CN110628670B - 一株异养硝化菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

一株异养硝化菌及其应用，涉及环境污染物生物处理。来源于南美白对虾养殖海水，经人工富集培养、分离纯化得到；为革兰氏染色阴性的斯尼斯氏菌属Sneathiella sp.的菌株216LB‑ZA1‑12，已于2019年06月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号：CGMCC No.18018，生物学特性为接触酶和氧化酶阳性，兼性厌氧，菌体形态呈杆状，菌落浅黄色不透明，边缘规则，表面凸起，无晕环，直径1～2mm。可在含盐污水去除氨氮处理中的应用。

Description

一株异养硝化菌及其应用
技术领域
本发明涉及环境污染物生物处理，尤其是涉及一株异养硝化菌及其应用。
背景技术
随着海水养殖业的高速发展，海水养殖对周边环境的影响也日益受到关注。据统计，水产养殖系统中的80％～88％碳、52％～95％氮、85％磷和60％固体饵料，最终以固体颗粒、可溶性有机物以及气体的形式释放出来，其中最常见的污染物为含氮废物[1]。大量含氮废物会导致水中“三氮”，即氨氮(NH4 +－N)、亚硝酸氮(NO2 －－N)、硝酸氮(NO3 －－N)的过度积累，进而抑制养殖对象的生长，这是养殖水域中诱发暴发性疾病的重要因素[2]。
含氮化合物是生物代谢过程中必不可少的物质，在生命周期中起着极其重要的作用[3]。然而有些含氮化合物并不受欢迎，例如，氨氮。氨氮不仅能够引起水质问题，而且还具有刺鼻的气味[4]。因此，如何经济高效的去除养殖水体中的氨氮是养殖业安全的重要保障。生物脱氮是含氮污水处理的重要环节，是目前最经济、有效的脱氮方法。
异养硝化作用和异养硝化微生物其实早在1886年、1894年和1908年就有报道，但由于遭到Winogradsky(维诺格拉德斯基)的强烈批判和否定，在此后的很多年几乎没有研究报道[5]。Quastel和Scholefield等人以丙酮酸肟为底物进行试验，获得了能产亚硝酸盐的菌株[6-7]，此后，研究者们猜想，可能存在有异养微生物可以氧化氨氮，即异养硝化作用。1983年Robertson首次从污水中分离纯化出异养硝化菌Thiosphaera pantotropha，并证实异养硝化菌在硝化作用过程中起着重要作用[8]。异养硝化菌广泛存在于不同的环境中[9-13]，主要存在于火山口、高山、河流、土壤、湿地和沼泽等[14-18]，其中，既包括原核生物，也包括真核生物[19-21]，目前已有报道的菌株有分离自松花江水的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)[22]、醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)[22]、穿孔假单菌(Pseudomonas pertucinogena)[22]和短杆菌(Brevibacterium sp.)[22]、Kim等从粪便处理系统中筛出的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)[23]、Su等从养猪场废水处理系统中筛出的产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes AS-1)[24]、Joo等从污泥中筛出的粪产碱菌(Alcaligenes faecalis No.4)[25]、孔庆鑫筛出的不动杆菌(Acinetobacter sp.YY-5)[26]、曾庆梅等筛出的产碱菌(Alcaligenes sp.HN-S)[27]、张培玉等筛出的假单胞菌(Pseudomonas sp.)[28]、廖小红等筛出的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus XWZ-8)[29]、陈昢圳等从畜禽养殖废水样品中筛出的嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinivorans)[30]等等。目前，关于异养硝化方面的研究报道呈递增趋势。并有研究报道，一些硝化菌还同时兼具反硝化的功能。李贵珍等人对兼具反硝化功能的异养硝化菌进行了专门的报道[31]。有些异养硝化菌可以在有氧存在的条件下，氧化氨氮或有机态氮，形成亚硝酸盐氮或硝酸盐氮。由于异养硝化菌可利用底物十分宽泛，因而认为异养硝化反应硝化底物进行的更加彻底。目前，已报道的异养硝化菌有细菌、真菌、放线菌，其中细菌报道的有Achromobacter、Alcaligenes Acinetobacter、Pseudomonas、Bacillus、Rhodococcus、Halomonas等属，并多用于污水处理研究。
参考文献：
1、Gutierrez-Wing MT,Malone RF.Biological filters in aquaculture:trends and research directions for freshwater and marineapplications.Aquacult Eng 2006；34:163-171.
2、徐升.海水循环水养殖系统生物脱氮技术研究进展.江西农业学报2012；24:151-155.
3、Kuypers MM,Marchant HK,Kartal B.The microbial nitrogen-cyclingnetwork.Nat Rev Microbiol 2018；16:263-276.
4、He T,Xie D,Li Z,Ni J,Sun Q.Ammonium stimulates nitrate reductionduring simultaneous nitrification and denitrification process by Arthrobacterarilaitensis Y-10.Bioresource Techn 2017；239:66-73.
5、C.H.维诺德格拉德斯基著,阎逊初.土壤微生物学问题和方法：科学出版社；1962.72p.
6、Scholefield PG.Influence of organic Nitrogen Compounds onNitrifications in Soil.Nature 1949；164:1068-1072.
7、Quastel PJH,F.RS,Scholefield et al.Oxidation of pyruvic oxime bysoil organisms.Nature 1950；166:940-942.
8、Berks BC,Richardson DJ,Robinson C et al.Purification andcharacterization of the periplasmic nitrate reductase from Thiosphaerapantotropha.Eur J Biochem 1994；220:117–124.
9、Schimel JP,Firestone MK,Killham KS.Identification of heterotrophicnitrification in a sierran forest soil.Appl Environ Micro 1984；48:802-806.
10、Killham K.Nitrification in coniferous forest soils.Plant&Soil1990；128:31-44.
11、Adams JA.Identification of heterotrophic nitrification in stronglyacid larch humus.Soil Biology and Biochemistry 1986；18:339-341.
12、Duggin JA,Voigt GK,Bormann FH.Autotrophic and heterotrophicnitrification in response to clear-cutting northern hardwood forest.SoilBiology and Biochemistry 1991；23:779-787.
13、Robertson LA,Kuenen JG,Kleijntjens R.Aerobic denitrification andheterotrophic nitrification by Thiosphaera pantotropha.Antonie vanLeeuwenhoek 1985；51:445-445.
14、Pedersen H,Dunkin KA,Firestone MK.The relative importance ofautotrophic and heterotrophic nitrification in a conifer forest soil asmeasured by 15N tracer and pool dilution techniques.Biogeochemistry 1999；44:135-150.
15、Papen H,Berg RV.A Most Probable Number method(MPN)for theestimation of cell numbers of heterotrophic nitrifying bacteria in soil.Plantand Soil 1998；199:123-130.
16、张光亚,陈美慈,韩如旸等.一株异养硝化细菌的分离及系统发育分析.微生物学报2003；43:156-161.
17、Fisher T,Fisher E,Appleman MD.Nitrite production by heterotrophicbacteria.J Gen Appl Microbio 1956；14:238-247.
18、White JP,Johnson GT.Aflatoxin Production Correlated withNitrification in Aspergillus flavus Group Species.Mycologia 1982；74:718-723.
19、Yao S,Ni J,Chen Q,Borthwick AG.Enrichment and characterization ofa bacteria consortium capable of heterotrophic nitrification and aerobicdenitrification at low temperature.Bioresource Techn 2013；127:151-157.
20、Zhao B,He YL,Hughes J,Zhang XF.Heterotrophic nitrogen removal by anewly isolated Acinetobacter calcoaceticus HNR.Bioresource Techn 2010；101:5194-5200.
21、吕永康,王荀,刘博凯,刘玉香,杨晓华.Isolation and Characterization ofHeterotrophic Nitrifying Strain W1.中国化学工程学报(英文版)2012；20:995-1002.
22、张多英,李伟光,刘苗等.低温异养硝化菌群去除氨氮的动力学.环境工程学报2015；9:3751-3756.
23、Kim JK,Park KJ,Cho KS et al.Aerobic nitrification–denitrificationby heterotrophic Bacillus strains.Bioresource Techn 2005；96:1897-1906.
24、Su JJ,Yeh KS,Tseng PW.A strain of Pseudomonas sp.isolated frompiggery wastewater treatment systems with heterotrophic nitrificationcapability in Taiwan.Curr Microbiol 2006；53:77-81.
25、Joo HS,Hirai M,Shoda M.Characteristics of ammonium removal byheterotrophic nitrification-aerobic denitrification by Alcaligenes faecalisNo.4.J Biosci Bioeng 2005；100:184-191.
26、孔庆鑫.一株新型脱氮微生物的分离鉴定及其脱氮机制:中国人民解放军军事医学科学院；解放军军事医学科学院；2004.
27、曾庆梅,司文攻,李志强等.一株高效异养硝化菌的选育、鉴定及其硝化条件.微生物学报2010；50:803-810.
28、张培玉,曲洋,于德爽等.菌株qy37的异养硝化/好氧反硝化机制比较及氨氮加速降解特性研究.环境科学2010；31:1819-1826.
29、廖小红,汪苹,刁惠芳等.蜡状芽孢杆菌WXZ-8的异养硝化/好氧反硝化性能研究.环境污染与防治2009；31:17-20.
30、陈昢圳,王立刚,王迎春等.异养硝化-好氧反硝化菌的筛选及脱氮性能的实验研究.环境科学2009；30:3614-3618.
31、李贵珍，赖其良，闫培生等.异养硝化-好氧反硝化细菌的研究进展.生物资源2018:419-429.
发明内容
本发明的第一目的在于提供一株异养硝化菌。
本发明的另一个目的是提供一株异养硝化菌在含盐污水去除氨氮处理中的应用。
所述一株异养硝化菌来源于南美白对虾养殖海水，经人工富集培养、分离纯化得到；所述一株异养硝化菌为革兰氏染色阴性的斯尼斯氏菌属Sneathiella sp.的菌株216LB-ZA1-12，已于2019年06月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏中心登记入册编号：CGMCC No.18018，所述革兰氏染色阴性的斯尼斯氏菌属Sneathiella sp.的菌株216LB-ZA1-12 16S rDNA基因序列的GenBank注册号为MN226643；所述一株异养硝化菌的生物学特性为接触酶和氧化酶阳性，兼性厌氧，菌体形态呈杆状，菌落浅黄色不透明，边缘规则，表面凸起，无晕环，直径1～2mm。
所述革兰氏染色阴性的斯尼斯氏菌属Sneathiella sp.的菌株216LB-ZA1-12 16SrDNA基因序列为：
TGCAGTCGACGAGAAGCTTCTTTCGGGAAGTGGAGAGTGGCGCACGGGTGAGTAACGCGTGGGGATTTGCCTTTCGGTACGGGATAACGTTTGGAAACGAACGCTAATACCGTATGAAGTCTACGGACTAAAGATTTATCGCCGAAAGAGAAACCCGCGTAGGATTAGATAGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGTCGACGATCTTTAGCTGGTCTGAGAGGACGATCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGGGCAACCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCGCTAGGGAAGATAATGACGGTACCTAGTAAAGAAGTCCCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGGACTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGAGTACGTAGGCGGCTAATCAAGTTGGGTGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCACTCAAAACTGGTTAGCTAGAGATCGAAAGAGGTAAGTGGAATTCCCAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTACTGGTTCGATACTGACGCTGAGGTACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCTAGTTGTTGGGAGGTTTACCTTTCAGTGACGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCCCTTGACATGGGTAGTATGATTACCAGAGATGGTTTTCTTCAGTTCGGCTGGCTACCACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCATTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTGATGGAACTGCCGGTGATAAGCCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGATGCGAAGGGGTGACCCGGAGCTAATCTCCAAAAACCATCTCAGTTCGGATTGTTCTCTGCAACTCGAGAGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTTTACCCGAAGCCGGTGCGCGAACCTTTGGACGCAGCCGACCACGTA
所述一株异养硝化菌的最适生长条件为：pH＝8.0，温度25～28℃，盐度2％～6％。
所述一株异养硝化菌在含盐污水去除氨氮处理中的应用；所述含盐污水可为含氨氮污染物的高盐污水。
所述一株异养硝化细菌可在水体生物处理和修复中的应用，一株异养硝化菌在异养条件下可以进行硝化作用，即将氨氮转化为硝态氮。在28℃培养下，硝化速率可达到0.32mg/L.h-1。一株异养硝化菌在好氧异养条件下高效的硝化速率，可应用于含盐废水及养殖污水等的生物强化处理与修复，应用前景良好。
附图说明
图1为菌株216LB-ZA1-12系统进化树图。
图2为菌株Sneathiella sp.216LB-ZA1-12在硝化培养基中NO3 -和NO2 -产生情况图。在图2中，曲线a为NO2 -，曲线b为NO3 -。
图3为菌株216LB-ZA1-12硝化速率的测定图。
具体实施方式
以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。
所述一株异养硝化菌来源于南美白对虾养殖海水，经人工富集培养、分离纯化得到；所述一株异养硝化菌为革兰氏染色阴性的斯尼斯氏菌属Sneathiella sp.的菌株216LB-ZA1-12，已于2019年06月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏中心登记入册编号：CGMCC No.18018，所述革兰氏染色阴性的斯尼斯氏菌属Sneathiella sp.的菌株216LB-ZA1-12 16S rDNA基因序列的GenBank注册号为MN226643；所述一株异养硝化菌的生物学特性为接触酶和氧化酶阳性，兼性厌氧，菌体形态呈杆状，菌落浅黄色不透明，边缘规则，表面凸起，无晕环，直径1～2mm。
所述革兰氏染色阴性的斯尼斯氏菌属Sneathiella sp.的菌株216LB-ZA1-12 16SrDNA基因序列为：
TGCAGTCGACGAGAAGCTTCTTTCGGGAAGTGGAGAGTGGCGCACGGGTGAGTAACGCGTGGGGATTTGCCTTTCGGTACGGGATAACGTTTGGAAACGAACGCTAATACCGTATGAAGTCTACGGACTAAAGATTTATCGCCGAAAGAGAAACCCGCGTAGGATTAGATAGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGTCGACGATCTTTAGCTGGTCTGAGAGGACGATCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGGGCAACCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCGCTAGGGAAGATAATGACGGTACCTAGTAAAGAAGTCCCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGGACTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGAGTACGTAGGCGGCTAATCAAGTTGGGTGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCACTCAAAACTGGTTAGCTAGAGATCGAAAGAGGTAAGTGGAATTCCCAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTACTGGTTCGATACTGACGCTGAGGTACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCTAGTTGTTGGGAGGTTTACCTTTCAGTGACGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCCCTTGACATGGGTAGTATGATTACCAGAGATGGTTTTCTTCAGTTCGGCTGGCTACCACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCATTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTGATGGAACTGCCGGTGATAAGCCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGATGCGAAGGGGTGACCCGGAGCTAATCTCCAAAAACCATCTCAGTTCGGATTGTTCTCTGCAACTCGAGAGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTTTACCCGAAGCCGGTGCGCGAACCTTTGGACGCAGCCGACCACGTA
所述一株异养硝化菌的最适生长条件为：pH＝8.0，温度25～28℃，盐度2％～6％。
所述一株异养硝化菌在含盐污水去除氨氮处理中的应用；所述含盐污水为含氨氮污染物的高盐污水。
以下给出具体实施例。
实施例1：Sneathiella sp.216LB-ZA1-12的分离与鉴定
从福建省漳州市诏安县一个南美白对虾养殖池采集海水样品，取2mL采集的海水样品，转接到灭菌LB(蛋白胨5g/L，酵母膏5g/L，氯化钠(NaCl)10g/L，pH值7.4～8.2)富集培养液的锥形瓶中富集培养，1周为一个周期，每个周期结束后取适量培养液离心，弃上清液，收集沉淀，获得菌体，然后在无菌条件下用生理盐水洗涤菌体3次，以2％的接种量转接入新鲜的灭菌的异养硝化培养基继续培养，反复循环，进行驯化。取富集培养基2mL转接到灭菌的选择培养基中(氯化铵(NH4Cl)0.382g/L，乙酸钠(CH3CH2ONa)3.417g/L，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.05g/L，磷酸氢二钾(K2HPO4)0.2g/L，氯化钠(NaCl)30g/L，硫酸锰(MnSO4)0.01g/L，硫酸亚铁(FeSO4)0.01g/L，pH值7.4～8.2，121℃高压蒸汽灭菌20min)。10℃、140rpm/min的摇床上振荡培养2d，培养2d后，转接到新的选择培养基中，反复转接3次。每次转接前都进行硝态氮和亚硝态氮含量的测定。
取1mL富集后培养基，梯度稀释后，涂布于固体选择培养基中，得到多株纯菌，纯菌接种至液体培养基中验证其异养硝化能力，最后得到一株低温异养硝化菌216LB-ZA1-12，该菌经16S rDNA基因序列鉴定为斯尼斯氏菌属(Sneathiella)；选取其中相似序列，用MEGA7.2计算出序列的系统进化距离，构建系统进化树。系统进化树显示，与其相似度最高的菌株为Sneathiella glossodoripedis JCM 23214T菌株，相似度为97.30％，其次为Sneathiella chungangensis CAU 1294T，相似度为96.13％(见图1)。结合菌株的16S rDNA序列的测定结果，将其归属于斯尼斯氏菌属(Sneathiella)。
实施例2：Sneathiella sp.216LB-ZA1-12异养硝化的性能
将Sneathiella sp.216LB-ZA1-12接种至以氯化铵(NH4Cl)为唯一氮源的异养硝化培养基中，通入氧气，以保证可以进行好氧呼吸，同时注入乙炔气体，抑制反硝化作用的进行。在140rpm/min、10℃摇床中培养，间隔取样并检测硝态氮和亚硝态氮浓度变化。由图2可以看出Sneathiella sp.216LB-ZA1-12在培养过程中硝态氮和亚硝态氮浓度变化情况。由图3可以看出Sneathiella sp.216LB-ZA1-12异养硝化速率约为0.32mg/L-1.h。
序列表
<110> 自然资源部第三海洋研究所
<120> 一株异养硝化菌及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 2
<211> 1368
<212> DNA
<213> 斯尼斯氏菌（Sneathiella）
<400> 2
tgcagtcgac gagaagcttc tttcgggaag tggagagtgg cgcacgggtg agtaacgcgt 60
ggggatttgc ctttcggtac gggataacgt ttggaaacga acgctaatac cgtatgaagt 120
ctacggacta aagatttatc gccgaaagag aaacccgcgt aggattagat agttggtggg 180
gtaatggcct accaagtcga cgatctttag ctggtctgag aggacgatca gccacactgg 240
aactgagaca cggtccagac tcctacggga ggcagcagtg gggaatattg gacaatgggg 300
gcaaccctga tccagccatg ccgcgtgagt gaagaaggcc ttagggttgt aaagctcttt 360
cgctagggaa gataatgacg gtacctagta aagaagtccc ggctaactcc gtgccagcag 420
ccgcggtaat acggagggga ctagcgttgt tcggaattac tgggcgtaaa gagtacgtag 480
gcggctaatc aagttgggtg tgaaagcccg gggctcaacc ccggaactgc actcaaaact 540
ggttagctag agatcgaaag aggtaagtgg aattcccagt gtagaggtga aattcgtaga 600
tattgggaag aacaccagtg gcgaaggcgg cttactggtt cgatactgac gctgaggtac 660
gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta aacgatgaat 720
gctagttgtt gggaggttta cctttcagtg acgcagctaa cgcattaagc attccgcctg 780
gggagtacgg tcgcaagatt aaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg 840
agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgca gaaccttacc agcccttgac atgggtagta 900
tgattaccag agatggtttt cttcagttcg gctggctacc acacaggtgc tgcatggctg 960
tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa ccctcgccat 1020
tagttgccag catttagttg ggcactctga tggaactgcc ggtgataagc cggaggaagg 1080
tggggatgac gtcaagtcct catggccctt atgggctggg ctacacacgt gctacaatgg 1140
tggtgacagt gggatgcgaa ggggtgaccc ggagctaatc tccaaaaacc atctcagttc 1200
ggattgttct ctgcaactcg agagcatgaa gttggaatcg ctagtaatcg cggatcagca 1260
tgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgggagttgg 1320
ttttacccga agccggtgcg cgaacctttg gacgcagccg accacgta 1368

Claims (6)

1.一株异养硝化菌，其特征在于来源于南美白对虾养殖海水，经人工富集培养、分离纯化得到；所述一株异养硝化菌为革兰氏染色阴性的斯尼斯氏菌属Sneathiella sp.的菌株216LB-ZA1-12，已于2019年06月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号：CGMCC No.18018，所述革兰氏染色阴性的斯尼斯氏菌属Sneathiella sp.的菌株216LB-ZA1-12 16S rDNA基因序列的GenBank注册号为MN226643。
2.如权利要求1所述一株异养硝化菌，其特征在于其生物学特性为接触酶和氧化酶阳性，兼性厌氧，菌体形态呈杆状，菌落浅黄色不透明，边缘规则，表面凸起，无晕环，直径1～2mm。
3.如权利要求1所述一株异养硝化菌，其特征在于所述革兰氏染色阴性的斯尼斯氏菌属Sneathiella sp.的菌株216LB-ZA1-12 16S rDNA基因序列为：
TGCAGTCGACGAGAAGCTTCTTTCGGGAAGTGGAGAGTGGCGCACGGGTGAGTAACGCGTGGGGATTTGCCTTTCGGTACGGGATAACGTTTGGAAACGAACGCTAATACCGTATGAAGTCTACGGACTAAAGATTTATCGCCGAAAGAGAAACCCGCGTAGGATTAGATAGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGTCGACGATCTTTAGCTGGTCTGAGAGGACGATCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGGGCAACCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCGCTAGGGAAGATAATGACGGTACCTAGTAAAGAAGTCCCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGGACTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGAGTACGTAGGCGGCTAATCAAGTTGGGTGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCACTCAAAACTGGTTAGCTAGAGATCGAAAGAGGTAAGTGGAATTCCCAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTACTGGTTCGATACTGACGCTGAGGTACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCTAGTTGTTGGGAGGTTTACCTTTCAGTGACGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCCCTTGACATGGGTAGTATGATTACCAGAGATGGTTTTCTTCAGTTCGGCTGGCTACCACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCATTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTGATGGAACTGCCGGTGATAAGCCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGATGCGAAGGGGTGACCCGGAGCTAATCTCCAAAAACCATCTCAGTTCGGATTGTTCTCTGCAACTCGAGAGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTTTACCCGAAGCCGGTGCGCGAACCTTTGGACGCAGCCGACCACGTA。
4.如权利要求1所述一株异养硝化菌，其特征在于其最适生长条件为：pH＝8.0，温度25～28℃，盐度2％～6％。
5.如权利要求1所述一株异养硝化菌在含盐污水去除氨氮处理中的应用。
6.如权利要求5所述应用，其特征在于所述含盐污水为含氨氮污染物的高盐污水。
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