表达的dsRNA的制备
1、设计用于制备抑制CG10032基因表达的dsRNA的编码DNA的引物如下：
CG10032-F(SEQ ID NO.3)：
Figure BDA0001737860560000061
CG10032-R(SEQ ID NO.4)：
Figure BDA0001737860560000062
上述引物中，方框标注的区域为T7启动子序列。
2、提取果蝇S2细胞的总RNA并反转录为cDNA，以cDNA为模板，用CG10032-F和CG10032-R组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
3、取步骤2得到的PCR扩增产物，采用Ambion MEGAscriptT7High YieldTranscription Kit(产品目录号为AM1334)并按试剂盒说明书进行体外转录，由于CG10032-F和CG10032-R都具有T7启动子，体外转录形成两条反向互补的单链RNA分子，该两条反向互补的单链RNA分子自发形成双链RNA分子(即CG10032dsRNA)。
4、设计用于制备抑制GFP基因(绿色荧光蛋白基因)表达的dsRNA的编码DNA的引物如下：
GFP-F(SEQ ID NO.5)：
Figure BDA0001737860560000071
GFP-R(SEQ ID NO.6)：
Figure BDA0001737860560000072
上述引物中，方框标注的区域为T7启动子序列。
5、合成GFP基因序列(SEQ ID NO.17)的双链DNA分子，以该合成的双链DNA分子为模板，用GFP-F和GFP-R组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
GFP基因序列(SEQ ID NO.17)：
ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGCTC。
6、取步骤5得到的PCR扩增产物，采用Ambion MEGAscriptT7High YieldTranscription Kit(产品目录号为AM1334)并按试剂盒说明书进行体外转录，由于GFP-F和GFP-R都具有T7启动子，体外转录形成两条反向互补的单链RNA分子，该两条反向互补的单链RNA分子自发形成双链RNA分子(即GFP dsRNA)。
实施例2重组质粒pMT-CG10032-V5-HisA的构建
1、提取果蝇的总RNA并反转录得到cDNA。
2、以步骤1得到的cDNA为模板，采用F1和R1引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。引物序列如下(下划线所示的序列代表酶切位点)：
F1(SEQ ID NO.7)：5’-AAGAAtctagaAATACCACAGATGGGCCCG-3’；
R1(SEQ ID NO.8)：5’-AAGAAgaattcTAGGACTTTTTCGATTGCAAGG-3’。
3、用限制性内切酶XbaI和EcoRI双酶切步骤2的PCR扩增产物，回收酶切产物。
4、用限制性内切酶XbaI和EcoRI双酶切质粒pMT/BiP/V5-HisA，回收约2400bp的骨架载体。
5、将步骤3得到的酶切产物和步骤4得到的骨架载体连接，得到重组质粒pMT-CG10032-V5-HisA。对重组质粒进行测序验证，测序结果表明：在质粒pMT/BiP/V5-HisA的XbaI和EcoRI酶切位点之间插入了如SEQ ID NO.2所示的CG10032基因序列，该CG10032基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4、借助转染试剂(Effectene Transfection Reagent，购自Qiagen，产品目录号为301425)并按说明书进行操作，将重组质粒pMT-CG10032-V5-HisA转入S2细胞，转染24h后用500mM浓度的Cu2+(以CuSO4的形式加入)诱导48h(即28℃静置培养)，收集上清液并采用Anti-V5鼠单克隆抗体(Anti-V5-tag mAb，购自MBL公司，产品目录号为M167-3)作为一抗进行蛋白质免疫印迹(Western blot)，结果如图1所示。
从图1可知：相对于对照组(empty vector，即pMT/BiP/V5-HisA)，重组质粒pMT-CG10032-V5-HisA可以检测到特异的阳性条带。
实施例3抑制CG10032基因表达的dsRNA促进水泡性口炎病毒复制的验证
1、将S2细胞分成实验组和对照组两组，借助转染试剂(Effectene TransfectionReagent，购自Qiagen，产品目录号为301425)并按说明书进行操作，将dsRNA(实验组：CG10032dsRNA，对照组：GFP dsRNA)转入S2细胞，转染72h后，感染水泡性口炎病毒(VSV)，感染复数为0.001。
2、完成步骤1的感染24天后，提取S2细胞的总RNA并反转录为cDNA，利用SYBR-GREEN方法检测S2细胞内的水泡性口炎病毒量(采用DmActin基因为内参)。
用于检测水泡性口炎病毒的引物对如下：
上游引物(SEQ ID NO.9)：5’-AATGACGATGAGACTATGCAATC-3’；
下游引物(SEQ ID NO.10)：5’-CACAAGTCACTCGTGACCATCT-3’。
用于检测DmActin基因的引物对如下：
上游引物(SEQ ID NO.11)：5’-CCCAAGGCCAACCGTGAGAA-3’；
下游引物(SEQ ID NO.12)：5’-CGGAGGCGTACAGCGAGAGC-3’。
S2细胞内的水泡性口炎病毒量见图2。
图2的结果表明：导入用于抑制CG10032基因表达的CG10032dsRNA后，S2细胞内的水泡性口炎病毒量出现明显上升，即抑制CG10032基因表达可以促进水泡性口炎病毒在S2细胞内的复制；因此，CG10032基因可以抑制水泡性口炎病毒在S2细胞内的复制。
实施例4抑制CG10032基因表达的dsRNA促进登革病毒复制的验证
1、将S2细胞分成实验组和对照组两组，借助转染试剂(Effectene TransfectionReagent，购自Qiagen，产品目录号为301425)并按说明书进行操作，将dsRNA(实验组：CG10032dsRNA，对照组：GFP dsRNA)转入S2细胞，转染72h后，感染登革热2型病毒(DENV-2)，感染复数为1。
2、完成步骤1的感染24h后，提取S2细胞的总RNA并反转录为cDNA，利用Taqman探针法方法检测S2细胞内的登革病毒量(采用DmActin基因为内参)。
用于检测登革热2型病毒的引物对如下：
上游引物(SEQ ID NO.13)：5’-CATTCCAAGTGAGAATCTCTTTGTCA-3’；
下游引物(SEQ ID NO.14)：5’-CAGATCTCTGATGAATAACCAACG-3’。
用于检测登革热2型病毒的探针如下：
5’-FAM-ATGCTGAAACGCGAGAGAAACCGC-TRAMA-3’。
用于检测DmActin基因的引物对如下：
上游引物(SEQ ID NO.11)：5’-CCCAAGGCCAACCGTGAGAA-3’；
下游引物(SEQ ID NO.12)：5’-CGGAGGCGTACAGCGAGAGC-3’。
S2细胞内的登革热2型病毒量见图3。
图3结果表明：导入用于抑制CG10032基因表达的CG10032dsRNA后，S2细胞内的登革病毒量出现明显上升，即抑制CG10032基因表达可以促进登革病毒在S2细胞内的复制；因此，CG10032基因可以抑制水泡性口炎病毒在S2细胞内的复制。
实施例5抑制CG10032基因表达的dsRNA促进果蝇C病毒复制的验证
1、将S2细胞分成实验组和对照组两组，借助转染试剂(Effectene TransfectionReagent，购自Qiagen，产品目录号为301425)并按说明书进行操作，将dsRNA(实验组：CG10032dsRNA，对照组：GFP dsRNA)转入S2细胞，转染72h后，感染果蝇C病毒(DCV)，感染复数为0.001。
2、完成步骤1的感染24h后，提取S2细胞的总RNA并反转录为cDNA，利用SYBR-GREEN方法检测S2细胞内的果蝇C病毒量(采用DmActin基因为内参)。
用于检测果蝇C病毒的引物对如下：
上游引物(SEQ ID NO.15)：5’-TCATCGGTATGCACATTGCT-3’；
下游引物(SEQ ID NO.16)：5’-CGCATAACCATGCTCTTCTG-3’。
用于检测DmActin基因的引物对如下：
上游引物(SEQ ID NO.11)：5’-CCCAAGGCCAACCGTGAGAA-3’；
下游引物(SEQ ID NO.12)：5’-CGGAGGCGTACAGCGAGAGC-3’。
S2细胞内的果蝇C病毒量见图4。
图4结果表明：导入用于抑制CG10032基因表达的CG10032dsRNA后，S2细胞内的果蝇C病毒量出现明显上升，即抑制CG10032基因表达可以促进果蝇C病毒在S2细胞内的复制；因此，CG10032基因可以抑制果蝇C病毒在S2细胞内的复制。
实施例6CG10032蛋白抑制水泡性口炎病毒复制的验证
1、实验组的处理
(1)借助转染试剂(Effectene Transfection Reagent:，购自Qiagen，产品目录号为301425)并按说明书进行操作，将重组质粒pMT-CG10032-V5-HisA转入S2细胞，转染24h后用500mM浓度的Cu2+(以CuSO4的形式加入)诱导48h(即28℃静置培养)，收集上清液。
(2)在步骤(1)得到的上清液中加入水泡性口炎病毒的病毒液，使水泡性口炎病毒的浓度为104Pfu/mL，28℃静置孵育2h。
(3)将2×106个细胞/mL的Vero细胞的细胞液铺6孔板，每孔2mL。
(4)将步骤(2)得到的溶液加入步骤(3)得到的6孔板，每孔1mL，37℃静置培养3h，然后更换DMEM完全培养基(购自Life Technology，产品目录号为11965-084)培养24h。
(5)完成步骤(4)后，吸弃上清，用pH＝7.4的PBS缓冲液清洗细胞一次，然后采用RNA抽提试剂盒(AxyPrep总RNA小量制备试剂盒，购自Axygen,产品目录号为AP-MN-MS-RNA-250)提取总RNA，然后采用逆转录试剂盒(iScript cDNA Synthesis Kit，购自Bio-Rad，产品目录号为170-8890)进行逆转录得到cDNA，以cDNA为模板，利用SYBR-GREEN法检测Vero细胞中水泡性口炎病毒的病毒量(采用DmActin基因为内参)。
用于检测水泡性口炎病毒的引物对如下：
上游引物(SEQ ID NO.9)：5’-AATGACGATGAGACTATGCAATC-3’；
下游引物(SEQ ID NO.10)：5’-CACAAGTCACTCGTGACCATCT-3’。
用于检测DmActin基因的引物对如下：
上游引物(SEQ ID NO.11)：5’-CCCAAGGCCAACCGTGAGAA-3’；
下游引物(SEQ ID NO.12)：5’-CGGAGGCGTACAGCGAGAGC-3’。
S2细胞内的水泡性口炎病毒量见图5。
2、对照组的处理
用空质粒pMT/BiP/V5-HisA代替重组质粒pMT-CG10032-V5-HisA，其它同步骤1。
3、结果分析
实验组和对照组中，Vero细胞中水泡性口炎病毒病毒的病毒量见图5(进行三次重复实验，每次重复实验中设置5个重复处理，结果取平均值)。图5的结果表明：加入CG10032蛋白后，Vero细胞内的水泡性口炎病毒的病毒量出现明显下降，即本实施例的CG10032蛋白可以抑制水泡性口炎病毒在Vero细胞中的复制。
从上述实施例可知：CG10032蛋白和/或CG10032基因具有显著抑制水泡性口炎病毒、登革热2型病毒和果蝇C病毒的功能，因此，其可以用于制备相关的抗病毒药物。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 深圳市疾病预防控制中心
<120> CG10032蛋白和/或CG10032基因的应用
<160> 17
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 217
<212> PRT
<213> 果蝇(Drosophila )
<400> 1
Met Arg Thr Phe Ser Ile Ala Arg Gly Leu Asn Cys Leu Asn Phe Ser
1               5                   10                  15
Gln Val Cys Asp Gly Leu Ala Asp Cys Lys Asp Cys Ser Asp Glu Asp
            20                  25                  30
Gly Thr Leu Cys Thr Ala Phe Arg Cys Leu Tyr Gly Ala Cys Val Ser
        35                  40                  45
Pro Asn Ala Leu Cys Asn His Ile Pro Asp Cys Leu Asp Gly Ser Asp
    50                  55                  60
Glu Met Ala Glu Lys Asp Val Lys Asn Ala Trp Lys Val Cys Arg Leu
65                  70                  75                  80
Glu Asp Pro Ser Lys Ser Leu Val Val Glu Asn Tyr Val Gly Gly Thr
                85                  90                  95
Thr Phe Gln Ser Thr Ala Phe Val Pro Asp Lys Thr Val Val His Leu
            100                 105                 110
Ser Cys Arg Asn Gly Tyr Ala Leu Ile Gly Glu Glu Lys Asn Ile Cys
        115                 120                 125
Asp Gln Asp Gln Cys Arg Tyr Pro Leu Ser Arg Cys Val Pro Gln Cys
    130                 135                 140
Lys His Val Gly Asn Leu Ser His Thr Arg Gln Cys Thr Leu Asn Gly
145                 150                 155                 160
Arg Pro Ile Asp Cys Asp Gln Ser Val Met Pro Met Gly Thr Leu Met
                165                 170                 175
Ser Val Thr Cys Ser Ser Gly Tyr Glu Lys Thr Gly Gly Asp Gly Leu
            180                 185                 190
Gln Phe Cys Asp Glu Thr Gly Ser Trp Val Val Ser Lys Lys Leu Pro
        195                 200                 205
Asn Cys Gly Pro Ile Cys Gly Ile Trp
    210                 215
<210> 2
<211> 654
<212> DNA
<213> 果蝇(Drosophila )
<400> 2
atgaggactt tttcgattgc aaggggtctg aactgtctga actttagtca ggtgtgcgat 60
ggattagcgg attgcaagga ctgcagcgac gaagacggca cactctgcac ggctttcaga 120
tgcctctacg gagcctgtgt tagtccgaat gcattgtgta atcacattcc cgattgccta 180
gatggctccg atgagatggc ggagaaggat gtcaaaaacg cttggaaagt gtgtcgacta 240
gaagaccctt caaaatctct ggtggtcgaa aactacgttg gtgggacaac ctttcaaagt 300
accgcctttg tgcccgataa gaccgtcgtc catctaagct gccgcaatgg atatgctctg 360
atcggcgagg agaagaacat ttgcgaccag gaccagtgtc gctatccatt gtccaggtgc 420
gtgccccaat gtaagcacgt gggtaatcta agccacacga ggcagtgcac cctgaatggt 480
cgtccgatag actgcgatca gtcggtgatg ccgatgggca ctctaatgtc ggtcacctgc 540
tcgtcggggt atgaaaaaac aggaggtgat ggtctgcagt tttgcgacga aaccggaagt 600
tgggtggttt ccaaaaagct gccaaactgc gggcccatct gtggtatttg gtag 654
<210> 3
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
taatacgact cactataggg gatgagatgg cggagaagga t 41
<210> 4
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
taatacgact cactataggg gaccatcacc tcctgttttt tca 43
<210> 5
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
taatacgact cactataggg gtgagcaagg gcgaggag 38
<210> 6
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
taatacgact cactataggg catgatatag acgttgtggc tgtt 44
<210> 7
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
aagaatctag aaataccaca gatgggcccg 30
<210> 8
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
aagaagaatt ctaggacttt ttcgattgca agg 33
<210> 9
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
aatgacgatg agactatgca atc 23
<210> 10
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
cacaagtcac tcgtgaccat ct 22
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
cccaaggcca accgtgagaa 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
cggaggcgta cagcgagagc 20
<210> 13
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
cattccaagt gagaatctct ttgtca 26
<210> 14
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
cagatctctg atgaataacc aacg 24
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
tcatcggtat gcacattgct 20
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
cgcataacca tgctcttctg 20
<210> 17
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac 60
ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac 120
ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc 180
ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag 240
cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc 300
ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg 360
gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac 420
aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac 480
ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc 540
gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac 600
tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc 660
ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagctc 720

Claims (7)

1.一种抑制CG10032基因表达的物质在制备促进病毒复制药物中的应用；其中，所述抑制CG10032基因表达的物质为抑制CG10032基因表达的dsRNA，所述CG10032基因的核酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述病毒为水泡性口炎病毒、登革热2型病毒和果蝇C病毒中的至少一种。
2.一种CG10032蛋白在制备抗病毒药物中的应用；其中，所述CG10032蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述病毒为水泡性口炎病毒。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述CG10032蛋白的制备方法包括：
构建含有SEQ ID NO.2所示序列的重组质粒；
将所述重组质粒转入宿主细胞中进行表达，得到所述CG10032蛋白。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，构建含有SEQ ID NO.2所示序列的重组质粒的步骤包括：
提取果蝇总RNA，然后反转录得到cDNA；
从所述cDNA中扩增得到SEQ ID NO.2所示序列；
将SEQ ID NO.2所示序列与骨架质粒载体连接，得到所述重组质粒。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，扩增SEQ ID NO.2所示序列的引物如SEQ IDNO.7和SEQ ID NO.8所示。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述骨架质粒载体为pMT/BiP/V5-HisA质粒。
7.一种抗病毒药物，其特征在于，所述抗病毒药物包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的CG10032蛋白，所述病毒为水泡性口炎病毒。
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