CN110628705A - 一种驴胚胎冲洗液及其应用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种驴胚胎冲洗液及其应用方法，其主要成分有氯化钠，氯化钾，磷酸氢二钾，硫酸镁，碳酸氢钠，二水氯化钙，乳酸钠，EDTA，丙酮酸钠，谷氨酰胺，HEPES，青链霉素，BSA。本发明的有益效果是：解决了现有胚胎冲洗液针对性不强，价格昂贵，胚胎发育不良以及降低胚胎移植后子宫炎发病率等问题，非常适用于驴非手术法胚胎移植的规模化生产，有利于胚胎移植技术的推广应用。
Description
发明领域
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种驴胚胎冲洗液及其应用方法。
背景技术
我国驴数量大、品种多，可耕地和乘骑，由于社会的发展，驴的役用功能逐渐退出历史舞台。驴肉的蛋白质含量比猪牛肉都高，是典型的高蛋白低脂肪食物,驴皮更是珍贵的食材和药材。但是驴的繁殖力比其他家畜低，导致全国驴的数量急剧下降，许多品种都处于保种状态。近几年驴的选育工作也相对滞后，驴品种质量严重退化。因此必须要充分认识驴种质资源保护的重要性、必要性和紧迫性。
为了能够充分发挥优良母驴的繁育力，大大缩短优良母驴本身的繁殖周期，增加优良母驴后代的数量，目前主要采用胚胎移植技术来解决驴种质资源保护的问题。胚胎移植技术，又称受精卵移植，是指将优良母驴的早期胚胎，或通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到另一头母驴体内，使之继续发育为新个体的技术。
合理应用胚胎移植技术，是构建和保持驴优质遗传资源的关键手段，随着现代生物科学技术的不断发展，驴胚胎移植技术逐渐成熟并推广应用。现有技术中，胚胎冲洗液无专用液，是采用国外进口马胚胎移植冲洗液，价格昂贵，移植成功率相对较低和子宫炎发病率相对较高。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种驴胚胎冲洗液及其应用方法，解决了进口胚胎冲洗液针对性不强，价格昂贵，胚胎发育不良的问题。所述驴胚胎冲洗液就是为了解决驴胚胎体外操作时发育不良的问题，而本发明所述驴胚胎冲洗液更有利于驴胚胎的发育。
本发明提供了一种驴胚胎冲洗液，每升胚胎冲洗液中含4770mg氯化钠，360mg氯化钾，160mg磷酸氢二钾，142mg硫酸镁，2110mg碳酸氢钠，250mg二水氯化钙，5847微升乳酸钠，41mgEDTA，30mg丙酮酸钠，146mg谷氨酰胺，2383mgHEPES，10000单位的青链霉素，2500mgBSA。
本发明还提供了一种冲洗驴胚胎的方法，包括以下步骤：
(1)准备
在超净工作台上准备六孔洗胚皿，洗胚皿底为凹形，六孔分别倒入冲洗液2-5mL；
(2)洗胚
洗胚器把胚胎在集卵杯中吸出，放入洗胚皿第一个孔，清洗2-3次，用洗胚器分别在六个孔中各冲洗2-3次；
(3)装管
胚胎冲洗完毕，装入移胚管，装管时先吸入所述冲洗液，吸入空气，吸入所述冲洗液和胚胎，再吸入空气，再吸入冲洗液；
(4)装枪移植。
现有技术采用进口马胚胎冲洗液针对性不强，马的妊娠期11个月左右，驴的妊娠期12个月左右，就囊胚而言驴的囊胚内细胞团和外滋养层对碳源利用、蛋白核酸代谢以及外环境中酸碱度要求较高，所以针对驴胚胎在冲洗液中添加了丙酮酸钠、谷氨酰胺、EDTA和HEPES，以适用于驴胚胎的保存环境。
与现有技术相比，本发明提供的驴胚胎冲洗液具有以下有益效果
(1)针对驴的胚胎特征，在冲洗液中添加了丙酮酸钠、谷氨酰胺、EDTA和HEPES，并优选出最佳配比，使胚胎冲洗液更接近母驴子宫内环境；
(2)显著降低了生产成本，本发明提供的冲胚液与进口冲胚液相比价格方面有绝对的优势；
(3)显著提高了胚胎移植成功率，降低移植引发的子宫炎症发病率。
具体实施方式
实施例1
一种驴胚胎冲洗液，每升胚胎冲洗液中含4770mg氯化钠，360mg氯化钾，160mg磷酸氢二钾，142mg硫酸镁，2110mg碳酸氢钠，250mg二水氯化钙，5847微升乳酸钠，41mgEDTA，30mg丙酮酸钠，146mg谷氨酰胺，2383mgHEPES，10000单位的青链霉素，2500mgBSA。
取以上配方得冲洗液对驴胚胎进行冲洗，包括以下步骤：
(1)准备
在超净工作台上准备六孔洗胚皿，洗胚皿底为凹形，六孔分别倒入冲洗液2-5mL；
(2)洗胚
洗胚器把胚胎在集卵杯中吸出，放入洗胚皿第一个孔，清洗2-3次，用洗胚器分别在六个孔中各冲洗2-3次；
(3)装管
胚胎冲洗完毕，装入移胚管，装管时先吸入所述冲洗液，吸入空气，吸入所述冲洗液和胚胎，再吸入空气，再吸入冲洗液；
(4)装枪移植。
实施例2
购买国外进口马胚胎冲洗液Equihold。按照实施例1的冲洗方法进行胚胎冲洗。
实施例3
3、一种驴胚胎冲洗液，每升胚胎冲洗液中含4765mg氯化钠，355mg氯化钾，155mg磷酸氢二钾，137mg硫酸镁，2105mg碳酸氢钠，245mg二水氯化钙，5845微升乳酸钠，36mgEDTA，25mg丙酮酸钠，141mg谷氨酰胺，2378mgHEPES，10000单位的青链霉素，2495mgBSA。
取以上配方得冲洗液对驴胚胎进行冲洗，包括以下步骤：
(1)准备
在超净工作台上准备六孔洗胚皿，洗胚皿底为凹形，六孔分别倒入冲洗液2-5mL；
(2)洗胚
洗胚器把胚胎在集卵杯中吸出，放入洗胚皿第一个孔，清洗2-3次，用洗胚器分别在六个孔中各冲洗2-3次；
(3)装管
胚胎冲洗完毕，装入移胚管，装管时先吸入所述冲洗液，吸入空气，吸入所述冲洗液和胚胎，再吸入空气，再吸入冲洗液；
(4)装枪移植。
实施例4
一种驴胚胎冲洗液，每升胚胎冲洗液中含4775mg氯化钠，365mg氯化钾，165mg磷酸氢二钾，147mg硫酸镁，2115mg碳酸氢钠，255mg二水氯化钙，5855微升乳酸钠，46mgEDTA，35mg丙酮酸钠，151mg谷氨酰胺，2388mgHEPES，10000单位的青链霉素，2505mgBSA。
取以上配方得冲洗液对驴胚胎进行冲洗，包括以下步骤：
(1)准备
在超净工作台上准备六孔洗胚皿，洗胚皿底为凹形，六孔分别倒入冲洗液2-5mL；
(2)洗胚
洗胚器把胚胎在集卵杯中吸出，放入洗胚皿第一个孔，清洗2-3次，用洗胚器分别在六个孔中各冲洗2-3次；
(3)装管
胚胎冲洗完毕，装入移胚管，装管时先吸入所述冲洗液，吸入空气，吸入所述冲洗液和胚胎，再吸入空气，再吸入冲洗液；
(4)装枪移植。
采用非手术法促排冲胚，每次每头优质供体母驴可冲出7-8d胚胎1-3枚，每10枚胚胎一组，每组重复三次，分别应用上述实施例1-4中的胚胎冲洗液，应用本发明中所述方法进行胚胎冲洗和移植到受体母驴。
结果判定：移植成功率、子宫炎发病率和成本。
| 移植成功率(％) | 子宫炎发病率(％) | 成本(元/mL) | |
| 实施例1 | 89.33 | 3.33 | 0.01873 |
| 实施例2 | 76.67 | 13.33 | 15.66667 |
| 实施例3 | 85.97 | 4.12 | 0.01956 |
| 实施例4 | 87.21 | 3.78 | 0.01957 |
Claims (4)
1.一种驴胚胎冲洗液，每升胚胎冲洗液中含4765-4775mg氯化钠，355-365mg氯化钾，155-165mg磷酸氢二钾，137-147mg硫酸镁，2105-2115mg碳酸氢钠，245-255mg二水氯化钙，5845-5855微升乳酸钠，36-46mgEDTA，25-35mg丙酮酸钠，141-151mg谷氨酰胺，2378-2388mgHEPES，10000单位的青链霉素，2495-2505mgBSA。
2.根据权利要求1所述的驴胚胎冲洗液，每升胚胎冲洗液中含4770mg氯化钠，360mg氯化钾，160mg磷酸氢二钾，142mg硫酸镁，2110mg碳酸氢钠，250mg二水氯化钙，5847微升乳酸钠，41mgEDTA，30mg丙酮酸钠，146mg谷氨酰胺，2383mgHEPES，10000单位的青链霉素，2500mgBSA。
3.一种冲洗驴胚胎的方法，包括以下步骤：
(1)准备
在超净工作台上准备六孔洗胚皿，洗胚皿底为凹形，六孔分别倒入冲洗液2-5mL；
(2)洗胚
洗胚器把胚胎在集卵杯中吸出，放入洗胚皿第一个孔，清洗2-3次，用洗胚器分别在六个孔中各冲洗2-3次；
(3)装管
胚胎冲洗完毕，装入移胚管，装管时先吸入所述冲洗液，吸入空气，吸入所述冲洗液和胚胎，再吸入空气，再吸入冲洗液；
(4)装枪移植；
所述冲洗液，每升胚胎冲洗液中含4765-4775mg氯化钠，355-365mg氯化钾，155-165mg磷酸氢二钾，137-147mg硫酸镁，2105-2115mg碳酸氢钠，245-255mg二水氯化钙，5845-5855微升乳酸钠，36-46mgEDTA，25-35mg丙酮酸钠，141-151mg谷氨酰胺，2378-2388mgHEPES，10000单位的青链霉素，2495-2505mgBSA。
4.根据权利要求3所述的冲洗方法，所述驴胚胎冲洗液，每升胚胎冲洗液中含4770mg氯化钠，360mg氯化钾，160mg磷酸氢二钾，142mg硫酸镁，2110mg碳酸氢钠，250mg二水氯化钙，5847微升乳酸钠，41mgEDTA，30mg丙酮酸钠，146mg谷氨酰胺，2383mgHEPES，10000单位的青链霉素，2500mgBSA。
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