CN110714007A

CN110714007A - 人sting基因启动子抑制调控区域及其应用

Info

Publication number: CN110714007A
Application number: CN201910948703.XA
Authority: CN
Inventors: 徐华国; 陈海燕; 庞晓雨
Original assignee: Jiangsu Province Hospital First Affiliated Hospital With Nanjing Medical University
Current assignee: Jiangsu Province Hospital First Affiliated Hospital With Nanjing Medical University
Priority date: 2019-10-08
Filing date: 2019-10-08
Publication date: 2020-01-21
Anticipated expiration: 2039-10-08
Also published as: CN110714007B

Abstract

本发明公开了人STING基因启动子抑制调控区域及其应用。人STING基因启动子抑制调控区域如SEQ ID NO：1所示,第2033bp～第2154bp为STING基因启动子区主要抑制活性调控区段。人STING基因启动子活性抑制区域作为制备抑制STING及其他蛋白的药物作用靶点，通过导入该基因启动子活性抑制区域或促进其表达，降低人STING或其他蛋白的表达水平，从而在制备治疗STING相关疾病或其他疾病的药物中的应用；或者对人STING基因启动子活性抑制区域进行剪切或者任何可导致其抑制启动子活性作用失效的处理，提升STING的转录活性，从而在制备治疗或防御肿瘤、病毒感染性疾病的药物中的应用。

Description

人STING基因启动子抑制调控区域及其应用

技术领域

本发明属于基因表达调控领域，更具体地，涉及人STING基因启动子区抑制调控元件及其应用。

背景技术

2018年2月，世界卫生组织(WHO)官网公布了10种高危性传染性疾病，除X疾病目前不能明确病原体，其他均为病毒感染性疾病。DNA病毒与许多传染病及肿瘤相关，而且这种疾病往往是终生的，很难根除。在某些情况下，尤其是在儿童和免疫缺陷的患者中，这些病毒可导致致命性疾病。病毒感染已然成为严重威胁人类健康和生存的重要危险因素，引起了国际社会的普遍担忧和高度关注。但是，目前对这些病毒感染尚无特异性治疗方法。抗病毒天然免疫应答作为机体抵抗病毒入侵的第一道防线，在机体抵抗病毒过程中至关重要。寻找有效的抗病毒抗肿瘤预防和治疗作用靶点，已经成为当前抗病毒和抗肿瘤免疫研究的首要任务和关键所在。

脊椎动物不断受到微生物入侵的威胁，进化出了清除感染性病原体的免疫防御机制。在哺乳动物中，这种免疫系统由两个分支组成：先天性免疫和适应性免疫。天然免疫系统是第一道防线，由模式识别受体(PRRs)启动，检测病原体的配体以及损伤相关模式分子。越来越多的受体被发现，包括Toll样受体(TLRs)，C型凝集素受体，视黄酸诱导基因I(RIG-I)样受体和NOD样受体(NLRs)和dsDNA传感器^[1]。PRRs的激活导致参与炎症反应的基因上调，包括抑制病原体复制和促进适应性免疫的I型干扰素、促炎细胞因子和趋化因子^[2]。

STING是内质网(ER)中存在的跨膜蛋白，在介导胞质dsDNA识别中发挥关键作用,已被确定为胞浆核酸天然免疫应答的中枢信号分子。在此背景下，cGAS与dsDNA结合后产生2',3'-cGMP-AMP(以下简称cGAMP)，定位于内质网(ER)的跨膜蛋白STING作为cGAMP的第二信使受体^[6,7]，通过直接与cGAMP结合而被激活^[8]。此外，STING还可以作为环二核苷酸(CDNs)和小分子激动剂的模式识别受体发挥作用^[3]。对内源性或原核生物的CDNs的识别通过STING的羧基端结构域进行，该结构域朝向细胞质并形成由STING同源二聚体形成的V形结合袋^[9]。配体诱导STING活化触发其重新定位到高尔基体，这一过程对促进STING与TBK1的相互作用至关重要^[10]。这种蛋白复合物又通过转录因子IRF-3信号诱导I型干扰素(IFN)和其他共同调节的抗病毒因子^[1,11]。此外，还有研究表明STING可诱导NF-κB和MAP激酶的活化^[5]。在信号传导启动后，STING迅速降解，这一步骤被认为是终止炎症反应的重要步骤。STING的活化导致IRF3和NF-κB通路的上调，从而诱导IFN-β和促炎细胞因子的产生^[5]。IFN效应和炎症反应作为机体天然免疫反应帮助机体抵御病毒入侵，也促进了适应性免疫的产生。反转录病毒感染导致的疾病，像HIV感染引起的AIDS病和HBV、HCV感染引起的病毒性肝炎严重影响着人们的健康，而且目前的治疗手段无法达到根治，因此STING被认为是必不可少的抗菌宿主防御，最近的研究表明cGAS-STING通路还具有抗肿瘤的作用。但是STING具有两面性，其过度激活也是一些疾病的诱因。STING的过度激活与单基因自身炎症状态的一个子集有关，即所谓的I型干扰素病^[12]。这些疾病的例子包括一种被称为婴儿期发病的STING相关血管病变(SAVI)的临床综合征，该综合征由TMEM173(STING的基因名称)的功能获得性突变引起^[13]。而且，STING与AGS和系统性红斑狼疮的发病机制有关，核酸代谢失调是AGS持续天然免疫激活的基础^[14]，这与SAVI完全相反。除了这些遗传性疾病，新出现的证据表明STING在一系列炎症相关疾病如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和癌症中具有更普遍的致病作用^[15]。因此，抑制STING信号通路在治疗多种疾病方面具有显著的潜力。

启动子是转录控制元件，定位在有效连接编码序列5’末端的转录起始位点附近。它调节例如编码多肽的核酸转录为前mRNA的核酸的量，控制有效连接的核酸的转录，进而调控蛋白质的表达水平，蛋白质的表达是活细胞中的基本过程。启动子转录调控为蛋白质表达调控的重要一环，所以，STING基因的启动子抑制调控区域的阐明对抗病毒和抗肿瘤的治疗和预防至关重要，可作为具有治疗作用的药物靶点。

目前，尚未见到有关STING基因启动子抑制调控区域的研究报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足提供人STING基因启动子抑制调控区域。

本发明的另一目的是提供人STING基因启动子抑制调控区域的应用。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

人STING基因启动子活性抑制区域，包含SEQ ID NO：1中第2056bp～第2154bp所示的人STING基因启动子抑制调控区域的关键序列或其互补序列，该区段位于人STING基因5’末端上游+169～+267共99bp的片段，SEQ ID NO：1中第1888bp为转录起始位点,即为+1。

所述的人STING基因启动子活性抑制区域，优选核苷酸序列选自以下任意一种：

(1)SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，

(2)SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列中发生一处或多处点突变，但依然具备人STING基因启动子活性抑制功能的核苷酸序列。

本发明所述的人STING基因启动子活性抑制区域作为治疗靶点在制备抗病毒、抗肿瘤药物，或调控STING或其他蛋白表达的药物中的应用。

所述的应用优选，所述的人STING基因启动子活性抑制区域作为制备抑制STING及其他蛋白的药物作用靶点，通过导入该所述的人STING基因启动子活性抑制区域或促进其表达，降低人STING或其他蛋白的表达水平，从而在制备治疗STING相关疾病或其他疾病的药物中的应用；或者对所述的人STING基因启动子活性抑制区域进行剪切或者任何可导致其抑制启动子活性作用失效的处理，提升STING的转录活性，从而在制备治疗或防御肿瘤、病毒感染性疾病的药物中的应用。

所述的STING相关疾病是指由STING蛋白表达量或其活性的变化所致的疾病。

一种载体，该载体含有本发明所述的人STING基因启动子活性抑制区域。

该载体优选还含有所述的启动子区转录抑制区域可操作的连接的外源基因。

一种宿主细胞，它含有本发明所述的载体，所述的宿主细胞是不具遗传功能的哺乳动物细胞。

本发明所述的人STING基因启动子活性抑制区域构建在含有人STING基因启动子或其他基因启动子的重组表达载体中的应用。

本发明提供确定STING 5’启动子活性抑制区域及其重组质粒的构建方法。为了获得本发明的人STING基因启动子抑制区域的序列片段，如在下述实施所详细描述的，对人STING基因的启动子预测区进行不同长度的缺失，将序列长度不同的片段，插入到pGL3-Basic载体中，得到一系列表达质粒。然后利用萤火虫荧光素酶报告基因，检测这些质粒在细胞中的转录活性，锁定抑制调控核心区域，对该核酸序列进行剪切可提升STING的转录活性，结果如图3所示。随后将抑制核心区域序列正向和反向亚克隆至pGL3-Control和本课题组构建的人cGAS启动子载体上，检测这些质粒在细胞中的转录活性。结果如图6、8显示上述两种具有启动子活性的质粒均被该片段所抑制。为减少细胞培养微环境所造成的误差，以表达海肾荧光素酶的质粒pRL-TK作为内参照，与上述质粒共同转染细胞，测定萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶的酶活性，用二者的比值，即相对荧光素酶活性表示启动子转录活性。经过多次实验结果验证：+169～+267之间即SEQ ID NO：1中第2056bp～第2154bp所示的核苷酸序列区段为STING基因抑制调控启动子区段，该区段也可能具有广泛地抑制其他基因转录活性的作用。该核酸序列或者载体可作为制备抑制STING及其他蛋白的药物作用靶点，降低人STING或其他蛋白的表达水平，作为治疗STING相关疾病或其他疾病的一种技术手段。另一方面，对其进行剪切或者任何可导致抑制作用失效的处理可提升STING的转录活性，对肿瘤和病毒感染性疾病的治疗和防御具有重要意义。

有益效果：

在研究人STING基因的调控机制上，本发明首次发现了人STING基因启动子活性抑制区域，并确定了人STING基因启动子抑制调控区域的关键序列。本发明首次将上述具有抑制启动子活性的序列正向反向装入多种具有启动子活性的载体中，证实该段序列的抑制作用与方向性无关，并且对多种基因的转录活性具有抑制作用。目前的STING拮抗剂与激动剂一般是与STING蛋白竞争性抑制，具有一定的局限性；本发明发现并克隆的人STING基因启动子活性抑制区域,能够抑制STING基因启动子活性,从而抑制位于其后的STING基因或其他目的基因的转录,达到降低人STING蛋白或其他目的蛋白表达的目的。通过对人STING基因启动子活性抑制区域的过表达或剪切，可以实现对STING基因或该STING基因启动子活性抑制区域后目的基因表达的负向或正向调控。所以本发明具有重要意义，对今后进一步深入研究抗病毒抗肿瘤的药物至关重要，也为某些目前难以治疗的疾病提供一种新的治疗手段。

附图说明

图1为STING 5-1a与Genebank中的目的基因序列对比图；

图2为STING 5-2a缺失突变体与STING 5-1a的序列对比图；

图3为STING 5-1a和STING 5-2a转染至A549细胞中相对荧光素酶活性分析结果，证实STING 5-2a较之STING 5-1a缺失的片段具有抑制人STING启动子活性的作用；

图4为STING核心抑制片段正向构建的重组报告质粒的酶切鉴定及测序结果；

图5为STING核心抑制片段反向构建的重组报告质粒的酶切鉴定及测序结果；

图6将STING核心抑制片段正向、反向插入pGL3-Control载体中，在HEK293T及HEPG2细胞中相对荧光素酶活性分析结果，证实该区域具有抑制转录活性的作用；

图7为cGAS启动子载体质粒示意图；

图8将STING核心抑制转录活性片段正向、反向亚克隆至cGAS启动子质粒，在HEK293T及HEPG2细胞中相对荧光素酶活性分析结果，证实该区域具有抑制cGAS启动子活性的作用；

图9为pGL3-Basic载体质粒图谱；

图10为pGL3-Control载体质粒图谱。

具体实施方式

实施例1构建STING 5’端启动子活性抑制区域重组质粒及其缺失突变体确定抑制STING 5’端启动子活性关键区域

1.待对数生长期的HEK293T细胞长至九成满的时候提取基因组DNA。

2.利用Oligo 7软件设计一对引物。KpnⅠ和BglⅡ酶切位点分别装入上游和下游引物中。引物序列如下：

表1

3.以HEK293T细胞的全基因组DNA作为模板，加入上述引物，使用EXtaq(Takara,Japan)作为聚合酶配置PCR体系，克隆不同长度STING基因启动子抑制区域的片段。条件如下：预变性95℃5min，变性95℃30s，退火58-62℃30s，延伸72℃2min。变性、退火、延伸三个步骤循环30次。72℃彻底延伸5min。所得PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳条带与目的片段大小相似，对PCR产物纯化切胶回收。

4.用限制性内切酶Kpn I和Bgl II对纯化产物和pGL3-Basic质粒进行双酶切，37℃水浴锅反应1小时。用1％的琼脂糖凝胶电泳对上述PCR扩增片段进行核酸电泳实验，切胶回收。纯化后的带粘性末端的目的片段和载体质粒用T4 DNA连接酶4℃连接过夜。

将大肠放置于冰上10min，将10μL的连接产物和200μL的DH5α大肠杆菌混匀后，冰上孵育5min，42℃水浴90s，再冰浴5min。加入800μL LB液体培养基，置于摇床中200rpm，37℃培养45min。菌液经short短暂离心5min，余200μL进行重悬。取100μL菌液和10μL浓度为50μg/ml的氨苄青霉素涂布于LB平板上。平板倒置放入37℃孵箱过夜。第二天收取平板，挑取阳性单克隆至5ml加入5μL氨苄青霉素的LB液体培养基中，进行菌落扩增。然后按照质粒小提试剂盒说明书的步骤提取目的质粒，将获得的质粒送至擎科公司测序，测序引物为表1中的引物。用APE软件将测序结果与Genebank中的目的基因序列进行对比，对比结果如图1和2，对比结果初步证明质粒构建成功。STING 5-1a质粒的插入片段为SEQ ID NO：1中-124～+267中的序列，STING 5-2a质粒的插入片段为SEQ ID NO：1中-124～+168的序列。

5.将1×10⁵个/ml的A549细胞接种至48孔板上。16-20小时左右，待细胞长至6-7成满，进行转染，体系配制如下：

1)A液配制：2.5μg/μL的Renilla 1μL，200ng重组质粒、pGL3-Basic质粒或pGL3-Control质粒，用Opti-MEM补足至25μL，室温下静置5min。

2)B液配制：1μL Lipofectamine^TM 2000，用Opti-MEM补足至25μL。

3)A、B液充分混匀之后，静置15min，加入48孔板中。4复孔每孔加入50μL体系，置孵箱培养24h收细胞。

6.吸弃培养基，用1×PBS洗涤细胞两次。每孔加入100μL稀释过的1×PassiveLysis Buffer，置微量振荡器上震荡30min，离心后收集上清。打开Berthold FB12Luminometer单管式化学发光仪，同时打开软件，用空的1.5ml EP管进行校正。吸取10μL上清至1.5ml EP管中，加入20μL平衡至室温的荧光素酶检测试剂A液，充分混匀后放入检测池。关闭仓门后仪器自动读取荧光值，记为Net A。检测完毕后，立即取出EP管，加入荧光素酶检测试剂B液，混匀后检测Net B的值。仪器读取数据后自动给出相对荧光素酶的值(RLU)。如图3中显示STING 5-2a的转录活性比STING 5-1a高10倍以上，差异具有统计学意义，该结果说明STING 5-2a较之STING 5-1a缺失的片段具有抑制STING启动子活性的作用，把该具有抑制作用的片段命名为STING 5-1b，为SEQ ID NO：1中+169～+267中的序列。

实施例2人STING启动子活性抑制序列的片段正向反向亚克隆至pGL3-Control载体，并检测其抑制转录活性的作用

1.利用Oligo 7软件设计一对引物。HindⅢ酶切位点分别装入上游或者下游引物中。

引物序列如下：

表2

2.以STING 5-1a质粒的DNA作为模板，加入上述引物，使用EXtaq(Takara,Japan)作为聚合酶配置PCR体系，克隆正向和反向的STING基因启动子抑制区域的片段。所得PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳条带与目的片段大小相似，对PCR产物纯化切胶回收。将PCR产物及pGL3-Basic质粒(图6)进行单酶切反应，酶切产物切胶回收，利用T4连接酶进行连接构建重组报告质粒。转化大肠杆菌后挑取单克隆进行菌落扩增及质粒小提，将获得的质粒进行测序验证。经酶切鉴定及测序结果(图4、图5)表明质粒构建成功。

3.将上述测序成功的质粒转染至HEK293T和HEPG2细胞中。将转染24h后的HEK293T和HEPG2细胞用1×PBS洗涤一次，去尽残液，加入100ul新鲜配制的1×PLB,室温下，在微量振荡器上振荡30min以裂解细胞。取10ul上述细胞裂解液加入20ul荧光素酶检测试剂A液，测定荧火虫荧光素酶活性，再向同EP管中加入20ul新鲜的荧光素酶检测试剂B液，混匀，测定海肾荧光素酶(内参)活性，计算出两种荧光素酶活性比值，即相对荧光素酶活性，每次结果重复4次。

4.结果如图6显示pGL3-Control STING 5-1b中的人STING基因5'上游+169～+267的抑制片段，无论是正向序列的载体还是反向序列载体转染至HEK293T和HEPG2细胞中，均可导致pGL3-Control质粒的启动子活性的下降，其降低倍数在10倍以上，差异具有统计学意义。实施例3将抑制核心区域序列正向和反向亚克隆至cGAS启动子质粒载体，检测转录活性

如实施例2所述将人STING抑制调控区域同样正向、反向亚克隆至cGAS启动子质粒(图7示意图，前期课题组已证明该质粒有启动子活性)。然后进行双荧光素酶活性检测。如图8结果显示：与对照组pGL3-Basic相比，当人STING基因5'上游+169～+267的抑制调控区域构建在具有启动子活性的cGAS启动子质粒时，也可以抑制cGAS转录活性。

综上所述，该序列可以抑制人STING基因启动子活性，也可能具有广泛地抑制其他基因转录活性的作用，可以用于探讨人STING基因的转录调控机制，作为制备抑制STING及其他蛋白的药物靶点，降低人STING或其他蛋白的表达水平，在治疗STING相关疾病或其他疾病上具有重要的应用价值。另一方面，对该片段进行剪切或者任何可导致其抑制作用失效的处理可提升STING的转录活性，对肿瘤和病毒感染性疾病的治疗和防御具有重要意义。

[1]Liu S,Cai X,Wu J,Cong Q,Chen X,Li T,et al.Phosphorylation ofinnate immune adaptor proteins MAVS,STING,and TRIF induces IRF3activation.Science.2015；347(6227):aaa2630.

[2]Motwani M,Pesiridis S,Fitzgerald KA.DNA sensing by the cGAS-STINGpathway in health and disease.Nat Rev Genet.2019.

[3]Diner EJ,Burdette DL,Wilson SC,Monroe KM,Kellenberger CA,Hyodo M,et al.The innate immune DNA sensor cGAS produces a noncanonical cyclicdinucleotide that activates human STING.Cell Rep.2013；3(5):1355-61.

[4]Ishikawa H,Ma Z,Barber GN.STING regulates intracellular DNA-mediated,type I interferon-dependent innate immunity.Nature.2009；461(7265):788-92.

[5]Abe T,Barber GN.Cytosolic-DNA-mediated,STING-dependentproinflammatory gene induction necessitates canonical NF-kappaB activationthrough TBK1.J Virol.2014；88(10):5328-41.

[6]Dobbs N,Burnaevskiy N,Chen D,Gonugunta VK,Alto NM,Yan N.STINGActivation by Translocation from the ER Is Associated with Infection andAutoinflammatory Disease.Cell Host Microbe.2015；18(2):157-68.

[7]Zhang X,Shi H,Wu J,Zhang X,Sun L,Chen C,et al.Cyclic GMP-AMPcontaining mixed phosphodiester linkages is an endogenous high-affinityligand for STING.Mol Cell.2013；51(2):226-35.

[8]Ergun SL,Fernandez D,Weiss TM,Li L.STING Polymer Structure RevealsMechanisms for Activation,Hyperactivation,and Inhibition.Cell.2019；178(2):290-301 e10.

[9]Huang Y-H,Liu X-Y,Du X-X,Jiang Z-F,Su X-D.The structural basis forthe sensing and binding of cyclic di-GMP by STING.

[10]Zhao B,Du F,Xu P,Shu C,Sankaran B,Bell SL,et al.A conservedPLPLRT/SD motif of STING mediates the recruitment and activation ofTBK1.Nature.2019；569(7758):718-22.

[11]Tegtmeyer PK,Spanier J,Borst K,Becker J,Riedl A,Hirche C,etal.STING induces early IFN-beta in the liver and constrains myeloid cell-mediated dissemination of murine cytomegalovirus.Nat Commun.2019；10(1):2830.

[12]Benmerzoug S,Ryffel B,Togbe D,Quesniaux VFJ.Self-DNA Sensing inLung Inflammatory Diseases.Trends Immunol.2019；40(8):719-34.

[13]Liu Y,Jesus AA,Marrero B,Yang D,Ramsey SE,Sanchez GAM,etal.Activated STING in a vascular and pulmonary syndrome.N Engl J Med.2014；371(6):507-18.

[14]Jeremiah N,Neven B,Gentili M,Callebaut I,Maschalidi S,StolzenbergMC,et al.Inherited STING-activating mutation underlies a familialinflammatory syndrome with lupus-like manifestations.J Clin Invest.2014；124(12):5516-20.

[15]Li Y,James SJ,Wyllie DH,Wynne C,Czibula A,Bukhari A,et al.TMEM203is a binding partner and regulator of STING-mediated inflammatory signalingin macrophages.Proc Natl Acad Sci U S A.2019.

序列表

<110> 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院）

<120> 人STING基因启动子抑制调控区域及其应用

<160> 9

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2154

<212> DNA

<213> 人类(homines)

<400> 1

aacccagcct cgcccgtctg tctagattct tcttggcctc tctgagcgtg tgttccttct 60

ttctgagtgt ggggcagggc cctctctgga agggggattt tataatctac actcaaacaa 120

tgtaggtcag accttccctt cccttccctt cccttccctt ccttcctttc tctctctctc 180

tttttctttc tttcttctct tttttttttt tttgagacgg agttttgctc ttgtcgccca 240

ggctggagtg caatggcacg atctcggctc agtgcaacct ccgcctccca ggttcaagca 300

gttctcctgc ctcagcctcc caagaagctg ggattacagg catgcgccat cacgcccagc 360

taattttttg tatttttagt agagatgggg tttctccatg ttggtcagga tggtcttgaa 420

ctcctgacct caggtgatct gcctgccttg gcctcccaaa ttgctgggat tataggagtg 480

agccactgca cccggccttt tttttttttt tttttgagat ggagtttgac tcttgttgcc 540

gaggctggag tgcagtggca tgatctcggc tcaccgcaag ctccgcctcc tgggttcaag 600

cgattctcct gcctcagcct cctgagtagc tgggattata ggcacccgcc accacgccca 660

gcgaattttt tgtactttta gtagagatgg ggtttcacta tgttggccag gctggtctcg 720

aactcctgac ctcaagtgat ccatttgcct tggcctccca aagtgcgagg attacaagga 780

tgagccattg cgcctggcct attttttttt tttttttttt gagatagggt atcactctgt 840

cacttaggct ggagtgcagt ggtgccatca caactcactg caacctctac ctccaggggt 900

caagtgatgc tcccacctca gcctcccaag tagctgggac tataggcgtg ttccgtcatg 960

cttggctaat tttttttttt tttttttgta gagatgggat ctccctgtgt tgcttaggct 1020

ggtctcaaac ttctgggctc aagtgatcct cctgccttgg cctcccaaag tgctgggatt 1080

actggaatga aatcaaggca cagagcaagc tgggctttgg agcaacccac caggcttcaa 1140

gtccccactc tcaattactt aaaccagtta tttcacctcc ctgagcctcg gattatccat 1200

ctataaaatg gggctagaat tatacctacc tgacagggtg gctggtgaaa tgatatacaa 1260

gtgaagtgat atatgcaaca cttggcataa tgtctggaac aaggtaaaca ctttattatt 1320

attattatta ttataattta ggttgatgca tggggatttt ataacctaca ctcaaacaat 1380

gtaggtcaga tcatttttct tttcttttct tttcttttct tttgagacag tctcgctctt 1440

gttgcccagg ctggagtgca gtggcctaat ctctgctcac tgcaacttcc acctctcagg 1500

ttccagcgat tctcctgcct cagcctccca agtagctaag attacaagcg cccaccacca 1560

cgcctggcta atttttgttt ttagtagaga tggggtttca ccatgttgct caggctggtc 1620

ttgaactcct gacctcaagt gatccaccca tctcggcctc ccaaagcgct gggattacag 1680

gcatgagcca ctgtgccagg cctgcaatta cttttgctcc tacctaatat catccccaca 1740

accgccttct gggcagaaac cggcaggctc tcttggagaa gtcacaggcg tggccatttc 1800

ctgcaaagag ccaaaccccc attcctctgt gcccctcctc tcccaccaag tgctttataa 1860

aaatagctct tgttaccgga aataactgtt catttttcac tcctccctcc taggtcacac 1920

ttttcagaaa aagaatctgc atcctggaaa ccagaagaaa aatatgagac ggggaatcat 1980

cgtgtgatgt gtgtgctgcc tttggctgag tgtgtggagt cctgctcagg tgttaggtac 2040

agtgtgtttg atcgtggtgg cttgagggga acccgctgtt cagagctgtg actgcggtga 2100

gtgtttctaa acacccttgg tttgggggta gcaaagggca atggaatgga ggct 2154

<210> 2

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

cggggtaccc aggctctctt ggagaagtca ca 32

<210> 3

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ggaagatcta gcctccattc cattgccctt tg 32

<210> 4

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

cggggtaccc aggctctctt ggagaagtca ca 32

<210> 5

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ggaagatcta cgatcaaaca cactgtacct aa 32

<210> 6

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

aagcttttag gtacagtgtg ttgatcgt 28

<210> 7

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

aagcttagcc tccattccat tgccctttg 29

<210> 8

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

aagctttcgg aggtaaggta acgggaaac 29

<210> 9

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

aagcttatcc atgtcacaca aactagca 28

Claims

1.人STING基因启动子活性抑制区域，其特征在于包含SEQ ID NO：1中第2056bp～第2154bp所示的人STING基因启动子抑制调控区域的关键序列或其互补序列。

2.根据权利要求1所述的人STING基因启动子活性抑制区域，其特征在于其核苷酸序列选自以下任意一种：

(1)SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，

3.权利要求1或2所述的人STING基因启动子活性抑制区域作为治疗靶点在制备抗病毒、抗肿瘤药物，或调控STING或其他蛋白表达的药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于权利要求1或2所述的人STING基因启动子活性抑制区域作为制备抑制STING及其他蛋白的药物作用靶点，通过导入该基因或促进其表达，降低人STING或其他蛋白的表达水平，从而在制备治疗STING相关疾病或其他疾病的药物中的应用；或者对权利要求1或2所述的人STING基因启动子活性抑制区域进行剪切或者任何可导致其抑制启动子活性作用失效的处理，提升STING的转录活性，从而在制备治疗或防御肿瘤、病毒感染性疾病的药物中的应用。

5.一种载体，其特征在于，该载体含有权利要求1或2所述的人STING基因启动子活性抑制区域。

6.根据权利要求5所述的载体，其特征在于，该载体还含有所述的启动子区转录抑制区域可操作的连接的外源基因。

7.一种宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求5或6所述的载体，所述的宿主细胞是不具遗传功能的哺乳动物细胞。

8.权利要求1所述的人STING基因启动子活性抑制区域构建在含有人STING基因启动子或其他基因启动子的重组表达载体中的应用。