CN110724694B

CN110724694B - 一种水稻育性基因saw1及其应用

Info

Publication number: CN110724694B
Application number: CN201911192671.1A
Authority: CN
Inventors: 祝钦泷; 刘耀光; 陈乐天; 方瑞秋; 王斌; 陈法铭; 韩靖鸾
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: South China Agricultural University
Priority date: 2019-11-28
Filing date: 2019-11-28
Publication date: 2021-06-15
Anticipated expiration: 2039-11-28
Also published as: CN110724694A

Abstract

本发明公开了一种水稻育性基因SAW1及其应用。所述基因SAW1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。敲除所述基因SAW1可以使水稻花药败育，可以应用于不育系的创制和杂交种子制备。基于基因SAW1突变所产生的雄性不育系，育性稳定、不受环境条件影响，为构建新型杂交育种体系提供了必要的元件，具有很好的应用价值和前景。

Description

一种水稻育性基因SAW1及其应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域。更具体地，涉及一种水稻育性基因SAW1及其应用。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，它提供了世界人口约21％的能量摄入需求。我国不仅是世界水稻生产大国更是消费大国，我国大米的进口量不断增加，仅2015年单年进口量首次突破300万吨。目前我们正面临着如何在水稻种植面积基本不变或逐年下降的情况下提高水稻的总产量，保障粮食安全的严峻挑战。杂交育种是提高农作物产量的有效途径，杂交种在产量、抗逆性、品质等方面通常比普通种更具有明显的优势，杂交种的选育通常也比常规种选育周期短、见效快。目前杂交育种已经成为许多农作物的主要育种方法，作物雄性不育系的选育是杂交育种的关键环节。

为了解决目前细胞质不育系种质资源缺乏及光温敏不育性不稳定、制种成本高等技术瓶颈，科学工作者正在尝试利用新的杂交育种技术，这种技术将充分利用隐性细胞核不育基因，构建育性不受环境影响的稳定不育系，解除环境因素对杂交育种的制约，消除生产上的潜在风险。而且所利用的隐性核不育基因适用于绝大多数品种，使杂种优势资源利用大幅提高，解决杂种优势的资源利用问题。近年来，对于水稻细胞核不育的研究已经有较多成果。已报道有超过40个水稻雄性发育相关基因被克隆，如OsNP1、OsGAMYB、MTR1、UGP1等，这些参与水稻花粉发育的基因编码多种类型的蛋白，包括转录调控因子、信号转导蛋白、蛋白降解的调控因子和激素生物合成中的酶等。

因此，水稻育性相关基因的研究具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的水稻育性相关基因SAW1(SWOLLEN ANTHER WALL1)，该可影响水稻育性，在野生型水稻敲除该基因可产生不受光照及温度影响的水稻不育系。所得基因不育突变体可以应用于水稻育性调控的理论研究、不育系的创制和杂交种子制备等。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种水稻育性基因SAW1，其核苷酸序列如以下(1)、(2)或(3)所示：

(1)SEQ ID NO.1所示序列；

(2)在严格条件下与SEQ ID NO.1所示序列可以进行DNA分子杂交且编码相同蛋白的序列；

(3)与(1)或(2)所示序列具有90％以上相似性且编码植物育性相关蛋白的序列。

所述水稻育性基因SAW1编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在图位克隆所述基因SAW1过程中所涉及到的Indel引物(见表1)，皆为本实验需要而自行设计的引物，这些自行设计的引物也属于本发明的保护范围。

上述水稻育性基因SAW1与敲除后可以使水稻花药败育，其可以应用于不育系的创制和杂交种子制备。

因此，含有所述水稻育性基因SAW1的基因编辑载体也应属于本发明的保护范围。

所述水稻育性基因SAW1或所述基因编辑载体在改变水稻育性的植物育种中的应用也应属于本发明的保护范围。

同时提供了一种创制水稻雄性不育系的方法，抑制或沉默水稻育性基因SAW1的表达，获得不育植株。所述“突变”可以是点突变，也可以是DNA片段缺失或插入突变。所得水稻雄性不育系可用于杂交种子制备。

如可利用基因编辑技术，对水稻育性基因SAW1进行敲除突变，获得不育植株。具体优选的敲除突变的位点为SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22和/或SEQ ID NO.23。

具体地，作为一种可选择的优选方案：所述水稻雄性不育系的构建方法如下：

(1)突变靶点：在SAW1外显子对应的基因组区域选择3个靶点。这三个靶点具有共同的特征，3’端具有NGG(N为A、T、C、G任一碱基)。

(2)构建包含以上3个靶点的CRISPR/Cas9载体，即重组质粒pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1。(方法可参照pYLCRISPR/Cas9Pubi-H载体构建的方法(Ma et al.,2015,MolecularPlant 8，1274-1284))。

(3)用电击法将重组质粒pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1转化农杆菌(如农杆菌EHA105)，得到重组菌株pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1。

(4)将重组菌pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1转化水稻(如籼稻品种HHZ)获得SAW1基因敲除的转基因T₀代植株。(方法可为利用农杆菌侵染水稻成熟胚的遗传转化方法(Nishimura&Matsuoka,2006,Nature Protocols 1,2796-2802))。

(5)T₀代植株中选择得到水稻雄性不育系。

其中，优选地，步骤(1)中三个靶点的扩增引物对为：Primer1(SEQ ID NO.24)/Primer2(SEQ ID NO.25)、Primer3(SEQ ID NO.26)/Primer4(SEQ ID NO.27)、Primer5(SEQID NO.28)/Primer6(SEQ ID NO.29)。

步骤(2)中所述CRISPR/Cas9敲除载体的构建方法：在pYLCRISPR/Cas9Pubi-H载体的BsaI重组位点插入基因SAW1的靶点片段，得到重组质粒。

步骤(3)中转化所得重组菌提取质粒进行PCR及酶切鉴定，鉴定正确的重组菌株命名为pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1。

步骤(5)中对T₀代植株进行突变鉴定，具体是检测T₀代植株是否带有目的转基因，以及是否在靶点位置发生突变。

优选地，步骤(5)中检测T₀代植株是否带有转基因的PCR引物对为上游检测引物Primer7(SEQ ID NO.30)和下游检测引物Primer8(SEQ ID NO.31)。

检测T₀代植株是否在靶点位置发生突变的PCR引物对分别为：针对第一个靶点的上游引物Primer9(SEQ ID NO.32)和下游引物Primer10(SEQ ID NO.33)，针对第二个靶点的上游引物Primer11(SEQ ID NO.34)和下游引物Primer12(SEQ ID NO.35)，针对第三个靶点的上游引物Primer13(SEQ ID NO.36)和下游引物Primer14(SEQ ID NO.37)。

上述构建的CRISPR/Cas9敲除载体或含有所述敲除载体的重组菌也应属于本发明的保护范围。

另外，用于构建所述CRISPR/Cas9敲除载体的引物组也应在本发明保护范围之内，包括SEQ ID NO.24-29所示的引物对Primer1/Primer2、引物对Primer3/Primer 4、引物对Primer 5/Primer6。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一种水稻育性基因SAW1，敲除该基因可以使水稻花药败育，可以应用于不育系的创制和杂交种子制备。

基于基因SAW1突变所产生的雄性不育系，育性稳定、不受环境条件影响，为构建新型杂交育种体系提供了必要的元件。

附图说明

图1.野生型水稻品种黄华占(HHZ)和Co⁶⁰γ-ray辐射突变体saw1的抽穗期株型图。

图2.野生型黄华占(HHZ)和saw1突变体花药形态观察。

图3.野生型黄华占(HHZ)和saw1突变体花粉染色分析。

图4.SAW1的精细定位。

图5.SAW1候选基因结构及其突变体中片段倒位的结构图。

图6.在SAW1基因外显子上设计3个CRISPR/Cas9敲除靶点。

图7.野生型黄华占(HHZ)和saw1-ko植株3个CRISPR/Cas9敲除靶点测序峰图及其解码结果。

图8.野生型黄华占(HHZ)和saw1-ko抽穗期株型图。

图9.野生型黄华占(HHZ)和saw1-ko植株花药形态观察。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1、诱变筛选水稻雄性不育突变体(saw1)

籼稻品种黄华占(HHZ)通过Co⁶⁰γ-ray辐射诱变，筛选得到突变体saw1。

通过突变体saw1同野生型HHZ正反交实验证实，突变体saw1是一个雄性不育突变体。

取突变体saw1的即将开花的小花，利用镊子挤压花药后，1％的I₂-KI染色发现花粉出现典败。但是突变体saw1的株高、分蘖数、抽穗期和叶片数目同野生型HHZ一样(抽穗期株型如图1，花药形态如图2，花粉染色分析结果如图3)。

另外，经过在广州早季(长日照+高温)和晚季(短日照+低温)种植，突变体saw1的表型稳定，不受光照和温度的影响。

实施例2、水稻育性相关基因的获得

1、InDel标记连锁分析

以粳稻品种T65为父本，突变体saw1为母本杂交获得F₁，以及自交后的F₂分离群体(200株)。在F₂群体中挑选表型和突变体saw1极端相似10株突变体，利用其叶片提取DNA。

提取单株DNA的方法参照SDS微量抽提水稻DNA的方法(Zhou et al.,2016,Current Protocols in Plant Biology 1,29-42)。

利用覆盖水稻基因组的InDel标记进行连锁分析，初步发现控制水稻育性的基因存在于标记26621和28076之间。之后在26621和28076之间自行设计InDel标记，并用F₃大群体进一步精细定位，缩小定位区间，最终将目标基因缩小在标记26785和26819之间。依据公开的粳稻日本晴的基因组序列，该区段的距离大约为34kb(图4)。对该区间进行测序，发现该区段有一个倒位断裂点，涉及一个565kb片段的倒位(图5)。

上述InDel标记分析的具体方法如下所述：

(1)InDel引物设计：

对HHZ和T65在SAW1所在位置附近的部分区段进行测序，并进行比对，发现两者之间存在的SNPs，以这些SNPs为基础用Primer Premier 5.0软件设计InDel标记引物(见表1)。

表1用于基因定位的分子标记

(2)InDel标记分析的PCR反应体系：

DNA(20ng/μl)2μl，上游引物(10pmol/μl)2μl，下游引物(10pmol/μl)2μl，10×Buffer 2μl，dNTP(10mM)0.4μl，rTaq(5U/μl)0.4μl，加ddH₂O至20μl。PCR扩增程序：94℃3min；94℃30sec，55℃30sec，72℃30min，35个循环；72℃5min。PCR产物使用8％的变性PAGE胶分离，银染。

2、获得水稻花粉育性相关基因SAW1

测序发现该565kb片段的倒位的一个断裂连接点位于Os06g0638000基因的第一个外显子区域，破坏了该基因的编码区，因此确定该基因为水稻花粉育性相关基因SAW1，基因cDNA序列如SEQ ID NO.1所示(6207bp)，编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示(2068个氨基酸)。

实施例3、SAW1基因的敲除载体构建及转基因植株的获得与鉴定

(1)参照籼稻HHZ基因组的序列，在SAW1外显子对应的基因组区域选择3个靶点(图6)，这三个靶点具有共同的特征，3’端具有NGG(N为A、T、C、G任一碱基)。针对这三个靶点设计引物对：Primer1(SEQ ID NO.24)/Primer2(SEQ ID NO.25)、Primer3(SEQ ID NO.26)/Primer4(SEQ ID NO.27)、Primer5(SEQ ID NO.28)/Primer6(SEQ ID NO.29)。

参照pYLCRISPR/Cas9Pubi-H载体构建的方法(Ma et al.,2015,Molecular Plant8，1274-1284)构建包含以上3个靶点的CRISPR/Cas9载体pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1。用电击法将重组质粒pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1转化农杆菌EHA105菌株，得到重组菌株，提取质粒进行PCR及酶切鉴定。将PCR及酶切鉴定正确的重组菌株命名为pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1。利用农杆菌侵染水稻成熟胚的遗传转化方法(Nishimura&Matsuoka,2006,NatureProtocols 1,2796-2802)，将pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1转化籼稻品种HHZ获得SAW1基因敲除的转基因T₀代植株。

(2)利用SDS微量基因组DNA抽提方法提取上面获得的T₀代植株基因组DNA，以基因组DNA为模板，在pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1上Cas9蛋白的CDS区域设计上游检测引物Primer7(SEQ ID NO.30)和NOS终止子上设计的下游检测引物Primer8(SEQ ID NO.31)，利用Primer7和Primer8引物进行扩增检测T₀代植株是否带有转基因。PCR反应体系：DNA(20ng/μl)2μl，Primer7(10pmol/μl)2μl，Primer8(10pmol/μl)2μl，10×Buffer 2μl，dNTP(10mM)0.4μl，rTaq(5U/μl)0.4μl，加ddH₂O至20μl。PCR扩增程序：94℃3min；94℃30sec，55℃30sec，72℃1min，35个循环；72℃5min。

在SAW1基因对应的基因组序列的3个靶点位置上游和下游分别设计引物，针对第一个靶点的上游引物Primer9(SEQ ID NO.32)和下游引物Primer10(SEQ ID NO.33)，针对第二个靶点的上游引物Primer11(SEQ ID NO.34)和下游引物Primer12(SEQ ID NO.35)，针对第三个靶点的上游引物Primer13(SEQ ID NO.36)和下游引物Primer14(SEQ ID NO.37)。以上述T₀代植株基因组DNA为模板扩增，并Sanger测序检测不同靶点位置的突变。PCR反应体系：DNA(20ng/μl)2μl，上游引物(10pmol/μl)2μl，下游引物(10pmol/μl)2μl，10×Buffer2μl，dNTP(10mM)0.4μl，rTaq(5U/μl)0.4μl，加ddH₂O至20μl。PCR扩增程序：94℃3min；94℃30sec，55℃30sec，72℃1min，35个循环；72℃5min。测序结果见图7，利用CRISPR-GE在线工具对测序峰图解码(Liu et al.,2015,Molecular Plant 8:1431-1433；Xie et al.,2017,Molecular Plant 10:1246-1249)，发现不同的靶点都发生了缺失/插入造成的移码突变。

(3)分别将SAW1基因敲除的转基因T₀代植株、野生型HHZ和突变体saw1种植在华南农业大学水稻试验站，对开花后的花粉I₂-KI染色观察，pYLCRISPR/Cas9Pubi-SAW1的转基因植株的花粉同saw1突变体花粉都出现了典败(抽穗期株型如图8，花药形态如图9)。说明SAW1确实可以影响水稻育性。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 华南农业大学

<120> 一种水稻育性基因SAW1及其应用

<130>

<160> 37

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 6207

<212> DNA

<213> 花粉育性相关基因SAW1的cDNA序列

<400> 1

atggatccgc ctcccccgtt cgaccacccg ctccaccgcc gccactactc cgaccaccac 60

cacttccccc ccggcggaag cggaggcagc ggcggcgctg cttctgcggc tgcgcgctcc 120

aggtacgagt acggcggcgg cggcggcggc ggctacgagt cccactctca ccaccagtac 180

cacctccccg accaccacca ccaccaccac caccccccac cgcgcgtcca gcaccatcac 240

caccaccacc accagcagct gcccgcgcca acgccgcccc cgccgccgcc gcctcccctg 300

ccgcagcacc gcctcgagcc ccctcctcct cactacggct tccctccccg cggccatccc 360

gacgcctact cgccgccgcc gtaccacgac ccgtccccgc accaccacta ccatcgccac 420

gggggcgacg acttcctccc cgccgacgag atccgccgcg tcggtggtgg tcaccaccac 480

caccaccatc cgcagctgca acagcttctc ccgtgggagg aggctgagga agagaggcgc 540

cgctacggcg gcgccaccca gcagctccga ctatcgccgt ctggtcctcg gaaaaggcag 600

cgcggcgctg tgcacgacgc cgacgttgag agcacctcca gttctggccc gcctccccgc 660

cgccagaggc agcaacccca cccggactat gctctggatg atagttttgt agataggaac 720

aatgcccatc ctggttacat ggtccatgag ggcttctcaa tccacagtga tagcaaggtt 780

agcaggaaga tccagatgcc tacgcagatg gcactgcctg gctctcccca tggcacgagt 840

gctgggtatg cgaggcgagc cccacagaag gttgcccctt ctagagtgtc tgtgtggcac 900

cgaatcgagg agaaccctgc aatgtatgaa ccgtcttctc cgccgccgca tatgcctaag 960

gaggtgcacg tctcgccgtg caagtcgaac aatgttgctc ctgcttcgaa ggagttggcc 1020

agtgtgattt ctgtggattg tagagggaag agtgctgatg gtaatgatgg tgatagtaat 1080

acaggaacaa agaagaatcc tgtcaagaag aatgaaaagg tgttggcttc agtgcttgtg 1140

aagcctccaa tggagcccaa ggaaaaggaa gtggctgcta agaagatgct caagaaacct 1200

gataaggttc agaagaatgc agtgcattcc aatattagaa gtttggtctc aactccctgc 1260

cctggtgctg gtgcgaagaa agtgaagaag atagttataa aaaagattgt taggaagatc 1320

aatgggaaag gtaatcaaaa cagtaccccg gttgtctcag aaaagagaga tggtattgat 1380

gctaatgctt gtgagaaaga agagggtgag atcactacat catcttttga gaaggatgtt 1440

atttctgcac atgatccgat cgccgttagt gacacagctg gttttggtaa tgctgtaaat 1500

gatcagaagc aaaaaaacac caacttcaca aatccaagtg gaaggaatgc tgcttcagcc 1560

aatggatcta tggaaattcc cgatccacca aatggtagtg ggagtgcaca tcctggaaag 1620

gaagaggttc taagcccaaa gaatccagtt gataatagca atgcttcttt agtcgatgaa 1680

cctatagaag tgcttgagaa aagtgggact gagcatccta ggaaggagca tgatatgagc 1740

tctattggtt caggtgtaaa tgatgctttt gcagatgcga acaatcatac tcagaaggag 1800

gttggtgaaa tgaatgtcgc agttgcaatc aattctgtga gagtttctga tgcacgggaa 1860

gttcctaggt gtgatgattc cagcatggaa gagagcaaag tacctaagga tgtggatgca 1920

aacaatgctg tttgcatgga tggagttgct tctaattgtg atacaacaga agtctgtgga 1980

aatgaagatg caaggaggga atgtggaaaa aaattgattg gcataaatga cgagaaagct 2040

ttccttttaa acaattctgc cagaagttct agtacatctg atacttgcat gactgctgta 2100

gagggtgctc agaaaaaaga gggtataatt ctcactggtt caagtgaaaa gagcatcggc 2160

tttttaggtg attctgtggg aactcatagg acaacagaat ttggtgccag taaggatgcc 2220

cccaacgaag gagatgacat gccaagccat cctagtgaaa aggattttat gtcattgaac 2280

tcttgtggag gtcttaatta cacagaagtt agtgaaaagg aggatatcca ggagaaagag 2340

gacagagtac ccatggaatc aattgtagct tgtacttcta gtggaaatga ggacatacaa 2400

gtgaatgagg gcagaaaacc catggagtta agtgaagcta atgcttttag tggaagcggg 2460

gatagccaag gtaaagagtg tagaataccc atgggttcaa gtgaaacaaa tacatcttcc 2520

gtgaatcatg tgaatgcttc taatgaaaag gatttcagct tgagtgagga cacccagaag 2580

aaagagagcc acaggcccat agaatcatgt gaaaatacta cttttgaaat tatgcaccat 2640

gaagaagctc ctagtacaga agaggttatt acaggtgtgt cacttgggag aaaggtggct 2700

gaaggcccaa cgaggtcaaa tgaaagatgt tcaggtgcta gaggtaattc tgcaactact 2760

ttaaagtttg gtttagcttg tgcaactgag gataatcaga tggaagattt actcaacaat 2820

agaactgctt taaatgaaac agatgatcct cttgatgctg aggattcccc tgtgtttgtt 2880

cctccatctt ccagaaatgt agaaagtaca tatgcatcgc cattatatga tcctatggag 2940

gattctacca gtgatggtat tttgaatatt ggtttgggaa ggaacactac atctaaggca 3000

gcagaacttt tggatcttca tggagaccat atttcttctg agaatgattc tttgatacat 3060

tcccggggca cttcatctgt atctggtaac cgtgagcagt ctgtccctac agctttgaca 3120

cttggtagca atatctattt tagtagtgcg gaaactgatg atcggcctga ggaaagacat 3180

gagctagtag tggaaggtca gcaaggatta actgttgaga caacaagcaa acttgatagc 3240

cctggcaaaa tagaagtcct gaatggtgcg ggcttcatca gtacaggtat tcaaaattgg 3300

ctgagtttac ctccatcaat caacagcatg gagatgtctg ggcaatttct gaataatggt 3360

tttactgtta gtaagggtag gctaggttta gaccagagta tggatgatgc tacttcagtg 3420

agtcaggatc atgatattgc acaagatatg gaccagcgtg gaagtgagga tgctttcttt 3480

agtcaggatc acagcattag gttatgtggt agcaatttgc ctcattcaca tttgttggca 3540

cccaaagaga gcagcatgaa tggtgaggat cagagtggca ttgttctcac aggtttgcac 3600

cctattaatt cagtaaatgt tttaggtcac tatggttacc aaacagatga tattcctgtg 3660

gataacctga ataagcttcc ctcagcttta gaatcttctg atgctatgga tgcagatcaa 3720

gtttcttctc aggtatgcgt taatccagat cacaccaatg acagtaatac tgagaatgct 3780

ggggttgagt caaatgcaaa gcaggatctg ttgtcttctt ggattgaagc cattgtatca 3840

gaggctaaaa aggaacaccc accatacaag tccactccgc tcactgttgg cttgccagat 3900

aagttattag aaccaaagga cagcgacagg aaaacattac tggaaacagt ggtgccttct 3960

gcagtaaaat ctcctcagat aaattttgca agctcaacac tccaaaaggt agctcctaaa 4020

caagtaacat tgcctagttc atcccgagaa cccactcgag caaatcaaaa tgcaaggcac 4080

aggacatggc atcgtggcaa catagcatct tctagttcat ctttgcatgc ttcacagcct 4140

ttaggattac ccccaaaatt accacccaag aagaatgaca aagctcaaaa ctcttatata 4200

cggaaaggta atgctcttat tagaaatcca tcaaatggta atcatcctca ttcttctaca 4260

ggtcacgata ctcaaaataa gttgaataaa cctgtggtaa ggagaagcat gaactttgta 4320

aggaaagctg atacgaaaga cttagcaaat tctaacatct cagttgaaag acccaagacc 4380

cctcctttac cacttcacac aaaatccagc tgccctacaa cccttttgga gccattgtct 4440

caaactttgc agaaacagca tggtcatgat gctgaaaagg aggatctcac tgggcagcca 4500

aagtcaggcg ttgataactc aagcatcaaa agtgcacaaa aatctgaacc ctcggatcct 4560

agtaaagtgg tttatgttag gcccaaatca aaccaactgg ttgctgcaca gaggcaacac 4620

cctattgatt tagtcaacag tcccacagat aagattctgt ctctgcaggc acccatagca 4680

tctgatctat atttaaagaa aaggaaaaat caaattgttt tgagttcctg ctccccttct 4740

gatggtctga gtaccaaaga aacgttacct gctgagaatt caaattcaga agagaagaaa 4800

gatctaatga ttgcatgctc tatcagtggt atccctgggg taaaggacag accacaaaaa 4860

gctcttcaga caacaaataa tgtggggcgt ttctctcatg tgtggacact caatgggcaa 4920

cagccacaga ggaaaggttt tatgggcagt agtcatatga atgccttccc acgtatactt 4980

ccatggaaaa gaaaaatatt ctgcaagaat tttagaagca gtcacatgtc gaatgtgagc 5040

tccatacgaa ttgtcagaaa attgctgcaa acaaggaaga gagatatgat ttatactgtc 5100

tcaactgatg ggttctctct acggaaatct ggtgtgttaa gtgttggtgg atcaagtttg 5160

aaatggtcaa gatcccttga gaagcgttct caaaaggtca acaaggaagc tacattggca 5220

ctcgctgaag ttgaaagaag gaaaagggag aaacggaagc ggcagtctct ccatgataag 5280

ggagatcatc aatttgaatc tgtcactgac aatcaattaa gaaacagctg ccaatcgtct 5340

tccgattcga gaaagccatc gacttgcaat gaatatgtgc gcgttagcaa aggtaaccaa 5400

ctggttagaa atccgaagaa tgtaatccgc atgctagcaa gtgacaaagt tcgatggagt 5460

ttgcacactg tgagatcacg cctagcaaag aaacaacagt actgccaatt cttcactcgg 5520

tttggcgagt gcaaaaaacc caggggcaaa tgcccttata ttcatgaccg agctaaagtg 5580

actatatgta ctaaatttct taaaggattg tgttctaata ctagttgcaa actgactcac 5640

aaggtccttc cagaaagaat gccagattgt tcttattttc tgagaggact ctgtaccaac 5700

atagcctgcc cctataggca tgtgaaagtg aacttgaatg ctcctgtttg tgaagacttc 5760

ttaaaaggat attgtgcata tggtgacgag tgtcataaaa agcacagcta tgtatgtcct 5820

gtcttcgagg caactggaga gtgcccacaa ggatctagat gcaaacttca tcacccgaag 5880

agcaaagtca aatccaagag cagaagacca gatttcttgc aaaacagtag ttggggccgg 5940

tattttgatg ccagcattga ccatcaagat gagacaagga aagtttcttt agacgaagac 6000

gagagagaga aacctcaacg tgttttcact gatggggatt tgggctttat cagcttggat 6060

gatgatgcgg atgaagatgt tacagcttta gatgcgtcag atgatatacc gctgatggaa 6120

ttggactcgg gggatttaag tgtgcagact gataatcttg atgcactaat caagccactt 6180

cggatcatga gaacagcaag agtttga 6207

<210> 2

<211> 2068

<212> PRT

<213> 花粉育性相关基因SAW1的氨基酸序列

<400> 2

Met Asp Pro Pro Pro Pro Phe Asp His Pro Leu His Arg Arg His Tyr

1 5 10 15

Ser Asp His His His Phe Pro Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly

20 25 30

Ala Ala Ser Ala Ala Ala Arg Ser Arg Tyr Glu Tyr Gly Gly Gly Gly

35 40 45

Gly Gly Gly Tyr Glu Ser His Ser His His Gln Tyr His Leu Pro Asp

50 55 60

His His His His His His His Pro Pro Pro Arg Val Gln His His His

65 70 75 80

His His His His Gln Gln Leu Pro Ala Pro Thr Pro Pro Pro Pro Pro

85 90 95

Pro Pro Pro Leu Pro Gln His Arg Leu Glu Pro Pro Pro Pro His Tyr

100 105 110

Gly Phe Pro Pro Arg Gly His Pro Asp Ala Tyr Ser Pro Pro Pro Tyr

115 120 125

His Asp Pro Ser Pro His His His Tyr His Arg His Gly Gly Asp Asp

130 135 140

Phe Leu Pro Ala Asp Glu Ile Arg Arg Val Gly Gly Gly His His His

145 150 155 160

His His His Pro Gln Leu Gln Gln Leu Leu Pro Trp Glu Glu Ala Glu

165 170 175

Glu Glu Arg Arg Arg Tyr Gly Gly Ala Thr Gln Gln Leu Arg Leu Ser

180 185 190

Pro Ser Gly Pro Arg Lys Arg Gln Arg Gly Ala Val His Asp Ala Asp

195 200 205

Val Glu Ser Thr Ser Ser Ser Gly Pro Pro Pro Arg Arg Gln Arg Gln

210 215 220

Gln Pro His Pro Asp Tyr Ala Leu Asp Asp Ser Phe Val Asp Arg Asn

225 230 235 240

Asn Ala His Pro Gly Tyr Met Val His Glu Gly Phe Ser Ile His Ser

245 250 255

Asp Ser Lys Val Ser Arg Lys Ile Gln Met Pro Thr Gln Met Ala Leu

260 265 270

Pro Gly Ser Pro His Gly Thr Ser Ala Gly Tyr Ala Arg Arg Ala Pro

275 280 285

Gln Lys Val Ala Pro Ser Arg Val Ser Val Trp His Arg Ile Glu Glu

290 295 300

Asn Pro Ala Met Tyr Glu Pro Ser Ser Pro Pro Pro His Met Pro Lys

305 310 315 320

Glu Val His Val Ser Pro Cys Lys Ser Asn Asn Val Ala Pro Ala Ser

325 330 335

Lys Glu Leu Ala Ser Val Ile Ser Val Asp Cys Arg Gly Lys Ser Ala

340 345 350

Asp Gly Asn Asp Gly Asp Ser Asn Thr Gly Thr Lys Lys Asn Pro Val

355 360 365

Lys Lys Asn Glu Lys Val Leu Ala Ser Val Leu Val Lys Pro Pro Met

370 375 380

Glu Pro Lys Glu Lys Glu Val Ala Ala Lys Lys Met Leu Lys Lys Pro

385 390 395 400

Asp Lys Val Gln Lys Asn Ala Val His Ser Asn Ile Arg Ser Leu Val

405 410 415

Ser Thr Pro Cys Pro Gly Ala Gly Ala Lys Lys Val Lys Lys Ile Val

420 425 430

Ile Lys Lys Ile Val Arg Lys Ile Asn Gly Lys Gly Asn Gln Asn Ser

435 440 445

Thr Pro Val Val Ser Glu Lys Arg Asp Gly Ile Asp Ala Asn Ala Cys

450 455 460

Glu Lys Glu Glu Gly Glu Ile Thr Thr Ser Ser Phe Glu Lys Asp Val

465 470 475 480

Ile Ser Ala His Asp Pro Ile Ala Val Ser Asp Thr Ala Gly Phe Gly

485 490 495

Asn Ala Val Asn Asp Gln Lys Gln Lys Asn Thr Asn Phe Thr Asn Pro

500 505 510

Ser Gly Arg Asn Ala Ala Ser Ala Asn Gly Ser Met Glu Ile Pro Asp

515 520 525

Pro Pro Asn Gly Ser Gly Ser Ala His Pro Gly Lys Glu Glu Val Leu

530 535 540

Ser Pro Lys Asn Pro Val Asp Asn Ser Asn Ala Ser Leu Val Asp Glu

545 550 555 560

Pro Ile Glu Val Leu Glu Lys Ser Gly Thr Glu His Pro Arg Lys Glu

565 570 575

His Asp Met Ser Ser Ile Gly Ser Gly Val Asn Asp Ala Phe Ala Asp

580 585 590

Ala Asn Asn His Thr Gln Lys Glu Val Gly Glu Met Asn Val Ala Val

595 600 605

Ala Ile Asn Ser Val Arg Val Ser Asp Ala Arg Glu Val Pro Arg Cys

610 615 620

Asp Asp Ser Ser Met Glu Glu Ser Lys Val Pro Lys Asp Val Asp Ala

625 630 635 640

Asn Asn Ala Val Cys Met Asp Gly Val Ala Ser Asn Cys Asp Thr Thr

645 650 655

Glu Val Cys Gly Asn Glu Asp Ala Arg Arg Glu Cys Gly Lys Lys Leu

660 665 670

Ile Gly Ile Asn Asp Glu Lys Ala Phe Leu Leu Asn Asn Ser Ala Arg

675 680 685

Ser Ser Ser Thr Ser Asp Thr Cys Met Thr Ala Val Glu Gly Ala Gln

690 695 700

Lys Lys Glu Gly Ile Ile Leu Thr Gly Ser Ser Glu Lys Ser Ile Gly

705 710 715 720

Phe Leu Gly Asp Ser Val Gly Thr His Arg Thr Thr Glu Phe Gly Ala

725 730 735

Ser Lys Asp Ala Pro Asn Glu Gly Asp Asp Met Pro Ser His Pro Ser

740 745 750

Glu Lys Asp Phe Met Ser Leu Asn Ser Cys Gly Gly Leu Asn Tyr Thr

755 760 765

Glu Val Ser Glu Lys Glu Asp Ile Gln Glu Lys Glu Asp Arg Val Pro

770 775 780

Met Glu Ser Ile Val Ala Cys Thr Ser Ser Gly Asn Glu Asp Ile Gln

785 790 795 800

Val Asn Glu Gly Arg Lys Pro Met Glu Leu Ser Glu Ala Asn Ala Phe

805 810 815

Ser Gly Ser Gly Asp Ser Gln Gly Lys Glu Cys Arg Ile Pro Met Gly

820 825 830

Ser Ser Glu Thr Asn Thr Ser Ser Val Asn His Val Asn Ala Ser Asn

835 840 845

Glu Lys Asp Phe Ser Leu Ser Glu Asp Thr Gln Lys Lys Glu Ser His

850 855 860

Arg Pro Ile Glu Ser Cys Glu Asn Thr Thr Phe Glu Ile Met His His

865 870 875 880

Glu Glu Ala Pro Ser Thr Glu Glu Val Ile Thr Gly Val Ser Leu Gly

885 890 895

Arg Lys Val Ala Glu Gly Pro Thr Arg Ser Asn Glu Arg Cys Ser Gly

900 905 910

Ala Arg Gly Asn Ser Ala Thr Thr Leu Lys Phe Gly Leu Ala Cys Ala

915 920 925

Thr Glu Asp Asn Gln Met Glu Asp Leu Leu Asn Asn Arg Thr Ala Leu

930 935 940

Asn Glu Thr Asp Asp Pro Leu Asp Ala Glu Asp Ser Pro Val Phe Val

945 950 955 960

Pro Pro Ser Ser Arg Asn Val Glu Ser Thr Tyr Ala Ser Pro Leu Tyr

965 970 975

Asp Pro Met Glu Asp Ser Thr Ser Asp Gly Ile Leu Asn Ile Gly Leu

980 985 990

Gly Arg Asn Thr Thr Ser Lys Ala Ala Glu Leu Leu Asp Leu His Gly

995 1000 1005

Asp His Ile Ser Ser Glu Asn Asp Ser Leu Ile His Ser Arg Gly

1010 1015 1020

Thr Ser Ser Val Ser Gly Asn Arg Glu Gln Ser Val Pro Thr Ala

1025 1030 1035

Leu Thr Leu Gly Ser Asn Ile Tyr Phe Ser Ser Ala Glu Thr Asp

1040 1045 1050

Asp Arg Pro Glu Glu Arg His Glu Leu Val Val Glu Gly Gln Gln

1055 1060 1065

Gly Leu Thr Val Glu Thr Thr Ser Lys Leu Asp Ser Pro Gly Lys

1070 1075 1080

Ile Glu Val Leu Asn Gly Ala Gly Phe Ile Ser Thr Gly Ile Gln

1085 1090 1095

Asn Trp Leu Ser Leu Pro Pro Ser Ile Asn Ser Met Glu Met Ser

1100 1105 1110

Gly Gln Phe Leu Asn Asn Gly Phe Thr Val Ser Lys Gly Arg Leu

1115 1120 1125

Gly Leu Asp Gln Ser Met Asp Asp Ala Thr Ser Val Ser Gln Asp

1130 1135 1140

His Asp Ile Ala Gln Asp Met Asp Gln Arg Gly Ser Glu Asp Ala

1145 1150 1155

Phe Phe Ser Gln Asp His Ser Ile Arg Leu Cys Gly Ser Asn Leu

1160 1165 1170

Pro His Ser His Leu Leu Ala Pro Lys Glu Ser Ser Met Asn Gly

1175 1180 1185

Glu Asp Gln Ser Gly Ile Val Leu Thr Gly Leu His Pro Ile Asn

1190 1195 1200

Ser Val Asn Val Leu Gly His Tyr Gly Tyr Gln Thr Asp Asp Ile

1205 1210 1215

Pro Val Asp Asn Leu Asn Lys Leu Pro Ser Ala Leu Glu Ser Ser

1220 1225 1230

Asp Ala Met Asp Ala Asp Gln Val Ser Ser Gln Val Cys Val Asn

1235 1240 1245

Pro Asp His Thr Asn Asp Ser Asn Thr Glu Asn Ala Gly Val Glu

1250 1255 1260

Ser Asn Ala Lys Gln Asp Leu Leu Ser Ser Trp Ile Glu Ala Ile

1265 1270 1275

Val Ser Glu Ala Lys Lys Glu His Pro Pro Tyr Lys Ser Thr Pro

1280 1285 1290

Leu Thr Val Gly Leu Pro Asp Lys Leu Leu Glu Pro Lys Asp Ser

1295 1300 1305

Asp Arg Lys Thr Leu Leu Glu Thr Val Val Pro Ser Ala Val Lys

1310 1315 1320

Ser Pro Gln Ile Asn Phe Ala Ser Ser Thr Leu Gln Lys Val Ala

1325 1330 1335

Pro Lys Gln Val Thr Leu Pro Ser Ser Ser Arg Glu Pro Thr Arg

1340 1345 1350

Ala Asn Gln Asn Ala Arg His Arg Thr Trp His Arg Gly Asn Ile

1355 1360 1365

Ala Ser Ser Ser Ser Ser Leu His Ala Ser Gln Pro Leu Gly Leu

1370 1375 1380

Pro Pro Lys Leu Pro Pro Lys Lys Asn Asp Lys Ala Gln Asn Ser

1385 1390 1395

Tyr Ile Arg Lys Gly Asn Ala Leu Ile Arg Asn Pro Ser Asn Gly

1400 1405 1410

Asn His Pro His Ser Ser Thr Gly His Asp Thr Gln Asn Lys Leu

1415 1420 1425

Asn Lys Pro Val Val Arg Arg Ser Met Asn Phe Val Arg Lys Ala

1430 1435 1440

Asp Thr Lys Asp Leu Ala Asn Ser Asn Ile Ser Val Glu Arg Pro

1445 1450 1455

Lys Thr Pro Pro Leu Pro Leu His Thr Lys Ser Ser Cys Pro Thr

1460 1465 1470

Thr Leu Leu Glu Pro Leu Ser Gln Thr Leu Gln Lys Gln His Gly

1475 1480 1485

His Asp Ala Glu Lys Glu Asp Leu Thr Gly Gln Pro Lys Ser Gly

1490 1495 1500

Val Asp Asn Ser Ser Ile Lys Ser Ala Gln Lys Ser Glu Pro Ser

1505 1510 1515

Asp Pro Ser Lys Val Val Tyr Val Arg Pro Lys Ser Asn Gln Leu

1520 1525 1530

Val Ala Ala Gln Arg Gln His Pro Ile Asp Leu Val Asn Ser Pro

1535 1540 1545

Thr Asp Lys Ile Leu Ser Leu Gln Ala Pro Ile Ala Ser Asp Leu

1550 1555 1560

Tyr Leu Lys Lys Arg Lys Asn Gln Ile Val Leu Ser Ser Cys Ser

1565 1570 1575

Pro Ser Asp Gly Leu Ser Thr Lys Glu Thr Leu Pro Ala Glu Asn

1580 1585 1590

Ser Asn Ser Glu Glu Lys Lys Asp Leu Met Ile Ala Cys Ser Ile

1595 1600 1605

Ser Gly Ile Pro Gly Val Lys Asp Arg Pro Gln Lys Ala Leu Gln

1610 1615 1620

Thr Thr Asn Asn Val Gly Arg Phe Ser His Val Trp Thr Leu Asn

1625 1630 1635

Gly Gln Gln Pro Gln Arg Lys Gly Phe Met Gly Ser Ser His Met

1640 1645 1650

Asn Ala Phe Pro Arg Ile Leu Pro Trp Lys Arg Lys Ile Phe Cys

1655 1660 1665

Lys Asn Phe Arg Ser Ser His Met Ser Asn Val Ser Ser Ile Arg

1670 1675 1680

Ile Val Arg Lys Leu Leu Gln Thr Arg Lys Arg Asp Met Ile Tyr

1685 1690 1695

Thr Val Ser Thr Asp Gly Phe Ser Leu Arg Lys Ser Gly Val Leu

1700 1705 1710

Ser Val Gly Gly Ser Ser Leu Lys Trp Ser Arg Ser Leu Glu Lys

1715 1720 1725

Arg Ser Gln Lys Val Asn Lys Glu Ala Thr Leu Ala Leu Ala Glu

1730 1735 1740

Val Glu Arg Arg Lys Arg Glu Lys Arg Lys Arg Gln Ser Leu His

1745 1750 1755

Asp Lys Gly Asp His Gln Phe Glu Ser Val Thr Asp Asn Gln Leu

1760 1765 1770

Arg Asn Ser Cys Gln Ser Ser Ser Asp Ser Arg Lys Pro Ser Thr

1775 1780 1785

Cys Asn Glu Tyr Val Arg Val Ser Lys Gly Asn Gln Leu Val Arg

1790 1795 1800

Asn Pro Lys Asn Val Ile Arg Met Leu Ala Ser Asp Lys Val Arg

1805 1810 1815

Trp Ser Leu His Thr Val Arg Ser Arg Leu Ala Lys Lys Gln Gln

1820 1825 1830

Tyr Cys Gln Phe Phe Thr Arg Phe Gly Glu Cys Lys Lys Pro Arg

1835 1840 1845

Gly Lys Cys Pro Tyr Ile His Asp Arg Ala Lys Val Thr Ile Cys

1850 1855 1860

Thr Lys Phe Leu Lys Gly Leu Cys Ser Asn Thr Ser Cys Lys Leu

1865 1870 1875

Thr His Lys Val Leu Pro Glu Arg Met Pro Asp Cys Ser Tyr Phe

1880 1885 1890

Leu Arg Gly Leu Cys Thr Asn Ile Ala Cys Pro Tyr Arg His Val

1895 1900 1905

Lys Val Asn Leu Asn Ala Pro Val Cys Glu Asp Phe Leu Lys Gly

1910 1915 1920

Tyr Cys Ala Tyr Gly Asp Glu Cys His Lys Lys His Ser Tyr Val

1925 1930 1935

Cys Pro Val Phe Glu Ala Thr Gly Glu Cys Pro Gln Gly Ser Arg

1940 1945 1950

Cys Lys Leu His His Pro Lys Ser Lys Val Lys Ser Lys Ser Arg

1955 1960 1965

Arg Pro Asp Phe Leu Gln Asn Ser Ser Trp Gly Arg Tyr Phe Asp

1970 1975 1980

Ala Ser Ile Asp His Gln Asp Glu Thr Arg Lys Val Ser Leu Asp

1985 1990 1995

Glu Asp Glu Arg Glu Lys Pro Gln Arg Val Phe Thr Asp Gly Asp

2000 2005 2010

Leu Gly Phe Ile Ser Leu Asp Asp Asp Ala Asp Glu Asp Val Thr

2015 2020 2025

Ala Leu Asp Ala Ser Asp Asp Ile Pro Leu Met Glu Leu Asp Ser

2030 2035 2040

Gly Asp Leu Ser Val Gln Thr Asp Asn Leu Asp Ala Leu Ile Lys

2045 2050 2055

Pro Leu Arg Ile Met Arg Thr Ala Arg Val

2060 2065

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 26621上游引物

<400> 3

gatggtattt agatgcatgg t 21

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 26621下游引物

<400> 4

tgggagtctt atagagtagc 20

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 26713上游引物

<400> 5

cggggagatt ttgaccttgt cg 22

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 26713下游引物

<400> 6

agaacactcg ggaagattag tca 23

<210> 7

<211> 24

<212> DNA

<213> 26733上游引物

<400> 7

aaaaccaatt gctaatacgg tttg 24

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> 26733下游引物

<400> 8

tattgtaagg aaccgtgctt tc 22

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 26785上游引物

<400> 9

tcaatctctc atggctattg 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 26785下游引物

<400> 10

gcccgtgcag actcagctta 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 26819上游引物

<400> 11

tcaatctctc atggctattg 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 26819下游引物

<400> 12

gcccgtgcag actcagctta 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 27138上游引物

<400> 13

taaattcccg cagcaatgcg 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 27138下游引物

<400> 14

gtgagctgtt cgcacgagaa 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 27337上游引物

<400> 15

atgagcatgt tgaggattga 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 27337下游引物

<400> 16

tcgtcttcgg tggctcctac 20

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 27421上游引物

<400> 17

gtagtagtgc tagtagctta c 21

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 27421下游引物

<400> 18

ttgacggcta attttcgacc 20

<210> 19

<211> 21

<212> DNA

<213> 28076上游引物

<400> 19

cttcacctat atgaatggag c 21

<210> 20

<211> 21

<212> DNA

<213> 28076下游引物

<400> 20

caaacgacat gcacttatga c 21

<210> 21

<211> 29

<212> DNA

<213> 突变位点1基因组DNA

<400> 21

acagcttctc ccgtgggagg aggctgagg 29

<210> 22

<211> 28

<212> DNA

<213> 突变位点2基因组DNA

<400> 22

gtaaggatgc ccccaacgaa ggagatga 28

<210> 23

<211> 38

<212> DNA

<213> 突变位点3基因组DNA

<400> 23

gtttgtgaag acttcttaaa aggatattgt gcatatgg 38

<210> 24

<211> 23

<212> DNA

<213> Primer1

<400> 24

ggcacagctt ctcccgtggg agg 23

<210> 25

<211> 24

<212> DNA

<213> Primer2

<400> 25

aaaccctccc acgggagaag ctgt 24

<210> 26

<211> 22

<212> DNA

<213> Primer3

<400> 26

gccgtaagga tgcccccaac ga 22

<210> 27

<211> 23

<212> DNA

<213> Primer4

<400> 27

aaactcgttg ggggcatcct tac 23

<210> 28

<211> 23

<212> DNA

<213> Primer5

<400> 28

gttgtttgtg aagacttctt aaa 23

<210> 29

<211> 24

<212> DNA

<213> Primer6

<400> 29

aaactttaag aagtcttcac aaac 24

<210> 30

<211> 20

<212> DNA

<213> Primer7

<400> 30

ctgacgctaa cctcgacaag 20

<210> 31

<211> 25

<212> DNA

<213> Primer8

<400> 31

ccgatctagt aacatagatg acacc 25

<210> 32

<211> 20

<212> DNA

<213> Primer9

<400> 32

gtcccactct caccaccagt 20

<210> 33

<211> 20

<212> DNA

<213> Primer10

<400> 33

cgtaggcatc tggatcttcc 20

<210> 34

<211> 20

<212> DNA

<213> Primer11

<400> 34

gtttctgatg cacgggaagt 20

<210> 35

<211> 20

<212> DNA

<213> Primer12

<400> 35

ggttttctgc cctcattcac 20

<210> 36

<211> 20

<212> DNA

<213> Primer13

<400> 36

ggggcaaatg cccttatatt 20

<210> 37

<211> 20

<212> DNA

<213> Primer14

<400> 37

gcacctgatg ctgaattcct 20

Claims

1.一种水稻育性基因SAW1，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述水稻育性基因SAW1编码蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

3.用于敲除权利要求1所述水稻育性基因SAW1的基因编辑载体。

4.权利要求3所述基因编辑载体在敲除权利要求1所述水稻育性基因SAW1从而改变水稻育性的植物育种中的应用。

5.一种创制水稻雄性不育系的方法，其特征在于，敲除权利要求1所述水稻育性基因SAW1的表达，获得不育植株。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，利用基因编辑技术，对水稻育性基因SAW1进行敲除突变，获得不育植株。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，构建含有权利要求1所述基因SAW1的靶点序列的重组基因CRISPR/Cas9敲除载体，转化野生型水稻，对水稻的基因SAW1进行突变，获得不育系。

8.根据权利要求6或7所述方法，其特征在于，突变位点为SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22和/或SEQ ID NO.23。

9.权利要求7或8中构建的CRISPR/Cas9敲除载体或含有所述敲除载体的重组菌。

10.用于构建权利要求7或8中所述CRISPR/Cas9敲除载体的引物组，其特征在于，所述引物组包括SEQ ID NO.24-25所示的引物对Primer1/Primer2、SEQ ID NO.26-27所示的引物对Primer3/Primer 4、SEQ ID NO.28-29所示的引物对Primer 5/Primer6。