CN110732017A - Sp在制备用于治疗男性不育症的药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了P物质在制备用于治疗男性不育症的药物中的用途。本发明通过将P物质治疗无精子症小鼠模型，发现P物质可以有效地改善白消安所致无精子症小鼠模型的生精功能，并进一步证实了P物质通过促进生精细胞的增殖来改善生精功能；本发明为男性不育症的治疗提供了新的思路和理论支持。
Description
技术领域
本发明涉及SP(Substance P，P物质)在制备用于治疗男性不育症的药物中的用途。
背景技术
随着全球生育力下降问题的凸显，“男性生育力保护”已经成为世界范围内相关领域专家研究的热点问题。精子质量下降是男性生育力下降的重要原因。据WHO统计，精子质量下降影响了世界上7％的育龄男性，近40年间，精子浓度整体下降59.3％(请参见：Schlegel,P.N.(2009)Evaluation of male infertility.Minerva ginecologica 61,261-283；Levine,H.,Jorgensen,N.,Martino-Andrade,A.,Mendiola,J.,Weksler-Derri,D.,Mindlis,I.,Pinotti,R.,and Swan,S.H.(2017)Temporal trends in sperm count:asystematic review and meta-regression analysis.Hum Reprod Update 23,646-659；Walczak-Jedrzejowska,R.,Wolski,J.K.,and Slowikowska-Hilczer,J.(2013)The roleof oxidative stress and antioxidants in male fertility.Cent European J Urol66,60-67)。目前针对男性不育的药物治疗仍局限于抗氧化、改善细胞能量代谢、改善微循环等经验治疗，疗效欠佳。虽然辅助生殖技术作为治疗不孕不育的有效手段，但是越来越多的研究指出借助辅助生殖技术出生的儿童存在更高的出生缺陷风险(请参见：Hansen,M.,Kurinczuk,J.J.,Milne,E.,de Klerk,N.,and Bower,C.(2013)Assisted reproductivetechnology and birth defects:a systematic review and meta-analysis.Hum ReprodUpdate 19,330-353)以及长大后罹患心血管疾病的概率显著升高(请参见：Meister,T.A.,Rimoldi,S.F.,Soria,R.,von Arx,R.,Messerli,F.H.,Sartori,C.,Scherrer,U.,andRexhaj,E.(2018)Association of Assisted Reproductive Technologies WithArterial Hypertension During Adolescence.J Am Coll Cardiol 72,1267-1274)。随着社会人口老龄化进程加速，以及外部因素(如肿瘤化疗、放疗、环境污染等)对生育力的损害增多，男性不育患者日益增多。因此，探索恢复男性不育患者生育力的新治疗方法，成为了迫切需要解决的重大科学问题。
精子来源于精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)，在睾丸特殊微环境的精细调控下完成精原干细胞自我更新和分化，精母细胞减数分裂和精子形成等复杂过程，最终获得健康的精子，即精子发生(spermatogenesis)。精原干细胞和睾丸微环境的衰老和损害会引起精子质量的下降，进而导致男性不育。研究表明，人体内精子的生成及其质量也随年龄增加逐渐降低(请参见：Auger,J.,Kunstmann,J.M.,Czyglik,F.,andJouannet,P.(1995)Decline in Semen Quality among Fertile Men in Paris duringthe Past 20Years.332,281-285；Bonde,J.P.E.,Kold Jensen,T.,Brixen Larsen,S.,Abell,A.,Scheike,T.,Hjollund,N.H.I.,Kolstad,H.A.,Ernst,E.,Giwercman,A.,
N.E.,Keiding,N.,Olsen,J.J.S.J.o.W.,Environment,and Health.(1998)Year of birth and sperm count in 10Danish occupational studies.407-413；Stewart,A.F.,and Kim,E.D.(2011)Fertility concerns for the aging male.Urology78,496-499)。从35岁起精子总数开始下降，45岁后的男性使女性怀孕机会不到25岁男性的一半(请参见：Stone,B.A.,Alex,A.,Werlin,L.B.,and Marrs,R.P.(2013)Age thresholdsfor changes in semen parameters in men.Fertil Steril 100,952-958；Mathieu,C.,Ecochard,R.,Bied,V.,Lornage,J.,and Czyba,J.C.(1995)Cumulative conception ratefollowing intrauterine artificial insemination with husband's spermatozoa:influence of husband's age.Hum Reprod 10,1090-1097；Harris,I.D.,Fronczak,C.,Roth,L.,and Meacham,R.B.(2011)Fertility and the aging male.Rev Urol 13,e184-190)。此外，肿瘤放化疗也是导致男性不育，尤其是青少年男性不育的重要因素。随着肿瘤发病率逐年上升，青少年肿瘤患者亦逐年增多，但由于肿瘤放化疗等技术的进步，约80％的青少年肿瘤患者可获得长期存活(请参见：Ginsberg,J.P.,Carlson,C.A.,Lin,K.,Hobbie,W.L.,Wigo,E.,Wu,X.,Brinster,R.L.,and Kolon,T.F.(2010)An experimental protocolfor fertility preservation in prepubertal boys recently diagnosed withcancer:a report of acceptability and safety.Hum Reprod 25,37-41)。长期存活的青少年肿瘤患者中，罹患永久性无精子症和严重少精子症的比例高达24％(可参见：LópezAndreu,J.A.,Fernández,P.J.,Ferrís i Tortajada,J.,Navarro,I.,Rodríguez-Ineba,A.,Antonio,P.,Muro,M.D.,and Romeu,A.Persistent altered spermatogenesis inlong-term childhood cancer survivors.Pediatric hematology and oncology 17,21-30)。由于青春期前无成熟精子的肿瘤患者无法实现自体精子冻存，而睾丸组织和精原干细胞冻存尚处于动物实验阶段，目前针对这一群体的生育力保护手段近乎空白。
P物质(Substance P，SP)是世界上最早发现的一种神经肽，属于速激肽家族。近年来发现，P物质可动员多种内源性干细胞，并促进组织损伤修复，如脊髓、角膜、骨骼等(可参见：Yang,L.,Li,G.,Ye,J.,Lu,D.,Chen,Z.,Xiang,A.P.,and Jiang,M.H.(2017)SubstanceP enhances endogenous neurogenesis to improve functional recovery afterspinal cord injury.Int J Biochem Cell Biol 89,110-119；Hong,H.S.,Lee,J.,Lee,E.,Kwon,Y.S.,Lee,E.,Ahn,W.,Jiang,M.H.,Kim,J.C.,and Son,Y.(2009)A new role ofsubstance P as an injury-inducible messenger for mobilization of CD29(+)stromal-like cells.Nat Med 15,425-435；Zhang,Y.,An,S.,Hao,J.,Tian,F.,Fang,X.,and Wang,J.(2018)Systemic Injection of Substance P Promotes Murine CalvarialRepair Through Mobilizing Endogenous Mesenchymal Stem Cells.Scientificreports 8,12996)。P物质与男性生殖系统有着密切的关系：1)在小鼠和人的睾丸组织中，发现P物质表达于睾丸间质细胞(可参见：Chiwakata,C.,Brackmann,B.,Hunt,N.,Davidoff,M.,Schulze,W.,and Ivell,R.(1991)Tachykinin(substance-P)geneexpression in Leydig cells of the human and mouse testis.Endocrinology 128,2441-2448)；2)P物质可促进支持细胞分泌精子发生所需的乳酸和转铁蛋白(可参见：Rao,J.N.,Debeljuk,L.,and Bartke,A.(1995)Effects of tachykinins on the secretoryactivity of rat Sertoli cells in vitro.Endocrinology 136,1315-1318)；3)P物质可以调节精子的运动活力(可参见：Ravina,C.G.,Seda,M.,Pinto,F.M.,Orea,A.,Fernandez-Sanchez,M.,Pintado,C.O.,and Candenas,M.L.(2007)A role for tachykinins in theregulation of human sperm motility.Hum Reprod22,1617-1625)。以上研究结果表明：P物质很可能参与了生精微环境的调控，然而目前尚无P物质参与精子发生的相关报道。
发明内容
基于此，一方面，本发明提供了P物质在制备用于治疗男性不育症的药物中的用途。
在其中一个实施例中，所述男性不育症为无精子症或少精子症。
在其中一个实施例中，所述P物质通过改善生精功能来治疗男性不育症。
在其中一个实施例中，所述P物质通过促进生精细胞增殖来改善生精功能。
在其中一个实施例中，所述P物质作用于生精过程的有丝分裂阶段来促进生精细胞增殖。
在其中一个实施例中，所述P物质的使用浓度为1-100nM。
在其中一个实施例中，所述P物质的使用浓度为100nM。
另一方面，本发明还提供了一种药物组合物，其包括P物质及药学上可接受的载体。“药学上可接受的载体”包括任何和所有生理上相容的容积、分散介质、包衣料、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延缓剂等。药学上可接受的载体的实例包括水、盐水、磷酸缓冲盐水、右旋糖酐、甘油、乙醇等中的一个或多个以及它们的组合。在很多情况下，优选的是将等渗剂例如糖、多元醇或氯化钠包括在组合物中。本发明的药物组合物可以为多种形式。这些形式包括例如液体、半固体和固体剂型，如液体溶液剂(例如可注射和可输注溶液剂)、分散剂或混悬剂、片剂、丸剂、散剂、脂质体和栓剂。优选的形式取决于预定的给药方式和治疗应用。优选地，所述药物组合物的剂型是注射液或冻干制剂。典型的优选药物组合物为可注射或可输注溶液剂形式。优选的给药方式是胃肠外(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)给药。在一个优选的实施方案中，本发明的药物组合物通过静脉内输注或注射给予。在另一个优选的实施方案中，本发明的药物组合物通过肌肉内或皮下注射给予。还可将辅助性活性化合物掺入到组合物中，在某些实施方案中，可将本发明药物组合物与一种或多种可用于治疗男性不育的另外治疗药剂一起共配制和/或共给予。
又一方面，本发明还提供了以上所述的药物组合物在制备用于治疗男性不育症的药物中的用途。
基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：
本发明通过将P物质治疗无精子症小鼠模型，发现P物质可以有效地改善白消安所致无精子症小鼠模型的生精功能，并进一步证实了P物质通过促进生精细胞的增殖来改善生精功能。本发明为男性不育症的治疗提供了新的思路和理论支持。
附图说明
图1显示了P物质促进白消安无精子症模型的生精恢复；H&E染色显示了正常组、造模组和P物质治疗组的睾丸组织学形态。
图2显示了P物质促进生精细胞增殖；其中，图2A为睾丸组织中生精细胞DDX4和增殖标志物EdU共定位表达图；图2B为DDX4和EdU双阳性生精小管百分比统计图；图2C为每生精小管DDX4和EdU双阳性细胞数统计图。
图3显示了P物质增多精原细胞的数量；其中，图3A为对照组和P物质治疗组睾丸组织中精原细胞标志物ZBTB16、LIN28以及未分化精原细胞表达图；图3B为ZBTB16、LIN28、STRA8阳性生精小管百分比统计图；图3C为每生精小管ZBTB16、LIN28、STRA8阳性细胞数统计图；图3D显示了对照组和P物质治疗组睾丸组织中未分化精原细胞标志物Bcl16、ZBTB16、Gfra1基因表达情况；图3E显示了对照组和P物质治疗组睾丸组织中分化型精原细胞标志物Nanos3、Kit、spo11基因表达情况。
图4显示了P物质促进生精小管中生精细胞增殖，其中，图4A为不同浓度P物质(0、1、10、100uM)与生精小管共培养2天后的荧光染色照片：DDX4(红色)与EdU(绿色)；图4B为DDX4与EdU双阳性细胞密度统计图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照实施例对本发明进行更全面的描述，以下给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。应理解，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用试剂，均为市售产品。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
实施例1
1、白消安无精子症模型的建立与动物实验设计
往体重约25g的C57/BL6雄性小鼠腹腔注射白消安(按30mg/kg体重注射)；白消安提前按照白消安：DMSO：水＝20mg：5ml：5ml稀释好，配好即用。白消安处理后开始连续每周1次尾静脉注射P物质(按5noml/kg体重注射)，共10周，并进一步检测生精功能的变化。
2、生精小管分离培养
取3月龄C57BL/6雄性小鼠，颈椎脱臼处死，无菌条件下分离睾丸。用含1％双抗的PBS漂洗之后去除白膜，加入PBS，用吸管抽吸吹散小管，小管在PBS中自然沉降，静置去上清，重复4一5次，将小管挑至培养板中，以DMEM/F12为基础培养基,加入0.1％BSA、5mg/liter insulin，5mg/liter transferrin，5ug/liter sodium selenite的ITS。
3、体外共培养实验
将不同浓度(0、1、10、100nM)的P物质分别与生精小管共培养(设置时间梯度：分别为24h、48h、72h)，最后12h加入10μM EdU继续培养，然后对小管进行EdU染色观察生精小管内细胞增殖情况，同时与DDX4抗体进行免疫荧光染色共染，观察生精小管内生精细胞的增殖情况，分析P物质对生精细胞增殖能力及其数量变化。
4、免疫荧光染色
小鼠麻醉心脏灌注之后，分离睾丸组织，用PFA固定6小时，蔗糖梯度脱水过夜，等到脱水结束后取组织切开两半，进行冰冻切片。切片后放入烤箱烘烤20min，然后用PBS冲洗3次，每次5min。之后根据是否需要抗体进胞内选择是否穿透，穿透过程加0.2％Triton。最后用合适的封闭液(通常加山羊血清)进行封闭1h，再加入一抗四度过夜。第二天先PBS洗3次，每次5min，再加入二抗40min，PBS洗3次每次5min。最后加入DAPI 5min，最后洗2次后封片。通过共聚焦显微镜呈像。通过免疫荧光染色直观地观察睾丸组织中生精细胞的数量变化。
5、结果
5.1 P物质改善白消安所致的无精子症小鼠模型的生精功能
利用白消安建立小鼠无精子症模型，随之连续10周给予小鼠尾静脉注射P物质。造模10周后，对小鼠睾丸取材并进行HE染色，结果(如图1所示)显示：白消安造模后10周，小鼠睾丸明显萎缩，HE染色可见生精小管萎缩塌陷，生精上皮层数缺失；而P物质治疗组则部分恢复了生精小管的形态，80％以上的生精小管具有完整的生精上皮。以上数据说明P物质可以有效地改善白消安所致无精子症小鼠模型的生精功能。
5.2 P物质促进小鼠生精细胞的增殖
为进一步明确P物质是否通过促进生精细胞增殖来改善小鼠的生精功能，我们在最后一次注射P物质后连续7天腹腔注射EdU，并在最后一次EdU注射后取睾丸进行免疫荧光染色。结果(如图2所示)显示：P物质治疗明显提高了DDX4(生精细胞标志物)和EdU(增殖标志物)双阳性细胞，进一步说明P物质通过促进生精细胞的增殖来改善生精功能。
5.3 P物质治疗增多精原细胞数量
为进一步阐述P物质促进生精细胞增殖是源自精子发生具体哪一阶段，我们利用免疫荧光染色来对未分化型精原细胞标志物(ZBTB16和LIN28)、分化型精原细胞标志物(STRA8)进行染色。结果(如图3所示)显示：P物质明显增多未分化型和分化型精原细胞的数量；另外，荧光定量PCR结果显示：P物质治疗组小鼠睾丸中未分化型精原细胞标志物(Bcl16、ZBTB16、Gfra1)以及分化型精原细胞标志物(Nanos3、Kit、spo11)基因表达水平均显著性地高于对照组。以上数据提示P物质可作用于生精过程的有丝分裂阶段。
5.4 P物质体外促进生精小管的生精细胞增殖
利用小鼠生精小管体外培养的模型，我们进一步检测了P物质对于生精细胞的作用。经过不同浓度的P物质(0、1、10、100nM)处理后，我们检测生精细胞的增殖能力，结果(如图4所示)显示：随着P物质浓度的升高，DDX4和EdU双阳性细胞，即增殖的生精细胞数量显著提高，并在100nM具备最佳效果。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (9)
1.P物质在制备用于治疗男性不育症的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述男性不育症为无精子症或少精子症。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述P物质通过改善生精功能来治疗男性不育症。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述P物质通过促进生精细胞增殖来改善生精功能。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述P物质作用于生精过程的有丝分裂阶段来促进生精细胞增殖。
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述P物质的使用浓度为1-100nM。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述P物质的使用浓度为100nM。
8.一种药物组合物，其特征在于，包括P物质及药学上可接受的载体。
9.根据权利要求8所述的药物组合物在制备用于治疗男性不育症的药物中的用途。
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|---|---|---|---|---|
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1824289A (zh) * | 2004-10-27 | 2006-08-30 | 韩国原子力研究所 | P物质用于间充质干细胞的动员或增殖以及用于伤口愈合或促进伤口愈合的用途 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1824289A (zh) * | 2004-10-27 | 2006-08-30 | 韩国原子力研究所 | P物质用于间充质干细胞的动员或增殖以及用于伤口愈合或促进伤口愈合的用途 |
| CN108135965A (zh) * | 2016-04-07 | 2018-06-08 | 株式会社生物解决方案有限公司 | 用于伤口愈合的含p物质的药物组合物 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| B V SASTRY等: "Significance of substance P- and enkephalin-peptide systems in the male genital tract", 《COMPARATIVE STUDY》 * |
| C.G.RAVINA等: "A role for tachykinins in the regulation of human sperm motility", 《HUMAN REPRODUCTION》 * |
| LUCIANO DEBELJUK等: "Tachykinins and their possible modulatory role on testicular function: a review", 《INT J ANDROL》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114480618A (zh) * | 2022-01-12 | 2022-05-13 | 中山大学附属第一医院 | 一种用于预测男性生殖功能衰退的标志物及其应用 |
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