CN110628785A - 野大豆耐盐基因GmSULTR23.1及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及野大豆耐盐基因GmSULTR23.1及其应用，属于耐盐基因挖掘技术领域。本发明所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1具有耐盐胁迫作用。

Description

野大豆耐盐基因GmSULTR23.1及其应用

技术领域

本发明涉及耐盐基因挖掘技术领域，具体涉及野大豆耐盐基因GmSULTR23.1及其应用。

背景技术

盐害是威胁农作物安全生产的一种常见非生物逆境。其胁迫机制主要体现在对农作物的渗透胁迫和离子毒害上。然而在盐碱环境中有很多耐盐植物能够在较高的含盐土壤上正常生长，对这些植物进行耐盐基因挖掘与利用是改良农作物耐盐特性、提高耐盐能力和增收增产的重要途径。

野大豆主要分布在东亚地区，是一种一年生草本植物，其抗逆能力非常突出，能够在盐碱地上良好生长。野大豆的耐盐机理主要体现在以下几个方面：(1)形态学结构。有研究指出野大豆具盐腺，生长在茎叶外切向壁胞间层，能够向外分泌盐分；(2)生理生化调节。高盐环境下，野大豆吸收的盐分主要分布在根部，叶片中含量很少，避免Na⁺对光合作用的影响；(3)代谢层面调节。盐环境下野大豆可以通过合成大豆异黄酮等次级代谢产物来降低盐胁迫的危害；(4)耐盐基因。盐胁迫下野大豆中有大量基因受盐胁迫诱导表达，通过转录、调控、合成、吸收等各个层面的基因表达调控来降低盐害的产生。

发明内容

本发明的目的在于提供野大豆耐盐基因GmSULTR23.1及其应用。本发明所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1具有耐盐胁迫作用。

本发明提供了一种野大豆耐盐基因GmSULTR23.1，所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供了上述技术方案所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1表达的蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供了含上述技术方案所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1的重组表达载体。

优选的是，所述重组表达载体构建用表达载体包括pRI101-AN。

本发明还提供了含上述技术方案所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1的基因工程菌。

优选的是，所述基因工程菌包括大肠杆菌。

本发明还提供了野大豆耐盐基因GmSULTR23.1在耐盐胁迫中的应用。

本发明提供了野大豆耐盐基因GmSULTR23.1及其应用。本发明通过序列分析、载体构建以及转基因拟南芥耐盐性验证证实野大豆耐盐基因GmSULTR23.1在野大豆耐盐中的作用。试验结果表明，野生型和GmSULTR23.1转基因植株的生长都受到了抑制，但是转基因植株在叶色和根长方面受到抑制的程度均比对照要小，说明GmSULTR23.1基因具有一定的耐盐功能。

附图说明

图1为本发明提供的GmSULTR23.1基因克隆扩增结果；

图2为本发明提供的GmSULTR23.1基因过表达图谱；

图3为本发明提供的GmSULTR23.1与STR23序列比对结果图；

图4为本发明提供的GmSULTR23.1蛋白结构域预测结果图；

图5为本发明提供的拟南芥T1代植株阳性苗鉴定图；

图6为本发明提供的转GmSULTR23.1阳性植株半定量结果图；

图7为本发明提供的转GmSULTR23.1阳性植株耐盐表型结果图；

图8为本发明提供的转GmSULTR23.1阳性植株盐胁迫下根长统计结果图。

具体实施方式

本发明提供了一种野大豆耐盐基因GmSULTR23.1，所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供了上述技术方案所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1表达的蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供了含上述技术方案所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1的重组表达载体。

在本发明中，所述重组表达载体构建用表达载体包括pRI101-AN。

本发明还提供了含上述技术方案所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1的基因工程菌。

在本发明中，所述基因工程菌包括大肠杆菌。

本发明还提供了野大豆耐盐基因GmSULTR23.1在耐盐胁迫中的应用。GmSULTR23.1基因具有耐盐功能。

下面结合具体实施例对本发明所述的野大豆耐盐基因GmSULTR23.1及其应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。

实施例1

GmSULTR23.1基因克隆

克隆引物F：

克隆引物R:

(下划线加粗部分为后续载体构建时，采用同源重组方法进行构建的同源臂)

高保真酶Pfu为北京全式金生物技术有限公司产品，扩增条件：

以野大豆幼根cDNA为模板，使用高保真酶Pfu进行同源扩增。扩增体系为50μL，各组分及用量如下：

扩增条件为：94℃3分钟后进入扩增程序：94℃30秒、58℃30秒、72℃2分钟，36个循环后，72℃10分钟。PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳后获得一条2kb左右大小的、条带明亮且单一的PCR条带，GmSULTR23.1基因克隆扩增结果如图1所示。

载体构建图谱

载体为实验室保存pRI101-AN表达载体，经KpnI单酶切后获得线性化载体。GmSULTR23.1基因全长片段和线性化载体根据PCR产物回收试剂盒EasyPurePCRPurificationKit的步骤分别进行回收，构建图谱如图2所示。

载体连接反应体系为10μL，各组分及用量如下：

用移液枪晃匀并短暂离心后，置于PCR仪中在50℃温度下反应15分钟，后立即置于冰上5分钟。连接产物进行大肠杆菌转化。转化步骤如下：

(1)取大肠杆菌Trans1-T1感受态于冰上融化；

(2)取5μL连接产物加入至50μL感受态细胞中冰浴30分钟；

(3)42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰上，冰浴静置5分钟；

(4)加入700μL灭过菌的液体LB培养基，混匀后置于37℃摇床，150rpm震荡培养40分钟，使菌体复苏；

(5)取200μL已转化的感受态细胞，涂到含有Kan抗性的LB固体培养基上，37℃倒置培养过夜。

利用引物pRI101-AN-F和pRI101-AN-R进行菌落PCR鉴定，序列如下：

pRI101-AN-F：CTCTAGATACATCACAATCACAC(SEQ ID NO:5)

pRI101-AN-R：TGTTTGAACGATCGGGGAAATTC(SEQ ID NO:6)

将菌落PCR检测呈阳性的单菌落进行测序，结果发现获得的序列与硫酸根转移酶蛋白STR23(GmSULTR3；5a Glyma07g09710 STR23，核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示)并不一致，新获得的基因全长1959bp，编码653个氨基酸，较STR23(1866bp)基因多了93bp，并存在多处SNP，将此基因命名为GmSULTR23.1(GmSULTR23.1与STR23序列比对结果如图3)。

GmSULTR23.1基因编码的蛋白序列在SMART网站(http://smart.embl-heidelberg.de/)进行结构域预测，发现存在硫酸根转移酶基因家族共有的Sulfate-transp和STAS保守结构域(GmSULTR23.1蛋白结构域预测结果如图4)，因此这是一个新的硫酸根转移酶基因。

拟南芥转化和阳性植株筛选

从Ecoli中提取构建好的表达载体质粒，采用电转化法转入农杆菌GV3101，步骤如下：

(1)从-80℃取出农杆菌感受态细胞置于冰上融化，加入2μL构建成功的过表达载体质粒，用移液枪吹打混匀；

(2)用移液枪将混有质粒的农杆菌吸入预冷的电击杯中，并将电击杯置于电击仪(BTX，ECM399 electroporation system)的电击槽中，2500V电压，电击5msec；

(3)电击结束后，立即在电击杯加入1mL不含任何抗生素的液体LB培养基，吹打混匀后转移至1.5mL离心管中，28℃，200rpm振荡培养1-2h；

(4)吸取200μL菌液，涂布于含50mg/L的Rif和50mg/L的Kan抗性的LB固体培养基上，28℃倒置培养48h。

拟南芥侵染步骤：

拟南芥侵染选在盛花期时进行，侵染时间一般为上午10:00左右，侵染方法参考滴花法(Clough et al.，1998)进行，具体操作方法稍有改动，过程如下：

(1)侵染前一天晚上摇菌，在250mL锥形瓶中倒入80mL的LB液体培养基，加入抗生素Rif和Kan，终浓度均为50mg/L。用无菌枪头将长好的农杆菌从LB固体培养基上刮下，放于锥形瓶里，28℃，200rpm过夜振荡培养。并于当夜将需要侵染的拟南芥苗子浇足水分；

(2)次日待培养基呈现鲜亮的橙黄色时，50mL离心管收集菌体。7000rpm常温条件离心6min，弃上清；

(3)准备重悬液，5％蔗糖溶液，添加Silwet-77，使终浓度为0.02％；

(4)使用30mL重悬液重悬菌体(重悬液体积一般为摇菌体积的1/3-1/2)；

(5)菌体重悬后，倒入直径为9cm的圆形培养皿中，将拟南芥的花序完全浸入到重悬液中，前后摆动数次后取出，平放在苗盆中；

(6)将苗盆盖上盖子，置于黑暗条件下，过夜；

(7)次日清晨揭开盖子将拟南芥取出，正常生长直至收种(在此期间可根据需要再一次侵染拟南芥，两次侵染之间间隔7-10d)。

T1代转基因拟南芥阳性苗筛选

侵染获得的拟南芥T1代种子经表面无菌化处理后铺在含Kan(50mg/L)的1/2MS培养基上，将培养基平放在培养间里。Kan筛选大约需要经过7d左右的时间，阳性苗较培养基里其它的拟南芥高挑，子叶展开并且有主根生长，将这样的苗子挑选出，种在蛭石基质里。按照正常方式进行管理，约3周左右，分单株提取拟南芥植株DNA，采用引物对

pRI101-AN-F：CTCTAGATACATCACAATCACAC(SEQ ID NO:7)

pRI101-AN-R：TGTTTGAACGATCGGGGAAATTC(SEQ ID NO:8)

对拟南芥进行阳性苗鉴定(拟南芥T1代植株阳性苗鉴定结果如图5，标注数字的植株为阳性植株，WT和阴性植株未转进载体，因此没有条带)，进一步剔除假阳性植株。

为进一步验证野大豆硫酸根转移酶基因GmSULTR23.1在阳性苗中的表达情况，从上述鉴定到的阳性苗中挑选3株植株提取总RNA(总RNA提取步骤为：获得的野大豆幼根材料立刻放到液氮中，在经前期处理的RNA-free的研钵中研磨成粉末儿，然后使用植物总RNA提取试剂盒EasyPure PlantRNAKit(全式金，北京)根据说明书提取野大豆幼根总RNA，并测定其浓度。使用反转录试剂盒TransScript II First-Strand cDNA Synthesis SuperMix(全式金，北京)根据说明书合成第一链cDNA备用)，进行基因表达的半定量鉴定(转GmSULTR23.1阳性植株半定量结果如图6)结果说明外源基因在拟南芥中得到了表达。

半定量引物为：

GmSULTR23.1-SF：CTATTTGGCTTCACCCCTCTT(SEQ ID NO:9)

GmSULTR23.1-SR:GTTGTGTCAATGGCTGTCACT(SEQ ID NO:10)

收取经过半定量鉴定植株的种子，进行耐盐性实验。

过表达植株耐盐表型

野生型和过表达种子经表面消毒后点播在1/2MS培养基上，置于温度24±1℃，光周期16小时光照8小时黑暗的植物培养间中生长5-7天，至根长在0.8cm左右时转移到1/2MS培养基，含100mM和150mM NaCl的1/2MS培养基上继续培养，进行耐盐实验。生长10天左右，进行表型(转GmSULTR23.1阳性植株耐盐表型结果如图7)和根长(转GmSULTR23.1阳性植株盐胁迫下根长统计结果如图8)统计。

100mM和150mM NaCl胁迫下，野生型和GmSULTR23.1转基因植株的生长都受到了抑制，但是转基因植株在叶色和根长方面受到抑制的程度均比对照要小，说明GmSULTR23.1基因具有一定的耐盐功能。

统计在盐胁迫下根长，相对于在正常培养基上的生长的WT和GmSULTR23.1转基因植株，WT根长在100mM NaCl胁迫时只有正常状态的83％，150mM NaCl胁迫时仅有正常状态的42％；而GmSULTR23.1转基因植株在100mM和150mM NaCl胁迫下根长分别为正常生长的91％和52％，体现出一定程度的耐盐能力。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 中国农业科学院烟草研究所

<120> 野大豆耐盐基因GmSULTR23.1及其应用

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1959

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atgggttcca ttagtaacac cgaggttcat aatcatcaca atgatgatga tgacgacaat 60

catcgtcatc gggtgaattt ctcaatccag agaggatttg ggacaaaatt gaaggaggca 120

ttgaaggaaa cattgtttcc ggatgatccc ttcaggcagt tcaagaacga ggagaagcca 180

atggggaggg tgatgaaagg ggtgcaatac ttcatcccaa tctttgagtg gctccccact 240

tacaattttc gcctcttttg ctctgacttg atcgctggac taaccatctc aagccttgcc 300

atccctcaag gcattagcta tgccaaactt gctgaccttc ctcccctcat tggcctttat 360

tccagctttg ttccaccttt gatctatgct gtttttggga gttcaaggca catggcagtg 420

ggtacgatag cagcagcatc gttgcttatt gctcaaacca tacaaaccgt ggtagatcca 480

gtagaagatc caacgttgta tcttcatttg attttcacta ccacctttat caccggtgtt 540

ttccaggctt gtttgggttt ttttaggctg ggaatattgg tggacttctt ttcccattct 600

accattaatg gcttcatggg agggacagca gtaattctca tcctccaaca actaaagggt 660

gtatttggca tgaaacattt ttcaaccaaa acgaacttgg tggcagtggt gaagagcata 720

gtcaacaata gacaagagat taggtgggaa cctaccattc ttggcgtgat ctttgttgct 780

ttcttgcaat ttaccaggca cctgaggaat aagaatccaa aactcttttg ggtaccggct 840

atagctccaa tggtgactgt agtagttgct gccgttttca cctacgtcgt caagggccaa 900

catcatggaa ttcaaattgt gggccatcta gataaaggac taaatccctt gtccattcac 960

tatttgaact ttaatggtaa atatttacga gcagttgtgc aagctggtct tgtcacaggc 1020

gtgttgtcat tagcggaagg aatagcaata ggaagaagct ttgctgttgc tgacaataca 1080

ccccatgatg ggaacaaaga aatgatcgct ttcggcctta tgaacttgtt cggttcattt 1140

acttcatgtt acttgactag tggaccattt tccaagaccg cagtgaatta caatgcaggg 1200

tgtaagactg ctatggcaaa cgtggtacag gcaatagtaa tggcactcac actacaattt 1260

ttggcgccac tatttggctt cacccctctt gttgctctct cagccattat tatttctgcc 1320

atgcttgggc tcattcatta cgaagaagtc atccatctct acaaagttga caagtttgac 1380

tttgttattt gcatggctgc cttccttgga gtcatcttta taagcatgga cgttggtctc 1440

atgctgtctg ttggtctcgg cgttcttaga gcacttttat atgtggctag acctgcgcca 1500

tgcaagcttg gaaagttacc tgaaattggt ttatatagag acacggagca atataatgta 1560

tcaacatacc caggagttct tgttgtacaa cttggttctc ccgtttactt tgcaaattct 1620

atatacgtca aagaaaggat tatgaggtat attcgaagtg aggaaagctc tactggagat 1680

gtagttgagc acatcatact tgatttgtca ggagtgacag ccattgacac aactgctatt 1740

aaaggattgg acgagttaat taaaatattg ggaaagaatg gagttaaggt tttgttcgta 1800

aacccaaggc tggaggtgat ggagaagctt ataatatcca agtttgttga gaaaattggg 1860

aaggagtcgt tttatctaat attggatgat gcagtgatgg caagtcaata tacacttcgt 1920

tcatcaaagg ctgcaaataa tgctcaagag gtggtttaa 1959

<210> 2

<211> 652

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Gly Ser Ile Ser Asn Thr Glu Val His Asn His His Asn Asp Asp

1 5 10 15

Asp Asp Asp Asn His Arg His Arg Val Asn Phe Ser Ile Gln Arg Gly

20 25 30

Phe Gly Thr Lys Leu Lys Glu Ala Leu Lys Glu Thr Leu Phe Pro Asp

35 40 45

Asp Pro Phe Arg Gln Phe Lys Asn Glu Glu Lys Pro Met Gly Arg Val

50 55 60

Met Lys Gly Val Gln Tyr Phe Ile Pro Ile Phe Glu Trp Leu Pro Thr

65 70 75 80

Tyr Asn Phe Arg Leu Phe Cys Ser Asp Leu Ile Ala Gly Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Ala Ile Pro Gln Gly Ile Ser Tyr Ala Lys Leu Ala Asp

100 105 110

Leu Pro Pro Leu Ile Gly Leu Tyr Ser Ser Phe Val Pro Pro Leu Ile

115 120 125

Tyr Ala Val Phe Gly Ser Ser Arg His Met Ala Val Gly Thr Ile Ala

130 135 140

Ala Ala Ser Leu Leu Ile Ala Gln Thr Ile Gln Thr Val Val Asp Pro

145 150 155 160

Val Glu Asp Pro Thr Leu Tyr Leu His Leu Ile Phe Thr Thr Thr Phe

165 170 175

Ile Thr Gly Val Phe Gln Ala Cys Leu Gly Phe Phe Arg Leu Gly Ile

180 185 190

Leu Val Asp Phe Phe Ser His Ser Thr Ile Asn Gly Phe Met Gly Gly

195 200 205

Thr Ala Val Ile Leu Ile Leu Gln Gln Leu Lys Gly Val Phe Gly Met

210 215 220

Lys His Phe Ser Thr Lys Thr Asn Leu Val Ala Val Val Lys Ser Ile

225 230 235 240

Val Asn Asn Arg Gln Glu Ile Arg Trp Glu Pro Thr Ile Leu Gly Val

245 250 255

Ile Phe Val Ala Phe Leu Gln Phe Thr Arg His Leu Arg Asn Lys Asn

260 265 270

Pro Lys Leu Phe Trp Val Pro Ala Ile Ala Pro Met Val Thr Val Val

275 280 285

Val Ala Ala Val Phe Thr Tyr Val Val Lys Gly Gln His His Gly Ile

290 295 300

Gln Ile Val Gly His Leu Asp Lys Gly Leu Asn Pro Leu Ser Ile His

305 310 315 320

Tyr Leu Asn Phe Asn Gly Lys Tyr Leu Arg Ala Val Val Gln Ala Gly

325 330 335

Leu Val Thr Gly Val Leu Ser Leu Ala Glu Gly Ile Ala Ile Gly Arg

340 345 350

Ser Phe Ala Val Ala Asp Asn Thr Pro His Asp Gly Asn Lys Glu Met

355 360 365

Ile Ala Phe Gly Leu Met Asn Leu Phe Gly Ser Phe Thr Ser Cys Tyr

370 375 380

Leu Thr Ser Gly Pro Phe Ser Lys Thr Ala Val Asn Tyr Asn Ala Gly

385 390 395 400

Cys Lys Thr Ala Met Ala Asn Val Val Gln Ala Ile Val Met Ala Leu

405 410 415

Thr Leu Gln Phe Leu Ala Pro Leu Phe Gly Phe Thr Pro Leu Val Ala

420 425 430

Leu Ser Ala Ile Ile Ile Ser Ala Met Leu Gly Leu Ile His Tyr Glu

435 440 445

Glu Val Ile His Leu Tyr Lys Val Asp Lys Phe Asp Phe Val Ile Cys

450 455 460

Met Ala Ala Phe Leu Gly Val Ile Phe Ile Ser Met Asp Val Gly Leu

465 470 475 480

Met Leu Ser Val Gly Leu Gly Val Leu Arg Ala Leu Leu Tyr Val Ala

485 490 495

Arg Pro Ala Pro Cys Lys Leu Gly Lys Leu Pro Glu Ile Gly Leu Tyr

500 505 510

Arg Asp Thr Glu Gln Tyr Asn Val Ser Thr Tyr Pro Gly Val Leu Val

515 520 525

Val Gln Leu Gly Ser Pro Val Tyr Phe Ala Asn Ser Ile Tyr Val Lys

530 535 540

Glu Arg Ile Met Arg Tyr Ile Arg Ser Glu Glu Ser Ser Thr Gly Asp

545 550 555 560

Val Val Glu His Ile Ile Leu Asp Leu Ser Gly Val Thr Ala Ile Asp

565 570 575

Thr Thr Ala Ile Lys Gly Leu Asp Glu Leu Ile Lys Ile Leu Gly Lys

580 585 590

Asn Gly Val Lys Val Leu Phe Val Asn Pro Arg Leu Glu Val Met Glu

595 600 605

Lys Leu Ile Ile Ser Lys Phe Val Glu Lys Ile Gly Lys Glu Ser Phe

610 615 620

Tyr Leu Ile Leu Asp Asp Ala Val Met Ala Ser Gln Tyr Thr Leu Arg

625 630 635 640

Ser Ser Lys Ala Ala Asn Asn Ala Gln Glu Val Val

645 650

<210> 3

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tgcccgtcga ccccgggggt accatgggtt ccattagtaa caccg 45

<210> 4

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

attcagaatt cggatccggt accttaaacc acctcttgag cattatt 47

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ctctagatac atcacaatca cac 23

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tgtttgaacg atcggggaaa ttc 23

<210> 7

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

ctctagatac atcacaatca cac 23

<210> 8

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

tgtttgaacg atcggggaaa ttc 23

<210> 9

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

ctatttggct tcacccctct t 21

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gttgtgtcaa tggctgtcac t 21

<210> 11

<211> 1866

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

atgggttcca ttagtaacac cgaggttcat aatcatcaca atgatgatga cgacgatgat 60

catcgtcatc gggtgaattt ctcgatccag agaggatttg ggacaaaatt gaaggaggca 120

ttgaaggaaa cattgtttcc ggatgatccc ttcaggcagt tcaagaacga ggagaagcca 180

atggggaggg tgatgaaagg ggtgcaatac ttcatcccaa tctttgagtg gctccccact 240

tacaattttc gcctcttttg ctctgacttg atcgctggac taaccatctc aagccttgcc 300

atccctcaag gcattagcta tgccaaactt gctgaccttc ctcccctcat tggcctttat 360

tccagctttg tcccaccttt gatctatgct gtttttggga gttcaaggca catggcagtg 420

gggacgatag cagcagcatc gttgcttatt gctcaaacca tacaaaccgt ggtagatcca 480

gtagaagatc caacgttgta tcttcatttg attttcacta ccacctttat caccggtgtt 540

ttccaggctt gtttgggttt ttttagtttc atcaaaatag atcttatgat aattgatttt 600

ttagaaaaag aaaattgtta tttctatata tattttggaa ataacattag gtgggaacct 660

accattcttg gcgtgatctt tgttgctttc ttgcaattta ccaggcacct gaggaataag 720

aatccaaaac tcttttgggt accggctata gctccaatgg tgactgtagt agttgctgcc 780

gttttcacct acgtcgtcaa gggccaacat catggaattc aaattgtggg ccatctagat 840

aaaggactaa atcccttgtc cattcactat ttgaacttta atggtaaata tttacgagca 900

gttgtgcaag ctggtcttgt cacaggcgtg ttgtcattag cggaaggaat agcaatagga 960

agaagctttg ctgttgctga caatacaccc catgatggga acaaagaaat gatcgctttc 1020

ggccttatga acttgttcgg ttcatttact tcatgttact tgactagtgg accattttcc 1080

aagaccgcag tgaattacaa tgcagggtgt aagactgcta tggcaaacgt ggtacaggca 1140

atagtaatgg cactcacact acaatttttg gcgccactat ttggcttcac ccctcttgtt 1200

gctctctcag ctattattat ttctgccatg cttgggctca ttcattacga agaagtcatc 1260

catctctaca aagttgacaa gtttgacttt gttatttgca tggctgcctt ccttggagtc 1320

atctttataa gcatggacgt tggtctcatg ctgtctgttg gtctcggcgt tcttagagca 1380

cttttatatg tggctagacc tgcgccatgc aagcttggaa agttacctga aattggttta 1440

tatagagaca cggagcaata taatgtatca acatacccag gagttcttgt tgtacaactt 1500

ggttctcccg tttactttgc aaattctata tacgtcaaag aaaggattat gaggtatatt 1560

cgaagtgagg aaagctctac tggagatgta gttgagcaca tcatacttga tttgtcagga 1620

gtgacagcca ttgacacaac tgctattaaa ggattggacg agttaattaa aatattggga 1680

aagaatggag ttaaggtttt gttcgtaaac ccaaggctgg aggtgatgga gaagcttata 1740

atatccaagt ttgttgagaa aattgggaag gagtcgtttt atctaatatt ggatgatgca 1800

gtgatggcaa gtcaatatac acttcgttca tcaaaggctg caaataatgc tcaagaggtg 1860

gtttaa 1866

Claims (7)

1.一种野大豆耐盐基因GmSULTR23.1，其特征在于，所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1表达的蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.含权利要求1所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1的重组表达载体。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体构建用表达载体包括pRI101-AN。

5.含权利要求1所述野大豆耐盐基因GmSULTR23.1的基因工程菌。

6.根据权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌包括大肠杆菌。

7.野大豆耐盐基因GmSULTR23.1在耐盐胁迫中的应用。