CN110651916B - 一种微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用 - Google Patents

一种微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110651916B
CN110651916B CN201910989064.1A CN201910989064A CN110651916B CN 110651916 B CN110651916 B CN 110651916B CN 201910989064 A CN201910989064 A CN 201910989064A CN 110651916 B CN110651916 B CN 110651916B
Authority
CN
China
Prior art keywords
fermented feed
bacillus
feed
microbial
fermentation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910989064.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110651916A (zh
Inventor
王磊
魏万权
刘广
周怡
郭本月
王鲁波
刘阳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qingdao Guan Tai Biotechnology Co ltd
Qingdao Master Biological Technology Co ltd
Original Assignee
Qingdao Guan Tai Biotechnology Co ltd
Qingdao Master Biological Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qingdao Guan Tai Biotechnology Co ltd, Qingdao Master Biological Technology Co ltd filed Critical Qingdao Guan Tai Biotechnology Co ltd
Priority to CN201910989064.1A priority Critical patent/CN110651916B/zh
Publication of CN110651916A publication Critical patent/CN110651916A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110651916B publication Critical patent/CN110651916B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/20—Animal feeding-stuffs from material of animal origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/20—Animal feeding-stuffs from material of animal origin
    • A23K10/22—Animal feeding-stuffs from material of animal origin from fish
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/20—Animal feeding-stuffs from material of animal origin
    • A23K10/26—Animal feeding-stuffs from material of animal origin from waste material, e.g. feathers, bones or skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
    • A23K10/37—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms from waste material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
    • A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K40/00—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs
    • A23K40/10—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs by agglomeration; by granulation, e.g. making powders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
    • Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
    • Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Abstract

本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及一种微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用。所述发酵剂通过多种微生物菌种的协同作用，能高产蛋白酶和淀粉酶，有利于将发酵原料中的大分子蛋白质充分分解为小肽和氨基酸，提高发酵饲料的营养价值。

Description

一种微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用
技术领域
本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及一种微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用。
背景技术
在日常的水产养殖生产实践中，除了鲢鳙鱼等滤食性鱼类可依靠摄食浮游生物和河塘中生长的水草及螺丝等天然饵料外，多数水产养殖种类在精养条件下均需进行人工饵料投喂，以弥补天然饵料的不足。投喂饲料的种类与质量直接关系到养殖者的经济效益，甚至是养殖的成败。
根据饲料来源途径的不同，一般可以分为青绿饲料、农副产品料、食品下脚料、人工配合饲料及其它类等几个大类。(一)青绿饲料包括各种陆生田间杂草、人工栽培的水浮萍、伊乐藻等各类水生植物，还包括废弃的蔬菜叶柄等，在传统养鱼中一直占据着十分重要的地位，优点是种类多分布广，资源丰富，方便易得；缺点是营养低，养殖动物生长慢，不消化物多易坏水质底质，病害率高。(二)农副产品料种类主要包括谷实类的玉米、小麦、大麦，饼粕类的菜籽饼、豆饼、豆粕，糠麸类的米糠与麸皮等等；这类饲料就是通常所说的精料，相对于青绿饲料而言，营养含量有所增加，普遍适用于草鳊鲫鲤等大众化养殖种类，拓宽了农副产品的消化渠道，把植物性蛋白转化为动物性蛋白，提升了营养层次；缺点是营养不够全面，较为单一，含有抗营养物质。(三)食品下脚料主要种类包括家畜家禽内脏、酒糟豆渣及饮食业所产生的泔脚等等，前者可用来投喂肉食性的鲶鱼、黑鱼等肉食性鱼类，能部分弥补动物源性饲料的不足，变废为宝，物尽其用，减少对周围环境的污染，后者可用来投喂草鱼及杂食性鱼类，缺点是品质不稳定，易变质引发病害，影响养殖动物品质。(四)人工配合饲料即根据水产动物的不同种类、生长阶段和营养需求，将多种饲料原料按一定的配方比例，经工业加工后生产出来的饲料；其原料既包括农副产品，又包括鱼粉、血粉、肉骨粉和蚕蛹粉等动物源性原料，还有油脂和各类营养添加剂等，优点是营养全面，种类齐全，使用方便，适口性较好，生长迅速，病害相对较少，符合规模化养殖的要求，是目前水产养殖饲料的主要饲料；缺点是不同厂家饲料品质不一，大范围推广造成饲料资源短缺，成本较高，为降低成本大量使用植物性原料导致饲料中抗营养物质较多，影响养殖动物的生长健康。(五)其他饲料，主要是指人工培育、捕获饲料鱼、鹵虫、蝇蛆、蚯蚓等，再投喂给水产动物使用；优点是营养丰富均衡，适口性好，低值饲料动物通转化为高档次养殖品种，缺点是成本高，增加环境负担，品质控制不严易爆发病害。
发酵饲料是新一代绿色环保型饲料，是以微生物发酵为核心技术生产的动物饲料，发酵饲料不仅可以降低饲料原料(如棉粕、豆粕等)中的抗营养因子，还可以利用非常规饲料资源(如马铃薯渣、酒糟、苹果渣等)提高营养成分及适口性，提高其利用价值，所含有生物功能活性成分能促进养殖动物的生长和健康，提高养殖成功率，能减少、替代部分抗生素的使用。我国在2012年12月就将生物技术作为国家新兴发展战略产业，近年来为了食品健康逐步限制了抗生素类在养殖业中的应用，并对环境保护提高了要求；微生态制剂能改善养殖环境并能填补部分抗生素退出产生的空白，保证养殖业的健康发展，而发酵饲料则是微生态制剂很好的应用实践方式，发酵饲料能节约资源缓解饲料资源短缺的问题，减少废弃物的排放，研究低成本高效微生态饲料具有时代特征，符合国家产业发展方向，符合当前饲料业发展需求，具有未来发展和应用前途和潜力。
发酵饲料较早应用于猪牛等畜禽养殖生产中，效果显著；而随着水产业发展和国家限抗和环境政策推广，发酵饲料在水产养殖中的应用也越来越广泛。发酵饲料采用的菌种多为乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌等，国家相关部门又逐步扩大了允许在饲料中使用黑曲霉等微生物种类和使用范围，鼓励绿色安全微生态饲料的研发和应用，从政策上推动了微生态制剂在水产发酵饲料业中的推广使用。乳酸菌发酵能产生有机酸等，进入体内能保持微生态平衡，促进机体健康；酵母菌体营养价值较高，繁殖快，能提高饲料营养价值；芽孢杆菌和曲霉等菌发酵能产生较多生物酶，预消化饲料，降解大分子，提高营养价值，减少抗营养物质。目前发酵饲料的发酵剂品质良莠不齐，目前处在关注发酵剂的总菌量和发酵气味方面，对发酵过程中降解大分子，减少抗营养物质的效果关注较少，未能充分发挥发酵饲料的效果；品质好的发酵饲料不仅能提高饲料的营养价值，还含有大量的乳酸菌、酵母菌、芽孢菌等有益菌及有机酸、饲料抗营养物质分解酶、消化酶等。而要提高发酵饲料的品质，需要在发酵菌种的菌株筛选和菌种复配配方上进行深入研究，才能释放发酵饲料的全面有益价值，促进水产养殖业的绿色健康持续发展。
发明内容
本发明为解决现有技术问题，提供了一种微生物发酵剂，并提供了其在水产发酵饲料生产中的应用。所述发酵剂通过多种微生物菌种的协同作用，能高产蛋白酶和淀粉酶，有利于将发酵原料中的大分子蛋白质充分分解为小肽和氨基酸，提高发酵饲料的营养价值。
本发明一方面提供了一种微生物发酵剂，包括枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus flavus)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。
所述的微生物发酵剂中各组分及其重量比分别为：枯草芽孢杆菌27-45％、黑曲霉15-20％，米曲霉20-33％，地衣芽孢杆菌15-25％。
进一步优选的，所述的微生物发酵剂中各组分及其重量比分别为：枯草芽孢杆菌35％、黑曲霉20％，米曲霉20％，地衣芽孢杆菌25％。
进一步优选的，所述枯草芽孢杆菌的菌株编号为ACCC 01185。
进一步优选的，所述黑曲霉的菌株编号为CGMCC 3.7059。
进一步优选的，所述米曲霉的菌株编号为CGMCC 3.2073。
进一步优选的，所述地衣芽孢杆菌的菌株编号为ACCC 01261。
所述微生物发酵剂中活菌量不少于1011cfu/g。
本发明还提供了所述微生物发酵剂在水产发酵饲料生产中的应用。
所述应用中，微生物发酵剂的接种量为发酵底料重量的2％。
本发明提供的微生物发酵剂中黑曲霉、地衣芽孢杆菌、米曲霉和枯草芽孢杆菌四种菌株在发酵过程中产生了协同促进作用，能显著提高淀粉酶和蛋白酶的产量，这两种酶能显著促进饲料中淀粉和蛋白质的有效分解，有利于提高发酵饲料的营养价值，提高发酵饲料的消化利用率。而且当发酵剂中枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的添加比例为8:7-19:11时，利用该发酵剂进行发酵获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的酶活均处于较高水平，其中当枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的添加比例为7:5时，利用该发酵剂进行发酵获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的酶活均达到最高水平；但随着枯草芽孢杆菌添加量的继续增加，获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的酶活开始迅速下降，取得了意料不到的技术效果。
利用本发明提供的微生物发酵剂生产的水产发酵饲料，营养更丰富，更有利于水产动物消化吸收，可显著提高水产动物的生长性能。其中，实验组鲈鱼的增重率提高了29.2-31.0％，成活率提高了8.5-9.6％，饵料系数降低了13.1-14.5％，效果非常显著。
本发明提供的微生物发酵剂可广泛应用于水产发酵饲料的生产，市场前景广阔。
具体实施方式
本发明实施例中所述原料和设备均可购自市售任意一种。其中枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌均可购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，枯草芽孢杆菌的菌株编号为ACCC01185,地衣芽孢杆菌的菌株编号为ACCC 01261，黑曲霉和米曲霉均可购自于中国普通微生物菌种保藏管理中心，黑曲霉的菌株编号为CGMCC 3.7059，米曲霉的菌株编号为CGMCC3.2073。
实施例中涉及的各种发酵培养基的配方如下：
PDA斜面培养基：取去皮马铃薯200g，加水1000mL，煮沸20min后纱布过滤,然后称取20g葡萄糖与17g琼脂加入滤液中，蒸馏水定容至1L，121℃灭菌30min,即得。
曲霉扩大培养基：马铃薯滤液200mL，葡萄糖2g、尿素0.5g充拌匀装入250m三角瓶中，121℃灭菌30min，即得。
曲霉种子培养基：200ml马铃薯滤液、20g葡萄糖、5g硫酸铵，用蒸馏水定容至1L，即得。
曲霉发酵培养基:蛋自胨10g、葡萄糖20g和牛肉浸膏5g，pH值6.8。
普通琼脂斜面培养基：10g蛋白胨、3g牛肉膏粉、5g氯化钠，15g琼脂，用蒸馏水定容至1L。
芽孢杆菌扩大培养基:牛肉浸膏5g、蛋自陈10g,加5mL水，加热至牛肉浸膏、蛋白胨完全溶解，加入500mL水、5gNaCl完全溶化，用蒸馏水定容至1L，用NaOH调至pH7.0，121℃灭菌30min，即得。
芽孢杆菌种子培养基：10g酵母膏、20g蛋白胨、5gNaCl、10g蔗糖、5g琼脂粉，用蒸馏水定容至1L，即得。
芽孢杆菌发酵培养基：蛋白胨12g，牛肉浸膏7g和氯化钠5g，pH值7.3。
本发明实施例中所述的发酵底料的组分及重量比分别为：鱼粉20％、鸡肉粉10％、猪血球蛋白粉2％、虾壳粉2％、豆粕10％、花生粕20％、玉米蛋白粉10％、高筋面粉10％、米糠粕6％、大豆磷脂油2％、乌贼膏5％、海藻酸钠3％。将上述组分按比例加入到混合机中混匀，即为发酵底料。
实施例1菌粉制备
1、黑曲霉和米曲霉菌粉的制备方法
(1)斜面培养：将曲霉接种于PDA斜面培养基，28℃培养5天；
(2)扩大培养：从PDA培养基取曲霉接种于曲霉扩大培养基上，28℃培养5天，得曲霉一级菌种；
(3)二级种子液制备：将曲霉一级菌种按5％接种量接种到曲霉种子培养基中，30℃，200r/min，连续培养24h，得曲霉二级菌种；
(4)发酵罐发酵：将曲霉二级菌种按5％接种量接种到曲霉发酵培养基中，30℃，240r/min，连续培养28h，得曲霉发酵液；
(5)将曲霉发酵液进行离心，得到菌泥，按质量比添加3％甘露醇和7％牛奶，真空冷冻干燥后得到曲霉菌粉，曲霉菌粉中活菌数为1010cfu/g。
2、枯草芽抱杆菌和地衣芽孢杆菌菌粉的制备方法
(1)斜面培养：将芽孢杆菌接种于普通琼脂斜面培养基，37℃培养18h；
(2)扩大培养：从普通琼脂斜面培养基取芽孢杆菌接种于芽孢杆菌扩大培养基，37℃培养18天，得芽孢杆菌一级菌种；
(3)二级种子液制备：将芽孢杆菌一级菌种按体积比8％接种量接种到芽孢杆菌种子培养基中，35℃，180r/min，连续培养12h，得芽孢杆菌二级菌种；
(4)发酵罐发酵：将芽孢杆菌二级菌种按体积比10％接种量接种到芽孢杆菌发酵培养基，30℃，200r/min，连续培养8h，得芽孢杆菌发酵液；
(5)将芽孢杆菌发酵液进行离心得到菌泥，按质量比添加5％甘露醇和5％牛奶，真空冷冻干燥后得到芽孢杆菌菌粉，菌粉中活菌数为1011cfu/g。
实施例2
一种微生物发酵剂，其组分及重量比分别为：枯草芽孢杆菌45％、黑曲霉20％，米曲霉20％，地衣芽孢杆菌15％。
按照上述重量比分别称取实施1制备得到的各菌株的菌粉，混合均匀后，即得本发明所述的微生物发酵剂，命名为发酵剂1#。
实施例3
一种微生物发酵剂，其组分及重量比分别为：枯草芽孢杆菌27％、黑曲霉15％，米曲霉33％，地衣芽孢杆菌25％。
所述微生物发酵剂的制备方法同实施例2，命名为发酵剂2#。
实施例4
一种微生物发酵剂，其组分及重量比分别为：枯草芽孢杆菌35％、黑曲霉20％，米曲霉20％，地衣芽孢杆菌25％。
所述微生物发酵剂的制备方法同实施例2，命名为发酵剂3#。
实施例5本发明提供的微生物发酵剂在水产发酵饲料生产中的应用
实验组：分别将实施例2-4所述的微生物发酵剂加入10倍水溶解，做成发酵液。每1kg发酵底料中加入200mL发酵液，搅拌均匀，置于恒温培养箱中30℃培养15天，即获得发酵饲料。
空白对照组：发酵底料中不添加任何发酵剂，置于恒温培养箱中30℃培养15天。
分别测定实验组和空白对照组获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的酶活，具体结果见表1。
(1)淀粉酶活力测定方法
参照谷物及谷物产品淀粉酶α-淀粉酶活性测定方法(GB/T5521-1989)
(2)蛋白酶活力测定方法(张寒俊等2004)
酶活定义：1g固体酶粉，在一定温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1μg酪氨酸为1个酶活力单位，以U/g表示。
待测酶液的制备：称取发酵后的样品0.5-1.0g，精确至0.002g；用pH6.0磷酸盐缓冲液溶解，移入100ml容量瓶中,用缓冲液定容摇匀；40℃水浴浸提60min，每五分钟摇一次；先将酪素溶液放入(40±0.2)℃恒温水浴中，预热5min；然后按下列步骤操作：
试管A(空白)：加酶液1.00mL，(60±0.2)℃，5min；加三氯乙酸2.00mL，摇匀；(40±0.2)℃，10min，加酪素1.00m1；静置10min，过滤；于275m波长测定并记录A。
试管B(酶活测定，3份平行)：加浸提酶液1.00ml；加酪素1.00m，(40±0.2)℃，10min；(60±0.2)℃，5min；加三氯乙酸，2.00m1，摇匀；静置10min，过滤；于275nm波长，测定并记录A。
计算公式：酶活力(U/g或U/mL)＝(A×K×V×n)/t×m
A为样品的吸光度值，K为吸光常数，V为反应试剂总体积，n为酶液的稀释倍数，t为反时间，m为酶质量或酶体积。
表1发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的酶活比较
分组 添加发酵剂 淀粉酶酶活(U/mL) 蛋白酶酶活(U/mL)
空白对照组 - 2.05 4.05
实验组1 发酵剂1# 150.21 132.25
实验组2 发酵剂2# 150.93 130.93
实验组3 发酵剂3# 153.82 133.11
从表1的数据可以看出，与空白对照组相比，实验组通过添加本发明提供的微生物发酵剂进行发酵获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的酶活都得到显著提高，这两种酶能促进饲料中淀粉和蛋白质的有效分解，有利于提高发酵饲料的营养价值。从而表明，本发明提供的微生物发酵剂在发酵过程中产生了大量的蛋白酶和淀粉酶，能大大提高发酵饲料的消化利用率。实施例6微生物发酵剂中各菌株间的协同促进作用
实验组：分别将实施例1制备得到的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、黑曲霉和米曲霉菌粉以及发酵剂3#各加入10倍水溶解，做成发酵液。每1kg发酵底料中加入200mL发酵液，搅拌均匀，置于恒温培养箱中30℃培养15天，即获得发酵饲料。
空白对照组：发酵底料中不添加任何发酵剂，置于恒温培养箱中30℃培养15天。
分别测定实验组和空白对照组获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的酶活(U/mL)，具体结果见表2。
表2微生物发酵剂中各菌株的添加量对发酵饲料的影响
Figure BDA0002237649960000061
Figure BDA0002237649960000071
从表2的数据可以看出，单独添加黑曲霉、地衣芽孢杆菌、米曲霉和枯草芽孢杆菌菌粉的实验组1-4发酵获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的含量均明显高于对照组，其中淀粉酶酶活最高的是单独添加地衣芽孢杆菌菌粉的实验组2获得的发酵饲料，淀粉酶酶活为99.65U/mL；蛋白酶酶活最高的是单独添加枯草芽孢杆菌菌粉的实验组4获得的发酵饲料，蛋白酶酶活为78.78U/mL。但添加本发明实施例4制备得到的发酵剂3#的实验组5获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶酶活高达153.82U/mL和133.11U/mL，比实验组2和实验组4分别提高了54.4％和60％，效果极显著。从而表明，本发明提供的发酵剂中黑曲霉、地衣芽孢杆菌、米曲霉和枯草芽孢杆菌四种菌株在发酵过程中产生了协同促进作用，能显著提高淀粉酶和蛋白酶的产量，使发酵饲料更有利于消化吸收，营养价值更高，取得了意料不到的技术效果。实施例7枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的添加比例对微生物发酵剂发酵效果的影响
申请人在研发过程中发现枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的添加比例对于本发明提供的微生物发酵剂的发酵效果具有意料不到的影响。
申请人按照芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌)60％，米曲霉20％，黑曲霉20％的重量比设计实验。其中，将芽孢杆菌中枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的添加比例设置不同梯度试验，按表3或表4所述10组菌种配方配制发酵剂。将所述10组发酵剂各加入10倍水溶解，做成发酵液。每1kg发酵底料中加入200mL发酵液，搅拌均匀，置于恒温培养箱中30℃培养15天，即获得发酵饲料。分别测定各组获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的酶活(U/mL)，具体结果见表3和表4。
表3枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的添加比例对发酵剂在发酵过程中产淀粉酶的影响
Figure BDA0002237649960000072
Figure BDA0002237649960000081
从表3的数据可以看出，当枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的重量比为1:2时，发酵后获得的发酵饲料中淀粉酶的酶活仅为70.45U/mL；随着枯草芽孢杆菌添加量的增加，发酵饲料中淀粉酶的酶活开始缓慢升高，当枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的重量比达到8:7时，实验组4获得的发酵饲料中淀粉酶酶活开始迅速升高，且随着枯草芽孢杆菌添加量的增加，发酵饲料中淀粉酶酶活继续升高；当枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的重量比达到7:5时，实验组5获得的发酵饲料中淀粉酶酶活达到最高，为153.82U/m；但随着枯草芽孢杆菌添加量的继续增加，实验组6-10获得的发酵饲料中淀粉酶的酶活开始迅速下降，取得了意料不到的技术效果。
表4枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的添加比例对发酵剂在发酵过程中产蛋白酶的影响
分组 枯草芽孢杆菌 地衣芽孢杆菌 米曲霉 黑曲霉 蛋白酶酶活
实验组1 20％ 40％ 20％ 20％ 38.45
实验组2 25％ 35％ 20％ 20％ 39.96
实验组3 30％ 30％ 20％ 20％ 95.77
实验组4 32％ 28％ 20％ 20％ 114.24
实验组5 35％ 25％ 20％ 20％ 133.11
实验组6 38％ 22％ 20％ 20％ 122.60
实验组7 40％ 20％ 20％ 20％ 74.73
实验组8 45％ 15％ 20％ 20％ 56.48
实验组9 50％ 10％ 20％ 20％ 48.29
实验组10 55％ 5％ 20％ 20％ 45.37
从表4的数据可以看出，当枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的重量比为1:2时，发酵后获得的发酵饲料中蛋白酶的酶活仅为38.45U/mL；随着枯草芽孢杆菌添加量的增加，发酵饲料中蛋白酶的酶活开始缓慢升高，当枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的重量比达到1:1时，实验组3获得的发酵饲料中蛋白酶酶活开始迅速升高，且随着枯草芽孢杆菌添加量的增加，发酵饲料中蛋白酶酶活继续升高；当枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的重量比达到7:5时，实验组5获得的发酵饲料中蛋白酶酶活达到最高，为133.11U/m；但随着枯草芽孢杆菌添加量的继续增加，实验组7-10获得的发酵饲料中蛋白酶的酶活开始迅速下降，取得了意料不到的技术效果。
综上所述，在发酵剂中芽孢杆菌的总量为60％的情况下，枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的添加比例为8:7-19:11时，利用该发酵剂进行发酵获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的酶活均处于较高水平，其中当枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的添加比例为7:5时，利用该发酵剂进行发酵获得的发酵饲料中淀粉酶和蛋白酶的酶活均达到最高水平，取得了意料不到的技术效果。
实施例8通过添加本发明提供的微生物发酵剂生产的发酵饲料在鲈鱼养殖中的应用
实验材料:加州鲈3000尾
随机分为4组，1个对照组，3个试验组，每组三个重复。
对照组：投喂未经发酵的饲料；
试验组：分别投喂实施例5所述通过添加发酵剂1#、2#、3#进行发酵获得的发酵饲料。
上述饲料均在制粒机中制粒，做成颗粒料。尽量保证所有组的养殖条件公平一致，试验期间采用正常管理模式即可。养殖初期应根据干物质折算投喂量，后期根据具体摄食情况调整。每天记录投喂量。实验开始时称量每条鱼的体重，实验结束时，计算头数，计算饵料系数、成活率，具体结果见表5。
表5发酵饲料对鲈鱼生长性能的影响
Figure BDA0002237649960000091
从表5的数据可以看出，与对照组相比，通过投喂经本发明所述微生物发酵剂发酵后的饲料，实验组鲈鱼的增重率提高了29.2-31.0％，成活率提高了12.3-13.6％，饵料系数降低了13.1-14.5％，效果非常显著。从而说明，利用本发明提供的微生物发酵剂生产的水产发酵饲料，营养更丰富，更有利于水产动物消化吸收，可显著提高水产动物的生长性能，应用前景广阔。

Claims (4)

1.一种用于制备水产发酵饲料的微生物发酵剂，其特征在于，所述的微生物发酵剂中各组分及其重量比分别为：枯草芽孢杆菌32%，黑曲霉20%，米曲霉20%，地衣芽孢杆菌28%；所述枯草芽孢杆菌的菌株编号为ACCC 01185，所述黑曲霉的菌株编号为CGMCC 3.7059，所述米曲霉的菌株编号为CGMCC 3.2073，所述地衣芽孢杆菌的菌株编号为ACCC 01261；所述的微生物发酵剂中活菌量不少于1011cfu/g。
2.一种用于制备水产发酵饲料的微生物发酵剂，其特征在于，所述的微生物发酵剂中各组分及其重量比分别为：枯草芽孢杆菌38%，黑曲霉20%，米曲霉20%，地衣芽孢杆菌22%；所述枯草芽孢杆菌的菌株编号为ACCC 01185，所述黑曲霉的菌株编号为CGMCC 3.7059，所述米曲霉的菌株编号为CGMCC 3.2073，所述地衣芽孢杆菌的菌株编号为ACCC 01261；所述的微生物发酵剂中活菌量不少于1011cfu/g。
3.一种用于制备水产发酵饲料的微生物发酵剂，其特征在于，所述的微生物发酵剂中各组分及其重量比分别为：枯草芽孢杆菌35%，黑曲霉20%，米曲霉20%，地衣芽孢杆菌25%；所述枯草芽孢杆菌的菌株编号为ACCC 01185，所述黑曲霉的菌株编号为CGMCC 3.7059，所述米曲霉的菌株编号为CGMCC 3.2073，所述地衣芽孢杆菌的菌株编号为ACCC 01261；所述的微生物发酵剂中活菌量不少于1011cfu/g。
4.权利要求1-3任一所述的微生物发酵剂在水产发酵饲料生产中的应用。
CN201910989064.1A 2019-10-17 2019-10-17 一种微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用 Active CN110651916B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910989064.1A CN110651916B (zh) 2019-10-17 2019-10-17 一种微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910989064.1A CN110651916B (zh) 2019-10-17 2019-10-17 一种微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110651916A CN110651916A (zh) 2020-01-07
CN110651916B true CN110651916B (zh) 2022-04-08

Family

ID=69041136

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910989064.1A Active CN110651916B (zh) 2019-10-17 2019-10-17 一种微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110651916B (zh)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002238466A (ja) * 2001-01-31 2002-08-27 Iji Biosystem:Kk 飼料添加物
CN107853480A (zh) * 2017-11-27 2018-03-30 安佑生物科技集团股份有限公司 一种猪饲料的发酵方法及应用
CN108157673B (zh) * 2017-12-13 2022-04-29 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一种发酵对虾配合饲料的制备方法
CN109497281A (zh) * 2018-10-26 2019-03-22 湖北源清生物科技股份有限公司 一种微生物复合有机饲料

Also Published As

Publication number Publication date
CN110651916A (zh) 2020-01-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106173363B (zh) 以食用菌菌糠为原料分级发酵生产牛羊全价饲料的方法
CN102696547B (zh) 一种育肥猪的养殖方法
CN105076753A (zh) 甘蔗渣发酵制备牛羊饲料的方法
CN104381607B (zh) 一种藻菌复合发酵饲料添加剂及其制备方法
CN104106727A (zh) 一种全价发酵饲料及其制备方法
CN101690540A (zh) 一种采用混合发酵制备复合蛋白饲料的方法
CN106333060A (zh) 一种微生物发酵饲料及其制备方法与应用
CN106922952B (zh) 一种米曲霉固态发酵制备富多肽蛋白饲料添加剂的方法
CN105053535A (zh) 一种发酵农作物秸秆的组合物及其应用
CN100998369A (zh) 博根双微生物蛋白饲料
CN104012787A (zh) 一种利用微生物有益活菌制备玉米秸秆粗饲料的方法
CN106306426A (zh) 一种玉米青贮新工艺
CN103478441B (zh) 一种大米活性菌肽鱼饲料及其应用
CN106234755B (zh) 以甘蔗渣为原料分级发酵生产牛羊全价饲料的方法
CN110754586A (zh) 一种含黑水虻幼虫粉的虾用生物饲料及其制备方法
CN110583866A (zh) 一种高膳食纤维低抗原蛋白发酵大豆皮及其制备方法
CN106071143A (zh) 一种可提高反刍动物生产性能的颗粒型微生态制剂及其制备方法
CN111264686A (zh) 一种用于哺乳仔猪的无抗发酵软颗粒教槽料制备方法
CN110583855A (zh) 一种高色氨酸发酵饲料的制备方法
CN104855725A (zh) 用于反刍动物颗粒混合饲料的谷草发酵工艺及反刍动物颗粒混合饲料
CN105166324B (zh) 一种利用苎麻骨培养基菌糠制作饲料的方法
CN109722392B (zh) 能够促进枯草芽孢杆菌产芽孢的培养基及其应用
CN110050890A (zh) 一种肉牛专用发酵饲料及其制备方法和应用方法
CN109170151A (zh) 微生物发酵饲料的制备方法
CN113331318A (zh) 应用于虾蟹养殖的富集酵母、虾青素、乳酸、蛋白酶的饲料制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant