CN110669105B - 长效多肽构建及其抗急性肾损伤和糖尿病并发肾病的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及多种化学修饰长效多肽及制备急性肾损伤或糖尿病并发肾病药物的应用，属于生物药学领域。第一序列：SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的任意一个氨基酸上修饰谷氨酸，谷氨酸与脂肪酸连接；第二序列：SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的任意一个氨基酸上修饰谷氨酸，谷氨酸与水溶性聚合物连接；第三序列：SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的任意一个氨基酸上修饰脂肪酸，脂肪酸与谷氨酸连接，谷氨酸与赖氨酸连接；第四序列：所述第三序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列N端通过丁二酰连接。本发明中化学修饰长效多肽能够显著增强与受体APJ的结合能力，明显缓解缺血再灌注损伤引起的肾功能紊乱，缓解糖尿病引起的糖尿病并发肾病，明显缓解肾脏的肾小管坏死、炎症和纤维化。

Description

长效多肽构建及其抗急性肾损伤和糖尿病并发肾病的应用
技术领域
本发明属于生物技术药物领域，具体涉及多种长效多肽构建及其抗急性肾损伤和糖尿病并发肾病的应用。
背景技术
急性肾损伤是一种在全球有高死亡率的疾病，其肾小管细胞缺血或者受到毒性损伤造成肾功能的急剧下降。急性肾损伤是造成终期肾脏疾病的重要原因之一。全球每年1.33亿人发生急性肾损伤并且大约每年造成200万人死亡，并且死亡人数还在逐年增加。
肾脏的缺血再灌注损伤是造成急性肾损伤的最主要原因，并在全球很高的死亡率。肾脏缺血再灌注的病理过程包括炎症的发生和凋亡的出现。有效的抑制炎症因子和凋亡能够保护急性的肾脏缺血再灌注损伤。现在的医疗技术还没有比较有效的手段进行治疗，常以肾脏替代疗法延长肾病患者的生存期，所以寻找缓解肾脏缺血再灌注损伤的药物迫在眉睫。
糖尿病可导致多种并发症，对肾脏、眼、心脏和血管等多种器官造成慢性损害、引起器官功能障碍甚至衰竭。糖尿病肾脏疾病属于糖尿病微血管病变，是糖尿病患者致残致死的主要原因之一，也是引起终末期肾病的最常见原因。糖尿病肾病在糖尿病患者中发病率非常高，如欧美糖尿病肾病患病率高达30～40％，而我国社区2型糖尿病患者中肾病患病率也达10％～40％。糖尿病肾病按病程可分为四级，即肾小球基质膜增厚、系膜中度或重度扩张、至少一个肾小球基质中存在结节硬化以及晚期糖尿病肾小球硬化。此外，微量白蛋白尿和肾小球滤过率改变也是糖尿病肾病的重要病理特征。目前多数治疗糖尿病肾病药物主要都是通过降糖、降压等间接作用手段，能有效治疗或减缓糖尿病肾病的药物很少，迫切需要找到新的有效药物或疗法。
发明内容
本发明解决了现有技术中多肽与受体结合能力弱以及半衰期短的技术问题。提供了多种经过长效化学修饰的多肽及其在制备急性肾损伤和糖尿病并发肾病药物中的应用。本发明所述的化学修饰后的多肽能够缓解肾脏的缺血再灌注损伤和糖尿病并发肾病。由此解决现有技术对急性肾损伤和糖尿病肾病缺乏有效治疗手段的技术问题。
按照本发明的第一方面，提供了一种修饰多肽，含有如下第一序列或第二序列所示的序列；
所述第一序列为：SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的任意一个氨基酸上修饰谷氨酸，所述谷氨酸还与脂肪酸连接；
所述第二序列为：SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的任意一个氨基酸上修饰谷氨酸，所述谷氨酸还与水溶性聚合物连接。
优选地，所述脂肪酸为棕榈酸、硬脂酸或辛酸。
优选地，所述水溶性聚合物为聚乙二醇。
按照本发明的另一方面，提供了一种修饰多肽，含有如下第三序列所示的序列；
所述第三序列为：SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的任意一个氨基酸上修饰脂肪酸，所述脂肪酸还与谷氨酸连接，所述谷氨酸还与赖氨酸连接。
优选地，所述第三序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列通过丁二酰连接。
所述第四序列为：所述第三序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列通过丁二酰连接，表现出多有效作用位点与其相应受体结合的特征。
优选地，所述脂肪酸为棕榈酸、硬脂酸或辛酸。
按照本发明的另一方面，提供了任一所述的修饰多肽用于制备治疗急性肾损伤或糖尿病并发肾病药物的应用。
按照本发明的另一方面，提供了一种治疗急性肾损伤或糖尿病并发肾病的药物组合物，包含任一所述的修饰多肽和药学上可接受的赋形剂。
按照本发明的另一方面，提供了一种所述的药物组合物的制备方法，包括将任一所述的修饰多肽与至少一种药学上可接受的赋形剂混合。
总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：
(1)本发明经过长效化学修饰的多肽延长了血浆半衰期和增强了和受体的结合能力。本发明发现SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列修饰后的第一序列优选地为Pal-E11肽、修饰后的第二序列优选地为PEG-E11肽、修饰后的第三序列优选地为K(pal)-E11肽和修饰后的第四序列优选地为Dimer-E11肽。第一序列、第二序列、第三序列和第四序列都极大了增强了和APJ受体的结合能力，且显著地延长了第一序列、第二序列、第三序列和第四序列在血浆中的半衰期，特别是第四序列表现出多作用位点可与其相应受体结合的特征。
(2)本发明经过长效化学修饰的多肽及其在治疗急性肾损伤和糖尿病并发肾病中的应用。本发明发现SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列(E11肽)、修饰后的第一序列优选地为Pal-E11肽和修饰后的第二序列优选地为PEG-E11肽可以抑制C57BL/6小鼠肾脏缺血再灌注损伤引起的炎症、纤维化和细胞坏死，对急性肾损伤有明显保护作用，其中以Pal-E11和PEG-E11肽效果尤为显著。而且，在C57BL/6小鼠肾脏缺血再灌注损伤后不同时间点，SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列(E11肽)修饰后的第一序列优选地为Pal-E11肽均能显著性抑制肾脏的病理病变，说明Pal-E11肽对肾脏缺血再灌注损伤具有良好的治疗效果。
另外，E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能有效抑制棕榈酸刺激引起的肾脏细胞的脂质积累和甘油三酯含量，故本发明的E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽可以为制备治疗急性肾损伤和糖尿病肾病药物奠定了基础，为开发出更有效的急性肾损伤和糖尿病并发肾病治疗药物提供了新思路。
(3)本发明中经过长效化学修饰的多肽对肾功能的影响。本发明发现SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列(E11肽)、修饰后的第一序列优选地为Pal-E11肽和修饰后的第二序列优选地为PEG-E11肽可以缓解C57BL/6小鼠肾脏缺血再灌注损伤引起的肾功能紊乱，抑制上升的尿素氮和肌酐水平的上升。
附图说明
图1是本发明的E11肽、K(pal)-E11肽、Pal-E11肽、PEG-E11肽和Dimer-E11肽给药后尿素氮的测试；
图2是本发明的E11肽、K(pal)-E11肽、Pal-E11肽、PEG-E11肽和Dimer-E11肽给药后肌酐的测试；
图3本发明的E11肽、K(pal)-E11肽、Pal-E11肽、PEG-E11肽和Dimer-E11肽给药后肾脏病理切片的相关染色测试；
图4是本发明的E11肽、K(pal)-E11肽、Pal-E11肽、PEG-E11肽和Dimer-E11肽给药后坏死相关蛋白测试；
图5本发明的Pal-E11肽在肾脏缺血再灌注损伤后不同时间点给药后肾脏病理切片的相关染色测试；
图6是本发明的E11肽、Pal-E11肽、PEG-E11肽抑制棕榈酸刺激引起的细胞脂质积累的相关染色测试。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
一种修饰多肽，具有如下第一序列或第二序列所示的序列；所述第一序列为：SEQID NO:1所示的氨基酸序列的任意一个氨基酸上修饰谷氨酸，所述谷氨酸与脂肪酸连接；所述脂肪酸优选地为棕榈酸、硬脂酸或辛酸；
所述第二序列为：SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的任意一个氨基酸上修饰谷氨酸，所述谷氨酸与水溶性聚合物连接；所述水溶性聚合物为聚乙二醇；
所述第一序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有与第一序列同等活性的由第一序列衍生的序列，或者所述第二序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有与第二序列同等活性的由第二序列衍生的序列。
一种修饰多肽，具有如下第三序列或第四序列所示的序列；所述第三序列为：SEQID NO:1所示的氨基酸序列的任意一个氨基酸上修饰脂肪酸，所述脂肪酸与谷氨酸连接，所述谷氨酸与赖氨酸连接；所述脂肪酸为棕榈酸、硬脂酸或辛酸；
所述第四序列为：所述第三序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列通过丁二酰连接，表现出多作用位点可其相应受体结合的特征。
本发明中的氨基酸指天然氨基酸、非天然氨基酸和修饰的氨基酸，除非与此相反地规定，否则一般性或以名称具体指出的任何氨基酸都包括D和L立体异构体，如果其结构允许这样的立体异构体形式。天然氨基酸包括丙氨酸(Ala)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、精氨酸(Arg)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、赖氨酸(Lys)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和缬氨酸(Val)。非天然氨基酸包括但不限于高赖氨酸、高精氨酸、氮杂环丁烷甲酸、2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、β-丙氨酸、氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基异丁酸、3-氨基异丁酸、2-氨基庚二酸、叔丁基甘氨酸、2,4-二氨基异丁酸、锁链素、2,2’-二氨基庚二酸、2,3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、高脯氨酸、羟赖氨酸、别羟赖氨酸、3-羟脯氨酸，4-羟脯氨酸、异锁链素、别-异亮氨酸、N-甲基缬氨酸、萘丙氨酸、正缬氨酸、正亮氨酸、乌氨酸、戊基甘氨酸、2-吡啶酸和硫代脯氨酸。其它的非天然氨基酸包括修饰的氨基酸残基，其可逆或不可逆地被化学封闭，或在其N端氨基或其侧链基团上被化学修饰，例如其中侧链官能团被化学修饰为另一个官能团的N-甲基化D和L氨基酸或残基。例如，修饰的氨基酸包括甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸砜。天冬氨酸的一种修饰氨基酸--天冬氨酸-(β甲酯)、丙氨酸的一种修饰氨基酸--丙氨酸甲酰氯或甘氨酸的一种修饰氨基酸--N-乙基甘氨酸。
针对多肽的修饰还可包括小分子取代基，例如短烷基和约束烷基(例如支链、环状、融合、金刚烷基)和芳基。水溶性聚合物分子或脂肪酸链可以直接位于多肽氨基酸序列的N端，也可以直接位于多肽氨基酸序列的C端，也可以通过第一序列和第二序列中原有的Cys，Arg的侧链，或在序列的N端，C端或任意位置插入的Cys，Arg，Lys，Glu，Asp，γGlu，γAsp的侧链引入。
多肽的C末端如果游离，既可以为羧酸，也可以酰胺化。如果是酰胺化的C末端，既可以是普通的酰胺(-CONH2)，也可以是羧酸与甲胺、二甲胺、乙胺，1-丙氨、哌啶、吗啉、苄氨等伯胺或仲胺缩合而成的酰胺。
多肽的生产采用化学肽合成技术，主要为多肽固相合成技术。多肽采用RP-HPLC，C18色谱柱进行纯化。
本发明的多肽应用于制备治疗急性肾损伤和糖尿病并发肾病的药物。
本发明的多肽通过与至少一种药学上可接受的赋形剂混合制备得到药物组合物。
作为其中的一种优选，本发明设计和构建如下的序列：SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列为E11肽；修饰的第一序列优选地为Pal-E11肽；修饰的第二序列优选地为PEG-E11肽；修饰的第三序列优选地为K(pal)-E11肽；修饰的第四序列优选地为Dimer-E11肽，序列如表1所示。
表1多肽的氨基酸序列
Figure GDA0002908360840000061
Figure GDA0002908360840000071
式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ分别是本发明的E11多肽、Pal-E11多肽、PEG-E11多肽、K(pal)-E11多肽和Dimer-E11多肽的化学结构图。
Figure GDA0002908360840000072
Figure GDA0002908360840000081
Figure GDA0002908360840000091
本发明实施例中使用的C57BL/6小鼠购买于湖北动物中心，本发明的E11肽、K(pal)-E11肽、Pal-E11肽、PEG-E11肽和Dimer-E11肽按照标准的固相多肽合成步骤合成。
本发明的E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能缓解肾脏缺血再灌注引起的炎症因子上调、炎症细胞浸润；能够减少肾脏缺血再灌注引起的细胞凋亡；能缓解肾脏缺血再灌注引起的肾脏形态的恶化和纤维蛋白的沉积。本发明的E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能下调棕榈酸刺激的肾脏细胞内脂质积累和甘油三酯含量。
实施例1
本发明所用多肽的固相合成和纯化方法。
将1g Fmoc-rink AM resin(载样量0.3mmol/g)于10mL DMF中溶胀4小时，移去DMF，加入含有20％哌啶的DMF，室温震荡反应45min，移除Fmoc保护基团。用DMF清洗脱保护的树脂，去除残余的哌啶。然后加入含有Fmoc氨基酸(3.0当量)，HBTU(2.9当量)，HOBt(3.0当量)，DIPEA(6.0当量)的DMF溶液15mL，室温震荡反应2小时，移去反应液，树脂用DMF清洗，Kaiser检验是否反应完全(如果未反应完全，则重复偶联一次)。按照多肽氨基酸序列由C端向N端进行氨基酸的偶联，多肽序列完成之后，分别用DMF，CH2Cl2、MeOH依次清洗树脂两遍，然后将树脂在37℃条件下干燥6小时，使用切落液(92.5％TFA，2.5％苯酚，2.5％1.2-乙二硫醇，2.5％三异丙基硅烷)室温切割树脂3小时，切落液加入十倍体积冷乙醚析出多肽，经过离心沉淀，去除乙醚，干燥后得到粗肽，为淡黄色固体。将粗肽溶于含0.1％TFA的超纯水，经0.22μm的微孔滤膜过滤后，用C18柱和含有0.1％TFA的乙腈/水梯度的反相HPLC纯化，使用ESI/MS或Maldi TOF MS测定多肽分子量。
用脂肪酸(例如棕榈酸)修饰多肽的一般方法如下：向Rink在树脂上的肽(0.1mmol)加入含有脂肪酸(3.0当量)，HBTU(3.0当量)，HOBt(3.0当量)和DIPEA(6.0当量)的DMF溶液，室温震荡反应6小时，移去反应液，用DMF，CH2Cl2，MeOH依次清洗树脂，树脂干燥后用切落液切割，然后冷乙醚沉淀粗肽，干燥后C18柱，反相HPLC纯化，冻干后得到目标多肽。
可使用带有Fmoc保护的PEG羧酸修饰多肽，也可以使用活化的PEG酯，在溶液中对赖氨酸的侧链的游离氨基或纯化肽的末端氨基进行PEG修饰，通过反相HPLC纯化获得目标多肽。
实施例2
本发明的K(pal)-E11肽、PEG-E11肽、Pal-E11肽和Dimer-E11肽的体外血浆半衰期较E11肽长。
具体操作：新鲜血浆600μL，多肽60μg，加入3000μL Tris-HCl缓冲液，37摄氏度孵育，在0、2、4、8、12和24小时这六个时间点每次取600μ反应液，向取出的反应液样品中加入30μL TFA终止反应，然后加入3000到4000μL甲醇充分混合后-静置20min，10000转离心5min，取上清，冷冻浓缩机处理挥去液体，加入含0.1％TFA的甲醇/水(1:1)20微升，充分溶解后10000转离心5min，取上清进HPLC分析，计算峰面积积分测定半衰期。实验结果如表2所示，K(pal)-E11肽、PEG-E11肽、Pal-E11肽和Dimer-E11肽的体外血浆半衰期均较E11肽长。
表2多肽的体外半衰期和Ki值
Figure GDA0002908360840000111
实施例3
本发明的PEG-E11肽和Pal-E11肽能够抑制肾脏I/R损伤引起的肾脏功能紊乱。
具体操作：在正式实验进行前我们进行了本发明的系列多肽注射剂量预实验，系列多肽注射后小鼠各方面生理指标均正常，认为系列多肽是安全的。将体重在25g左右的小鼠分为：对照小鼠组(CT组)、肾脏缺血再灌注小鼠组(I/R组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给E11肽(E11组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给K(pal)-E11肽组(K(pal)-E11组)肽、肾脏缺血再灌注小鼠组给Pal-E11肽组(Pal-E11组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给PEG-E11肽组(PEG-E11组)和肾脏缺血再灌注小鼠组给Dimer-E11肽组(Dimer-E11组)。肾脏缺血再灌注小鼠组进行45分钟的I/R手术。对照小鼠组(CT组)、肾脏缺血再灌注小鼠组(I/R组)腹腔注射磷酸盐缓冲液每天两次。肾脏缺血再灌注小鼠组给E11肽(E11组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给K(pal)-E11肽组(K(pal)-E11组)肽、肾脏缺血再灌注小鼠组给Pal-E11肽组(Pal-E11组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给PEG-E11肽组(PEG-E11组)和肾脏缺血再灌注小鼠组给Dimer-E11肽组(Dimer-E11组)按照每300pmol的每天两次，共三天。实验三天后，取肾脏测重并收集血液。实验结果显示，小鼠在I/R损伤三天后，发现血清中尿素氮(图1)和肌酐(图2)的含量含量有显著地上升，而给予Pal-E11肽和PEG-E11肽能够较好缓解这些肾脏功能指标的上升。
实施例4
本发明的E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能够抑制肾脏I/R损伤诱导的肾脏形态改变、炎症和纤维化，其中Pal-E11肽和PEG-E11肽效果最好。
具体操作：将体重在25g左右的小鼠分为：对照小鼠组(CT组)、肾脏缺血再灌注小鼠组(I/R组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给E11肽(E11组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给K(pal)-E11肽组(K(pal)-E11组)肽、肾脏缺血再灌注小鼠组给Pal-E11肽组(Pal-E11组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给PEG-E11肽组(PEG-E11组)和肾脏缺血再灌注小鼠组给Dimer-E11肽组(Dimer-E11组)。
小鼠肾脏用石蜡包埋，切成5μM厚的切片，然后进行HE染色和免疫组织化学染色。实验结果如图3所示，通过对小鼠肾脏组织变化进行检测：与CT组相比，I/R损伤会导致严重的肾小管损伤，如广泛的肾小管坏死、肾小管细胞的脱落等。通过半定量的对组织切片进行评分，表明E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能够明显的提高受损肾脏的评分(图3)。通过对炎症细胞的标志物Ly6G和CD3的表达检测，发现肾脏I/R损伤后，炎症细胞的浸润有明显的增加，E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能够缓解这种浸润，从而表明E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽在一定程度上能够缓解炎症(图3)。通过对纤维化的标记物，如胶原蛋白的沉积(马松三色染色简称Masson染色)进行分析，发现E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能够保护I/R损伤的小鼠明显的纤维化变性(图3)。通过实验测试能表明E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽有显著的改善效果，其中Pal-E11肽和PEG-E11肽效果最好。
实施例5
本发明的E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能够抑制肾脏I/R损伤诱导的坏死。
具体操作：将体重在25g左右的小鼠分为：对照小鼠组(CT组)、肾脏缺血再灌注小鼠组(I/R组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给E11肽(E11组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给K(pal)-E11肽组(K(pal)-E11组)肽、肾脏缺血再灌注小鼠组给Pal-E11肽组(Pal-E11组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给PEG-E11肽组(PEG-E11组)和肾脏缺血再灌注小鼠组给Dimer-E11肽组(Dimer-E11组)。取小鼠肾脏组织超声破碎，进行免疫印迹实验。
实验结果如图4所示，免疫印迹实验表明，与CT组相比，在肾脏发生I/R损伤时，c-Cas8蛋白水平显著性下降，p-MLKL蛋白水平显著性上升。E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能够上调c-Cas8蛋白水平和降低和p-MLKL蛋白水平，其中Pal-E11肽和PEG-E11肽效果最好。
实施例6
本发明的Pal-E11肽能够治疗肾脏I/R损伤诱导的急性肾小管坏死。
具体操作：将体重在25g左右的小鼠分为：对照小鼠组(CT组)、肾脏缺血再灌注小鼠组(I/R组)、肾脏缺血再灌注小鼠组给Pal-E11肽组(Pal-E11组)、肾脏缺血再灌注小鼠损伤6小时后给Pal-E11肽组(I/R 6h+Pal-E11组)、肾脏缺血再灌注小鼠损伤12小时后给Pal-E11肽组(I/R 12h+Pal-E11组)和肾脏缺血再灌注小鼠损伤24小时后给Pal-E11肽组(I/R24h+Pal-E11组)。
小鼠肾脏用石蜡包埋，切成5μM厚的切片，然后进行HE染色。实验结果如图5所示，通过对小鼠肾脏组织变化进行检测：与CT组相比，I/R损伤会导致严重的肾小管损伤，如广泛的肾小管坏死、肾小管细胞的脱落等。通过对组织切片进行评分，表明Pal-E11肽在I/R损伤24小时后能够明显的改善I/R引起的急性肾小管坏死等肾脏病理病变。
实施例7
本发明的E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能够抑制棕榈酸刺激所致的小鼠肾系膜细胞(MES13)脂质积累，其中Pal-E11肽和PEG-E11肽效果最好。
具体操作：对MES13细胞进行处理，分为正常组(CT组)、正常组给E11肽(E11+CT组)、正常组给Pal-E11肽(Pal-E11+CT组)、正常组给PEG-E11肽(PEG-E11+CT组)、棕榈酸刺激组(PA组)、棕榈酸组给E11肽(E11+PA组)、棕榈酸组给Pal-E11肽(Pal-E11+PA组)和棕榈酸组给PEG-E11组(PEG-E11+PA组)。对各组细胞通过油红O染色检测脂质积累的情况。
结果如图6所示，油红O染色实验表明，在正常情况下，E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽对肾脏细胞无影响，不影响细胞的脂质积累。在棕榈酸刺激的条件下，E11肽、Pal-E11肽和PEG-E11肽能显著性抑制棕榈酸引起的肾脏细胞脂质积累，其中Pal-E11肽和PEG-E11肽效果最好。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
<120> 修饰多肽及制备急性肾损伤或糖尿病并发肾病药物的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10

Claims (4)

1.一种化学修饰长效多肽，其特征在于，所述化学修饰长效多肽的结构式为
Figure FDA0002982468740000011
Figure FDA0002982468740000021
2.如权利要求1所述的修饰多肽用于制备治疗急性肾损伤或糖尿病并发肾病药物的应用。
3.一种治疗急性肾损伤或糖尿病并发肾病的药物组合物，其特征在于，包含如权利要求1所述的修饰多肽和药学上可接受的赋形剂。
4.一种如权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括将如权利要求1所述的修饰多肽与至少一种药学上可接受的赋形剂混合。
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